一种治疗小儿腹泻的贴剂

摘要

本发明涉及一种治疗小儿腹泻的贴剂，该贴剂包括具有防漏圈的空白膏药贴和涂布于所述防漏圈内的药膏，所述的药膏由有效成分、维生素E和基质组成，其中，所述的有效成分由以下重量百分量的挥发油组成：砂仁挥发油20.5～25.2％，苍术挥发油20.7～25.2％，肉桂挥发油17.0～21.2％，丁香挥发油29.1～35.4％；组成所述有效成分的挥发油由以下方法制得：分别取砂仁、苍术、肉桂和丁香的药材粉末，加入15倍量水浸泡30分钟，在100℃的条件下回流提取；收集挥发油，分别得到砂仁挥发油、苍术挥发油、肉桂挥发油和丁香挥发油。所述的维生素E的用量为有效成分重量的1.5％～3.0％；所述的基质为羊毛脂。该贴剂不仅药味少，而且稳定化效果好，疗效显著。

权利要求

1.一种治疗小儿腹泻的贴剂，该贴剂包括具有防漏圈的空白膏药贴和涂布于所述防漏圈内的药膏，所述的药膏由有效成分、维生素E和基质组成，其中，所述的有效成分由以下重量百分量的挥发油组成：砂仁挥发油20.5～25.2％，苍术挥发油20.7～25.2％，肉桂挥发油17.0～21.2％，丁香挥发油29.1～35.4％；

组成所述有效成分的挥发油由以下方法制得：分别取砂仁、苍术、肉桂和丁香的药材粉末，加入15倍量水浸泡30分钟，在100℃的条件下回流提取；收集挥发油，分别得到砂仁挥发油、苍术挥发油、肉桂挥发油和丁香挥发油；

所述的维生素E的用量为有效成分重量的1.5％～3.0％；

所述的基质为羊毛脂。

2.根据权利要求1所述的一种治疗小儿腹泻的贴剂，其特征在于，所述的有效成分由以下重量百分量的挥发油组成：砂仁挥发油23.43％，苍术挥发油23.85％，肉桂挥发油

20.08％，丁香挥发油32.64％。

3.根据权利要求1或2所述的一种治疗小儿腹泻的贴剂，其特征在于，该贴剂由以下方法制得：(1)取所述的有效成分加入维生素E并搅拌均匀；

(2)取所述的基质，置于100℃水浴锅，水浴至熔融状态，取出放至50℃，按有效成分︰基质＝1︰9的质量比加入步骤(1)所制得的含有维生素E的有效成分混合均匀，制得药膏；

(3)按每贴0.2g的用量趁热将药膏涂布于空白膏药贴的防漏圈内，冷却后，盖上防黏层，即得。

说明书

一种治疗小儿腹泻的贴剂

技术领域

[0001] 本发明涉及本发明涉及含有来自植物的未确定结构的药物制剂，具体涉及含有双子叶植物纲苍术属植物的未确定结构的贴膏剂，该贴膏剂可用于治疗腹泻。

背景技术

[0002] 小儿腹泻是一组由多病原、多因素引起的以大便次数增多和大便性状改变为特点的儿科常见病，6个月--2岁婴幼儿发病率高，是造成小儿营养不良、生长发育障碍和死亡的主要原因之一。据世界卫生组织(WHO)统计，全世界每年大约有10亿5岁以下儿童患腹泻，其中有400万～500万儿童死于腹泻；2009年联合国一项报告指出，全世界每5起儿童死亡个案中就有一人死于腹泻。国内小儿腹泻感染性强，发病率高，主要病原体是肠致病性大肠杆菌和轮状病毒，其次是志贺菌、沙门菌、空肠弯曲菌和某些条件致病菌如场球菌等。卫生部将其列为儿科重点防治的“四病”之一，防控需投入庞大的公共卫生资源。

[0003] 目前西药治疗小儿腹泻多口服吡哌酸、庆大霉素、氨苄青霉素、红霉素，或丁胺卡那霉素等抗生素。抗生素对肠道菌群平衡产生强烈的影响，它们可抑制或杀灭敏感菌，促进非敏感菌过度增殖，增加二重感染机会；肠道正常菌种的数量、位置、比例发生改变，导致菌群失调；还可使葡萄糖吸收减少，双糖酶活力下降而发生腹泻；在大量杀灭细菌时，菌体裂解，产生了高浓度的内毒素，内毒素入血可增加通透性和过氧化损伤，破坏肠道屏障功能，抑制肝脏网状内皮系统的吞噬功能和全身免疫力，从而加重腹泻或使腹泻迁延。病原体的变异及新病原的出现、新型抗生素价格昂贵，亦使抗生素为主的治疗模式面临巨大挑战。

[0004] 中医药防治小儿腹泻积累了丰富的临床经验，其中独特的中药敷脐疗法占有一席之地。它具有应用方便、价格低廉、标本兼治的优势，通过脐部皮肤对药物的吸收作用和药物对穴位的刺激作用，显示了良好的治疗效果。其中具有代表性的药物是丁桂儿脐贴但其治疗小儿腹泻的效果仍不十分理想。此外，肉桂和丁香所含的丁香酚和桂皮醛在光照(4000lx)、高温(60℃～80℃)下极易分解，严重影响了该贴剂的稳定性。课题组前期试验结果表明，伴随贴剂中有效成分的加速降解，其抗腹泻的药效亦有明显下降，因此含有不稳定性有效成分贴剂的稳定化措施，具有重要的成药性价值和意义。

发明内容

[0005] 本发明要解决的技术问题是提供一种治疗小儿腹泻的贴剂，该贴剂不仅药味少，而且稳定性好，疗效显著。

[0006] 本发明解决上述技术问题的方案如下：

[0007] 一种治疗小儿腹泻的贴剂，该贴剂包括具有防漏圈的空白膏药贴和涂布于所述防漏圈内的药膏，所述的药膏由有效成分、维生素E和基质组成，其中，

[0008] 所述的有效成分由以下重量百分量的挥发油组成：砂仁挥发油20.5～25.2％，苍术挥发油20.7～25.2％，肉桂挥发油17.0～21.2％，丁香挥发油29.1～35.4％；组成所述有效成分的挥发油由以下方法制得：分别取砂仁、苍术、肉桂和丁香的药材粉末，加入15倍量水浸泡30分钟，在100℃的条件下回流提取；收集挥发油，分别得到砂仁挥发油、苍术挥发油、肉桂挥发油和丁香挥发油；

[0009] 所述的维生素E的用量为有效成分重量的1.5％～3.0％；

[0010] 所述的基质为羊毛脂。

[0011] 上述药膏中，所述的有效成分的最佳配比为砂仁挥发油23.43％，苍术挥发油23.85％，肉桂挥发油20.08％，丁香挥发油32.64％。

[0012] 本发明所述的贴剂，其中所述的空白膏药贴为市售的空白膏药贴，该空白膏药贴的特点是中部设有防漏圈。上述空白膏药贴具体可以是山东笑康生物科技有限公司、安国市弘盛医疗器械有限公司、高唐县嘉铭医疗器械有限公司或北京天元杏林医药科技有限公司的产品。

[0013] 本发明所述的贴剂可采用常规的方法制得，本发明人推荐的方法如下：

[0014] (1)取所述的有效成分加入维生素E并搅拌均匀；

[0015] (2)取所述的基质，置于100℃水浴锅，水浴至熔融状态，取出放至50℃，按有效成分︰基质＝1︰9的质量比加入步骤(1)所制得的含有维生素E的有效成分混合均匀，制得药膏；

[0016] (3)按每贴0.2g的用量趁热将药膏涂布于空白膏药贴的防漏圈内，冷却后，盖上防黏层，即得。

[0017] 本发明所述的贴剂按中医的配伍原则由砂仁、苍术、肉桂和丁香四味的挥发油组成，具有化湿运脾，温中止泻的效果。与现有的丁桂儿脐贴相比，本发明明显减少了小鼠番泻叶致泻模型的湿便次数和扭体次数，治疗小儿腹泻的总有效率高达92％，显著高于丁桂儿脐贴和思密达的蒙脱石散。此外，本发明所述的有效成分中加入了抗氧化剂维生素E，所得成品在储存过程中，指标成分桂皮醛、丁香酚、苍术素保留率显著提高，稳定化效果好。

具体实施方式

[0018] 下面将通过药效实验、稳定性实验、临床实验来证明本发明所具有的技术效果。

[0019] 一.制剂稳定性与止泻药效影响实验

[0020] 1制剂稳定性对止泻药效影响的探讨

[0021] 1.1实验材料

[0022] 1.1.1中药复方挥发油的制备

[0023] 取砂仁、苍术、肉桂和丁香的药材粉末，分别加入15倍量水浸泡30分钟，在100℃的条件下回流提取；收集挥发油，分别得到砂仁挥发油、苍术挥发油、肉桂挥发油和丁香挥发油。精密称取砂仁挥发油5.6g、苍术挥发油5.7g、肉桂挥发油4.8g、丁香挥发油7.8g，置100ml棕色量瓶中，超声处理5分钟，摇匀，放冷，即得。

[0024] 1.1.2含13.0％处方挥发油膏剂的制备

[0025] 称取羊毛脂8.70g(熔点36-42℃)，置100℃水浴锅，水浴至熔融状态，取出放至适宜温度，加入1.1.1项下处方挥发油1.30g，混合均匀，放冷，即得。

[0026] 1.1.3受热0、10、15、20天处方挥发油膏剂的制备

[0027] 取上述含13.0％处方挥发油膏剂各适量，装填于玻璃瓶中，密封，用纯铝袋包装，即得。在60℃条件下放置20天，于0、10、15、20天取样，测定，计算上述指标成分保留率。

[0028] 1.1.4对照试验组

[0029] 模型对照组：羊毛脂基质

[0030] 1.1.5番泻叶浸出液制备

[0031] 取番泻叶药材粉末10g(20目)，置200ml量瓶中，加10倍量的蒸馏水，90℃浸泡0.5小时，滤过，取续88液，即得。

[0032] 1.1.6动物:

[0033] NIH小鼠由广东省医学实验动物中心提供，SPF级，实验动物质量许可证号：

[0034] SCXK(粤)2008-0020，雄性，体重18～22g。饲养环境：室温23 2℃，相对湿度为75 10％。

[0035] 1.1.7器械试剂：

[0036] 番泻叶(购自广州中医药大学第一附属医院药房)；药用植物油；怡宝纯净水，怡宝纯净水有限公司；精密电子分析天平，FA/JA系列，上海良平仪器仪表有限公司；一次性注射器等，鼠罩40个；鼠盒1个；实验台。

[0037] 1.2实验方法

[0038] 1.2.1不同药物对番泻叶所致小鼠腹泻的影响

[0039] 雄性小鼠60只，随机分成5组，禁食，同时给予蒸馏水喂养，4小时后，称定重量，模型对照组按0.2g/只涂贴空白基质，受热0天处方挥发油膏剂组、受热10天处方挥发油膏剂组、受热15天处方挥发油膏剂组、受热20天含处方挥发油膏剂组按0.2g/只涂贴含药不同的膏剂，两个小时后，模型对照组、受热0天处方挥发油膏剂组、受热10天处方挥发油膏剂组、受热15天处方挥发油膏剂组、受热20天含处方挥发油膏剂组按0.3ml/10g体重灌番泻叶浸出液，小鼠单笼观察，下铺吸水纸作湿粪计数，以湿粪多少表示腹泻程度。及时更换吸水纸或清理湿粪，每小时记录累计湿粪数，计算模型对照组、受热0天处方挥发油膏剂组、受热10天处方挥发油膏剂组、受热15天处方挥发油膏剂组、受热20天含处方挥发油膏剂组各鼠4小时内湿粪总数。以各组湿粪数均数进行组间t检验，结果如下。

[0040] 1.2.2统计学处理

[0041] 实验数据以χ±s表示，采用t检验，使用SPSS17.0软件统计包进行统计学分析，*P<0.05表示差异显著；**P<0.01表示差异较显著；***P<0.001表示差异极显著。

[0042] 1.2.3实验结果

[0043] 表1各组与模型对照组比较结果(n＝12)

[0044]

[0045] *注：与模型对照组比较：*P<0.05；**P<0.01；***P<0.001；

[0046] 与受热0天处方挥发油膏剂组比较：+表示P<0.0；++表示P<0.01；+++表示P<0.001。

[0047] 表2 60℃受热10、15、20天含油贴膏中各指标成分的综合保留率

[0048]

[0049] 注：综合保留率＝桂皮醛保留率*1.5/6+丁香酚保留率*2.5/6+苍术素保留率*2/6[0050] 1.3实验讨论

[0051] 结果显示，与模型对照组比较，受热0天处方挥发油膏剂组对番泻叶所致小鼠腹泻有明显的抑制作用；而分别受热10、15、20天处方挥发油膏剂组对番泻叶所致小鼠腹泻均没有明显的抑制作用。结果表明伴随加速破坏周期的延长，有效成分降解程度增大，止泻药效呈降低趋势。

[0052] 2制剂稳定性对止泻药效影响的验证实验

[0053] 2.1实验材料

[0054] 2.1.1含13％处方挥发油膏剂的制备

[0055] 同1.1.2。

[0056] 2.1.2受热0、10、15天处方挥发油膏剂的制备

[0057] 同1.1.3。

[0058] 2.1.3对照试验组

[0059] 同1.1.4。

[0060] 2.1.4番泻叶浸出液制备

[0061] 同1.1.5。

[0062] 2.1.5动物:

[0063] 同1.1.6。

[0064] 2.1.6器械试剂：

[0065] 同1.1.7。

[0066] 2.2实验方法

[0067] 2.2.1不同药物对番泻叶所致小鼠腹泻的影响

[0068] 雄性小鼠40只，随机分成4组，禁食，同时给予蒸馏水喂养，4小时后，称定重量，模型对照组按0.2g/只涂贴空白基质，受热0天处方挥发油膏剂组、受热10天处方挥发油膏剂组、受热15天处方挥发油膏剂组按0.2g/只涂贴含药不同的膏剂，两个小时后，模型对照组、受热0天处方挥发油膏剂组、受热10天处方挥发油膏剂组、受热15天处方挥发油膏剂组按0.3ml/10g体重灌番泻叶浸出液，小鼠单笼观察，下铺吸水纸作湿粪计数，以湿粪多少表示腹泻程度。及时更换吸水纸或清理湿粪，每小时记录累计湿粪数，计算模型对照组、受热0天处方挥发油膏剂组、受热10天处方挥发油膏剂组、受热15天处方挥发油膏剂组各鼠4小时内湿粪总数。以各组湿粪数均数进行组间t检验，结果如下。

[0069] 2.2.2统计学处理

[0070] 同前。

[0071] 2.2.3实验结果

[0072] 表3各组与空白对照组比较结果(n＝10)

[0073]

[0074] *注：与模型对照组比较：*P<0.05；**P<0.01；***P<0.001；

[0075] 与受热0天处方挥发油膏剂组比较：+表示P<0.0；++表示P<0.01；+++表示P<0.001。

[0076] 2.4实验讨论

[0077] 结果显示，与模型对照组比较，受热0天处方挥发油膏剂组对番泻叶所致小鼠腹泻有明显的抑制作用；而分别受热10、15天处方挥发油膏剂组对番泻叶所致小鼠腹泻均没有明显的抑制作用。以上验证试验表明稳定性与药效关联结果的重复性，提示本处方或类同制剂的稳定化措施具有药理意义或临床意义。

[0078] 二、效果实验

[0079] (一)小鼠番泻叶致泻模型

[0080] 1、实验动物及分组

[0081] 80只NIH小鼠，由广东省医学实验动物中心提供，SPF级，实验动物质量许可证号：SCXK(粤)2008-0020，雄性，体重18～22g。饲养环境：室温23 2℃，相对湿度为75 10％。80只小鼠随机分成实验组1、实验组2、实验组3、实验组4、实验组5、实验组6、对照组和空白组，每组10只。

[0082] 2、实验方法

[0083] 给药前各组动物禁食，同时给予蒸馏水喂养，4小时后，称定重量并给药。其中，空白组按0.2g/只在NIH小鼠的腹部涂抹羊毛脂，并控制涂抹面积为3㎝2；对照组为亚宝药业集团股份有限公司生产的丁桂儿脐贴；实验组1、实验组2、实验组3、实验组4、实验组5、实验组6按0.2g/只依次在NIH小鼠的腹部涂抹下述实施例2、3、4、5、6、7所述贴剂的药膏并控制2
涂抹面积为3㎝ 。施药两个小时后，各组均按小鼠的体重给以番泻叶浸出液0.3mL/10g灌胃。灌胃的小鼠单笼观察，下铺吸水纸作湿粪计数，每隔一小时记录累计湿粪数并及时更换吸水纸，以湿粪多少表示腹泻程度，连续观察4小时。

[0084] 上述番泻叶浸出液的制备方法如下：取番泻叶药材粉末10g(20目)，置200mL量瓶中，加10倍量的蒸馏水，90℃浸泡0.5小时，滤过，取续滤液，即得。

[0085] 将记录的实验数据以±s表示，采用t检验，使用SPSS17.0软件统计包进行统计学分析，实验结果见下表1。

[0086] 表4各组与模型组止泻效果比较(n＝10)

[0087]

[0088] *注，与空白组比较，P<0.05表示差异显著；**P<0.01表示差异较显著；***P<0.001表示差异极显著

[0089] 3、结论

[0090] 由表1可见，实验组1～6的效果均优于对照组。

[0091] (二)扭体镇痛实验

[0092] 1、实验动物及分组

[0093] 同上。

[0094] 2、实验方法

[0095] 给药前各组动物禁食，同时给予蒸馏水喂养，10小时后，称定重量并给药。其中，空白组按0.2g/只在NIH小鼠的腹部涂抹羊毛脂，并控制涂抹面积为3㎝2；对照组为亚宝药业集团股份有限公司生产的丁桂儿脐贴；实验组1、实验组2、实验组3、实验组4、实验组5、实验组6按0.2g/只依次在NIH小鼠的腹部涂抹下述实施例2、3、4、5、6、7所述脐贴的药膏并控制2
涂抹面积为3㎝ 。施药两个小时后，各鼠均腹腔注射0.5％醋酸0.2mL/只，观察15min内各组小鼠出现扭体反应(腹部内凹、伸展后肢、臀部抬高)的次数和每只小鼠出现扭体的时间，计算各药物的镇痛百分率。

[0096] 镇痛百分率(％)＝(空白组扭体反应次数-实验组组扭体反应次数)/空白组扭体反应鼠数×100％。

[0097] 将记录的实验数据以±s表示，采用t检验，使用SPSS17.0软件统计包进行统计学分析，实验结果见下表5。

[0098] 表5各组与模型组镇痛试验比较(n＝10)

[0099]

[0100] *注，与空白组比较，P<0.05表示差异显著；**P<0.01表示差异较显著；***P<0.001表示差异极显著

[0101] 3、结论

[0102] 由表5可见，实验组1～6的镇痛百分率均可达到60％以上；从扭体次数来看，实验组1～6都与空白组有极显著差异(P<0.05)，同时与对照组有显著差异(P<0.05)；从平均潜伏时间来看，实验组1～6扭体动物的平均潜伏时间，比空白组延长了近2倍，且均大于对照组。因此，本发明专利制备的贴剂对由醋酸引起的疼痛具有显著的抑制效果。

[0103] 三、皮肤刺激性及过敏性实验

[0104] 按照《中药、天然药物局部刺激性和溶血性研究技术指导原则》规范，探讨含受试药物的5％、12.5％、20％中药复方挥发油贴膏对家兔完整皮肤的刺激性；考察12.5％中药复方挥发油贴膏对豚鼠的过敏性。

[0105] 1实验材料

[0106] 1.1试验药物

[0107] 1.1.1受试药物5％(g/g)挥发油膏剂制备

[0108] 称取羊毛脂9.0g(熔点36-42℃)，置100℃水浴锅，水浴至熔融状态，取出放至适宜温度(50℃)，加入实施例1的挥发油0.47g，混合均匀，放冷，即得。(含油浓度为0.05g/g)。

[0109] 1.1.2受试药物12.5％(g/g)挥发油膏剂制备

[0110] 称取羊毛脂9.0g(熔点36-42℃)，置100℃水浴锅，水浴至熔融状态，取出放至适宜温度(50℃)，加入实施例1的挥发油1.29g，混合均匀，放冷，即得。(含油浓度为0.125g/g)。

[0111] 1.1.3受试药物20％(g/g)挥发油膏剂制备

[0112] 称取羊毛脂9.0g(熔点36-42℃)，置100℃水浴锅，水浴至熔融状态，取出放至适宜温度(50℃)，加入实施例1的挥发油2.25g，混合均匀，放冷，即得。(含油浓度为0.20g/g)。

[0113] 1.1.4对照试验组

[0114] 2,4-二硝基氯代苯。

[0115] 1.1.5空白对照组

[0116] 羊毛脂。

[0117] 1.2实验动物

[0118] 豚鼠，体质量(220±30)g，雌雄各半，广州中医药大学动物实验中心提供SPF级动物；5～8个月龄健康雄性新西兰家兔，体重2.0～2.5Kg，由广州中医药大学动物实验中心提供。

[0119] 1.3试验仪器

[0120] 宠物电推剪，电动剃须刀，手术刀。

[0121] 1.4实验环境

[0122] 广州中医药大学动物实验环境设施SPF级动物房。

[0123] 2实验方法

[0124] 单次及多次给药对家兔完整皮肤的刺激性实验：按照《中药、天然药物局部刺激性和溶血性研究技术指导原则》规范开展。

[0125] 豚鼠过敏性实验：选用体重在220±3g豚鼠9只，随机均分为3组(n＝3)，分别为受试药物组、阳性对照组、空白对照组。试验前24小时，将其背部对称两侧脱毛，脱毛面积每侧为3cm×3cm，并作如下试验：

[0126] (1)致敏接触：将上述三组动物左侧脱毛区分别贴涂白羊毛脂0.2g、含12.5％油膏剂0.2g和阳性致敏物(1％的2,4-二硝基氯代苯)0.2mL。接触时间持续6小时，并于给药后7、14天重复上述给药过程。其中阳性对照组给药后用一层消毒油纸和两层消毒纱布覆盖，胶布固定。

[0127] (2)激发接触：于致敏接触阶段末次给药后14天重复上述给药过程，给药部位为右侧脱毛区，其中阳性致敏物浓度为1％的2,4-二硝基氯代苯0.2mL。激发6小时后洗净药物，即刻观察，然后于24，48，72小时再次观察皮肤过敏反应，根据《中药、天然药物免疫毒性(过敏性、光变态反应)研究的技术指导原则》的评分标准进行评价。

[0128] 过敏反应平均值＝(红斑形成总分+水肿形成总分)/合计动物数

[0129] 致敏发生率＝出现红斑、水肿或全身性过敏反应的动物例数/合计动物数[0130] *注：出现红斑、水肿或全身性过敏反应的动物例数,应不论程度轻重。

[0131] (3)皮肤过敏反应程度评分标准如下表6和表7所示：

[0132] 表6皮肤过敏反应程度的评分标准

[0133]

[0134] 表7皮肤致敏性评价标准

[0135]

[0136] 3实验结果

[0137] 3.1单次给药家兔完整皮肤刺激性试验

[0138] 表8完整皮肤单次给药试验皮肤反应积分值

[0139]

[0140] 由表8可见，含挥发油5％、12.5％、20％贴膏单次给药在去除药物后1、24、48和72小时均未见家兔背部完整皮肤受试区出现红斑、水肿等现象。实验结果提示，在单次给药家兔完整皮肤刺激性试验中，受试药物均未见皮肤刺激性现象。

[0141] 3.2多次给药家兔完整皮肤刺激性试验

[0142] 表9完整皮肤多次给药试验皮肤反应平均积分值及刺激强度

[0143]

[0144] 由表9可见，完整皮肤多次给药试验中，空白基质及含挥发油5％、12.5％的贴膏未见刺激性，含挥发油20％贴膏显示可恢复的轻微刺激性。

[0145] 3.3含挥发油12.5％贴膏的皮肤过敏性

[0146] 按照《中药、天然药物免疫毒性(过敏性、光变态反应)研究的技术指导原则》规范，探讨含挥发油12.5％贴膏对豚鼠的皮肤过敏性。实验结果如下：

[0147] 表10受试药物的皮肤过敏性评价

[0148]

[0149] 表11受试药物的皮肤过敏性评价

[0150]

[0151] 结果显示，在试验过程中，各组动物均未出现哮喘、站立不稳或休克等严重全身性过敏反应。其中阳性对照组在0h、24h、48h和72h致敏反应平均分值为1.3、3.7、5和6，致敏率为100％。空白对照组和含12.5％挥发油膏剂组致敏反应平均分均值皆为0，致敏率为0％，提示含挥发油12.5％贴膏对皮肤未见致敏性。

[0152] 结论

[0153] 本实验选取实施例1的挥发油，探讨含受试药物的5％、12.5％、20％中药复方挥发油贴膏对家兔完整皮肤的刺激性及过敏性。结果表明，空白基质及含挥发油5％、12.5％的贴膏未见刺激性，含挥发油20％贴膏显示可恢复的轻微刺激性。空白对照组和含12.5％挥发油膏剂组致敏反应平均分均值皆为0，致敏率为0％，对皮肤无致敏性。动物刺激性与过敏性实验表明，本发明受试药物未见刺激性和过敏性反应。

[0154] 四、临床效果考察

[0155] 1一般资料

[0156] 本组150例患儿均来自2012～2013年到妇幼保健院就诊的患儿。严格按照“中国腹泻病诊断治疗方案”的诊断标准选择病例，其中男85例，女65例，年龄6～40个月，平均22个月，病程2～30d，

[0157] 上述病例的临床表现为大便次数多，每日5～15次，大便均呈蛋花水样或黄色稀水样，多伴轻度脱水、发热，大便常规检查未见脓细胞、吞噬细胞，且红细胞、白细胞在每视野15个以下，血常规均未见异常。将患者随机分为对照组1、对照组2和治疗组，每组50例。对照组1采取传统的治疗方法，口服思密达的蒙脱石散；对照组2采用丁桂儿脐贴贴敷患儿神阙穴；治疗组选用含下述实施例1的贴剂贴敷患儿神厥穴。两组患儿在年龄、性别、体重、病情、病程等方面无显著性差异(P>0.05)，具有可比性。

[0158] 2治疗方法

[0159] 对照组1仅进行常规治疗，即调整饮食，禁食6～12h，口服思密达的蒙脱石散。轻度脱水患者口服补液盐(ORS)，中重度脱水者静脉补液，纠正脱水和电解质紊乱。对照组2采用丁桂儿脐贴贴敷患儿神阙穴，一次1贴，24小时换药一次。治疗组采用下述实施例1的脐贴，每日1次，一次1贴，24小时换药一次。三组均以3d为一个疗程，一个疗程后进行疗效评价。贴敷期间，若出现使用不适情况如脐部发红、破溃、起泡则禁用；治疗期间忌食辛辣、海鲜、羊肉、蘑菇等发物。

[0160] 3疗效评价

[0161] 本实验采用以下标准，显效：经过一个疗程的治疗，患儿每日大便次数少于两次，大便的性状以及便常规检查趋于正常，临床症状完全消失；有效：经过一个疗程的治疗，患儿每日大便次数少于四次，大便的性状以及便常规检查有所改善，临床症状基本消失；无效：经过一个疗程的治疗，患儿临床症状没有任何改善甚至出现加重趋势。

[0162] 4统计学处理

[0163] 采用统计学软件SPSS 17.0建立数据库，通过t检验和2检验进行统计学分析，(P<0.05)表示差异有显著性意义。

[0164] 5结果

[0165] 两组临床疗效比较见表12，治疗组总有效率为92％(46/50)，对照组1总有效率为76％(38/50)，对照组2总有效率为84％(42/50)且给药期间患者均没有出现使用不适情况，两组比较差异有统计学意义(P<0.05)，治疗组疗效优于对照组。结果表明，本发明所述脐贴具有显著的临床疗效。

[0166] 表12两组患儿临床治疗效果比较[例(％)]

[0167]

[0168] *注：与对照组比较：*表示P<0.05；总有效率＝(显效例数+有效例数)/总例数×l00％。

[0169] 五、抗氧化剂对中药复方挥发油受热稳定性的影响研究

[0170] 1.抗氧化剂种类筛选研究

[0171] 1.1实验材料

[0172] 1.1.1中药复方挥发油的制备

[0173] 取砂仁、苍术、肉桂和丁香的药材粉末，分别加入15倍量水浸泡30分钟，在100℃的条件下回流提取；收集挥发油，分别得到砂仁挥发油、苍术挥发油、肉桂挥发油和丁香挥发油。精密称取砂仁挥发油5.6g、苍术挥发油5.7g、肉桂挥发油4.8g、丁香挥发油7.8g，置100ml棕色量瓶中，超声处理5分钟，摇匀，放冷，即得。

[0174] 1.1.2含0.2％VE贴膏的制备

[0175] 取1.1.1项下处方挥发油备用，另称取羊毛脂45.0g(熔点36-42℃)，置60℃水浴锅，水浴至熔融状态，取出放至适宜温度，挥发油约5.0g中加入VE油0.2g(VE含量0.5mg/mg)，与基质混合均匀，放冷。取含VE组膏剂各1.5g，填于空白贴片中，密封，用纯铝袋包装，即得。(贴膏含药浓度为0.1g/g，VE用量为挥发油重量的2％)

[0176] 1.1.3含0.2％BHT贴膏的制备

[0177] 取1.1.1项下处方挥发油备用，另称取羊毛脂45.0g(熔点36-42℃)，置60℃水浴锅，水浴至熔融状态，取出放至适宜温度，挥发油约5.0g中加入BHT0.1g(2,6-二叔丁基对甲酚)，与基质混合均匀，放冷。取含VE组膏剂各1.5g，填于空白贴片中，密封，用纯铝袋包装，即得。(含药浓度为0.1g/g，BHT用量为挥发油重量的2％)

[0178] 1.1.4含0.2％BHA贴膏的制备

[0179] 取1.1.1项下处方挥发油备用，另称取羊毛脂45g(熔点36-42℃)，置60℃水浴锅，水浴至熔融状态，取出放至适宜温度，挥发油约5.0g中加入BHA0.1g(叔丁基对羟基茴香醚)，与基质混合均匀，放冷。取含VE组膏剂各1.5g，填于空白贴片中，密封，用纯铝袋包装，即得。(含药浓度为0.1g/g，BHA用量为挥发油重量的2％)

[0180] 1.2方法与结果

[0181] 1.2.1试验方法

[0182] 将上述样品置密封洁净容器中，分别在40℃、60℃条件下放置5天，于0、3、5天取样，测定，计算上述指标成分保留率。

[0183] 1.2.2供试品溶液制备及测定

[0184] 称取贴膏约0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入甲醇25ml，称定重量，超声45min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。吸取上述各供试品溶液适量，微孔滤膜滤过，取续滤液，液相色谱仪测定，结果见下表。

[0185] 表13未加抗氧化剂贴膏的高温试验结果

[0186]

[0187]

[0188] 表14含0.2％VE贴膏的高温试验结果

[0189]

[0190] 表15含0.2％BHT贴膏的高温试验结果

[0191]

[0192] 表16含0.2％BHA贴膏的高温试验结果

[0193]

[0194] 1.3实验讨论

[0195] 结果显示，与未加入抗氧化剂的贴膏比较，40℃受热5天的含VE贴膏中桂皮醛、丁香酚、苍术素保留率略高于含BHT贴膏及含BHA贴膏；在更高的温度60℃受热5天的含VE贴膏中桂皮醛、丁香酚、苍术素保留显著提高，且显著高于含BHT贴膏及含BHA贴膏，在该条件下VE对贴膏中指标成分的保护效果显著优于BHT及含BHA。后续试验进一步考察不同用量VE对贴膏中指标成分的保护效果。

[0196] 2抗氧化剂VE用量考察

[0197] 2.1实验材料

[0198] 2.1.1含0.01％VE贴膏的制备

[0199] 取1.1.1项下处方挥发油备用，另称取羊毛脂45.0g(熔点36-42℃)，置60℃水浴锅，水浴至熔融状态，取出放至适宜温度，挥发油约5.0g中加入VE油0.01g(VE含量0.5mg/mg)，与基质混合均匀，放冷。取含VE组膏剂各1.5g，填于空白贴片中，密封，用纯铝袋包装，即得。(含药浓度为0.1g/g，VE用量为挥发油重量的0.1％)

[0200] 2.1.2含0.05％VE贴膏的制备

[0201] 同含0.01％VE贴膏的制备，挥发油约5.0g中加入VE油0.05g(VE含量0.5mg/mg)，即得。(含药浓度为0.1g/g，VE用量为挥发油重量的0.5％)

[0202] 2.1.3含0.10％VE贴膏的制备

[0203] 同含0.01％VE贴膏的制备，挥发油约5.0g中加入VE油0.10g(VE含量0.5mg/mg)，即得。(含药浓度为0.1g/g，VE用量为挥发油重量的1％)

[0204] 2.1.4含0.15％VE贴膏的制备

[0205] 同含0.01％VE贴膏的制备，挥发油约5.0g中加入VE油0.15g(VE含量0.5mg/mg)，即得。(含药浓度为0.1g/g，VE用量为挥发油重量的1.5％)

[0206] 2.1.5含0.3％VE贴膏的制备

[0207] 同含0.1％VE贴膏的制备，挥发油约5.0g中加入VE油0.3g(VE含量0.5mg/mg)，即得。(含药浓度为0.1g/g，VE用量为挥发油重量的3％)

[0208] 2.1.6含0.6％VE贴膏的制备

[0209] 同含0.1％VE贴膏的制备，挥发油约5.0g中加入VE油0.6g(VE含量0.5mg/mg)，即得。(含药浓度为0.1g/g，VE用量为挥发油重量的6％)

[0210] 2.1.7含1％VE贴膏的制备

[0211] 同含0.1％VE贴膏的制备，挥发油约5.0g中加入VE油1.0g(VE含量0.5mg/mg)，即得。(含药浓度为0.1g/g，VE用量为挥发油重量的10％)

[0212] 2.1.8含1.5％VE贴膏的制备

[0213] 同含0.1％VE贴膏的制备，挥发油约5.0g中加入VE油1.5g(VE含量0.5mg/mg)，即得。(含药浓度为0.1g/g，VE用量为挥发油重量的15％)

[0214] 2.1.9空白保护贴膏的制备

[0215] 取1.1.1项下处方挥发油备用，另称取羊毛脂45.0g(熔点36-42℃)，置60℃水浴锅，水浴至熔融状态，取出放至适宜温度，挥发油约5.0g加入基质中，混合均匀，放冷。取不含抗氧化剂膏剂各1.5g，填于空白贴片中，密封，用纯铝袋包装，即得。(含药浓度为0.1g/g)[0216] 2.1.10丁桂儿脐贴试药

[0217] 20贴，批号：121003

[0218] 2.2方法与结果

[0219] 2.2.1试验方法

[0220] 将上述样品置密封洁净容器中，在60℃条件下放置5天，于0、3、5天取样，测定，计算上述指标成分保留率。

[0221] 2.2.2供试品溶液制备及测定

[0222] 称取贴膏0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入甲醇25ml，称定重量，超声45min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。吸取上述各供试品溶液适量，微孔滤膜滤过，取续滤液，液相色谱仪测定，结果见下表。

[0223] 表17抗氧化剂VE不同用量对桂皮醛的受热保护效果的比较

[0224]

[0225]

[0226] 表18抗氧化剂VE不同用量对丁香酚的受热保护效果的比较

[0227]

[0228] 表19抗氧化剂VE不同用量对苍术素的受热保护效果的比较

[0229]

[0230] 结果显示，与不含VE的贴膏比较，60℃受热3、5天的不同VE含量贴膏中桂皮醛、丁香酚、苍术素保留较佳，但VE对贴膏中不同成分的保护效果受到VE含量的显著影响，过高或过低均不利于VE最佳保护效果的发挥，其中桂皮醛对应贴膏中VE用量为0.15％～0.3％，丁香酚对应贴膏中VE用量为0.1％～2.0％，苍术素对应贴膏中VE用量为0.10％～1.5％，而60℃受热10天的试验结果显示，含0.15％～0.3％VE贴膏中桂皮醛、丁香酚、苍术素保留优于其它VE用量贴膏。结果提示抗氧化剂VE适宜用量为贴膏的0.15％～0.3％(相当于加入挥发油重量的1.5％～3.0％)，贴膏中桂皮醛、丁香酚稳定性显著优于丁桂儿脐贴。

[0231] 3.制剂稳定化措施的验证：含0.2％VE、0.3％VE贴剂的加速稳定性试验[0232] 本研究以桂皮醛、丁香酚、苍术素、乙酸龙脑酯的保留率为指标，采用模拟上市包装即纯铝袋密封包装，考察含有0.2％、0.3％VE贴剂的加速稳定性。

[0233] 3.1实验材料

[0234] 3.1.1含0.2％VE贴膏的制备

[0235] 取1.1.1项下处方挥发油备用，另称取羊毛脂135.0g(熔点36-42℃)，置60℃水浴锅，水浴至熔融状态，取出放至适宜温度，挥发油约15.0g中加入VE粉末0.3g，与基质混合均匀，放冷。取含VE组膏剂各1.5g，填于空白贴片中，密封，用纯铝袋包装，即得。(含药浓度为0.1g/g，VE用量为挥发油重量的2％)

[0236] 3.1.2含0.3％VE贴膏的制备

[0237] 同含0.2％VE贴膏的制备，挥发油约15.0g中加入VE粉末0.45g，即得。(含药浓度为0.1g/g，VE用量为挥发油重量的3％)

[0238] 3.1.3空白保护贴膏的制备

[0239] 同含0.2％VE贴膏的制备，挥发油约15.0g中未加入VE，即得。(含药浓度为0.1g/g，含VE0％)

[0240] 3.2方法与结果

[0241] 3.2.1试验方法

[0242] 将上述样品置密封洁净容器中，在30℃条件下放置6个月，在0、1、2、3、6月取样，测定，计算上述指标成分保留率。

[0243] 3.2.2供试品溶液制备及测定

[0244] 称取贴膏约0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入甲醇25ml，称定重量，超声45min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。吸取上述各供试品溶液适量，微孔滤膜滤过，取续滤液，液相色谱仪测定，结果见下表。

[0245] 3.3实验结果及讨论：

[0246] 表20加速稳定性试验1、2、3、6月保留率结果(桂皮醛、丁香酚、苍术素)[0247]

[0248] 表21加速稳定性试验1、2、3、6月保留率结果(乙酸龙脑酯)

[0249]

[0250] 通过高效液相色谱法测定不同时间点制剂中桂皮醛、丁香酚、苍术素含量，结果显示经过加速试验6个月后，空白保护贴剂中桂皮醛、丁香酚、苍术素保留率分别为49.9％、73.6％、60.1％；含0.3％VE贴剂中桂皮醛、丁香酚、苍术素保留率分别为68.3％、89.9％、
78.9％，有明显的提高。通过毛细管气相色谱法测定不同时间点制剂中乙酸龙脑酯的含量，结果显示经过加速试验6月后，空白保护贴剂中乙酸龙脑酯为88.1％，含0.2％VE、0.3％VE贴剂中其保留率分别为95.3％、92.5％，提示维生素E对贴剂中乙酸龙脑酯保护作用显著。
通过加速稳定性试验评价四个指标成分的保留率，综合而言，贴膏中0.15％～0.30％VE用量(相当于加入挥发油重量的1.5％～3.0％)是适宜的。

具体实施方式

[0251] 实施例1(挥发油的制备例)

[0252] 称取砂仁、苍术、肉桂和丁香药的药材粉末(中粉)各10kg，分别加入15倍量水浸泡30分钟，在100℃的条件下回流提取；收集挥发油，分别得到砂仁挥发油373.6g、苍术挥发油
135g、肉桂挥发油212.12g和丁香挥发油520g。所制得的四种挥发油分别密封避光保存，供下述实施例2～7使用。

[0253] 实施例2

[0254] 1、处方：砂仁挥发油5.6g、苍术挥发油5.7g、肉桂挥发油4.8g、丁香挥发油7.8g。本例中四种挥发油的总重量是23.9g。

[0255] 2、制备药膏：取四种挥发油加入0.359g的维生素E(维生素E用量为挥发油重量的1.5％)混合均匀；称取羊毛脂215.1g(熔点36-42℃)，置于100℃水浴锅，水浴至熔融状态，取出放至50℃，加入所制备的含有维生素E的四种挥发油混合均匀，即得药膏。

[0256] 3、制备贴剂：将药膏按0.2g/贴趁热涂布于空白膏药贴的防漏圈内，冷却后，再盖上防黏层，用纯铝袋密封避光包装，即得。其中，所述的空白膏药贴购于山东笑康生物科技有限公司，其规格如下：空贴面积为7cm×7cm，防漏圈的内径为3.0cm，深度为0.2cm。

[0257] 实施例3

[0258] 2、处方：砂仁挥发油5.9g、苍术挥发油5.2g、肉桂挥发油4.6g、丁香挥发油8.0g。本例中四种挥发油的总重量是23.7g。

[0259] 2、制备药膏：取四种挥发油加入0.427g的维生素E(维生素E用量为挥发油重量的1.8％)混合均匀；称取羊毛脂213.3g(熔点36-42℃)，置于100℃水浴锅，水浴至熔融状态，取出放至50℃，加入所制备的含有维生素E的四种挥发油混合均匀，即得药膏。

[0260] 3、制备贴剂：将药膏按0.2g/贴趁热涂布于空白膏药贴的防漏圈内，冷却后，再盖上防黏层，用纯铝袋密封避光包装，即得。其中，所述的空白膏药贴购于山东笑康生物科技有限公司，其规格如下：空贴面积为7cm×7cm，防漏圈的内径为3.0cm，深度为0.2cm。

[0261] 实施例4

[0262] 1、处方：砂仁挥发油5.1g、苍术挥发油5.5g、肉桂挥发油4.8g、丁香挥发油8.4g。本例中四种挥发油的总重量是23.8g。

[0263] 2、制备药膏：取四种挥发油加入0.476g的维生素E(维生素E用量为挥发油重量的2％)混合均匀；称取羊毛脂214.2g(熔点36-42℃)，置于100℃水浴锅，水浴至熔融状态，取出放至50℃，加入所制备的含有维生素E的四种挥发油混合均匀，即得药膏。

[0264] 3、制备贴剂：将药膏按0.2g/贴趁热涂布于空白膏药贴的防漏圈内，冷却后，再盖上防黏层，用纯铝袋密封避光包装，即得。其中，所述的空白膏药贴购于山东笑康生物科技有限公司，其规格如下：空贴面积为7cm×7cm，防漏圈的内径为3.0cm，深度为0.2cm。

[0265] 实施例5

[0266] 1、处方：砂仁挥发油5.8g、苍术挥发油5.9g、肉桂挥发油4.2g、丁香挥发油7.7g。本例中四种挥发油的总重量是23.6g。

[0267] 2、制备药膏：取四种挥发油加入0.543g的维生素E(维生素E用量为挥发油重量的2.3％)混合均匀；称取羊毛脂212.4g(熔点36-42℃)，置于100℃水浴锅，水浴至熔融状态，取出放至50℃，加入所制备的含有维生素E的四种挥发油混合均匀，即得药膏。

[0268] 3、制备贴剂：将药膏按0.2g/贴趁热涂布于空白膏药贴的防漏圈内，冷却后，再盖上防黏层，用纯铝袋密封避光包装，即得。其中，所述的空白膏药贴购于山东笑康生物科技有限公司，其规格如下：空贴面积为7cm×7cm，防漏圈的内径为3.0cm，深度为0.2cm。

[0269] 实施例6

[0270] 1、处方：砂仁挥发油5.5g、苍术挥发油5.2g、肉桂挥发油5.0g、丁香挥发油8.1g。本例中四种挥发油的总重量是23.8g。

[0271] 2、制备药膏：取四种挥发油加入0.595g的维生素E(维生素E用量为挥发油重量的2.5％)混合均匀；称取羊毛脂214.2g(熔点36-42℃)，置于100℃水浴锅，水浴至熔融状态，取出放至50℃，加入所制备的含有维生素E的四种挥发油混合均匀，即得药膏。

[0272] 3、制备贴剂：将药膏按0.2g/贴趁热涂布于空白膏药贴的防漏圈内，冷却后，再盖上防黏层，用纯铝袋密封避光包装，即得。其中，所述的空白膏药贴购于山东笑康生物科技有限公司，其规格如下：空贴面积为7cm×7cm，防漏圈的内径为3.0cm，深度为0.2cm。

[0273] 实施例7

[0274] 1、处方：砂仁挥发油5.9g、苍术挥发油5.8g、肉桂挥发油4.6g、丁香挥发油7.4g。本例中四种挥发油的总重量是23.7g。

[0275] 2、制备药膏：取四种挥发油加入0.711g的维生素E(维生素E用量为挥发油重量的3％)混合均匀；称取羊毛脂213.3g(熔点36-42℃)，置于100℃水浴锅，水浴至熔融状态，取出放至50℃，加入所制备的含有维生素E的四种挥发油混合均匀，即得药膏。

[0276] 3、制备贴剂：将药膏按0.2g/贴趁热涂布于空白膏药贴的防漏圈内，冷却后，再盖上防黏层，用纯铝袋密封避光包装，即得。其中，所述的空白膏药贴购于山东笑康生物科技有限公司，其规格如下：空贴面积为7cm×7cm，防漏圈的内径为3.0cm，深度为0.2cm。