采用高效液相色谱法测定己内酰胺中氨基己酸含量的方法

摘要

本发明公开了一种采用高效液相色谱法测定己内酰胺中氨基己酸含量的方法，采用反相色谱中常用的流动相乙腈‑缓冲盐混合溶液体系，外标法定量分析氨基己酸含量的分析方法。其色谱条件为：色谱柱：CAPCELL CORE PC S2.7（2.1mml.d×150mm）；流动相：混合溶液：10mmol/L缓冲盐的体积比为98：2配制而成，等度洗脱；流速：0.4mL/min；检测波长：200nm；柱温：40℃；进样量：20μL。该方法填补了己内酰胺领域氨基己酸测定方法的技术空白，具有样品处理及分析过程简单，分析结果准确性高，重现性好等优点。

权利要求

1.一种采用高效液相色谱法测定己内酰胺中氨基己酸含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）标液制备：准确称取氨基己酸标准物质，用纯水溶解，定容后，再以体积浓度为80%的乙腈为稀释剂配制成不同浓度的标液；

2）建立标准曲线：用样品空白液校准液相色谱仪零点，以测定样品相同的液相色谱条件测定步骤1）中的标液，仪器自动绘制标准曲线；

3）样品溶液制备：称取被测样品2.5 g±0.0001g，用纯水定容至25mL，得A液，再从A液中取5mL，用体积浓度为80%的乙腈定容至25mL，得B液；

4）样品测定：待液相色谱仪器的基线稳定后，测定标液和B液，先注入标液，两次注入标液的面积变化小于1%后，进行B液测定，在两次标液注入的中间注入B液；

5）分别记下步骤4）中每针标液、B液的面积，用外标法计算B液中氨基己酸的含量，并根据稀释倍数计算出样品中氨基己酸含量；

所述的液相色谱条件为：

色谱柱：CAPCELL CORE PC S2.7；

流动相：混合溶液与10mmol/L的缓冲盐按体积比98：2配制，等度洗脱；

流速：0.4mL/min；

检测波长：200nm；

柱温：40℃；

进样量：20μL；

所述的流动相中的混合溶液采用体积浓度为95%的乙腈溶液与10mmol/L的缓冲盐按体积比85：15配制而成；所述10mmol/L缓冲盐采用磷酸二氢钾溶液和磷酸氢二钠溶液按体积比1:1混合配制而成。

2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述CAPCELL CORE PC S2.7柱的规格为：

2.1mml.d×150mm。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤1）中所述不同浓度分别为200.32mg/L、100.16mg/L、40.064mg/L、20.032mg/L、10.016mg/L。

4.根据权利要求1-3任意一项所述的方法，其特征在于：所述被测样品为己内酰胺生产中粗酰胺油中间产品。

说明书

采用高效液相色谱法测定己内酰胺中氨基己酸含量的方法

技术领域

[0001] 本发明属于分析技术领域，涉及一种测定氨基己酸含量的方法，具体为一种采用高效液相色谱法在己内酰胺生产过程中酰胺油中氨基己酸含量的分析方法。

背景技术

[0002] 氨基己酸(C6H13NO2)，在己内酰胺生产工艺中，主要是在酸性或碱性介质中，在水存在下己内酰胺水解开环而得。

[0003] 在中和反应器中，共有两股物料，分别为重排液(含有浓硫酸)及气氨，如果两者混合不均，势必造成局部过酸或过碱，且中和过程产生了一定的水，使己内酰胺水解的条件成熟，产生一定量副产物氨基己酸。

[0004] 氨基己酸的密度介于己内酰胺和硫酸铵之间，含量足够高时，往往会造成有机相与无机相的分层困难，出现明显的乳化现象，不仅增加己内酰胺与硫胺的消耗，还会加重后续萃取分离的负荷，进而影响成品己内酰胺的质量。因而己内酰胺工艺过程中氨基己酸的测定就显得尤为重要。

[0005] 目前氨基己酸的测定集中在生物医药方面，在己内酰胺行业的应用尚未见报道；且目前氨基己酸的测定方法多为柱前或柱后衍生后，再进行测定，方法较为复杂。

发明内容

[0006] 本发明的目的是针对以上问题，提供采用高效液相色谱法测定己内酰胺中氨基己酸含量的方法。

[0007] 为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：一种采用高效液相色谱法测定己内酰胺中氨基己酸含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：

[0008] 1)标液制备：准确称取氨基己酸标准物质，用纯水溶解，定容后，再以体积浓度为80％的乙腈为稀释剂配制成不同浓度的标液；

[0009] 2)建立标准曲线：用样品空白液校准液相色谱仪零点，以测定样品相同的液相色谱条件测定步骤1)中的标液，仪器自动绘制标准曲线；

[0010] 3)样品溶液制备：称取被测样品2.5g±0.0001g，用纯水定容至25mL，得A液，再从A液中取5mL，用体积浓度为80％的乙腈定容至25mL，得B液；

[0011] 4)样品测定：待液相色谱仪器的基线稳定后，测定标液和B液，先注入标液，两次注入标液的面积变化小于1％后，进行B液测定，在两次标液注入的中间注入B液；

[0012] 5)分别记下步骤4)中每针标液、B液的面积，用外标法计算B液中氨基己酸的含量，并根据稀释倍数计算出样品中氨基己酸含量。

[0013] 所述的液相色谱条件为：

[0014] 色谱柱：CAPCELL CORE PC S2.7；

[0015] 流动相：混合溶液与10mmol/L的缓冲盐溶液按体积比98：2配制，等度洗脱；

[0016] 流速：0.4mL/min；

[0017] 检测波长：200nm；

[0018] 柱温：40℃；

[0019] 进样量：20μL。

[0020] 进一步的，所述的混合溶液采用体积浓度为95％的乙腈溶液与10mmol/L的缓冲盐溶液按体积比85：15配制而成；所述10mmol/L缓冲盐溶液采用磷酸二氢钾溶液和磷酸氢二钠溶液按体积比1:1混合配制而成。

[0021] 所述CAPCELL CORE PC S2.7柱的规格为：2.1mml.d×150mm。

[0022] 步骤1)中所述不同浓度分别为200.32mg/L、100.16mg/L、40.064mg/L、20.032mg/L、10.016mg/L。

[0023] 所述被测样品为己内酰胺生产中粗酰胺油中间产品。

[0024] 本发明利用氨基己酸在紫外区域波长200nm处有吸收的原理，用带有紫外检测器的液相色谱仪测定己内酰胺生产中粗酰胺油中氨基己酸的含量。采用反相色谱中常用的流动相乙腈-缓冲盐混合溶液体系，外标法定量分析氨基己酸含量，该方法填补了己内酰胺领域氨基己酸测定方法的技术空白，具有样品处理及分析过程简单，分析结果准确性高，重现性好等优点。

附图说明

[0025] 图1为标液的色谱谱图，图中10.449min出峰为氨基己酸峰。

[0026] 图2为样品配制所得B液的色谱谱图，图中10.334min出峰为氨基己酸峰。

具体实施方式

[0027] 下面结合实施例及附图1和2，进一步阐明本发明。

[0028] 实施例1：

[0029] 一种采用高效液相色谱法测定己内酰胺中氨基己酸含量的方法，具体步骤为：

[0030] 液相色谱法测定氨基己酸含量的分析方法

[0031] 1、流动相选择和检测波长选择：

[0032] 1)流动相的选择实验结果表明：缓冲盐含量增加，混合标样出峰时间很快，但是无法分离；乙腈含量增加，混合标样出峰时间慢，但峰形差，兼顾分离效果与分析时间，采用以下洗脱条件：混合溶液：10mmol/L缓冲盐＝98：2(V/V)；其中混合溶液采用体积浓度为95％的乙腈溶液与10mmol/L的缓冲盐按体积比85：15配制而成；10mmol/L缓冲盐采用磷酸二氢钾溶液和磷酸氢二钠溶液按体积比1:1混合配制而成。

[0033] 2)检测波长的选择

[0034] 用紫外可见分光光度计在190-800nm进行连续扫描，氨基己酸在200nm处有特征吸收，故确定检测波长为200nm。

[0035] 2、标准溶液的配制

[0036] 准确称取2.0032g氨基己酸标准品，置于1000mL容量瓶中，用纯水溶解，并定容，摇匀，得浓度为2003.2mg/L的标准储备液；

[0037] 取标准储备液10mL，用80％乙腈定容至100mL，得浓度为200.32mg/L标样1#；

[0038] 取标准储备液5mL，用80％乙腈定容至100mL，得浓度为100.16mg/L标样2#；

[0039] 取标准储备液2mL，用80％乙腈定容至100mL，得浓度为40.064mg/L标样3#；

[0040] 取标准储备液1mL，用80％乙腈定容至100mL，得浓度为20.032mg/L标样4#；

[0041] 取标1#标液5mL，用80％乙腈定容至100mL，得浓度为10.016mg/L标样5#。

[0042] 3、建立校正曲线

[0043] 用样品空白液校准液相色谱仪零点，以测定样品相同的液相色谱条件测定标样1#、2#、3#、4#、5#溶液，仪器自动绘制校正曲线。

[0044] 4、样品溶液制备

[0045] 取酰胺油2.5g，用纯水溶解，并定容至25mL，摇匀，得A溶液；从A溶液中移取5mL，用80％的乙腈定容至25mL，摇匀，得样品溶液B液。

[0046] 5、液相色谱仪条件设定：

[0047] 仪器为安捷伦液相色谱1260，

[0048] 流动相为混合溶液：10mmol缓冲盐＝98：2，等度洗脱；

[0049] 流速：0.4mL/min；

[0050] 检测波长：200nm；

[0051] 检测器：紫外-可见光检测器；

[0052] 柱温：40℃；

[0053] 进样量：20μL；

[0054] CAPCELL CORE PC S2.7，2.1mml.d×150mm。

[0055] 6、样品测定：待仪器的基线稳定后，测定标液和B液，先注入标液，两次注入标液的面积变化小于1％后，进行B液测定，在两次标液注入的中间注入B液。

[0056] 其中标样的色谱图见图1，B液的色谱图见图2，根据外标法计算B液中氨基己酸的含量为42.63mg/L，并根据稀释倍数计算出样品中氨基己酸含量为0.1060wt％。

[0057] 7、标准回收试验见表1

[0058]

[0059] 表1

[0060] 结论：加标回收的结论:回收率为92％—106％，满足分析需求。

[0061] 8、精密度试验

[0062] 对同一份样品在优化条件下连续测定10次，相对标准偏差为3.45％。

[0063] 该实施例应理解为仅用于说明本发明而不是用于限制本发明的保护范围。在阅读了本发明记载的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等效变化和修饰同样落入本发明权利要求书所限定的范围。