一种顺铂脂质体制剂及其制备方法和应用

摘要

本发明涉及药物制剂技术领域，具体公开了一种顺铂脂质体制剂及其制备方法和应用。本发明技术方案通过改良的配方和工艺使得该顺铂脂质体能提高顺铂药物的生物利用度，延长药物在体内的滞留时间，并可使顺铂浓集于癌变器官，不仅可以减少用药剂量，增强疗效，而且可以降低药物的毒副作用，适用于多种肿瘤疾病的治疗。

权利要求

1.一种顺铂脂质体制剂，由以下原料制备而成：顺铂、蛋黄卵磷脂、胆固醇、油酸、吐温-

80、氢氧化钠和水；

其中，顺铂、蛋黄卵磷脂、胆固醇、油酸、吐温-80的重量份配比如下：顺铂：蛋黄卵磷脂：胆固醇：油酸：吐温-80=37.5：50：12：31：7；

其中，氢氧化钠用量为油酸摩尔量的60-85%；

其中，水的体积与蛋黄卵磷脂、胆固醇、油酸和吐温-80总质量的比例为：1mL：（10—40）mg；

所述顺铂脂质体制剂的制备方法步骤如下：

（1）、通过乙醇注入-挤压法制备空白脂质体混悬液；

将蛋黄卵磷脂、油酸、胆固醇和吐温-80置于烧杯中，加入无水乙醇在30-45℃水浴中磁力搅拌溶解，将所得乙醇溶液注入已预热到30℃的氢氧化钠水溶液中，在30℃条件下继续搅拌30min后，用脂质体挤出器过孔径为100nm的聚碳酸酯膜1-4次，得到空白脂质体混悬液；

（2）、将顺铂加入至空白脂质体混悬液中，避光、30～60℃加热搅拌至充分反应，弃去沉淀，用脂质体挤出器过孔径为100nm聚碳酸酯膜1-4次；

（3）、除去游离的顺铂，即得顺铂脂质体制剂。

2.根据权利要求1所述的顺铂脂质体制剂，其特征在于：所述水的体积与蛋黄卵磷脂、胆固醇、油酸和吐温-80总质量的比例为1mL：（15—25）mg。

3.根据权利要求1所述的顺铂脂质体制剂，其特征在于：所述水的体积与蛋黄卵磷脂、胆固醇、油酸和吐温-80总质量的比例为1mL：20 mg。

4.根据权利要求1所述的顺铂脂质体制剂，其特征在于：所述步骤（3）中除去游离顺铂的方法为将步骤（2）所得液体进行如下四种处理之一：置于截留分子量10000-14000的透析袋中透析、过琼脂糖凝胶柱、于0～4℃下15000～

35000转/分钟离心5～10分钟，或通过50KD-100KD中空纤维过滤器。

5.权利要求1-4中任一所述的顺铂脂质体制剂在制备治疗或预防肿瘤疾病药物中的应用。

说明书

一种顺铂脂质体制剂及其制备方法和应用

技术领域

[0001] 本发明涉及药物制剂技术领域，具体涉及一种顺铂脂质体制剂及其制备方法和应用。

背景技术

[0002] 顺铂(顺氯氨铂，DDP)最早于1844年制得，直到1967年，美国密执安州大学教授Rosenberg等人才发现其顺式异构有抗癌作用，并于1969年应用于临床，1978年在美国上市。

[0003] 顺铂是第1个铂类药物，顺铂为重金属铂的络合物，在中心原子铂的四周有2个氯原子和2个氨分子，具有双官能团烷化剂的性质。在人体内，氯可被水解下来，形成活泼的带正电的水化分子，然后与核酸和蛋白质反应，引起DNA链间或链内交联，或形成DNA与蛋白质的交联，从而抑制DNA复制和转录，导致DNA断裂和误码，抑制细胞有丝分裂，且作用较强而持久。

[0004] 顺铂的抗癌谱较广，为细胞周期非特异性药物，静注后迅速广泛分布于肝、肾、前列腺、膀胱、卵巢、亦可到达胸腹腔，极少通过血脑屏障，在人体内主要通过肾脏排泄。DDP是目前肿瘤化疗的主要药物，对睾丸癌、骨肉瘤、卵巢癌、乳腺癌、肺癌、小细胞肺癌和非小细胞肺癌、头颈部癌、胃癌、膀胱癌、恶性淋巴瘤和软组织肉瘤有较好疗效。

[0005] 顺铂具有以下特点：(1)抗癌谱广，抗癌作用强，抗癌活性高；(2)毒副作用，主要是肾毒性和恶心、呕吐，毒性谱与其他抗癌药物有不同之处，因此易与其他抗癌药物配伍，包括与其他铂类抗癌药物配伍；(3)与其他抗癌药物缺乏交叉耐药性，有利于临床的联合用药。

[0006] 顺铂的抗肿瘤药效确定，效果较好，临床应用较为广泛。但是，在杀伤肿瘤细胞同时，对人体正常细胞也造成很大伤害，毒性反应较为严重。其主要的毒性反应包括肾毒性、消化道毒性、骨髓抑制神经毒性和耳毒性等，在很多情况下，毒性反应严重时可导致治疗中断。

[0007] 为了在保证疗效的基础上，最大限度地降低顺铂的毒副作用，科学家们试图通过改变药物靶向输送的方式，提高药物治疗效果，缓解顺铂的毒副作用。

[0008] 研究显示，脂质体包裹抗癌药物能显著减轻药物的毒副作用，提高药物的治疗指数。目前已上市的抗癌脂质体制剂有：阿霉素脂质体、顺铂脂质体、柔红霉素脂质体、紫杉醇脂质体等。将顺铂制成靶向制剂，提高药物在肿瘤部位的浓度，降低血液及其他组织中药物的浓度，不仅可提高疗效，还可降低其全身毒副作用。脂质体具有类细胞结构，毒性低，无免疫原性，并具有被动靶向性，特别适合于作为抗癌化疗药物的靶向给药。将顺铂开发为脂质体制剂，具有广阔的应用前景，近几十年来一直是医药工作者关注的焦点。自20世纪80年代初，国外已进行了其脂质体研究，动物实验证实，顺铂脂质体制剂能够提高抗肿瘤作用，并显著降低其毒副作用，并且有1期临床试验表明，顺铂脂质体可提高疗效，降低毒性作用(Boulikas,Clinical overview on  lipoplatinTM:a successful liposomal formulation of cisplatin.Expert Opinion on Investigational Drugs,18(8),1197-1218,2009)。虽然目前对铂类药物脂质体的研究较多，但其效果均不是很理想，主要存在包封率低、药物易泄露以及部分顺铂包裹在脂质体内失活或无法释放等问题(Meric,Rixe,Khayat.Metastatic malignant melanoma.Drugs Today(Barc),2003,39(S-C):17.)。因此，提高顺铂脂质体的稳定性及包封率成为实现顺铂脂质体应用于临床的关键。

[0009] 本发明采用特殊配方，及特殊制备工艺制备全新顺铂脂质体。结果表明，该脂质体载药量高，体外稳定性好。动物实验表明，该脂质体药效较游离顺铂强，动物给药后显著延长了存活时间，在肿瘤部位的药物浓度显著高于其他身体器官，安全性好。

发明内容

[0010] 针对现有技术中存在的不足，本发明的目的是提供一种具有较高载药量的顺铂脂质体制剂及其较为简单易行的制备方法，进一步，提供了该制剂的应用。

[0011] 一种顺铂脂质体制剂，由以下原料制备而成：顺铂、蛋黄卵磷脂、胆固醇、油酸、吐温-80、氢氧化钠和水；

[0012] 其中，顺铂、蛋黄卵磷脂、胆固醇、油酸、吐温-80的重量份配比如下：

[0013] 顺铂：蛋黄卵磷脂：胆固醇：油酸：吐温-80＝(20-40)：(40-70)：(8-15)：(10-35)：(4-8)；

[0014] 优选重量份配比为，顺铂：蛋黄卵磷脂：胆固醇：油酸：吐温-80＝(30-40)：(50-68)：(10-12)：(16-31)：(6-7)；

[0015] 最优重量份配比为，

[0016] 顺铂：蛋黄卵磷脂：胆固醇：油酸：吐温-80＝37.5：50：12：31：7或者[0017] 顺铂：蛋黄卵磷脂：胆固醇：油酸：吐温-80＝37.5：68：10：16：6；

[0018] 其中，氢氧化钠用量为油酸摩尔量的60-85％；

[0019] 其中，水的体积与蛋黄卵磷脂、胆固醇、油酸和吐温-80四者总质量的比例为：

[0020] 1mL：(10—40)mg，优选1mL：(15—25)mg，最优1mL：20mg；

[0021] 本发明的另一个目的在于提供了一种将上述配比的原料制备成所述顺铂脂质体制剂的方法，其步骤如下：

[0022] (1)、通过乙醇注入-挤压法制备空白脂质体混悬液；

[0023] 将蛋黄卵磷脂、油酸、胆固醇和吐温-80置于烧杯中，加入无水乙醇在30-45℃水浴中磁力搅拌溶解，将所得乙醇溶液注入已预热到30℃的氢氧化钠水溶液中，在30℃条件下继续搅拌30min后，用脂质体挤出器过孔径为100nm的聚碳酸酯膜1-4次，得到空白脂质体混悬液。

[0024] (2)、将顺铂加入至空白脂质体混悬液中，避光、加热搅拌至充分反应，弃去沉淀，用脂质体挤出器过孔径为100nm聚碳酸酯膜1-4次；

[0025] (3)、除去游离的顺铂，即得顺铂脂质体制剂；

[0026] 所述步骤(2)中加热温度为30～60℃，优选为50℃；反应时间为1～5小时，优选为1-2小时。

[0027] 所述步骤(3)中除去游离顺铂的方法为将步骤(2)所得液体进行如下四种处理之一：

[0028] 置于截留分子量10000-14000的透析袋中透析、过琼脂糖凝胶柱(如CL-4B凝胶柱)、于0～4℃下15000～35000转/分钟离心5～10分钟，或通过50KD-100KD中空纤维过滤器。

[0029] 与现有技术相比，本发明产品及方法的优点和有益效果在于：

[0030] 本发明制得的脂质体粒径可控，可根据需求制备出不同粒径大小并且粒径均一的脂质体，粒径范围在80～120nm之间，Zeta电位在-30至-60mv之间，顺铂脂质体的载药量在8.45～10.71％之间。该方法与现有文献及专利已报道的脂质体不同，该顺铂脂质体具有载药量高、稳定性好及抗癌活性强等特点。

[0031] 本发明获得的顺铂脂质体制剂可用于治疗多种实体瘤，如肺癌、肝癌、结直肠癌、卵巢癌、骨肉瘤、神经母细胞瘤、头颈部、宫颈、食管及泌尿系肿瘤等，本发明制备的顺铂脂质体制剂可经注射途径给药，如静脉、肌肉或皮下注射给药。经实验验证该顺铂脂质体能提高顺铂生物利用度，延长药物在体内的滞留时间，并可使顺铂浓集于癌变器官，不仅可以减少用药剂量，增强疗效，而且可以降低药物的毒副作用，适用于多种肿瘤疾病的治疗。

附图说明

[0032] 图1为实施例3所制备的顺铂脂质体制剂粒径分布图，其分布范围为80～120nm。

[0033] 图2为顺铂对A549细胞生长的抑制作用。

[0034] 图3为实施例3所制备的顺铂脂质体对A549细胞生长的抑制作用。

[0035] 图4为顺铂及实施例3所制备的顺铂脂质体对A549细胞诱导的裸鼠肿瘤抑制作用。

[0036] ◇顺铂脂质体15mg/kg,□顺铂脂质体5mg/kg，△游离顺铂5mg/kg，×生理盐水组。

[0037] 图5为顺铂及实施例3所制备的顺铂脂质体对A549细胞诱导的肿瘤裸鼠存活时间的影响。

[0038] ___顺铂脂质体15mg/kg，顺铂脂质体5mg/kg，_.游离顺铂5mg/kg，[0039] _生理盐水组。

[0040] 图6为顺铂及实施例3所制备的顺铂脂质体对A549细胞诱导的肿瘤裸鼠体重的影响。

[0041] □顺铂脂质体15mg/kg,△顺铂脂质体5mg/kg，◇游离顺铂5mg/kg，○生理盐水组。

具体实施方式

[0042] 以下实施例中原料药顺铂购自昆明贵研药业有限公司，蛋黄卵磷脂为上海东尚生物科技有限公司型号为LIPOID E PC S的产品，其他原料均为常规试剂。

[0043] 以下实施例1-6中，包封率和载药量的计算公式如下：

[0044] 包封率＝(脂质体中包封的药物/脂质体中药物总量)×100％

[0045] 载药量＝[脂质体中药物量/(脂质体中药物+载体总量)]×100％

[0046] 实施例1

[0047] 一种顺铂脂质体制剂，其制备方法步骤如下：

[0048] a)空白脂质体的制备

[0049] 将1000mg的蛋黄卵磷脂、620mg的油酸、240mg的胆固醇和140mg的吐温-80置于10ml烧杯中，加入3ml无水乙醇在40℃水浴中磁力搅拌溶解，将所得乙醇溶液注入已预热到
30℃的100ml氢氧化钠水溶液中(为氢氧化钠加水配置而成，NaOH:油酸＝85:100mol/mol)，在30℃条件下继续搅拌30min后，用脂质体挤出器过孔径为100nm聚碳酸酯膜3次，得到空白脂质体混悬液。

[0050] b)顺铂脂质体制剂的制备

[0051] 将上述空白脂质体混悬液置于摇床中，50℃预热30min；称取450mg顺铂加入到上述空白脂质体混悬液中，50℃、180r/min、避光条件下振荡1h，弃去沉淀，用脂质体挤出器过孔径为100nm聚碳酸酯膜3次；最后用50KD中空纤维过滤器分离顺铂脂质体中游离药，并进行浓缩，得到顺铂脂质体制剂，所得顺铂脂质体制剂的包封率为91.0％，载药量为8.45％。

[0052] 实施例2

[0053] 一种顺铂脂质体制剂，其制备方法步骤如下：

[0054] a)空白脂质体的制备

[0055] 将1000mg的蛋黄卵磷脂、620mg的油酸、240mg的胆固醇和140mg的吐温-80置于10ml烧杯中，加入3ml无水乙醇在40℃水浴中磁力搅拌溶解，将所得乙醇溶液注入已预热到
30℃的100ml氢氧化钠水溶液中(NaOH:油酸＝85:100mol/mol)，在30℃条件下继续搅拌
30min后，用脂质体挤出器过孔径为100nm聚碳酸酯膜3次，得到空白脂质体混悬液。

[0056] b)顺铂脂质体制剂的制备

[0057] 将上述空白脂质体混悬液置于摇床中，50℃预热30min；称取600mg顺铂加入到上述空白脂质体混悬液中，50℃、180r/min、避光条件下振荡1h，弃去沉淀，用脂质体挤出器过孔径为100nm聚碳酸酯膜3次；最后用50KD中空纤维过滤器分离顺铂脂质体中游离药，并进行浓缩，得到顺铂脂质体制剂，所得顺铂脂质体制剂的包封率为91.5％，载药量为8.90％。

[0058] 实施例3

[0059] 一种顺铂脂质体制剂，其制备方法步骤如下：

[0060] a)空白脂质体的制备

[0061] 将1000mg的蛋黄卵磷脂、620mg的油酸、240mg的胆固醇和140mg的吐温-80置于10ml烧杯中，加入3ml无水乙醇在40℃水浴中磁力搅拌溶解，将所得乙醇溶液注入已预热到
30℃的100ml氢氧化钠水溶液中(NaOH:油酸＝85:100mol/mol)，在30℃条件下继续搅拌
30min后，用脂质体挤出器过孔径为100nm聚碳酸酯膜3次，得到空白脂质体混悬液。

[0062] b)顺铂脂质体制剂的制备

[0063] 将上述空白脂质体混悬液置于摇床中，50℃预热30min；称取750mg顺铂加入到上述空白脂质体混悬液中，50℃、180r/min、避光条件下振荡1h，弃去沉淀，用脂质体挤出器过孔径为100nm聚碳酸酯膜3次；最后用50KD中空纤维过滤器分离顺铂脂质体中游离药，并进行浓缩，得到顺铂脂质体制剂，所得顺铂脂质体制剂的包封率为90.9％，载药量为9.14％。

[0064] 实施例4

[0065] 一种顺铂脂质体制剂，其制备方法步骤如下：

[0066] a)空白脂质体的制备

[0067] 将1000mg的蛋黄卵磷脂、620mg的油酸、240mg的胆固醇和140mg的吐温-80置于10ml烧杯中，加入3ml无水乙醇在40℃水浴中磁力搅拌溶解，将所得乙醇溶液注入已预热到
30℃的100ml氢氧化钠水溶液中(NaOH:油酸＝85:100mol/mol)，在30℃条件下继续搅拌
30min后，用脂质体挤出器过孔径为100nm聚碳酸酯膜3次，得到空白脂质体混悬液。

[0068] b)顺铂脂质体制剂的制备

[0069] 将上述空白脂质体混悬液置于摇床中，50℃预热30min；称取750mg顺铂加入到上述空白脂质体混悬液中，50℃、180r/min、避光条件下振荡2h，弃去沉淀，用脂质体挤出器过孔径为100nm聚碳酸酯膜3次；最后用100KD中空纤维过滤器分离顺铂脂质体中游离药，并进行浓缩，得到顺铂脂质体制剂，所得顺铂脂质体制剂的包封率为92.0％，载药量为10.71％。

[0070] 实施例5

[0071] 一种顺铂脂质体制剂，其制备方法步骤如下：

[0072] a)空白脂质体的制备

[0073] 将1360mg的蛋黄卵磷脂、320mg的油酸、200mg的胆固醇和120mg的吐温-80置于10ml烧杯中，加入3ml无水乙醇在40℃水浴中磁力搅拌溶解，将所得乙醇溶液注入已预热到
30℃的100ml氢氧化钠水溶液中(NaOH:油酸＝60:100mol/mol)，在30℃条件下继续搅拌
30min后，用脂质体挤出器过孔径为100nm聚碳酸酯膜3次，得到空白脂质体混悬液，测定pH为8.78。

[0074] b)顺铂脂质体制剂的制备

[0075] 称取750mg顺铂加入到上述空白脂质体混悬液中，50℃、100r/min、避光条件下搅拌载药，载药过程中加0.1M的NaOH溶液调节体系pH在7.5-8.5之间，直至pH不再改变，弃去沉淀，用脂质体挤出器过孔径为100nm聚碳酸酯膜3次；最后用100KD中空纤维过滤器分离顺铂脂质体中游离药，并进行浓缩，得到顺铂脂质体制剂，所得顺铂脂质体制剂的包封率为90.2％，载药量为9.32％。说明在载药过程中较好地控制体系pH在7.5-8.5的范围内，有利于顺铂脂质体进行载药，得到的载药量较高。

[0076] 实施例6

[0077] 一种顺铂脂质体制剂，其制备方法步骤如下：

[0078] a)空白脂质体的制备

[0079] 将1200mg的蛋黄卵磷脂、450mg的油酸、220mg的胆固醇和130mg的吐温-80置于10ml烧杯中，加入3ml无水乙醇在40℃水浴中磁力搅拌溶解，将所得乙醇溶液注入已预热到
30℃的100ml氢氧化钠水溶液中(NaOH:油酸＝70:100mol/mol)，在30℃条件下继续搅拌
30min后，用脂质体挤出器过孔径为100nm聚碳酸酯膜3次，得到空白脂质体混悬液。

[0080] b)顺铂脂质体制剂的制备

[0081] 将上述空白脂质体混悬液置于摇床中，50℃预热30min；称取750mg顺铂加入到上述空白脂质体混悬液中，50℃、180r/min、避光条件下振荡1h，弃去沉淀，用脂质体挤出器过孔径为100nm聚碳酸酯膜3次；最后用50KD中空纤维过滤器分离顺铂脂质体中游离药，并进行浓缩，得到顺铂脂质体制剂，所得顺铂脂质体制剂的包封率为91.2％，载药量为8.20％。

[0082] 用英国马尔文激光粒度仪检测实施例1-实施例6所制备顺铂脂质体制剂的粒径、PDI及Zeta电位，结果表明所制备的顺铂脂质体制剂平均粒径均在80-120nm之间(图1)，PDI均在0.120-0.180之间，Zeta电位均在-30至-60mv之间。

[0083] 实施例7：顺铂脂质体在非小细胞肺癌A549细胞中的体外毒性研究

[0084] 实验所用顺铂脂质体为实施例3制备的顺铂脂质体。

[0085] 活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒(Formazan)并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。

[0086] 实验方法：

[0087] 1.MTT的配制：MTT粉末用PBS溶解，配成5mg/ml的溶液，水浴60℃助溶，过滤除菌，-20℃避光保存；2.细胞的接种(铺板)：收集对数期A549细胞，调整细胞悬液浓度，每孔加入
100μl，铺板使待测细胞密度为1000/孔，边缘孔用无菌PBS填充；细胞于5％CO2，37℃孵育；
3.化合物配制：称取顺铂1mg，溶于1ml生理盐水，37℃水浴助溶，配制1mg/ml的母液，过滤除菌，用生理盐水梯度稀释，配成不同浓度的溶液，将实施例3制备的顺铂脂质体用生理盐水梯度稀释；4.细胞贴壁单层铺满孔底，加入各浓度梯度的药物，每个浓度设6个复孔，同时设置调零孔(培养基、MTT、DMSO)和对照孔(细胞、药物溶解介质、培养液、MTT、DMSO)5％CO2，37℃孵育36小时；5.每孔加入10μl的5mg/ml的MTT溶液，继续培养4小时；6.终止培养，小心吸取孔内培养液；7.每孔加入150μl的DMSO，置于摇床上低速振荡10分钟，使结晶物充分溶解，在酶标仪上检测OD490nm各孔的吸光值。

[0088] 实验结果：

[0089] 顺铂对A549细胞生长抑制IC50值为：4.87μg/ml(图2)；实施例3制备的顺铂脂质体对A549细胞生长抑制IC50值为：47.86μg/ml(此值以脂质体中顺铂含量计算)(图3)。实验结果表明，顺铂脂质体较游离顺铂具有更好的安全性，安全性提高大约10倍左右。

[0090] 实施例8：顺铂脂质体在对A549细胞诱导的裸鼠肿瘤的抑制作用

[0091] 实验所用顺铂脂质体为实施例3制备的顺铂脂质体。

[0092] 实验动物采用Balb/c裸鼠，雄性，(18-25g,由北京维维通利华实验动物中心提供)，华中科技大学实验动物中心，SPF级动物饲养房。动物购入后，经至少一周实应性饲养，自由进食,饮水不限，6只/笼饲养，12/12小时光/暗周期调节，温度23±1℃恒温，湿度50～60％，清洁级动物房饲养，隔天测量大鼠体重一次。从小鼠的腹部皮下接种5×106A549非小细胞肺癌细胞，诱导小鼠皮下移植肺癌肿瘤的发生。实验从肿瘤细胞接种后7天，形成了明显的肿瘤开始，此时移植瘤的体积大约为0.05-0.1cm3。然后小鼠接受实施例3制备的顺铂脂质体或游离顺铂溶液注射，通过尾静脉注射，每隔3天一次。肿瘤的生长将由研究人员使用数字游标卡尺定期测量，测量人员事先不应知悉实验组合，从而达到“盲测”的目的。每次测量包括肿瘤两个方向呈90°夹角的直径。计算肿瘤体积方法为：最大直径×0.52×最短直径的平方。记录每只小鼠的死亡时间(以检查时间为准，如检查时小鼠濒死，记为死亡并处死)。然后根据记录，制作小鼠存活曲线。根据以前的研究结果，肿瘤的生长体积并不服从正态分布，因此肿瘤体积的数据分析使用non-parametric Kruskal–Wallis检验进行，使用Dunn’s post-test分析不同处理间的差异显著性。

[0093] 实验结果表明，游离顺铂(5mg/kg,iv)有效抑制了A549细胞诱导的裸鼠肿瘤生长，顺铂脂质体(5mg/kg,iv)(以脂质体中顺铂含量计算)亦显示良好抑制作用，其作用强度与游离顺铂(5mg/kg,iv)相当。顺铂脂质体(15mg/kg,iv)对A549诱导的肿瘤体积具有更好的疗效，与游离顺铂(5mg/kg,iv)相比较无统计学意义，但作用趋势较为明显(图4)。与游离顺铂(5mg/kg,iv)相比，顺铂脂质体(5and10mg/kg,iv)，可显著延长动物存活时间。游离顺铂(5mg/kg,iv)组，动物平均只能存活22天，而顺铂脂质体(5and15mg/kg,iv)组则分别可存活39天和59天(图5)。存活时间存在非常显著的剂量依存关系。游离顺铂(5mg/kg,iv)以及顺铂脂质体(5mg/kg,iv)，对肿瘤动物体重无显著影响，动物体重状态与生理盐水相当。顺铂脂质体(15mg/kg,iv)则显著增加了动物体重，与游离顺铂相比，存在非常显著统计性差异(图6)。从动物身体状况看，游离顺铂(5mg/kg,iv)对动物影响较大，身体状况很差，比生理盐水组更加恶化。而顺铂脂质体组(5mg and15mg/kg,iv)动物体表状况较好，尤其顺铂脂质体(15mg/kg,iv)组动物，其身体状况与正常动物接近。

[0094] 研究显示，与游离顺铂相比，顺铂脂质体对A549细胞诱导的肿瘤具有较佳的抑制作用，显示较好的抗肿瘤活性。其抗肿瘤药效强度与等剂量游离顺铂相近，或略强(无统计学差异)。但存活时间较游离顺铂有非常显著延长，动物身体状况较游离顺铂具有显著改善。

[0095] 实施例9：顺铂脂质体大鼠药物动力学研究

[0096] 实验所用顺铂脂质体为实施例5制备的顺铂脂质体。

[0097] 取SD大鼠12只，体重200-250g,随机分成2组，每组6只，雌雄各半，进样前禁食12小时。以顺铂注射液(1.0mg/ml)为参比制剂，实施例5所制备的顺铂脂质体为受试制剂，尾静脉注射，剂量为6mg·kg-1(此剂量以脂质体中顺铂含量计算)，分别于0.25、0.5、1、2、4、8、12、24和36小时眼眶取血置于肝素化离心管中，4000r/min离心10min,取血浆105℃油浴蒸干试管内液体，加入0.5ml浓硫酸，孵化2h后，加入0.2-0.5ml双氧水至溶液变澄清，将所有样品定容至3ml，用电感耦合等离子体发射光谱仪(ICP-OES)测定铂元素含量。经药动学WinNonlin软件数据处理，得药动学参数见表1。

[0098] 表1大鼠静脉注射顺铂制剂的非房室药动学参数(n＝6)

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[0100] 结论：实验结果表明，将顺铂制成顺铂脂质体，在体内具有更优的药物动力学特性。与游离顺铂相比，顺铂脂质体具有更高的血液药物峰浓度，生物半衰期延长两倍以上，曲线下面积(AUC)则为游离顺铂的4倍以上。这一结果显示，将顺铂制成顺铂脂质体，药物具有更佳的体内吸收，并在体内存在的时间更长，有利于发挥更佳药效。