一种从鲜木瓜果实中提取齐墩果酸的方法

摘要

本发明一种从鲜木瓜果实中提取齐墩果酸的方法，可以快速、安全的提取齐墩果酸，经济性好，适合于工业化生产的需要，无需大型设备，提取时间短，生产效率高，可保证齐墩果酸最大限度的快速游离出来，得到高纯度的齐墩果酸晶体；而且该提取方法工艺步骤简单，条件温和，具有广阔的工业应用价值，适宜于大规模生产。本发明提供的提取方法可得到有效成分含量较高的提取物，齐墩果酸的纯度在95%以上，可直接用于药物制剂的制备。

权利要求

1.一种从鲜木瓜果实中提取齐墩果酸的方法，按下述步骤进行：

1）将鲜木瓜洗净沥干后剖开去籽，在50-65℃的环境下干燥0.5-2.5h后，粉碎得干木瓜粉；

2）将干木瓜粉加入3-5倍量的浓度为95%的乙醇置于回流装置内并加热70-90℃进行回流蒸煮，回流反应时间为0.5-1.5h，重复回流提取三次，将三次提取的乙醇的稠浸膏合并备用；

3）将步骤2）制得的稠浸膏投入敞口的不锈钢容器中加热75-80℃直至残液充分蒸发后，加入2-3倍量的蒸馏水并充分搅拌后煮沸10-20min，并自然降温至20-28℃后，用虹吸法除去水溶液，并重复水洗2-3次；

4）将滤出的水不溶物加入2-3倍量的浓度为95%乙醇充分搅拌溶解，缓慢滴入浓度为

10%的NaOH调节pH值为11时停止滴入，并加入0.25-0.75倍量的活性炭脱色0.5-1.5h后过滤；

5）向滤液中缓慢滴入浓度为95%的盐酸酸化至pH值为1时停止滴入，并静置10-12h析出沉淀物，滤出沉淀物备用，将滤液加热50-70℃使盐酸蒸发后浓缩过滤，并与沉淀物合并备用；

6）将步骤5）的滤出物用6-8倍量的浓度为5%的NaOH水溶液充分搅拌均匀并煮沸30-

45min后趁热过滤，并对滤液重复煮沸2-3次后，再用6-8倍量的去离子水搅拌煮沸30-45min后，趁热过滤得水洗物；

7）将步骤6）的水洗物加入10-12倍量的水充分溶解，加入0.1-0.3倍量的活性炭过滤脱色，滤液再滴入浓度为95%的盐酸酸化至pH值为1时停止滴入，并静置4-8h析出齐墩果酸结晶；

8）将步骤7）的结晶物用1-2倍量的蒸馏水煮沸洗涤30-40min，重复洗涤4-5次，直至用硝酸银鉴别无氯离子时，将沉淀物置于60-80℃的温度下烘干，即得白色齐墩果酸成品。

说明书

一种从鲜木瓜果实中提取齐墩果酸的方法

[0001] 技术领域  本发明属于齐墩果酸的提取技术领域，具体涉及一种从鲜木瓜果实中提取齐墩果酸的方法。

[0002] 背景技术  木瓜（Fructus Chaenomelis）为《中国药典》2010 年版（一部）收载品种，是蔷薇科植物贴梗海棠Chaenomeles speciosa(Sweet)Nakai 的干燥近成熟果实。味酸、温，归肝、脾经。具有平肝舒筋，和胃化湿的功效。主治湿痹拘挛，腰膝关节酸重疼痛，暑湿吐泻，转筋挛痛，脚气水肿等症。随着中药药理学研究的深入，发现木瓜具有多种生理活性，已报道的主要药理活性成分包括三萜类、有机酸类、黄酮类以及鞣质等。主要的三萜类成分为五环三萜类化合物，包括齐墩果酸（oleanolicacid）、齐墩果酸（ursolic acid）、3-O- 乙酰基齐墩果酸（3-O-acetylursolicacid）、3-O- 乙酰坡模醇酸（3-O-acetyl pomolic acid）和桦木酸（betulinic acid）等。木瓜中的其它成分，有机酸种类较多，主要有苹果酸（malic

[0003] acid）、绿原酸（chlorogenic acid）、咖啡酸（coffeic acid）、柠檬酸（citric acid）、

[0004] 莽草酸（shikimate）、奎宁酸（quinic acid）、曲酸（kojic acid）、琥珀酸（succinic

[0005] acid）、乙酸（acetic acid）、正葵酸（n-caproic acid）、棕榈酸（palmitic acid）、亚麻酸（顺-9,12- 十八碳二烯酸，linolenic acid）、硬脂酸（stearic acid）、绿原酸甲酯（chlorogenic acid methyl ester）、绿原酸乙酯（chlorogenic acid ethylester）、绿原酸丁酯（chlorogenic acid-n-butyl）等等。黄酮类成分主要为槲皮素等。鞣质类成分主要为原儿茶酸（protocatechuic acid）、没食子酸（gallic acid）等。

[0006] 齐墩果酸 oleanolic acid 是一种五环三萜类化合物早在1908年英国的 F B Powers 首次从木樨科植物橄榄( Olea europaea L)的叶中分离出齐墩果酸并在1946年由 Ruzicka 确定了它的结构。据不完全统计有190余种植物中含有齐墩果酸。齐墩果酸以游离态或皂苷的形式存在于植物体内广泛分布于双子叶植物五加科、木犀科、龙胆科等多种植物中。齐墩果酸为抗肝炎药用于治疗病毒性迁延性慢性肝炎对症状、体征和肝功能均有明显改善作用。现代研究表明齐墩果酸具有降低谷丙转氨酶、促进细胞再生、防止肝硬化、抗炎等作用是治疗肝炎的有效成分。其药用价值主要有保肝护肝作用、抗癌作用、降血糖血脂作用、抗病毒及微生物作用、抗炎作用、抗衰老作用、抗溃疡作用以及对免疫系统的影响。在医学领域主要有用于急性病毒性肝炎的治疗用于慢性肝炎的治疗、肝硬化治疗、免疫治疗恶性肿瘤。对楤木属植物进行齐墩果酸含量测定结果表明在植物各个部位根皮部、茎皮部和叶片中的含量均较高。齐墩果酸的提取方法主要有回流提取、索氏提取、渗滤提取和冷浸提取。

[0007] 鉴于其独特的临床效果、重要的经济价值及广泛的应用前景，一种从天然植物中采取经济、快速、适合于工业化生产的提取齐墩果酸的方法就显得尤为重要。中国专利公告号为CN103059092的专利都公开了提取齐墩果酸的方法，但在提取纯度和提取工艺步骤上还是存在一定弊端。

[0008] 发明内容  本发明的目的是提供一种可经济、快速、适合于工业化生产的从鲜木瓜果实中提取齐墩果酸的方法，以弥补现有技术的不足。

[0009] 为了实现上述目的，本发明一种从鲜木瓜果实中提取齐墩果酸的方法，按下述步骤进行：

[0010] 1）将鲜木瓜洗净沥干后剖开去籽，在50-65℃的环境下干燥0.5-2.5h后，粉碎得干木瓜粉；

[0011] 2）将干木瓜粉加入3-5倍量的浓度为95%的乙醇置于回流装置内并加热70-90℃进行回流蒸煮，回流反应时间为0.5-1.5h，重复回流提取三次，将三次提取的乙醇的稠浸膏合并备用；

[0012] 3）将步骤2）制得的稠浸膏投入敞口的不锈钢容器中加热75-80℃直至残液充分蒸发后，加入2-3倍量的蒸馏水并充分搅拌后煮沸10-20min，并自然降温至20-28℃后，用虹吸法除去水溶液，并重复水洗2-3次；

[0013] 4）将滤出的水不溶物加入2-3倍量的浓度为95%乙醇充分搅拌溶解，缓慢滴入浓度为10%的NaOH调节pH值为11时停止滴入，并加入0.25-0.75倍量的活性炭脱色0.5-1.5h后过滤；

[0014] 5）向滤液中缓慢滴入浓度为95%的盐酸酸化至pH值为1时停止滴入，并静置10-12h析出沉淀物，滤出沉淀物备用，将滤液加热50-70℃使盐酸蒸发后浓缩过滤，并与沉淀物合并备用；

[0015] 6）将步骤5）的滤出物用6-8倍量的浓度为5%的NaOH水溶液充分搅拌均匀并煮沸30-45min后趁热过滤，并对滤液重复煮沸2-3次后，再用6-8倍量的去离子水搅拌煮沸30-
45min后，趁热过滤得水洗物；

[0016] 7）将步骤6）的水洗物加入10-12倍量的水充分溶解，加入0.1-0.3倍量的活性炭过滤脱色，滤液再滴入浓度为95%的盐酸酸化至pH值为1时停止滴入，并静置4-8h析出齐墩果酸结晶；

[0017] 8）将步骤7）的结晶物用1-2倍量的蒸馏水煮沸洗涤30-40min，重复洗涤4-5次，直至用硝酸银鉴别无氯离子时，将沉淀物置于60-80℃的温度下烘干，即得白色齐墩果酸成品。

[0018] 本发明提供的提取方法可得到有效成分含量较高的提取物，齐墩果酸的纯度在90%以上，可直接用于药物制剂的制备。

[0019] 本发明一种从鲜木瓜果实中提取齐墩果酸的方法，可以快速、安全的提取齐墩果酸，经济性好，适合于工业化生产的需要，无需大型设备，提取时间短，生产效率高，可保证齐墩果酸最大限度的快速游离出来，得到高纯度的齐墩果酸晶体；而且该提取方法工艺步骤简单，条件温和，具有广阔的工业应用价值，适宜于大规模生产。

具体实施方式

[0020] 实施例一

[0021] 将鲜木瓜洗净沥干后剖开去籽，在65℃的环境下干燥1h后，粉碎得干木瓜粉；将干木瓜粉加入5倍量的浓度为95%的乙醇置于回流装置内并加热85℃进行回流蒸煮，回流反应时间为1h，重复回流提取三次，将三次提取的乙醇的稠浸膏合并备用；将制得的稠浸膏投入敞口的不锈钢容器中加热80℃直至残液充分蒸发后，加入3倍量的蒸馏水并充分搅拌后煮沸20min，并自然降温至25℃后，用虹吸法除去水溶液，并重复水洗3次；将滤出的水不溶物加入3倍量的浓度为95%乙醇充分搅拌溶解，缓慢滴入浓度为10%的NaOH调节pH值为11时停止滴入，并加入0.5倍量的活性炭脱色1h后过滤；向滤液中缓慢滴入浓度为95%的盐酸酸化至pH值为1时停止滴入，并静置12h析出沉淀物，滤出沉淀物备用，将滤液加热65℃使盐酸蒸发后浓缩过滤，并与沉淀物合并备用；将滤出物用8倍量的浓度为5%的NaOH水溶液充分搅拌均匀并煮沸30min后趁热过滤，并对滤液重复煮沸3次后，再用8倍量的去离子水搅拌煮沸45min后，趁热过滤得水洗物；将水洗物加入10倍量的水充分溶解，加入0.1倍量的活性炭过滤脱色，滤液再滴入浓度为95%的盐酸酸化至pH值为1时停止滴入，并静置8h析出齐墩果酸结晶；将结晶物用2倍量的蒸馏水煮沸洗涤30min，重复洗涤4次，直至用硝酸银鉴别无氯离子时，将沉淀物置于80℃的温度下烘干，即得白色齐墩果酸成品。

[0022] 齐墩果酸含量的测定

[0023] 采用高效液相色谱法进行测定。

[0024] 色谱柱：Shim-pack CLC-ODS(M) 柱(250mm×4.6mm，5μm) ；

[0025] 流动相：甲醇- 水- 冰乙酸- 三乙胺=265 ∶ 35 ∶ 0.1 ∶ 0.05 ；

[0026] 流速：0.6ml·min-1 ；

[0027] 检测波长：210nm ；

[0028]  柱温：22℃ ；

[0029] 进样量：20μl。

[0030] 理论板数按齐墩果酸峰计不低于2000。

[0031] 取实施例1制得的固体提取物约10mg，精确称定，置具塞锥形瓶中，精确加甲醇30ml，密塞，称定重量，浸泡1.5h，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取滤液作为供试品溶液。精确称取齐墩果酸对照品约15mg，置100ml 容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为齐墩果酸混合对照品溶液。取上述溶液20μl，注入液相色谱仪，按外标法以峰面积计算。

[0032] 经测定，提取物中齐墩果酸含量为92.4%。

[0033] 实施例二

[0034] 将鲜木瓜洗净沥干后剖开去籽，在60℃的环境下干燥1.5h后，粉碎得干木瓜粉；将干木瓜粉加入4倍量的浓度为95%的乙醇置于回流装置内并加热80℃进行回流蒸煮，回流反应时间为1.5h，重复回流提取三次，将三次提取的乙醇的稠浸膏合并备用；将制得的稠浸膏投入敞口的不锈钢容器中加热75℃直至残液充分蒸发后，加入2倍量的蒸馏水并充分搅拌后煮沸15min，并自然降温至20℃后，用虹吸法除去水溶液，并重复水洗2次；将滤出的水不溶物加入2倍量的浓度为95%乙醇充分搅拌溶解，缓慢滴入浓度为10%的NaOH调节pH值为11时停止滴入，并加入0.75倍量的活性炭脱色1h后过滤；向滤液中缓慢滴入浓度为95%的盐酸酸化至pH值为1时停止滴入，并静置11h析出沉淀物，滤出沉淀物备用，将滤液加热65℃使盐酸蒸发后浓缩过滤，并与沉淀物合并备用；将的滤出物用6倍量的浓度为5%的NaOH水溶液充分搅拌均匀并煮沸40min后趁热过滤，并对滤液重复煮沸2次后，再用8倍量的去离子水搅拌煮沸30min后，趁热过滤得水洗物；将的水洗物加入11倍量的水充分溶解，加入0.3倍量的活性炭过滤脱色，滤液再滴入浓度为95%的盐酸酸化至pH值为1时停止滴入，并静置7h析出齐