一种草莓组织培养基及其配制方法

摘要

本发明公开了一种草莓组织培养基，每升MS母液中包括(NH4)2SO4硫酸铵640 mg/L、CO(NH2)2尿素1000mg/L。本发明配方不使用硝酸铵，使用目前容易购买到的硫酸铵和尿素来替代，解决了硝酸铵购买难的问题；由于使用了硫酸铵，因此硫酸根的浓度增加，因此将传统MS培养基中的硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠配制的铁盐换成Fe‑EDDHA乙二胺邻二羟基乙酸铁，试验效果证明植物生长更好；去掉了MS培养基中的氯化钴和硫酸铜，因为这两个物质用量及其少，配制过程中由于不好称量，常常需要先配置这两个物质的浓缩液，在按照一定浓度添加到母液中，费时费力，实验发现这两个物质对植物生长没有影响，因此去掉，简化配制流程。

权利要求

1.一种草莓组织培养基，其特征在于：每升MS母液中包括(NH4)2SO4硫酸铵640 mg/L、CO(NH2)2 尿素1000 mg/L、Fe-EDDHA 乙二胺邻二羟基乙酸铁10 mg/L、肌醇100 mg/L、烟酸1 mg/L、维生素B10.5 mg/L、维生素B61 mg/L、维生素C2 mg/L。

2.根据权利要求1所述的草莓组织培养基，其特征在于：还包括大量元素，每升MS母液中含有KNO3硝酸钾1500 mg/L、MgSO47H2O七水合硫酸镁200 mg/L、KH2PO4 磷酸二氢钾170 mg/L。

3.根据权利要求1所述的草莓组织培养基，其特征在于：还包括微量元素，每升MS母液中含有KI碘化钾1.1 mg/L、MnSO44H2O四水合硫酸锰20 mg/L、ZnSO47H2O 七水合硫酸锌10 mg/L、H3BO3硼酸5 mg/L。

4.根据权利要求1所述的草莓组织培养基，其特征在于：还包括钙盐，每升MS母液中含有CaCl22H2O二水合氯化钙440 mg/L。

5.如权利要求1 4任意一项所述的草莓组织培养基的配制方法，其特征在于：分别配制~

大量元素母液、微量元素母液、铁盐母液、钙盐母液、有机物母液，每种母液配制成浓缩液，冷藏备用，配制培养基时每升添加葡萄糖15克，植物凝胶2.5克。

说明书

一种草莓组织培养基及其配制方法

技术领域

[0001] 本发明涉及植物组织培养技术领域，具体涉及一种组织培养基及其配制方法。

背景技术

[0002] MS培养基是目前植物组织培养中最为常用的培养基，从1962年发明该培养基以来，经过多年的发展，该培养基已经越来越广泛的应用于植物的组织培养中。MS 培养基是 Murashige 和 Skoog 于 1962 年为烟草细胞培养设计的，其特点是无机盐和离子浓度较高，是较稳定的离子平衡溶液。大多数植物的试管苗繁殖大多采用 MS培养基，因此目前在植物组织培养中，MS培养基的用量是非常大的。MS培养基有较高浓度的无机盐， 对保证组织生长所需的矿质营养和加速愈伤组织的生长十分有利，其中铵态氮的来源是硝酸铵，由于硝酸铵是工业上制造炸药所需的原料，近年来，国家监管此类物品越来越严格，实验室购买硝酸铵的难度很大。因此，在组织培养过程中，硝酸铵的缺失是目前的一个重要问题，能不能用其他物质代替硝酸铵而且让植物正常生长是本发明的主要任务。

发明内容

[0003] 发明目的：本发明的目的在于为了克服现有技术的不足，提供一种无需硝酸铵的草莓组织培养基及其配制方法，使不同品种的草莓在该养基中都能够正常生长。

[0004] 技术方案：本发明所述的一种草莓组织培养基，每升MS母液中包括(NH4)2SO4硫酸铵640 mg/L、CO(NH2)2 尿素1000 mg/L，使用硫酸铵和尿素第一能够提供草莓生长所需要的氮元素，提供的量足够保证草莓正常生长，其次这两种物质不会带入对草莓生长有害的一些元素，对草莓生长不产生副作用。

[0005] 进一步，还包括大量元素，每升MS母液中含有KNO3硝酸钾1500 mg/L、MgSO4•7H2O七水合硫酸镁200 mg/L、KH2PO4 磷酸二氢钾170 mg/L，提供草莓组培苗生长必须的钾元素、镁元素以及磷元素，配合使用能够保证草莓组培苗吸收足够的大量元素，生长健壮。

[0006] 进一步，为了提供草莓组培苗生长必须的微量元素，每升MS母液中含有KI碘化钾1.1 mg/L、MnSO4•4H2O四水合硫酸锰20 mg/L、ZnSO4•7H2O七水合硫酸锌10 mg/L、H3BO3硼酸5 mg/L。

[0007] 进一步，还包括铁盐，每升MS母液中含有Fe-EDDHA 乙二胺邻二羟基乙酸铁10 mg/L。

[0008] 进一步，还包括钙盐，每升MS母液中含有CaCl2•2H2O二水合氯化钙440 mg/L，组织培养时，草莓缺钙会引起植株黄化，因此需要加入一定的钙元素保证组培苗正常生长。

[0009] 进一步，还包括有机物，每升MS母液中含有肌醇100 mg/L、烟酸1 mg/L、维生素B10.5 mg/L、维生素B61 mg/L、维生素C2 mg/L。

[0010] 上述草莓组织培养基的配制方法，分配置大量元素母液、微量元素母液、铁盐母液、钙盐母液、有机物母液，每种母液配制成浓缩液，冷藏备用，配置培养基时每升添加葡萄糖15克，植物凝胶2.5克。

[0011] 有益效果：1、本发明配方不使用硝酸铵，使用目前容易购买到的硫酸铵和尿素来替代，解决了硝酸铵购买难的问题；

[0012] 2、由于使用了硫酸铵，因此硫酸根的浓度增加，因此将传统MS培养基中的硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠配制的铁盐换成Fe-EDDHA 乙二胺邻二羟基乙酸铁，试验效果证明植物生长更好，由于Fe-EDDHA 乙二胺邻二羟基乙酸铁是一种螯合铁，植物生长中吸收铁元素以螯合铁更容易吸收，传统培养基中使用硫酸亚铁配制螯合铁，这样，硫酸根离子浓度过大，因此，使用Fe-EDDHA 乙二胺邻二羟基乙酸铁更容易使植物良好吸收铁；

[0013] 3、去掉了MS培养基中的氯化钴和硫酸铜，因为这两个物质用量及其少，配制过程中由于不好称量，常常需要先配置这两个物质的浓缩液，在按照一定浓度添加到母液中，费时费力，实验发现增加两个物质对植物生长没有影响，因此去掉，简化配制流程；

[0014] 4、在有机元素中添加维生素C，利于草莓组织培养植株的生长；维生素C是一种抗氧化剂，能帮助植物抵抗干旱、臭氧和紫外线，维生素C保护植物免受光合作用中有害副作用的侵害；

[0015] 5、在配置培养基时不适用琼脂粉和蔗糖，使用植物凝胶和葡萄糖，这样植物能够更好的吸收营养元素，生长更好。

具体实施方式

[0016] 下面对本发明技术方案进行详细说明，但是本发明的保护范围不局限于所述实施例。

[0017] 实施例：以配置一升的草莓组织培养基为例：

[0018] 第一步，配置1升大量元素，大量元素配置成25倍的浓缩溶液，为母液一。

[0019] 称取：KNO3硝酸钾37.5g、(NH4)2SO4硫酸铵16g、CO(NH2)2 尿素25g、MgSO4•7H2O七水合硫酸镁5g、KH2PO4磷酸二氢钾4.25g，溶解于1升蒸馏水中。

[0020] 第二步，配置200豪升微量元素，配置成1000倍的浓缩溶液，为母液二。

[0021] 称取：KI碘化钾0.22g、MnSO4•4H2O四水合硫酸锰4g、ZnSO4•7H2O七水合硫酸锌2g、H3BO3硼酸1g，溶解于200豪升蒸馏水中。

[0022] 第三步，配置500豪升铁盐，配置成200倍的浓缩溶液，为母液三。

[0023] 称取：Fe-EDDHA 乙二胺邻二羟基乙酸铁1g，溶解于500豪升蒸馏水中。

[0024] 第四步，配置500豪升钙盐，配置成50倍的浓缩溶液，为母液四。

[0025] 称取：CaCl2•2H2O二水合氯化钙11g，溶解于500豪升蒸馏水中。

[0026] 第五步，配置500豪升有机溶液，配置成200倍的浓缩溶液，为母液五。

[0027] 称取：肌醇10g、烟酸0.1g、维生素B1 0.05g、维生素B6 0.1g、维生素C0.2g溶解于500豪升蒸馏水中。

[0028] 母液配好后放4度冰箱保存备用。

[0029] 配置培养基时每一升培养基加母液一50毫升，母液二1毫升，母液三5毫升，母液四20毫升，母液五5毫升。具体配制方法为：将每种母液混匀后添加2.5克植物凝胶和15克葡萄糖混匀，定容至一升，分装到培养基适用容器中备用。

[0030] 由于植物凝胶和葡萄糖容易在水中溶解，因此配置培养基时不需要煮沸，只需要所有组分加到一起搅匀分装即可，灭菌完成后会充分溶解，因此，配制培养基省时省力。