一种用于治疗肺癌的药物组合物

摘要

本发明公开了一种用于治疗肺癌的药物组合物，其包含姜黄素（curcumin）和芬维A胺（fenretinide），姜黄素和芬维A胺的摩尔比值为（10~30）：（4~6）。经实验证明姜黄素能明显增强芬维A胺的抗肺癌效果，两者具有协同抗肺癌作用。该药物组合物可应用于抗肺癌的药物开发。

权利要求

1.一种药物组合物在用于制备肺癌药物中的应用，其特征在于：所述药物组合物由姜黄素和芬维A胺组成，所述药物组合物中姜黄素和芬维A胺的摩尔比值为10 30：4 6。

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说明书

一种用于治疗肺癌的药物组合物 

技术领域

[0001] 本发明涉及一种组合药物，具体涉及一种用于治疗肺癌的药物组合。

背景技术

[0002] 肺癌是最常见、对人类健康与生命危害最大的的恶性肿瘤之一。药物治疗是晚期肺癌治疗的重要方法之一，但是目前治疗效果有待于进一步的提高，探索理想的治疗方案是当前抗肺癌药物研究的主要方向和迫切要求。

[0003] 近年来，联合用药可以增强抗肿瘤疗效而备受关注。姜黄素是从姜科植物的根茎中提取的一种酚性化合物。近年来体外实验表明姜黄素能够抑制包括结肠癌、前列腺癌、肺癌等在内的多种肿瘤细胞增殖，并能诱导肿瘤细胞的凋亡。芬维A胺是人工合成的全反式维甲酸衍生物，对多种致癌物所诱导的肿瘤有抑制作用，包括卵巢癌、前列腺癌、子宫癌、肺癌、肾癌、膀胱癌、皮肤癌、胶质瘤、脑瘤和颈瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、成神经细胞瘤和尤因氏肉瘤，是一种具有潜在开发价值的抗肿瘤药物。由于芬维A胺具有抗乳腺癌的效力，其在发挥作用时会优先堆积在脂肪组织，因此多用于乳腺癌的研究。而临床第三期试验结果也表明，芬维A胺可以降低绝经前女性乳腺癌的复发。其可能作用机制主要为作用于肿瘤细胞时，增加内质网应激，提高细胞内活性氧水平，抑制肿瘤细胞生长和增殖，诱导细胞凋亡。

[0004] 迄今为止，尚未见国内外有对姜黄素和芬维A胺协同抗肺癌肿瘤作用的报道。

发明内容

[0005] 本发明的目的在于提供一种用于治疗肺癌的药物组合物，其包含姜黄素（curcumin）和芬维A胺（fenretinide），该组合物具有协同抗肺癌作用，可应用于抗肺癌的药物开发。

[0006] 优选地，本发明药物组合物中含有的姜黄素和芬维A胺的摩尔比值为10 30：4 6。~ ~

[0007] 优选地，本发明药物组合物中姜黄素的有效剂量为80 mg/kg，芬维A胺的有效剂量为1 mg/kg。

[0008] 本发明的用于治疗肺癌的药物组合物，经实验发现姜黄素能明显增强芬维A胺的抗肺癌效果，两者具有协同抗肺癌作用。该组合物可应用于抗肺癌的药物开发。

附图说明

[0009] 图1为本发明的药物组合物对肺癌细胞存活率的影响；

[0010] 其中，A为在普通光学显微镜下本发明的组合物对A549肺癌细胞的生长抑制作用，B和C分别为本发明的药物组合物在不同剂量作用下对A549和LLC（Lewis lung carcinoma）两种肺癌细胞的细胞存活干预示意图。

[0011] 图2为本发明的药物组合物对C57BL/6小鼠体内的肺癌肿瘤的抑制作用；

[0012] 其中，A为本发明的组合药物对小鼠体内的肺癌肿瘤体积的抑制作用，并且呈现时间依赖关系，B为本发明的组合药物对荷瘤小鼠存活率的影响，C为不同药物对小鼠体内肿瘤生长的影响，D为不同药物对小鼠体内肿瘤生长重量的影响。

[0013] 图3为本发明的药物组合物降低了由姜黄素诱导引起的GRP78蛋白质表达的升高；

[0014] 其中，A和B显示了组合物中芬维A胺显著降低由姜黄素诱导升高的GRP78蛋白质表达，C为GRP78 siRNA转染肺癌A549细胞，明显下调了由姜黄素诱导表达升高的GRP78蛋白；D为GRP78 siRNA转染肺癌A549细胞，协同增强姜黄素抑制肺癌细胞的生长。

具体实施方式

[0015] 下面将结合具体实施例或附图进一步阐述本发明，但不作为对保护范围的限制依据；在本发明权利要求范围内的任何改进方案，均应视为本发明的保护范围。

[0016] 实施例1：

[0017] 一种用于治疗肺癌的药物组合物，该药物组合物包含姜黄素（curcumin）和芬维A胺（fenretinide）。

[0018] 实施例2：

[0019] A549细胞和LLC细胞的培养

[0020] 两种肺癌细胞株A549和LLC购自美国模式培养物保藏所（ATCC）。培养基为DMEM（Gibco公司, 美国）添加10%胎牛血清（Hyclone公司，美国），于37℃、5% CO2细胞培养箱常规培养，培养基隔天更换一次。

[0021] 本发明的药物组合物对肺癌细胞存活的检测

[0022] 1. 实验设计及药物处理

[0023] 用姜黄素（购自上海皓元生物医药科技有限公司）10 μΜ-30 μΜ，芬维A胺4 μΜ-6 μΜ（购自阿拉丁试剂上海有限公司）及它们的组合物溶解于培养基中预处理细胞24小时，然后更换培养基，用显微镜拍照片和四甲基偶氮唑蓝（MTT，购于美国Sigma公司）法检测肺癌细胞的存活率。

[0024] 2. 肺癌细胞存活率的检测方法

[0025] （1）MTT法

[0026] 将含有1×104个/100 µl A549细胞和LLC细胞的培养液分别接种于96孔板的每孔上，培养24小时后，用含不同浓度的姜黄素、芬维A胺、姜黄素和芬维A胺的组合物的培养基培养24小时，然后用MTT方法测定细胞存活率。

[0027] （2）实验结果：

[0028] 显微镜下观察，姜黄素单独预处理表现出了一定的细胞抑制作用；而单独的芬维A胺则表现的抑制作用不明显；用姜黄素（20 μΜ）和芬维A胺（4 μΜ）、（20 μΜ）和芬维A胺（6 μΜ）、（30 μΜ）和芬维A胺（4 μΜ）、（30 μΜ）和芬维A胺（6μΜ）联合处理A549肺癌细胞时，显著地增强了肺癌细胞的抑制作用，如图1A所示。当姜黄素（20 μΜ-30 μΜ）与芬维A胺（4 μΜ-6 μΜ）联合用药时，与单一药物处理组相比，显著增强了对肺癌细胞的抑制作用，如图1B（A549肺癌细胞）和1C（LLC肺癌细胞）所示。联合用药组与相应浓度的姜黄素或芬维A胺单一用药组比较，分别为#p < 0.05和*p < 0.05。即当药物组合物中姜黄素和芬维A胺的摩尔比值为10 30：4 6时，组合用药组的细胞存活率显著低于单一化合物用药组的细胞存活率，~ ~
提示在体外组合药物可以协同增强抗肺癌细胞的效果。

[0029] 实施例3：

[0030] 本发明的药物组合物抑制小鼠Levis肺癌的生长

[0031] （1）实验方法

[0032] 以C57BL/6小鼠（雌性，18～20克，购于广东省医学实验动物中心）作为实验动物。取对数生长期Lewis肺癌细胞(LLC)，于右侧前肢腋下皮下注射（1.6×106个细胞/µl，100 µl/只），建立C57BL/6小鼠Levis肺癌移植模型。模型建立5天后将小鼠随机分为4组，每组8只。药物用聚乙二醇400（PEG400）溶解，分别设对照组（PEG-400）、姜黄素组（40 mg/kg）、芬维A胺组（1 mg/kg）及联合用药组（40 mg/kg姜黄素组+1 mg/kg芬维A胺），分别以腹腔注射的方式给药。每2天给药1次并测量瘤径。给药25天后以安乐法处死小鼠，解剖取出肿瘤，并称量拍照。

[0033] （2）实验结果：

[0034] 小鼠在第5-7天成瘤，成瘤率100%。不同药物处理对C57BL/6小鼠肿瘤生长曲线如图2A所示。接种肿瘤25天后，小鼠其存活率如图2B所示：本发明的药物组合物处理组与姜黄素处理组相比，小鼠的存活率有所增加，但没有统计学意义（p > 0.05）。小鼠肿瘤重量比较如图2D所示：本发明的药物组合物处理组的小鼠肿瘤重量显著低于对照组（p ＜ 0.05）；药物组合物处理组的小鼠肿瘤重量低于姜黄素单一处理组，但没有统计学意义（p > 0.05）；药物组合物处理组的小鼠肿瘤重量显著低于芬维A胺处理组（p ＜ 0.05）。以上结果提示，本发明的药物组合物对小鼠肺癌肿瘤的抑制率有一定的增加。与芬维A胺单一处理组比较，本发明的组合药物可以显著降低小鼠体内肺癌肿瘤的重量。

[0035] 实施例4：

[0036] 本发明的组合药物降低了由姜黄素诱导引起的GRP78蛋白表达的升高

[0037] （1）实验方法

[0038] 分别用姜黄素（20 μΜ）、芬维A胺（4 μΜ）或两个药的组合物处理A549肺癌细胞12个小时后，收集细胞后，将细胞用200 µl含有1%的蛋白酶抑制剂（购自Roche公司）的RIPA裂解液（购自碧云天公司），冰上裂解30 分钟后，12, 000 g离心10分钟，收集上清。各个样品的总蛋白浓度和体积调整后，加入2×SDS loading buffer于95℃煮5分钟。然后进行SDS-PAGE凝胶电泳和用Western blot方法检测GRP78蛋白表达的变化。

[0039] （2）实验结果：

[0040] 与姜黄素单一处理相比，药物组合物处理组显著下调了A549细胞中的GRP78蛋白质表达，提示本发明的药物组合物能有效的减少由姜黄素诱导GRP78蛋白表达的增加，如图3A、图3B所示。与姜黄素处理组比较，***p < 0.001。

[0041] 实施例5：

[0042] GRP78 siRNA下调了由姜黄素诱导引起肺癌细胞的GRP78蛋白表达增加，并增加了姜黄素对肿瘤细胞生长的抑制作用

[0043] （1）实验方法

[0044] 用GRP78 siRNA进行细胞转染后，（A）用20 μΜ姜黄素处理A549肺癌细胞12小时。随后提取蛋白质进行蛋白质印迹分析GRP78蛋白的表达量的变化。（B）用0-30 μΜ姜黄素处理A549肺癌细胞24小时，用MTT的方法分析细胞的存活率。

[0045] （2）实验结果

[0046] 如图3C所示，GRP78 siRNA显著降低由姜黄素诱导升高GRP78的蛋白表达。在细胞存活率的实验中，GRP78 siRNA显著增强了姜黄素对肺癌细胞的抑制作用，siRNA阴性对照处理组（Scr siRNA），对细胞的存活率未产生明显的作用，如图3D所示，与相应浓度的姜黄素处理组比较，***p < 0.001。