两种卤酚化合物在促血管生成作用方面的应用

摘要

本发明涉及两种卤酚化合物2,4',5'‑三羟基‑5,2'‑二溴二苯甲酮、2',5‑二溴‑2‑（2‑苯基咪唑‑1‑基）甲基‑4',5'‑二羟基二苯甲酮及其药物组合物具有促血管生成作用的新药理用途。本发明明确了两种卤酚化合物的促血管生成作用，具体表现为：可以显著增加斑马鱼受损伤节间血管的长度，对血管损伤的斑马鱼具有保护作用。其可单独或与其它药学上可接受的药用辅料成分共同使用，用于制备具有促血管生成作用的药物，在用于预防和治疗缺血性心脏病、中风、肌肉萎缩、远端肢体坏死等方面有潜在的应用前景。

权利要求

1.卤酚化合物2',5-二溴-2-（2- 苯基咪唑-1- 基）甲基-4',5'-二羟基二苯甲酮在制备用于预防和治疗缺血性心脏病、中风、肌肉萎缩、远端肢体坏死疾病的药物方面的应用。

2.一种用于预防和治疗与促进血管生成相关的心、脑及四肢的缺血性疾病的药物，其特征在于：所述药物的活性成分为卤酚化合物2',5- 二溴-2-（2- 苯基咪唑-1- 基）甲基-

4',5'- 二羟基二苯甲酮。

3.根据权利要求2所述的用于预防和治疗与促进血管生成相关的心、脑及四肢的缺血性疾病的药物，其特征在于：该药物含有一种或多种在药学上可接受的药用辅料成分。

4.根据权利要求2或3所述的用于预防和治疗与促进血管生成相关的心、脑及四肢的缺血性疾病的药物，其特征在于：所述药物为固体分散体、注射剂、片剂、药丸剂或胶囊剂。

说明书

两种卤酚化合物在促血管生成作用方面的应用

技术领域

[0001] 本发明属于卤酚化合物新用途领域，具体涉及两种卤酚化合物及其药物组合物在促血管生成作用方面的应用，具体是在预防和治疗与促血管生成作用相关的缺血性心脏病、中风、肌肉萎缩、远端肢体坏死等疾病中的应用。

背景技术

[0002] 卤酚化合物具有抗氧化、抗微生物、抗肿瘤、抗血栓、抗炎、α-葡萄糖苷酶抑制、蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPIB)抑制、生物拒食等多重生物学活性。为解决其生物来源的局限性，申请人前期设计合成了多种新型卤酚化合物，发现该类化合物具有显著的保护血管内皮细胞、抗动脉粥样硬化、保护缺血再灌注引起的心肌损伤等与心血管疾病相关的药理作用。

[0003] 斑马鱼作为一种动物模型，已经在毒理学、遗传学、发育学等多学科领域的研究中发挥着重要作用，同时被广泛地用于药物研发的各个过程中。由于斑马鱼与人类相关基因和信号通路具有高度同源性，使其在新药筛选领域具有极大的潜力。斑马鱼的胚胎和幼虫透明，易于在体观察疾病发生发展以及药物对疾病作用的具体过程。值得关注的是与小型哺乳动物相比，斑马鱼在发育过程中几乎所有血管实现可视化、非侵入性地可产生一些血管形态和血流动力学参数，这一优势即为本申请所述的促进血管生成作用的研究手段。另外，斑马鱼个体小、生长发育迅速、小分子渗透性强，可以减少受试样品的需求。

[0004] 在开发一种安全有效的具有预防和治疗与促血管生成作用相关疾病的药物过程中，细胞生长因子类药物发挥了重要作用。但不可忽视的是生物大分子药物往往面临获取困难、不稳定、生物利用度低、给药不便，顺应性低等诸多问题。因此获得一种具有促进血管生成作用的小分子药物，将为多种缺血性疾病提供更多的临床选择。

发明内容

[0005] 本发明的目的在于提供两种卤酚化合物2,4',5'-三羟基-5,2'-二溴二苯甲酮(即LM49) 及其药物组合物和2',5-二溴-2-（2-苯基咪唑-1-基）甲基-4',5'-二羟基二苯甲酮（即LW38a）及其药物组合物的新的药理药效用途，具体是二者在促血管生成作用方面的应用。其中，2,4',5'-三羟基-5,2'-二溴二苯甲酮的结构为： ；2',5-二溴-2-（2-苯基咪唑-1-基）甲基-4 ',5 '-二羟基二苯甲酮的结构为：
。

[0006] 本发明的另一个目的在于提供一种用于预防和治疗与促进血管生成相关的心、脑及四肢的缺血性疾病的药物，该药物是以卤酚化合物2,4',5'-三羟基-5,2'-二溴二苯甲酮或者是2',5-二溴-2-（2-苯基咪唑-1-基）甲基-4',5'-二羟基二苯甲酮为活性成分，并且该药物还与一种或多种在药学上可接受的药用辅料成分配制使用，该药物可以根据不同要求制成注射剂、片剂、药丸剂或胶囊剂，以期更快更好地发挥临床药效。该药物具体可用于预防和治疗缺血性心脏病、中风、肌肉萎缩、远端肢体坏死等疾病，或作为研究这些疾病的工具药。

[0007] 本发明中的2,4',5'-三羟基-5,2'-二溴二苯甲酮和2',5-二溴-2-（2-苯基咪唑-1-基）甲基-4',5'-二羟基二苯甲酮两种卤酚化合物具有良好的促血管生成作用，同时通过毒性实验证明其具有低毒，副作用小等优点，且可工业化合成，价格低廉。因此，卤酚化合物
2,4',5'-三羟基-5,2'-二溴二苯甲酮和2',5-二溴-2-（2-苯基咪唑-1-基）甲基-4',5'-二羟基二苯甲酮可单独或与药学上可接受的药用辅料成分共同使用，以制备用于预防和治疗与促进血管生成相关的心、脑及四肢的缺血性疾病的药物，从而为临床治疗与促进血管生成相关的疾病提供了新的手段和方法，为临床用药开辟了新的方向。

[0008] 本发明通过将两种卤酚化合物作用于酪氨酸激酶抑制剂PTK787诱导血管损伤的转基因斑马鱼，明确了其具有促进斑马鱼节间血管生成的作用，具体表现为：可以显著增加斑马鱼受损伤节间血管的长度，对血管损伤的斑马鱼具有保护作用。

附图说明

[0009] 图1为卤酚化合物2,4',5'-三羟基-5,2'-二溴二苯甲酮对斑马鱼节间血管长度的影响（n=7）。

[0010] 图2为卤酚化合物2',5-二溴-2-（2-苯基咪唑-1-基）甲基-4',5'-二羟基二苯甲酮对斑马鱼节间血管长度的影响（n=10）。

[0011] 图3 为表1中各组对斑马鱼ISV发育的影响（×4，标尺单位：200μm）。

[0012] 图中：A-空白对照、B-模型组、C-LM49（2μg/ml）、D-LM49（1μg/ml）、E-LM49（0.5μg/ml）、F-LW38a（100μg/ml）、G-LW38a（50μg/ml）、 H-LW38a（25μg/ml）。

具体实施方式

[0013] 为了更好地解释本发明的药理用途的实质内容，以下通过具体实施例做进一步的阐述，但实施例并不对本发明做任何限定。

[0014] 实施例：卤酚化合物2,4',5'-三羟基-5,2'-二溴二苯甲酮和2',5-二溴-2-（2-苯基咪唑-1-基）甲基-4',5'-二羟基二苯甲酮对PTK787诱导血管损伤的转基因斑马鱼的作用。

[0015] 一、实验方法

[0016] 1、斑马鱼胚胎的准备

[0017] 选取健康性成熟的雌鱼、雄鱼各一只放入鱼缸内，并将两只鱼隔开，过夜。次日上午将挡板撤去，雌雄鱼产卵(小米粒大小，透明状)。对受精卵进行消毒后移入斑马鱼胚胎培养用水中，28℃下控光培养

[0018] 2、样品溶液配制

[0019] 将PTK787、LM49、LW38a用二甲基亚砜（DMSO）分别配制成 0.5g/L、 20g/ L、100 g/ L的母液。

[0020] 3、样品对转基因斑马鱼血管生成的影响

[0021] 在受精卵发育24h后，使用1g/L 的链霉蛋白酶E（Pronase E）溶液脱去其卵膜。实验分为空白对照组、模型组、LM49高（2μg/ml）、LM49中（1μg/ml）、LM49低（0.5μg/ml）、LW38a高（100μg/ml）、LW38a中（50μg/ml）、LW38a低（25μg/ml）给药组。在24孔板中各给药组加入一定体积的LM49或LW38a样品液以及PTK787溶液，并用培养水加至2 mL，使PTK787浓度为0.4μg/mL，样品LM49终浓度分别为2μg/ml、1μg/ml、0.5μg/ml，样品LW38a终浓度分别为100μg/ml、50μg/ml、25μg/ml，空白对照组加入含0.2%DMSO的培养水2 mL，模型组加入PTK787溶液和培养水至2 mL，使PTK787终浓度为0.4μg/mL。在体视显微镜下挑选正常的斑马鱼胚胎，移入24 孔培养板中，每孔约8-10枚。然后将培养板加盖，置于恒温光照培养箱(28℃)中让胚胎继续发育。

[0022] 4、结果观察与处理

[0023] 在受精卵发育48h时，用荧光显微镜观察斑马鱼并采集图像，并用Image-pro plus软件测量斑马鱼节间血管（intersegmental vessels  , ISVs）长度，采用SPSS 13.0分析实验数据，各给药组分别与模型组进行两独立样本t检验，比较各组新生血管差异。

[0024] 二、实验结果

[0025] 结果表明：空白对照组的节间血管(ISVs)区域完整，完好连接背主动脉(DA)和背部脊索血管（DLAVs）。而模型组ISVs出现明显的缺失，血管生成受到了抑制。对节间血管长度进行计算，在实验剂量范围内，LM49及LW38a各给药组与模型组比较差异均有统计学意义(**P<0.01，*P<0.05)，并随剂量增加促进节间血管生长的作用增强。说明其对PTK787损伤的血管具有保护作用，可促进血管生成。

[0026] 表1 LM49和LW38a对转基因斑马鱼节间血管长度的影响

[0027]

[0028] 注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01

[0029] 三、实验结论：如图1、2所示，两种卤酚化合物2,4',5'-三羟基-5,2'-二溴二苯甲酮和2',5-二溴-2-（2-苯基咪唑-1-基）甲基-4',5'-二羟基二苯甲酮具有明确促进PTK787诱导血管损伤的转基因斑马鱼节间血管生成的作用；如图3所示，各组对斑马鱼ISV发育的影响（×4，标尺单位：200μm），其中，A为空白对照、B为模型组、C为LM49（2μg/ml）、D为LM49（1μg/ml）、E为LM49（0.5μg/ml）、F为LW38a（100μg/ml）、G为LW38a（50μg/ml）、 H为LW38a（25μg/ml）。