用于执行声处理的设备转让专利

申请号 : CN201480015880.8

文献号 : CN105102110B

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基本信息:

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法律信息:

相似专利:

发明人 : L.费尔登D.莱曼M.霍纳德尔S.茹埃特

申请人 : 默克专利股份公司

摘要 :

一种用于在液体样本上执行声处理的设备包括用于保持一列样本小瓶的支架、超声探头,其具有对应于样本小瓶阵列的凹口的布置且适于分别收纳和接触相应一个样本小瓶的底部的外表面,以及对立支座,其具有对应于样本小瓶阵列且适于分别将力施加到相应一个样本小瓶上的推动部件的布置,以便推动各个小瓶的底部来与探头的相关联凹口接触。设备可用于制备用于检测细胞成分(例如,细胞分析物、蛋白质、核酸等)的样本和以一定参数范围内应用声处理的方法中使用,其提供了通用的溶解方法,其可应用于大量细胞或有机物,如,相同设备和过程内的所有细菌、病毒、孢子、酵母和霉菌。

权利要求 :

1.一种用于在液体样本上执行声处理的设备,包括:

用于保持成列的样本小瓶(2)的支架(1);

超声探头(3),其具有对凹口(4)的布置,所述凹口(4)对应于所述成列的样本小瓶(2)且适于分别收纳和接触相应一个所述样本小瓶(2)的底部(2a)的外表面;以及对立支座(5),其具有推动部件(6)的布置,所述推动部件对应于所述成列的样本小瓶(2)且适于将力分别施加到相应一个所述样本小瓶(2)上,以便推动各个小瓶(2)的底部(2a)来与所述探头(3)的相关联的凹口(4)接触,其中,所述支架(1)沿中心轴线的方向可受支承地移动,且沿朝所述推动部件(6)的方向弹性地被偏压。

2.根据权利要求1所述的设备,其特征在于,所述推动部件为推杆(6)形式,且布置成将所述力施加到相应的相关联小瓶(2)的顶部上。

3.根据权利要求2所述的设备,其特征在于,所述推杆(6)受支承使得所述力可调整和/或所述推杆朝所述小瓶(2)弹性地偏压。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的设备,其特征在于,定位机构(7)提供成使所述推动部件与所述小瓶(2)有选择地接合。

5.根据权利要求4所述的设备,其特征在于,所述定位机构(7)包括用于保持成列的所述推动部件的平台(8),所述平台(8)受支承,以便至少在朝向和远离所述探头(3)的方向上可动,且包括用于沿朝向和远离所述探头(3)的方向使所述平台(8)交替移动的驱动机构。

6.根据权利要求1至3中任一项所述的设备,其特征在于,所述设备还包括移动机构,其用于将所述支架(1)在所述设备的壳体外的位置与壳体内的同所述超声探头(3)对准的位置之间移动。

7.根据权利要求1至3中任一项所述的设备,其特征在于,所述凹口(4)形成为匹配所述列中的小瓶(2)的底部构造。

8.根据权利要求1至3中任一项所述的设备,其特征在于,所述凹口(4)关于中心轴线旋转对称。

9.根据权利要求1至3中任一项所述的设备,其特征在于,所述凹口(4)为半球形或圆锥形。

10.根据权利要求7所述的设备,其特征在于,各个凹口(4)构造成以便匹配至少两个不同小瓶(2)的不同底部构造。

11.根据权利要求10所述的设备,其特征在于,各个凹口(4)具有圆滑底部(4a)和圆锥形外周部分(4b)。

12.根据权利要求7所述的设备,其特征在于,至少包含所述凹口(4)的所述探头(3)的部分可更换以适应不同的成列的样本小瓶(2)和/或具有不同底部构造的样本小瓶(2)。

13.一种制备用于细胞成分的检测的样本的方法,包括:

将所述样本提供在样本小瓶(2)中,

将所述样本小瓶(2)放在如根据权利要求1至12中任一项限定的所述设备中,通过所述设备使用以下参数在所述样本小瓶(2)中的样本上执行声处理来实现样本的溶解:将0.1到1N/mm2的机械应力施加到所述样本小瓶与所述探头之间,施加2到10μm的峰到峰振动振幅,以及

施加20到100kHz的振动频率。

14.根据权利要求13所述的方法,其特征在于,多个样本提供在所述列中的多个样本小瓶中,且声处理在所述设备中在所述列中的多个样本上同时执行。

15.根据权利要求13或14所述的方法,其特征在于,所述样本以20μl到1ml的样本体积提供在具有200μl到50ml的额定容积的样本小瓶中。

16.根据权利要求13或14所述的方法,其特征在于,用于收纳所述样本的所述样本小瓶为标准实验管,或圆底管,或多孔滴定板或微量滴定板。

17.根据权利要求16所述的方法,其特征在于,所述样本小瓶由塑料材料制成。

说明书 :

用于执行声处理的设备

技术领域

[0001] 本发明涉及一种用于在液体样本上执行声处理的设备,总体而言,其优选在生物学、分子生物学、生物工艺学、生物化学、普通化学、食品和饮料行业、制药行业的领域中,且用于诊断应用。此外,本发明涉及一种用于使用用于执行声处理的设备来制备用于检测细胞成分的样本的方法。

背景技术

[0002] 声处理在以上领域中用于很多用途,如,混合、增溶、驱动化学反应、组织均化作用、细胞操作和使用、剥除生物分子如DNA,以及清洁、塑料焊接等。这些领域(除塑料焊接之外)的声处理一般在浴超声发生器中执行,其中水将声能从变换器传递至样本,或利用探头超声发生器执行,其中浸没在样本中的金属探头将声能施加于其上。浴声处理受限于其传递至样本的能量的量。探头声处理可供应较大能量,但限于一次一个样本或每个探头一个样本。此外,将金属探头浸没在样本中必然污染金属探头,且需要昂贵的清洁。
[0003] 待经声处理处理的样本可包括需在适合的溶液中测定的细菌、细胞、病毒和含有核酸的其它材料,溶液以预定量加入样本容器中。
[0004] 用于在液体样本上执行声处理的大部分当前的装置受限于它们在一个时间点可加工或处理的样本液体的最小体积,从而仅提供了有限的产量,或存在其它缺点,如,在使用之后的过高清洁要求。
[0005] 文献US2009/0151459A1公开了一种用于超声样本制备的系统及方法,其包括圆柱形样本容器,该容器由聚合材料形成,且具有壁,壁限定外周侧表面,以及用于容纳样本材料的大约1ml到大约25ml之间的内部体积。提供了外部转换器,其将交流电力转换成超声范围中的机械振动,并且超声探头提供成与样本容器的外周表面相接触。超声探头与转换器通信,且将机械振动传递至样本容器的壁,且从而至内部容积,以激励和混合容器中的样本材料。探头具有探头部分,其并未插入样本容器中,但与样本容器的外周侧壁进行紧密接触。该现有技术是人工操作的系统,且限于一次在单个样本容器中的单个样本的声处理。
[0006] 文献EP 0337690 A1公开了用于制备样本核酸的另一方法及设备,其包括样本的无创声处理,样本容纳在样本容器中,容器与在40kHz或更高频率下共振的超声发生器的长形振动超声末梢物理接触。超声变换器安装在框架部件上,框架部件继而又安装在位于壳体内的底座上。超声变换器安装在气压缸上,以控制超声末梢相对于用作样本液体的容器的一次性小杯的力。小杯相对于超声末梢由力保持件保持,力保持件滑动地接合小瓶的顶4 5 -2
部。为了保持超声波末梢与小瓶之间的接触,设备通过激励气压缸来施加6x10 到2x10Nm的压力。该设备也是一次一个样本的设备,且因此不适用于高产量的应用。
[0007] 文献US2007/0238090 A1公开了另一种系统和方法,其用于处理在用于溶解病毒或生物细胞中的生物液体样本,来使用生物测定系统来分析。将由该系统处理的样本体积在大约1ml到10ml的范围中,且样本通过施加压力和声能或热能到样本上来处理。为此,设备具有特殊小瓶,其为圆筒形,且具有用于接收样本的内室。小瓶具有开口上端,用于密封开口上端的塞或插入物插入开口上端中,以及挡盖,以用于通过与小瓶的上外端部分螺纹接合来将塞保持在小瓶中。加热器线圈包绕小瓶的下端,且为长形末梢形式的声处理头定位成以便面对和接触小瓶的平下底端面。
[0008] 在另一个实施例中,文献US2007/0238090A1公开了一种设备,其中具有特殊的小瓶和相关联的长形声处理头的上述结构是多个的,以便多个不同的样本可同时地处理。该系统具有多孔板,其具有多个孔或室,各个均用于收纳预定尺寸的样本;塞板,其具有从一面突出的多个塞或柱塞来在多孔板中的相应对准的孔中密封接合;以及锁定或闩锁机构,其用于在各个塞完全插入相应的孔中时将两个板装固在一起。加热器提供成用于加热各个孔中的样本,且具有等于板中的孔的数目的多个长形末梢的超声装置用于将超声波施加到各个孔中的样本,其中多探头声处理装置与孔的下端对准,且朝孔移动,直到各个探头接触相应的对准的孔的平底端面。
[0009] 该实施例在一定意义上改善了系统,使得其允许大量的样本的同时处理,但其是很复杂的布置,尤其是需要大量超声探头末梢。

发明内容

[0010] 本发明的目的在于提供一种用于在多个液体样本上执行声处理的设备,其适于在一定数目的样本上同时执行声处理,且其比现有的装置更简化和更稳健。此外,本发明的目的在于提供一种借助于声处理制备用于检测细胞成分的样本的方法,其可在大应用领域中在一定数目的样本上有效地执行溶解。
[0011] 为了解决该问题,本发明提供了一种如权利要求1中限定的在液体样本上执行声处理的设备,以及如权利要求11中限定的使用此设备制备用于检测细胞成分的样本的方法。设备和方法的优选实施例在从属权利要求中限定。
[0012] 用于在液体样本上执行声处理的本发明的设备包括用于保持成列样本小瓶的支架、具有凹口布置的超声波探头,凹口布置对应于成列样本小瓶且适于分别收纳和接触相应一个样本小瓶的底部的外表面,以及具有推动部件布置的对立支座,推动部件对应于成列样本小瓶,且适于分别将力施加到相应一个样本小瓶上,以便推动各个小瓶的底部来与探头的相关联的凹口接触。
[0013] 根据本发明的制备用于检测细胞成分的样本的方法包括以下步骤:在样本小瓶中提供样本、将样本小瓶置于本发明的设备中、通过设备使用以下参数在样本小瓶中的样本上执行声处理以实现样本的溶解:在样本小瓶与探头之间施加0.1到1N/mm2的机械应力、施加2到10μm的峰到峰振动振幅,以及施加20到100kHz的振动频率。
[0014] 设备的一个优点在于通过声处理溶解可在成阵列的多个样本上同时地执行,其中样本收纳在通常用作消耗品的标准小瓶或容器中,其总体而言在生物化学、普通化学、食品和饮料行业、制药行业中,且用于诊断应用,以在微升范围中执行微量反应。这些小瓶通常包括圆锥形实验管,所谓的50ml圆锥离心管或圆底管、1.5ml或2ml微离心管,其独立地保持在支架中,或微量滴定板,其将一列孔或测试管组合在一体的板中,且通常由塑料材料制成,如,PP(聚丙烯)、PS(聚苯乙烯)、PC(聚碳酸酯)、PET(聚乙烯)或薄玻璃。
[0015] 通过允许此标准小瓶或容器中的样本的声处理,即使很少量的样本液体也可有效地溶解,因为探头通过其分别对应于成列样本小瓶的凹口布置收纳和接触各相应的一个样本小瓶的底部的外表面。少量样本液体通常集中在各个此类小瓶的底部处,其通常为圆锥形或圆形或半球形。探头的凹口不但在下底面处,而且在底端上方的一部分长度处包绕该底部,且因此使表面面积和环绕整个液体体积最大化。因此,更多能量可转移到样本,而没有熔化或破坏小瓶管的风险,且不需要在声处理期间小瓶的冷却。此外,能量更均匀地分配,且施加到样本的整个体积上。
[0016] 来自小瓶的外侧的间接声处理避免了超声探头与样本液体的接触,且成列多个样本小瓶可在支架内由公共超声探头同时声处理的事实提供了待处理的大量样本的快速结果和高产量,同时仅涉及阵列中的样本之间的有限的差异。
[0017] 此外,该设备提供了一种容易使用的系统,因为样本的支架的支座设计成移动来与设备中可能静止的超声探头接触,以便存在通过简单的机械机构的限定的移动,这提高了使用者操作设备的安全性。简单的机械布置提供了使保持成列样本小瓶的支架的输送至操作位置自动化的可能性,操作位置可在与环境密封的基本闭合的壳体内侧。因此,设备不需要处理其间的人工处理步骤,且仅需要将小瓶布置到设备的支架中作为准备步骤。
[0018] 其中超声探头为一体的块,其具有凹口的阵列或布置,其对应于样本小瓶的阵列,且形成为分别收纳和接触相应一个样本小瓶的底部的外表面,即,其中凹口的形状模拟小瓶的底部的形状,与小瓶的外表面的接触面积最大化,且超声能的传递集中于小瓶的一部分上,其中甚至在仅处理微升范围中的很少量的样本液体的情况下样本液体也集中在该部分中。因此,在20μl到1ml的范围中的即使很少量的样本液体也可使用行业中作为消耗品的可获得的标准小瓶或容器来声处理。
[0019] 超声探头的结构还提供了声处理能量相对于阵列中的所有样本小瓶均匀地分配的优点,使得相应位置处施加的能量之间的偏差很小且确保了整个阵列各处的结果的可比性。
[0020] 特别有利的实施例为超声探头中的多个凹口分别构造成以便匹配至少两个不同小瓶的不同底部构造的实施例。这大大提高了设备的通用性和声处理的速度,因为如果不同类型的小瓶/容器将一批接下一批处理时不需要设备的改变。
[0021] 由于超声波探头设有凹口布置且另外形成为将在设备中处理的所有样本小瓶的一体的块,故结构简单且各个液体样本的激励在窄范围内可比较。这便于处理大量样本,且使得结果更具可比性。此外,超声探头的简单结构便于在样本液体从小瓶/容器溢出的情况下清洁设备。
[0022] 使用本发明的设备制备用于细胞成分的检测的样本的本发明的方法且应用权利要求11的参数范围内的声处理提供了通用的溶解方法,其可以相同设备和过程而应用于多种细胞或有机物,如,所有细菌、病毒、孢子、酵母和霉菌。这减少了必须在实验室中实施和记录的不同程序的数目,且使得程序更简单且彼此可比较。

附图说明

[0023] 这些及其它方面将从下文参照附图的优选实施例的描述中变得清楚。在附图中:
[0024] 图1示出了本发明的设备的示例性实施例的示意性透视图,
[0025] 图2示出了图1的设备的动态图解,
[0026] 图3以截面示出了具有代表不同的优选实施例的不同列举的凹口类型的探头,以及本发明的设备的超声探头内的独立凹口的放大截面视图。

具体实施方式

[0027] 图1和2中示出了本发明的设备的基本构造。该设备具有用于保持一列样本小瓶2的支架1,以及具有凹口4布置的超声探头3,凹口4对应于一列样本小瓶,且在探头和支架对准且被引至图1中所示的工作位置时,适于分别收纳和接触相应一个样本小瓶的底部2a的外表面。探头3与转换器协作,转换器产生超声振动,且将其传递至探头。
[0028] 支架1受支承,以便可沿中心轴线的方向移动,且优选沿朝用于施加保持或接触力的对立支座5的推动机构7的推动部件6的方向受弹性偏压。移动机构(未示出)优选设在设备中,以用于使支架在设备的壳体外的位置与壳体内的同超声探头对准的位置之间移动。因此,操作者仅须将具有样本的小瓶放入支架中,或将具有小瓶的整个支架放到移动机构上。这些运动可用手执行,但也可自动执行,例如,通过专用或可编程的机械手或机器人。在开始该过程(即,通过按下"开始"按钮)之后,支架自动地移动到壳体中,优选通过水平移动,且声处理在操作者受庇于该过程时执行。在经过预设的声处理时间之后,支架又通过移动机构从壳体移出,以进一步处理小瓶。
[0029] 对立支座5具有推动部件的布置,其对应于一列样本小瓶,且适于将力分别施加到相应一个样本小瓶2的顶部上,以便推动各个小瓶的底部来与探头3的相关联的凹口4以限定压力(每表面面积的力)紧密接触。该压力足够高,使得超声能的最大值转移到小瓶中的样本中,而不转移到小瓶自身中,以免在交界处使小瓶材料熔化(即,聚丙烯)。接触的缺失实际上将在交界处产生剪切,这将使温度升高。另一方面,太高的接触压力将需要来自功率转换器的更多功率,以便保持恒定振动振幅,且可在小瓶的边界处产生应力,其可具有与接触缺失相同的不利结果。
[0030] 用于产生接触压力的力可在设备中以许多不同方式产生。在所示的优选实施例中,推动部件优选为推杆6的形式,其布置并保持在公共平台8中,以施加力到相应的相关联小瓶的顶部上,且借助于驱动机构9来一起移动。不同构造的推动部件和将力引入小瓶中的不同位置是可行的。在优选实施例(未示出)中,一列推动部件可更换,以适应不同列的样本小瓶和/或具有不同构造的样本小瓶。
[0031] 推杆6优选设计成使得力可调整,和/或推杆朝小瓶弹性地偏压。这可通过预张紧弹簧实现,其预张力可调整来调节施加至相应的小瓶的力。
[0032] 定位机构9提供成有选择地移动平台8,且从而使推动部件6的布置与小瓶接合。该定位机构9包括用于保持成列的推动部件6的平台8。平台8受到支承以便至少在朝向和远离探头3的方向上可移动,并且驱动机构9用于在这些位置之间重复地交替移动平台8,且施加相同的保持力,驱动机构9如图2中所示可包括具有齿轮和驱动电机的凸轮/从动件系统。其它驱动机构包括电力、液压或气动驱动促动是可行的。推杆6还可由电动或液压缸(未示出)偏压。
[0033] 设备中的布置大体上使得相关联的凹口和推动部件的中心轴线对准,且至少在施加力和开始声处理时与阵列中的相关联的样本小瓶同轴。
[0034] 例如,如图3中所示的设备的一体的块状超声探头3的凹口4是本发明的重要方面。凹口形成为至少在一定程度上匹配阵列中使用的小瓶2的底部2a的底部构造,其中凹口优选关于中心轴线旋转对称,且取决于设备中使用的小瓶的类型,优选为如图3a中的半球形或圆锥形。因此,设备可结合常规的标准反应器皿或小瓶或容器使用,这些容器可归类为典型地具有1.5ml到2ml的范围中的额定容积或尺寸的小的小瓶或容器,即,所谓的艾本德(Eppendorf)杯,其通常具有卡扣盖或圆锥形密封件或硅树脂密封件,或者典型地为15ml到
50ml的范围中的额定容积的较大的小瓶/容器,其具有卡扣或螺纹盖,且例如可获得的50ml圆锥离心管或具有200μl的孔的96孔板。
[0035] 小瓶可为如上文所述的独立的容器或微量滴定板,其将一列孔或测试管组合在一体的板中。所有这些容器通常由塑料材料制成,包括PP(聚丙烯)、PS(聚苯乙烯)、PC(聚碳酸酯)、PET(聚乙烯)或由薄玻璃制成。小型的小瓶通常具有小半球形末梢端,而较大类型的小瓶具有圆锥形下端,但不同的构造是可能的。如图3a中所示,本发明的超声波探头的凹口模仿(mimicking)通常用于实验室环境的小瓶的这些底部构造。因此,与底部区段中的外表面的接触面积最大化,且接触面积不仅限于轴向底面,而是进一步向上延伸,以便凹口与小瓶之间的接触面积包绕少量样本液体所收集中于的下底端。
[0036] 在图3b中所示的特别优选的实施例中,各个凹口构造成以便匹配至少两个或甚至更多不同的小瓶的不同底部构造。如图3b中所示的该结构将下部处的用于小型小瓶的半球形轮廓与大型小瓶的圆锥形构造组合邻近底端的一个凹口中。这里,同样不同的构造也可实施,其提供与不同构造的最大接触面积。
[0037] 总体上,本发明的设备可广泛应用于生物学、分子生物学、生物工艺学、生物化学、普通化学、食品和饮料行业、制药行业的领域中大量的液体样本的溶解任务,且用于诊断应用。其中如上文所述的普通样本小瓶/容器可容纳在设备中,且其中声处理过程的参数如样本小瓶上的保持力、峰到峰的振动振幅,以及频率及声处理时间可在设备中设置,可执行各种应用如混合、声呐化学和用于诊断的样本制备。
[0038] 特别有利的效果通过在制备用于检测细胞成分(例如,细胞分析物、蛋白质、核酸(NA)等)的一个或多个样本的方法中使用上文所述的设备来获得,因此该方法包括以下步骤:将各个样本提供在单独的样本小瓶中,将样本小瓶放入设备中,通过设备使用以下参数在样本小瓶中的样本上同时执行声处理以实现样本的溶解:
[0039] 将0.1到1N/mm2(优选的是,对于1.5ml微型离心管是0.26+/-0.05N/mm2,且对于50ml的圆锥离心管是0.1+/-0.01N/mm2)的保持机械应力施加在样本小瓶与探头之间;
[0040] 施加2到10μm的峰到峰振动振幅(优选的是,对于小管是4μm,而对于大管是10μm);以及
[0041] 施加20到100kHz的振动频率(优选的是,对于小管和大管是20kHz+/-100Hz)。
[0042] 声处理时间对于小管和大管为大约3分钟。当在适当缓冲介质(即,胍缓冲液)中执行时,该方法能够分解所有细菌、病毒、孢子、酵母和霉菌,而不破坏其NA。
[0043] 上文限定的参数范围变为覆盖使用本发明的设备的多种声处理应用。控制器可设在设备中以允许通过适合的操作者界面来设置范围内的相应的值,且用于控制设备中的构件,以便声处理以设置值内作用。此外,控制器还可通过以预定方式触动设备中的相应驱动机构来实现将支架自动转移进出上文所述的设备。
[0044] 实例:
[0045] 实例1:微生物的溶解效率的展示
[0046] 1.1.实验报告
[0047] 菌株制备和溶解
[0048] 对于各个测试的微生物,来自平皿培养物的少量CFU(菌落形成单元)在胨盐稀释剂中再悬浮至限定的OD值。实现了十倍的连续稀释。
[0049] 然后,104CFU在溶解缓冲液中达到顶峰(盐酸胍1M、NLS(核定位序列)0.5%、5mM Tris(氨基丁三醇)pH8、EDTA(乙二胺四乙酸)0.5mM)。溶解溶液的总量为500μL。实现了10复制测试。
[0050] 样本利用根据本发明的设备在1.5ml的耐声处理管(Eppendorf Safe-Lock Biopur)中声处理大约3分钟。DNA提纯步骤立即执行以隔离实时PCR相容洗脱缓冲中的微生物DNA。
[0051] DNA提纯
[0052] 磁性DNA提纯使用磁性珠来执行以提纯微生物DNA。15个样本使用KingFisher仪器(ThermoScientific标号5400050)和MilliPrep套件(Merck Millipore标号MPRPMYC48)同时提纯。
[0053] 随后,洗出液转移到1.5mL的管,且在10000g下离心作用90s。如果需要,样本储存在-20℃下,且在执行特定实时DNA扩增之前解冻。
[0054] 特定实时DNA扩增和检测
[0055] 除L.monocytogenes(李斯特菌)和E.coli(大肠杆菌)外,执行特定实时SYBR Green(绿荧光法)PCR测定。每个反应的15μL的PCR混合物配制有2X浓缩的Green PCR套件(Qiagen)和0.5μM的特定底层(primers)。然后,10
μL的各个样本加入各个孔中。负控制(10μL的水)和正控制(1-100ng的测试微生物gDNA)在各次中并入。实现了每个提纯样本的两PCR复制测试。
[0056] PCR板(Twintec板,Eppendorf)密封( 膜,Bio-rad)且以1700rpm离心作用2分钟。PCR测定在Mastercycler epgradient realplex2(Eppendorf)仪器上执行。
[0057] 对于大肠杆菌,执行特定的实时TaqMan PCR测定。每个反应15μL的PCR混合物配制有2X浓缩的QuantiFastTMPCR套件(Qiagen)、0.1μM的特定底层和0.08μM的特定探头。然后,以负控制和正控制,将10μL的各个样本加入各个孔中。实现了每个提纯样本的两PCR复制。如上文所述,执行了PCR板和测定。
[0058] 使用 李斯特菌检测套件(Biotecon Diagnostics)执行李斯特菌(L.monocytogenes)测试。实现了每个提纯样本的两PCR复制。PCR板(
4titude)密封(QPCR Adhesive Clears(玻璃胶),4titude),且以1700rpm离心作用2分钟。
PCR测定在Stratagene Mx3005P(Agilent Technologies)仪器上执行。
[0059] 1.2结果
[0060]
[0061] 数据显示声处理可认作是革兰氏阴性细菌、革兰氏阳性细菌(包括厌氧菌)、细菌孢子、酵母和霉菌的孢子的有效溶解方法。
[0062] 实例2:溶解线性的展示
[0063] 2.1试验报告
[0064] 使用根据本发明的声处理设备的溶解的线性性通过测试微生物(如上文所述配制)的尖峰和溶解10/100/1000/10000CFU来测试。实现了每个测试浓度的5复制。提纯和DNA扩增如上文所述那样实现。
[0065] 2.2.结果
[0066]
[0067] 上表中呈现的数据示出了使用声处理仪器的测试微生物的溶解是线性的。