一种皮肤营养液及其制备方法

摘要

本发明涉及一种皮肤营养液及其制备方法。该皮肤营养液包括如下组分：人神经干细胞调节培养液990ml，人重组表皮生长因子1‑100μg，抗坏血酸葡萄糖苷0.5‑5g，维生素E0.2‑5g，维生素原B5 0.3‑5g，神经酰胺10‑1000mg，尿囊素0.1‑3g，辅酶Q10 1‑50mg，透明质酸0.1‑4g，水解胶原蛋白1‑10g，微量元素促渗因子20‑1000mg。本发明的皮肤营养液可以有效促进皮肤新陈代谢，淡化色斑，平复皱纹，修复受损肌肤，增加皮肤弹性，防止皮肤老化，改善长期使用化妆品后的激素性或其它有害物质引起的敏感皮肤或称问题皮肤，全面改善问题皮肤，嫩化肌肤，达到健康的肤质。

权利要求

1.一种皮肤营养液，其特征在于该皮肤营养液包括如下组分：人神经干细胞调节培养液   990 ml，人重组表皮生长因子      1-100μg，抗坏血酸葡萄糖苷         0.5-5g，维生素E                0.2-5g，维生素原B5             0.3-5g ，神经酰胺               10-1000mg，尿囊素                 0.1-3g，辅酶Q10                1-50mg，透明质酸              0.1-4g，水解胶原蛋白           1-10g，微量元素促渗因子       20-1000mg；

所述的人神经干细胞调节培养液是人神经干细胞培养基对人神经干细胞进行培养3-7天，收集得到的上清液，人神经干细胞培养基是由以下组分混合而成：DMEM/F12 培养基      12g无菌去离子水        950 mL肝素钠              200μg维生素E            30 μg人重组胰岛素        25 mg腐胺                1.6 mg亚硒酸钠             6 μg人转铁蛋白           5.5 mg黄体酮               7 μgL－谷氨酰胺         300mg

4-羟乙基哌嗪乙磺酸    5.9 g人重组表皮生长因子   20μg人重组碱性成纤维生长因子 20μg维生素C 葡萄糖苷  50mg庆大霉素       40000 IU；

所述的皮肤营养液由以下步骤制得：

1）人神经干细胞调节培养液经0.3 μm滤膜过滤备用；

2）取尿囊素、抗坏血酸葡萄糖苷、维生素E、维生素原B5、水解胶原蛋白、透明质酸、神经酰胺、辅酶Q10和微量元素促渗因子，用人神经干细胞调节培养液作为溶剂溶解并充分混合，得到混合液；

3）混合液置于56-58℃水浴加温1-1.5小时，在无菌条件操作配制，最后加入人重组表皮生长因子，搅拌均匀后灌装，置于-20℃冷冻箱内保存。

说明书

一种皮肤营养液及其制备方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种美容产品，特别涉及一种皮肤营养液及其制备方法，属于化妆品领域。

背景技术

[0002] 人体衰老是细胞衰老的最终结果，皮肤皱纹是皮肤细胞衰老的表现形式。随着年龄变大，皮肤代谢减慢，自由基和脂质过氧化物增加，胶原纤维和弹力纤维变性，皱纹加深加长。同时黑色素细胞酶活性减低等多种原因导致色素沉着和多种斑块形成。随着人民生活水平提高，人们越来越重视自己的个人形象，特别是脸面部的皱纹和色素沉着会影响个人的美观和心情，而个人的心情或多或少直接影响全身的一个或多个组织器官的健康。所以，脸部皮肤的美观对每个人都十分重要，对女性朋友尤其重要。在日常生活中，人们长期使用化妆品后产生所谓“激素皮肤”和其它不健康皮肤或称为“问题皮肤”。有些妇女的皮肤近看时皮肤表层很薄，可以看见明显的皮下红血丝，她们对稍微有点热的水或冷的水或对面吹来的凉风都会感到刺疼和难受，对很多护肤品都会过敏。这些妇女心情十分烦躁，甚至影响着她们的日常生活，她们甚至抱怨市场上买不到一种真正无防腐剂、无毒副作用的护肤美容品。

发明内容

[0003] 本发明提供一种有效促进皮肤新陈代谢，淡化色斑，平复皱纹，修复受损肌肤，增加皮肤弹性，防止皮肤老化的皮肤营养液。

[0004] 本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

[0005] 一种皮肤营养液，该皮肤营养液包括如下组分：

[0006]

[0007]

[0008] 作为优选，所述的人神经干细胞调节培养液是人神经干细胞培养基对人神经干细胞进行培养3-7天，收集得到的上清液，人神经干细胞培养基由以下组分混合而成(1L)：

[0009]培养基中营养物质被人神经干细胞吸收、代谢，并产生新的生长因子和营养成分。上清液-20度冷冻保藏，备用。

[0010] 一种所述的皮肤营养液的制备方法，该方法包括如下步骤：

[0011] 1)人神经干细胞调节培养液经0.3μm滤膜过滤备用；

[0012] 2)取尿囊素、抗坏血酸葡萄糖苷、维生素E、维生素原B5、水解胶原蛋白、透明质酸、神经酰胺、辅酶Q10和微量元素促渗因子，用人神经干细胞调节培养液作为溶剂溶解并充分混合，得到混合液；

[0013] 3)混合液置于56-58℃水浴加温1-1.5小时，在无菌条件(0-10级无菌超净工作台)中操作配制，最后加入人重组表皮生长因子，搅拌均匀后灌装，置于-20℃冷冻箱内保存。本产品常温融化后，直接涂抹脸面部，每天1-2次，连续使用1-2周以上。

[0014] 发明人经过十余年的潜心研究，包括对本发明的产品进行5年的人体测试,其中主要成分是人神经干细胞调节培养液。在人神经干细胞长期培养期间，每个星期需要更换1-2次新鲜干细胞培养液，给人神经干细胞培养使用后的人神经干细胞培养液被称为人神经干细胞调节培养液。经过我们对它涂抹脸部皮肤的多人使用后，发现在连续使用3周可以使脸面部皮肤皱纹明显减少，而且脸面部的色素沉着也明显淡化了。后来在此基础上添加了其它化妆品原料，经过多次实验优选，结果发现该组合配方的抗皱纹和淡斑效果比任何单一成分更好，所以形成了这组配方，称为皮肤营养液(简称OG-1)。

[0015] 本发明的皮肤营养液中成分分析如下：

[0016] 1).人神经干细胞调节培养液的作用是，a.补充皮肤细胞多种营养成份；b.调节皮肤内外微循环平衡作用；c.补充皮肤微量元素和补水作用；d.作为我们产品“皮肤营养液”(暂名)其它原料的溶剂。

[0017] 2).表皮生长因子(EGF)，EGF由美国科学家Stanley Cohen等于1962年发现的，大量实验研究表明EGF可促进皮肤创伤的愈合，增加皮肤弹性作用。

[0018] 3).抗坏血酸葡萄糖苷作用，a.参与氨基酸代谢、神经递质、胶原蛋白和组织细胞间质的合成；b.具有很强的抗氧化作用；c.抑制皮肤异常色素沉着和美白作用。

[0019] 4).维生素E作用，a.延缓皮肤细胞衰老；b.抗氧化作用；c.清除自由基作用，为“血管清道夫”；d.维持细胞正常代谢；e.改善血液和毛细血管的循环；f.抑制日晒红斑、平滑肌肤、减少皮肤皱纹；

[0020] 5).维生素原B5作用，a.活化上皮细胞，促进上皮细胞生成，有助于伤口的愈合；b.消炎作用；c.抗过敏性皮炎和解毒作用；d.保湿作用。

[0021] 6).神经酰胺作用，a.抗皮肤衰老作用；b.美白作用；c.保湿作用；d.抗过敏作用；e.参与调节细胞生长、增殖、分化、凋亡及损伤等多种细胞活动；f.抗癌作用。

[0022] 7).尿囊素作用，a.修复皮肤损伤的作用，包括对皮肤晒伤的修复作用；b.促进细胞生长、软化角质蛋白层，加快伤口愈合；c.润肤保湿作用；d.消炎、抗痤疮(痘)作用。

[0023] 8).辅酶Q10作用，a.防止皮肤光衰老，减少皮肤皱纹；b.抑制脂质过氧化反应，减少自由基的生成；c.保护超氧化物歧化酶(SOD)活性中心及其结构免受自由基氧化损伤；d.抗细胞凋亡，维持细胞膜的完整和稳定；e.增强细胞新陈代谢的功能；f.增强保湿功效。

[0024] 9).透明质酸作用，a.对损伤皮肤有修复作用；b.营养作用；c.保湿作用；d.润滑性和成膜性；e.增稠和稳定作用。

[0025] 10).水解胶原蛋白作用，a.提高肌肤内部张力和弹性，平整皱纹，提高紧致感；b.补充胶原蛋白和促进自体胶原蛋白的合成；c.延缓皮肤衰老，d.保湿作用，保持角质层水份。

[0026] 11).微量元素促渗因子：含有微量元素和海水。其中富含矿物质(镁、氯、钠、钙、铁、锌、锰、铜、碘、钾)等微量元素，促进各种营养成分向皮下组织渗透作用。本身无毒副作用。

[0027] 本发明的有益效果是：本发明的皮肤营养液可以有效促进皮肤新陈代谢，淡化色斑，平复皱纹，修复受损肌肤，增加皮肤弹性，防止皮肤老化，改善长期使用化妆品后的激素性或其它有害物质引起的敏感皮肤或称问题皮肤，全面改善问题皮肤，嫩化肌肤，达到健康的肤质。此外，本发明另一个特色是不添加防腐剂、乳化剂、醇醚类、抗氧化剂、稳定剂、色素、香精等有毒害物质，真正达到有益无害的美容护肤品，安全可靠。

附图说明

[0028] 图1是不同剂量皮肤营养液对人皮肤上皮细胞的增殖作用；

[0029] 图2是EGF 100ng/mL对照组(放大100倍)人皮肤上皮细胞；

[0030] 图3是OG-1 25μL/mL实验组(放大100倍)人皮肤上皮细胞；

[0031] 图4是皱纹深度对照组照片灰度图(光源距离15cm)；

[0032] 图5是使用皮肤营养液前、后的皮肤照片灰度变化图(光源距离15cm)；

[0033] 图6是使用皮肤营养液前、后的额头皱纹长度变化图；

[0034] 图7是使用皮肤营养液前、后的额头皱纹宽度变化图；

[0035] 图8是使用前的额头皱纹照相；

[0036] 图9是使用皮肤营养液12天后的额头皱纹照相；

[0037] 图10是使用前左眼角皱纹照相；

[0038] 图11是使用皮肤营养液12天后左眼角皱纹照相；

[0039] 图12是本发明使用前右眼角皱纹照相；

[0040] 图13是使用皮肤营养液12天后右眼角皱纹照相。

具体实施方式

[0041] 下面通过具体实施例，对本发明的技术方案作进一步的具体说明。应当理解，本发明的实施并不局限于下面的实施例，对本发明所做的任何形式上的变通和/或改变都将落入本发明保护范围。

[0042] 在本发明中，若非特指，所有的份、百分比均为重量单位，所采用的设备和原料等均可从市场购得或是本领域常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。

[0043] 微量元素促渗因子来源于法国CODIF微量元素促渗因子ATOLIGOMER。

[0044] 实施例1皮肤营养液的配制

[0045] 1.人神经干细胞调节培养液的制备

[0046] 人神经干细胞在37℃5％CO2细胞培养箱中进行长期培养，每个星期更换1-2次新鲜配制的干细胞培养液，更换下来的人神经干细胞培养液放置于-20℃冷冻保存。临用前室温下融化人神经干细胞调节培养液，用0.3μm滤膜过滤备用。

[0047] 人神经干细胞调节培养液是人神经干细胞培养基对人神经干细胞进行培养3-7天，收集得到的上清液，人神经干细胞培养基由以下组分混合而成(1L)：

[0048]

[0049]培养基中营养物质被人神经干细胞吸收、代谢，并产生新的生长因子和营养成分。上清液-20度冷冻保藏，备用。

[0050] 2.皮肤营养液的配制

[0051] 配方：人神经干细胞调节培养液990ml；人重组表皮生长因子(EGF)50μg，抗坏血酸葡萄糖苷1g，维生素E 1g，维生素原B5 1g，神经酰胺100mg，尿囊素1g，辅酶Q10 10mg，透明质酸2g，水解胶原蛋白5g，微量元素促渗因子100mg。

[0052] 在人神经干细胞调节培养液中按比例加入抗坏血酸葡萄糖苷、维生素E、维生素原B5、尿囊素、水解胶原蛋白、微量元素促渗因子、辅酶Q10、神经酰胺和透明质酸等物质，在0-10级无菌超净工作台中操作配制，最后加入人重组表皮生长因子，除菌，分装，置于-20℃冷冻箱内保存。

[0053] 3.微生物检查：每次配制的产品都进行微生物检查。皮肤营养液中检查未发现细菌和霉菌，即为产品合格。

[0054] 实施例2皮肤营养液的配制

[0055] 本实施例具体方案与实施例1相同，不同之处在于皮肤营养液的配制中配方为：人神经干细胞调节培养液990ml；人重组表皮生长因子(EGF)5μg，抗坏血酸葡萄糖苷0.5g，维生素E 0.3g，维生素原B5 0.3g，神经酰胺10mg，尿囊素0.1g，辅酶Q10 2mg，透明质酸0.2g，水解胶原蛋白1g，微量元素促渗因子20mg。

[0056] 实施例3皮肤营养液的配制

[0057] 本实施例具体方案与实施例1相同，不同之处在于皮肤营养液的配制中配方为：人神经干细胞调节培养液990ml；人重组表皮生长因子(EGF)100μg，抗坏血酸葡萄糖苷5g，维生素E 5g，维生素原B5 5g，神经酰胺1000mg，尿囊素3g，辅酶Q10 50mg，透明质酸4g，水解胶原蛋白10g，微量元素促渗因子1000mg。

[0058] 实施例不同浓度皮肤营养液对人皮肤上皮细胞增殖作用的影响

[0059] 1、实验目的

[0060] 探讨不同浓度的皮肤营养液(简称OG-1)是否具有对人皮肤上皮细胞的增殖作用，从细胞水平分析皮肤营养液的作用。

[0061] 2、实验方法

[0062] 1)采用传代的人皮肤上皮细胞(简称皮肤细胞)。

[0063] 2)分成9组(A-I)：

[0064] A：DMEM/F12+2％FBS，设为调零组；

[0065] B：DMEM/F12+2％FBS，+DMEM/F12 20μL,设为空白对照组；

[0066] C：DMEM/F12+10％FBS+细胞+DMEM/F12 20μL设为标准对照组；

[0067] D：DMEM/F12+2％FBS+细胞+DMEM/F12含0.78μL/mL OG-1；

[0068] E：DMEM/F12+2％FBS+细胞+DMEM/F12含1.56μL/mL OG-1；

[0069] F：DMEM/F12+2％FBS+细胞+DMEM/F12含3.13μL/mL OG-1；

[0070] G：DMEM/F12+2％FBS+细胞+DMEM/F12含6.25μL/mL OG-1；

[0071] H：DMEM/F12+2％FBS+细胞+DMEM/F12含12.50μL/mL OG-1；

[0072] I：DMEM/F12+2％FBS+细胞+DMEM/F12含25μL/mL OG-1；

[0073] 3).从37℃培养箱中取出皮肤细胞，弃去上清液，加入10ml D-Hank’s液冲洗2遍，弃液。

[0074] 4).加1ml 0.125％的胰蛋白酶EDTA溶液，放入37℃培养箱中消化5min。

[0075] 5).5min后取出，加入0.5ml血清终止消化，用移液管吹打成单个细胞。移入离心管中。

[0076] 6).离心机2500rpm(663g)离心5分钟，弃去上清液，加入2ml DMEM/F12培养基含有2％胎牛血清(FBS)吹打成细胞悬液，取50μL加台盼蓝进行细胞计数。

[0077] 7).用含有2％FBS的营养液调整细胞浓度为8.75×104个/ml，种入96孔板相对应孔中，每孔80μL细胞悬液。其中96孔板外围一圈加入100μL DMEM/F12培养基，以防液体蒸发。

[0078] 8).放入37℃CO2培养箱中培养。

[0079] 9).细胞贴壁后，从培养箱中取出96孔板。将中间孔平均分为9组，每组设6孔平行组(n＝6)。按如下分组分别加入皮肤营养液(各孔最终总量为100μL)：

[0080] 10).将96孔板放入37℃培养箱中培养。

[0081] 11).48h后取出96孔板，每孔加入20μL噻唑蓝(MTT)母液(5mg/ml)，沿孔边缘加入。

[0082] 12).放入37℃培养箱内培养5小时。

[0083] 13).5小时后取出，用移液枪小心吸弃营养液。立即加入二甲基亚砜(DMSO)150μL/孔，用移液枪上下轻轻地吸和吹，以便溶解MTT结晶。

[0084] 14).将96孔板放入37℃培养箱5min，以便减少气泡。

[0085] 15).开启酶标仪，调波长至570nm，测定各孔的吸光值。

[0086] 3、实验结果

[0087] 从上述MTT结果分析：

[0088] ①OG-1各剂量组与空白对照组相比，OD值均大于空白对照组，即表示细胞增殖均快于对照组，且具有明显的差异。

[0089] ②与标准对照组相比，剂量为25μL/mL，12.5μL/mL，6.25μL/mL的三组OD值大于标准对照组，即表示该三组细胞增殖快于标准对照组。

[0090] ③OG-1不同剂量比较，随着剂量的增加，OD值增大，即表示随着OG-1剂量增加，细胞增殖加快。

[0091] ④图2、对照组，DMEM/F12+2％血清+EGF 100ng/mL。图3、实验组，DMEM/F12+2％血清+OG-1 25ul/mL培养6天后细胞显微镜图像看出，OG-1 25ul/mL使细胞明显增多。

[0092] 图1显示不同剂量皮肤营养液对人皮肤上皮细胞的增殖作用，在0.78-25uL/mL剂量皮肤营养液比对照组均有明显的细胞增殖作用，并有剂量-反应关系，25uL/mL剂量皮肤营养液达到细胞增殖的最高峰。

[0093] 综上所述：本实验剂量的条件下，本发明的皮肤营养液随着剂量增加，对人上皮细胞增殖加快。说明皮肤营养液具有促进人皮肤上皮细胞的增殖作用。

[0094] 实施例 皮肤营养液急性经皮毒性试验

[0095] 1.实验目的 观测皮肤营养液对家兔皮肤是否有急性毒性作用。

[0096] 2、材料和方法：

[0097] 1)受试物：本发明制得的皮肤营养液原液。

[0098] 2)动物和饲养环境：新西兰种家兔，普通级，体重2.0-2.6Kg，动物于普通级动物房内单笼饲养，动物房的温度为20-22℃，湿度为40-50％RH。饮水为自来水。

[0099] 3).剂量分组：按一次最大限度试验，每组20只动物，雌、雄性各半。按2180mg/kg体重计算染毒量。

[0100] 4)试验方法：采用一次最大限度试验，受试物剂量设为2180mg/kg体重。试验开始前24h，剃除动物躯干背部拟染毒区域的被毛，去毛面积为9cm×20cm。将受试物均匀涂敷于背部皮肤染毒区，用一层薄胶片覆盖，然后以无刺激胶布固定，封闭接触24h。染毒结束后，用水清除残留受试物。观察动物的一般状况、中毒症状和死亡情况，观察期限两周，观察期间每周称量体重一次。试验结束时所有动物进行解剖，记录动物的大体病理改变。根据急性毒性分级标准进行急性毒性分级。

[0101] 5)观察指标：染毒后，观察动物的一般状况、中毒症状和死亡情况，观察期限两周。在两周内无死亡，可判定LD50大于2180mg/kg体重。

[0102] 3、试验结果

[0103] 表1.皮肤营养液对家兔急性经皮毒性试验结果

[0104]

[0105] 结论：给皮肤营养液最大剂量后，家兔无中毒及死亡情况出现。因此，该受试物对家兔经皮LD50均大于2180mg/kg体重。

[0106] 实施例 皮肤营养液多次皮肤刺激试验

[0107] 1.实验目的 观测皮肤营养液对家兔皮肤多次刺激后是否有亚急性毒性作用。

[0108] 2、材料和方法：

[0109] 1)受试物：本发明的皮肤营养液原液。

[0110] 2)动物和饲养环境：新西兰种家兔，普通级，体重2.3-3.0Kg，动物于普通级动物房内单笼饲养，动物房的温度为23-26℃，湿度为60-70％RH。饮水为自来水。

[0111] 3试验方法：试验前约24h，将动物背部脊柱两侧毛剪掉，去毛范围左、右各约3cm x 3cm。取受试物0.5ml涂在一侧皮肤上，另一侧皮肤作为对照，在涂抹后4小时，用温水清洗以除去残留受试物。每天1次，连续14天。在每次涂抹后24小时观察结果，按《化妆品卫生规范》(2007年版)“皮肤刺激性/腐蚀性试验”中表1评分，对照区和试验区作同样处理。实验结束后按下列公式计算每天每只动物的平均积分，按表2判定皮肤刺激强度。

[0112]

[0113] 4、试验结果

[0114] 受试物对家兔多次皮肤刺激性为无刺激，见表2。

[0115] 表2.皮肤营养液原液对家兔多次皮肤刺激性试验结果

[0116]

[0117]

[0118] 结论：受试物皮肤营养液多次接触动物未引起皮肤刺激反应，其最高积分均值为0，按皮肤刺激强度分级标准，该受试物属于无刺激性。

[0119] 实施例 皮肤营养液皮肤变态反应试验

[0120] 1.实验目的 观测皮肤营养液对豚鼠皮肤是否有变态反应作用。

[0121] 2.材料和方法：

[0122] 1)受试物及其配制方法：皮肤营养液原液。

[0123] 2)阳性物：2，4-二硝基氯代苯，用凡士林配制成0.5％及0.3％的浓度。

[0124] 3)动物和饲养环境：白化豚鼠，普通级，共30只。体重239-279g，动物于普通级动物房内饲养，动物房的温度为20-24℃，湿度为45-55％RH。饮水为自来水。

[0125] 3.试验方法：采用局部封闭涂皮试验法。

[0126] 1)试验前约24h，将豚鼠背部左侧去毛约6cm2。

[0127] 2)诱导接触：试验0天将原液约0.2ml涂在豚鼠去毛区皮肤上，以两层纱布和一层玻璃纸覆盖，再以无刺激性胶布封闭固定6h。试验7天和14天按同样方法重复一次。阴性对照组动物不作处理，阳性对照组动物用0.5％2，4-二硝基氯代苯作同样处理。

[0128] 3)激发接触：在末次诱导后14天，将0.2ml原液涂于豚鼠右侧约2cm×2cm去毛区(接触前24h脱毛)，然后以两层纱布和一层玻璃纸覆盖，再以无刺激性胶布封闭固定6h。阴性对照组及阳性对照组动物分别用注射用水及0.3％2，4-二硝基氯代苯作同样处理。

[0129] 4)激发接触后24h和48h观察皮肤反应，按《化妆品卫生规范》(2007年版)“皮肤变态反应试验”中表1进行皮肤反应评分。

[0130] 5)如动物皮肤反应积分≥2分时，判为该动物皮肤变态反应阳性，按表3判定受试物的致敏强度。

[0131] 3、试验结果

[0132] 皮肤营养液对豚鼠皮肤变态反应试验结果表明，最大剂量皮肤营养液未见对豚鼠皮肤变态反应,见表3。

[0133] 表3.皮肤营养液对豚鼠皮肤变态反应试验结果(BT法)

[0134]

[0135] 注：皮肤反应强度栏中数字为皮肤反应积分为0、1、2、3…时，发生反应的动物数占受试动物数的比例。

[0136] 结论：受试物(皮肤营养液)对豚鼠皮肤变态反应试验结果为未见皮肤变态反应。

[0137] 实施例 皮肤营养液对人脸面部皮肤皱纹的影响

[0138] 1.实验目的

[0139] 皮肤营养液涂抹人脸面部皮肤后，观测其皱纹的变化，以便了解受试物是否具有抗皱作用。

[0140] 2.实验方法

[0141] 1)采用50-60岁健康人群20个人，10个女性，10个男性。

[0142] 2)在使用皮肤营养液前对其脸面部照相，并用硅胶倒模制作制图。

[0143] 3)使用皮肤营养液12天后照相，同样用硅胶倒模制作制图。

[0144] 4)硅胶倒模制作

[0145] (1)、称取20g医用硅胶。加入1ml塑化剂，快速搅拌均匀；

[0146] (2)、将搅拌均匀的硅胶涂迅速抹于检测部位，要求涂抹均匀、轻薄；

[0147] (3)、常温下，面部放松、平静30分钟，待硅胶自然凝固；

[0148] (4)、小心揭下硅胶倒膜片，倒置于桌面；

[0149] (5)、将一块从皮肤上取下的硅胶皱纹膜片放于平台上,一束倾斜的平行光照在硅胶皱纹膜片上,有皱纹的地方就会形成皱纹状的阴影。在硅胶膜片的上方有一个高分辨率的摄像头用于图像拍摄,通过分析这些阴影部分图像灰度值的变化，分析皮肤皱纹的变化,最终用于抗皱化妆品的检测。

[0150] 5)、皱纹长度和宽度

[0151] (1)、照相机，相机镜头距离皱纹距离：20cm。自动对焦。

[0152] (2)拍摄部位：额头眉心上方皱纹、左眼角皱纹和右眼角皱纹三区。

[0153] (3)以面部斑为对照，通过photoshop参照比例尺计算皱纹长度、宽度。

[0154] 6)、拍摄倒模照片：每一条件均拍摄3张图片。

[0155] 摄像头聚倒模距离：4cm；摄像头放大倍数：50X。

[0156] 光源：LED补光灯。

[0157] 摄像头高度：4.5cm组，0.5cm组，14.5cm组

[0158] 光源距离倒模直线距离：5cm组，15cm组，25cm组。

[0159] 7)、图片处理：所有图片均在photoshop中经灰化，反相处理后保存。

[0160] 8)、读取灰度值：以ImageJ软件选取图片区域中，读取并记录灰度值。

[0161] 3.实验结果

[0162] 1)皱纹深度对照组照片灰度见图4.图4显示1mm和2mm模拟皱纹倒模高度，以作为对照组。通过实验表明，1mm和2mm组在相同处理条件下，1mm组灰度组高于2mm，可得出结论，灰度值越高，皱纹倒模纹路越细小。

[0163] 2)使用皮肤营养液前后皮肤照片灰度变化见图5，图5显示，使用皮肤营养液3天后比使用前的倒模图片灰度值明显增高，并且使用皮肤营养液12天后比使用前的倒模图片灰度值具有非常显著增高，说明使用后皮肤营养液后皱纹倒模纹路变细小，皱纹明显变浅。

[0164] 3)使用皮肤营养液后额头皱纹长度变化图，图6显示，使用皮肤营养液3天后比使用前额头皱纹长度明显缩短，并且使用皮肤营养液12天后比使用前额头皱纹长度具有非常显著缩短，说明使用后皮肤营养液后皱纹长度明显缩短。

[0165] 4)使用皮肤营养液后额头皱纹宽度变化图，图7显示，使用皮肤营养液3天后比使用前额头皱纹宽度明显缩窄，并且使用皮肤营养液12天后比使用前额头皱纹宽度具有非常显著缩窄，说明使用皮肤营养液后皱纹宽度明显缩窄。

[0166] 5)使用前额头皱纹，见图8。使用皮肤营养液12天后额头皱纹明显比使用前减少，见图9。

[0167] 6)使用前左眼角皱纹，见图10。使用皮肤营养液12天后左眼角皱纹比使用前显著减少，见图11。

[0168] 7)使用前右眼角皱纹，见图12。使用皮肤营养液12天后右眼角皱纹比使用前显著减少，见图13。

[0169] 结果，使用皮肤营养液2周后使中老年人脸面部皱纹明显减少，说明皮肤营养液具有除皱效果。

[0170] 根据上述试验得到结论如下：

[0171] 1.经毒理试验表明，本发明的皮肤营养液多次涂抹动物未见皮肤刺激反应，属于无刺激性，无皮肤过敏反应，安全无毒。

[0172] 2.上述实验表明，本发明的皮肤营养液有促进体外培养的人皮肤上皮细胞的增殖作用；皮肤营养液具有抗皱嫩肤作用。

[0173] 此外，本发明皮肤营养液不添加防腐剂、乳化剂、醇醚类、抗氧化剂、激素、稳定剂、色素、香精等有毒害物质，真正达到有益无害的美容护肤品，安全可靠。

[0174] 以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案，并非对本发明作任何形式上的限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。