一种昆虫转录因子在害虫防治中的应用

摘要

本发明公开了昆虫转录因子Nrf2在害虫防治中的应用。本发明发现抑制Nrf2的表达，会增强鳞翅目昆虫对杀虫剂的敏感性，虫体死亡率加大；进一步研究还发现，昆虫转录因子Nrf2参与响应杀虫剂的信息通路，并通过上调昆虫体内解毒酶的表达来抵抗杀虫剂的毒性，从而使虫体表现出较耐受杀虫剂的表型，提高虫体的存活率。因此，可将能够抑制Nrf2表达的人工合成物质（如抑制Nrf2表达的dsRNA）或从植物筛选的化合物作为杀虫剂的增效剂，用于杀虫剂的制备，从而提高杀虫效率，降低高毒农药的使用剂量，从而达到环境和食品安全的目的。

权利要求

1.昆虫类转录因子Nrf2表达抑制剂在制备杀虫剂中的应用，其特征在于：所述转录因子Nrf2表达抑制剂为能够对昆虫基因Nrf2进行RNA干涉的序列，该序列为SEQ ID NO：2。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述转录因子Nrf2表达抑制剂能够使昆虫基因Nrf2沉默。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述的昆虫为鳞翅目昆虫。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述鳞翅目昆虫为斜纹夜蛾。

说明书

一种昆虫转录因子在害虫防治中的应用

技术领域

[0001] 本发明涉及昆虫转录因子Nrf2在斜纹夜蛾防治中的应用，具体涉及Nrf2影响斜纹夜蛾抗多种杀虫剂这一功能，从而围绕Nrf2开展转基因或抑制剂研发，提高杀虫剂的杀虫效率，降低化学杀虫剂的使用量，达到高效和环保进行害虫防治的目的。

背景技术

[0002] 各类化学杀虫剂和植物次生物质皆可引起昆虫体内氧胁迫。如2007年，Giordano等人在小鼠小脑颗粒神经元细胞中证明有机磷杀虫剂毒死蜱能够引起细胞内ROS水平的上升，进而诱导脂质过氧化等一系列的氧化应激反应。Ahmad等在1995年证实杀虫剂二氯萘醌在模式昆虫亚热带粘虫中也能引起氧化应激反应。拟除虫菊酯类杀虫剂除了神经毒性外，也能够引起昆虫的氧化应激反应。

[0003] 活性氧（reactive oxygen species，ROS）是生物体在有氧代谢过程中由氧分子直接或间接转化而来的，对生物体有害的一类含氧物，其主要包括超氧阴离子（superoxide 2-
anion，O ）、过氧化氢（hydrogen peroxide，H2O2）、单线态氧（singlet molecular oxygen，
1O2）、羟自由基（hydroxyl radical，HO•）、烷氧基（alkoxyl，RO•）和烷过氧基（Peroxyl，ROO•）等。当机体受到外界有毒物质的危害时，ROS过度积累。过量的过氧化物和自由基将损害DNA、蛋白质、糖类等生物大分子物质，进而引起细胞内信息传递的紊乱、细胞膜的损伤、细胞离子通道的损伤、细胞膜脂质过氧化，最终导致细胞凋亡甚至细胞的死亡。

[0004] 然而在生物体内存在着ROS的清除系统（抗氧化酶系统和非酶活性的抗氧化小分子），来抵抗活性氧对生物体的伤害，从而维持机体氧化与抗氧化的动态平衡。其中抗氧化酶系统主要包括超氧化物歧化酶（SOD，将体内的超氧化物阴离子O2- 转化成H2O2和O2 ）；过氧化氢酶（CAT，主要在过氧化物酶体和线粒体中将H2O2分解成H2O和O2）；硒依赖谷胱甘肽过氧化物酶（SeGSH-Px，将H2O2还原为H2O，阻断H2O2生成高度活泼的膜过氧化剂HO• ，从而防止细胞受到羟自由基的伤害）。抗氧化小分子物质如GSH、β-胡萝卜素、视黄醇、维生素C、维生素E、硫氧还蛋白等也参与ROS的清除。

[0005] 转录因子NF-E2（NF-E2-related factor2, Nrf2）在细胞抵抗氧胁迫和亲电物质中有着重要作用。细胞在正常状态下转录因子Nrf2在细胞质中与Keapl（Kelch-like ECH-associated protein 1）结合形成复合物，处于非活性状态，并由Keapl介导Nrf2泛素化降解；当细胞发生氧化应激反应或受到亲电子物质刺激时，Nrf2被激活并从Keapl-Nrf2复合物中解离出来，然后转入细胞核内与Maf形成异质二聚体，再与靶基因启动子上抗氧化反应元件ARE结合，进而调控Nrf2下游基因的转录和表达。其中，Nrf2的靶基因包括过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽S-转移酶、醌氧化还原酶、γ-谷氨酸合成酶以及血红素加氧酶。特别是一相解毒酶P450和二相解毒酶谷胱甘肽S-转移酶（GST）在昆虫抗药性中发挥重要的作用，因而Nrf2在调控昆虫抗性基因中起着重要作用。但目前昆虫中的该方面研究较少。苯巴比妥米那（phenobarbital, P450 抑制剂）通过Nrf2调控了一些果蝇解毒酶的表达（Misra JR, Horner MA, Lam G, Thummel CS. Genes Dev. 2011; 25(17):1796-806.）；
但是，并不清楚Nrf2是否参与农业害虫抗多种杀虫剂，并在其中起着重要的作用。

发明内容

[0006] 为了解决上述存在的问题，本发明对中国农业害虫斜纹夜蛾开展了研究，发现Nrf2 参与昆虫抗有机磷和菊酯类化学杀虫剂、及多种植物类次生物质，其机理可能是启动了相应的解毒酶，而敲除Nrf2会增加农业害虫斜纹夜蛾对有机磷杀虫剂毒死蜱的敏感性，虫体死亡率大大提高。

[0007] 本发明的目的在于提供昆虫Nrf2的抑制剂在制备杀虫剂中的应用。

[0008] 本发明所采取的技术方案是：

[0009] 昆虫类转录因子Nrf2表达抑制剂和/或活性抑制剂在制备杀虫剂中的应用。

[0010] 进一步的，上述转录因子Nrf2表达抑制剂为能够使昆虫基因Nrf2沉默的物质。

[0011] 进一步的，上述转录因子Nrf2表达抑制剂为能够对昆虫基因Nrf2进行RNA干涉的序列。

[0012] 进一步的，上述能够对昆虫基因Nrf2进行RNA干涉的序列为SEQ ID NO：2。

[0013] 进一步的，上述昆虫为鳞翅目昆虫。

[0014] 进一步的，上述鳞翅目昆虫为斜纹夜蛾。

[0015] 本发明的有益效果是：

[0016] 1）Nrf2是生物体中抗氧胁迫途径的其中一个重要的调控因子，它通过调控过氧化氢酶、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽S-转移酶、醌氧化还原酶、γ-谷氨酸合成酶和血红素加氧酶等抗氧胁迫酶的表达，而在生物体抗活性氧中发挥作用。它在哺乳动物中的研究较为详细，有毒物质通过受体AHR激发Nrf2表达上调，但是昆虫至今没有发现类似的受体蛋白，而且昆虫类的Nrf2序列与哺乳类有差别，因此表达可能有所不同。目前，昆虫只有极少的文章报道，主要发现在抗有机氯杀虫剂DDT昆虫中的Nrf2酶活性较高，并没有进行它的功能研究，同时由于DDT的剧毒性和不易降解性，农业上已停止使用。所以，Nrf2在昆虫应对杀虫剂中的真正作用并不清楚。本发明中，采用RNAi技术敲除斜纹夜蛾体内Nrf2，发现斜纹夜蛾对有机磷杀虫剂毒死蜱的敏感性增加，死亡率增加。因此，在应用上，可以根据Nrf2的结构筛选其抑制剂或转基因植物获得其dsRNA，作为杀虫剂的增效剂而提高杀虫剂的杀虫效率，降低对环境不友好的化学杀虫剂的使用剂量。

[0017] 2）本发明表明，斜纹夜蛾Nrf2除了响应毒死蜱外，还响应菊酯类杀虫剂，和不同类型植物次生物质，包括吲哚-3-甲醇，呋喃类花椒毒素和蒽酮类鱼藤酮等，并且Nrf2调控参与解毒这些物质的解毒酶，比如Slgste1，基因Slgste1被证明是斜纹夜蛾取食植物的重要解毒酶，敲除该基因，斜纹夜蛾不能爬行取食，生长减缓；同时可响应多种杀虫剂而表达增加，并对多种杀虫剂具有解毒作用。因此，Nrf2 同样影响斜纹夜蛾应对其他杀虫剂和植物（含植物次生物质），由于植物次生物质对昆虫的毒性偏低，虽然具有安全性，但由于杀虫效率低而不能大规模应用。因此可根据Nrf2 开发杀虫剂增效剂，提高植物源杀虫剂杀虫率。

[0018] 3）由于人类、哺乳类和昆虫类的Nrf2序列的相似性不高，本发明所用的dsRNA在人类基因组中没有相应的序列，因此利用该序列进行RNAi，将对人等动物无害。

附图说明

[0019] 图1为毒死蜱处理24 h后各组处理的斜纹夜蛾生长情况；

[0020] 图2为不同杀虫剂对Nrf2表达的诱导作用，xanthotoxin为花椒毒素、DMSO作为对照处理；indole-3-carbinol为植物次生物质吲哚-3甲醇、 rotenone为植物源杀虫剂鱼藤酮、chlorpyrifos为有机磷杀虫剂毒死蜱、deltamethrin为菊酯类杀虫剂溴氰菊酯、acetone丙酮作为对照（溶剂）处理；内参为GAPDH；

[0021] 图3为不同杀虫剂对解毒酶P450基因SlCyp6AE48表达的诱导作用，xanthotoxin为花椒毒素、DMSO作为对照处理；indole-3-carbinol为植物次生物质吲哚-3甲醇、 rotenone为植物源杀虫剂鱼藤酮、chlorpyrifos为有机磷杀虫剂毒死蜱、deltamethrin为菊酯类杀虫剂溴氰菊酯、acetone丙酮作为对照处理；内参为GAPDH；

[0022] 图4为不同杀虫剂对谷胱甘肽转移酶基因Slgste1表达的诱导作用，xanthotoxin为花椒毒素、DMSO作为对照处理；indole-3-carbinol为吲哚-3甲醇、rotenone为植物源杀虫剂鱼藤酮、chlorpyrifos为有机磷杀虫剂毒死蜱、deltamethrin为菊酯类杀虫剂溴氰菊酯、acetone丙酮作为对照处理；内参为GAPDH；

[0023] 图5为Nrf2蛋白与gste1启动子上的相应调控元件ARE的凝胶迁移实验 EMSA结果，图中探针为gste1启动子上的调控元件ARE序列，采用生物素标记以及非标记探针进行竞争实验来证明结合的专一性；

[0024] 图6为100 μM的不同类型杀虫剂对SlGSTE1酶活性的抑制作用；其中control为1-氯-2,4-二硝基苯，chlorpyrifos为有机磷杀虫剂毒死蜱、Malathion为马拉硫磷、Phoxim为辛硫磷、Deltamethrin为菊酯类的溴氰菊酯、DDT为有机氯类的DDT。

具体实施方式

[0025] 下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但并不局限于此。

[0026] 实施例1抑制Nrf2表达的斜纹夜蛾幼虫对杀虫剂更敏感

[0027] 1）斜纹夜蛾Nrf2dsRNA的合成

[0028] 根据试剂盒T7 RiboMAX™ Express RNAi System（购自Promega公司）的说明书分别合成斜纹夜蛾Nrf2和GFP的dsRNA， 用于后续的RNAi实验。

[0029] 斜纹夜蛾Nrf2 cDNA序列为（SEQ ID NO：1）：

[0030] ATGGATTTGACAGTGGCTAATTACGCATTCGCGCAGCCATTTTATGCAATGCCGCCATATTTGCGGACTGCACTAATATATCCGGATCCTTTGGAATATTTTAACAGTTATTACAAATATTATGATGGAATGTACACGATGCGTATGCTGGACGGCGCAGGACCGCACCATGCTCCTCATCACACCCACTCACACATGATGATAACAGAGAGAGATTCGGCCTCGGACAGCGCCGTGTCGTCGATGGGTTCCGAGCGTGTGCCATCTCTGTCTGACGGGGAATGGTGCGATGGCAGTGATTCCGCCCAGGAATTCCATAGTTCGAAATTCCGGCCGTATGATAATTCATTTGGACGAGAACGGTCTGCGCCTCATCAGCCACAGAAGAAGCATCATATGTTTGGAAAGAGGTGCTTCCAGGAGCAACCAGCTCCTACCCTAGATCCTGTCGGTAGACCTGGAGTCGTGAAGTACGAGTGCCCAGAACAGACATACCACCATGATAACATGCATATGCATAATGTTCCAGACTTCACTCCTAGACCACAGCTGGCGCCACCGCACGTGACCAACCTCCACGCCCCAGCGCTGGACCTCAACACTGCACACTCCAGCCATGCCCTGCTACAGAGCAATATCCCGAGCCCGGCTCCCCCCCGCTTTGCGTACGGCACCCCGGAGCGCGTCCGCCACAACCACACGTACTCCGCGCCCATCGCTGCCAACGACCAACGACCCGCCGCTGTACGGGACAAGAGAGTCCGGCGTCTAACAGACGGTAGCATGTCAGACGGTGGATCTTCAGCTACAAGCAGTGGACAGCATCTGTCGCGGGACGAGAAGCGAGCTAAAGCACTAGTGATTGCAGGGATTCCCTTGGAGGTGCAAGATATCATAAACTTGCCAATGGATGAGTTTAACGAGCGCCTGTCCAAACATGACCTGAGCGAGGCACAACTATCGCTCATACGGGATATACGGAGACGCGGGAAGAATAAGGTGGCAGCCCAGAACTGCCGGAAACGCAAACTGGACCAGATCACATCCCTCGCTGACGAGGTCCGCACCGTCAGGGACAGGAAGCAGCGGACGCAGAGGGAACACAGCTCGCTACTAGCTGAGAGGCAGCGGGTCAAGGAACGATTTGCAGCGCTATACCGTCACGTATTCCAGAACCTCCGCGACCCTGAAGGTAGACCGCTGTCATCCCAACAGTACTCCTTACAGCAAGCCGCCGACGGTAATGTCGTTCTTGTACCGAAAATGCCACAGCACCAAGATCACCCAATGAATCGCAGTAATGACGATGATATGGATAGAAAAGCCAAGAGCTACGACCAGTAA

[0031] 斜纹夜蛾Nrf2 dsRNA序列为（SEQ ID NO：2）

[0032] GCGUGUGCCAUCUCUGUCUGACGGGGAAUGGUGCGAUGGCAGUGAUUCCGCCCAGGAAUUCCAUAGUUCGAAAUUCCGGCCGUAUGAUAAUUCAUUUGGACGAGAACGGUCUGCGCCUCAUCAGCCACAGAAGAAGCAUCAUAUGUUUGGAAAGAGGUGCUUCCAGGAGCAACCAGCUCCUACCCUAGAUCCUGUCGGUAGACCUGGAGUCGUGAAGUACGAGUGCCCAGAACAGACAUACCACCAUGAUAACAUGCAUAUGCAUAAUGUUCCAGACUUCACUCCUAGACCACAGCUGGCGCCACCGCACGUGACCAACCUCCACGCCCCAGCGCUGGACCUCAACACUGCACACUCCAGCCAUGCCCUGCUACAGAGCAAUAUCCCGAGCCCGGCUCCCCCCCGCUUUGCGUACGGCACCCCGGAGCGCGUCCGCCACAACCACACGUACUCCGGCCCAUCGCUGCCAACGACCAACGACCCGCCGCUGUACGGGACAAGAGAGUCCGGCGUCUAACAGACGGUAGCAUGUCAGACGGUGGAUCUUCAGCUACAAGCAGUGGACAGCAUC

[0033] GFP dsRNA序列为（SEQ ID NO：3）：

[0034]UACGGCGUGCAGUGCUUCAGCCGCUACCCCGACCACAUGAAGCAGCACGACUUCUUCAAGUCCGCCAUGCCCGAAGGCUACGUCCAGGAGCGCACCAUCUUCUUCAAGGACGACGGCAACUACAAGACCCGCGCCGAGGUGAAGUUCGAGGGCGACACCCUGGUGAACCGCAUCGAGCUGAAGGGCAUCGACUUCAAGGAGGACGGCAACAUCCUGGGGCACAAGCUGGAGUACAACUACAACAGCCACAACGUCUAUAUCAUGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCAUCAAGGUGAACUUCAAGAUCCGCCACAACAUCGAGGACGGCAGCGUGCAGCUCGCCGACCACUACCAGCAGAACACCCCCAUCGGCGACGGCCCCGUGCUGCUGCCCGACAACCACUACCUGAGCAC。

[0035] 2）Nrf2 RNAi后斜纹夜蛾的表型以及对毒死蜱（CPF）处理的反应

[0036] 实验分为4组，即GFP RNAi（对照组）、Nrf2 RNAi、GFP RNAi+CPF、Nrf2 RNAi+CPF。Nrf2 RNAi和Nrf2 RNAi+CPF组分别向5龄1天斜纹夜蛾幼虫的倒数第二腹节注射5 μg Nrf2 dsRNA进行Nrf2 RNAi；GFP RNAi（对照组）和GFP RNAi+CPF分别注射同量的GFP dsRNA进行GFP RNAi；在RNAi 60 h后，采用点滴法将5 μl浓度为5*10-4mol/L的毒死蜱（以下简称为CPF）药液点滴至斜纹夜蛾的背部（GFP RNAi+CPF组、Nrf2 RNAi+CPF组）。每天观察虫体生长情况，注射dsRNA 84 h， 也即毒死蜱处理24 h后，记录死亡率。

[0037] 表1各组斜纹夜蛾幼虫经毒死蜱处理后死亡率

[0038]

[0039] 各组斜纹夜蛾死亡率的统计结果如表1所示，从中可以看出，毒死蜱处理24 h后，Nrf2 RNAi+CPF处理组的斜纹夜蛾死亡率达37%。

[0040] 毒死蜱处理24 h后各组斜纹夜蛾的长势如图1所示，从中可以看出，相比GFP RNAi组（如图1d），Nrf2 RNAi组的斜纹夜蛾个体生长缓慢，虫体瘦小（如图1a）；在对照组GFP RNAi基础上施加半致死剂量的杀虫剂CFP（GFP RNAi +CPF组），由于CPF的毒性，斜纹夜蛾虫体变小，生长减缓，并出现3%的死亡率（图1e和图1f）；但是经Nrf2 RNAi +CPF处理的斜纹夜蛾虫体更为瘦小，蜷缩且干瘪，100%不正常，出现37%的死亡率（图1b和图1c）；

[0041] 上述结果说明，Nrf2 RNAi后斜纹夜蛾虫体生长缓慢，并且对杀虫剂毒死蜱（CPF）更加敏感，斜纹夜蛾虫体的死亡率显著提高。说明昆虫Nrf2 dsRNA可作为相应昆虫杀虫剂的成分，从而促进昆虫的死亡率。

[0042] 实施例2 Nrf2在昆虫响应杀虫剂信号中的作用

[0043] 为了进一步研究昆虫Nrf2 dsRNA可作为杀虫剂成分的作用机制，本实施例进一步研究Nrf2在昆虫响应杀虫剂信号中的作用。

[0044] 1）杀虫剂对Nrf2表达的诱导作用

[0045] 分别用现在常用杀虫剂有机磷杀虫剂毒死蜱（chlorpyrifos）、菊酯类杀虫剂溴氰菊酯（deltamethrin）、植物源杀虫剂鱼藤酮（rotenone）、花椒毒素（xanthotoxin）、以及斜纹夜蛾喜好的十字花科植物中的主要次生物质吲哚-3甲醇（indole-3-carbinol）分别处理正常的5龄1天斜纹夜蛾幼虫，处理12h后，qRT-PCR检测各组虫体内Nrf2的表达量。

[0046] 检测结果如图2所示，从中可以看出，各种杀虫剂（xanthotoxin花椒毒素、indole-3-carbinol吲哚-3甲醇、 rotenone植物源杀虫剂鱼藤酮、chlorpyrifos有机磷杀虫剂毒死蜱、deltamethrin菊酯类杀虫剂溴氰菊酯）均对幼虫体内的Nrf2的表达水平具有显著的上调作用。

[0047] 2）杀虫剂对解毒酶表达的诱导作用

[0048] 分别用现在常用杀虫剂有机磷杀虫剂毒死蜱（chlorpyrifos）、菊酯类杀虫剂溴氰菊酯（deltamethrin）、植物源杀虫剂鱼藤酮（rotenone）、花椒毒素（xanthotoxin）、以及斜纹夜蛾喜好的十字花科植物中的主要次生物质吲哚-3甲醇（indole-3-carbinol）分别处理正常的5龄1天斜纹夜蛾幼虫，处理12h后，qRT-PCR分别检测各组虫体内解毒酶P450基因SlCyp6AE48、谷胱甘肽转移酶基因Slgste1的表达量。

[0049] 检测结果如图3和图4所示，从中可以看出，所选用的5种杀虫剂都能不同程度的诱导昆虫体内解毒酶Cyp6AE48和gste1表达上调，除了溴氰菊酯不能诱导Cyp6AE48之外。

[0050] 3）Nrf2调控解毒酶gste1表达

[0051] 将体外表达的Nrf2纯蛋白与gste1启动子上相应调控元件ARE: TCTGTGAAGTTATAATGACAAGGCAAAATAATATTT进行凝胶迁移实验 (EMSA， Electrophoretic Mobility Shift Assay )，实验结果如图5所示，从中可以看出体外获得的两个重组蛋白Nrf2（Nrf2-pET28a 和 Nrf2-ProA）都可以和ARE反应元件结合（图5泳道2和泳道4），200倍浓度的未标记的ARE反应元件相关的双链寡聚核苷酸能竞争性的抑制标记的ARE反应元件与重组蛋白的结合（图5泳道1和泳道3）。

[0052] 上述结果表明Nrf2可以与GSTe1启动子结合，从而启动解毒酶GSTe1的表达，而且这种结合是专一的，GSTe1启动子的ARE元件能与体外重组表达的Nrf2蛋白结合，而且这种结合是能够被非标记的ARE元件竞争性的抑制，所以说这种结合是专一的。而昆虫体内解毒酶GSTe1可以解毒多种有毒物，因此，可以说明Nrf2通过启动解毒酶的表达，从而行使了抗杀虫剂的功能，使虫体表现出较耐受杀虫剂的表型，提高虫体的存活率。

[0053] 采用分光光度法分别研究了有机磷杀虫剂毒死蜱、马拉硫磷和辛硫磷、菊酯类的溴氰菊酯、以及有机氯类的DDT与纯化SlGSTE1蛋白的体外结合。结果显示，GSTE1对标准底物1-氯-2,4-二硝基苯（以下简称为CDNB， 图6中control）具有较高酶活性，而在含CDNB酶活性检测液中分别加入这几类终浓度为100 μM杀虫剂，发现这几类杀虫剂都能竞争CDNB，抑制GSTE1对1-氯-2,4-二硝基苯（以下简称为CDNB）的活性，抑制率超过35%，其中以DDT对SlGSTE1体外抑制作用最为显著（见图6），结果表明这几类化学杀虫剂均可以与CDNB竞争性地结合在GSTE1的底物结合位点。由于已有大量报道不同GST（谷胱甘肽S-转移酶）可以与这些杀虫剂共轭结合后，转化为无毒的产物，因此SlGSTE1可作用多类杀虫剂。

[0054] 实施例3 Nrf2在不同物种的序列比对

[0055] 将斜纹夜蛾及其他昆虫的Nrf2核苷酸进行相似性分析，分析结果如表2所示，从中可以看出不同昆虫之间，斜纹夜蛾Nrf2除了与同为鳞翅目的家蚕（BmNrf2）有74.9% 相似度外，与其他物种相似度较低。因此在斜纹夜蛾Nrf2特殊区域的dsRNA具有特异性，不会对其他非鳞翅目种类昆虫的Nrf2进行RNA敲除，具有安全性，而可以用于鳞翅目害虫。

[0056] 表2斜纹夜蛾及其他昆虫的Nrf2核苷酸相似性分析

[0057]

[0058] 注：Bm:家蚕 bombyx mori Nrf2（BGIBMGA001765）; Da: 嗜凤梨果蝇Drosophila ananassae Nrf2(GF18025); Dm: 果蝇Drosophila melanogaster Nrf2（NM_170055）; Aa:埃及伊蚊 Aedes aegypti Nrf2（XM_001650266）; Ag: 冈比亚按蚊Anopheles gambiae Nrf2（XM_309091）; Am: 意蜂Apis mellifera Nrf2（XM_003251740）; Tc: 赤拟谷盗Tribolium castaneum Nrf2（NP_001164113）; Sl: 斜纹夜蛾Spodoptera litura Nrf2。

[0059] 将昆虫Nrf2 dsRNA序列与人类基因组进行比较，没有任何序列可以匹对，说明昆虫Nrf2 dsRNA可以用于专一杀虫应用。

[0060] 本发明用农业害虫斜纹夜蛾进行实验，证实Nrf2影响斜纹夜蛾对杀虫剂的敏感性。综合上述的实验结果，可将能够抑制昆虫Nrf2表达的人工合成物质（如抑制Nrf2表达的dsRNA）或从植物筛选的化合物作为杀虫剂的增效剂，从而提高杀虫效率，降低高毒农药的使用剂量，从而达到环境和食品安全的目的。

[0061] 上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。