人免疫缺陷病毒复制的抑制剂转让专利
申请号 : CN201480026834.8
文献号 : CN105189511B
文献日 : 2017-05-24
发明人 : B.N.奈杜 , M.佩特尔 , K.皮斯 , 王中玉
申请人 : 百时美施贵宝公司
摘要 :
本公开大体上涉及用于治疗人免疫缺陷病毒(HIV)感染的式I的化合物，包括组合物和方法。本公开提供新型HIV抑制剂，含有此类化合物的药物组合物，以及使用这些化合物治疗HIV感染的方法。
权利要求 :
1.化合物，选自
(2S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-(5-氯-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸；
(2S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-(5-氯-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸；
(2S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-(6-氯-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸；
(2S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-5-甲基-2-(5-苯基-
1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸；
(2S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸；
(2S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-2-(5-(4-氟苄基)噁唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸；
(2S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-2-(3-(4-氟苄基)-1,
2,4-噁二唑-5-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸；
(2S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-2-(5-(4-氟苯基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸；
(2S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-2-(5-(3-氟苯基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸；
(S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)-2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸；
(S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基环己基)-2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸；
(S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)-2-(5-(4-氟苄基)噁唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸；
(S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸；
(2S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-2-(5-(1-(4-氟苯基)乙基)噻唑-
2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸；
(S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-2-(5-(4-氟-3-甲基苄基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸；
(S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-2-(5-(4-氟苯乙基)噻唑-2-基)-
5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸；
(S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4-乙基-4-甲基哌啶-1-基)-2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-
5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸；
(S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-7-(4-羟基-4-甲基哌啶-1-基)-
5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸；
(S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-5-甲基-7-(4-甲基-5,6-二氢吡啶-1(2H)-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸；
(S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-5-甲基-7-(4-苯基-5,6-二氢吡啶-1(2H)-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸；
(S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-7-(4-(羟基甲基)-4-甲基哌啶-
1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸；
(S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-7-(4-甲氧基-4-甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸；
(S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-5-甲基-7-(4-甲基-4-乙烯基哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸；
(S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4-环丙基-4-甲基哌啶-1-基)-2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸；
(S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-2-(5-(4-氟苄基)噻吩-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸；
(S)-2-(2-(3-苄基-2-氧代咪唑烷-1-基)-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-(叔丁氧基)乙酸；
(2S)-2-(2-(4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-基)-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-(叔丁氧基)乙酸；
(2S)-2-(2-(5-苄基-2-氧代噁唑烷-3-基)-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-(叔丁氧基)乙酸；
(2S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基-2-(2-氧代-3-苯氧基吡咯烷-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸；
(S)-2-(2-(4-苄基-1H-吡唑-1-基)-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-(叔丁氧基)乙酸；
(S)-2-(2-(4-苄基-1H-咪唑-1-基)-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-(叔丁氧基)乙酸；
(S)-2-(2-(5 苄基-1H-吡唑-1-基)-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-(叔丁氧基)乙酸；
(S)-2-(2-(3-苄基-1H-吡唑-1-基)-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-(叔丁氧基)乙酸；
(S)-2-(7-(4-(烯丙氧基)-4-甲基哌啶-1-基)-2-(4-(2-(烯丙氧基)苄基)-1H-吡唑-
1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-(叔丁氧基)乙酸；
(S)-2-(2-(4-苄基-3-氯-1H-吡唑-1-基)-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-(叔丁氧基)乙酸；
(S)-2-(2-(1-苄基-1H-吡唑-4-基)-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-(叔丁氧基)乙酸；
(S)-2-(7-(4-(烯丙氧基)-4-甲基哌啶-1-基)-2-(1-苄基-1H-吡唑-4-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-(叔丁氧基)乙酸；和(S)-2-(7-(4-(烯丙氧基)-4-甲基哌啶-1-基)-2-(1-苄基-1H-咪唑-4-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-(叔丁氧基)乙酸或其可药用盐。
2.用于治疗HIV感染的组合物，包含治疗量的权利要求1的化合物和可药用载体。
3.权利要求2的组合物，还包含治疗有效量的至少一种用于治疗AIDS或HIV感染的其它药剂和可药用载体，所述其它药剂选自核苷HIV逆转录酶抑制剂、非核苷HIV逆转录酶抑制剂、HIV蛋白酶抑制剂、HIV融合抑制剂、 HIV吸附抑制剂、CCR5抑制剂、CXCR4抑制剂、HIV出芽或成熟抑制剂和HIV整合酶抑制剂。
4.权利要求1的化合物或其可药用盐在制备用于治疗HIV感染的药物中的用途。
5.权利要求4的用途，其中所述药物还包含至少一种用于治疗AIDS或HIV感染的其它药剂，所述其它药剂选自核苷HIV逆转录酶抑制剂、非核苷HIV逆转录酶抑制剂、HIV蛋白酶抑制剂、HIV融合抑制剂、HIV吸附抑制剂、CCR5抑制剂、CXCR4抑制剂、HIV出芽或成熟抑制剂和HIV整合酶抑制剂。
说明书 :
人免疫缺陷病毒复制的抑制剂
[0001] 相关申请的交叉引用
[0002] 本申请要求2013年3月13日提交的美国临时专利申请系列No.61/779,858的优先权，其全文经此引用并入本文。
[0003] 发明背景
[0004] 本公开大体上涉及用于治疗人免疫缺陷病毒（HIV）感染的化合物、组合物和方法。本公开提供HIV的新型抑制剂、含有此类化合物的药物组合物和使用这些化合物治疗HIV感染的方法。
[0005] 人免疫缺陷病毒（HIV）已被确认为是造成获得性免疫缺陷综合征（AIDS）（一种以免疫系统破坏和不能对抗威胁生命的机会性感染为特征的绝症）的病原体。最近的统计数据表明全球多达三千三百三十万人感染该病毒（UNAIDS Report on the Global AIDS Epidemic 2010）。除大量已感染的个体外，该病毒还在继续传播。来自1998年的估算指出仅该年就有接近6百万新感染。同年与HIV和AIDS相关的死亡病例有大约两百五十万起。
[0006] 目前有许多抗病毒药物可用于对抗该感染。这些药物可基于它们靶向的病毒蛋白质或它们的作用模式分类。特别地，沙奎那韦、茚地那韦、利托那韦、奈非那韦、阿扎那韦、地瑞那韦、安普那韦、福沙那韦、洛匹那韦和替拉那韦是HIV表达的天冬氨酰蛋白酶的竞争性抑制剂。齐多夫定、去羟肌苷、司他夫定、拉米夫定、扎西他滨、恩曲他滨、替诺福韦和阿巴卡韦是表现为底物模拟物以终止病毒cDNA合成的核苷（核苷酸）逆转录酶抑制剂。非核苷逆转录酶抑制剂奈韦拉平、地拉韦定、依法韦仑和依曲韦林通过非竞争（或无竞争）机制抑制病毒cDNA的合成。恩夫韦地和马拉韦罗抑制病毒进入宿主细胞。HIV整合酶抑制剂雷特格韦（MK-0518, Isentress®）也已被批准用于有治疗经验的患者，并且清楚的是，这种类型的抑制剂作为含有不同种类的HIV抑制剂的联合方案的一部分非常有效。
[0007] 独自使用时，这些药物有效减少病毒复制：但是，该效果只是暂时的，因为病毒容易对用作单一疗法的所有已知试剂产生耐药性。另一方面，联合治疗在许多患者中已证实对减少病毒和抑制耐药性的出现都非常有效。在联合治疗广泛普及的美国，HIV相关死亡的数量已急剧下降（Palella, F. J.；Delany, K. M.；Moorman, A. C.；Loveless, M. O.；Furher, J.；Satten, G. A.；Aschman, D. J.；Holmberg, S. D. N. Engl. J. Med.
1998, 338, 853-860）。
1998, 338, 853-860）。
[0008] 遗憾地，并非所有患者都有响应并且许多对这种治疗无效。实际上，最初的研究表明，该抑制性联合治疗中的至少一种药物最终对大约30-50%的患者无效。治疗失败在大多数情况下由病毒耐药性的出现造成。病毒耐药性又由HIV-1在感染过程中的复制速率以及与病毒聚合酶有关的相对较高的病毒突变速率和HIV感染个体在服用他们的处方药物时缺乏依从性造成。显然需要优选对已耐受目前批准药物的病毒具有活性的新抗病毒剂。其它重要的因素包括与许多目前批准药物相比改进的安全性和更方便的给药方案。
[0009] 已经公开了抑制HIV复制的化合物。参见WO2007131350、WO2009062285、WO2009062288、WO2009062289、WO2009062308、WO2010130034、WO2010130842、
WO2011015641、WO2011076765、WO2012003497、WO2012003498、WO2012033735、WO2012065963和WO2012066442。
WO2011015641、WO2011076765、WO2012003497、WO2012003498、WO2012033735、WO2012065963和WO2012066442。
[0010] 本发明提供技术优点，例如，该化合物新颖并可用于治疗HIV。另外，该化合物例如在它们的作用机制、结合力、抑制效力、靶选择性、可溶性、安全性或生物利用率的一个或多个方面提供药用优点。
[0011] 发明描述
[0012] 本发明包含式I化合物，包括可药用盐，其药物组合物，及其抑制HIV整合酶和治疗HIV或AIDS感染的用途。
[0013] 本发明的一个方面是式I化合物或其可药用盐
[0014]
[0015] 其中：
[0016] R1是吡咯基、呋喃基、噻吩基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、咪唑基、噁唑基、噻唑基、三唑基、噁二唑基、噻二唑基、吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、或苯并咪唑基，并且被0-3个选自卤素、烷基、卤代烷基、烯基、Ar1、(Ar1)烷基和(Ar1)O的取代基取代；
[0017] 或R1是吡咯烷酮基、噁唑烷酮基或咪唑啉酮基，并且被0-1个选自Ar1、(Ar1)烷基和(Ar1)O的取代基取代；
[0018] R2是氢、卤素或烷基；
[0019] R3是氮杂环丁烷基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、高哌啶基、高哌嗪基或高吗啉基，并且被0-3个选自卤素、烷基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、烯基、环烷基、羟基、烷氧基、卤代烷氧基、烯氧基和苯基的取代基取代；
[0020] 或R3是环烷基、环烯基、苯并二氢吡喃基、噁嗪基或二氢吡喃并喹啉基，并且被0-3个选自卤素、烷基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、烯基、环烷基、羟基、烷氧基、卤代烷氧基、烯氧基和苯基的取代基取代；
[0021] R4是烷基或卤代烷基；
[0022] R5是烷基；且
[0023] Ar1是被0-3个选自卤素、氰基、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基和烯氧基的取代基取代的苯基。
[0024] 本发明的另一方面是式I化合物或其可药用盐，其中
[0025] R1是噻吩基, 吡唑基, 咪唑基, 噁唑基, 噻唑基, 噁二唑基, 吲哚基, 苯并呋喃基, 苯并噻吩基或苯并咪唑基，并且被0-3个选自卤素、烷基、卤代烷基、烯基、Ar1、(Ar1)烷基和(Ar1)O的取代基取代；
[0026] 或R1是吡咯烷酮基、噁唑烷酮基或咪唑啉酮基，并且被0-1个选自Ar1、(Ar1)烷基和(Ar1)O的取代基取代；
[0027] R2是氢、卤素或烷基；
[0028] R3是被0-3个选自卤素、烷基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、烯基、环烷基、羟基、烷氧基、卤代烷氧基、烯氧基和苯基的取代基取代的哌啶基；
[0029] 或R3是环烷基、环烯基、苯并二氢吡喃基、噁嗪基或二氢吡喃并喹啉基，并且被0-3个选自卤素、烷基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、烯基、环烷基、羟基、烷氧基、卤代烷氧基、烯氧基和苯基的取代基取代；
[0030] R4是烷基或卤代烷基；
[0031] R5是烷基；且
[0032] Ar1是被0-3个选自卤素、氰基、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基和烯氧基的取代基取代的苯基。
[0033] 本发明的另一方面是式I化合物，其中R1是噻吩基、吡唑基、咪唑基、噁唑基、噻唑基、噁二唑基、吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基或苯并咪唑基，并且被0-3个选自卤素、烷基、卤代烷基、烯基、Ar1、(Ar1)烷基和(Ar1)O的取代基取代。
[0034] 本发明的另一方面是式I化合物，其中R1是吡咯烷酮基、噁唑烷酮基或咪唑啉酮基，并且被0-1个选自Ar1、(Ar1)烷基和(Ar1)O的取代基取代。
[0035] 本发明的另一方面是式I化合物，其中R2是氢。
[0036] 本发明的另一方面是式I化合物，其中R3是被0-3个选自卤素、烷基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、烯基、环烷基、羟基、烷氧基、卤代烷氧基、烯氧基和苯基的取代基取代的哌啶基。
[0037] 本发明的另一方面是式I化合物，其中R3是环烷基、环烯基、苯并二氢吡喃基、噁嗪基或二氢吡喃并喹啉基，并且被0-3个选自卤素、烷基、卤代烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、烯基、环烷基、羟基、烷氧基、卤代烷氧基、烯氧基和苯基的取代基取代。
[0038] 本发明的另一方面是式I化合物，其中R4是烷基。
[0039] 对于式I化合物，可变取代基（包括R1、R2、R3、R4和Ar1）的任何实例的范围可独立地与可变取代基的任何其它实例的范围一起使用。
[0040] 除非另有规定，这些术语具有下列含义。“烷基”是指由1至6个碳构成的直链或支链烷基。“烯基”是指具有至少一个双键的由2至6个碳构成的直链或支链烷基。“亚烷基”是指由1至6个碳构成的直链或支链二价烷基。“亚烯基”是指具有至少一个双键的由2至6个碳构成的直链或支链二价烯基。“环烷基”是指由3至7个碳构成的单环环系。“羟基烷基”、“烷氧基”和具有取代烷基部分的其它术语包括就烷基部分而言由1至6个碳原子构成的直链和支链异构体。“卤素”包括氟、氯、溴和碘。在用卤素规定的取代基，例如“卤代烷基”和“卤代烷氧基”、“卤代苯基”、“卤代苯氧基”中，“卤代”包括从单卤代到全卤代的所有卤代异构体。“芳基”包括碳环和杂环芳族取代基。通过化学结构式 显示键合在多环体系（例如双环环系）上的可变位置的取代基旨在键合到它们在结构式 中附着到的环上。括号和多括号术语旨在向本领域技术人员阐明键合关系。例如，((R)烷基)之类的术语是指被取代基R进一步取代的烷基取代基。
[0041] 本发明包括该化合物的所有可药用盐形式。可药用盐是抗衡离子不会显著影响该化合物的生理活性或毒性并因此充当药理等效物的那些盐。可以根据常见有机技术使用市售试剂制备这些盐。一些阴离子盐形式包括乙酸盐、醋硬脂酸盐、苯磺酸盐、溴化物、氯化物、柠檬酸盐、富马酸盐、葡糖醛酸盐、氢溴酸盐、盐酸盐、氢碘酸盐、碘化物、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、硝酸盐、双羟萘酸盐（pamoate）、磷酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐和xinofoate。一些阳离子盐形式包括铵、铝、苄星青霉素、铋、钙、胆碱、二乙基胺、二乙醇胺、锂、镁、葡甲胺、4-苯基环己基胺、哌嗪、钾、钠、氨丁三醇和锌。
[0042] 本发明的一些化合物以立体异构形式存在。本发明包括该化合物的所有立体异构形式，包括对映体和非对映体。制备和分离立体异构体的方法是本领域中已知的。本发明包括该化合物的所有互变异构形式。本发明包括阻转异构体和旋转异构体。
[0043] 本发明意在包括本化合物中出现的原子的所有同位素。同位素包括具有相同原子序数但不同质量数的那些原子。作为一般实例而非限制，氢的同位素包括氘和氚。碳的同位13 14
素包括 C和 C。本发明的同位素标记化合物通常可通过本领域技术人员已知的常规技术
或通过与本文描述的那些类似的方法使用适当的同位素标记试剂代替原本使用的未标记
试剂来制备。这样的化合物具有各种潜在用途，例如作为测定生物活性中的标样和试剂。在稳定同位素的情况下，这样的化合物具有有利地改变生物、药理学或药代动力学性质的潜力。
素包括 C和 C。本发明的同位素标记化合物通常可通过本领域技术人员已知的常规技术
或通过与本文描述的那些类似的方法使用适当的同位素标记试剂代替原本使用的未标记
试剂来制备。这样的化合物具有各种潜在用途，例如作为测定生物活性中的标样和试剂。在稳定同位素的情况下，这样的化合物具有有利地改变生物、药理学或药代动力学性质的潜力。
[0044] 生物方法
[0045] HIV复制的抑制.构建重组NL-Rluc病毒，其中来自NL4-3的nef基因的一个部分被海肾荧光素酶基因替代。通过两个质粒pNLRLuc和pVSVenv的共转染制备NL-Rluc病毒。
pNLRLuc含有在PvuII位置克隆到pUC18中的NL-Rluc DNA，而pVSVenv含有连接到LTR启动子上的VSV G蛋白质的基因。使用来自Invitrogen (Carlsbad, CA)的LipofectAMINE PLUS试剂盒根据制造商的指示在293T细胞中以1:3的pNLRLuc : pVSVenv比率进行转染，并在MT-2细胞中滴定生成的假型病毒。关于敏感性分析，在化合物存在下使用滴定的病毒感染MT-2细胞，并在培养5天后，处理细胞并通过表达的荧光素酶的量量化病毒生长。这提供用于量化病毒生长程度和因此量化受试化合物的抗病毒活性的简单容易的方法。使用来自
Promega (Madison, WI)的Dual Luciferase试剂盒量化荧光素酶。
pNLRLuc含有在PvuII位置克隆到pUC18中的NL-Rluc DNA，而pVSVenv含有连接到LTR启动子上的VSV G蛋白质的基因。使用来自Invitrogen (Carlsbad, CA)的LipofectAMINE PLUS试剂盒根据制造商的指示在293T细胞中以1:3的pNLRLuc : pVSVenv比率进行转染，并在MT-2细胞中滴定生成的假型病毒。关于敏感性分析，在化合物存在下使用滴定的病毒感染MT-2细胞，并在培养5天后，处理细胞并通过表达的荧光素酶的量量化病毒生长。这提供用于量化病毒生长程度和因此量化受试化合物的抗病毒活性的简单容易的方法。使用来自
Promega (Madison, WI)的Dual Luciferase试剂盒量化荧光素酶。
[0046] 通过在该化合物的连续稀释液存在下培养，测定病毒对化合物的敏感性。使用中效方程的指数形式计算50%有效浓度（EC50），其中(Fa) = 1/[1+ (ED50/药物浓度)m]（Johnson VA, Byington RT. Infectivity Assay. In Techniques in HIV Research. ed. Aldovini A, Walker BD. 71-76. New York: Stockton Press.1990）。在三种血清条件下评估化合物的抗病毒活性：10% FBS、15mg/ml人血清白蛋白/10% FBS或40%人血清/5% FBS，并使用来自至少2个实验的结果计算EC50值。结果显示于表1中。
[0047]
[0048] 药物组合物和使用方法
[0049] 本发明的化合物抑制HIV复制。因此，本发明的另一方面是治疗人类患者的HIV感染的方法，其包括与可药用载体一起给予治疗有效量的式I的化合物或其可药用盐。
[0050] 本发明的另一方面是式I的化合物在制备用于治疗AIDS或HIV感染的药物中的用途。
[0051] 本发明的另一方面是治疗人类患者的HIV感染的方法，其包括与治疗有效量的至少一种用于治疗AIDS或HIV感染的其它药剂一起给予治疗有效量的式I的化合物或其可药
用盐，所述其它药剂选自核苷HIV逆转录酶抑制剂、非核苷HIV逆转录酶抑制剂、HIV蛋白酶抑制剂、HIV融合抑制剂、HIV吸附抑制剂、CCR5抑制剂、CXCR4抑制剂、HIV出芽或成熟抑制剂和HIV整合酶抑制剂。
用盐，所述其它药剂选自核苷HIV逆转录酶抑制剂、非核苷HIV逆转录酶抑制剂、HIV蛋白酶抑制剂、HIV融合抑制剂、HIV吸附抑制剂、CCR5抑制剂、CXCR4抑制剂、HIV出芽或成熟抑制剂和HIV整合酶抑制剂。
[0052] 本发明的另一方面是一种方法，其中所述药剂是核苷HIV逆转录酶抑制剂。
[0053] 本发明的另一方面是一种方法，其中所述核苷HIV逆转录酶抑制剂选自阿巴卡韦、去羟肌苷、恩曲他滨、拉米夫定、司他夫定、替诺福韦、扎西他滨和齐多夫定或其可药用盐。
[0054] 本发明的另一方面是一种方法，其中所述药剂是非核苷HIV逆转录酶抑制剂。
[0055] 本发明的另一方面是一种方法，其中所述非核苷HIV逆转录酶抑制剂选自地拉韦定、依法韦仑和奈韦拉平或其可药用盐。
[0056] 本发明的另一方面是一种方法，其中所述药剂是HIV蛋白酶抑制剂。
[0057] 本发明的另一方面是一种方法，其中所述HIV蛋白酶抑制剂选自安普那韦、阿扎那韦、茚地那韦、洛匹那韦、奈非那韦、利托那韦、沙奎那韦和福沙那韦或其可药用盐。
[0058] 本发明的另一方面是一种方法，其中所述药剂是HIV融合抑制剂。
[0059] 本发明的另一方面是一种方法，其中所述HIV融合抑制剂是恩夫韦地或T-1249或其可药用盐。
[0060] 本发明的另一方面是一种方法，其中所述药剂是HIV吸附抑制剂。
[0061] 本发明的另一方面是一种方法，其中所述药剂是CCR5抑制剂。
[0062] 本发明的另一方面是一种方法，其中所述CCR5抑制剂选自Sch-C、Sch-D、TAK-220、PRO-140和UK-427,857或其可药用盐。
[0063] 本发明的另一方面是一种方法，其中所述药剂是CXCR4抑制剂。
[0064] 本发明的另一方面是一种方法，其中所述CXCR4抑制剂是AMD-3100或其可药用盐。
[0065] 本发明的另一方面是一种方法，其中所述药剂是HIV出芽或成熟抑制剂。
[0066] 本发明的另一方面是一种方法，其中所述出芽或成熟抑制剂是PA-457或其可药用盐。
[0067] 本发明的另一方面是一种方法，其中所述药剂是HIV整合酶抑制剂。
[0068] 本发明的另一方面是一种药物组合物，其包含治疗有效量的式I的化合物或其可药用盐与至少一种用于治疗AIDS或HIV感染的其它药剂和可药用载体，所述其它药剂选自核苷HIV逆转录酶抑制剂、非核苷HIV逆转录酶抑制剂、HIV蛋白酶抑制剂、HIV融合抑制剂、HIV吸附抑制剂、CCR5抑制剂、CXCR4抑制剂、HIV出芽或成熟抑制剂和HIV整合酶抑制剂。
[0069] 本发明的另一方面是所述组合物，其中所述药剂是核苷HIV逆转录酶抑制剂。
[0070] 本发明的另一方面是所述组合物，其中所述核苷HIV转录酶抑制剂选自阿巴卡韦、去羟肌苷、恩曲他滨、拉米夫定、司他夫定、替诺福韦、扎西他滨和齐多夫定或其可药用盐。
[0071] 本发明的另一方面是所述组合物，其中所述药剂是非核苷HIV逆转录酶抑制剂。
[0072] 本发明的另一方面是所述组合物，其中所述非核苷HIV逆转录酶抑制剂选自地拉韦定、依法韦仑和奈韦拉平或其可药用盐。
[0073] 本发明的另一方面是所述组合物，其中所述药剂是HIV蛋白酶抑制剂。
[0074] 本发明的另一方面是所述组合物，其中所述HIV蛋白酶抑制剂选自安普那韦、阿扎那韦、茚地那韦、洛匹那韦、奈非那韦、利托那韦、沙奎那韦和福沙那韦或其可药用盐。
[0075] 本发明的另一方面是所述组合物，其中所述药剂是HIV融合抑制剂。
[0076] 本发明的另一方面是所述组合物方法，其中所述HIV融合抑制剂是恩夫韦地或T-1249或其可药用盐。
[0077] 本发明的另一方面是所述组合物，其中所述药剂是HIV吸附抑制剂。
[0078] 本发明的另一方面是所述组合物，其中所述药剂是CCR5抑制剂。
[0079] 本发明的另一方面是所述组合物，其中所述CCR5抑制剂选自Sch-C、Sch-D、TAK-220、PRO-140和UK-427,857或其可药用盐。
[0080] 本发明的另一方面是一种方法，其中所述药剂是CXCR4抑制剂。
[0081] 本发明的另一方面是一种方法，其中所述CXCR4抑制剂是AMD-3100或其可药用盐。
[0082] 本发明的另一方面是所述组合物，其中所述药剂是HIV出芽或成熟抑制剂。
[0083] 本发明的另一方面是所述组合物，其中所述出芽或成熟抑制剂是PA-457或其可药用盐。
[0084] 本发明的另一方面是所述组合物，其中所述药剂是HIV整合酶抑制剂。
[0085] 关于式I的化合物与至少一种抗-HIV剂一起给药，“联合”、“共同给药”、“同时”和类似术语是指这些组分是如AIDS和HIV感染领域的专业人员所理解的联合抗逆转录病毒疗法或高效抗逆转录病毒疗法（HAART）的一部分。
[0086] “治疗有效”是指提供如AIDS和HIV感染领域的专业人员所理解的有意义的患者益处所需的药剂量。一般而言，治疗目标是抑制病毒载量、恢复和保持免疫功能、改进的生活质量和HIV相关的发病率和死亡率的降低。
[0087] “患者”是指如AIDS和HIV感染领域的专业人员所理解的感染HIV病毒并适合治疗的人。
[0088] “治疗”、“疗法”、“方案”、“HIV感染”、“ARC”、“AIDS”和相关术语如AIDS和HIV感染领域的专业人员理解的那样使用。
[0089] 本发明的化合物通常作为由治疗有效量的式I的化合物或其可药用盐和可药用载体构成的药物组合物提供并可能含有常规赋形剂。治疗有效量是提供有意义的患者益处所需的量。可药用载体是具有可接受的安全性的那些常规已知的载体。组合物包括所有常见的固体和液体形式，包括胶囊、片剂、锭剂和粉剂以及液体混悬剂、糖浆、酏剂和溶液剂。使用常见配制技术制备组合物，并且常规赋形剂（如粘合和润湿剂）和媒介物（如水和醇）常用于组合物。参见例如Remington’s Pharmaceutical Sciences, 第17版, Mack Publishing Company, Easton, PA (1985)。
[0090] 固体组合物通常以剂量单位配制，且每剂提供大约1至1000毫克活性成分的组合物是优选的。剂量的一些实例是1毫克、10毫克、100毫克、250毫克、500毫克和1000毫克。通常，其它抗逆转录病毒剂在与临床使用的这类药剂类似的单位范围内存在。通常，这是
0.25-1000毫克/单位。
0.25-1000毫克/单位。
[0091] 液体组合物通常在剂量单位范围内。通常，该液体组合物在1-100毫克/毫升的单位剂量范围内。剂量的一些实例是1毫克/毫升、10毫克/毫升、25毫克/毫升、50毫克/毫升和100毫克/毫升。通常，其它抗逆转录病毒剂在与临床使用的这类药剂类似的单位范围内存在。通常，这是1-100毫克/毫升。
[0092] 本发明包括所有常规给药模式；口服和肠道外方法是优选的。通常，给药方案类似于临床使用的其它抗逆转录病毒剂。通常，日剂量为每天1-100毫克/公斤体重。通常，口服需要的化合物较多，肠道外较少。但是，医生将利用合理的医疗判断确定具体给药方案。
[0093] 本发明还包括在联合疗法中提供该化合物的方法。也就是说，该化合物可以与可用于治疗AIDS和HIV感染的其它药剂联合但分开使用。这些药剂的一些包括HIV吸附抑制剂、CCR5抑制剂、CXCR4抑制剂、HIV细胞融合抑制剂、HIV整合酶抑制剂、HIV核苷逆转录酶抑制剂、HIV非核苷逆转录酶抑制剂、HIV蛋白酶抑制剂、出芽和成熟抑制剂、免疫调节剂和抗感染药。在这些联合方法中，式I的化合物通常以每天1-100毫克/公斤体重的日剂量与其它药剂联合给药。所述其它药剂通常以治疗上使用的量给药。但是，医生将利用合理的医疗判断确定具体给药方案。
[0094] 合成方法
[0095] 本发明的化合物可通过本领域已知的各种方法制备，包括下列方案和具体实施方案部分的那些。合成方案中所示的结构编号和变量编号不同于并且不应混淆于权利要求或说明书其余部分中的结构或变量编号。方案中的变量仅意在例示如何制备本发明的一些化合物。本公开不限于上述示例性实例且这些实例应在所有方面被视为示例性而非限制性的，参考所附权利要求书而非上述实例，因此意在涵盖落在权利要求书的含义和等同范围内的所有变化。
[0096] 方案和实施例中所用的缩写通常遵循本领域中使用的惯例。说明书和实施例中所用的化学缩写如下定义：“KHMDS”为双(三甲基甲硅烷基)氨基钾；"DMF"为N,N-二甲基甲酰胺；“HATU”为六氟磷酸O-(t-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓，“MeOH”为甲醇；“Ar”为芳基；"TFA"为三氟乙酸，“DMSO”为二甲亚砜；“h”为小时；“rt”为室温或保留时间（上下文会规定）；“min”为分钟；"EtOAc"为乙酸乙酯；"THF"为四氢呋喃；“Et2O”为乙醚；"DMAP"为4-二甲基氨基吡啶；“DCE”为1,2-二氯乙烷；“ACN”为乙腈；“DME”为1,2-二甲氧基乙烷；
“HOBt”为水合1-羟基苯并三唑；和“DIEA”为二异丙基乙胺。
“HOBt”为水合1-羟基苯并三唑；和“DIEA”为二异丙基乙胺。
[0097] 本文所用的缩写如下定义：“1 x”为一次，“2 x”为两次，“3 x”为三次，"℃"为摄氏度，“eq”为当量，“g”为克，“mg”为毫克，“L”为升，“mL”为毫升，“μL”为微升，“N”为当量浓度（normal），“M”为摩尔浓度，“mmol”为毫摩尔，“atm”为大气压，“psi”为磅/平方英寸，“conc.”为浓缩，“sat”或“sat’d”为饱和，“MW”为分子量，“mp”为熔点，“ee”为对映异构过量，“MS”或“Mass Spec”为质谱法，“ESI”为电喷雾电离质谱法，“HR”为高分辨率，“HRMS”为高分辨质谱法，“LCMS”为液相色谱-质谱法，“HPLC”为高压液相色谱法，“RP HPLC”为反相HPLC，“TLC”或“tlc”为薄层色谱法，“NMR”为核磁共振波谱法，“1H”为质子，“δ”为delta，“s”为单峰，“d”为双重峰，“t”为三重峰，“q”为四重峰，“m”为多重峰，“br”为宽，“Hz”为赫兹，且“α”、“β”、“R”、“S”、“E”和“Z”为本领域技术人员熟悉的立体化学名称。
[0098] 一些化合物可根据方案I由适当取代的杂环I-1合成，化合物I-1和I-2是商购的或通过本领域公知的反应合成。中间体I-3可通过本领域公知的程序制备或如以下实施例中所述使用化合物I-1和化合物I-2制备。中间体I-3 可方便地使用本领域技术人员公知的条件经由中间体I-4转化为中间体I-5。中间体I-5通过本领域公知的反应包括但不限于Davis 氧化，氧化为中间体I-6。中间体I-6通过公知的条件包括但不限于Dess-Martin氧化，氧化为中间体I-7。中间体I-7在催化手性配体的存在下使用公知的条件还原为手性中间体I-8。中间体I-8 通过公知的条件包括但不限于乙酸叔丁酯和高氯酸转化为中间体I-9。中间体I-9使用本领域公知的条件包括但不限于中间体I-9和R4-B(OR)2之间的Suzuki偶联方便地转化为中间体I-10。硼酸酯或硼酸偶联剂是商购的或通过本领域技术人员公知的反应
(PCT Appln. WO20090662285)制备。二酯中间体I-10通过本领域公知的方法区域选择性地转化为单羧酸中间体I-11。中间体I-11通过本领域技术人员公知的条件包括但不限于HATU和适当的碱接着在酸性条件下环化方便地转化为中间体I-12。中间体I-12通过文献中公知的条件转化为最终化合物I-13。此外，中间体I-12也可以通过使用本领域技术人员公知的条件烷基化接着水解来转化为最终化合物I-13。
(PCT Appln. WO20090662285)制备。二酯中间体I-10通过本领域公知的方法区域选择性地转化为单羧酸中间体I-11。中间体I-11通过本领域技术人员公知的条件包括但不限于HATU和适当的碱接着在酸性条件下环化方便地转化为中间体I-12。中间体I-12通过文献中公知的条件转化为最终化合物I-13。此外，中间体I-12也可以通过使用本领域技术人员公知的条件烷基化接着水解来转化为最终化合物I-13。
[0099] 方案I.
[0100]
[0101] 中间体I-6可通过如方案II中概述的本领域已知的方法转化为最终化合物II-3。
[0102] 方案II
[0103]
[0104] 中间体I-9可通过如方案III中概述的本领域已知的方法转化为最终化合物III-6。
[0105] 方案III
[0106]
[0107] 中间体IV-1可通过如方案IV中概述的本领域已知的方法转化为最终化合物IV-8。
[0108] 方案IV
[0109]
[0110] 本文所述的化合物通过本领域技术人员已知的方法通过硅胶柱上的正相柱色谱法使用适当的溶剂体系来提纯。本文实验章节中提到的制备HPLC提纯通过C18制备柱 (5 μm) 上使用以下流动相的梯度洗脱进行：流动相A: 9:1 H2O/乙腈含10 mM NH4OAc 和流动相B : A: 9:1 乙腈/H2O含10 mM NH4OAc或流动相A: 95:5 H2O/MeOH含20 mM NH4OAc和流动相B: 95:5 MeOH/H2O含20 mM NH4OAc。
[0111] 中间体1
[0112]
[0113] 6-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-羟基-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯。使用Dean-Stork 冷凝器将5-氨基-1H-吡唑-3-甲酸乙酯 (35.5 g, 229 mmol, 根据WO
2008015271制备)、2-乙酰基琥珀酸二乙酯 (51.2 mL, 275 mmol)和TsOH·H2O (0.218 g,
1.144 mmol)于邻二甲苯 (500 mL)中的悬浮液回流5 h。(注：该悬浮液变为清澈均匀的溶液，然后在约15分钟内从溶液中沉淀析出黄色固体)。然后，将反应混合物冷却，用己烷(250 mL)稀释，过滤，用己烷洗涤并干燥得到 6-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-羟基-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯 (53 g, 75 %收率)，为浅黄色固体。
2008015271制备)、2-乙酰基琥珀酸二乙酯 (51.2 mL, 275 mmol)和TsOH·H2O (0.218 g,
1.144 mmol)于邻二甲苯 (500 mL)中的悬浮液回流5 h。(注：该悬浮液变为清澈均匀的溶液，然后在约15分钟内从溶液中沉淀析出黄色固体)。然后，将反应混合物冷却，用己烷(250 mL)稀释，过滤，用己烷洗涤并干燥得到 6-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-羟基-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯 (53 g, 75 %收率)，为浅黄色固体。
[0114]
[0115] 中间体2
[0116]
[0117] 7-氯-6-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯。将6-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-羟基-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯 (25 g, 81
mmol)和N,N-二甲基苯胺 (20.6 mL, 163 mmol)于POCl3 (100 mL)中的混合物在120℃加
热3 h。然后将反应冷却至室温并真空浓缩至一半体积。将其倒入大量冰水中并搅拌20
min。形成沉淀并通过过滤收集。将该固体溶于乙酸乙酯(1 L)并用水洗涤。水相用乙酸乙酯反萃，合并的有机层用盐水 (200 mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并真空浓缩。然后粗产物用EtOAc/己烷研磨以得到7-氯-6-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯 (22 g, 67.5 mmol, 83 % 收率)，为浅黄色固体。
mmol)和N,N-二甲基苯胺 (20.6 mL, 163 mmol)于POCl3 (100 mL)中的混合物在120℃加
热3 h。然后将反应冷却至室温并真空浓缩至一半体积。将其倒入大量冰水中并搅拌20
min。形成沉淀并通过过滤收集。将该固体溶于乙酸乙酯(1 L)并用水洗涤。水相用乙酸乙酯反萃，合并的有机层用盐水 (200 mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并真空浓缩。然后粗产物用EtOAc/己烷研磨以得到7-氯-6-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯 (22 g, 67.5 mmol, 83 % 收率)，为浅黄色固体。
[0118]
[0119] 中间体3
[0120]
[0121] 6-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-碘-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯。将7-氯-6-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯 (5 g, 15.35
mmol) 和碘化钠 (9.20 g, 61.4 mmol) 悬浮于乙腈 (80 mL)并将所得混合物在 80℃下
加热2 h。此时LCMS 表明反应完成并出现目标产物。在冷却至室温后，反应混合物用乙酸乙酯稀释并用水和Na2S2O3水溶液洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。然后粗产物用乙酸乙酯/己烷研磨以得到6-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-碘-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯
(5.7 g, 13.66 mmol, 89 % 收率)，为灰白色固体。
mmol) 和碘化钠 (9.20 g, 61.4 mmol) 悬浮于乙腈 (80 mL)并将所得混合物在 80℃下
加热2 h。此时LCMS 表明反应完成并出现目标产物。在冷却至室温后，反应混合物用乙酸乙酯稀释并用水和Na2S2O3水溶液洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。然后粗产物用乙酸乙酯/己烷研磨以得到6-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-碘-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯
(5.7 g, 13.66 mmol, 89 % 收率)，为灰白色固体。
[0122]
[0123] 中间体4
[0124]
[0125] 6-(2-乙氧基-1-羟基-2-氧代乙基)-7-碘-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯。在-78℃下向0.9M KHMDS/THF (39.1 mL, 35.2 mmol)于THF (100 mL)中的搅拌溶液中经5min添加6-(2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-碘-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯
(11.3 g, 27.1 mmol)的THF (50 mL)溶液。30 min后，向红色反应混合物中添加3-苯基-2-(苯基磺酰基)-1,2-氧杂氮杂环丙烷 (9.20 g, 35.2 mmol)的THF (50 mL)溶液并在-78℃下再搅拌30分钟。然后，所得橙色反应混合物用饱和NH4Cl (50 mL)淬灭，用EtOAc (200 mL)稀释，用水(100 mL)、盐水(100 mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩得到固体。该固体用少量乙酸乙酯研磨，过滤固体，用己烷洗涤并在高真空下干燥以得到6-(2-乙氧基-1-羟基-
2-氧代乙基)-7-碘-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯 (7.3 g, 16.85 mmol, 62.2 %收率)，为浅黄色固体。
(11.3 g, 27.1 mmol)的THF (50 mL)溶液。30 min后，向红色反应混合物中添加3-苯基-2-(苯基磺酰基)-1,2-氧杂氮杂环丙烷 (9.20 g, 35.2 mmol)的THF (50 mL)溶液并在-78℃下再搅拌30分钟。然后，所得橙色反应混合物用饱和NH4Cl (50 mL)淬灭，用EtOAc (200 mL)稀释，用水(100 mL)、盐水(100 mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩得到固体。该固体用少量乙酸乙酯研磨，过滤固体，用己烷洗涤并在高真空下干燥以得到6-(2-乙氧基-1-羟基-
2-氧代乙基)-7-碘-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯 (7.3 g, 16.85 mmol, 62.2 %收率)，为浅黄色固体。
[0126]
[0127] 中间体5
[0128]
[0129] 6-(2-乙氧基-2-氧代乙酰基)-7-碘-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯。向6-(2-乙氧基-1-羟基-2-氧代乙基)-7-碘-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯 (3.7
g, 6.41 mmol)于CH2Cl2 (80 mL)中的混合物中添加Dess-Martin氧化剂(2.72 g, 6.41
mmol)并将所得混合物在室温下搅拌1 hr。然后用乙酸乙酯 (500 mL)稀释并用饱和NaHCO3溶液 (100 mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩，残余物通过硅胶色谱法提纯 (5-70 % EtOAc/己烷) 以得到期望的 6-(2-乙氧基-2-氧代乙酰基)-7-碘-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯 (2.5 g, 5.80 mmol, 91 %收率)，为灰白色固体。
g, 6.41 mmol)于CH2Cl2 (80 mL)中的混合物中添加Dess-Martin氧化剂(2.72 g, 6.41
mmol)并将所得混合物在室温下搅拌1 hr。然后用乙酸乙酯 (500 mL)稀释并用饱和NaHCO3溶液 (100 mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩，残余物通过硅胶色谱法提纯 (5-70 % EtOAc/己烷) 以得到期望的 6-(2-乙氧基-2-氧代乙酰基)-7-碘-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯 (2.5 g, 5.80 mmol, 91 %收率)，为灰白色固体。
[0130]
[0131] 中间体6
[0132]
[0133] (S)-6-(2-乙氧基-1-羟基-2-氧代乙基)-7-碘-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯。向6-(2-乙氧基-2-氧代乙酰基)-7-碘-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯
(6.4 g, 14.84 mmol)于无水甲苯(300 mL)中的搅拌黄色溶液中添加1.1M (R)-1-甲基-3,
3-二苯基六氢吡咯并[1,2-c][1,3,2]氧杂氮杂硼杂环戊烯/甲苯 (5.40 mL, 5.94 mmol)。
将混合物冷却至-35℃并经10min添加50% 儿茶酚硼烷/甲苯溶液 (5.09 mL, 20.78
mmol)。30 min分钟后，将反应混合物缓慢升温至-15℃并搅拌另外2 h，然后用EtOAc (600 mL)和饱和 Na2CO3 (100 mL)稀释。将混合物剧烈搅拌30 min，有机相用饱和Na2CO3 (2 X
100 mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩，残余物通过硅胶色谱法 (5-100% EtOAc/己烷)提纯以得到期望的(S)-6-(2-乙氧基-1-羟基-2-氧代乙基)-7-碘-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧
啶-2-甲酸乙酯 (5.3 g, 12.23 mmol, 82 %收率)，为灰白色固体。
(6.4 g, 14.84 mmol)于无水甲苯(300 mL)中的搅拌黄色溶液中添加1.1M (R)-1-甲基-3,
3-二苯基六氢吡咯并[1,2-c][1,3,2]氧杂氮杂硼杂环戊烯/甲苯 (5.40 mL, 5.94 mmol)。
将混合物冷却至-35℃并经10min添加50% 儿茶酚硼烷/甲苯溶液 (5.09 mL, 20.78
mmol)。30 min分钟后，将反应混合物缓慢升温至-15℃并搅拌另外2 h，然后用EtOAc (600 mL)和饱和 Na2CO3 (100 mL)稀释。将混合物剧烈搅拌30 min，有机相用饱和Na2CO3 (2 X
100 mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩，残余物通过硅胶色谱法 (5-100% EtOAc/己烷)提纯以得到期望的(S)-6-(2-乙氧基-1-羟基-2-氧代乙基)-7-碘-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧
啶-2-甲酸乙酯 (5.3 g, 12.23 mmol, 82 %收率)，为灰白色固体。
[0134]
[0135] 中间体7
[0136]
[0137] (S)-6-(1-(叔丁氧基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-碘-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯。在室温下向(S)-6-(2-乙氧基-1-羟基-2-氧代乙基)-7-碘-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯 (5.3 g, 12.23 mmol)于CH2Cl2 (150 mL)和乙酸叔丁酯(105
mL)中的搅拌溶液中添加高氯酸(3.15 mL, 36.7 mmol)并将反应烧瓶密封。3 h后，反应混合物用CH2Cl2 (100 mL)稀释，用饱和NaHCO3 (50 mL)小心淬灭，分离有机层并用盐水(100 mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩得到黄色液体。将其通过硅胶柱上的快速柱色谱法提纯，使用(10-50% EtOAc/Hex 为洗脱剂)以得到期望的 (S)-6-(1-(叔丁氧基)-2-乙氧基-
2-氧代乙基)-7-碘-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯 (4.5 g, 8.28 mmol, 67.7 %收率)，为粘性油。还回收700 mg起始物料。
mL)中的搅拌溶液中添加高氯酸(3.15 mL, 36.7 mmol)并将反应烧瓶密封。3 h后，反应混合物用CH2Cl2 (100 mL)稀释，用饱和NaHCO3 (50 mL)小心淬灭，分离有机层并用盐水(100 mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩得到黄色液体。将其通过硅胶柱上的快速柱色谱法提纯，使用(10-50% EtOAc/Hex 为洗脱剂)以得到期望的 (S)-6-(1-(叔丁氧基)-2-乙氧基-
2-氧代乙基)-7-碘-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯 (4.5 g, 8.28 mmol, 67.7 %收率)，为粘性油。还回收700 mg起始物料。
[0138]
[0139] 中间体8
[0140]
[0141] 2-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷: 通过如参考文献WO 2009062285中所述的已知程序制备标题化合物。
[0142] 中间体9
[0143]
[0144] 6-((S)-1-(叔丁氧基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸酯。将(S)-6-(1-(叔丁氧基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-碘-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯 (4.5 g, 9.20 mmol)、2-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷 (3.22 g, 11.04
mmol)和 2N Na2CO3 (9.20 mL, 18.39 mmol)于DMF (100 mL)中的混合物脱气并用N2吹扫
30 min。然后加入四(三苯基膦)钯(0) (0.744 g, 0.644 mmol)并将反应用N2再吹扫15
min。然后将混合物在100℃下加热16 h。此时，LCMS显示反应完成和出现目标产物，冷却至室温后，加入水(50 mL)并用乙醚 (2X 200 mL)萃取混合物。有机相用盐水(100 mL)洗涤，干燥 (Na2SO4)，过滤并真空浓缩。然后残余物通过硅胶色谱法提纯(5-60% EtOAc/己烷) 以得到 6-((S)-1-(叔丁氧基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-
基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯 (4 g, 7.58 mmol, 82 %收率)，为阻转异构体的混合物(存在大约10%的次要阻转异构体)。
mmol)和 2N Na2CO3 (9.20 mL, 18.39 mmol)于DMF (100 mL)中的混合物脱气并用N2吹扫
30 min。然后加入四(三苯基膦)钯(0) (0.744 g, 0.644 mmol)并将反应用N2再吹扫15
min。然后将混合物在100℃下加热16 h。此时，LCMS显示反应完成和出现目标产物，冷却至室温后，加入水(50 mL)并用乙醚 (2X 200 mL)萃取混合物。有机相用盐水(100 mL)洗涤，干燥 (Na2SO4)，过滤并真空浓缩。然后残余物通过硅胶色谱法提纯(5-60% EtOAc/己烷) 以得到 6-((S)-1-(叔丁氧基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-
基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯 (4 g, 7.58 mmol, 82 %收率)，为阻转异构体的混合物(存在大约10%的次要阻转异构体)。
[0145]
[0146] 中间体10
[0147]
[0148] 6-((S)-1-(叔丁氧基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸。向6-((S)-1-(叔丁氧基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯 (4 g,
6.07 mmol)于THF (40 mL)中的溶液中添加1N NaOH (6.07 mL, 6.07 mmol)并将所得混合物在室温下搅拌16 h。此时LCMS表明约70%转化，因此加入另外的1N NaOH (2.5 mL, 2.5 mmol)并将混合物再搅拌2 h。此时LCMS表明反应进展( 90% 转化) 以及少量的二酸。然后~
向反应混合物中加入水并将其用1N HCl (10 mL)酸化。该水溶液用乙醚 (2 x 100 mL)萃取，用盐水(50 mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并真空浓缩以得到6-((S)-1-(叔丁氧基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-
甲酸 (2.7 g, 5.41 mmol, 89 %收率)，为灰白色固体。
6.07 mmol)于THF (40 mL)中的溶液中添加1N NaOH (6.07 mL, 6.07 mmol)并将所得混合物在室温下搅拌16 h。此时LCMS表明约70%转化，因此加入另外的1N NaOH (2.5 mL, 2.5 mmol)并将混合物再搅拌2 h。此时LCMS表明反应进展( 90% 转化) 以及少量的二酸。然后~
向反应混合物中加入水并将其用1N HCl (10 mL)酸化。该水溶液用乙醚 (2 x 100 mL)萃取，用盐水(50 mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并真空浓缩以得到6-((S)-1-(叔丁氧基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-
甲酸 (2.7 g, 5.41 mmol, 89 %收率)，为灰白色固体。
[0149]
[0150] 中间体11
[0151]
[0152] (2S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-(5-氯-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯: 向6-((S)-1-(叔丁氧基)-
2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧
啶-2-甲酸 (140 mg, 0.280 mmol)和4-氯苯-1,2-二胺 (59.9 mg, 0.420 mmol)于DMF (3 mL)中的混合物中添加 DIEA (0.245 mL, 1.401 mmol)，接着添加HATU (320 mg, 0.841 mmol)和DMAP (3.42 mg, 0.028 mmol)，并将所得混合物在室温下搅拌16 h。然后加入水并用乙酸乙酯 ( 50 mL)萃取混合物，用盐水(25 mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。然后将残余物悬浮于AcOH (3 mL)并将混合物在60℃下加热1 h。然后浓缩混合物，将残余物溶于乙酸乙酯 (20 mL)并用饱和NaHCO3和盐水(各10 mL)洗涤，干燥，过滤并浓缩。粗物质然后通过硅胶色谱法提纯 (5-60% EtOAc/己烷)以得到 (2S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-(5-氯-1H-
苯并[d]咪唑-2-基)-7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (64 mg, 0.106 mmol, 38 %收率)，为白色固体。
2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧
啶-2-甲酸 (140 mg, 0.280 mmol)和4-氯苯-1,2-二胺 (59.9 mg, 0.420 mmol)于DMF (3 mL)中的混合物中添加 DIEA (0.245 mL, 1.401 mmol)，接着添加HATU (320 mg, 0.841 mmol)和DMAP (3.42 mg, 0.028 mmol)，并将所得混合物在室温下搅拌16 h。然后加入水并用乙酸乙酯 ( 50 mL)萃取混合物，用盐水(25 mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。然后将残余物悬浮于AcOH (3 mL)并将混合物在60℃下加热1 h。然后浓缩混合物，将残余物溶于乙酸乙酯 (20 mL)并用饱和NaHCO3和盐水(各10 mL)洗涤，干燥，过滤并浓缩。粗物质然后通过硅胶色谱法提纯 (5-60% EtOAc/己烷)以得到 (2S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-(5-氯-1H-
苯并[d]咪唑-2-基)-7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (64 mg, 0.106 mmol, 38 %收率)，为白色固体。
[0153]
[0154]
[0155] 实施例1
[0156]
[0157] (2S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-(5-氯-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸: 将(2S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-
(5-氯-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (25 mg, 0.041 mmol)和1M NaOH (0.165 mL, 0.165 mmol)于
MeOH (1 mL)中的溶液在60℃下加热16 h。然后，将反应混合物冷却并通过制备HPLC提纯以得到 (2S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-(5-氯-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸 (13.7 mg, 0.023 mmol, 54.6 %收
率)，为白色固体。
(5-氯-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (25 mg, 0.041 mmol)和1M NaOH (0.165 mL, 0.165 mmol)于
MeOH (1 mL)中的溶液在60℃下加热16 h。然后，将反应混合物冷却并通过制备HPLC提纯以得到 (2S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-(5-氯-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸 (13.7 mg, 0.023 mmol, 54.6 %收
率)，为白色固体。
[0158]
[0159] 实施例2和3
[0160]
[0161] (2S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-(5-氯-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸和(2S)-2-(叔丁氧基)-2-
(2-(6-氯-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-5-甲基
吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸。向(2S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-(5-氯-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯
(40 mg, 0.066 mmol)于DMF (2 mL)中的溶液中添加NaH (3.96 mg, 0.099 mmol)并将所
得混合物在室温下搅拌10 min。然后添加MeI (6.19 µl, 0.099 mmol)并将混合物在室温下搅拌16小时。此时LCMS显示反应完成和出现目标产物。随后加入水并用乙酸乙酯萃取混合物，干燥 (Na2SO4)，过滤并浓缩。粗物质然后用1M NaOH (0.264 mL, 0.264 mmol) /MeOH (1.000 mL)处理并将混合物在 60℃加热16 h。然后将混合物冷却并通过制备HPLC提纯以得到两个区域异构体。
(2-(6-氯-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-5-甲基
吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸。向(2S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-(5-氯-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯
(40 mg, 0.066 mmol)于DMF (2 mL)中的溶液中添加NaH (3.96 mg, 0.099 mmol)并将所
得混合物在室温下搅拌10 min。然后添加MeI (6.19 µl, 0.099 mmol)并将混合物在室温下搅拌16小时。此时LCMS显示反应完成和出现目标产物。随后加入水并用乙酸乙酯萃取混合物，干燥 (Na2SO4)，过滤并浓缩。粗物质然后用1M NaOH (0.264 mL, 0.264 mmol) /MeOH (1.000 mL)处理并将混合物在 60℃加热16 h。然后将混合物冷却并通过制备HPLC提纯以得到两个区域异构体。
[0162] 实施例2: (2S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-(5-氯-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸 (7 mg, 0.011 mmol, 17.02 %收率)。
[0163]
[0164] 实施例3: (2S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-(6-氯-1-甲基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸 (9 mg, 0.014 mmol, 21.88 %收率)。
[0165]
[0166] 实施例4
[0167]
[0168] (2S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-5-甲基-2-(5-苯基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸: 向(2S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-(5-氯-1H-苯并[d]咪唑-2-基)-7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸 (10 mg, 0.017 mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-苯基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷 (7.06 mg, 0.035 mmol) 和2.0M K3PO4 (0.017 mL, 0.035 mmol)于DMF (1 mL) 中的混合物中添加二环己基(2',6'-二甲氧基-[1,1'-联苯]-2-基)膦 (10.65 mg, 0.026
mmol)，接着添加乙酸钯 (II) (3.88 mg, 0.017 mmol)并将混合物在130℃下在微波中加热16 min。然后过滤混合物并通过制备HPLC提纯以得到(2S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(8-氟-
5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-5-甲基-2-(5-苯基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸 (6 mg, 9.20 µmol, 53.2 %收率)。
mmol)，接着添加乙酸钯 (II) (3.88 mg, 0.017 mmol)并将混合物在130℃下在微波中加热16 min。然后过滤混合物并通过制备HPLC提纯以得到(2S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(8-氟-
5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-5-甲基-2-(5-苯基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸 (6 mg, 9.20 µmol, 53.2 %收率)。
[0169]
[0170] 中间体12
[0171]
[0172] (2S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基乙酸乙酯：向6-((S)-1-
(叔丁氧基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸 (150 mg, 0.300 mmol) 于CH2Cl2 (2 mL)中的溶液中添加草酰氯
(0.039 mL, 0.450 mmol)，然后添加1滴DMF并将混合物在室温下搅拌1h。然后将粗制酰氯添加到1-氨基-3-(4-氟苯基)丙-2-酮, HCl (122 mg, 0.601 mmol, Synthetic
Communications 1972, 237-242)和DIEA (0.315 mL, 1.802 mmol)于CH2Cl 2 (2.0 mL) 中的预搅拌溶液中并将所得溶液在室温下搅拌2h。然后加入水并用二氯甲烷萃取混合物，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。粗物质然后通过硅胶柱上的快速柱色谱法提纯，使用 (50-100% EtOAc/己烷作为洗脱剂) 以得到(2S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-
6-基)-2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (115 mg, 0.177 mmol, 59.0 %收率)，为浅黄色固体。
(叔丁氧基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸 (150 mg, 0.300 mmol) 于CH2Cl2 (2 mL)中的溶液中添加草酰氯
(0.039 mL, 0.450 mmol)，然后添加1滴DMF并将混合物在室温下搅拌1h。然后将粗制酰氯添加到1-氨基-3-(4-氟苯基)丙-2-酮, HCl (122 mg, 0.601 mmol, Synthetic
Communications 1972, 237-242)和DIEA (0.315 mL, 1.802 mmol)于CH2Cl 2 (2.0 mL) 中的预搅拌溶液中并将所得溶液在室温下搅拌2h。然后加入水并用二氯甲烷萃取混合物，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。粗物质然后通过硅胶柱上的快速柱色谱法提纯，使用 (50-100% EtOAc/己烷作为洗脱剂) 以得到(2S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-
6-基)-2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (115 mg, 0.177 mmol, 59.0 %收率)，为浅黄色固体。
[0173]
[0174] 实施例5
[0175]
[0176] (2S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸: 向(2S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(8-氟-
5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (20 mg, 0.031 mmol)于甲苯中的溶液中添加Lawesson's试剂(37.4 mg, 0.092 mmol) 并在室温下搅拌15 min，在60℃下搅拌30min和在100℃下搅拌
5h。然后，将所得澄清黄色混合物冷却，浓缩并通过制备HPLC提纯以得到目标酯，为浅黄色固体。
5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (20 mg, 0.031 mmol)于甲苯中的溶液中添加Lawesson's试剂(37.4 mg, 0.092 mmol) 并在室温下搅拌15 min，在60℃下搅拌30min和在100℃下搅拌
5h。然后，将所得澄清黄色混合物冷却，浓缩并通过制备HPLC提纯以得到目标酯，为浅黄色固体。
[0177]
[0178] 然后将酯用1M NaOH (0.092 mL, 0.092 mmol)/MeOH (1.050 mL)在60℃下处理5 h。然后将混合物冷却，浓缩并通过制备HPLC提纯以得到(2S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸 (7 mg, 10.75 µmol, 34.9 %收率)，为白色固体。
[0179]
[0180] 实施例6
[0181]
[0182] (2S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-2-(5-(4-氟苄基)噁唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸: 向(2S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(8-氟-
5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (50 mg, 0.077 mmol)、Ph3P (40.4 mg, 0.154 mmol) 和
TEA (0.054 mL, 0.385 mmol)于乙腈(1.5 mL) 中的搅拌溶液中添加CCl4 (0.015 mL,
0.154 mmol)并将混合物在室温下搅拌5 h，然后在40℃下搅拌16 h。然后将混合物冷却，浓缩并通过制备HPLC提纯以得到目标酯，为灰白色固体。
5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (50 mg, 0.077 mmol)、Ph3P (40.4 mg, 0.154 mmol) 和
TEA (0.054 mL, 0.385 mmol)于乙腈(1.5 mL) 中的搅拌溶液中添加CCl4 (0.015 mL,
0.154 mmol)并将混合物在室温下搅拌5 h，然后在40℃下搅拌16 h。然后将混合物冷却，浓缩并通过制备HPLC提纯以得到目标酯，为灰白色固体。
[0183]
[0184] 然后将酯用1M NaOH (0.231 mL, 0.231 mmol)/MeOH (0.900 mL)在60℃下处理5 h。然后将混合物冷却，浓缩并通过制备HPLC提纯以得到 (2S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-2-(5-(4-氟苄基)噁唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸 (5 mg, 7.88 µmol, 10.23 %收率)，为灰白色固体。
[0185]
[0186] 实施例7
[0187]
[0188] (2S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-2-(3-(4-氟苄基)-1,2,4-噁二唑-5-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸: 向6-((S)-1-(叔丁氧
基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸(50 mg, 0.100 mmol)于CH2Cl2 (1 mL)中的溶液中添加草酰氯 (0.014 mL,
0.160 mmol)。然后加入1滴 DMF并将混合物在室温下搅拌1h。然后将该酰氯逐滴添加到2-(4-氟苯基)-N-羟基乙脒 (33.7 mg, 0.200 mmol) 和DIEA (0.070 mL, 0.400 mmol)于
CH2Cl2 (1 mL)中的搅拌溶液中并将混合物在室温下搅拌1 h。然后浓缩混合物并在二氧杂环己烷 (1.000 mL)中在90℃下加热14 h。此时LCMS显示目标产物为主。然后浓缩混合物并通过制备HPLC提纯以得到目标酯。
基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸(50 mg, 0.100 mmol)于CH2Cl2 (1 mL)中的溶液中添加草酰氯 (0.014 mL,
0.160 mmol)。然后加入1滴 DMF并将混合物在室温下搅拌1h。然后将该酰氯逐滴添加到2-(4-氟苯基)-N-羟基乙脒 (33.7 mg, 0.200 mmol) 和DIEA (0.070 mL, 0.400 mmol)于
CH2Cl2 (1 mL)中的搅拌溶液中并将混合物在室温下搅拌1 h。然后浓缩混合物并在二氧杂环己烷 (1.000 mL)中在90℃下加热14 h。此时LCMS显示目标产物为主。然后浓缩混合物并通过制备HPLC提纯以得到目标酯。
[0189]
[0190] 然后将酯用1M NaOH (0.300 mL, 0.300 mmol)/MeOH (1.0 mL)在60℃下处理5 h。然后冷却混合物，浓缩并通过制备HPLC提纯以得到 (2S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-2-(3-(4-氟苄基)-1,2,4-噁二唑-5-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸 (5 mg, 7.87 µmol, 7.86 %收率)，为灰白色固体。
[0191]
[0192] 中间体13
[0193]
[0194] (2S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-2-((2-(4-氟苯基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯: 向6-((S)-1-(叔丁氧基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸 (150 mg, 0.300 mmol) 于CH2Cl2 (2 mL) 中的溶液中添加草酰氯
(0.039 mL, 0.450 mmol)。然后加入1滴 DMF并将混合物在室温下搅拌1h。然后将粗制酰氯添加到2-氨基-1-(4-氟苯基)乙酮, HCl (114 mg, 0.601 mmol)和DIEA (0.315 mL,
1.802 mmol)于 CH2Cl2 (2.000 mL)中的预搅拌溶液中并将所得溶液在室温下搅拌2 h。然后加入水并用二氯甲烷萃取混合物，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。粗物质然后通过硅胶柱上的快速柱色谱法提纯，使用 (50-100% EtOAc/Hex为洗脱剂) 以得到(2S)-2-(叔丁氧基)-
2-(7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-2-((2-(4-氟苯基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)-
5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (20 mg, 0.032 mmol, 10.49 %收率)，为浅黄色固体。
(0.039 mL, 0.450 mmol)。然后加入1滴 DMF并将混合物在室温下搅拌1h。然后将粗制酰氯添加到2-氨基-1-(4-氟苯基)乙酮, HCl (114 mg, 0.601 mmol)和DIEA (0.315 mL,
1.802 mmol)于 CH2Cl2 (2.000 mL)中的预搅拌溶液中并将所得溶液在室温下搅拌2 h。然后加入水并用二氯甲烷萃取混合物，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。粗物质然后通过硅胶柱上的快速柱色谱法提纯，使用 (50-100% EtOAc/Hex为洗脱剂) 以得到(2S)-2-(叔丁氧基)-
2-(7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-2-((2-(4-氟苯基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)-
5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (20 mg, 0.032 mmol, 10.49 %收率)，为浅黄色固体。
[0195]
[0196] 实施例8
[0197]
[0198] (2S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-2-(5-(4-氟苯基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸: 向(2S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(8-氟-
5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-2-((2-(4-氟苯基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (47 mg, 0.074 mmol)于甲苯中的溶液中添加Lawesson's试剂(90 mg, 0.222 mmol) 并在室温下搅拌15 min，在60℃下搅拌30min和在100℃下搅拌
5h。然后，将所得澄清黄色混合物冷却，浓缩并通过制备HPLC提纯以得到目标酯，为浅黄色固体。
5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-2-((2-(4-氟苯基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (47 mg, 0.074 mmol)于甲苯中的溶液中添加Lawesson's试剂(90 mg, 0.222 mmol) 并在室温下搅拌15 min，在60℃下搅拌30min和在100℃下搅拌
5h。然后，将所得澄清黄色混合物冷却，浓缩并通过制备HPLC提纯以得到目标酯，为浅黄色固体。
[0199]
[0200] 酯然后用 1M NaOH (0.222 mL, 0.222 mmol)/MeOH (1.050 mL)在60℃下处理5 h。将混合物冷却，浓缩并通过制备HPLC提纯以得到(2S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-2-(5-(4-氟苯基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)
乙酸 (4 mg, 6.28 µmol, 8.49 %收率)，为白色固体。
乙酸 (4 mg, 6.28 µmol, 8.49 %收率)，为白色固体。
[0201]
[0202] 中间体14
[0203]
[0204] (2S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-2-((2-(3-氟苯基)-2-氧代乙基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯: 按照对于中
间体XX描述的程序制备。
间体XX描述的程序制备。
[0205]
[0206] 实施例 9
[0207]
[0208] (2S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(8-氟-5-甲基苯并二氢吡喃-6-基)-2-(5-(3-氟苯基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸: 按照实施例 8的程序制备。
[0209]
[0210] 中间体15
[0211]
[0212] (S)-6-(1-(叔丁氧基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯: 将(S)-6-(1-(叔丁氧基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-碘-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯 (300 mg, 0.613 mmol)、(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)硼酸 (113 mg, 0.736 mmol) 和2M Na2CO3 (0.613 mL, 1.226 mmol) 于DMF (6 mL)中的混合物脱气15 min。然后加入四(三苯基膦)钯(0) (49.6 mg, 0.043
mmol) 并继续脱气另外5 min。然后将混合物在100℃下加热2 h。此时LCMS显示反应完成和出现目标产物。在冷却至室温后，加入水(10 mL)并用乙醚(2X 50 mL)萃取混合物，用盐水(25 mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。粗物质然后通过biotage (5-30% EtOAc/己烷)提纯以得到(S)-6-(1-(叔丁氧基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-
基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯 (185 mg, 0.392 mmol, 64.0 %收率)，为灰白色固体(阻转异构体的混合物)。
mmol) 并继续脱气另外5 min。然后将混合物在100℃下加热2 h。此时LCMS显示反应完成和出现目标产物。在冷却至室温后，加入水(10 mL)并用乙醚(2X 50 mL)萃取混合物，用盐水(25 mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。粗物质然后通过biotage (5-30% EtOAc/己烷)提纯以得到(S)-6-(1-(叔丁氧基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-
基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯 (185 mg, 0.392 mmol, 64.0 %收率)，为灰白色固体(阻转异构体的混合物)。
[0213]
[0214] 中间体16
[0215]
[0216] (S)-6-(1-(叔丁氧基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸: 向(S)-6-(1-(叔丁氧基)-2-乙氧基-2-氧代乙
基)-7-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯 (185 mg,
0.392 mmol)于EtOH (4 mL)中的溶液中添加1M NaOH (0.392 mL, 0.392 mmol) 并将所得混合物在室温下搅拌4 h。此时LCMS显示反应完成。然后减压除去溶剂。混合物然后用水(3 mL)稀释，用1N HCl酸化，用乙酸乙酯 (25 mL)萃取，用盐水(10 mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩以得到 (S)-6-(1-(叔丁氧基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-(4,4-二甲基环己-1-
烯-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸 (150 mg, 0.338 mmol, 86 %收率)，为浅黄色固体(阻转异构体的混合物)。
基)-7-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯 (185 mg,
0.392 mmol)于EtOH (4 mL)中的溶液中添加1M NaOH (0.392 mL, 0.392 mmol) 并将所得混合物在室温下搅拌4 h。此时LCMS显示反应完成。然后减压除去溶剂。混合物然后用水(3 mL)稀释，用1N HCl酸化，用乙酸乙酯 (25 mL)萃取，用盐水(10 mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩以得到 (S)-6-(1-(叔丁氧基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-(4,4-二甲基环己-1-
烯-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸 (150 mg, 0.338 mmol, 86 %收率)，为浅黄色固体(阻转异构体的混合物)。
[0217]
[0218] 中间体17
[0219]
[0220] (S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)-2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯: 向(S)-6-(1-(叔丁
氧基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸 (400 mg, 0.902 mmol)于CH2Cl2 (10 mL) 中的溶液中添加草酰氯(0.095 mL,
1.082 mmol)。然后加入1滴 DMF并将混合物在室温下搅拌1h。然后将粗制酰氯添加到1-氨基-3-(4-氟苯基)丙-2-酮, HCl (367 mg, 1.804 mmol)和DIEA (0.945 mL, 5.41 mmol)
于 CH2Cl2 (10.00 mL)中的预搅拌溶液中并将所得溶液在室温下搅拌2 h。然后加入水并用二氯甲烷萃取混合物，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。粗物质然后通过硅胶柱上的快速柱色谱法提纯，使用 (5-70% EtOAc/Hex为洗脱剂) 以得到 (S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)-2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (320 mg, 0.540 mmol, 59.9 %收率)，为浅黄色固体(阻转异构体的混合物)。
氧基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸 (400 mg, 0.902 mmol)于CH2Cl2 (10 mL) 中的溶液中添加草酰氯(0.095 mL,
1.082 mmol)。然后加入1滴 DMF并将混合物在室温下搅拌1h。然后将粗制酰氯添加到1-氨基-3-(4-氟苯基)丙-2-酮, HCl (367 mg, 1.804 mmol)和DIEA (0.945 mL, 5.41 mmol)
于 CH2Cl2 (10.00 mL)中的预搅拌溶液中并将所得溶液在室温下搅拌2 h。然后加入水并用二氯甲烷萃取混合物，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。粗物质然后通过硅胶柱上的快速柱色谱法提纯，使用 (5-70% EtOAc/Hex为洗脱剂) 以得到 (S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)-2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (320 mg, 0.540 mmol, 59.9 %收率)，为浅黄色固体(阻转异构体的混合物)。
[0221]
[0222] 中间体18
[0223]
[0224] (S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)-2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯: (S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲
基环己-1-烯-1-基)-2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (100 mg, 0.169 mmol)于甲苯的溶液中添加Lawesson's试剂(75
mg, 0.186 mmol)并在室温下搅拌15 min，在60℃下搅拌1h。此时LCMS显示目标产物为主。
然后浓缩混合物并通过Biotage提纯 (5-30% EtOAc/己烷; 25g 柱) 以得到(S)-2-(叔丁
氧基)-2-(7-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)-2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并
[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (50 mg, 0.085 mmol, 50.2 %收率)，为灰白色固体(阻转异构体的混合物)。
基环己-1-烯-1-基)-2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (100 mg, 0.169 mmol)于甲苯的溶液中添加Lawesson's试剂(75
mg, 0.186 mmol)并在室温下搅拌15 min，在60℃下搅拌1h。此时LCMS显示目标产物为主。
然后浓缩混合物并通过Biotage提纯 (5-30% EtOAc/己烷; 25g 柱) 以得到(S)-2-(叔丁
氧基)-2-(7-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)-2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并
[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (50 mg, 0.085 mmol, 50.2 %收率)，为灰白色固体(阻转异构体的混合物)。
[0225]
[0226] 实施例 10
[0227]
[0228] (S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)-2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸: 向(S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基
环己-1-烯-1-基)-2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (40 mg, 0.068 mmol)于MeOH (1.5 mL)中的溶液中添加1M NaOH (0.339 mL, 0.339
mmol)并将混合物在50℃下加热16 h。然后冷却混合物，浓缩并通过制备HPLC提纯以得到 (S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)-2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸 (26 mg, 0.044 mmol, 64.8 %收率)，为阻转异构体的混合物 (大约 2:1)。
环己-1-烯-1-基)-2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (40 mg, 0.068 mmol)于MeOH (1.5 mL)中的溶液中添加1M NaOH (0.339 mL, 0.339
mmol)并将混合物在50℃下加热16 h。然后冷却混合物，浓缩并通过制备HPLC提纯以得到 (S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)-2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸 (26 mg, 0.044 mmol, 64.8 %收率)，为阻转异构体的混合物 (大约 2:1)。
[0229]
[0230] 中间体19
[0231]
[0232] 2,2,2-三氟乙酸 (S,Z)-7-(4,4-二甲基环己基)-6-(2-乙氧基-1-羟基-2-氧代乙基)-N-(3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-亚氨酸(carbimidic)
酐: 向(S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)-2-((3-(4-氟苯基)-2-氧
代丙基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (170 mg, 0.287 mmol)和Et3SiH (0.366 mL, 2.295 mmol)于DCE (5 mL)中的溶液中逐滴添加TFA (2 mL)并将所得混合物在室温下搅拌72 h。此时LCMS显示反应完成和含有三氟乙酸酯的饱和产物为主要产物(M+H) = 635.4。然后浓缩混合物并在高真空下干燥以得到粗制物，其原样用于下一反应。
酐: 向(S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)-2-((3-(4-氟苯基)-2-氧
代丙基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (170 mg, 0.287 mmol)和Et3SiH (0.366 mL, 2.295 mmol)于DCE (5 mL)中的溶液中逐滴添加TFA (2 mL)并将所得混合物在室温下搅拌72 h。此时LCMS显示反应完成和含有三氟乙酸酯的饱和产物为主要产物(M+H) = 635.4。然后浓缩混合物并在高真空下干燥以得到粗制物，其原样用于下一反应。
[0233] 中间体20
[0234]
[0235] (S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基环己基)-2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯: 在室温下向2,2,2-三氟乙酸
(S,Z)-7-(4,4-二甲基环己基)-6-(2-乙氧基-1-羟基-2-氧代乙基)-N-(3-(4-氟苯基)-2-
氧代丙基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-亚氨酸酐 (150 mg, 0.236 mmol) 于CH2Cl2 (4 mL)和tBuOAc (2.235 mL, 16.55 mmol)中的搅拌溶液中添加70% HClO4 (0.061 mL,
0.709 mmol)。3 h后，反应混合物用CH2Cl2 (10 mL)稀释，用饱和NaHCO3 (5 mL)小心淬灭，分离有机层并用盐水 (10 mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩得到黄色液体。将其用EtOH 中的饱和Na2CO3溶液(4 mL)在室温下处理30 min (脱保护三氟乙酸酯)。然后浓缩混合物并通过硅胶柱上的快速柱色谱法提纯，使用(10-50% EtOAc/Hex为洗脱剂) 以得到(S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基环己基)-2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-5-甲
基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (70 mg, 0.118 mmol, 49.8 %收率)，为浅黄色油状物。
(S,Z)-7-(4,4-二甲基环己基)-6-(2-乙氧基-1-羟基-2-氧代乙基)-N-(3-(4-氟苯基)-2-
氧代丙基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-亚氨酸酐 (150 mg, 0.236 mmol) 于CH2Cl2 (4 mL)和tBuOAc (2.235 mL, 16.55 mmol)中的搅拌溶液中添加70% HClO4 (0.061 mL,
0.709 mmol)。3 h后，反应混合物用CH2Cl2 (10 mL)稀释，用饱和NaHCO3 (5 mL)小心淬灭，分离有机层并用盐水 (10 mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩得到黄色液体。将其用EtOH 中的饱和Na2CO3溶液(4 mL)在室温下处理30 min (脱保护三氟乙酸酯)。然后浓缩混合物并通过硅胶柱上的快速柱色谱法提纯，使用(10-50% EtOAc/Hex为洗脱剂) 以得到(S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基环己基)-2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-5-甲
基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (70 mg, 0.118 mmol, 49.8 %收率)，为浅黄色油状物。
[0236]
[0237] 实施例 11
[0238]
[0239] (S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基环己基)-2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸: 向(S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基环己基)-
2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (58 mg, 0.098 mmol)于甲苯中的溶液中添加Lawesson's试剂 (43.4 mg, 0.107 mmol)并在室温下搅拌15 min，在60℃搅拌1h和在100℃搅拌16h。此时LCMS显示反应完成和出现目标产物。然后冷却混合物，浓缩并用1N NaOH (0.293 mL, 0.293 mmol)/MeOH (3 mL)在65℃下处理4 h。然后冷却混合物并通过制备HPLC提纯以得到(S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基环己基)-2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸 (29 mg, 0.051 mmol, 52.7 %收率)。
2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (58 mg, 0.098 mmol)于甲苯中的溶液中添加Lawesson's试剂 (43.4 mg, 0.107 mmol)并在室温下搅拌15 min，在60℃搅拌1h和在100℃搅拌16h。此时LCMS显示反应完成和出现目标产物。然后冷却混合物，浓缩并用1N NaOH (0.293 mL, 0.293 mmol)/MeOH (3 mL)在65℃下处理4 h。然后冷却混合物并通过制备HPLC提纯以得到(S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基环己基)-2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸 (29 mg, 0.051 mmol, 52.7 %收率)。
[0240]
[0241] 中间体21
[0242]
[0243] (S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)-2-(5-(4-氟苄基)噁唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯: (S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲
基环己-1-烯-1-基)-2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (100 mg, 0.169 mmol)、Ph3P (89 mg, 0.337 mmol) 和TEA (0.118 mL, 0.844 mmol)于乙腈(3 mL)中的搅拌溶液中添加 CCl4 (0.033 mL, 0.337 mmol) 并
将混合物在室温下搅拌5 h，然后在40℃搅拌16h。然后冷却混合物，浓缩并通过制备HPLC提纯以得到期望的(S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)-2-(5-(4-氟苄
基)噁唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯(26 mg, 0.045 mmol, 26.8 %收率)，为灰白色固体 (阻转异构体混合物)。
基环己-1-烯-1-基)-2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (100 mg, 0.169 mmol)、Ph3P (89 mg, 0.337 mmol) 和TEA (0.118 mL, 0.844 mmol)于乙腈(3 mL)中的搅拌溶液中添加 CCl4 (0.033 mL, 0.337 mmol) 并
将混合物在室温下搅拌5 h，然后在40℃搅拌16h。然后冷却混合物，浓缩并通过制备HPLC提纯以得到期望的(S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)-2-(5-(4-氟苄
基)噁唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯(26 mg, 0.045 mmol, 26.8 %收率)，为灰白色固体 (阻转异构体混合物)。
[0244]
[0245] 实施例 12
[0246]
[0247] (S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)-2-(5-(4-氟苄基)噁唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸: 向(S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基
环己-1-烯-1-基)-2-(5-(4-氟苄基)噁唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (26 mg, 0.045 mmol)于MeOH (1.5 mL)中的溶液中添加1M NaOH (0.226 mL, 0.226
mmol)并将混合物在65℃下加热4 h。然后冷却混合物并通过制备HPLC提纯以得到 (S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)-2-(5-(4-氟苄基)噁唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸 (14.8 mg, 0.026 mmol, 56.9 %收率)，为阻转异构体的大约2:1混合物。
环己-1-烯-1-基)-2-(5-(4-氟苄基)噁唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (26 mg, 0.045 mmol)于MeOH (1.5 mL)中的溶液中添加1M NaOH (0.226 mL, 0.226
mmol)并将混合物在65℃下加热4 h。然后冷却混合物并通过制备HPLC提纯以得到 (S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基环己-1-烯-1-基)-2-(5-(4-氟苄基)噁唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸 (14.8 mg, 0.026 mmol, 56.9 %收率)，为阻转异构体的大约2:1混合物。
[0248]
[0249] 中间体22
[0250]
[0251] (S)-6-(1-(叔丁氧基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯: 向(S)-6-(1-(叔丁氧基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-碘-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯 (300 mg, 0.613 mmol) 和4,4-二甲基哌啶,
HCl (138 mg, 0.920 mmol)于NMP (3 mL)中的溶液中添加DIEA (0.321 mL, 1.839 mmol)并将混合物在50℃下加热4 h。此时LCMS显示大约40%转化，因此将混合物在相同温度下加热一个周末。此时LCMS显示反应完成。然后冷却混合物至室温并通过制备HPLC提纯以得到(S)-6-(1-(叔丁氧基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯 (220 mg, 0.464 mmol, 76 %收率)，为灰白色固体。
HCl (138 mg, 0.920 mmol)于NMP (3 mL)中的溶液中添加DIEA (0.321 mL, 1.839 mmol)并将混合物在50℃下加热4 h。此时LCMS显示大约40%转化，因此将混合物在相同温度下加热一个周末。此时LCMS显示反应完成。然后冷却混合物至室温并通过制备HPLC提纯以得到(S)-6-(1-(叔丁氧基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯 (220 mg, 0.464 mmol, 76 %收率)，为灰白色固体。
[0252]
[0253] 中间体23
[0254]
[0255] (S)-6-(1-(叔丁氧基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸: 向(S)-6-(1-(叔丁氧基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-(4,
4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯 (410 mg, 0.864 mmol)于
EtOH (10 mL)中的溶液中添加1M NaOH (0.864 mL, 0.864 mmol)并将所得混合物在室温
下搅拌4 h。此时LCMS显示反应完成。然后减压除去溶剂。然后混合物用水(3 mL)稀释，用1N HCl酸化，用乙酸乙酯(25 mL)萃取，用盐水(10 mL)稀释，干燥 (Na2SO4)，过滤并浓缩以得到(S)-6-(1-(叔丁氧基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸 (337 mg, 0.755 mmol, 87 %收率)，为浅黄色固体。
4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯 (410 mg, 0.864 mmol)于
EtOH (10 mL)中的溶液中添加1M NaOH (0.864 mL, 0.864 mmol)并将所得混合物在室温
下搅拌4 h。此时LCMS显示反应完成。然后减压除去溶剂。然后混合物用水(3 mL)稀释，用1N HCl酸化，用乙酸乙酯(25 mL)萃取，用盐水(10 mL)稀释，干燥 (Na2SO4)，过滤并浓缩以得到(S)-6-(1-(叔丁氧基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸 (337 mg, 0.755 mmol, 87 %收率)，为浅黄色固体。
[0256]
[0257] 中间体24
[0258]
[0259] (S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯：向(S)-6-(1-(叔丁氧基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸
(200 mg, 0.448 mmol)于CH2Cl2 (3 mL)中的溶液中添加草酰氯 (0.059 mL, 0.672
mmol)。然后加入1滴DMF并将混合物在室温下搅拌1h。然后将粗制酰氯添加到 1-氨基-3-(4-氟苯基)丙-2-酮, HCl (182 mg, 0.896 mmol)和DIEA (0.469 mL, 2.69 mmol)于
CH2Cl2 (3.00 mL) 中的预搅拌溶液中并将所得溶液在室温下搅拌2 h。然后加入水并用二氯甲烷萃取混合物，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。粗物质然后通过硅胶柱上的快速柱色谱法提纯，使用 (50-100% EtOAc/己烷为洗脱剂) 以得到(S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-
6-基)乙酸乙酯 (150 mg, 0.252 mmol, 56.2 %收率)，为浅黄色固体。
(200 mg, 0.448 mmol)于CH2Cl2 (3 mL)中的溶液中添加草酰氯 (0.059 mL, 0.672
mmol)。然后加入1滴DMF并将混合物在室温下搅拌1h。然后将粗制酰氯添加到 1-氨基-3-(4-氟苯基)丙-2-酮, HCl (182 mg, 0.896 mmol)和DIEA (0.469 mL, 2.69 mmol)于
CH2Cl2 (3.00 mL) 中的预搅拌溶液中并将所得溶液在室温下搅拌2 h。然后加入水并用二氯甲烷萃取混合物，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。粗物质然后通过硅胶柱上的快速柱色谱法提纯，使用 (50-100% EtOAc/己烷为洗脱剂) 以得到(S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-
6-基)乙酸乙酯 (150 mg, 0.252 mmol, 56.2 %收率)，为浅黄色固体。
[0260]
[0261] 中间体25
[0262]
[0263] (S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯: 向(S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲
基哌啶-1-基)-2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-
6-基)乙酸乙酯 (150 mg, 0.252 mmol)于甲苯中的溶液中添加Lawesson's 试剂(306 mg,
0.755 mmol)并在室温下搅拌15 min，在60℃下搅拌30min和在 100℃下搅拌5h。然后，将所得澄清黄色混合物冷却，浓缩并通过硅胶柱上的柱色谱法提纯，使用 (5-30% EtOAc/己烷为洗脱剂) 以得到 (S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-2-(5-(4-氟苄基)
噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (50 mg, 0.084 mmol, 33.4 %收率)，为灰白色固体。
基哌啶-1-基)-2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-
6-基)乙酸乙酯 (150 mg, 0.252 mmol)于甲苯中的溶液中添加Lawesson's 试剂(306 mg,
0.755 mmol)并在室温下搅拌15 min，在60℃下搅拌30min和在 100℃下搅拌5h。然后，将所得澄清黄色混合物冷却，浓缩并通过硅胶柱上的柱色谱法提纯，使用 (5-30% EtOAc/己烷为洗脱剂) 以得到 (S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-2-(5-(4-氟苄基)
噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (50 mg, 0.084 mmol, 33.4 %收率)，为灰白色固体。
[0264]
[0265] 实施例 13
[0266]
[0267] (S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸: 向(S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基哌
啶-1-基)-2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯(50
mg, 0.084 mmol)于MeOH (2 mL)中的溶液中添加1N NaOH (0.253 mL, 0.253 mmol)并将
混合物在60℃下加热5 h。然后冷却混合物并通过制备HPLC提纯以得到(S)-2-(叔丁氧基)-
2-(7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-
6-基)乙酸 (27.3 mg, 0.048 mmol, 57.3 %收率)。
啶-1-基)-2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯(50
mg, 0.084 mmol)于MeOH (2 mL)中的溶液中添加1N NaOH (0.253 mL, 0.253 mmol)并将
混合物在60℃下加热5 h。然后冷却混合物并通过制备HPLC提纯以得到(S)-2-(叔丁氧基)-
2-(7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-
6-基)乙酸 (27.3 mg, 0.048 mmol, 57.3 %收率)。
[0268]
[0269]
[0270] 中间体26
[0271]
[0272] 2-(4-氟苯基)丙酰氯：向2-(4-氟苯基)丙酸 (3 g, 17.84 mmol) 于CH2Cl2 (40 mL)中的溶液中添加草酰氯(15.16 mL, 30.3 mmol)，接着添加几滴DMF并将所得混合物在室温下搅拌1 h。此时LCMS (于甲醇中)显示对应的甲基酯。然后将混合物浓缩并在高真空下干燥1 h以得到2-(4-氟苯基)丙酰氯，为浅棕色油状物，其不经进一步提纯用于下一步骤。
[0273] 中间体27
[0274]
[0275] 1-氨基-3-(4-氟苯基)丁-2-酮, HCl: 历经5min向1M LiHMDS (29.4 mL, 29.4 mmol)于THF (80 mL)中的-78℃溶液中逐滴添加2-异氰乙酸甲酯 (2.63 g, 26.5 mmol)的THF (10 mL) 溶液。30 min后，历经5min添加2-(4-氟苯基)丙酰氯(3.3 g, 17.68 mmol) 的THF (20mL)溶液。1h后，移除冷浴并将混合物在室温下搅拌16h。然后加入水 (25 mL)并用乙酸乙酯 (100 mL)萃取混合物，用盐水(50 mL)洗涤，干燥 (Na2SO4)，过滤并浓缩。残余物然后用浓HCl (40 mL) 回流3 h。然后浓缩混合物并用乙酸乙酯研磨残余物，在高真空下干燥以得到 1-氨基-3-(4-氟苯基)丁-2-酮,HCl (2.5 g, 11.49 mmol, 64.9 %收率)，为棕褐色固体。
[0276]
[0277] 中间体28
[0278]
[0279] (2S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丁基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯：向(S)-6-(1-(叔丁氧基)-
2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸
(100 mg, 0.224 mmol)于CH2Cl2 (2 mL) 中的溶液中添加草酰氯 (0.123 mL, 0.246
mmol)。然后添加1滴DMF并将混合物在室温下搅拌1h。然后将粗制酰氯添加到1-氨基-3-(4-氟苯基)丁-2-酮, HCl (73.1 mg, 0.336 mmol)和 DIEA (0.235 mL, 1.344 mmol)于
CH2Cl2 (2.000 mL)中的预搅拌溶液中并将所得溶液在室温下搅拌4h。然后添加水并用二氯甲烷萃取混合物，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。粗制物然后通过硅胶柱上的快速柱色谱法提纯，使用(5-70% EtOAc/Hex为洗脱剂)以得到(2S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基哌啶-
1-基)-2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丁基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (80 mg, 0.131 mmol, 58.6 %收率)，为浅黄色固体。
2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸
(100 mg, 0.224 mmol)于CH2Cl2 (2 mL) 中的溶液中添加草酰氯 (0.123 mL, 0.246
mmol)。然后添加1滴DMF并将混合物在室温下搅拌1h。然后将粗制酰氯添加到1-氨基-3-(4-氟苯基)丁-2-酮, HCl (73.1 mg, 0.336 mmol)和 DIEA (0.235 mL, 1.344 mmol)于
CH2Cl2 (2.000 mL)中的预搅拌溶液中并将所得溶液在室温下搅拌4h。然后添加水并用二氯甲烷萃取混合物，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。粗制物然后通过硅胶柱上的快速柱色谱法提纯，使用(5-70% EtOAc/Hex为洗脱剂)以得到(2S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基哌啶-
1-基)-2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丁基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (80 mg, 0.131 mmol, 58.6 %收率)，为浅黄色固体。
[0280]
[0281] 实施例 14
[0282]
[0283] (2S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-2-(5-(1-(4-氟苯基)乙基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸：向(2S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丁基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧
啶-6-基)乙酸乙酯 (67 mg, 0.110 mmol)于甲苯中的溶液中添加Lawesson's 试剂(48.9 mg, 0.121 mmol)并在室温下搅拌15min，在60℃下搅拌 1 h，2 h。此时，LCMS表明反应完成和出现目标产物。然后冷却混合物，浓缩并用1M NaOH (0.330 mL, 0.330 mmol)/MeOH (3 mL)在65℃下处理4 h。然后冷却混合物并通过制备HPLC提纯以得到(2S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-2-(5-(1-(4-氟苯基)乙基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-
a]嘧啶-6-基)乙酸 (40 mg, 0.069 mmol, 62.8 %收率)。
啶-6-基)乙酸乙酯 (67 mg, 0.110 mmol)于甲苯中的溶液中添加Lawesson's 试剂(48.9 mg, 0.121 mmol)并在室温下搅拌15min，在60℃下搅拌 1 h，2 h。此时，LCMS表明反应完成和出现目标产物。然后冷却混合物，浓缩并用1M NaOH (0.330 mL, 0.330 mmol)/MeOH (3 mL)在65℃下处理4 h。然后冷却混合物并通过制备HPLC提纯以得到(2S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-2-(5-(1-(4-氟苯基)乙基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-
a]嘧啶-6-基)乙酸 (40 mg, 0.069 mmol, 62.8 %收率)。
[0284]
[0285] 中间体29
[0286]
[0287] 1-氨基-3-(4-氟-3-甲基苯基)丙-2-酮, HCl: 历经5min向1M LiHMDS (19.57 mL, 19.57 mmol)于THF (70 mL)中的-78℃溶液中逐滴添加 2-异氰乙酸甲酯(1.752 g,
17.68 mmol)的THF (10 mL)溶液。30 min后，历经5min添加2-(4-氟-3-甲基苯基)乙酰氯 (2.2 g, 11.79 mmol)的THF (20mL)溶液。1 h后，移除冷浴并将混合物在室温下搅拌16 h。
然后加入水(25 mL)并用乙酸乙酯 (100 mL)萃取混合物，用盐水 (50 mL)洗涤，干燥
(Na2SO4)，过滤并浓缩。残余物然后用浓HCl (30 mL)回流3 h。然后将混合物冷却至室温并通过过滤收集固体，用乙酸乙酯洗涤，并在高真空下干燥以得到1-氨基-3-(4-氟-3-甲基苯基)丙-2-酮, HCl (1.2 g, 5.51 mmol, 46.8 %收率)，为棕褐色固体。
17.68 mmol)的THF (10 mL)溶液。30 min后，历经5min添加2-(4-氟-3-甲基苯基)乙酰氯 (2.2 g, 11.79 mmol)的THF (20mL)溶液。1 h后，移除冷浴并将混合物在室温下搅拌16 h。
然后加入水(25 mL)并用乙酸乙酯 (100 mL)萃取混合物，用盐水 (50 mL)洗涤，干燥
(Na2SO4)，过滤并浓缩。残余物然后用浓HCl (30 mL)回流3 h。然后将混合物冷却至室温并通过过滤收集固体，用乙酸乙酯洗涤，并在高真空下干燥以得到1-氨基-3-(4-氟-3-甲基苯基)丙-2-酮, HCl (1.2 g, 5.51 mmol, 46.8 %收率)，为棕褐色固体。
[0288]
[0289] 中间体30
[0290]
[0291] (S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-2-((3-(4-氟-3-甲基苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯：向(S)-6-(1-(叔丁氧基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸 (100 mg, 0.224 mmol)于CH2Cl2 (2 mL)中的溶液中添加草酰氯 (0.123 mL, 0.246 mmol)。然后添加1滴DMF并将混合物在室温下搅拌1h。然后将粗制酰氯添加到1-氨基-3-(4-氟-3-甲基苯基)丙-2-酮,HCl (73.1 mg, 0.336 mmol)和DIEA (0.235 mL, 1.344 mmol) 于CH2Cl2 (2.000 mL)中的预搅拌溶液中并将所得溶液在室温下搅拌4 h。然后加入水并用二氯甲烷萃取混合物，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。粗制物然后通过硅胶柱上的快速柱色谱法提纯，使用(5-70% EtOAc/己烷为洗脱剂) 以得到 (S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-2-((3-(4-氟-3-甲基苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (75 mg, 0.123 mmol, 54.9 %收率)，为浅黄色固体。
[0292]
[0293] 实施例 15
[0294]
[0295] (S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-2-(5-(4-氟-3-甲基苄基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸: 向(S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-2-((3-(4-氟-3-甲基苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (70 mg, 0.115 mmol)于甲苯中的溶液中添加Lawesson's 试剂
(51.1 mg, 0.126 mmol)并在室温下搅拌15min，在60℃下搅拌1 h，2 h。此时LCMS 表明反应完成和出现目标产物。然后冷却混合物，浓缩并用1M NaOH (0.344 mL, 0.344 mmol) /MeOH (3 mL)在65℃下处理4 h。然后冷却混合物并通过制备HPLC提纯以得到(S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-2-(5-(4-氟-3-甲基苄基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑
并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸 (37 mg, 0.064 mmol, 55.6 %收率)。
(51.1 mg, 0.126 mmol)并在室温下搅拌15min，在60℃下搅拌1 h，2 h。此时LCMS 表明反应完成和出现目标产物。然后冷却混合物，浓缩并用1M NaOH (0.344 mL, 0.344 mmol) /MeOH (3 mL)在65℃下处理4 h。然后冷却混合物并通过制备HPLC提纯以得到(S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-2-(5-(4-氟-3-甲基苄基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑
并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸 (37 mg, 0.064 mmol, 55.6 %收率)。
[0296]
[0297] 中间体31
[0298]
[0299] 1-氨基-4-(4-氟苯基)丁-2-醇：将TMS-CN (2.62 mL, 19.52 mmol)逐滴添加到3-(4-氟苯基)丙醛 (2.7 g, 17.74 mmol)和ZnI2 (0.283 g, 0.887 mmol)在干燥圆底烧瓶中的混合物中并将混合物在室温下搅拌1h。然后将粗制氰醇醚溶于乙醚(5 mL) 并逐滴添加到2M LiAlH4/THF (9.76 mL, 19.52 mmol))/乙醚 (20 mL)中并在室温下搅拌1h。然后逐滴加入水 (1 mL)，接着加入15% NaOH (1 mL)，然后加入水 (2 mL)。将混合物搅拌15min (形成粒状黄色沉淀物)。过滤，干燥(Na2SO4) 并浓缩得到1-氨基-4-(4-氟苯基)丁-2-醇 (1.7 g, 9.28 mmol, 52.3 %收率)，为黄色油状物，其不经进一步提纯用于下一步骤。
[0300]
[0301] 中间体32
[0302]
[0303] (2S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-2-((4-(4-氟苯基)-2-羟基丁基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯:向(S)-6-(1-(叔丁氧基)-
2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸
(150 mg, 0.336 mmol)于CH2Cl2 (3 mL)中的溶液中添加草酰氯(0.185 mL, 0.370 mmol)。
然后添加1滴DMF并将混合物在室温下搅拌1h。然后将粗制酰氯添加到 1-氨基-4-(4-氟苯基)丁-2-醇, HCl (111 mg, 0.504 mmol)和DIEA (0.352 mL, 2.015 mmol)于CH2Cl2
(3.00 mL)中的预搅拌溶液中并将所得溶液在室温下搅拌4 h。然后加入水并用二氯甲烷萃取混合物，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。粗制物然后通过硅胶柱上的快速柱色谱法提纯，使用 (5-70% EtOAc/Hex为洗脱剂) 以得到(2S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-
2-((4-(4-氟苯基)-2-羟基丁基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (90 mg, 0.147 mmol, 43.8 %收率)，为浅黄色固体。
2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸
(150 mg, 0.336 mmol)于CH2Cl2 (3 mL)中的溶液中添加草酰氯(0.185 mL, 0.370 mmol)。
然后添加1滴DMF并将混合物在室温下搅拌1h。然后将粗制酰氯添加到 1-氨基-4-(4-氟苯基)丁-2-醇, HCl (111 mg, 0.504 mmol)和DIEA (0.352 mL, 2.015 mmol)于CH2Cl2
(3.00 mL)中的预搅拌溶液中并将所得溶液在室温下搅拌4 h。然后加入水并用二氯甲烷萃取混合物，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。粗制物然后通过硅胶柱上的快速柱色谱法提纯，使用 (5-70% EtOAc/Hex为洗脱剂) 以得到(2S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-
2-((4-(4-氟苯基)-2-羟基丁基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (90 mg, 0.147 mmol, 43.8 %收率)，为浅黄色固体。
[0304]
[0305] 中间体33
[0306]
[0307] (S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-2-((4-(4-氟苯基)-2-氧代丁基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯：向(2S)-2-(叔丁氧基)-2-
(7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-2-((4-(4-氟苯基)-2-羟基丁基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (90 mg, 0.147 mmol)于CH2Cl2 (3 mL)中的溶液中添加粉末状4A分子筛 (55 mg)和NMO (25.9 mg, 0.221 mmol)。在将混合物搅拌10 min后，加入TPAP (5.17 mg, 0.015 mmol)并将混合物在室温搅拌1 h。此时LCMS表明反应完成。然后通过硅胶垫过滤混合物。接着浓缩滤液并通过Biotage (0-50% EtOAc/己烷; 25g 柱)提纯以得到(S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-2-((4-(4-氟苯基)-2-氧代丁基)氨基
甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (60 mg, 0.098 mmol, 66.9 %收
率)，为白色固体。
(7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-2-((4-(4-氟苯基)-2-羟基丁基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (90 mg, 0.147 mmol)于CH2Cl2 (3 mL)中的溶液中添加粉末状4A分子筛 (55 mg)和NMO (25.9 mg, 0.221 mmol)。在将混合物搅拌10 min后，加入TPAP (5.17 mg, 0.015 mmol)并将混合物在室温搅拌1 h。此时LCMS表明反应完成。然后通过硅胶垫过滤混合物。接着浓缩滤液并通过Biotage (0-50% EtOAc/己烷; 25g 柱)提纯以得到(S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-2-((4-(4-氟苯基)-2-氧代丁基)氨基
甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (60 mg, 0.098 mmol, 66.9 %收
率)，为白色固体。
[0308]
[0309] 实施例 16
[0310]
[0311] (S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-2-(5-(4-氟苯乙基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸: 向(S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基哌
啶-1-基)-2-((4-(4-氟苯基)-2-氧代丁基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-
基)乙酸乙酯 (60 mg, 0.098 mmol)于甲苯中的溶液中添加 Lawesson's 试剂(43.8 mg,
0.108 mmol) 并在室温下搅拌15min，在60℃下搅拌1h，2 h。此时LCMS 表明反应完成和出现目标产物。然后冷却混合物，浓缩并用1M NaOH (0.295 mL, 0.295 mmol) /MeOH (3 mL)在65℃下处理4 h。然后冷却混合物并通过制备HPLC提纯以得到(S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-2-(5-(4-氟苯乙基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-
基)乙酸 (35 mg, 0.060 mmol, 61.4 %收率)。
啶-1-基)-2-((4-(4-氟苯基)-2-氧代丁基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-
基)乙酸乙酯 (60 mg, 0.098 mmol)于甲苯中的溶液中添加 Lawesson's 试剂(43.8 mg,
0.108 mmol) 并在室温下搅拌15min，在60℃下搅拌1h，2 h。此时LCMS 表明反应完成和出现目标产物。然后冷却混合物，浓缩并用1M NaOH (0.295 mL, 0.295 mmol) /MeOH (3 mL)在65℃下处理4 h。然后冷却混合物并通过制备HPLC提纯以得到(S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-2-(5-(4-氟苯乙基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-
基)乙酸 (35 mg, 0.060 mmol, 61.4 %收率)。
[0312]
[0313] 中间体34
[0314]
[0315] (S)-6-(1-(叔丁氧基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-碘-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸:向(S)-6-(1-(叔丁氧基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-碘-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸乙酯 (5g, 10.22 mmol)于乙醇(100 mL)中的溶液中添加1M NaOH (10.22
mL, 10.22 mmol)并将所得混合物在室温下搅拌3 h。然后浓缩混合物，残余物用水 (100 mL)稀释并用乙醚 (100 mL)萃取。水层然后用1M HCl 酸化并用乙醚(150 mL)萃取，用盐水(50 mL)洗涤，干燥 (Na2SO4)，过滤并浓缩。残余物然后用乙醚/己烷研磨并过滤固体，用己烷洗涤并在高真空下干燥以得到(S)-6-(1-(叔丁氧基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-碘5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸 (3.4 g, 7.37 mmol, 72.1 %收率)，为灰白色固体。
mL, 10.22 mmol)并将所得混合物在室温下搅拌3 h。然后浓缩混合物，残余物用水 (100 mL)稀释并用乙醚 (100 mL)萃取。水层然后用1M HCl 酸化并用乙醚(150 mL)萃取，用盐水(50 mL)洗涤，干燥 (Na2SO4)，过滤并浓缩。残余物然后用乙醚/己烷研磨并过滤固体，用己烷洗涤并在高真空下干燥以得到(S)-6-(1-(叔丁氧基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-7-碘5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸 (3.4 g, 7.37 mmol, 72.1 %收率)，为灰白色固体。
[0316]
[0317] 中间体35
[0318]
[0319] (S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-7-碘-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯。向(S)-6-(1-(叔丁氧基)-2-乙氧基-2-氧代乙基)-
7-碘-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸 (2.5 g, 5.42 mmol)于CH2Cl2 (50 mL)中的溶液中添加草酰氯(0.522 mL, 5.96 mmol)。然后添加1滴DMF并将混合物在室温下搅拌1h。然后将粗制酰氯添加到 1-氨基-3-(4-氟苯基)丙-2-酮, HCl (1.435 g, 7.05 mmol)和DIEA
(5.68 mL, 32.5 mmol)于CH2Cl2 (50.0 mL)中的预搅拌溶液中并将所得溶液在室温下搅拌
2 h。然后加入水并用二氯甲烷萃取混合物，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。粗制物然后通过硅胶柱上的快速柱色谱法提纯，使用 (5-70% EtOAc/Hex为洗脱剂) 以得到 (S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-7-碘-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-
6-基)乙酸乙酯(2 g, 3.28 mmol, 60.5 %收率)，为浅黄色固体(旋转异构体的混合物)。
7-碘-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-2-甲酸 (2.5 g, 5.42 mmol)于CH2Cl2 (50 mL)中的溶液中添加草酰氯(0.522 mL, 5.96 mmol)。然后添加1滴DMF并将混合物在室温下搅拌1h。然后将粗制酰氯添加到 1-氨基-3-(4-氟苯基)丙-2-酮, HCl (1.435 g, 7.05 mmol)和DIEA
(5.68 mL, 32.5 mmol)于CH2Cl2 (50.0 mL)中的预搅拌溶液中并将所得溶液在室温下搅拌
2 h。然后加入水并用二氯甲烷萃取混合物，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。粗制物然后通过硅胶柱上的快速柱色谱法提纯，使用 (5-70% EtOAc/Hex为洗脱剂) 以得到 (S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-7-碘-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-
6-基)乙酸乙酯(2 g, 3.28 mmol, 60.5 %收率)，为浅黄色固体(旋转异构体的混合物)。
[0320]
[0321] 中间体36
[0322]
[0323] (S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4-乙基-4-甲基哌啶-1-基)-2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯:向(S)-2-(叔丁氧基)-
2-(2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-7-碘-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (100 mg, 0.164 mmol) 和4-乙基-4-甲基哌啶(41.7 mg, 0.328 mmol)于NMP
(2 mL)中的溶液中添加DIEA (0.086 mL, 0.491 mmol)并将混合物在60℃下加热4 h。此时LCMS表明反应完成。然后将混合物冷却至室温，用水稀释并用乙醚 (3 X 20 mL)萃取，干燥 (Na2SO4)，过滤并浓缩。残余物然后通过快速色谱法提纯(5-70% EtOAc/己烷) 以得到 (S)-
2-(叔丁氧基)-2-(7-(4-乙基-4-甲基哌啶-1-基)-2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (85 mg, 0.139 mmol, 85 %收率)，为粘性油状物。
2-(2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-7-碘-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (100 mg, 0.164 mmol) 和4-乙基-4-甲基哌啶(41.7 mg, 0.328 mmol)于NMP
(2 mL)中的溶液中添加DIEA (0.086 mL, 0.491 mmol)并将混合物在60℃下加热4 h。此时LCMS表明反应完成。然后将混合物冷却至室温，用水稀释并用乙醚 (3 X 20 mL)萃取，干燥 (Na2SO4)，过滤并浓缩。残余物然后通过快速色谱法提纯(5-70% EtOAc/己烷) 以得到 (S)-
2-(叔丁氧基)-2-(7-(4-乙基-4-甲基哌啶-1-基)-2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (85 mg, 0.139 mmol, 85 %收率)，为粘性油状物。
[0324]
[0325] 实施例 17
[0326]
[0327] (S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4-乙基-4-甲基哌啶-1-基)-2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸。向(S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4-乙基-4-甲基哌啶-1-基)-2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (80 mg, 0.131 mmol)于甲苯中的溶液中添加Lawesson's试剂 (58.4 mg,
0.144 mmol) 并在室温下搅拌15min，在60℃下搅拌1 h，2 h。此时LCMS 表明反应完成和出现目标产物。然后冷却混合物，浓缩并用1M NaOH (0.394 mL, 0.394 mmol) /MeOH (2 mL)在65℃下处理4 h。然后冷却混合物并通过制备HPLC提纯以得到 (S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4-乙基-4-甲基哌啶-1-基)-2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸 (58 mg, 0.100 mmol, 76 %收率)。
0.144 mmol) 并在室温下搅拌15min，在60℃下搅拌1 h，2 h。此时LCMS 表明反应完成和出现目标产物。然后冷却混合物，浓缩并用1M NaOH (0.394 mL, 0.394 mmol) /MeOH (2 mL)在65℃下处理4 h。然后冷却混合物并通过制备HPLC提纯以得到 (S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4-乙基-4-甲基哌啶-1-基)-2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸 (58 mg, 0.100 mmol, 76 %收率)。
[0328]
[0329] 中间体37
[0330]
[0331] (S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-7-(4-羟基-4-甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯:向(S)-2-(叔丁氧基)-
2-(2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-7-碘-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (100 mg, 0.164 mmol)和4-甲基哌啶-4-醇, HCl (49.7 mg, 0.328 mmol)于
NMP (2 mL)中的溶液中添加 DIEA (0.086 mL, 0.491 mmol)并将混合物在60℃下加热16 h。此时LCMS表明反应完成。然后将混合物冷却至室温，用水稀释并用乙酸乙酯 (2 X 50 mL)萃取，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。残余物然后通过快速色谱法提纯 (5-70% EtOAc/己烷) 以得到(S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-7-(4-羟基-4-甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (60 mg, 0.100 mmol,
61.3 %收率)，为灰白色固体。
2-(2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-7-碘-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (100 mg, 0.164 mmol)和4-甲基哌啶-4-醇, HCl (49.7 mg, 0.328 mmol)于
NMP (2 mL)中的溶液中添加 DIEA (0.086 mL, 0.491 mmol)并将混合物在60℃下加热16 h。此时LCMS表明反应完成。然后将混合物冷却至室温，用水稀释并用乙酸乙酯 (2 X 50 mL)萃取，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。残余物然后通过快速色谱法提纯 (5-70% EtOAc/己烷) 以得到(S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-7-(4-羟基-4-甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (60 mg, 0.100 mmol,
61.3 %收率)，为灰白色固体。
[0332]
[0333] 实施例 18和19
[0334]
[0335] (S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-7-(4-羟基-4-甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸和(S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-(5-(4-氟苄基)噻
唑-2-基)-5-甲基-7-(4-甲基-5,6-二氢吡啶-1(2H)-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸:
向(S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-7-(4-羟基-4-甲
基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (60 mg, 0.100 mmol)于甲苯
中的溶液中添加Lawesson's 试剂(44.7 mg, 0.110 mmol) 并在室温下搅拌15min，在60℃下搅拌1h，3 h。此时LCMS 显示目标产物和脱水副产物。然后冷却混合物，浓缩并用1M NaOH (0.301 mL, 0.301 mmol) /MeOH (2 mL)在60℃下处理3 h。然后冷却混合物并通过制备
HPLC提纯以得到
唑-2-基)-5-甲基-7-(4-甲基-5,6-二氢吡啶-1(2H)-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸:
向(S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-7-(4-羟基-4-甲
基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (60 mg, 0.100 mmol)于甲苯
中的溶液中添加Lawesson's 试剂(44.7 mg, 0.110 mmol) 并在室温下搅拌15min，在60℃下搅拌1h，3 h。此时LCMS 显示目标产物和脱水副产物。然后冷却混合物，浓缩并用1M NaOH (0.301 mL, 0.301 mmol) /MeOH (2 mL)在60℃下处理3 h。然后冷却混合物并通过制备
HPLC提纯以得到
[0336] 实施例 18: (S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-7-(4-羟基-4-甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸 (22 mg, 0.039 mmol, 38.6 %收率)。
[0337]
[0338] 实施例 19: (S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-5-甲基-7-(4-甲基-5,6-二氢吡啶-1(2H)-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸 (13.4 mg, 0.024 mmol,
24.28 %收率)。
24.28 %收率)。
[0339]
[0340] 中间体38
[0341]
[0342] (S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-7-(4-羟基-4-苯基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯: 向(S)-2-(叔丁氧
基)-2-(2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-7-碘-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-
6-基)乙酸乙酯 (60 mg, 0.098 mmol) 和4-苯基哌啶-4-醇 (34.8 mg, 0.197 mmol)于
NMP (1 mL) 中的溶液中添加 DIEA (0.052 mL, 0.295 mmol)并将混合物在60℃下加热72 h。此时LCMS表明反应完成。然后将混合物冷却至室温，用水稀释并用乙醚(2 X 50 mL)萃取，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。残余物然后通过快速色谱法(5-40% EtOAc/己烷) 提纯以得到 (S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-7-(4-羟基-4-苯基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (50 mg, 0.076 mmol, 77 %收率)，为灰白色固体。
基)-2-(2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-7-碘-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-
6-基)乙酸乙酯 (60 mg, 0.098 mmol) 和4-苯基哌啶-4-醇 (34.8 mg, 0.197 mmol)于
NMP (1 mL) 中的溶液中添加 DIEA (0.052 mL, 0.295 mmol)并将混合物在60℃下加热72 h。此时LCMS表明反应完成。然后将混合物冷却至室温，用水稀释并用乙醚(2 X 50 mL)萃取，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。残余物然后通过快速色谱法(5-40% EtOAc/己烷) 提纯以得到 (S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-7-(4-羟基-4-苯基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (50 mg, 0.076 mmol, 77 %收率)，为灰白色固体。
[0343]
[0344] 实施例 20
[0345]
[0346] (S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-5-甲基-7-(4-苯基-5,6-二氢吡啶-1(2H)-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸：向(S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-7-(4-羟基-4-苯基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯(50 mg, 0.076 mmol)于甲苯中的溶液中添加Lawesson's试剂(33.7
mg, 0.083 mmol) 并在室温下搅拌15min，在60℃下搅拌1 h，2 h。此时LCMS 显示主要为脱水副产物而不是目标产物。然后冷却混合物，浓缩并与1M NaOH (0.227 mL, 0.227 mmol) /MeOH (2 mL)一起在70℃下加热3 h。然后冷却混合物并通过制备HPLC提纯以得到(S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-5-甲基-7-(4-苯基-5,6-二氢吡啶-1(2H)-
基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸 (9 mg, 0.015 mmol, 19.41 %收率)。
mg, 0.083 mmol) 并在室温下搅拌15min，在60℃下搅拌1 h，2 h。此时LCMS 显示主要为脱水副产物而不是目标产物。然后冷却混合物，浓缩并与1M NaOH (0.227 mL, 0.227 mmol) /MeOH (2 mL)一起在70℃下加热3 h。然后冷却混合物并通过制备HPLC提纯以得到(S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-5-甲基-7-(4-苯基-5,6-二氢吡啶-1(2H)-
基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸 (9 mg, 0.015 mmol, 19.41 %收率)。
[0347]
[0348] 中间体39
[0349]
[0350] (S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-7-(4-(羟基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯: 向(S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-7-碘-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧
啶-6-基)乙酸乙酯 (70 mg, 0.115 mmol)和(4-甲基哌啶-4-基)甲醇·HCl (38.0 mg,
0.229 mmol) 于NMP (1.5 mL)中的溶液中添加DIEA (0.060 mL, 0.344 mmol)并将混合物在60℃下加热4 h。此时LCMS表明反应完成。然后将混合物冷却至室温，用水稀释并用乙酸乙酯(2 X 20 mL)萃取，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。残余物然后通过快速色谱法(5-70% EtOAc/己烷) 提纯以得到(S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲
酰基)-7-(4-(羟基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (47 mg, 0.077 mmol, 67.0 %收率)，为粘性油状物。
啶-6-基)乙酸乙酯 (70 mg, 0.115 mmol)和(4-甲基哌啶-4-基)甲醇·HCl (38.0 mg,
0.229 mmol) 于NMP (1.5 mL)中的溶液中添加DIEA (0.060 mL, 0.344 mmol)并将混合物在60℃下加热4 h。此时LCMS表明反应完成。然后将混合物冷却至室温，用水稀释并用乙酸乙酯(2 X 20 mL)萃取，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。残余物然后通过快速色谱法(5-70% EtOAc/己烷) 提纯以得到(S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲
酰基)-7-(4-(羟基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (47 mg, 0.077 mmol, 67.0 %收率)，为粘性油状物。
[0351]
[0352] 实施例 21
[0353]
[0354] (S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-7-(4-(羟基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸: 向(S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-7-(4-(羟基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并
[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (48 mg, 0.078 mmol)于甲苯中的溶液中添加Lawesson's试剂 (34.9 mg, 0.086 mmol) 并在室温下搅拌15min，在80℃下搅拌2 h。然后浓缩混合物并用1N NaOH (0.235 mL, 0.235 mmol) /MeOH (2 mL)在70℃下处理5 h。然后冷却混合物，浓缩并通过制备HPLC提纯以得到(S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-7-
(4-(羟基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸 (7.9 mg,
0.014 mmol, 17.31 %收率)。
[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (48 mg, 0.078 mmol)于甲苯中的溶液中添加Lawesson's试剂 (34.9 mg, 0.086 mmol) 并在室温下搅拌15min，在80℃下搅拌2 h。然后浓缩混合物并用1N NaOH (0.235 mL, 0.235 mmol) /MeOH (2 mL)在70℃下处理5 h。然后冷却混合物，浓缩并通过制备HPLC提纯以得到(S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-7-
(4-(羟基甲基)-4-甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸 (7.9 mg,
0.014 mmol, 17.31 %收率)。
[0355]
[0356] 中间体40
[0357]
[0358] (S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-7-(4-甲氧基-4-甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯: 向(S)-2-(叔丁氧
基)-2-(2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-7-碘-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-
6-基)乙酸乙酯 (100 mg, 0.164 mmol) 和4-甲氧基-4-甲基哌啶·HCl (54.3 mg, 0.328 mmol)于NMP (2 mL)中的溶液中添加DIEA (0.086 mL, 0.491 mmol)并将混合物在60℃下
加热 16 h。此时LCMS表明反应完成。然后将混合物冷却至室温，用水稀释并用乙酸乙酯(2 X 50 mL)萃取，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。残余物然后通过快速色谱法(5-70% EtOAc/己烷) 提纯以得到(S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-7-
(4-甲氧基-4-甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (62 mg,
0.101 mmol, 61.9 %收率)，为灰白色固体。
基)-2-(2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-7-碘-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-
6-基)乙酸乙酯 (100 mg, 0.164 mmol) 和4-甲氧基-4-甲基哌啶·HCl (54.3 mg, 0.328 mmol)于NMP (2 mL)中的溶液中添加DIEA (0.086 mL, 0.491 mmol)并将混合物在60℃下
加热 16 h。此时LCMS表明反应完成。然后将混合物冷却至室温，用水稀释并用乙酸乙酯(2 X 50 mL)萃取，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。残余物然后通过快速色谱法(5-70% EtOAc/己烷) 提纯以得到(S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-7-
(4-甲氧基-4-甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (62 mg,
0.101 mmol, 61.9 %收率)，为灰白色固体。
[0359]
[0360] 实施例 22
[0361]
[0362] (S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-7-(4-甲氧基-4-甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸: 向(S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-((3-(4-氟苯
基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-7-(4-甲氧基-4-甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (62 mg, 0.101 mmol)于甲苯中的溶液中添加Lawesson's 试剂(45.1 mg, 0.111 mmol) 并在室温下搅拌15min，在60℃下搅拌1 h，2 h。此时LCMS表明反应完成和出现目标产物。然后将混合物冷却，浓缩并用1N NaOH (0.304 mL, 0.304 mmol) /MeOH (2 mL)在65℃下处理4 h。然后冷却混合物并通过制备HPLC提纯以得到 (S)-2-(叔丁氧
基)-2-(2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-7-(4-甲氧基-4-甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,
5-a]嘧啶-6-基)乙酸 (39 mg, 0.067 mmol, 66.1 %收率)。
基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-7-(4-甲氧基-4-甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (62 mg, 0.101 mmol)于甲苯中的溶液中添加Lawesson's 试剂(45.1 mg, 0.111 mmol) 并在室温下搅拌15min，在60℃下搅拌1 h，2 h。此时LCMS表明反应完成和出现目标产物。然后将混合物冷却，浓缩并用1N NaOH (0.304 mL, 0.304 mmol) /MeOH (2 mL)在65℃下处理4 h。然后冷却混合物并通过制备HPLC提纯以得到 (S)-2-(叔丁氧
基)-2-(2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-7-(4-甲氧基-4-甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,
5-a]嘧啶-6-基)乙酸 (39 mg, 0.067 mmol, 66.1 %收率)。
[0363]
[0364] 中间体41
[0365]
[0366] 参考: WO2008/118718
[0367] 4-甲酰基-4-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯:在0℃下向4-甲酰基哌啶-1-甲酸叔丁酯 (4.5 g, 21.10 mmol) 于CH2Cl2 (50 mL)中的溶液中添加 KOtBu (3.08 g, 27.4 mmol)，接着添加MeI (3.96 mL, 63.3 mmol)并将所得混合物在0℃下搅拌30 min，然后升温至室温并搅拌1.5 h。然后将反应混合物倒入盐水中并用二氯甲烷萃取混合物，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。残余物然后通过Biotage (0-20% EtOAc/己烷)提纯以得到4-甲酰基-4-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯 (1.8 g, 7.92 mmol, 37.5 %收率)，为无色油状物。
[0368]
[0369] 中间体42
[0370]
[0371] 4-甲基-4-乙烯基哌啶-1-甲酸叔丁酯 (参考: US6140333): 在0℃下向CH3PPh3Br (1037 mg, 2.90 mmol)于THF (20 mL)中的溶液中添加2.5 M nBuLi (2.105 mL, 3.43 mmol)并将混合物搅拌30 min。逐滴添加4-甲酰基-4-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯 (600 mg,
2.64 mmol)/THF (5 mL)并将混合物在0℃下搅拌1 h。然后用乙酸乙酯稀释反应混合物并用饱和NH4Cl 和盐水洗涤，干燥 (Na2SO4)，过滤并浓缩。残余物然后通过Biotage (0-30% EtOAc/己烷) 提纯以得到4-甲基-4-乙烯基哌啶-1-甲酸叔丁酯 (310 mg, 1.376 mmol,
52.1 %收率)，为无色液体。
2.64 mmol)/THF (5 mL)并将混合物在0℃下搅拌1 h。然后用乙酸乙酯稀释反应混合物并用饱和NH4Cl 和盐水洗涤，干燥 (Na2SO4)，过滤并浓缩。残余物然后通过Biotage (0-30% EtOAc/己烷) 提纯以得到4-甲基-4-乙烯基哌啶-1-甲酸叔丁酯 (310 mg, 1.376 mmol,
52.1 %收率)，为无色液体。
[0372]
[0373] 中间体43
[0374]
[0375] 4-环丙基-4-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯。向冷却到0℃的4-甲基-4-乙烯基哌啶-1-甲酸叔丁酯 (310 mg, 1.376 mmol)于乙醚 (10 mL)中的溶液中逐份添加Pd(OAc)2
(15.44 mg, 0.069 mmol)、接着新鲜制备的醚CH2N2溶液，并将反应混合物在室温下搅拌16 h。然后通过滴加AcOH淬灭混合物并用饱和NaHCO3溶液稀释。混合物用CH2Cl2萃取，有机层经Na2SO4干燥。粗物质的 HNMR表明大约20%的目标环丙基产物与起始物质共洗脱。原样用于下一步骤。
(15.44 mg, 0.069 mmol)、接着新鲜制备的醚CH2N2溶液，并将反应混合物在室温下搅拌16 h。然后通过滴加AcOH淬灭混合物并用饱和NaHCO3溶液稀释。混合物用CH2Cl2萃取，有机层经Na2SO4干燥。粗物质的 HNMR表明大约20%的目标环丙基产物与起始物质共洗脱。原样用于下一步骤。
[0376]
[0377] 中间体44和45
[0378]
[0379] 4-甲基-4-乙烯基哌啶, HCl和4-环丙基-4-甲基哌啶, HCl：将由上述步骤制备的4-甲基-4-乙烯基哌啶-1-甲酸叔丁酯 (240 mg, 1.065 mmol) 和4-环丙基-4-甲基哌啶-
1-甲酸叔丁酯 (255 mg, 1.065 mmol) 与4M HCl/二氧杂环己烷(1.331 ml, 5.33 mmol)
的混合物在室温下搅拌3 h。然后浓缩混合物并用乙醚/环己烷研磨固体，过滤并在高真空下干燥以得到160 mg的乙烯基和环丙基胺的混合物。不经进一步提纯原样用于下一步骤。
1-甲酸叔丁酯 (255 mg, 1.065 mmol) 与4M HCl/二氧杂环己烷(1.331 ml, 5.33 mmol)
的混合物在室温下搅拌3 h。然后浓缩混合物并用乙醚/环己烷研磨固体，过滤并在高真空下干燥以得到160 mg的乙烯基和环丙基胺的混合物。不经进一步提纯原样用于下一步骤。
[0380] 实施例 23和24
[0381]
[0382] (S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-5-甲基-7-(4-甲基-4-乙烯基哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸和(S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4-环丙基-4-甲基哌啶-1-基)-2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸: 向
(S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-7-碘-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (300 mg, 0.491 mmol) 和上述步骤生成的乙烯基和环丙基
4-甲基哌啶的混合物160 mg于NMP (3 mL)中的溶液中添加DIEA (0.258 mL, 1.474 mmol) 并将混合物在60℃下加热16 h。此时LCMS表明反应完成。然后将混合物冷却至室温，用水稀释并用乙酸乙酯(2 X 50 mL)萃取，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。残余物然后通过快速色谱法(5-70% EtOAc/己烷) 提纯以得到(S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-5-甲基-7-(4-甲基-4-乙烯基哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙
酯 LCMS (M+H) = 608.4 和(S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4-环丙基-4-甲基哌啶-1-基)-2-
((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯. LCMS (M+H) = 622.4的大约3:1的不可分离的混合物，其用Lawesson's试剂 (65.9 mg,
0.163 mmol)/甲苯 (5 mL)在60℃下处理1 h。然后浓缩混合物，粗物质用1M NaOH (0.592 mL, 0.592 mmol)/MeOH (3 mL)在70℃下处理3 h。然后将混合物冷却至室温并通过制备
HPL提纯以得到
(S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-7-碘-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯 (300 mg, 0.491 mmol) 和上述步骤生成的乙烯基和环丙基
4-甲基哌啶的混合物160 mg于NMP (3 mL)中的溶液中添加DIEA (0.258 mL, 1.474 mmol) 并将混合物在60℃下加热16 h。此时LCMS表明反应完成。然后将混合物冷却至室温，用水稀释并用乙酸乙酯(2 X 50 mL)萃取，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。残余物然后通过快速色谱法(5-70% EtOAc/己烷) 提纯以得到(S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-5-甲基-7-(4-甲基-4-乙烯基哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙
酯 LCMS (M+H) = 608.4 和(S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4-环丙基-4-甲基哌啶-1-基)-2-
((3-(4-氟苯基)-2-氧代丙基)氨基甲酰基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸乙酯. LCMS (M+H) = 622.4的大约3:1的不可分离的混合物，其用Lawesson's试剂 (65.9 mg,
0.163 mmol)/甲苯 (5 mL)在60℃下处理1 h。然后浓缩混合物，粗物质用1M NaOH (0.592 mL, 0.592 mmol)/MeOH (3 mL)在70℃下处理3 h。然后将混合物冷却至室温并通过制备
HPL提纯以得到
[0383] 实施例 23: (S)-2-(叔丁氧基)-2-(2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-5-甲基-7-(4-甲基-4-乙烯基哌啶-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸 (50 mg, 0.087 mmol, 58.4 %收率) 。
[0384]
[0385] 实施例 24: (S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4-环丙基-4-甲基哌啶-1-基)-2-(5-(4-氟苄基)噻唑-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸 (15 mg, 0.025 mmol, 17.12 %收率)。
[0386]
[0387] 中间体46
[0388]
[0389] (5-溴噻吩-2-基)(4-氟苯基)甲醇: 在-15℃下向5-溴噻吩-2-甲醛 (1 g, 5.23 mmol) 于乙醚(20 mL)中的溶液中逐滴添加 (4-氟苯基)溴化镁(2.88 mL, 5.76 mmol)的
2M溶液。使混合物升温至室温并搅拌1 h。然后加入饱和NH4Cl 溶液并用乙酸乙酯萃取混合物，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。残余物然后通过biotage (0-30% EtOAc/己烷)提纯以得到 (5-溴噻吩-2-基)(4-氟苯基)甲醇 (900 mg, 3.13 mmol, 59.9 %收率)，为浅黄色液体。
2M溶液。使混合物升温至室温并搅拌1 h。然后加入饱和NH4Cl 溶液并用乙酸乙酯萃取混合物，干燥(Na2SO4)，过滤并浓缩。残余物然后通过biotage (0-30% EtOAc/己烷)提纯以得到 (5-溴噻吩-2-基)(4-氟苯基)甲醇 (900 mg, 3.13 mmol, 59.9 %收率)，为浅黄色液体。
[0390]
[0391] 中间体47
[0392]
[0393] 2-溴-5-(4-氟苄基)噻吩: 在0℃下向(5-溴噻吩-2-基)(4-氟苯基)甲醇 (900 mg, 3.13 mmol) 和Et3SiH (2.503 mL, 15.67 mmol) 于氯仿 (20 mL)中的溶液中逐滴添加三氟甲磺酸 (0.557 mL, 6.27 mmol)并将所得混合物在室温下搅拌1 h，然后将其用二氯甲烷稀释并用饱和NaHCO3溶液洗涤。干燥有机相 (Na2SO4)，过滤并浓缩。残余物然后通过Biotage (0-20% EtOAc/己烷)提纯以得到2-溴-5-(4-氟苄基)噻吩 (600 mg, 2.213
mmol, 70.6 %收率)，为无色液体。
mmol, 70.6 %收率)，为无色液体。
[0394]
[0395] 中间体48
[0396]
[0397] (5-(4-氟苄基)噻吩-2-基)硼酸: 在-78℃下向2-溴-5-(4-氟苄基)噻吩 (300 mg, 1.106 mmol)于THF (10 mL) 中的溶液中逐滴添加 2.5M nBuLi (0.531 mL, 1.328
mmol)并将所得混合物搅拌15 min。然后加入硼酸三异丙酯 (1.526 mL, 6.64 mmol)并将混合物搅拌2 h。然后将混合物升温至室温，用1N HCl酸化并用乙醚萃取。干燥有机层
(Na2SO4)，过滤并减压浓缩。残余物然后用乙酸乙酯/己烷研磨，过滤固体并在高真空下干燥以得到(5-(4-氟苄基)噻吩-2-基)硼酸 (150 mg, 0.635 mmol, 57.4 %收率)，为灰白色固体。
mmol)并将所得混合物搅拌15 min。然后加入硼酸三异丙酯 (1.526 mL, 6.64 mmol)并将混合物搅拌2 h。然后将混合物升温至室温，用1N HCl酸化并用乙醚萃取。干燥有机层
(Na2SO4)，过滤并减压浓缩。残余物然后用乙酸乙酯/己烷研磨，过滤固体并在高真空下干燥以得到(5-(4-氟苄基)噻吩-2-基)硼酸 (150 mg, 0.635 mmol, 57.4 %收率)，为灰白色固体。
[0398]
[0399] 实施例 25
[0400]
[0401] (S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-2-(5-(4-氟苄基)噻吩-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸:将(S)-2-(2-溴-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-
5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-(叔丁氧基)乙酸甲酯 (50 mg, 0.107 mmol)、(5-(4-氟苄基)噻吩-2-基)硼酸 (50.5 mg, 0.214 mmol)和2M Na2CO3 (0.107 mL, 0.214 mmol)于DMF (2 mL)中的混合物脱气15 min。然后加入四(三苯基膦)钯(0) (8.65 mg, 7.49 µ
mol)并继续脱气另外5 min。然后将混合物在90℃下加热16 h。在冷却至室温后，加入水并用乙酸乙酯萃取混合物，用盐水洗涤，干燥 (Na2SO4)，过滤并浓缩。残余物然后用1M NaOH (0.321 mL, 0.321 mmol)/MeOH (3 mL)在70℃下处理3 h。然后冷却混合物并通过制备
HPLC提纯以得到(S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-2-(5-(4-氟苄基)噻
吩-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸 (24 mg, 0.042 mmol, 39.7 %收率)。
5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-(叔丁氧基)乙酸甲酯 (50 mg, 0.107 mmol)、(5-(4-氟苄基)噻吩-2-基)硼酸 (50.5 mg, 0.214 mmol)和2M Na2CO3 (0.107 mL, 0.214 mmol)于DMF (2 mL)中的混合物脱气15 min。然后加入四(三苯基膦)钯(0) (8.65 mg, 7.49 µ
mol)并继续脱气另外5 min。然后将混合物在90℃下加热16 h。在冷却至室温后，加入水并用乙酸乙酯萃取混合物，用盐水洗涤，干燥 (Na2SO4)，过滤并浓缩。残余物然后用1M NaOH (0.321 mL, 0.321 mmol)/MeOH (3 mL)在70℃下处理3 h。然后冷却混合物并通过制备
HPLC提纯以得到(S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-2-(5-(4-氟苄基)噻
吩-2-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸 (24 mg, 0.042 mmol, 39.7 %收率)。
[0402]
[0403] 中间体49
[0404]
[0405] 2-(2-溴-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸甲酯:向2-(2-溴-7-氯-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸甲酯 (1.33 g, 4.18 mmol, 1当量)于DMF (14 mL)中的溶液中添加 4,4-二甲基哌啶盐酸盐 (0.75 g, 5.01 mmol, 1.2当量)和DIPEA (1.75 mL, 10.02 mmol, 2.4当量)。然后将反应在油浴中在60℃下加热。完成后，将反应从加热下移除，用水稀释，并用EtOAc 萃取(x2)。合并的EtOAc萃取物经Na2SO4干燥并真空浓缩。粗产物通过硅胶快速色谱法提纯(0-100% EtOAc/己烷)以提供产物，为灰白色固体 (1.50 g, 91%)。
[0406]
[0407] 中间体50
[0408]
[0409] 2-(2-溴-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-羟基乙酸甲酯: 在-78℃(IPA/CO2)下向2-(2-溴-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,
5-a]嘧啶-6-基)乙酸甲酯 (1.49 g, 3.79 mmol, 1 当量)于THF (38 mL) 中的溶液中添
加 KHMDS (6.8 mL的0.91 M THF溶液, 6.07 mmol, 1.6当量)。反应变为深橙色。15 min后，一次性添加3-苯基-2-(苯基磺酰基)-1,2-氧杂氮杂环丙烷 (1.49 g, 5.69 mmol, 1.5当量)。反应溶液明显变深，然后搅拌30 min。然后将反应从冷浴移除并用饱和NaHCO3水溶液淬灭，添加到水中，并用 EtOAc萃取(x3)。合并的EtOAc萃取物经Na2SO4干燥并真空浓缩。
粗产物通过硅胶快速色谱法提纯 (0-100% EtOAc/己烷) 以提供产物，为蜡状黄色固体
(1.28 g, 82%)。
5-a]嘧啶-6-基)乙酸甲酯 (1.49 g, 3.79 mmol, 1 当量)于THF (38 mL) 中的溶液中添
加 KHMDS (6.8 mL的0.91 M THF溶液, 6.07 mmol, 1.6当量)。反应变为深橙色。15 min后，一次性添加3-苯基-2-(苯基磺酰基)-1,2-氧杂氮杂环丙烷 (1.49 g, 5.69 mmol, 1.5当量)。反应溶液明显变深，然后搅拌30 min。然后将反应从冷浴移除并用饱和NaHCO3水溶液淬灭，添加到水中，并用 EtOAc萃取(x3)。合并的EtOAc萃取物经Na2SO4干燥并真空浓缩。
粗产物通过硅胶快速色谱法提纯 (0-100% EtOAc/己烷) 以提供产物，为蜡状黄色固体
(1.28 g, 82%)。
[0410]
[0411] 中间体51
[0412]
[0413] 2-(2-溴-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-氧代乙酸甲酯: 向2-(2-溴-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-
羟基乙酸甲酯(1.28 g, 3.11 mmol, 1当量)于DCM (16 mL)中的溶液中添加Dess-Martin
氧化剂 (1.85 g, 4.36 mmol, 1.4 当量)。30min后，向反应中添加饱和NHCO3水溶液并用DCM萃取(x3)。合并的DCM萃取物经 Na2SO4干燥并真空浓缩。粗产物通过硅胶快速色谱法提纯(0-50% EtOAc/己烷)以提供产物，为黄色固体(0.71 g, 56%)。
羟基乙酸甲酯(1.28 g, 3.11 mmol, 1当量)于DCM (16 mL)中的溶液中添加Dess-Martin
氧化剂 (1.85 g, 4.36 mmol, 1.4 当量)。30min后，向反应中添加饱和NHCO3水溶液并用DCM萃取(x3)。合并的DCM萃取物经 Na2SO4干燥并真空浓缩。粗产物通过硅胶快速色谱法提纯(0-50% EtOAc/己烷)以提供产物，为黄色固体(0.71 g, 56%)。
[0414]
[0415] 中间体52
[0416]
[0417] (S)-2-(2-溴-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-羟基乙酸甲酯: 向2-(2-溴-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-
基)-2-氧代乙酸甲酯(6.15 g, 15.03 mmol, 1当量) 于甲苯(200 mL)中的溶液中添加
(R)-1-甲基-3,3-二苯基六氢吡咯并[1,2-c][1,2,3]氧杂氮杂硼杂环戊烯 (9.0 mL的1 M 甲苯溶液, 9.02mmol, 0.6当量)。将溶液冷却至-25℃ (乙腈/CO2)并加入儿茶酚硼烷
(8.7 mL的50%甲苯溶液, 36.1 mmol, 2.4当量)。将冷浴温度保持在-15℃至-25℃ 4 h。然后用EtOAc (35 mL)和10% K2CO3水溶液 (35 mL) 稀释反应并接着升温至环境温度。将淬灭后的溶液搅拌45 min，然后添加到水中。用乙醚萃取 (x3)。合并的乙醚萃取物经MgSO4干燥并真空浓缩。粗产物通过硅胶快速色谱法提纯 (0-70% EtOAc/己烷)以提供为浅黄色玻璃状的产物 (5.68 g, 92%)。
基)-2-氧代乙酸甲酯(6.15 g, 15.03 mmol, 1当量) 于甲苯(200 mL)中的溶液中添加
(R)-1-甲基-3,3-二苯基六氢吡咯并[1,2-c][1,2,3]氧杂氮杂硼杂环戊烯 (9.0 mL的1 M 甲苯溶液, 9.02mmol, 0.6当量)。将溶液冷却至-25℃ (乙腈/CO2)并加入儿茶酚硼烷
(8.7 mL的50%甲苯溶液, 36.1 mmol, 2.4当量)。将冷浴温度保持在-15℃至-25℃ 4 h。然后用EtOAc (35 mL)和10% K2CO3水溶液 (35 mL) 稀释反应并接着升温至环境温度。将淬灭后的溶液搅拌45 min，然后添加到水中。用乙醚萃取 (x3)。合并的乙醚萃取物经MgSO4干燥并真空浓缩。粗产物通过硅胶快速色谱法提纯 (0-70% EtOAc/己烷)以提供为浅黄色玻璃状的产物 (5.68 g, 92%)。
[0418]
[0419] 中间体53
[0420]
[0421] (S)-2-(2-溴-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-(叔丁氧基)乙酸甲酯: 向(S)-2-(2-溴-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-羟基乙酸甲酯 (5.68 g, 13.81 mmol, 1当量)于DCM (92 mL) 和乙酸叔丁酯 (184 mL)中的溶液中添加70% 高氯酸 (3.3 mL, 55.2 mmol, 4当量)。反应变为浅黄
色。3 h后，将反应非常小心地添加到NaHCO3饱和水溶液中并用CHCl3萃取(x3)。合并的有机萃取物经Na2SO4干燥并真空浓缩。粗产物通过硅胶快速色谱法提纯(0-70% EtOAc/己烷) 以提供产物，为浅黄色固体 (2.8 g, 43%) ，和回收的起始物质 (3.0 g, 53 %)。
色。3 h后，将反应非常小心地添加到NaHCO3饱和水溶液中并用CHCl3萃取(x3)。合并的有机萃取物经Na2SO4干燥并真空浓缩。粗产物通过硅胶快速色谱法提纯(0-70% EtOAc/己烷) 以提供产物，为浅黄色固体 (2.8 g, 43%) ，和回收的起始物质 (3.0 g, 53 %)。
[0422]
[0423] 中间体54
[0424]
[0425] 5-苄基噁唑烷-2-酮: 根据US5744466中描述的程序制备。
[0426] 中间体55
[0427]
[0428] 3-苯氧基吡咯烷-2-酮: 向苯酚 (0.279 g, 2.97 mmol, 1.2当量)、3-羟基吡咯烷-2-酮(0.25 g, 2.47 mmol, 1当量)和三苯基膦 (0.908 g, 3.46 mmol, 1.4当量) 于
THF (12 mL)中的溶液中添加DIAD (0.67 mL, 3.46 mmol, 1.4当量)。搅拌2 h后，通过TLC测得反应完成并真空浓缩。粗产物通过快速柱硅胶色谱法提纯(0-100% EtOAc/己烷)以提供3-苯氧基吡咯烷-2-酮 (0.116 g, 27%)，为灰白色固体。
THF (12 mL)中的溶液中添加DIAD (0.67 mL, 3.46 mmol, 1.4当量)。搅拌2 h后，通过TLC测得反应完成并真空浓缩。粗产物通过快速柱硅胶色谱法提纯(0-100% EtOAc/己烷)以提供3-苯氧基吡咯烷-2-酮 (0.116 g, 27%)，为灰白色固体。
[0429]
[0430] 中间体56
[0431]
[0432] 4-苄基-1H-吡唑: 根据Echevarria, A.; Elguero, J.Syn. Comm. 1993, 23, 925-930中描述的程序制备。
[0433] 中间体57
[0434]
[0435] 4-苄基-3-氯-1H-吡唑: 根据Echevarria, A.; Elguero, J.Syn. Comm. 1993, 23, 925-930中描述的程序制备。
[0436] 中间体58
[0437]
[0438] 4-苄基-1H-咪唑: 根据De Esch, I. J. P.; Gaffar, A.; Menge, W. M. P. V.; Timmerman, H.Bioorg. Med. Chem. 1999, 7, 3003-3009中描述的程序制备。
[0439] 中间体59
[0440]
[0441] 5-苄基-1H-吡唑: 根据Almirante, N.; Cerri, A.; Fedrizzi, G.; Marazzi, G.; Santagostino, M. Tetrahedron Lett. 1998, 39, 3287-3290中描述的程序制备。
[0442] 中间体60
[0443]
[0444] 4-羟基-4-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯: 在N2气氛下，将甲基溴化镁 (1.67 mL, 5.02 mmol)于乙醚中的3N溶液逐滴添加到4-羟基-4-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯 (4g, 20.08 mmol)于乙醚(20 mL)中的冷却(-25℃) 溶液中。将反应混合物升温至室温并搅拌 2 h。然后将其冷却至0℃并通过添加饱和氯化铵水溶液淬灭。添加另外20 mL乙醚并在分液漏斗中分配混合物。留出有机相，水相用另外20 mL乙醚萃取。合并的乙醚萃取物经MgSO4干燥，过滤并蒸发以得到油状物，其然后通过biotage提纯，用0-50% EtOAc/己烷洗脱以得到4-羟基-4-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯 (4.30 g, 18.0 mmol, 90 %)，为无色油状物。
[0445]
[0446] 中间体61
[0447]
[0448] 4-(烯丙氧基)-4-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯: 在0℃下向4-羟基-4-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯 (4.30 g, 20.0 mmol)于DMF (50 mL)中的混合物中添加NaH (60 wt%) (1.60
g, 39.9 mmol)。然后将混合物在室温下搅拌2h。此时经5 min缓慢添加烯丙基溴 (8.64 mL, 100 mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3h。然后将其冷却至0℃并用饱和氯化铵水溶液淬灭。反应混合物用乙醚萃取。有机相经MgSO4干燥，过滤并浓缩以得到无色油状物，其然后通过biotage提纯，用0-25% EtOAc/己烷洗脱以分离3.1 g (61%)的4-(烯丙氧基)-4-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯，为无色油状物。
g, 39.9 mmol)。然后将混合物在室温下搅拌2h。此时经5 min缓慢添加烯丙基溴 (8.64 mL, 100 mmol)。将反应混合物在室温下搅拌3h。然后将其冷却至0℃并用饱和氯化铵水溶液淬灭。反应混合物用乙醚萃取。有机相经MgSO4干燥，过滤并浓缩以得到无色油状物，其然后通过biotage提纯，用0-25% EtOAc/己烷洗脱以分离3.1 g (61%)的4-(烯丙氧基)-4-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯，为无色油状物。
[0449]
[0450] 中间体62
[0451]
[0452] 4-(烯丙氧基)-4-甲基哌啶盐酸盐: 将4-(烯丙氧基)-4-甲基哌啶-1-甲酸叔丁酯 (3.10 g, 12.1 mmol) 和4N HCl/二氧杂环己烷 (15 mL, 60.0 mmol)的混合物在室温下搅拌3h。然后将其真空浓缩以得到2.2 g (95%)的4-(烯丙氧基)-4-甲基哌啶盐酸盐，为浅褐色固体。
[0453]
[0454] 中间体63
[0455]
[0456] 2-(7-(4-(烯丙氧基)-4-甲基哌啶-1-基)-2-溴-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸甲酯: 将2-(2-溴-7-氯-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸甲酯 (13.4 g,
41.9 mmol, 1当量)、4-(烯丙氧基)-4-甲基哌啶 (7.16 g, 46.1 mmol, 1.1当量)和DIPEA (17.6 mL, 101 mmol, 2.4当量)于DMF (84 mL)中的溶液在60℃下加热2 h。然后将反应添加到水中并用乙醚萃取(x2)。合并的乙醚萃取物经 (MgSO4)干燥并真空浓缩。粗产物通过硅胶快速色谱法提纯(0-50% EtOAc/hex)以提供 2-(7-(4-(烯丙氧基)-4-甲基哌啶-1-
基)-2-溴-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸甲酯 (17.7 g, 97%)。
41.9 mmol, 1当量)、4-(烯丙氧基)-4-甲基哌啶 (7.16 g, 46.1 mmol, 1.1当量)和DIPEA (17.6 mL, 101 mmol, 2.4当量)于DMF (84 mL)中的溶液在60℃下加热2 h。然后将反应添加到水中并用乙醚萃取(x2)。合并的乙醚萃取物经 (MgSO4)干燥并真空浓缩。粗产物通过硅胶快速色谱法提纯(0-50% EtOAc/hex)以提供 2-(7-(4-(烯丙氧基)-4-甲基哌啶-1-
基)-2-溴-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸甲酯 (17.7 g, 97%)。
[0457]
[0458]
[0459] 中间体64
[0460]
[0461] 2-(7-(4-(烯丙氧基)-4-甲基哌啶-1-基)-2-溴-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-氧代乙酸甲酯: 将2-(7-(4-(烯丙氧基)-4-甲基哌啶-1-基)-2-溴-5-甲基吡唑并
[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸甲酯 (17.7 g, 40.5 mmol, 1当量)于THF (200mL) 中的溶液冷
却至-78℃ (IPA/CO2)。历经约2 min逐滴添加KHMDS (72 mL的0.91 M THF溶液, 64.9
mmol, 1.6当量)。反应变为深橙色。30 min后，一次性加入3-苯基-2-(苯基磺酰基)-1,2-氧杂氮杂环丙烷(15.9 g, 60.8 mmol, 1.2当量) 。反应明显变深。30min后，将反应添加到饱和碳酸氢钠水溶液中并用乙醚萃取 (x2)。将合并的乙醚萃取物干燥 (MgSO4)并真空浓缩以提供产物，为褐色油状物。将其溶于DCM (200 mL) 和Dess-Martin氧化剂 (20.6 g,
48.6 mmol, 1.2当量)。30 min后，将反应添加到饱和碳酸氢钠水溶液中并用DCM萃取
(x3)。将合并的 DCM萃取物干燥 (Na2SO4)并真空浓缩以提供粗产物。粗产物通过硅胶快速色谱法提纯(0-50% EtOAc/hex)以提供 2-(7-(4-(烯丙氧基)-4-甲基哌啶-1-基)-2-溴-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-氧代乙酸甲酯 (9.2 g, 50%)。
[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸甲酯 (17.7 g, 40.5 mmol, 1当量)于THF (200mL) 中的溶液冷
却至-78℃ (IPA/CO2)。历经约2 min逐滴添加KHMDS (72 mL的0.91 M THF溶液, 64.9
mmol, 1.6当量)。反应变为深橙色。30 min后，一次性加入3-苯基-2-(苯基磺酰基)-1,2-氧杂氮杂环丙烷(15.9 g, 60.8 mmol, 1.2当量) 。反应明显变深。30min后，将反应添加到饱和碳酸氢钠水溶液中并用乙醚萃取 (x2)。将合并的乙醚萃取物干燥 (MgSO4)并真空浓缩以提供产物，为褐色油状物。将其溶于DCM (200 mL) 和Dess-Martin氧化剂 (20.6 g,
48.6 mmol, 1.2当量)。30 min后，将反应添加到饱和碳酸氢钠水溶液中并用DCM萃取
(x3)。将合并的 DCM萃取物干燥 (Na2SO4)并真空浓缩以提供粗产物。粗产物通过硅胶快速色谱法提纯(0-50% EtOAc/hex)以提供 2-(7-(4-(烯丙氧基)-4-甲基哌啶-1-基)-2-溴-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-氧代乙酸甲酯 (9.2 g, 50%)。
[0462]
[0463] 中间体65
[0464]
[0465] (S)-2-(7-(4-(烯丙氧基)-4-甲基哌啶-1-基)-2-溴-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-(叔丁氧基)乙酸甲酯: 将2-(7-(4-(烯丙氧基)-4-甲基哌啶-1-基)-2-溴-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-氧代乙酸甲酯 (9.20 g, 20.3 mmol, 1当量)和(R)-1-甲
基-3,3-二苯基六氢吡咯并[1,2-c][1,3,2]氧杂氮杂硼杂环戊烯 (12.2 mL的1 M甲苯溶
液, 12.2 mmol, 0.6当量)于甲苯 (200 mL) 中的溶液冷却至-25℃ (MeCN/CO2)。然后加入儿茶酚硼烷(6.8 mL的50% 甲苯溶液, 28.4 mmol, 1.4当量)并将温度在-15℃至 -25℃保持18 h。此时，加入更多的 (R)-1-甲基-3,3-二苯基六氢吡咯并[1,2-c][1,3,2]氧杂氮杂硼杂环戊烯 (4 mL的1 M甲苯溶液, 4 mmol, 0.2当量)和儿茶酚硼烷(3 mL的50%甲苯溶液, 12.5 mmol, 0.6当量)。然后将反应再搅拌4 h。然后反应用10% K2CO3水溶液(100mL)和EtOAc (100 mL)淬灭并从冷浴移除。搅拌45 min后，将混合物添加到水中并用乙醚萃取
(x4)。将合并的乙醚萃取物干燥(MgSO4) 并真空浓缩以提供粗产物，为黄色泡沫状。将其溶于DCM (50 mL)和tBuOAc (150 mL)。向该溶液中添加高氯酸(3.7 mL的70% 水溶液, 60.9 mmol, 3当量) 以得到浑浊橙色溶液。搅拌3 h后，将反应小心地添加到饱和碳酸氢钠水溶液中并用DCM萃取 (x3)。将合并的DCM萃取物干燥(Na2SO4)并真空浓缩以提供粗产物。粗产物通过硅胶快速色谱法提纯(0-100% EtOAc/hex)以提供 (S)-2-(7-(4-(烯丙氧基)-4-甲
基哌啶-1-基)-2-溴-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-(叔丁氧基)乙酸甲酯 (3.56 g,
34%)：
基-3,3-二苯基六氢吡咯并[1,2-c][1,3,2]氧杂氮杂硼杂环戊烯 (12.2 mL的1 M甲苯溶
液, 12.2 mmol, 0.6当量)于甲苯 (200 mL) 中的溶液冷却至-25℃ (MeCN/CO2)。然后加入儿茶酚硼烷(6.8 mL的50% 甲苯溶液, 28.4 mmol, 1.4当量)并将温度在-15℃至 -25℃保持18 h。此时，加入更多的 (R)-1-甲基-3,3-二苯基六氢吡咯并[1,2-c][1,3,2]氧杂氮杂硼杂环戊烯 (4 mL的1 M甲苯溶液, 4 mmol, 0.2当量)和儿茶酚硼烷(3 mL的50%甲苯溶液, 12.5 mmol, 0.6当量)。然后将反应再搅拌4 h。然后反应用10% K2CO3水溶液(100mL)和EtOAc (100 mL)淬灭并从冷浴移除。搅拌45 min后，将混合物添加到水中并用乙醚萃取
(x4)。将合并的乙醚萃取物干燥(MgSO4) 并真空浓缩以提供粗产物，为黄色泡沫状。将其溶于DCM (50 mL)和tBuOAc (150 mL)。向该溶液中添加高氯酸(3.7 mL的70% 水溶液, 60.9 mmol, 3当量) 以得到浑浊橙色溶液。搅拌3 h后，将反应小心地添加到饱和碳酸氢钠水溶液中并用DCM萃取 (x3)。将合并的DCM萃取物干燥(Na2SO4)并真空浓缩以提供粗产物。粗产物通过硅胶快速色谱法提纯(0-100% EtOAc/hex)以提供 (S)-2-(7-(4-(烯丙氧基)-4-甲
基哌啶-1-基)-2-溴-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-(叔丁氧基)乙酸甲酯 (3.56 g,
34%)：
[0466]
[0467]
[0468] 以及回收的(S)-2-(7-(4-(烯丙氧基)-4-甲基哌啶-1-基)-2-溴-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-羟基乙酸甲酯 (4.53 g, 49%)：
[0469]
[0470] 实施例 26
[0471]
[0472] (S)-2-(2-(3-苄基-2-氧代咪唑烷-1-基)-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-(叔丁氧基)乙酸: 将(S)-2-(2-溴-7-(4,4-二甲基哌啶-1-
基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-(叔丁氧基)乙酸甲酯 (0.041 g, 0.088 mmol,
1当量)、1-苄基咪唑烷-2-酮 (0.022 g, 0.123 mmol, 1.4当量)、Xantphos (0.006 g,
0.011 mmol, 0.12当量)、Cs2CO3 (0.046 g, 0.140 mmol, 1.6 当量)和Pd2(dba)3 (0.004 g, 0.004 mmol, 0.05当量) 于DMF (0.9 mL)中的溶液在120℃下加热1 h。然后将温度降至60℃并加入MeOH ( 1 mL)和LiOH·H2O (0.074 g, 1.75 mmol, 20 当量)。1 h后，将反~
应冷却至环境温度，过滤并通过制备LC/MS直接提纯（条件如下：柱: Waters XBridge C18,
19 x 200 mm, 5-μm粒子; 保护柱: Waters XBridge C18, 19 x 10 mm, 5-μm粒子; 流动相A: 含20-mM醋酸铵的水; 流动相B: 95:5 乙腈:含20-mM醋酸铵的水; 梯度: 40-80% B
历时20分钟，然后在 100% B保持5分钟；流速: 20 mL/min）以提供产物(0.031 g, 64%)。
基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-(叔丁氧基)乙酸甲酯 (0.041 g, 0.088 mmol,
1当量)、1-苄基咪唑烷-2-酮 (0.022 g, 0.123 mmol, 1.4当量)、Xantphos (0.006 g,
0.011 mmol, 0.12当量)、Cs2CO3 (0.046 g, 0.140 mmol, 1.6 当量)和Pd2(dba)3 (0.004 g, 0.004 mmol, 0.05当量) 于DMF (0.9 mL)中的溶液在120℃下加热1 h。然后将温度降至60℃并加入MeOH ( 1 mL)和LiOH·H2O (0.074 g, 1.75 mmol, 20 当量)。1 h后，将反~
应冷却至环境温度，过滤并通过制备LC/MS直接提纯（条件如下：柱: Waters XBridge C18,
19 x 200 mm, 5-μm粒子; 保护柱: Waters XBridge C18, 19 x 10 mm, 5-μm粒子; 流动相A: 含20-mM醋酸铵的水; 流动相B: 95:5 乙腈:含20-mM醋酸铵的水; 梯度: 40-80% B
历时20分钟，然后在 100% B保持5分钟；流速: 20 mL/min）以提供产物(0.031 g, 64%)。
[0473]
[0474] 根据上述程序使用适当的杂环制备以下化合物。
[0475] 实施例 27
[0476]
[0477] (2S)-2-(2-(4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-基)-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-(叔丁氧基)乙酸, 第一非对映异构体。
[0478]
[0479] 实施例 28
[0480]
[0481] (2S)-2-(2-(4-苄基-2-氧代噁唑烷-3-基)-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-(叔丁氧基)乙酸, 第二非对映异构体。
[0482]
[0483] 实施例 29
[0484]
[0485] (2S)-2-(2-(5-苄基-2-氧代噁唑烷-3-基)-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-(叔丁氧基)乙酸, 第一非对映异构体。
[0486]
[0487] 实施例 30
[0488]
[0489] (2S)-2-(2-(5-苄基-2-氧代噁唑烷-3-基)-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-(叔丁氧基)乙酸, 第二非对映异构体。
[0490]
[0491] 实施例 31
[0492]
[0493] (2S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基-2-(2-氧代-3-苯氧基吡咯烷-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸, 第一非对映异构体。
[0494]
[0495] [注: 未观察到1个噁唑烷酮氢、4个哌啶氢和3个吡啶基甲基氢；假定这些是非常宽的峰或在水峰下]; LCMS (ESI, M+1): 550.7。
[0496] 实施例 32
[0497]
[0498] (2S)-2-(叔丁氧基)-2-(7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基-2-(2-氧代-3-苯氧基吡咯烷-1-基)吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)乙酸, 第二非对映异构体。
[0499]
[0500] [注: 未观察到4个哌啶氢和3个吡啶基甲基氢；假定这些是非常宽的峰或在水峰下]; LCMS (ESI, M+1): 550.6。
[0501] 实施例 33
[0502]
[0503] (S)-2-(2-(4-苄基-1H-吡唑-1-基)-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-(叔丁氧基)乙酸: [基于Buchwald等人J. Org. Chem. 2004, 69,
5578-5587的程序]. 将(S)-2-(2-溴-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-(叔丁氧基)乙酸甲酯 (0.112 g, 0.240 mmol, 1当量)、4-苄基-1H-吡唑
(0.076 g, 0.479 mmol, 2当量)、CuI (0.005 g, 0.024 mmol, 0.1当量)、K3PO4 (0.132 g, 0.623 mmol, 2.6当量)和N1,N2-二甲基环己烷-1,2-二胺 (0.008 mL, 0.048 mmol,
0.2当量)于甲苯(1.2 mL)中的溶液在120℃下加热40 h。将反应冷却至环境温度，然后通过硅胶快速色谱法直接提纯(0-30% EtOAc/己烷)以提供产物，为粘性黄色油状物(0.031 g,
24%)。
5578-5587的程序]. 将(S)-2-(2-溴-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-(叔丁氧基)乙酸甲酯 (0.112 g, 0.240 mmol, 1当量)、4-苄基-1H-吡唑
(0.076 g, 0.479 mmol, 2当量)、CuI (0.005 g, 0.024 mmol, 0.1当量)、K3PO4 (0.132 g, 0.623 mmol, 2.6当量)和N1,N2-二甲基环己烷-1,2-二胺 (0.008 mL, 0.048 mmol,
0.2当量)于甲苯(1.2 mL)中的溶液在120℃下加热40 h。将反应冷却至环境温度，然后通过硅胶快速色谱法直接提纯(0-30% EtOAc/己烷)以提供产物，为粘性黄色油状物(0.031 g,
24%)。
[0504]
[0505] [注: 4个哌啶氢似乎非常宽且因此未观察到]; LCMS (ESI, M+1):545.5。
[0506] 向(S)-2-(2-(4-苄基-1H-吡唑-1-基)-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-(叔丁氧基)乙酸甲酯 (0.031 g, 0.057 mmol, 1当量)于9:1
MeOH:水 (0.60 ml)中的溶液中添加LiOH·H2O (0.024 g, 0.569 mmol, 10当量)。将反应在60℃下加热1.5 h。然后将反应冷却至环境温度，过滤并通过制备LC/MS直接提纯（条件如下: 柱: Waters XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-μm粒子; 保护柱: Waters XBridge
C18, 19 x 10 mm, 5-μm粒子; 流动相A: 含20-mM醋酸铵的水;流动相B: 95:5 乙腈:含
20-mM醋酸铵的水; 梯度: 20-100% B历时20分钟，然后在100% B保持5分钟; 流速: 20
mL/min）以提供产物 (0.0324 g, 107%)。
MeOH:水 (0.60 ml)中的溶液中添加LiOH·H2O (0.024 g, 0.569 mmol, 10当量)。将反应在60℃下加热1.5 h。然后将反应冷却至环境温度，过滤并通过制备LC/MS直接提纯（条件如下: 柱: Waters XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-μm粒子; 保护柱: Waters XBridge
C18, 19 x 10 mm, 5-μm粒子; 流动相A: 含20-mM醋酸铵的水;流动相B: 95:5 乙腈:含
20-mM醋酸铵的水; 梯度: 20-100% B历时20分钟，然后在100% B保持5分钟; 流速: 20
mL/min）以提供产物 (0.0324 g, 107%)。
[0507]
[0508] [注: 未观察到4个哌啶氢和3个嘧啶基甲基氢；假定这些分别在水峰和 DMSO峰下]; LCMS (ESI, M+1): 531.5。
[0509] 根据上述程序使用适当的杂环制备以下实施例。
[0510] 实施例 34
[0511]
[0512] (S)-2-(2-(4-苄基-1H-咪唑-1-基)-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-(叔丁氧基)乙酸:
[0513]
[0514] [注: 未观察到4个哌啶氢、3个吡啶基甲基氢和2个苄基氢；NMR样品非常稀); LCMS (ESI, M+1): 531.6。
[0515] 实施例 35
[0516]
[0517] (S)-2-(2-(5 苄基-1H-吡唑-1-基)-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-(叔丁氧基)乙酸:
[0518]
[0519] [注: 未观察到吡啶基甲基和4个哌啶氢；可能在大水峰下]; LCMS (ESI, M+1): 531.6。
[0520] 实施例 36
[0521]
[0522] (S)-2-(2-(3-苄基-1H-吡唑-1-基)-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-(叔丁氧基)乙酸:
[0523]
[0524] [注: 未观察到4个哌啶氢；可能非常宽]; LCMS (ESI, M+1): 531.6。
[0525] 实施例 37
[0526]
[0527] (S)-2-(7-(4-(烯丙氧基)-4-甲基哌啶-1-基)-2-(4-(2-(烯丙氧基)苄基)-1H-吡唑-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-(叔丁氧基)乙酸.
[0528]
[0529] [注: 未观察到4个哌啶氢和3个吡啶基甲基氢，哌啶的4个氢可能非常宽且甲基可能在DMSO峰下]; LCMS (ESI, M+1): 629.7。
[0530] 实施例 38
[0531]
[0532] (S)-2-(2-(4-苄基-3-氯-1H-吡唑-1-基)-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-(叔丁氧基)乙酸.
[0533]
[0534] [注: 未观察到4个哌啶氢和3个吡啶基甲基氢，哌啶的4个氢可能非常宽且甲基可能在DMSO峰下]; LCMS (ESI, M+1): 565.5。
[0535] 实施例 39
[0536]
[0537] (S)-2-(2-(1-苄基-1H-吡唑-4-基)-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-(叔丁氧基)乙酸: 将(S)-2-(2-溴-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-
甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-(叔丁氧基)乙酸甲酯 (0.030 g, 0.064 mmol, 1当
量)、(1-苄基-1H-吡唑-4-基)硼酸 (0.039 g, 0.193 mmol, 3当量)、PdCl2(dppf) (0.005 g, 0.006 mmol, 0.1当量)和K3PO3 (0.16 mL的2 M水溶液, 0.321 mmol, 5当量)于DMF
(0.3 mL)中的溶液用氮气冲洗2 min。然后将反应加热至80 ℃持续1 h。完成后，将反应冷却至环境温度并在水和EtOAc之间分配。EtOAc层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并真空浓缩。粗产物通过硅胶快速色谱法提纯 (0-40% EtOAc/己烷)以提供 (S)-2-(2-(1-苄基-1H-吡唑-
4-基)-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-(叔丁氧基)乙酸
甲酯。将其溶于9:1 MeOH:水 (1 ml)并添加LiOH·H2O (0.027 g, 0.64 mmol, 10当量)。
将反应在60℃下加热1 h。然后将反应冷却至环境温度，过滤并通过制备LC/MS直接提纯（条件如下：柱: Waters XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-μm粒子; 保护柱: Waters XBridge C18, 19 x 10 mm, 5-μm粒子; 流动相A: 水; 流动相B: 乙腈; 缓冲剂: 20-mM氢氧化铵；
梯度: 20-95% B历时20.5分钟，然后在95% B保持7分钟；流速: 25 mL/min）以提供产物 (0.016 g, 46%)。
甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-(叔丁氧基)乙酸甲酯 (0.030 g, 0.064 mmol, 1当
量)、(1-苄基-1H-吡唑-4-基)硼酸 (0.039 g, 0.193 mmol, 3当量)、PdCl2(dppf) (0.005 g, 0.006 mmol, 0.1当量)和K3PO3 (0.16 mL的2 M水溶液, 0.321 mmol, 5当量)于DMF
(0.3 mL)中的溶液用氮气冲洗2 min。然后将反应加热至80 ℃持续1 h。完成后，将反应冷却至环境温度并在水和EtOAc之间分配。EtOAc层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥并真空浓缩。粗产物通过硅胶快速色谱法提纯 (0-40% EtOAc/己烷)以提供 (S)-2-(2-(1-苄基-1H-吡唑-
4-基)-7-(4,4-二甲基哌啶-1-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-(叔丁氧基)乙酸
甲酯。将其溶于9:1 MeOH:水 (1 ml)并添加LiOH·H2O (0.027 g, 0.64 mmol, 10当量)。
将反应在60℃下加热1 h。然后将反应冷却至环境温度，过滤并通过制备LC/MS直接提纯（条件如下：柱: Waters XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-μm粒子; 保护柱: Waters XBridge C18, 19 x 10 mm, 5-μm粒子; 流动相A: 水; 流动相B: 乙腈; 缓冲剂: 20-mM氢氧化铵；
梯度: 20-95% B历时20.5分钟，然后在95% B保持7分钟；流速: 25 mL/min）以提供产物 (0.016 g, 46%)。
[0538]
[0539] 实施例 40
[0540]
[0541] (S)-2-(7-(4-(烯丙氧基)-4-甲基哌啶-1-基)-2-(1-苄基-1H-吡唑-4-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-(叔丁氧基)乙酸: 将(S)-2-(7-(4-(烯丙氧基)-4-甲基哌啶-1-基)-2-溴-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-(叔丁氧基)乙酸甲酯 (50 mg,
0.098 mmol, 1当量)、(1-苄基-1H-吡唑-4-基)硼酸 (29.7 mg, 0.147 mmol, 1.5当量)和
2.0 M磷酸钾水溶液 (147 µl, 0.294 mmol, 3当量)于DMF (o.49 mL )中的溶液用氮气冲洗10 min。添加Pd(dppf)2 (8.02 mg, 9.81 µmol, 0.1当量)并将反应加热至80℃持续1 h。冷却至环境温度后，反应用EtOAc稀释并用水洗涤。将EtOAc 层干燥(Na2SO4)并真空浓缩。
然后向粗产物中添加水 (0.5 mL)、MeOH (0.5 mL)和LiOH一水合物 (123 mg, 2.94 mmol,
30当量)。将反应在60℃加热2 h。冷却至环境温度后，将混合物过滤，然后通过制备LC/MS提纯（条件如下：柱: Waters XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-μm粒子; 保护柱: Waters XBridge C18, 19 x 10 mm, 5-μm粒子; 流动相A: 水; 流动相B: 乙腈; 缓冲剂: 20-mM氢氧化铵; 梯度: 20-95% B历时20.5分钟，然后在95% B保持7分钟；流速: 25 mL/min）以提供产物(9.7 mg, 17%)。
0.098 mmol, 1当量)、(1-苄基-1H-吡唑-4-基)硼酸 (29.7 mg, 0.147 mmol, 1.5当量)和
2.0 M磷酸钾水溶液 (147 µl, 0.294 mmol, 3当量)于DMF (o.49 mL )中的溶液用氮气冲洗10 min。添加Pd(dppf)2 (8.02 mg, 9.81 µmol, 0.1当量)并将反应加热至80℃持续1 h。冷却至环境温度后，反应用EtOAc稀释并用水洗涤。将EtOAc 层干燥(Na2SO4)并真空浓缩。
然后向粗产物中添加水 (0.5 mL)、MeOH (0.5 mL)和LiOH一水合物 (123 mg, 2.94 mmol,
30当量)。将反应在60℃加热2 h。冷却至环境温度后，将混合物过滤，然后通过制备LC/MS提纯（条件如下：柱: Waters XBridge C18, 19 x 200 mm, 5-μm粒子; 保护柱: Waters XBridge C18, 19 x 10 mm, 5-μm粒子; 流动相A: 水; 流动相B: 乙腈; 缓冲剂: 20-mM氢氧化铵; 梯度: 20-95% B历时20.5分钟，然后在95% B保持7分钟；流速: 25 mL/min）以提供产物(9.7 mg, 17%)。
[0542]
[0543] 根据上述程序使用适当的硼酸制备以下实施例。
[0544] 实施例 41
[0545]
[0546] (S)-2-(7-(4-(烯丙氧基)-4-甲基哌啶-1-基)-2-(1-苄基-1H-咪唑-4-基)-5-甲基吡唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)-2-(叔丁氧基)乙酸。
[0547]
[0548] 本领域技术人员显而易见的是，本公开不限于上述示例性实施例，并且可以在不背离其基本属性的情况下体现为其它具体形式。因此这些实施例应在所有方面被视为示例性而非限制性的，参考所附权利要求书而非上述实施例，因此其中意在涵盖落在权利要求书的含义和等同范围内的所有变化。