一种保护化学性肝损伤的中药保健品制剂的检测方法

摘要

本发明公开了一种保护化学性肝损伤的中药保健品制剂的检测方法，其中，所述的中药保健品制剂，按照重量份计算，它是由葛根380～420份、枳椇子300～340份、大枣280～320份、乌梅280～320份、砂仁130～170份、甘草130～170份、淀粉60～100份制成的；结合本方特点，本品选择组分指标—总黄酮和成分指标—葛根素共同控制和评价产品质量，并且在制备过程中本发明对其工艺参数进行了优化，在具体提取工艺参数考察中，采用正交设计对提取条件和工艺参数进行了研究，选择了功效成分总黄酮和葛根素的提取率作为工艺考察指标，以提高产品工艺合理性和质量可控性。

权利要求

1.一种保护化学性肝损伤的中药保健品制剂的检测方法，其特征在于，所述的中药保健品制剂，按照重量份计算，它是由葛根380～420份、枳椇子300～340份、大枣280～320份、乌梅280～320份、砂仁130～170份、甘草130～170份和淀粉60～100份制成的；

具体检测方法是对组分指标—总黄酮和成分指标—葛根素的含量进行测定；所述总黄酮含量测定方法具体为：对照品溶液的制备 精密称取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品25mg，置50ml量瓶中，加乙醇适量，超声处理使溶解，放冷，加乙醇至刻度，摇匀，精密量取20ml，置50ml置瓶中，加水至刻度，摇匀，即得；

标准曲线的制备 精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml，分别置于25ml量瓶中，照紫外可见分光光度法，在360nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；

测定法 取胶囊10粒，内容物研磨混匀，称取样品1.0g，精确至0.001g，置100mL具塞锥形瓶中，精密加65％乙醇25mL，称重，60℃超声提取30min，冷却，补足重量，过滤，精密吸取

2.0mL，于蒸发皿中，加1g聚酰胺粉吸附，于水浴上挥去乙醇，然后转入层析柱；先用20mL苯洗，苯液弃去，然后用甲醇50mL洗脱黄酮，收集至蒸发皿中，水浴蒸干，用甲醇转移并定容至

25mL，作为供试液；此液于波长360nm测定吸收值，同时以芦丁为标准品，测定标准曲线，求回归方程，计算试样中总黄酮含量；

本品按干燥品计算，含总黄酮以无水芦丁计，不得少于180mg/100g。

2.根据权利要求1所述的一种保护化学性肝损伤的中药保健品制剂的检测方法，其特征在于，所述葛根素的含量测定方法具体为：葛根素标准储备溶液的制备 准确称取0.02g葛根素标准品，精确至0.0001g，用70％甲醇溶解并定容至10mL，混匀，即得2.00mg/mL的葛根素标准储备溶液；

葛根素标准使用溶液的制备 准确吸取1.0mL葛根素标准储备溶液于10mL容量瓶中，用

70％甲醇溶解并定容至刻度，混匀，即得200μg/mL的葛根素标准使用溶液；

供试品溶液的制备 取本品10粒，倾出内容物，研磨均匀，称取试样0.25g，精确至

0.001g，加入70％甲醇溶解，并于超声波清洗器中提取30min，冷却至室温后用70％甲醇定容至50mL，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液；

阴性供试品溶液的制备 按处方比例及工艺制成缺葛根药材的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制成阴性供试品溶液；

系统适用性试验 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得；

理论板数按葛根素峰计算不低于5000。

3.根据权利要求2所述的一种保护化学性肝损伤的中药保健品制剂的检测方法，其特征在于，所述超声处理的功率为100W。

4.根据权利要求1～3任一项所述的一种保护化学性肝损伤的中药保健品制剂的检测方法，其特征在于，所述制剂每100g中总黄酮含量大于等于180mg，葛根素含量大于等于

120mg。

5.根据权利要求1～3任一项所述的一种保护化学性肝损伤的中药保健品制剂的检测方法，其特征在于，所述的制剂为胶囊剂。

6.根据权利要求1～3任一项所述的一种保护化学性肝损伤的中药保健品制剂的检测方法，其特征在于，所述制剂的制备方法为：按照比例称取葛根、枳椇子、乌梅、大枣、砂仁、甘草净药材，加6～10倍量水浸泡0.5～

1.5h，煎煮2～3次，每次1～2h，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至70℃、真空度-0.07MPa下相对密度为1.25～1.28的稠膏，按比例加入辅料淀粉混合均匀，制成各种不同的剂型，即得。

7.根据权利要求6所述的一种保护化学性肝损伤的中药保健品制剂的检测方法，其特征在于，所述制剂的制备方法为：按照比例称取葛根、枳椇子、乌梅、大枣、砂仁、甘草净药材，加8倍量水浸泡1h，第一次煎煮1小时，第二次加6倍量水煎煮1h，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至70℃、真空度-

0.07MPa下相对密度为1.25～1.28的稠膏，继续在70℃、真空度-0.07MPa下减压干燥6小时，粉碎，过65目筛，制成干膏粉，然后再在干膏粉中按照比例加入辅料淀粉，混合均匀后，用

95％乙醇过24目筛，制粒，60℃干燥4小时，过24目筛，整粒，总混20min，灌装胶囊，即得胶囊剂。

说明书

一种保护化学性肝损伤的中药保健品制剂的检测方法

技术领域

[0001] 本发明属于中药检测技术领域，具体涉及一种保护化学性肝损伤的中药保健品制剂的检测方法。

背景技术

[0002] 化学性肝损伤是由化学性肝毒性物质所造成的肝损伤。这些化学物质包括酒精、环境中的化学毒物及某些药物。作为人体的重要解毒器官的肝脏，具有肝动脉和肝静脉双重血液供应。化学物质可通过胃肠道门静脉或体循环进入肝脏进行转化，因此肝脏容易受到化学物中的毒性物质损害。大自然和人类工业生产过程中均存在一些对肝脏有毒性的物质，称为"亲肝毒物"，这些毒物在人群中普遍易感，潜伏期短，病变的过程与感染的剂量直接相关，可引起肝脏不同程度的肝细胞坏死、脂肪变形、肝硬化和肝癌。工业生产中的原料、中间产物与最终产物均可能有肝毒性，因此，需十分警惕化学性肝中毒的发生。

[0003] 申请人在申请号为2009101024750的发明专利中公开了一种防治酒精性肝病的中药保健品制剂，采用葛花、枳椇子、葛根、乌梅、大枣、砂仁、甘草进行配比，可以有效的防治酒精性肝病的发生。在此基础上，申请人又对其进行了改进，新组方由葛根、枳椇子、甘草、乌梅、大枣、砂仁等6味食药两用药材组成，由于这种药品还没有在市场公开，因此这种保健品制剂的检测方法还没有报道。

发明内容

[0004] 本发明的目的在于提供一种保护化学性肝损伤的中药保健品制剂的检测方法，可以对保护化学性肝损伤的中药保健品制剂的主要成分进行更有效的控制。

[0005] 本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

[0006] 一种保护化学性肝损伤的中药保健品制剂的检测方法，所述的中药保健品制剂，按照重量份计算，它是由葛根400份、枳椇子320份、大枣300份、乌梅300份、砂仁150份、甘草150份、淀粉80份制成的；

[0007] 具体检测方法是对组分指标—总黄酮和成分指标—葛根素的含量进行测定。

[0008] 前述保护化学性肝损伤的中药保健品制剂的检测方法中，所述总黄酮含量测定方法具体为：

[0009] 对照品溶液的制备精密称取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品25mg，置50ml量瓶中，加乙醇适量，超声处理使溶解，放冷，加乙醇至刻度，摇匀，精密量取20ml，置50ml置瓶中，加水至刻度，摇匀，即得；

[0010] 标准曲线的制备精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml，分别置于25ml量瓶中，照紫外可见分光光度法，在360nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；

[0011] 测定法取胶囊10粒，内容物研磨混匀，称取样品1.0g，精确至0.001g，置100mL具塞锥形瓶中，精密加65％乙醇25mL，称重，60℃超声提取30min，冷却，补足重量，过滤，精密吸取2.0mL，于蒸发皿中，加1g聚酰胺粉吸附，于水浴上挥去乙醇，然后转入层析柱；先用20mL苯洗，苯液弃去，然后用甲醇50mL洗脱黄酮，收集至蒸发皿中，水浴蒸干，用甲醇转移并定容至25mL，作为供试液；此液于波长360nm测定吸收值，同时以芦丁为标准品，测定标准曲线，求回归方程，计算试样中总黄酮含量；

[0012] 本品按干燥品计算，含总黄酮以无水芦丁计，不得少于180mg/100g。

[0013] 前述保护化学性肝损伤的中药保健品制剂的检测方法中，所述葛根素的含量测定方法具体为：

[0014] 葛根素标准储备溶液的制备准确称取0.02g葛根素标准品，精确至0.0001g，用70％甲醇溶解并定容至10mL，混匀，即得2.00mg/mL的葛根素标准储备溶液；

[0015] 葛根素标准使用溶液的制备准确吸取1.0mL葛根素标准储备溶液于10mL容量瓶中，用70％甲醇溶解并定容至刻度，混匀，即得200μg/mL的葛根素标准使用溶液；

[0016] 供试品溶液的制备取本品10粒，倾出内容物，研磨均匀，称取试样0.25g，精确至0.001g，加入70％甲醇溶解，并于超声波清洗器中提取30min，冷却至室温后用70％甲醇定容至50mL，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液；

[0017] 阴性供试品溶液的制备按处方比例及工艺制成缺葛根药材的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制成阴性供试品溶液；

[0018] 系统适用性试验分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得；

[0019] 理论板数按葛根素峰计算不低于5000。

[0020] 前述保护化学性肝损伤的中药保健品制剂的检测方法中，所述超声处理的功率为100W。

[0021] 前述保护化学性肝损伤的中药保健品制剂的检测方法中，所述制剂每100g中总黄酮含量 大于等于180mg，葛根素含量大于等于120mg。

[0022] 前述保护化学性肝损伤的中药保健品制剂的检测方法中，所述的制剂为胶囊剂。

[0023] 前述保护化学性肝损伤的中药保健品制剂的检测方法中，所述制剂的制备方法为：

[0024] 按照比例称取葛根、枳椇子、乌梅、大枣、砂仁、甘草净药材，加6～10倍量水浸泡0.5～1.5h，煎煮2～3次，每次1～2h，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至70℃、真空度-
0.07MPa下相对密度为1.25～1.28的稠膏，按比例加入辅料淀粉混合均匀，制成各种不同的剂型，即得。

[0025] 前述保护化学性肝损伤的中药保健品制剂的检测方法中，胶囊剂的制备方法为：

[0026] 按照比例称取葛根、枳椇子、乌梅、大枣、砂仁、甘草净药材，加8倍量水浸泡1h，第一次煎煮1小时，第二次加6倍量水煎煮1h，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至70℃、真空度-0.07MPa下相对密度为1.25～1.28的稠膏，继续在70℃、真空度-0.07MPa下减压干燥6小时，粉碎，过65目筛，制成干膏粉，然后再在干膏粉中按照比例加入辅料淀粉，混合均匀后，用
95％乙醇过24目筛，制粒，60℃干燥4小时，过24目筛，整粒，灌装胶囊，即得胶囊剂。

[0027] 由于在实际生产中，制剂的提取工艺会对其有效成分的含量有影响，所以，申请人对制备工艺和药理功能进行了相应的实验研究，根据方中药味的药物成分，结合药物的理化性质，采用正交实验，优化了处方及制备工艺，使之成为工艺稳定、质量可控、安全有效的纯中药制剂；动物实验研究表明，预防用药，可以有效保护化学性肝损伤。实验研究的主要内容如下：

[0028] 1、提取工艺拟订的依据

[0029] 依据方中各药的有效成分及性质，设计本品工艺路线。

[0030] 以金元时代《脾胃论》的葛花解酲汤及明代《普济方》中的“葛花丸”为基础方，结合贵州民间的习用配方，经加减而成。原方以汤剂或大蜜丸为用。为保持原方疗效，根据方中各药的有效成分及性质经试验我们选用了以水为溶剂提取方中6味药的药效成分。

[0031] 现代研究表明方中葛根富含异黄酮、皂苷等有效成分；药理研究发现，葛根所含异黄酮类化合物以葛根素为代表，具有解酒保肝等作用，具有很大的开发利用价值。枳椇子的有效成分为皂苷和糖苷、生物碱、脂肪酸等，其水溶性部分具有较好治疗酒精中毒保肝的活性。其它几味药则含黄酮、挥发油等有效成分。本工艺综合考虑方中各味药物的有效成分特性和生产实际，选择了水为提取溶剂。比较起有机溶剂的使用，选用纯化水作提取溶剂更加安全、经济、环保、吸收快、生物利用度高等有优点。在提取工艺参数考察中，我们采用正交设计对提取条件和工艺参数进行了研究。选择了功效成分：总黄酮和葛根素的提取率作为工艺考 察指标，以提高产品工艺合理性和质量可控性。

[0032] 对于水提物易吸湿等缺点，在制粒过程中加入适量的淀粉，一方面可降低该制剂的吸湿性，又可增加颗粒流动性，改善和提高产品吸湿稳定性和装量差异合格率。

[0033] 2、剂型的选择及依据

[0034] 历代用于防治酒精性肝病和防治酒毒的大多是液体制剂(汤剂或口服液)，以及大蜜丸等较为初级的固体制剂，较著名的有“葛花解醒汤”、“葛花丸”等。但在实际运用中有明显的不足之处，如汤剂处方大，服用量大，每次煎煮等过程麻烦，不适合商品化。丸剂大处方、大剂量、原粉入药、起效慢、生物利用率低等缺点。

[0035] 本品通过现代生物提取纯化和制剂手段，制成胶囊剂，可降低服用量，提高生物利用度，剂型经典、方便服用、携带和储存，便于规模化生产、提高产品质量的可控性和稳定性。故本品选择了硬胶囊剂。

[0036] 3、工艺路线的选择

[0037] 3.1药材吸水率的考察

[0038] 取粉碎成粗粉并混合均匀的药材约100g各三份，精密称定。分别加水500ml，充分振摇后，放置24小时，滤过，再称取每份药材重量，计算吸水率，见表1。

[0039] 表1药材粗粉吸水率考察

[0040]

[0041] 结果表明，药材的吸水量约为药材重量的2倍，故在第一次煎煮时，应多加2倍药材量的水。

[0042] 3.2提取工艺选择

[0043] (1)正交试验

[0044] 采用3因素3水平正交试验，以溶剂用量(A)、提取时间(B)、提取次数(C)为考查因素设计L9(34)正交表进行试验，每组平行三份。以总黄酮和葛根素含量为评价指标，筛选最佳工艺。

[0045] 取粗粉40g，用水煎煮提取，过滤，滤液减压回收，干燥得干膏，测定含量。因素水平安排见表2，结果见表3，方差分析见表4。

[0046] 表2因素水平表

[0047]

[0048] 表3正交试验结果

[0049]

[0050] 注：综合评分Z＝(X/Xmax*50+Y/Ymax*50)

[0051] 表4方差分析表

[0052]

[0053]

[0054] 注：F0.05(2，2)＝19.000；F0.01(2，2)＝99.000

[0055] 以上极差分析结果可以看出因素影响大小依次为B＞A＞C，且最佳工艺为A1B1C2，即加6倍量水，提取2次，每次1小时；方差分析结果表明，溶剂用量、提取时间、提取次数对提取效果均无显著影响。考虑到各药材的吸水率，故最终工艺为葛根、枳椇子、大枣、乌梅、砂仁、甘草拣选，粉碎成粗粉，加8倍量水浸泡1小时后，加热煎煮1小时，滤过，药渣再加6倍量水，煎煮1小时。

[0056] (2)提取工艺验证

[0057] 验证试验：按上述确定的工艺条件，三批中试验证试验结果见表5。

[0058] 表5验证试验结果

[0059]

[0060] 验证试验结果基本合理，总黄酮转移率可达59.7％，葛根素转移率可达52.7％。由此确定提取工艺为：葛根、枳椇子、大枣、乌梅、砂仁、甘草加8倍量水浸泡1小时后，加热煎煮1小时，滤过，药渣再加6倍量水，煎煮1小时。合并滤液、浓缩，制得稠膏。

[0061] 4、制剂工艺选择

[0062] 4.1辅料确定

[0063] 淀粉是一种常用的药物辅料，其化学性质稳定，与大多数药物不起作用，在空气中吸湿而不潮解，安全、普适性强、经济，易被患者接受。本产品选用可溶性淀粉作为辅料。

[0064] 4.2制粒润湿剂确定

[0065] 本产品干膏粉为水提工艺，由于吸湿性较强，流动性较差，故考虑适量辅料制粒方法，预试验分别试用了水和不同浓度的乙醇溶液作为润湿剂，结果选用95％乙醇作为润湿剂，易于制粒，产品分散性好，颗粒均匀，且干燥时间短。

[0066] 4.3制粒工艺的选择

[0067] 主要对制粒工艺进行了试验比较，见表6和表7，确定了制粒工艺路线。

[0068] 表6制剂工艺筛选1(粉末直接填充胶囊)

[0069]

[0070] 试验结果，粉尘污染大，不利于劳动保护，流动性差，装量差异大。

[0071] 表7制剂工艺筛选2(制粒后填充胶囊)

[0072]

[0073] 试验结果，无尘污飞扬，有利于劳动保护，流动性好，装量差异偏差较小。

[0074] 5、颗粒流动性研究

[0075] 5.1实验材料：采用实验室工艺自制胶囊样品(批号20111001、20111002、20111003)

[0076] 5.2试验方法：休止角测定采用固定漏斗法，将3只漏斗串联并固定于支架上并水平放置的于坐标纸上方，使漏斗下口距坐标纸的距离为H，小心地将样品沿漏斗壁倒入最上的漏斗中，直至坐标纸上形成的圆锥体尖端接触到最下面的漏斗口为止。由坐标纸测出圆锥底部的直径(2R)，根据公式tanα＝H/R，计算出休止角α。

[0077] 5.3样品休止角测定

[0078] 取样品适量，按休止角测定方法操作并计算，重复测定5次，取均值。结果测得干膏粉的休止角为42.28°，成型颗粒的休止角为35.95°，结果见表8、9。

[0079] 表8干膏粉休止角测定结果

[0080]

[0081]

[0082] 表9成型颗粒的休止角测定结果

[0083]

[0084] 5.4验证

[0085] (1)胶囊装量差异测定

[0086] 取3批试生产样品，按《中国药典》一部(2010版)附录胶囊剂项下分别测定其装量差异，3批均符合规定，表明颗粒流动性良好，达到灌装要求。结果见下表10：

[0087] 表10胶囊装量差异测定结果

[0088]

[0089]

[0090] (2)水分测定

[0091] 取3批试生产样品，按GB5009.3-2010(第一法)测定水分，见表11：

[0092] 表11水分测定结果

[0093]

[0094] 6、制剂成型颗粒的吸湿性研究

[0095] 6.1实验方法：将底部盛有氯化钠过饱和溶液的玻璃干燥器，放入25℃恒温培养箱中24h，干燥箱内的相对湿度为75％。在已恒重的称量瓶底部，放入已干燥至恒重的样品约1g，准确称重后置于上述干燥器内(称量瓶盖打开)，于25℃恒温培养箱内保存，分别于4、6、
8、12、24、36、48、60、72、84、96、108、120h后称定质量，按式1计算吸湿百分率，结果见表12。

[0096]   (式1)

[0097] 表12吸湿百分率测定结果

[0098]

[0099] 以吸湿百分率为纵坐标，吸湿时间为横坐标，作吸湿曲线，结果显示，干膏粉制成颗粒后吸湿性稍有改善，说明加入辅料淀粉可以增加本产品的抗吸湿性。干膏粉和成型颗粒的吸湿量都随放置时间的延长而逐步增加，放置大约8h后，其吸湿量均超过9％，《中国药典》规定胶囊剂的含水量不得超过9％，因此应尽量缩短生产过程，避免颗粒在空气中暴露时间过长而造成水分超标，吸潮后结块，影响产品的外观质量和稳定性。

[0100] 6.2临界相对湿度的测定

[0101] 按表13配制不同浓度硫酸溶液及盐的过饱和溶液，分别置于玻璃干燥器中，于25℃恒温箱中放置48小时，使其内部湿度平衡构成不同相对湿度(RH)的环境。取已干燥至恒重的成型颗粒1g，平铺于已恒重的称量瓶底部，厚约2mm，精密称量后分别放入上述不同相对 湿度的干燥器内(称量瓶盖打开)，于25℃恒温培养箱内放置7天后称量，计算各相对湿度下的吸湿百分率，结果见表13。

[0102] 表13不同相对湿度下药粉在25℃的吸湿率

[0103]

[0104] 以吸湿百分率为纵坐标，相对湿度(RH)为横坐标作图，得到临界相对湿度(CRH)曲线，分别在CRH曲线两端作切线，两切线交点的横坐标即为临界相对湿度。

[0105] 临界相对湿度是药物吸湿与否的临界值，可根据它确定生产时的环境湿度。结果显示，该药粉的临界相对湿度约为80％。故在粉碎、混合、整粒及分装时，车间环境的相对湿度应控制在80％以下，以避免水分对药物性质及稳定性的影响。生产实际中，GMP车间湿度控制在60％以下，适合该制剂的生产。

[0106] 7、中试工艺验证试验

[0107] 按拟定的制备工艺进行三批中试生产，对生产工艺各项指标进行检测，考核本制备工艺的合理性，结果见表14：

[0108] 表14三批中试试验数据及结果

[0109]

[0110]

[0111] 按拟定的制备工艺进行三批中试生产，对生产工艺各项指标进行检测，对产品进行质量评定，考核本制备工艺的合理性。三批试验总成品率在91.2％-95.0％之间。试验结果表明，本制备工艺路线设计基本合理，工艺生产条件符合工厂生产要求，工艺稳定，质量可控。

[0112] 本发明的有益效果是：

[0113] 方中药材，除含有葛根素为代表的异黄酮类物质外，还含有大量的总黄酮类物质，本品功能定位为“对化学性肝损伤有辅助保护功能”，结合本方特点，本品选择双含量指标共同控制和评价产品质量，指标分别为：组分指标—总黄酮和成分指标—葛根素。

[0114] 由于提取工艺最终会影响制剂中有效成分的含量，因此本发明对其工艺参数进行了优化，在具体提取工艺参数考察中，我们采用正交设计对提取条件和工艺参数进行了研究。选择了功效成分：总黄酮和葛根素的提取率作为工艺考察指标，以提高产品工艺合理性和质量可控性。

具体实施方式

[0115] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

[0116] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

[0117] 实施例1一种保护化学性肝损伤的中药保健品胶囊的检测方法

[0118] (一)首先制备保护化学性肝损伤的中药保健品胶囊剂。

[0119] 制备所采用的生产环境及管理应符合GMP要求，制剂生产过程中粉碎、过筛、混合、制粒、干燥、整粒、总混、内包装等工艺过程均在符合GB17405-1998《保健食品良好生产规范》(为30万级)的生产洁净区条件下操作，其它步骤在一般生产区操作。具体操作为：

[0120] 1、前处理：枳椇子、乌梅、大枣、砂仁拣选备用；葛根、甘草拣选、必要时切片，备用。各原辅料均应按相应标准检验合格后才能领用。

[0121] 2、配料：按配方比例称取各原辅料，备用。称量前核对原辅料品名、批号、规格、数量；以电子称称定。

[0122] 3、提取：葛根、枳椇子、乌梅、大枣、砂仁、甘草，第一次加8倍量水浸泡1h，煎煮1小时，第二次加6倍量水煎煮1h，合并煎液，滤过(不锈钢网，80目)。

[0123] 4、浓缩：滤液减压浓缩至相对密度为1.25～1.28(70℃，真空度-0.07MPa)的稠膏。

[0124] 5、干燥：70℃，真空度-0.07MPa减压干燥6小时，粉碎，过65目筛。

[0125] 6、混合：将干膏粉加入淀粉混合均匀。

[0126] 7、制粒：95％乙醇湿法制粒，过24目筛。

[0127] 8、整粒：湿颗粒60℃干燥4h，用24目筛整粒。

[0128] 9、总混：颗粒在V型混合机中混合20min。

[0129] 10、胶囊填充：颗粒用0号胶囊灌装，装量0.4g/粒。胶囊壳应符合《中国药典》2010年版二部第1204页项下的要求。

[0130] 11、内包装：将检验合格的胶囊用口服固体药用高密度聚乙烯瓶包装，每瓶装32粒，口服固体药用高密度聚乙烯瓶应符合YBB00122002的规定。

[0131] 12、外包装、检验、入库。

[0132] (二)对上述制成的胶囊剂进行检测

[0133] 具体检测方法是对组分指标—总黄酮和成分指标—葛根素的含量进行测定。

[0134] 其中，总黄酮含量测定方法具体为：

[0135] 对照品溶液的制备精密称取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品25mg，置50ml量瓶中，加乙醇适量，超声处理使溶解，放冷，加乙醇至刻度，摇匀，精密量取20ml，置50ml置瓶中，加水至刻度，摇匀，即得；

[0136] 标准曲线的制备精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml，分别置于25ml量瓶中，照紫外可见分光光度法，在360nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；

[0137] 测定法取胶囊10粒，内容物研磨混匀，称取样品1.0g(精确至0.001g)，置100mL具塞锥形瓶中，精密加65％乙醇25mL，称重，60℃超声提取30min，冷却，补足重量，过滤，精密吸取2.0mL，于蒸发皿中，加1g聚酰胺粉吸附，于水浴上挥去乙醇，然后转入层析柱。先用20mL苯洗，苯液弃去，然后用甲醇50mL洗脱黄酮，收集至蒸发皿中，水浴蒸干，用甲醇转移并定容至25mL，作为供试液。此液于波长360nm测定吸收值。同时以芦丁为标准品，测定标准曲线，求回归方程，计算试样中总黄酮含量。

[0138] 按干燥品计算，含总黄酮以无水芦丁计，不得少于180mg/100g。

[0139] 其中，葛根素的含量测定方法具体为：

[0140] 葛根素标准储备溶液(2.00mg/mL)：准确称取0.02g葛根素标准品(精确至0.0001g)，用70％甲醇溶解并定容至10mL，混匀(此标准储备液在4℃冰箱中可保存7d)。

[0141] 葛根素标准使用溶液(200μg/mL)：准确吸取1.0mL葛根素标准储备溶液于10mL容量瓶中，用70％甲醇溶解并定容至刻度，混匀，(此标准储备液在4℃冰箱中可保存7d)。

[0142] 试品溶液的制备试样处理：取本品10粒，倾出内容物，研磨均匀，称取试样0.25g(精确至0.001g)，加入70％甲醇溶解，并于超声波清洗器中提取30min，冷却至室温后用70％甲醇定容至50mL，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液；

[0143] 阴性供试品溶液的制备按处方比例及工艺制成缺葛根药材的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制成阴性供试品溶液；

[0144] 系统适用性试验分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得；

[0145] 理论板数按葛根素峰计算不低于5000。

[0146] 经检测，每100g胶囊剂中总黄酮为180mg，葛根素含量为120mg。

[0147] 实施例2一种保护化学性肝损伤的中药保健品颗粒剂的检测方法

[0148] (一)首先制备保护化学性肝损伤的中药保健品颗粒剂

[0149] 1、前处理：枳椇子、乌梅、大枣、砂仁拣选备用；葛根、甘草拣选、必要时切片，备用。各原辅料均应按相应标准检验合格后才能领用。

[0150] 2、配料：按配方比例称取各原辅料，备用。称量前核对原辅料品名、批号、规格、数量；以电子称称定。

[0151] 3、提取：葛根、枳椇子、乌梅、大枣、砂仁、甘草，第一次加8倍量水浸泡1h，煎煮1小时，第二次加6倍量水煎煮1h，合并煎液，滤过(不锈钢网，80目)。

[0152] 4、浓缩：滤液减压浓缩至相对密度为1.25～1.28(70℃，真空度-0.07MPa)的稠膏。

[0153] 5、干燥：70℃，真空度-0.07MPa减压干燥6小时，过65目筛。

[0154] 6、粉碎，混合：加入适量可溶性淀粉，制粒。

[0155] 6、分装：袋装，10g/袋。

[0156] 7、外包装、检验、入库。

[0157] (二)对上述制成的颗粒剂进行检测

[0158] 具体检测方法是对组分指标—总黄酮和成分指标—葛根素的含量进行测定。

[0159] 其中，总黄酮含量测定方法具体为：

[0160] 对照品溶液的制备精密称取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品25mg，置50ml量瓶中，加乙醇适量，超声处理使溶解，放冷，加乙醇至刻度，摇匀，精密量取20ml，置50ml置瓶中，加水至刻度，摇匀，即得；

[0161] 标准曲线的制备精密量取对照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml，分别置于25ml量瓶中，照紫外可见分光光度法，在360nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线；

[0162] 测定法取称取样品1.0g(精确至0.001g)，置100mL具塞锥形瓶中，精密加65％乙醇25mL，称重，60℃超声提取30min，冷却，补足重量，过滤，精密吸取2.0mL，于蒸发皿中，加1g聚酰胺粉吸附，于水浴上挥去乙醇，然后转入层析柱。先用20mL苯洗，苯液弃去，然后用甲醇
50mL洗脱黄酮，收集至蒸发皿中，水浴蒸干，用甲醇转移并定容至25mL，作为供试液。此液于波长360nm测定吸收值。同时以芦丁为标准品，测定标准曲线，求回归方程，计算试样中总黄酮含量；

[0163] 按干燥品计算，含总黄酮以无水芦丁计，不得少于180mg/100g。

[0164] 其中，葛根素的含量测定方法具体为：

[0165] 葛根素标准储备溶液(2.00mg/mL)：准确称取0.02g葛根素标准品(精确至0.0001g)，用70％甲醇溶解并定容至10mL，混匀(此标准储备液在4℃冰箱中可保存7d)。

[0166] 葛根素标准使用溶液(200μg/mL)：准确吸取1.0mL葛根素标准储备溶液于10mL容量瓶中，用70％甲醇溶解并定容至刻度，混匀，(此标准储备液在4℃冰箱中可保存7d)。

[0167] 试品溶液的制备试样处理：取本品适量研磨均匀，称取试样0.25g(精确至0.001g)，加入70％甲醇溶解，并于超声波清洗器中提取30min，冷却至室温后用70％甲醇定容至50mL，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，作为供试品溶液；

[0168] 阴性供试品溶液的制备按处方比例及工艺制成缺葛根药材的阴性样品，按供试品溶液的制备方法制成阴性供试品溶液；

[0169] 系统适用性试验分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得；

[0170] 理论板数按葛根素峰计算不低于5000。

[0171] 经检测，每100g颗粒剂中总黄酮为180mg，葛根素含量为120mg。