蒽贝素或蒽贝素类化合物在抑制细菌中的新用途

摘要

本发明公开了蒽贝素或蒽贝素类化合物在抑制细菌中的新用途。本发明提供了蒽贝素或蒽贝素类化合物的如下新用途：(1)对β‑内酰胺酶的酶活具有抑制作用，特别是对新德里金属β内酰胺酶‑1广泛的抗生物水解活性具有突出的抑制作用；(2)能够显著增加耐药菌对抗生素的敏感性，明显降低多种抗生素对超级耐药菌的最低抑菌浓度，逆转耐药菌的耐药性，降低严重耐药菌的临床危害；(3)具有一定程度的抑菌活性，高浓度的蒽贝素或蒽贝素类化合物对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、鼠伤寒沙门氏菌、宋氏志贺菌、福氏志贺菌、肺炎克雷伯菌、大肠杆菌等病原菌具有明显的抑菌活性，甚至能完全抑制细菌生长。

权利要求

1.抑制剂和抗生素在制备抑制细菌的产品中的应用；所述抑制剂为蒽贝素或蒽贝素类化合物；所述细菌为携带β-内酰胺酶的编码基因的耐药细菌；所述抗生素为β-内酰胺类抗生素；

所述蒽贝素类化合物为式1所示化合物、式1所示化合物的相应盐、式2所示化合物、式2所示化合物的相应盐、式3所示化合物、式3所示化合物的相应盐、式5所示化合物、式5所示化合物的相应盐、式4所示化合物的相应盐、式4所示化合物的复合物、式4所示化合物的多聚物或式4所示化合物的高聚物；

式1中，R为-H、-CH2CH2CH2CH2CH2CH3、式2中，R1为-OCOCH3或 R2为-OCH3或式3中，R3为-CH2-CH2-(CH3)2或

式5中，R4为-OCH3、-OCH2CH3、

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于：

式2中，R1和R2为如下组合(1)或(2)：

(1)R1＝OCOCH3，R2＝OCH3；(2)所述“式4所示化合物的相应盐”为式4所示化合物的一价金属离子盐、式4所示化合物的二价金属离子盐、式4所示化合物的铵盐或式4所示化合物的C1-C6的烷基取代的铵盐；

所述“式4所示化合物的一价金属离子盐”为式6所示化合物或式7所示化合物；

所述“式4所示化合物的铵盐”为式11所示化合物；

所述“式4所示化合物的C1-C6的烷基取代的铵盐”为式12所示化合物；

所述“式4所示化合物的复合物”为式13所示蒽贝素-茚三酮复合物、蒽贝素-磷脂复合物、式14所示蒽贝素-聚乙二醇复合物、式15所示化合物或式16所示化合物；

所述“式4所示化合物的多聚物”为二聚物，所述二聚物为式17所示化合物；

所述“式4所示化合物的高聚物”为式18所示化合物；

所述式18中，n≥2；

所述“式1所示化合物的相应盐”优选为式1所示化合物药学上可接受的盐；所述式2所示化合物的相应盐优选为“式2所示化合物药学上可接受的盐”；所述“式3所示化合物的相应盐”优选为式3所示化合物药学上可接受的盐；所述“式5所示化合物的相应盐”优选为式5所示化合物药学上可接受的盐；所述“式4所示化合物的相应盐”优选为式4所示化合物药学上可接受的盐。

3.一种抑制细菌的产品，其活性成分为抑制剂和抗生素；所述抑制剂为蒽贝素或蒽贝素类化合物；所述细菌为携带β-内酰胺酶的编码基因的耐药细菌；所述抗生素为β-内酰胺类抗生素；

所述蒽贝素类化合物为式1所示化合物、式1所示化合物的相应盐、式2所示化合物、式2所示化合物的相应盐、式3所示化合物、式3所示化合物的相应盐、式5所示化合物、式5所示化合物的相应盐、式4所示化合物的相应盐、式4所示化合物的复合物、式4所示化合物的多聚物或式4所示化合物的高聚物；

式1中，R为-H、-CH2CH2CH2CH2CH2CH3、式2中，R1为-OCOCH3或 R2为-OCH3或式3中，R3为-CH2-CH2-(CH3)2或

式5中，R4为-OCH3、-OCH2CH3、

4.如权利要求3所述的产品，其特征在于：

式2中，R1和R2为如下组合(1)或(2)：

(1)R1＝OCOCH3，R2＝OCH3；(2)所述“式4所示化合物的相应盐”为式4所示化合物的一价金属离子盐、式4所示化合物的二价金属离子盐、式4所示化合物的铵盐或式4所示化合物的C1-C6的烷基取代的铵盐；

所述“式4所示化合物的一价金属离子盐”为式6所示化合物或式7所示化合物；

所述“式4所示化合物的铵盐”为式11所示化合物；

所述“式4所示化合物的C1-C6的烷基取代的铵盐”为式12所示化合物；

所述“式4所示化合物的复合物”为式13所示蒽贝素-茚三酮复合物、蒽贝素-磷脂复合物、式14所示蒽贝素-聚乙二醇复合物、式15所示化合物或式16所示化合物；

所述“式4所示化合物的高聚物”为式18所示化合物；

所述式18中，n≥2；

所述“式1所示化合物的相应盐”优选为式1所示化合物药学上可接受的盐；所述式2所示化合物的相应盐优选为“式2所示化合物药学上可接受的盐”；所述“式3所示化合物的相应盐”优选为式3所示化合物药学上可接受的盐；所述“式5所示化合物的相应盐”优选为式5所示化合物药学上可接受的盐；所述“式4所示化合物的相应盐”优选为式4所示化合物药学上可接受的盐。

5.蒽贝素或蒽贝素类化合物在制备β-内酰胺酶抑制剂中的应用；

所述蒽贝素类化合物为式1所示化合物、式1所示化合物的相应盐、式2所示化合物、式2所示化合物的相应盐、式3所示化合物、式3所示化合物的相应盐、式5所示化合物、式5所示化合物的相应盐、式4所示化合物的相应盐、式4所示化合物的复合物、式4所示化合物的多聚物或式4所示化合物的高聚物；

式1中，R为-H、-CH2CH2CH2CH2CH2CH3、式2中，R1为-OCOCH3或 R2为-OCH3或式3中，R3为-CH2-CH2-(CH3)2或

式5中，R4为-OCH3、-OCH2CH3、

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于：

式2中，R1和R2为如下组合(1)或(2)：

(1)R1＝OCOCH3，R2＝OCH3；(2)所述“式4所示化合物的相应盐”为式4所示化合物的一价金属离子盐、式4所示化合物的二价金属离子盐、式4所示化合物的铵盐或式4所示化合物的C1-C6的烷基取代的铵盐；

所述“式4所示化合物的一价金属离子盐”为式6所示化合物或式7所示化合物；

所述“式4所示化合物的铵盐”为式11所示化合物；

所述“式4所示化合物的C1-C6的烷基取代的铵盐”为式12所示化合物；

所述“式4所示化合物的复合物”为式13所示蒽贝素-茚三酮复合物、蒽贝素-磷脂复合物、式14所示蒽贝素-聚乙二醇复合物、式15所示化合物或式16所示化合物；

所述“式4所示化合物的多聚物”为二聚物，所述二聚物为式17所示化合物；

所述“式4所示化合物的高聚物”为式18所示化合物；

所述式18中，n≥2；

所述“式1所示化合物的相应盐”优选为式1所示化合物药学上可接受的盐；所述式2所示化合物的相应盐优选为“式2所示化合物药学上可接受的盐”；所述“式3所示化合物的相应盐”优选为式3所示化合物药学上可接受的盐；所述“式5所示化合物的相应盐”优选为式5所示化合物药学上可接受的盐；所述“式4所示化合物的相应盐”优选为式4所示化合物药学上可接受的盐。

7.蒽贝素或蒽贝素类化合物在制备抑制β-内酰胺酶水解β-内酰胺类抗生素的产品中的应用；

所述蒽贝素类化合物为式1所示化合物、式1所示化合物的相应盐、式2所示化合物、式2所示化合物的相应盐、式3所示化合物、式3所示化合物的相应盐、式5所示化合物、式5所示化合物的相应盐、式4所示化合物的相应盐、式4所示化合物的复合物、式4所示化合物的多聚物或式4所示化合物的高聚物；

式1中，R为-H、-CH2CH2CH2CH2CH2CH3、式2中，R1为-OCOCH3或 R2为-OCH3或式3中，R3为-CH2-CH2-(CH3)2或

式5中，R4为-OCH3、-OCH2CH3、

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于：

式2中，R1和R2为如下组合(1)或(2)：

(1)R1＝OCOCH3，R2＝OCH3；(2)所述“式4所示化合物的相应盐”为式4所示化合物的一价金属离子盐、式4所示化合物的二价金属离子盐、式4所示化合物的铵盐或式4所示化合物的C1-C6的烷基取代的铵盐；

所述“式4所示化合物的一价金属离子盐”为式6所示化合物或式7所示化合物；

所述“式4所示化合物的铵盐”为式11所示化合物；

所述“式4所示化合物的C1-C6的烷基取代的铵盐”为式12所示化合物；

所述“式4所示化合物的复合物”为式13所示蒽贝素-茚三酮复合物、蒽贝素-磷脂复合物、式14所示蒽贝素-聚乙二醇复合物、式15所示化合物或式16所示化合物；

所述“式4所示化合物的多聚物”为二聚物，所述二聚物为式17所示化合物；

所述“式4所示化合物的高聚物”为式18所示化合物；

所述式18中，n≥2；

所述“式1所示化合物的相应盐”优选为式1所示化合物药学上可接受的盐；所述式2所示化合物的相应盐优选为“式2所示化合物药学上可接受的盐”；所述“式3所示化合物的相应盐”优选为式3所示化合物药学上可接受的盐；所述“式5所示化合物的相应盐”优选为式5所示化合物药学上可接受的盐；所述“式4所示化合物的相应盐”优选为式4所示化合物药学上可接受的盐。

说明书

蒽贝素或蒽贝素类化合物在抑制细菌中的新用途

技术领域

[0001] 本发明涉及蒽贝素或蒽贝素类化合物在抑制细菌中的新用途。

背景技术

[0002] 自1940年青霉素应用于临床以来，抗生素在控制与治疗疾病方面发挥着重要作用。包括青霉素在内的β内酰胺类抗生素是目前临床应用较广、用量较大的一类抗细菌微生物药物。随着其广泛使用，引起人类疾病的许多细菌产生了耐药性，近年来屡屡出现能抵抗多种抗生素的耐药菌。2010年出版的我国细菌耐药检测报告表明，细菌对青霉素、头孢菌素等β-内酰胺类抗生素的耐药明显，其中大肠杆菌耐药性在50％以上，主要耐药机制为产超广谱的β-内酰胺酶，产酶率高达68％。2010年，一种产新德里金属β-内酰胺酶-1(NDM-1，New Delhi Metallo-β-lactamase-1)的耐药菌在印度、英国和巴基斯坦的传播，引起国内外学者和媒体的广泛关注和报道。产NDM-1的细菌，由于其广泛耐药性导致感染治疗十分困难，被媒体报道为“超级细菌(superbug)”。目前，产NDM-1的细菌已在美国、加拿大、德国、日本、我国香港和台湾等三十多个国家和地区被分离和报道，并不断有新感染病例出现。2010年1O月26日，中国疾病预防控制中心和军事医学科学院同时宣布在中国大陆的宁夏和福建分别发现了产NDM-1的“超级细菌”，并且不断有新的临床分离株在国内被发现。

[0003] 目前临床最常用的抗生素大都含有β-内酰胺环结构，包括青霉素类、头孢菌素类、碳青霉烯类等。其中碳青霉烯类抗生素抗菌谱最广，耐药率最低，被称为抗生素中的“杀手锏”，一般用于重症感染患者的治疗。细菌产生水解β-内酰胺类抗生素的β-内酰胺酶(β-lactamase)，是细菌对β-内酰胺类抗菌药物耐药的主要机制。随着β-内酰胺类抗生素的广泛使用，β-内酰胺酶的种类也在不断增加。根据β-内酰胺酶的分子结构，可将其分为A、B、C、D四类。TEM型β-内酰胺酶，属于A类β-内酰胺酶，是最早发现且种类最多的β-内酰胺酶之一，目前至少已有183种TEM酶被发现，以TEM-1、TEM-2为代表。SHV型β-内酰胺酶，属于A类β-内酰胺酶，为分布最广的β内酰胺酶之一，目前已发现134种SHV酶。与A、C、D类β内酰胺酶相比，B类β-内酰胺酶具有独特的分子结构，其酶活性的发挥需要金属离子的参与，通常为Zn2+，因此也称为金属β-内酰胺酶。IMP型和VIM型β内酰胺酶是其重要代表。因为它们能够水解亚胺培南、美罗培南等碳青霉烯类抗菌药物，所以也被称为碳青霉烯酶。NDM-1是一种新发现的碳青霉烯酶，属于B类β-内酰胺酶。NDM-1酶水解底物包括青霉素类、头孢菌素类和碳青霉烯类等，表现为产酶细菌对这些药物广泛耐药。报道显示，携带NDM-1耐药基因的肺炎克雷伯菌引起的菌血症的病死率高达50％。

[0004] 临床上将β-内酰胺类抗生素和β-内酰胺酶抑制剂联合用药是目前较为成功的对抗细菌耐药的方法。舒巴坦、克拉维酸和他唑巴坦是临床长期以来广泛使用的β-内酰胺酶抑制剂，它们通过抑制β-内酰胺酶活性而达到保护β-内酰胺类抗生素的目的。临床常用的有氨苄西林/舒巴坦、阿莫西林/舒巴坦、头孢哌酮/舒巴坦、阿莫西林/克拉维酸钾等组成的复方制剂。但目前的体外实验表明现有的这三种β-内酰胺酶抑制剂对NDM-1没有任何抑制活性。

发明内容

[0005] 本发明的目的是提供蒽贝素或蒽贝素类化合物在抑制细菌中的新用途。

[0006] 本发明提供了蒽贝素或蒽贝素类化合物的第一种新用途为蒽贝素或蒽贝素类化合物在制备抑制细菌的产品中的应用。

[0007] 基于上述第一种新用途，本发明还保护一种抑制细菌的产品，其活性成分为蒽贝素或蒽贝素类化合物。

[0008] 所述细菌具体可为革兰氏阳性细菌或革兰氏阴性细菌，也可以为携带β-内酰胺酶的编码基因的耐药细菌。所述β-内酰胺酶具体可为NDM-1蛋白、TEM-1蛋白、VIM-1蛋白、SHV-18蛋白或IMP-1蛋白。所述β-内酰胺酶具体可为序列表的序列1所示的NDM-1蛋白、序列表的序列3所示的TEM-1蛋白、序列表的序列5所示的VIM-1蛋白、序列表的序列7所示的SHV-18蛋白或序列表的序列9所示的IMP-1蛋白。所述细菌可为金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)、宋氏志贺菌(Shigella sonnei)、福氏志贺菌(Shigella flexneri)、肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)或大肠杆菌(Escherichia coli)。

[0009] 本发明还保护抑制剂和抗生素在制备抑制细菌的产品中的应用；所述抑制剂为蒽贝素或蒽贝素类化合物。

[0010] 本发明还保护一种抑制细菌的产品，其活性成分为抑制剂和抗生素；所述抑制剂为蒽贝素或蒽贝素类化合物。

[0011] 所述抗生素为β-内酰胺类抗生素。所述β-内酰胺类抗生素为碳青霉烯类抗生素、青霉素类抗生素或头孢菌素类抗生素。所述碳青霉烯类抗生素具体可为比阿培南或美罗培南。所述青霉素类抗生素具体可为氨苄西林或青霉素G。所述头孢菌素类抗生素具体可为头孢吡肟、头孢他定或头孢拉定。所述细菌具体可为革兰氏阳性细菌或革兰氏阴性细菌，也可以为携带β-内酰胺酶的编码基因的耐药细菌。所述β-内酰胺酶具体可为NDM-1蛋白、TEM-1蛋白、VIM-1蛋白、SHV-18蛋白或IMP-1蛋白。所述β-内酰胺酶具体可为序列表的序列1所示的NDM-1蛋白、序列表的序列3所示的TEM-1蛋白、序列表的序列5所示的VIM-1蛋白、序列表的序列7所示的SHV-18蛋白或序列表的序列9所示的IMP-1蛋白。所述细菌可为金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)、宋氏志贺菌(Shigella sonnei)、福氏志贺菌(Shigella flexneri)、肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)或大肠杆菌(Escherichia coli)。

[0012] 本发明提供了蒽贝素或蒽贝素类化合物的第二种新用途为蒽贝素或蒽贝素类化合物在制备β-内酰胺酶抑制剂中的应用。

[0013] 基于上述第二种新用途，本发明还保护一种β-内酰胺酶抑制剂，它的活性成分为蒽贝素或蒽贝素类化合物。

[0014] 所述β-内酰胺酶具体可为NDM-1蛋白、TEM-1蛋白、VIM-1蛋白、SHV-18蛋白或IMP-1蛋白。所述β-内酰胺酶具体可为序列表的序列1所示的NDM-1蛋白、序列表的序列3所示的TEM-1蛋白、序列表的序列5所示的VIM-1蛋白、序列表的序列7所示的SHV-18蛋白或序列表的序列9所示的IMP-1蛋白。

[0015] 本发明还保护蒽贝素或蒽贝素类化合物在制备抑制β-内酰胺酶水解β-内酰胺类抗生素的产品中的应用。

[0016] 本发明还保护一种抑制β-内酰胺酶水解β-内酰胺类抗生素的产品，它的活性成分为蒽贝素或蒽贝素类化合物。

[0017] 所述β-内酰胺酶具体可为NDM-1蛋白、TEM-1蛋白、VIM-1蛋白、SHV-18蛋白或IMP-1蛋白。所述β-内酰胺酶具体可为序列表的序列1所示的NDM-1蛋白、序列表的序列3所示的TEM-1蛋白、序列表的序列5所示的VIM-1蛋白、序列表的序列7所示的SHV-18蛋白或序列表的序列9所示的IMP-1蛋白。所述β-内酰胺类抗生素为碳青霉烯类抗生素、青霉素类抗生素或头孢菌素类抗生素。所述碳青霉烯类抗生素具体可为比阿培南或美罗培南。所述青霉素类抗生素具体可为氨苄西林或青霉素G。所述头孢菌素类抗生素具体可为头孢吡肟、头孢他定或头孢拉定。

[0018] 以上任一所述蒽贝素为式4所示化合物(化合物4)；

[0019]

[0020] 以上任一所述蒽贝素类化合物为式1所示化合物、式1所示化合物的相应盐、式1所示化合物的溶剂合物、式2所示化合物、式2所示化合物的相应盐、式2所示化合物的溶剂合物、式3所示化合物、式3所示化合物的相应盐、式3所示化合物的溶剂合物、式5所示化合物、式5所示化合物的相应盐、式5所示化合物的溶剂合物、式4所示化合物的相应盐、式4所示化合物的溶剂合物、式4所示化合物的复合物、式4所示化合物的多聚物或式4所示化合物的高聚物；

[0021]

[0022] 式1中，R为-H(形成化合物1-1)、-CH2CH2CH2CH2CH2CH3(形成化合物1-2)、(形成化合物1-3)、 (形成化合物1-4)、 (形成化合物1-5)、 (形成化合物1-6)或 (形成化合物1-7)。

[0023] 式2中，R1为-OCOCH3或 R2为-OCH3或

[0024] 式II中，R1和R2为如下组合(1)或(2)：

[0025] (1)R1＝OCOCH3，R2＝OCH3(形成化合物2-1)；(2)(形成化合物2-2)。

[0026] 式3中，R3为-CH2-CH2-(CH3)2(形成化合物3-1)或 (形成化合物3-2)。

[0027] 式5中，R4为-OCH3(形成化合物5-1)、-OCH2CH3(形成化合物5-2)、 (形成化合物5-3)、 (形成化合物5-4)、 (形成化合物5-5)、(形成化合物5-6)、 (形成化合物5-7)、 (形成
化合物5-8)、 (形成化合物5-9)、 (形成化合物5-10)、
(形成化合物5-11)或 (形成化合物5-12)。

[0028] 所述“式4所示化合物的相应盐”可为式4所示化合物的一价金属离子盐、式4所示化合物的二价金属离子盐、式4所示化合物的铵盐或式4所示化合物的C1-C6的烷基取代的铵盐。

[0029] 所述“式4所示化合物的一价金属离子盐”为式6所示化合物(化合物6)或式7所示化合物(化合物7)。

[0030]

[0031] 所述“式4所示化合物的二价金属离子盐”为式8所示化合物(化合物8)、式8-1所示化合物(化合物8-1，化合物8-1是化合物8的盐)、式9所示化合物(化合物9)或式10所示化合物(化合物10)。

[0032]

[0033] 式8中，M1为Co2+、Ni2+、Cu2+或Zn2+；虚线代表八面体的螯合结构；S为溶剂(具体可为水)。

[0034] 式8-1中，M2为Co2+、Ni2+、Cu2+或Zn2+；虚线代表八面体的螯合结构；S为溶剂(具体可为水)。

[0035] 式9中，M3为Co2+、Ni2+、Cu2+或Zn2+；虚线代表八面体的螯合结构；S为溶剂(具体可为水)。

[0036] 式10中，M4为Co2+、Ni2+、Cu2+或Zn2+；虚线代表八面体的螯合结构；S为溶剂(具体可为水)。

[0037] 所述“式4所示化合物的铵盐”为式11所示化合物(化合物11)。

[0038]

[0039] 所述“式4所示化合物的C1-C6的烷基取代的铵盐”为式12所示化合物(化合物12)。

[0040]

[0041] 所述“式4所示化合物的复合物”为式13所示蒽贝素-茚三酮复合物(化合物13)、蒽贝素-磷脂复合物、式14所示蒽贝素-聚乙二醇复合物(化合物14)、式15所示化合物(化合物15)或式16所示化合物(化合物16)。

[0042]

[0043] 所述“式4所示化合物的多聚物”为二聚物，所述二聚物为式17所示化合物(化合物17)。

[0044]

[0045] 所述“式4所示化合物的高聚物”为式18所示化合物(化合物18)。

[0046]

[0047] 所述式18中，n≥2(n具体可为2-8)。

[0048] 式1所示化合物的相应盐具体可为式1所示化合物药学上可接受的盐。式2所示化合物的相应盐具体可为式2所示化合物药学上可接受的盐。式3所示化合物的相应盐具体可为式3所示化合物药学上可接受的盐。式5所示化合物的相应盐具体可为式5所示化合物药学上可接受的盐。式4所示化合物的相应盐具体可为式4所示化合物药学上可接受的盐。

[0049] 所述“式1所示化合物的溶剂合物”中的“溶剂”优选为二甲基亚砜水溶液、橄榄油或失水山梨醇单油酸酯聚氧乙烯醚水溶液。所述“式2所示化合物的溶剂合物”中的“溶剂”优选为二甲基亚砜水溶液、橄榄油或失水山梨醇单油酸酯聚氧乙烯醚水溶液。所述“式3所示化合物的溶剂合物”中的“溶剂”优选为二甲基亚砜水溶液、橄榄油或失水山梨醇单油酸酯聚氧乙烯醚水溶液。所述“式5所示化合物的溶剂合物”中的“溶剂”优选为二甲基亚砜水溶液、橄榄油或失水山梨醇单油酸酯聚氧乙烯醚水溶液。所述“式4所示化合物的溶剂合物”中的“溶剂”优选为二甲基亚砜水溶液、橄榄油或失水山梨醇单油酸酯聚氧乙烯醚水溶液。以上任一所述二甲基亚砜水溶液中二甲基亚砜的体积分数优选为0.1-20％。以上任一所述失水山梨醇单油酸酯聚氧乙烯醚水溶液中失水山梨醇单油酸酯聚氧乙烯醚的体积分数优选为0.04-4％。通过加入溶剂的方式可以促进蒽贝素或蒽贝素类化合物的用途。还可采用液固压缩(liquisolid compacts)技术促进蒽贝素或蒽贝素类化合物的用途。

[0050] 以上任一所述产品具体可为药物。本发明提供的药物中，除了所述有效成分外，可以添加药学上允许的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂、增效剂、和添加剂等。本发明提供的药物的给药形态，可为片剂、胶囊、软胶囊、散剂、颗粒剂、细粒剂、液剂、丸剂、乳剂或悬浊剂等口服制剂，亦可为针剂(如粉剂、水剂、油剂)栓剂、软膏、硬膏、贴剂、喷雾剂、酊剂或滴眼剂等非口服制剂。所述制剂都可采用本领域技术人员熟知常用的制备方法而获得。其给药途径可为口服、经皮、静脉或肌肉注射。

[0051] 本发明提供了蒽贝素或蒽贝素类化合物的如下新用途：(1)对β-内酰胺酶(NDM-1蛋白、TEM-1蛋白、SHV-18蛋白、VIM-1蛋白或IMP-1蛋白等)的酶活具有抑制作用，特别是对新德里金属β内酰胺酶-1(NDM-1蛋白)广泛的抗生物水解活性具有突出的抑制作用；(2)能够显著增加耐药菌对抗生素的敏感性，明显降低多种抗生素(美罗培南、比阿培南、头孢吡肟、头孢拉定、头孢拉定等)对超级耐药菌的最低抑菌浓度，逆转耐药菌的耐药性，降低严重耐药菌的临床危害；(3)具有一定程度的抑菌活性，高浓度的蒽贝素或蒽贝素类化合物对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、鼠伤寒沙门氏菌、宋氏志贺菌、福氏志贺菌、肺炎克雷伯菌、大肠杆菌等病原菌具有明显的抑菌活性，甚至能完全抑制细菌生长。

[0052] 本发明对于医药领域和健康领域具有重大应用价值。

附图说明

[0053] 图1为反应流程图。

[0054] 图2为PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳图。

[0055] 图3为NDM-1蛋白溶液的聚丙烯酰胺电泳图。

[0056] 图4为各体系中NDM-1蛋白的相对酶活。

具体实施方式

[0057] 以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。

[0058] 大肠杆菌DH5α：Transgen公司。大肠杆菌BL21(DE3)：Transgen公司。质粒pET-22b(+)：Novagen公司。肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)：ATCC编号为BAA-2146，该菌株为携带NDM-1耐药基因的肺炎克雷伯菌，简称肺炎克雷伯菌BAA-2146。肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)：ATCC编号为700603，该菌株为携带SHV-18耐药基因的肺炎克雷伯菌，简称肺炎克雷伯菌700603。大肠杆菌(Escherichia coli)：ATCC编号为35218，该菌株为携带TEM-1耐药基因的大肠杆菌，简称大肠杆菌35218。

[0059] 比阿培南(碳青霉烯类抗生素)、美罗培南(碳青霉烯类抗生素)、青霉素G(青霉素类抗生素)、氨苄西林(青霉素类抗生素)、头孢吡肟(头孢菌素类抗生素，第四代头孢菌素)、头孢他定(头孢菌素类抗生素，第三代头孢菌素)、头孢拉定(头孢菌素类抗生素，第二代头孢菌素)、舒巴坦、他唑巴坦和克拉维酸，均购自中国药品生物制品检定所。

[0060] 下述实施例中所用的式4所示化合物：Embel in(2，5-二羟基-3-十一烷基-1,4-苯醌)、英文名称为2,5-Dihydroxy-3-undecyl-1,4-benzoquinone或2,5-dihydroxy-3-undecylcyclohexa-2,5-diene-1,4-dione；sigma公司(纯度>98％)；CAS号为550-24-3，EINECS号为208-979-8，分子式为C17H26O4，分子量为294.3859；InChI＝1/C17H26O4/c1-2-3-4-5-6-7-8-9-10-11-13-16(20)14(18)12-15(19)17(13)21/h12,18,21H,2-11H2,1H3；常见形态：橙色的板状结晶；密度：1.131g/cm3；沸点：在760mmHg下的沸点为431.9℃；闪点：
229.1℃；蒸汽压：在25℃下为2.85E-09mmHg。

[0061] 下述实施例中的式2-1所示化合物、式5-1所示化合物和式5-2所示化合物均按文献Xu M,Deng Z,Li J,Fu H,Proksch P,et al.Chemical constituents from the mangrove plant,Aegiceras corniculatum.J Nat Prod 2004:67:762-6.制备得到。

[0062] 下述实施例中的式5-3所示化合物、式5-4所示化合物、式5-5所示化合物、式5-6所示化合物、式5-7所示化合物、式5-8所示化合物、式5-9所示化合物、式5-10所示化合物、式5-11所示化合物、式5-12所示化合物和式3-2所示化合物均按文献Sekar Mahendran,Shrishailappa Badami,et al.Synthesis and Evaluation of Analgesic and Anti-inflammatory Activities of Most Active Free Radical Scavenging Derivatives of Embelin—A Structure–Activity Relationship.Chem.Pharm.Bull.59(8)913—919(2011).制备得到。

[0063] 下述实施例中的式1-1所示化合物、式1-2所示化合物、式1-3所示化合物、式1-4所示化合物、式1-5所示化合物、式1-6所示化合物和式1-7所示化合物均按文献Jianyong Chen,Zaneta Nikolovska-Coleska,et al.Design,synthesis,and characterization of new embelin derivatives as potent inhibitors of X-linked inhibitor of apoptosis protein.2006.Elsevier Ltd.16:5805–5808.制备得到。相应的反应流程图如图1所示，图1中的条件为：(a)n-BuLi、THF、0℃和10min；(b)H2、10％Pd-C、EtOAc和RT；(c)CAN、CH3CN-H2O、0℃和1h；(d)HClO4、HCl、dioxane、RT和48h。

[0064] 下述实施例中的式3-1所示化合物和式12所示化合物均按文献Gupta OP,Ali MM,Ray Ghatak BJ,et al.Some pharmacological investigations of embelin and its semisynthetic derivatives.Indian J Physiol Pharmacol.1977Jan-Mar；21(1):31-9.制备得到。

[0065] 下述实施例中的式6所示化合物和式7所示化合物均按文献Zutshi U,Sharma SC,Kaul JL,Atal CK.Kinetic fate of potassium embelate,a non-narcotic centrally acting analgesic after oral and intravenous administration.Pharmacology.40:179-184.制备得到。

[0066] 下述实施例中的式11所示化合物按文献Yared Debebe.,Mesfin Tefera.,et al.2015.Evaluation of anthelmintic potential of the Ethiopian medicinal plant Embelia schimperi Vatke in vivo and in vitro against some intestinal parasites.BMC Complementary and Alternative Medicine.15:187.制备得到。

[0067] 下述实施例中的式8所示化合物、式9所示化合物和式10所示化合物均按文献Vaddadi Usha Rani.,Ghanta Jyothi.,et al.2010.Chemical Speciation of Binary Complexes of Embelin With Some Biologically Important Metal Ions.Acta Chim.Slov.57:916–921.制备得到。

[0068] 下述实施例中的式13所示化合物按文献S.Mahendran,S.Badami,et al.2011Antioxidant,analgesic and anti-inflammatory properties of new ninhydrin adduct of embelin.Pharmaceutical Chemistry Journal.Volume 45,Issue 
9,pp 547-551.制备得到。

[0069] 下述实施例中的化合物蒽贝素-磷脂复合物按文献Rahila Ahmad Pathan.,Uma Bhandari.2011.Preparation&characterization of embelin–phospholipid complex as effective drug delivery tool.J Incl Phenom Macrocycl Chem.69:139-14制备得到。

[0070] 下述实施例中的式14所示化合物按文献Yixian Huang,Jianqin Lu,et al.PEG-Derivatized Embelin as a Dual Functional Carrier for the Delivery of Paclitaxel.Bioconjug Chem.2012July 18；23(7):1443–1451制备得到。

[0071] 下述实施例中的式15所示化合物和式16所示化合物均按文献Rosalyn Pena,Sandra Jimenez-Alonso,et al.Multicomponent synthesis of antibacterial dihydropyridin and dihydropyran embelin derivatives.J.Org.Chem.2013,78,7977-7985制备得到。

[0072] 下述实施例中的式17所示化合物按文献C.Balachandran.,V.Duraipandiyan.,et al.2013.Synthesis and medicinal properties of plant-derived vilangin.Environ Chem Lett.11:303-308制备得到。

[0073] 下述实施例中的式18所示化合物按文献R.Renuka.,S.Rajasekaran.,et al.2001.Electrochemically Synthesized Polymer of the Plant Substance Embelin (2,5-Dihydroxy-3-Undecyl-1,4-Benzoquinone).Applied Biochemistry and Biotechnology制备得到。

[0074] 实施例1、蛋白的制备

[0075] 一、NDM-1蛋白的制备

[0076] 1、以肺炎克雷伯菌BAA-2146的基因组DNA为模板，用P1和P2组成的引物对进行PCR扩增，得到PCR扩增产物(PCR扩增产物中具有序列表的序列2自5’末端第1至810位核苷酸所示的NDM-1基因，编码序列表的序列1所示的NDM-1蛋白)。

[0077] P1：5’-catatggaattgcccaatattatg-3’；

[0078] P2：5’-ctcgaggcgcagcttgtcggccat-3’。

[0079] PCR条件：95℃3min；94℃30s、60℃30s、72℃1min，30个循环；72℃5min。

[0080] PCR反应体系(50μl)：模板2μl，上下游引物各2μl，dNTP 4μl，EasyTaq polymerase 0.5μl，10×buffer 5μl，加H2O至50μl。

[0081] PCR扩增产物的琼脂糖凝胶电泳图见图2，M为Marker(2000bp)，1为PCR扩增产物。扩增片段约为819bp，与预期大小一致

[0082] 2、用限制性内切酶NdeI和XhoI双酶切步骤1的PCR扩增产物，回收酶切产物。

[0083] 3、用限制性内切酶NdeI和XhoI双酶切质粒pET-22b(+)，回收约5400bp的载体骨架。

[0084] 4、将步骤2的酶切产物和步骤3的载体骨架连接，得到重组质粒pET-22b(+)-ndm1。根据测序结果，对重组质粒pET-22b(+)-ndm1进行结构描述如下：在质粒pET-22b(+)的NdeI和XhoI酶切位点之间插入了序列表的序列2自5’末端第4至810位核苷酸所示的双链DNA分子，该双链DNA分子与载体骨架上的His标签的编码基因融合，表达N末端具有His标签的NDM-1蛋白。

[0085] 5、将重组质粒pET-22b(+)-ndm1导入大肠杆菌BL21(DE3)，得到重组菌。

[0086] 6、将步骤5得到的重组菌接种至LB培养基，当OD600nm达到对数生长期时加入IPTG至终浓度为0.1mmol/L进行诱导表达，诱导表达4小时后，离心收集菌体。

[0087] 7、将步骤6得到的菌体进行超声破碎(400W；工作5s，间隔3s，循环99次)，然后5000g离心20min，收集上清液。

[0088] 8、将步骤7得到的上清液上样于镍柱进行亲和层析，平衡液的咪唑浓度为40mmol/L，洗脱液的咪唑浓度为400mmol/L，收集过柱后的洗脱液(NDM-1蛋白液),装在透析袋中置于10mM的Hepes缓冲液中进行透析，然后取透析袋中的溶液，即为NDM-1蛋白溶液。

[0089] NDM-1蛋白溶液的聚丙烯酰胺电泳图见图3，M为12-80kd的蛋白质Marker，1和2为NDM-1蛋白溶液。可以看出，泳道1和泳道2出现了28KD的蛋白片段，与预期的大小一致。

[0090] 二、TEM-1蛋白的制备

[0091] 1、以大肠杆菌35218的基因组DNA为模板，用P3和P4组成的引物对进行PCR扩增，得到PCR扩增产物(PCR扩增产物中具有序列表的序列4自5’末端第1至858位核苷酸所示的TEM-1基因，编码序列表的序列3所示的TEM-1蛋白)。

[0092] P3：5’-catatgagtattcaacatttccgtgt-3’；

[0093] P4：5'-ctcgagccaatgcttaatcagtgag-3'。

[0094] 2、用限制性内切酶NdeI和XhoI双酶切步骤1的PCR扩增产物，回收酶切产物。

[0095] 3、用限制性内切酶NdeI和XhoI双酶切质粒pET-22b(+)，回收约5400bp的载体骨架。

[0096] 4、将步骤2的酶切产物和步骤3的载体骨架连接，得到重组质粒pET-22b(+)-tem1。

[0097] 5、将重组质粒pET-22b(+)-tem1导入大肠杆菌BL21(DE3)，得到重组菌。

[0098] 6、同步骤一的6。

[0099] 7、同步骤一的7。

[0100] 8、同步骤一的8。得到TEM-1蛋白溶液。

[0101] 三、VIM-2蛋白的制备

[0102] 1、将人工合成序列表的序列6自5’末端第1至798位核苷酸所示的双链DNA分子插入载体pET-22b(+)的XhoI和NdeI酶切位点之间，得到重组质粒pET-22b(+)-vim2。序列表的序列6所示的双链DNA分子编码序列表的序列5所示的VIM-2蛋白。

[0103] 2、将重组质粒pET-22b(+)-vim2导入大肠杆菌BL21(DE3)，得到重组菌。

[0104] 3、同步骤一的6。

[0105] 4、同步骤一的7。

[0106] 5、同步骤一的8。得到VIM-2蛋白溶液。

[0107] 四、SHV-18蛋白的制备

[0108] 1、以肺炎克雷伯菌700603的基因组DNA为模板，用P5和P6组成的引物对进行PCR扩增，得到PCR扩增产物(PCR扩增产物中具有序列表的序列8自5’末端第1至858位核苷酸所示的SHV-18基因，编码序列表的序列7所示的SHV-18蛋白)。

[0109] P5：5’-catatgcgttattttcgcctgtgtat-3’；

[0110] P6：5’-ctcgaggcgttgccagtgctcgatc-3’。

[0111] 2、用限制性内切酶NdeI和XhoI双酶切步骤1的PCR扩增产物，回收酶切产物。

[0112] 3、用限制性内切酶NdeI和XhoI双酶切质粒pET-22b(+)，回收约5400bp的载体骨架。

[0113] 4、将步骤2的酶切产物和步骤3的载体骨架连接，得到重组质粒pET-22b(+)-shv18。

[0114] 5、将重组质粒pET-22b(+)-shv18导入大肠杆菌BL21(DE3)，得到重组菌。

[0115] 6、同步骤一的6。

[0116] 7、同步骤一的7。

[0117] 8、同步骤一的8。得到SHV-18蛋白溶液。

[0118] 五、IMP-1蛋白的制备

[0119] 1、将人工合成序列表的序列10自5’末端第1至798位核苷酸所示的双链DNA分子插入载体pET-22b(+)的XhoI和NdeI酶切位点之间，得到重组质粒pET-22b(+)-imp1。序列表的序列10所示的双链DNA分子编码序列表的序列9所示的IMP-1蛋白。

[0120] 2、将重组质粒pET-22b(+)-imp1导入大肠杆菌BL21(DE3)，得到重组菌。

[0121] 3、同步骤一的6。

[0122] 4、同步骤一的7。

[0123] 5、同步骤一的8。得到IMP-1蛋白溶液。

[0124] 实施例2、蒽贝素对各种β-内酰胺酶的抑制活性

[0125] 蒽贝素(Embelin)即式4所示化合物。

[0126] 一、蒽贝素对NDM-1蛋白的抑制活性

[0127] 1、将实施例1制备的NDM-1蛋白溶液、比阿培南与含50μM ZnCl2的10mM HEPES缓冲液(pH7.5)混合，使NDM-1蛋白的浓度为0.5μg/ml、比阿培南的浓度为0.5mM。

[0128] 2、将步骤1的体系分成若干组，分别加入不同量的蒽贝素，30℃反应10min，检测235nm(抗生素的特异吸收峰)吸收值(A235nm值)。

[0129] NDM-1蛋白在体系中的相对酶活＝(蒽贝素采用不同浓度时该体系反应开始时的A235nm-结束时刻的A235nm值)/(蒽贝素浓度为0时该体系反应开始时的A235nm-结束时刻的A235nm值)×100％。

[0130] 蒽贝素对NDM-1酶活的半数抑制浓度IC50＝NDM-1蛋白在体系中的相对酶活为50％时对应的化合物Ⅰ浓度(μM)。

[0131] 进行三次重复实验，结果取平均值。

[0132] 各体系中NDM-1蛋白的相对酶活见图4。结果表明，蒽贝素对NDM-1蛋白作为β-内酰胺酶的酶活(NDM-1蛋白作为β-内酰胺酶的酶活即NDM-1蛋白水解比阿培南的活性)具有明显的抑制作用，对0.5μg/ml的NDM-1蛋白的半数抑制浓度IC50为2.11±0.17μM。

[0133] 用舒巴坦、他唑巴坦或克拉维酸代替蒽贝素进行上述实验。结果表明，当浓度达到1mM时，舒巴坦、他唑巴坦、克拉维酸对NDM-1蛋白水解比阿培南的活性没有抑制作用。

[0134] 二、蒽贝素对TEM-1蛋白的抑制活性

[0135] 用初始浓度为1.95μg/ml的TEM-1蛋白代替初始浓度为0.5μg/ml的NDM-1蛋白，用初始浓度为2mM的青霉素G代替初始浓度为0.5mM的比阿培南，其它同步骤一。

[0136] 结果表明，蒽贝素对TEM-1蛋白作为β-内酰胺酶的酶活(TEM-1蛋白作为β-内酰胺酶的酶活即TEM-1蛋白水解青霉素G的活性)具有明显的抑制作用，对1.95μg/ml的TEM-1蛋白的半数抑制浓度IC50为1.8±0.4μM。

[0137] 用舒巴坦、他唑巴坦或克拉维酸代替蒽贝素进行上述实验。结果表明，当浓度达到1mM时，舒巴坦、他唑巴坦、克拉维酸对TEM-1蛋白水解青霉素G的活性没有抑制作用。

[0138] 三、蒽贝素对VIM-2蛋白的抑制活性

[0139] 用初始浓度为44μg/ml的VIM-2蛋白代替初始浓度为0.5μg/ml的NDM-1蛋白，用初始浓度为0.25mM的美罗培南代替初始浓度为0.5mM的比阿培南，其它同步骤一。

[0140] 结果表明，蒽贝素对VIM-2蛋白作为β-内酰胺酶的酶活(VIM-2蛋白作为β-内酰胺酶的酶活即VIM-2蛋白水解美罗培南的活性)具有明显的抑制作用，对44μg/ml的VIM-2蛋白的半数抑制浓度IC50为225±28μM。

[0141] 用舒巴坦、他唑巴坦或克拉维酸代替蒽贝素进行上述实验。结果表明，当浓度达到1mM时，舒巴坦、他唑巴坦、克拉维酸对VIM-2蛋白水解美罗培南的活性没有抑制作用。

[0142] 四、蒽贝素对SHV-18蛋白的抑制活性

[0143] 用初始浓度为72μg/ml的SHV-18蛋白代替初始浓度为0.5μg/ml的NDM-1蛋白，用初始浓度为0.5mM的头孢吡肟代替初始浓度为0.5mM的比阿培南，其它同步骤一。

[0144] 结果表明，蒽贝素对SHV-18蛋白作为β-内酰胺酶的酶活(SHV-18蛋白作为β-内酰胺酶的酶活即SHV-18蛋白水解头孢吡肟的活性)具有明显的抑制作用，对72μg/ml的SHV-18蛋白的半数抑制浓度IC50为18.5±3.9μM。

[0145] 用舒巴坦、他唑巴坦或克拉维酸代替蒽贝素进行上述实验，结果表明，当浓度达到1mM时，舒巴坦、他唑巴坦、克拉维酸对SHV-18蛋白水解头孢吡肟的活性没有抑制作用。

[0146] 五、蒽贝素对IMP-1蛋白的抑制活性

[0147] 用初始浓度为7.44μg/ml的IMP-1蛋白代替初始浓度为0.5μg/ml的NDM-1蛋白，其它同步骤一。

[0148] 结果表明，蒽贝素对IMP-1蛋白作为β-内酰胺酶的酶活(IMP-1蛋白作为β-内酰胺酶的酶活即IMP-1蛋白水解比阿培南的活性)具有明显的抑制作用，对7.44μg/ml的IMP-1蛋白的半数抑制浓度IC50为102±17μM。

[0149] 用舒巴坦、他唑巴坦或克拉维酸代替蒽贝素进行上述实验，结果表明，当浓度达到1mM时，舒巴坦、他唑巴坦、克拉维酸对IMP-1蛋白水解比阿培南的活性没有抑制作用。

[0150] 实施例3、化合物对耐药菌的耐药性的逆转

[0151] 抗生素指的是氨苄西林、头孢拉定、头孢他定、头孢吡肟、美罗培南或比阿培南。

[0152] 抑制剂指的是本发明中提供的化合物(式1-1所示化合物、式1-2所示化合物、式1-3所示化合物、式1-4所示化合物、式1-5所示化合物、式1-6所示化合物和式1-7所示化合物、式2-1所示化合物、式3-1所示化合物、式3-2所示化合物、式4所示化合物、式5-1所示化合物、式5-2所示化合物、式5-3所示化合物、式5-4所示化合物、式5-5所示化合物、式5-6所示化合物、式5-7所示化合物、式5-8所示化合物、式5-9所示化合物、式5-10所示化合物、式5-
11所示化合物、式5-12所示化合物、式6所示化合物、式7所示化合物、式8所示化合物、式9所示化合物、式10所示化合物、式11所示化合物、式12所示化合物、式13所示化合物、式14所示化合物、式15所示化合物、式16所示化合物、式17所示化合物或式18所示化合物)、舒巴坦、他唑巴坦或克拉维酸。

[0153] 1、采用MH肉汤培养基(牛肉粉2.0g/L、可溶性淀粉1.5g/L、酸水解酪蛋白17.5g/L；pH7.4)培养肺炎克雷伯菌BAA-2146至菌液浓度为1.5×108CFU/ml，用MH肉汤培养基稀释
1000倍，即菌液浓度为1.5×105CFU/ml。

[0154] 2、将步骤1得到的菌液分成若干组，分别加入不同量的抗生素，使其浓度为4096mg/L、2048mg/L、1024mg/L、512mg/L、256mg/L、128mg/L、64mg/L、32mg/L、16mg/L、8mg/L、4mg/L、2mg/L、1mg/L、0.5mg/L、0.25mg/L、0.125mg/L或0.0625mg/L。

[0155] 3、将步骤2得到的每个组的体系再分成若干小组，分别加入不同量的抑制剂，使其浓度为60mg/L、40mg/L、20mg/L、10mg/L、4mg/L、1mg/L、0.5mg/L、0.25mg/L或0mg/L。

[0156] 4、将步骤3得到的各个体系37℃、180rpm/min振荡培养18小时，检测菌液的OD600nm值。

[0157] 操作方法参照美国实验室标准化委员会(Clinical and laboratory standards institute，CLSI)的法规进行，结果解释标准参照2012年CLSI的临界值判定。

[0158] 设置三次重复实验，结果取平均值。

[0159] 计算最低抑菌浓度(Minimal inhibitory concentration,MIC)，即完全抑制细菌生长所需要的抗生素的最低浓度(当OD600nm值小于阴性对照组OD600nm值的110％时，认为完全抑制细菌生长；阴性对照组仅加入抑制剂、抗生素与培养基)。

[0160] 本发明中提供的各个化合物均能够降低各个抗生素对肺炎克雷伯菌的最低抑菌浓度。加入相同浓度(60mg/L)的不同化合物，不同抗生素对肺炎克雷伯菌的MIC降低了2-512倍，效果显著优于已有抑制剂(克拉维酸、舒巴坦或他唑巴坦)。测试结果表明，当加入
40mg/L的式4所示化合物时，头孢拉定、头孢他定、头孢吡肟的抑菌效果分别提高4倍、32倍和8倍，美罗培南和比阿培南的抑菌效果分别提高512倍和128倍(MIC分别降为0.125mg/L和
0.0625mg/L)。本发明中提供的各个化合物可不同程度逆转耐药菌的耐药性(MIC降低了2-
512倍)，显著提高耐药菌对抗生素的敏感性；其中，式5-1所示化合物、式5-12所示化合物、式6所示化合物、式12所示化合物、式13所示化合物、式17的效果优于式4所示化合物；舒巴坦、他唑巴坦、克拉维酸三种临床常用β-内酰胺酶抑制剂对各个抗生素的MIC没有任何影响。部分结果参见表1(表1中：第一行的单元格的数值指的是抑制剂的初始浓度；第二行至第二十四行的数值指的是抗生素的最低抑菌浓度，单位为mg/L)。

[0161] 表1抗生素与抑制剂的复合物对产NDM-1耐药菌的抑菌活性检测

[0162]

[0163]

[0164] 实施例3、化合物的直接抗菌活性

[0165] 抑菌剂指的是式1-1所示化合物、式1-2所示化合物、式1-3所示化合物、式1-4所示化合物、式1-5所示化合物、式1-6所示化合物和式1-7所示化合物、式2-1所示化合物、式3-1所示化合物、式3-2所示化合物、式4所示化合物、式5-1所示化合物、式5-2所示化合物、式5-3所示化合物、式5-4所示化合物、式5-5所示化合物、式5-6所示化合物、式5-7所示化合物、式5-8所示化合物、式5-9所示化合物、式5-10所示化合物、式5-11所示化合物、式5-12所示化合物、式6所示化合物、式7所示化合物、式8所示化合物、式9所示化合物、式10所示化合物、式11所示化合物、式12所示化合物、式13所示化合物、式14所示化合物、式15所示化合物、式16所示化合物、式17所示化合物或式18所示化合物。

[0166] 待测菌分别为如下菌：金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)：ATCC编号为29213；铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)：ATCC编号为15442；鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)：CICC编号为21484；宋氏志贺菌(Shigella sonnei)：CICC编号为21535；福氏志贺菌(Shigella flexneri)：CICC编号为21534；肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)：ATCC编号为700603；大肠杆菌(Escherichia coli)：ATCC编号为25922。

[0167] 1、采用MH肉汤培养基培养待测菌至菌液浓度为(1.5×108CFU/ml)，用MH肉汤培养基稀释1000倍，即菌液浓度为1.5×105CFU/ml。

[0168] 2、取步骤1得到的菌液，加入抑菌剂使其初始浓度为128mg/L，然后37℃、180rpm/min振荡培养18小时，检测菌液的OD600nm值。

[0169] 操作方法参照美国实验室标准化委员会(Clinical and laboratory standards institute，CLSI)的法规进行，结果解释标准参照2012年CLSI的临界值判定。设置三次重复实验，结果取平均值。

[0170] 各个抑菌剂对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、鼠伤寒沙门氏菌、宋氏志贺菌、福氏志贺菌、肺炎克雷伯菌和大肠杆菌等病原菌均具有明显的直接抑菌活性，在128mg/L的浓度下均能抑制上述细菌的生长。