连续单纯菌发酵制备虫草米酒的方法转让专利

申请号 : CN201510442090.4

文献号 : CN105062765B

文献日 :

基本信息:

PDF:

法律信息:

相似专利:

发明人 : 陈明利高虹史德芳张金木吴文锦白志尚李露薛淑静范秀芝李新王晨

申请人 : 湖北省农业科学院农产品加工与核农技术研究所

摘要 :

本发明涉及一种连续单纯菌发酵制备虫草米酒的方法,米流水清洗,沥干,加蒸馏水,搅匀,装罐密封,灭菌;冷却至20~25℃,备用;培养菌株保藏编号为NKHB CM209635的蛹虫草微颗粒菌种,在米罐中接入蛹虫草微颗粒液体菌种发酵,避光培养5~10d,发酵,见光培养3~7d,灭菌,加无菌水;接入加无菌水稀释的米根霉液体微颗粒菌种,培养36~48h;再接入加无菌水稀释的酿酒酵母菌种,培养3~7d,每隔12h检测总酸、总糖、酒精度;分装,包装;60Co‑γ辐照源常温辐照灭菌。本发明采用蛹虫草菌种、米根霉菌种、酿酒酵母菌种在专一条件下连续发酵,成本低,所得虫草米酒含物活性成分、营养丰富。

权利要求 :

1.连续发酵制备虫草米酒的方法,其特征在于:具体步骤如下:

(1)筛选米,流水搅拌清洗40~90s,沥干;

(2)1-1.5kg米中加蒸馏水,水和米的比例为1.2~3:1,搅匀;

(3)将米装罐、密封,于121℃,1.034×105Pa,灭菌15~30min;再冷却至20~25℃,备用;

(4)培养菌株保藏编号为NKHBCM209635的蛹虫草微颗粒菌种,蛹虫草菌种培养基:米粉100~200g,蔗糖20~40g,酵母粉6~10g,MgSO4/MgCl23~6g,KH2PO4/K2HPO43~4g,加无菌蒸馏水至1000ml;于温度20~23℃,pH6~7,剪切转速800~

1200rpm条件下培养5~6d,得到蛹虫草微颗粒液体菌种,备用;

(5)在步骤(3)的米罐中接入米质量1~10%的所述蛹虫草微颗粒液体菌种;先在20~

25℃发酵,避光培养5~10d,每隔12h搅拌一次;然后在20~25℃发酵,见光培养3~7d,光强为100~1200Lux,每隔12h搅拌一次;停止发酵,于115℃,0.676×104Pa条件下灭菌15min;

加其质量10~30%的无菌水;

(6)培养菌株保藏编号为CCTCCAF93150的米根霉菌种,米根霉菌种培养基:米粉100~200g,马铃薯浸粉20~60g,蔗糖20~40g,MgSO4/MgCl20.5~2g,KH2PO4/K2HPO41~4g,加水至1000ml;于温度28℃,pH6~7,剪切转速800~

1200rpm,培养36~48h,得到米根霉微颗粒液体菌种,备用;

其中KH2PO4/K2HPO4=1:1;

(7)取步骤(1)中筛选米质量1~10%的所述米根霉微颗粒液体菌种,加无菌水稀释至3~5倍,接入步骤(5)的罐中,28℃培养36~48h;

(8)培养菌株保藏编号为CCTCCAY93158酿酒酵母菌种,酿酒酵母菌种培养基:米粉100~200g,酪蛋白胨3~8g,麦芽浸粉3~10g,蔗糖10~

40g,酵母浸粉3~6g,加水至1000ml;培养条件:温度28℃,pH6~7,剪切转速800~1200rpm,培养32~48h,得到酿酒酵母液体菌种,备用;

(9)取步骤(1)中筛选米质量的1~5%的所述酿酒酵母液体菌种,加无菌水稀释至3~5倍,接入步骤(7)的罐中,28℃培养3~7d,每隔12h检测总酸、总糖、酒精度;停止发酵,得虫草米酒,分装,包装;

(10)60Co-γ辐照源常温辐照灭菌,辐照吸收剂量为1~10kGy。

2.根据权利要求1所述的连续发酵制备虫草米酒的方法,其特征在于:步骤(1)所筛选米为糯米、糙米或碎米,步骤(2)水和米的比例为:1.5~2:1。

3.根据权利要求1所述的连续发酵制备虫草米酒的方法,其特征在于:步骤(4)中蛹虫草菌种培养基:米粉150~200g,蔗糖20~30g,酵母粉6~8g,MgSO4/MgCl25g,KH2PO4/K2HPO44g,加无菌蒸馏水至1000ml;于温度22℃,pH7,剪切转速1000rpm条件下培养6d。

4.根据权利要求1所述的连续发酵制备虫草米酒的方法,其特征在于:步骤(4)、(6)、(8)中所用米粉为糙米粉或碎米粉。

5.根据权利要求1所述的连续发酵制备虫草米酒的方法,其特征在于:步骤(4)所得菌株保藏编号为NKHBCM209635的蛹虫草微颗粒液体菌种,蛹虫草菌体颗粒粒径为0.2~

3 5

0.7mm,菌体浓度为10~10个/ml。

6.根据权利要求1所述的连续发酵制备虫草米酒的方法,其特征在于:步骤(4)所得菌株保藏编号为NKHBCM209635的蛹虫草微颗粒液体菌种,蛹虫草菌体颗粒粒径为0.3~

0.5mm,菌体浓度为5×103~104个/ml。

7.根据权利要求1所述的连续发酵制备虫草米酒的方法,其特征在于:步骤(5)、中,在米罐中接入接入2~3%蛹虫草微颗粒液体菌种发酵,避光培养5~7d,发酵,见光培养3~

5d,光强为200~500Lux。

8.根据权利要求1或7所述的连续发酵制备虫草米酒的方法,其特征在于:步骤(6)中,米根霉菌种培养基:米粉100~150g,马铃薯浸粉30~40g,蔗糖20~30g,MgSO4/MgCl20.5~

1g,KH2PO4/K2HPO42~3g,加水至1000ml;于温度28℃,pH6.5,剪切转速1000rpm,培养40h。

9.根据权利要求1所述的连续发酵制备虫草米酒的方法,其特征在于:步骤(6)所得菌株保藏编号为CCTCCAF93150的米根霉微颗粒液体菌种,菌种颗粒粒径为0.2~0.5mm,菌体浓度为103~105个/ml。

10.根据权利要求1所述的连续发酵制备虫草米酒的方法,其特征在于:步骤(7)中,取3~5%米根霉微颗粒液体菌种,加无菌水稀释至5倍,接入步骤(5)的罐中,28℃培养36~

40h。

11.根据权利要求1所述的连续发酵制备虫草米酒的方法,其特征在于:步骤(8)中,酿酒酵母菌种培养基:米粉150~200g,酪蛋白胨3~6g,麦芽浸粉3~5g,蔗糖10~20g,酵母浸粉3~5g,加水至1000ml;培养条件:温度28℃,pH6.5,剪切转速800rpm,培养32h。

12.根据权利要求1所述的连续发酵制备虫草米酒的方法,其特征在于:步骤(8)中,培养得到的酿酒酵母液体菌种浓度为5×106~107个/ml。

13.根据权利要求1所述的连续发酵制备虫草米酒的方法,其特征在于:步骤(9)中,取步骤(1)中筛选米质量2~3%的所述酿酒酵母液体菌种进行发酵。

说明书 :

连续单纯菌发酵制备虫草米酒的方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种连续单纯菌发酵制备虫草米酒的方法。

背景技术

[0002] 蛹虫草(Cordyceps militaris),属子囊菌亚门,麦角菌目,麦角菌科、虫草属的模式种。蛹虫草含有多种活性物质,包括虫草多糖、虫草素、虫草酸、腺苷、核苷、麦角甾醇、SOD等。
[0003] 米酒又称醪糟、甜米酒,是我国民间的一种传统发酵食品,已有二千多年的食用历史,酒精含量低、口味甜香醇美,深受广大百姓喜爱。米酒以糯米为原料,用自制天然酒曲发酵制成,含有丰富的还原糖、氨基酸、微生物等营养物质,低度酒精,有通经活络、养血补气、滋阴润肺之功效。传统工艺方法制作米酒工艺简单,以糯米、大米为原料,用甜酒曲发酵。甜酒曲属于混合曲,含有大量酵母菌,少量根霉菌外,还有大量杂菌,所以,酒曲质量很不稳定,做出来的米酒酒味过浓而甜味不足,或酒精度很低,甚至制作米酒失败,很难做到生产的米酒口感始终如一。
[0004] 现有米酒及制作方法,如CN102477394公布的一种安神补脑的虫草米酒的制备方法,利用冬虫夏草10克、桂圆肉30克、人参20克、大枣30克、构祀30克,通过米酒浸提。CN 103382427公布的一种保健米酒,其酿造工艺为二次发酵,先把小米、生料酒曲和地下深层水混合后进行发酵,经发酵后再进行蒸馏出白酒,再把白酒作为酒基,稷米加大枣浸泡后进行蒸煮,蒸煮后再加大曲进行发酵,发酵完成后进行压榨,压榨后加入冰糖、蜂蜜和中药辅料进行勾兑调色,然后经过滤后杀毒,经检验合格后灌装封口,最后制备成成品米酒包装入库。

发明内容

[0005] 本发明的目的是针对上述技术现状,旨在提供一种活性成分、营养丰富;制备方法无污染、无残留、操作连续、成本低、效率高的连续单纯菌发酵制备虫草米酒的方法。
[0006] 本发明目的的实现方式为,连续单纯菌发酵制备虫草米酒的方法,具体步骤如下:
[0007] (1)筛选米,流水搅拌清洗40~90s,沥干;
[0008] (2)1-1.5kg米中加蒸馏水,水和米的比例为1.2~3:1,搅匀;
[0009] (3)将米装罐、密封,于121℃,1.034×105Pa,灭菌15~30min;再冷却至20~25℃,备用;
[0010] (4)培养菌株保藏编号为NKHB CM209635的蛹虫草微颗粒菌种,
[0011] 蛹虫草菌种培养基:米粉100~200g,蔗糖20~40g,酵母粉6~10g,MgSO4/MgCl2 3~6,KH2PO4/K2HPO4 3~4g,加无菌蒸馏水至1000ml;于温度20~23℃,pH 6~7,剪切转速800~1200rpm条件下培养5~6d,得菌株保藏编号为NKHB CM209635的蛹虫草微颗粒菌种,备用;
[0012] (5)在步骤(3)的糯米罐中接入糯米质量1~10%,步骤(4)培养的蛹虫草微颗粒液体菌种;20~25℃发酵,避光培养5~10d,每隔12h搅拌一次;
[0013] (6)20~25℃发酵,见光培养3~7d,光强为100~1200Lux,每隔12h搅拌一次;
[0014] (7)停止发酵,115℃,0.676×104Pa,灭菌15min;加其质量10~30%的无菌水;
[0015] (8)培养菌株保藏编号为CCTCC AF93150的米根霉菌种,
[0016] 米根霉菌种培养基:米粉100~200g,马铃薯浸粉20~60g,蔗糖20~40g,MgSO4/MgCl2 0.5~2g,KH2PO4/K2HPO4 1~4g,加水至1000ml;于温度28℃,pH 6~7,剪切转速800~1200rpm,培养36~48h,得菌株保藏编号为CCTCC AF93150的米根霉液体微颗粒菌种,备用;
[0017] 其中KH2PO4/K2HPO4=1:1;
[0018] (9)取步骤(1)中筛选米质量的1~10%%,步骤(8)培养的米根霉液体微颗粒菌种,加无菌水稀释至3~5倍,接入步骤(8)的罐中,28℃培养36~48h;
[0019] (10)培养菌株保藏编号为CCTCC AY93158酿酒酵母菌种,
[0020] 酿酒酵母菌种培养基:米粉100~200g,酪蛋白胨3~8g,麦芽浸粉3~10g,蔗糖10~40g,酵母浸粉3~6g,加水至1000ml;培养条件:温度28℃,pH 6~7,剪切转速800~1200rpm,培养32~48h,得菌株保藏编号为CCTCC AY93158酿酒酵母菌种,备用;
[0021] (11)取步骤(1)中筛选米质量的1~5%,步骤(10)培养的酿酒酵母菌种,加无菌水稀释至3~5倍,接入步骤(9)的罐中,28℃培养3~7d,每隔12h检测总酸、总糖、酒精度;
[0022] (12)停止发酵,分装,包装;
[0023] (13)60Co-γ辐照源常温辐照灭菌,辐照吸收剂量为1~10kGy。
[0024] 在传统食品中引用蛹虫草菌,通过生物发酵转化的手段在米酒食品中引入营养和活性物质,使米酒食品创新升级。
[0025] 本发明采用蛹虫草菌种、米根霉菌种、酿酒酵母菌种在每个专一条件下连续发酵,三种单纯菌株连续发酵转化在米酒中引入了生理活性物质,如虫草素、虫草多糖、腺苷等,成本低,所得虫草米酒含物活性成分、营养丰富;制备方法无污染、无残留、绿色健康,操作连续、成本低、效率高。

附图说明

[0026] 图1是蛹虫草菌种图,
[0027] 图2是虫草米酒、普通糯米酒、普通糙米甜米酒图,
[0028] 图3是腺苷对照品HPLC色谱图,
[0029] 图4是虫草米酒腺苷HPLC色谱。

具体实施方式

[0030] 采用本发明,筛选米,流水清洗,沥干,加蒸馏水,水和米的比例为1~3:1,搅匀,装罐密封,灭菌。优选的,步骤(2)中,水和米的比例为:1.5~2:1。所筛选米为糯米、糙米或碎米。
[0031] 冷却至20~25℃,备用;培养菌株保藏编号为NKHB CM209635的蛹虫草微颗粒菌种。蛹虫草菌种培养基:米粉100~200g,蔗糖20~40g,酵母粉6~10g,MgSO4/MgCl2 3~6g,KH2PO4/K2HPO4 3~4g,加无菌蒸馏水至1000ml;于温度20~23℃,pH 6~7,剪切转速800~1200rpm条件下培养5~6d,得图1所示的菌株保藏编号为NKHB CM209635的蛹虫草微颗粒菌种。菌体颗粒粒径为0.2~0.7mm,菌体浓度为103~105个/ml。
[0032] 优选的,蛹虫草菌种培养基:米粉150~200g,蔗糖20~30g,酵母粉6~8g,MgSO4/MgCl2 5g,KH2PO4/K2HPO4 4g,加无菌蒸馏水至1000ml;于温度22℃,pH 7,剪切转速1000rpm条件下培养6d。蛹虫草菌体颗粒粒径为0.3~0.5mm,菌体浓度为5×103~104个/ml。
[0033] 步骤(5)、(6)中,在糯米罐中接入接入1~10%蛹虫草微颗粒液体菌种发酵,避光培养5~10d,发酵,见光培养3~7d,光强为100~1200Lux。优选的,在糯米罐中接入接入2~3%蛹虫草微颗粒液体菌种发酵,避光培养5~7d,发酵,见光培养3~5d,光强为200~
500Lux。灭菌,加无菌水。
[0034] 培养菌株保藏编号为CCTCC AF93150的米根霉菌种,米根霉菌种培养基:米粉100~200g,马铃薯浸粉20~60g,蔗糖20~40g,MgSO4/MgCl2 0.5~2g,KH2PO4/K2HPO4 1~4g,加水至1000ml;于温度28℃,pH 6~7,剪切转速800~1200rpm,培养36~48h。优选的,步骤(8)中,米根霉菌种培养基:米粉140~160g,马铃薯浸粉30~40g,蔗糖20~30g,MgSO4/MgCl2 0.5~1g,KH2PO4/K2HPO4 2~3g,加水至1000ml;于温度28℃,pH 6.5,剪切转速1000rpm,培养40h。
[0035] 步骤(8)所得菌株保藏编号为CCTCC AF93150的米根霉菌种颗粒粒径为0.2~3 5
0.5mm,菌体浓度为10~10个/ml。
[0036] 取步骤(1)中筛选米质量的1~10%米根霉微颗粒液体菌种,加无菌水稀释至3~5倍,接入步骤(8)的罐中,28℃培养36~48h。优选的,步骤(9)中取步骤(1)中筛选米质量的3~5%米根霉微颗粒液体菌种,加无菌水稀释至5倍,接入步骤(8)的罐中,28℃培养36~40h。
[0037] 米根霉液体菌种接种量为3~5%,加无菌水稀释5倍,发酵时间为36~40h。
[0038] 培养菌株保藏编号为CCTCC AY93158酿酒酵母菌种,酿酒酵母菌种培养基:米粉100~200g,酪蛋白胨3~8g,麦芽浸粉3~10g,蔗糖10~40g,酵母浸粉3~6g,加水至
1000ml;培养条件:温度28℃,pH 6~7,剪切转速800~1200rpm,培养32~48h。优选的,步骤(10)中,酿酒酵母菌种培养基:米粉150~200g,酪蛋白胨4~6g,麦芽浸粉3~5g,蔗糖10~
20g,酵母浸粉4~5g,加水至1000ml;培养条件:温度28℃,pH 6.5,剪切转速800rpm,培养
32h。步骤(10)培养的酿酒酵母菌种浓度为5×106~107个/ml。
[0039] 步骤(4)、(8)、(10)中所用米粉为糙米或碎米粉。
[0040] 取步骤(1)中筛选米质量的1~5%的酿酒酵母菌种,优选的,取步骤(1)中筛选米质量的2~3%的酿酒酵母菌种。培养3~7d,每隔12h检测总酸、总糖、酒精度。分装,包装;60Co-γ辐照源常温辐照灭菌得虫草米酒。所得虫草米酒虫的草素含量0.3~1.0‰,虫草多糖含量0.2~3.0%,腺苷含量0.5~2.0‰,酒精含量1~10%,总酸含量1.0~10g/L,总糖含量100g~200g/L,还原糖含量5~10%,固形物含量20~30%。
[0041] 采用60Co-γ辐照源常温辐照灭菌,不破坏营养、活性成分,不破坏外包装。
[0042] 普通糯米酒、普通糙米甜酒与采用本发明制备的米酒虫草米酒图见图2,从图1、2可见,虫草米酒在外观上表现了虫草的色泽和形态,说明虫草米酒具有虫草的属性。
[0043] 腺苷对照品HPLC色谱图见图3,虫草米酒腺苷HPLC色谱见图4,从图,3、4可见虫草米酒和腺苷标准品具有相同的保留时间的目的峰,说明虫草米酒中含有腺苷物质活性成分。
[0044] 下面用具体实施例详述本发明:
[0045] 实施例1
[0046] (1)筛选糯米,流水搅拌清洗40~60s,滤水无浊度、色度即止,沥干;
[0047] (2)1kg糯米中加1.5L蒸馏水,搅匀;
[0048] (3)将糯米装罐、密封,于121℃,1.034×105Pa,灭菌15min;再冷却至20~25℃,备用;
[0049] (4)培养菌株保藏编号为NKHB CM209635的蛹虫草微颗粒菌种,
[0050] 蛹虫草菌种培养基:糙米粉150g,蔗糖30g,酵母粉6g,MgSO4/MgCl2 3g,KH2PO4/K2HPO4 4g,加无菌蒸馏水至1000ml;于温度22℃,pH6.5,剪切转速1000rpm条件下培养6d,得菌株保藏编号为NKHB CM209635的蛹虫草微颗粒菌种,备用;其中KH2PO4/K2HPO4=1:1;
[0051] (5)在步骤(3)的糯米罐中接入糯米质量5%,步骤(4)培养的蛹虫草微颗粒液体菌种;20℃发酵,避光培养7d,每隔12h搅拌一次;
[0052] (6)20℃发酵,见光培养5d,光强为1000Lux,每隔12h搅拌一次;
[0053] (7)停止发酵,115℃,0.676×104Pa,灭菌15min;加其质量10%的无菌水;
[0054] (8)培养菌株保藏编号为CCTCC AF93150的米根霉菌种,
[0055] 米根霉菌种培养基:糙米粉100g,马铃薯浸粉50g,蔗糖20g,MgSO4/MgCl2 0.5g,KH2PO4/K2HPO4 1g,加水至1000ml;于温度28℃,pH 6.5,剪切转速1000rpm,培养40h,得菌株保藏编号为CCTCC AF93150的米根霉菌种,备用;
[0056] 其中KH2PO4/K2HPO4=1:1;
[0057] (9)取步骤(1)中筛选米质量的5%,步骤(8)培养的米根霉液体微颗粒菌种,加无菌水稀释至5倍,接入步骤(8)的罐中,28℃培养40h;
[0058] (10)培养菌株保藏编号为CCTCC AY93158酿酒酵母菌种,
[0059] 酿酒酵母菌种培养基:糙米粉100g,酪蛋白胨5g,麦芽浸粉3g,蔗糖10g,酵母浸粉3g,加水至1000ml;培养条件:温度28℃,pH 6.5,剪切转速1000rpm,培养40h,得菌株保藏编号为CCTCC AY93158酿酒酵母菌种,备用;
[0060] (11)取步骤(1)中筛选米质量的5%,步骤(10)培养的酿酒酵母菌种,加无菌水稀释至3倍,接入步骤(9)的罐中,28℃培养5d,每隔12h检测总酸、总糖、酒精度;
[0061] (12)停止发酵,分装,包装;
[0062] (13)60Co-γ辐照源常温辐照灭菌,辐照吸收剂量为3kGy。
[0063] 实施例2,同实施例1,不同的是,
[0064] (2)1kg糙米中加1.2L蒸馏水,搅匀;
[0065] (3)将糙米装罐、密封,于121℃,1.034×105Pa,灭菌25min;再冷却至20~25℃,备用;
[0066] (4)培养菌株保藏编号为NKHB CM209635的蛹虫草微颗粒菌种,
[0067] 蛹虫草菌种培养基:糙米粉100g,蔗糖40g,酵母粉8g,MgSO4/MgCl2 5g,KH2PO4/K2HPO4 4g,加无菌蒸馏水至1000ml;于温度20℃,pH6.5,剪切转速1200rpm条件下培养6d,备用;
[0068] (5)在糙米罐中接入糙米质量3%的蛹虫草微颗粒液体菌种;20℃发酵,避光培养5d;
[0069] (6)22℃发酵,见光培养5d,光强为500Lux,每隔12h搅拌一次;
[0070] (7)停止发酵,加其质量30%的无菌水;
[0071] (8)培养菌株保藏编号为CCTCC AF93150的米根霉菌种,
[0072] 米根霉菌种培养基:糙米粉150g,马铃薯浸粉30g,蔗糖30g,MgSO4/MgCl2 1g,KH2PO4/K2HPO4 2g,加水至1000ml;于温度28℃,pH 6.0,剪切转速1000rpm,培养48h;
[0073] (9)取步骤(1)中筛选米质量的3%的米根霉液体微颗粒菌种,加无菌水稀释至3倍,接入步骤(8)的罐中,28℃培养48h;
[0074] (10)培养菌株保藏编号为CCTCC AY93158酿酒酵母菌种,
[0075] 酿酒酵母菌种培养基:糙米粉200g,酪蛋白胨6g,麦芽浸粉7g,蔗糖20g,酵母浸粉5g,加水至1000ml;pH 7,剪切转速1000rpm,培养36h;
[0076] (11)取步骤(1)中筛选米质量的3%的酿酒酵母菌种,加无菌水稀释培养3倍;
[0077] (13)60Co-γ辐照源常温辐照灭菌,辐照吸收剂量为10kGy。
[0078] 实施例3,同实施例1,不同的是,
[0079] (1)筛选碎米,流水冲洗50~70s,沥干;
[0080] (2)1kg碎米中加3L蒸馏水,搅匀;
[0081] (3)将碎米装罐、密封,于121℃,1.034×105Pa,灭菌20min;
[0082] (4)培养菌株保藏编号为NKHB CM209635的蛹虫草微颗粒菌种,
[0083] 蛹虫草菌种培养基:碎米粉200g,蔗糖20g,酵母粉10g,MgSO4/MgCl2 6g,KH2PO4/K2HPO4 3g,加无菌蒸馏水至1000ml;于温度23℃,pH6.0,剪切转速1000rpm条件下培养6d;
[0084] (5)在碎米罐中接入碎米质量10%的蛹虫草微颗粒液体菌种;22℃发酵,避光培养10d;
[0085] (6)22℃发酵,见光培养3d,光强为200Lux;
[0086] (7)停止发酵,加其质量20%的无菌水;
[0087] (8)培养菌株保藏编号为CCTCC AF93150的米根霉菌种,
[0088] 米根霉菌种培养基:碎米粉100g,马铃薯浸粉60g,蔗糖20g,MgSO4/MgCl2 2g,KH2PO4/K2HPO4 4g,加水至1000ml;于温度28℃,pH 7.0,剪切转速800rpm,培养36h;
[0089] (9)取步骤(1)中筛选米质量的1%的米根霉液体微颗粒菌种,加无菌水稀释至3倍,接入步骤(8)的罐中,28℃培养36h;
[0090] (10)培养菌株保藏编号为CCTCC AY93158酿酒酵母菌种,
[0091] 酿酒酵母菌种培养基:碎米粉150g,酪蛋白胨3g,麦芽浸粉10g,蔗糖40g,酵母浸粉6g,加水至1000ml;pH 6.0,剪切转速1000rpm,培养48h;
[0092] (11)取步骤(1)中筛选米质量的5%的酿酒酵母菌种,加无菌水稀释培养5倍,28℃培养3d;
[0093] (13)60Co-γ辐照源常温辐照灭菌,辐照吸收剂量为1kGy。
[0094] 实施例4,同实施例1,不同的是,
[0095] (1)筛选糯米,流水冲洗50~60s,沥干;
[0096] (2)1.5kg糯米中加2L蒸馏水,搅匀;
[0097] (3)将糯米装罐、密封,于121℃,1.034×105Pa,灭菌20min;
[0098] (4)培养菌株保藏编号为NKHB CM209635的蛹虫草微颗粒菌种,
[0099] 蛹虫草菌种培养基:糙米粉120g,蔗糖40g,酵母粉7g,MgSO4/MgCl2 4g,KH2PO4/K2HPO4 4g,加无菌蒸馏水至1000ml;于温度23℃,pH6.0,剪切转速1200rpm条件下培养6d;
[0100] (5)在糯米罐中接入糯米质量1%的蛹虫草微颗粒液体菌种;25℃发酵,避光培养10d;
[0101] (6)25℃发酵,见光培养6d,光强为900Lux;
[0102] (7)停止发酵,加其质量15%的无菌水;
[0103] (8)培养菌株保藏编号为CCTCC AF93150的米根霉菌种,
[0104] 米根霉菌种培养基:糙米粉100g,马铃薯浸粉20g,蔗糖40g,MgSO4/MgCl2 0.5g,KH2PO4/K2HPO4 3g,加水至1000ml;于温度28℃,pH6.5,剪切转速800rpm,培养36h;
[0105] (9)取步骤(1)中筛选米质量的10%的米根霉液体微颗粒菌种,加无菌水稀释至3倍,接入步骤(8)的罐中,28℃培养42h;
[0106] (10)培养菌株保藏编号为CCTCC AY93158酿酒酵母菌种,
[0107] 酿酒酵母菌种培养基:糙米粉200g,酪蛋白胨8g,麦芽浸粉3g,蔗糖10g,酵母浸粉3g,加水至1000ml;于温度28℃,pH 6.5,剪切转速1200rpm,培养32h;
[0108] (11)取步骤(1)中筛选米质量的2%的酿酒酵母菌种,加无菌水稀释培养5倍,28℃培养4d;
[0109] (13)60Co-γ辐照源常温辐照灭菌,辐照吸收剂量为5kGy。
[0110] 实施例5,同实施例1,不同的是,
[0111] (1)筛选糙米,流水冲洗60~90s,沥干;
[0112] (2)1.5kg糙米中加2.5L蒸馏水,搅匀;
[0113] (3)将糙米装罐、密封,于121℃,1.034×105Pa,灭菌25min;
[0114] (4)培养菌株保藏编号为NKHB CM209635的蛹虫草微颗粒菌种,
[0115] 蛹虫草菌种培养基:糙米粉160g,蔗糖20g,酵母粉8g,MgSO4/MgCl2 5g,KH2PO4/K2HPO4 4g,加无菌蒸馏水至1000ml;于温度22℃,pH6.0,剪切转速1200rpm条件下培养5d;
[0116] (5)在糙米罐中接入糯米质量2%的蛹虫草微颗粒液体菌种;25℃发酵,避光培养10d;
[0117] (6)25℃发酵,见光培养7d,光强为100Lux;
[0118] (7)停止发酵,加其质量20%的无菌水;
[0119] (8)培养菌株保藏编号为CCTCC AF93150的米根霉菌种,
[0120] 米根霉菌种培养基:糙米粉200g,马铃薯浸粉40g,蔗糖40g,MgSO4/MgCl2 1g,KH2PO4/K2HPO4 4g,加水至1000ml;于温度28℃,pH 7.0,剪切转速1200rpm,培养46h;
[0121] (9)取步骤(1)中筛选米质量的7%的米根霉液体微颗粒菌种,加无菌水稀释至5倍,接入步骤(8)的糙米罐中,28℃培养46h;
[0122] (10)培养菌株保藏编号为CCTCC AY93158酿酒酵母菌种,
[0123] 酿酒酵母菌种培养基:糙米粉160g,酪蛋白胨8g,麦芽浸粉1g,蔗糖10g,酵母浸粉3g,加水至1000ml;温度28℃,pH 6.5,剪切转速900rpm,培养42h;
[0124] (11)取步骤(1)中筛选米质量的4%的酿酒酵母菌种,加无菌水稀释培养3倍,28℃培养7d;
[0125] (13)60Co-γ辐照源常温辐照灭菌,辐照吸收剂量为8kGy。
[0126] 实施例6,同实施例1,不同的是,
[0127] (1)筛选碎米,流水冲洗60~90s,沥干;
[0128] (2)1.5kg碎米中加2L蒸馏水,搅匀;
[0129] (4)培养菌株保藏编号为NKHB CM209635的蛹虫草微颗粒菌种,
[0130] 蛹虫草菌种培养基:碎米粉150g,蔗糖30g,酵母粉10g,MgSO4/MgCl2 6g,KH2PO4/K2HPO4 4g,加无菌蒸馏水至1000ml;于温度20℃,pH7.0,剪切转速1000rpm条件下培养5d;
[0131] (5)在糯米罐中接入碎米质量8%的蛹虫草微颗粒液体菌种;25℃发酵,避光培养5d;
[0132] (6)21℃发酵,见光培养3d,光强为1200Lux;
[0133] (7)停止发酵,加其质量30%的无菌水;
[0134] (8)培养菌株保藏编号为CCTCC AF93150的米根霉菌种,
[0135] 米根霉菌种培养基:碎米粉150g,马铃薯浸粉30g,蔗糖20g,MgSO4/MgCl2 0.5g,KH2PO4/K2HPO4 3g,加水至1000ml;于温度28℃,pH 7.0,剪切转1000rpm,培养40h;
[0136] (9)取步骤(1)中筛选米质量的5%的米根霉液体微颗粒菌种,加无菌水稀释至3倍,接入步骤(8)的碎米罐中,28℃培养46h;
[0137] (10)培养菌株保藏编号为CCTCC AY93158酿酒酵母菌种,
[0138] 酿酒酵母菌种培养基:碎米粉200g,酪蛋白胨3g,麦芽浸粉5g,蔗糖30g,酵母浸粉6g,加水至1000ml;温度28℃,pH 6.0,剪切转速800rpm,培养32h;
[0139] (11)取步骤(1)中筛选米质量的5%的酿酒酵母菌种,加无菌水稀释培养3倍,接入步骤(9)碎米罐中,28℃培养6d;
[0140] (13)60Co-γ辐照源常温辐照灭菌,辐照吸收剂量为6kGy。