用于治疗奶牛乳房炎的药物及其制法与检测方法及用途

摘要

本发明涉及中药领域，具体涉及一种用于治疗奶牛乳房炎的药物及其制法与检测方法及用途。该药物是由以下重量份的原料制成的：紫葛1～2重量份，铺地黍1～2重量份;马齿苋0.5～1重量份。该药物制备成片剂、丸剂、散剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂。制法为：干燥的紫葛、铺地黍、马齿苋，第一次加11倍量水浸泡1小时，煎煮1小时，第二次加4倍量水煎煮1小时，合并水煎液，滤过，滤液浓缩，干燥，粉碎成细粉，过筛，混匀，制成散剂。药物质量检测方法的色谱条件为：采用HypersilDs色谱柱；流动相：比例为30：70的甲醇‑0.15%磷酸溶液；检测波长：200nm；柱温：20℃；流速：1.0mL·min‑1；进样量：10μL。本发明药物组方合理、治疗效果显著。

权利要求

1.一种用于治疗奶牛乳房炎的药物，其特征在于，该药物是由以下重量份的原料制成的：紫葛50g，铺地黍50g，马齿苋25g；

该药物采用如下方法制备：取干燥的紫葛、铺地黍、马齿苋，第一次加11倍量水浸泡1小时，煎煮1小时，第二次加4倍量水煎煮1小时，合并水煎液，滤过，滤液浓缩，干燥，粉碎成细粉，过筛，混匀，制成散剂，即得；

该药物采用如下方法检测：采用高效液相色谱法进行水杨苷的含量测定：(1)色谱条件：采用HypersilDs色谱柱；流动相：比例为30：70的甲醇-0.15％磷酸溶液；

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检测波长：200nm；柱温：20℃；流速：1.0mL·min ；进样量：10μL；

(2)对照品溶液制备：精密称取80℃干燥至恒重的水杨苷对照品适量，加甲醇溶解制成每1mL含0.2mg的对照品溶液；

(3)供试品溶液的制备：精密称取本发明药物10g，加甲醇40mL，加热回流4h，提取液回流溶剂并浓缩至干，残渣加水10mL溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次20mL，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次15mL，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取滤液，即得供试品溶液；

(4)测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，进行检测。

2.如权利要求1所述的药物在制备治疗牛急性肠炎的药物或保健品中的应用。

说明书

用于治疗奶牛乳房炎的药物及其制法与检测方法及用途

技术领域

[0001] 本发明涉及中药领域，具体涉及一种用于治疗奶牛乳房炎的药物及其制备方法与用途。

背景技术

[0002] 奶牛乳房炎又称奶牛乳腺炎（bovine mastitis），是奶牛乳腺受物理、化学、微生物刺激导致乳腺组织局部微循环障碍、乳腺腺泡发生病变、免疫功能障碍等症状的一种复杂的疾病。微生物是奶牛乳房炎的主要病因，目前已发现约有150多种病原体可引起奶牛乳房炎，常见菌以葡萄球菌、链球菌、大肠埃希菌、化脓杆菌为主，约占奶牛乳房炎病例90%以上。

[0003] 据世界奶牛业协会统计，全世界奶牛乳房炎发生率在50%左右。国外奶牛乳房炎发病率在25%～60%，我国为20%～70%，部分奶牛场发病率更高。奶牛发生乳房炎后，机体启动防御体系导致牛奶中白细胞等体细胞增加，产奶量下降，奶质量下降，严重者也可能引起奶牛发情减少。研究报道，平均每头发病奶牛每年损失超100美元，全美国每年因奶牛乳房炎造成的损失超过20亿美元。全世界每年因乳房炎造成的经济损失高达350亿美元。

[0004] 我国从20世纪80年代开始对奶牛乳房炎进行研究以来，抗生素一直是治疗乳房炎的首选药物，其中青霉素、链霉素、庆大霉素、氯唑西林钠、头孢噻呋钠等抗生素和化学药品在临床上治疗细菌性奶牛乳房炎取得了很显著的成效，治疗率高达90%。然而，长期大量使用抗生素导致了耐药菌、超级细菌的出现，各类化学合成药品的残留代谢物已严重威胁着人类健康。当前，食品质量安全逐渐引起社会的重视，研究人员开始研究新型的绿色的无公害的、无残留的、速效的药物来替代抗生素和化学药品治疗奶牛乳房炎。无公害、无残留、无休药期的中药成为当前的研究热点。

发明内容

[0005] 本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种组方合理、治疗效果好的用于治疗奶牛乳房炎的药物。

[0006] 本发明的另一目的是提供该药物的制备方法。

[0007] 本发明还提供了该药物的质量检测方法。

[0008] 本发明还提供了该药物的制药用途。

[0009] 本发明药物是经发明人多年来精心研制，主要用于治疗奶牛乳房炎。本发明药物既能清热解毒、活血散瘀，又能促进乳房血液循环疏畅，有利于炎肿的吸收消散，促进乳汁的分泌，对奶牛乳房炎具有较好的治疗效果。

[0010] 在本发明药物中原料药的基源如下：

[0011] 紫葛为葡萄科蛇葡萄属植物异叶蛇葡萄Ampelopsis humulifolia Bungevar.heterophylla（Thunb.）K.Koch.[A.heterophylla（Thunb.）Sieb. et Zucc]的根皮。

[0012] 铺地黍为禾本科植物铺地黍Panicum repens L.的全草。

[0013] 马齿苋为马齿苋科Portulacaceae植物的全草。

[0014] 本发明的目的是由以下方式实现的：

[0015] 一种药物是由以下重量份的原料制成的：紫葛1～2重量份，铺地黍1～2重量份；马齿苋0.5～1重量份。

[0016] 该药物优选是由以下重量份的原料制成的：紫葛1重量份，铺地黍2重量份马齿苋0.5重量份。

[0017] 该药物优选是由以下重量份的原料制成的：紫葛2重量份，铺地黍1重量份；马齿苋1重量份。

[0018] 该药物优选是由以下重量份的原料制成的：紫葛1重量份，铺地黍1重量份；马齿苋0.8重量份。

[0019] 所述的药物中可以制备成片剂、丸剂、散剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂。

[0020] 所述的药物采用如下方法制备：取紫葛、铺地黍、马齿苋，混合，加入3～15倍量的水浸泡0.5～2小时，煎煮0.5～2小时，煎煮2～4次，每次0.5～2小时，提取液合并，滤过，滤液浓缩，干燥，粉碎成细粉，加入辅料，混匀，制成散剂，即得。

[0021] 所述的药物采用如下方法制备：取干燥的紫葛、铺地黍、马齿苋，第一次加11倍量水浸泡1小时，煎煮1小时，第二次加4倍量水煎煮1小时，合并水煎液，滤过，滤液浓缩，干燥，粉碎成细粉，过筛，混匀，制成散剂，即得。

[0022] 所述的药物采用如下方法检测：采用高效液相色谱法进行水杨苷的含量测定：

[0023] （1）色谱条件：采用HypersilDs色谱柱；流动相：比例为20～40：60～80的甲醇-0.15%磷酸溶液；检测波长：190～210nm；柱温：15～25℃；流速：0.5～1.5mL·min-1；进样量：
5～20μL；

[0024] （2）对照品溶液制备：精密称取干燥至恒重的水杨苷对照品适量，加甲醇溶解制成对照品溶液；

[0025] （3）供试品溶液的制备：精密称取本发明药物，加甲醇，加热回流，提取液回流溶剂并浓缩至干，残渣加水溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，摇匀，滤过，取滤液，即得供试品溶液；

[0026] （4）测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各5～20μL，注入高效液相色谱仪，进行检测。

[0027] 所述的药物优选采用如下方法检测：采用高效液相色谱法进行水杨苷的含量测定：

[0028] （1）色谱条件：采用HypersilDs色谱柱；流动相：比例为30：70的甲醇-0.15%磷酸溶-1液；检测波长：200nm；柱温：20℃；流速：1.0mL·min ；进样量：10μL；

[0029] （2）对照品溶液制备：精密称取80℃干燥至恒重的水杨苷对照品适量，加甲醇溶解制成每1mL含0.2mg的对照品溶液；

[0030] （3）供试品溶液的制备：精密称取本发明药物10g，加甲醇40mL，加热回流4h，提取液回流溶剂并浓缩至干，残渣加水10mL溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次20mL，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次15mL，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取滤液，即得供试品溶液；

[0031] （4）测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，进行检测。

[0032] 所述的药物可用于制备治疗奶牛乳房炎、牛急性肠炎的药物或保健品。

[0033] 实验一：本发明药物治疗奶牛乳房炎的试验研究

[0034] 1  实验材料

[0035] 1.1  试验药品

[0036] 本发明药物

[0037] 处方：紫葛50g，铺地黍50g，马齿苋25g

[0038] 制备方法：取干燥的紫葛50g、铺地黍50g、马齿苋25g第一次加1100mL水浸泡1小时，煎煮1小时，第二次加400mL，煎煮1小时，合并水煎液，滤过，滤液浓缩，干燥，得本发明药物。

[0039] 对比药物A

[0040] 处方：紫葛100g

[0041] 制备方法：取干燥的紫葛100g，第一次加1100mL水浸泡1小时，煎煮1小时，第二次加400mL，煎煮1小时，合并水煎液，滤过，滤液浓缩，干燥，得对比药物A。

[0042] 对比药物B

[0043] 处方：铺地黍100g

[0044] 制备方法：取干燥的铺地黍100g，第一次加1100mL水浸泡1小时，煎煮1小时，第二次加400mL，煎煮1小时，合并水煎液，滤过，滤液浓缩，干燥，得对比药物B。

[0045] 1.2  试验动物

[0046] 连云港市云台农场奶牛场400头泌乳奶牛，对产奶量下降的奶牛进行加州乳房炎检测法（CMT）检测，选取90头“++”以上的阳性奶牛，随机分为三组，即本发明药物治疗组、对比药物A治疗组、对比药物B治疗组，每组30头。

[0047] 1.3  试验器材

[0048] 保定栏、保定绳、投药瓶、50mL注射器、20号通乳针、加州乳房炎检测法（CMT）检验板。

[0049] 2  试验方法

[0050] 2.1  加州乳房炎检测法

[0051] 分别吸取同等剂量的牛奶和稀释的CMT诊断液加入检验板，充分混匀，进行观察。加州乳房炎检测法判断标准如试剂盒说明书所述，奶牛乳房炎治疗效果判断标准见表1。

[0052] 表1  奶牛乳房炎治疗效果判断标准

[0053]

[0054] 2.2  临床分组给药

[0055] 本发明药物治疗组：本发明药物10g，用开水浸泡，冷却后搅拌均匀，用投药瓶进行灌服，每次100mL，1次/d，连用5d为一个疗程。

[0056] 对比药物A治疗组：对比药物A 10g，用开水浸泡，冷却后搅拌均匀，用投药瓶进行灌服，每次100mL，1次/d，连用5d为一个疗程。

[0057] 对比药物B组：对比药物B 10g，用开水浸泡，冷却后搅拌均匀，用投药瓶进行灌服，每次100mL，1次/d，连用5d为一个疗程。

[0058] 对于试验奶牛，实行统一的饲养管理，统一的饲料配方，不同药物治疗三个疗程，共计15d。三个疗程后对三组奶牛进行CMT检测。

[0059] 3  结果

[0060] 3.1  乳房炎阳性奶牛

[0061] 应用加州乳房炎检测法对400头泌乳牛进行检测，“++”以上的阳性奶牛150头，阳性率达37.5%，其中有红、肿、热、痛症状的100头，占阳性奶牛66.7%，100头中选取90头做临床试验。

[0062] 3.2  不同药物治疗效果

[0063] 三个疗程后，对三组奶牛的治疗效果进行CMT检测，并于第20天复检是否复发，结果见表2。本发明药物组、对比药物A组和对比药物B组奶牛乳房炎的治愈率分别是65.2%、38.2%、41.1%，有效率分别是97.8%、74.1%、85.5%，复发率分别是1.64%、12.8%、11.9%；

[0064] 表2  三组不同药物治疗效果对比试验结果

[0065]

[0066] 4  结论

[0067] 试验结果表明，本发明药物组、对比药物A组和对比药物B组的治愈率、有效率、复发率差异显著（P<0.05）。在治愈率方面本发明药物组比对比药物A组、对比药物B组分别高27个百分点和24个百分点；在有效率方面，本发明药物组比对比药物A组、对比药物B组分别高23.7个百分点和12.3个百分点，这充分证明本发明药物的治疗效果优于对比药物A和对比药物B。说明本发明药物中药味之间的配伍精良，药味之间的组合产生了明显的协同增效作用。此外，本试验中发现33.3%的乳房炎患牛为隐性感染，未表现明显的临床炎症病变，建议养殖场高度重视隐性乳房炎的危害。

[0068] 实验二：本发明药物的质量检测方法研究

[0069] 1仪器与试药

[0070] 1.1仪器

[0071] 高效液相色谱仪（Agilent110高效液相色谱仪及工作站，G1311Aquat泵，G1314紫外检测器）。

[0072] 1.2试药

[0073] 水杨苷（salicin）对照品（中国药品生物制品检定研究院）；本发明中药组合物；中药材（康济连锁药店提供）；甲醇（色谱醇，上海生化工助剂厂）；其他试剂为分析纯。

[0074] 2方法与结果

[0075] 2.1处方

[0076] 紫葛500g，铺地黍500g，马齿苋250g。

[0077] 2.2制备

[0078] 取干燥的紫葛500g，铺地黍500g，马齿苋250g，第一次加11000mL水浸泡1小时，煎煮1小时，第二次加4000mL，煎煮1小时，合并水煎液，滤过，滤液浓缩，干燥，即得。

[0079] 2.3 水杨苷的含量测定

[0080] 2.3.1 HPLC色谱条件

[0081] 采用HypersilDs（4.0mm×125mm，5μm）色谱柱；流动相：比例为30：70的甲醇-0.15%磷酸溶液；检测波长：200nm；柱温：20℃；流速：1.0mL·min-1；进样量：10μL；在该色谱条件下，对照品及样品色谱峰良好，无铺地黍阴性对照对测定无干扰。

[0082] 2.3.2对照品溶液的制备

[0083] 精密称取80℃干燥至恒重的水杨苷对照品适量，加甲醇制成每1mL含0.2mg的溶液。

[0084] 2.3.3供试品溶液与阴性对照液的制备

[0085] 精密称取本发明药物10g，加甲醇40mL，加热回流4h，提取液回流溶剂并浓缩至干，残渣加水10mL溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取5次，每次20mL，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤3次，每次15mL，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解并转移至10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取滤液即得；另按处方比例制备不含铺地黍的阴性对照品，同法制成阴性对照液。

[0086] 2.3.4标准曲线的绘制

[0087] 精密称取80℃干燥至恒重的水杨苷对照品适量，用甲醇制成10.4，20.8，41.6，83.2，166.4μgmL-1系列浓度的溶液，分别精密量取上述5种浓度溶液各10μL，注入高效液相色谱仪进行测定。

[0088] 以峰面积比值与浓度进行线性回归，得回归方程为：A=21.2763C-0.1391，r=0.9999。表明水杨苷在10.4～166.4μgmL-1浓度范围内呈良好的线性关系。

[0089] 2.3.5稳定性试验

[0090] 精密吸取供试品溶液10μL，分别于0，1，2，4，8h进样，并计算水杨苷含量。结果8h内RSD为0.45%（n=5）。表明样品溶液在8h内稳定。

[0091] 2.3.6重复性试验

[0092] 按供试品溶液制备方法平行处理样品5份，依法测定水杨苷含量并计算。结果测得水杨苷平均含量为0.12mg·g-1，RSD为1.3%。

[0093] 2.3.7精密度实验

[0094] 精密吸取水杨苷对照品溶液，重复进样5次，依法测定峰面积。结果RSD为0.23%（n=5）。表明精密度较好。

[0095] 2.3.8回收率实验

[0096] 精密称取已知水杨苷含量的同一批号的样品6份，按高、中、低浓度分别精密加入适量的水杨苷对照品溶液，按样品测定项下操作，依法测定，计算回收率。结果平均回收率为100.3%，RSD为0.45%（n=5）。

[0097] 2.3.9样品含量测定

[0098] 分别量取对照品溶液和供试品溶液适量，用微孔滤膜滤过，各进样10μL，按上述色谱条件测定3批样品，平行测定5次。按外标法以峰面积计算供试品溶液水杨苷的含量。本品含水杨苷应为标示含量的95%～105%，以每1g样品含水杨苷计，不得少于0.12mg。3批样品含量分别为100.8%（RSD=1.2%），101.7%（RSD=1.3%），99.2%（RSD=1.1%）。

[0099] 具体实施方式：

[0100] 实施例1，一种用于治疗奶牛乳房炎的药物，该药物是由以下重量份的原料制成的：紫葛1重量份，铺地黍2重量份；马齿苋0.5重量份。

[0101] 实施例2，一种用于治疗奶牛乳房炎的药物，该药物是由以下重量份的原料制成的：紫葛2重量份，铺地黍1重量份；马齿苋1重量份。

[0102] 实施例3，一种用于治疗奶牛乳房炎的药物，该药物是由以下重量份的原料制成的：紫葛1重量份，铺地黍1重量份；马齿苋0.8重量份。

[0103] 实施例4，一种用于治疗奶牛乳房炎的药物，，该药物是由以下重量份的原料制成的：紫葛1.5重量份，铺地黍1重量份; 马齿苋0.7重量份。

[0104] 实施例1～4中任意一项所述的药物，可以将该药物按常规制法制备成片剂、丸剂、散剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂。

[0105] 实施例5，实施例1～4中任意一项所述的药物，该药物采用如下方法制备：取紫葛、铺地黍、马齿苋，混合，加入3～15倍量的水浸泡0.5～2小时，煎煮0.5～2小时，煎煮2～4次，每次0.5～2小时，提取液合并，滤过，滤液浓缩，干燥，粉碎成细粉，加入辅料，混匀，制成散剂，即得。

[0106] 实施例6，实施例1～4中任意一项所述的药物，该药物采用如下方法制备：取干燥的紫葛、铺地黍、马齿苋，第一次加11倍量水浸泡1小时，煎煮1小时，第二次加4倍量水煎煮1小时，合并水煎液，滤过，滤液浓缩，干燥，粉碎成细粉，过筛，混匀，制成散剂，即得。

[0107] 实施例7，实施例5或6中任意一项所述的药物，该药物采用高效液相色谱法进行水杨苷的含量测定：

[0108] （1）色谱条件：采用HypersilDs色谱柱；流动相：比例为20～40：60～80的甲醇-0.15%磷酸溶液；检测波长：190～210nm；柱温：15～25℃；流速：0.5～1.5mL·min-1；进样量：
5～20μL；

[0109] （2）对照品溶液制备：精密称取干燥至恒重的水杨苷对照品适量，加甲醇溶解制成对照品溶液；

[0110] （3）供试品溶液的制备：精密称取本发明药物，加甲醇，加热回流，提取液回流溶剂并浓缩至干，残渣加水溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取，合并正丁醇提取液，用氨试液洗涤，正丁醇提取液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，摇匀，滤过，取滤液，即得供试品溶液；

[0111] （4）测定：分别精密量取上述供试品溶液、对照品溶液各5～20μL，注入高效液相色谱仪，进行检测。