本发明属于中药制剂检测领域，具体涉及一种具有养血除烦、宁心安神作用的药物制剂的检测方法。该检测方法，通过选择提取溶剂、提取时间、提取方法等，使得心神宁片中的斯皮诺素最大程度的被提取；通过选择色谱柱、梯度洗脱的方法等，使得心神宁片中的斯皮诺素与其它化学成分的分离效果最好，从而准确地对心神宁片中的斯皮诺素的含量进行测定。该检测方法准确、灵敏、简便、稳定性和重现性良好，HPLC色谱图峰型佳，从而准确地对心神宁片中的斯皮诺素的含量进行测定，有利于对该药物的质量进行有效控制，有助于提高该药物使用的安全性和稳定性。
1.一种具有养血除烦、宁心安神作用的药物制剂的检测方法，其特征在于，所述药物制剂的原料药组成为：炒酸枣仁、远志、茯苓、栀子、六神曲、甘草；
(1)供试品溶液的制备：取待测药物制剂，精密称定，研细，取0.2重量份～0.8重量份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％～100％甲醇或50％～100％乙醇15体积份～35体积份，称定重量，超声5～50分钟或加热回流5～50分钟，放冷，称定重量，用50％～100％甲醇或50％～100％乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得；
(2)对照品溶液的制备：精密称取斯皮诺素对照品适量，加甲醇适量，制成含斯皮诺素
(3)色谱条件：以4.6mm×250mm，5μm的C18为色谱柱，以乙腈为流动相A，以水-0.1％冰乙酸为流动相B，按照如下程序进行梯度洗脱：0min，A：B为10％：90％；0min-15min，A：B为
10％：90％→17％：83％；15min，A：B为17％：83％；15min-25min，A：B为17％：83％→23％：
77％；25min，A：B为23％：77％；25min-30min，A：B为23％：77％→35％：65％；30min，A：B为
35％：65％；30min-33min，A：B为35％：65％→10％：90％；33min-37min，A：B为10％：90％；检测波长335nm；柱温20℃～30℃；流速1.0mL/min；
(4)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液8～12μL，注入高效液相色谱仪，测定；
2.根据权利要求1所述的具有养血除烦、宁心安神作用的药物制剂的检测方法，其特征在于，该检测方法包括如下对斯皮诺素的含量测定步骤：
(1)供试品溶液的制备：取待测药物制剂，精密称定，研细，取0.4重量份～0.6重量份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入65％～75％甲醇或65％～75％乙醇20体积份～30体积份，称定重量，超声8～12分钟或加热回流8～12分钟，放冷，称定重量，用65％～75％甲醇或65％～75％乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得；
(2)对照品溶液的制备：精密称取斯皮诺素对照品适量，加甲醇适量，制成含斯皮诺素
(3)色谱条件：以4.6mm×250mm，5μm的C18为色谱柱，以乙腈为流动相A，以水-0.1％冰乙酸为流动相B，按照如下程序进行梯度洗脱：0min，A：B为10％：90％；0min-15min，A：B为
10％：90％→17％：83％；15min，A：B为17％：83％；15min-25min，A：B为17％：83％→23％：
77％；25min，A：B为23％：77％；25min-30min，A：B为23％：77％→35％：65％；30min，A：B为
35％：65％；30min-33min，A：B为35％：65％→10％：90％；33min-37min，A：B为10％：90％；检测波长335nm；柱温23℃～27℃；流速1.0mL/min；
(4)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液9～11μL，注入高效液相色谱仪，测定。
3.根据权利要求2所述的具有养血除烦、宁心安神作用的药物制剂的检测方法，其特征在于，该检测方法包括如下对斯皮诺素的含量测定步骤：
(1)供试品溶液的制备：取待测药物制剂，精密称定，研细，取0.5重量份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇或70％乙醇25体积份，称定重量，超声10分钟或加热回流
10分钟，放冷，称定重量，用70％甲醇或70％乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得；
(2)对照品溶液的制备：精密称取斯皮诺素对照品适量，加甲醇适量，制成含斯皮诺素
(3)色谱条件：以4.6mm×250mm，5μm的C18为色谱柱，以乙腈为流动相A，以水-0.1％冰乙酸为流动相B，按照如下程序进行梯度洗脱：0min，A：B为10％：90％；0min-15min，A：B为
10％：90％→17％：83％；15min，A：B为17％：83％；15min-25min，A：B为17％：83％→23％：
77％；25min，A：B为23％：77％；25min-30min，A：B为23％：77％→35％：65％；30min，A：B为
35％：65％；30min-33min，A：B为35％：65％→10％：90％；33min-37min，A：B为10％：90％；检测波长335nm；柱温25℃；流速1.0mL/min；
(4)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液10μL，注入高效液相色谱仪，测定。
4.根据权利要求1-3任一项所述的具有养血除烦、宁心安神作用的药物制剂的检测方法，其特征在于，所述色谱柱选自4.6mm×250mm，5μm的Perkin Elmer C18或4.6×250mm，5μm的Agilent C18或4.6×250mm，5μm的Inertsil ODS-3。
5.根据权利要求1-3任一项所述的具有养血除烦、宁心安神作用的药物制剂的检测方法，其特征在于，还包括如下阴性对照品溶液的制备的步骤：所述阴性对照品的原料药组成为：远志、茯苓、栀子、六神曲、甘草；
取待测阴性对照品，精密称定，研细，取0.2重量份～0.8重量份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％～100％甲醇或50％～100％乙醇15体积份～35体积份，称定重量，超声
5～50分钟或加热回流5～50分钟，放冷，称定重量，用50％～100％甲醇或50％～100％乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得所述阴性对照品溶液。
6.根据权利要求5所述的具有养血除烦、宁心安神作用的药物制剂的检测方法，其特征在于，所述阴性对照品溶液的制备的步骤为：取待测阴性对照品，精密称定，研细，取0.4重量份～0.6重量份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入65％～75％甲醇或65％～75％乙醇20体积份～30体积份，称定重量，超声8～12分钟或加热回流8～12分钟，放冷，称定重量，用65％～75％甲醇或65％～75％乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得所述阴性对照品溶液。
7.根据权利要求6所述的具有养血除烦、宁心安神作用的药物制剂的检测方法，其特征在于，所述阴性对照品溶液的制备的步骤为：取待测阴性对照品，精密称定，研细，取0.5重量份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇或70％乙醇25体积份，称定重量，超声10分钟或加热回流10分钟，放冷，称定重量，用70％甲醇或70％乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得所述阴性对照品溶液。
8.根据权利要求5所述的具有养血除烦、宁心安神作用的药物制剂的检测方法，其特征在于，所述药物制剂的原料药组成为：炒酸枣仁220-280重量份、远志140-190重量份、茯苓
140-190重量份、栀子50-110重量份、六神曲50-110重量份、甘草50-110重量份；
所述阴性对照品的原料药组成为：远志140-190重量份、茯苓140-190重量份、栀子50-
110重量份、六神曲50-110重量份、甘草50-110重量份。
9.根据权利要求1-3任一项所述的具有养血除烦、宁心安神作用的药物制剂的检测方法，其特征在于，所述药物制剂为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂或注射制剂。
10.根据权利要求5所述的具有养血除烦、宁心安神作用的药物制剂的检测方法，其特征在于，所述药物制剂由以下方法制备：(1)取选定重量份的甘草和六神曲，粉碎，过筛，混匀，得细粉；
(2)取选定重量份的炒酸枣仁、栀子、远志和茯苓，加水煎煮两次，第一次煎煮3小时，第二次煎煮2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至50℃相对密度为1.05-1.20的清膏；
(3)将所述细粉加入至所述清膏中，混匀，加入常规辅料、按照常规工艺制成临床可接受的剂型；
(1)取选定重量份的甘草和六神曲，粉碎，过筛，混匀，得细粉；
(2)取选定重量份的栀子、远志和茯苓，加水煎煮两次，第一次煎煮3小时，第二次煎煮2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至50℃相对密度为1.05-1.20的清膏；
(3)将所述细粉加入至所述清膏中，混匀，加入常规辅料、按照常规工艺制成临床可接受的剂型。
一种具有养血除烦、宁心安神作用的药物制剂的检测方法
技术领域
[0001] 本发明属于中药制剂检测领域，具体涉及一种具有养血除烦、宁心安神作用的药物制剂的检测方法。
背景技术
[0002] 心神宁片由东汉医圣张仲景所著《金匮要略》中的酸枣仁汤化裁而来。由炒酸枣仁、远志、茯苓、栀子、神曲、甘草等六味中药组成，收载于国家药品标准(WS-10410(ZD-0410)2002-2012Z)，具有养血除烦，宁心安神的功效，用于心肝血虚，失眠多梦，烦躁而惊，疲倦食少等症。心神宁片疗效显著，临床应用较为广泛。其中炒酸枣仁为方中君药，起着至关重要的作用，投料药材质量的优劣、成分含量的高低，直接影响着心神宁片的药效。
[0003] 酸枣仁为鼠李科枣属植物酸枣的干燥成熟种子，具有宁心安神、生津、补肝宁心、益阴敛汗的功效，为传统的镇静安神药物之一。酸枣仁中主要有效成分是皂苷类和黄酮类化合物。
[0004] 《HPLC法测定酸枣仁分散片中斯皮诺素含量》(亚太传统医药，2013，9(7)，41-42)，公开了以下内容：“方法：采用HPLC法，用Diamonsil C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；以乙腈(A)-水(0.1％乙酸)(B)为流动相梯度洗脱；流速1.0mL/min，柱温为25℃，检测波长为335nm。结果：斯皮诺素在3.36-32.36μg/g(r＝0.9992)范围内关系良好，平均加样回收率为
99.23％(n＝6)；RSD为1.51％”。以《HPLC法测定酸枣仁分散片中斯皮诺素含量》的方法对心神宁片的斯皮诺素的含量进行测定时，由于心神宁片由炒酸枣仁、远志、茯苓、栀子、神曲、甘草等六味中药组成，各中药之间相互联系、相互作用、相互影响，斯皮诺素与心神宁片中的其他化学成分的分离效果较差，从而导致不能进行含量测定。因此，《HPLC法测定酸枣仁分散片中斯皮诺素含量》的方法并不适用于心神宁片中斯皮诺素的含量测定。
[0005] 因此，建立一种心神宁片中斯皮诺素的含量测定方法，对于心神宁片的质量进行全面控制具有重要意义。
发明内容
[0006] 因此，本发明要解决的技术问题在于现有技术中没有心神宁片中斯皮诺素的含量测定方法、不利于从整体上对心神宁片的质量进行全面控制的技术问题，从而提出一种具有养血除烦、宁心安神作用的药物制剂的检测方法。
[0007] 为解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案来实现的：
[0008] 本发明提供一种具有养血除烦、宁心安神作用的药物制剂的检测方法，所述药物制剂的原料药组成为：炒酸枣仁、远志、茯苓、栀子、六神曲、甘草；
[0009] 该检测方法包括如下对斯皮诺素的含量测定步骤：
[0010] (1)供试品溶液的制备：取待测药物制剂，精密称定，研细，取0.2重量份～0.8重量份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％～100％甲醇或50％～100％乙醇15体积份～35体积份，称定重量，超声5～50分钟或加热回流5～50分钟，放冷，称定重量，用50％～
100％甲醇或50％～100％乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得；
[0011] (2)对照品溶液的制备：精密称取斯皮诺素对照品适量，加甲醇适量，制成含斯皮诺素0.005～0.015mg/mL的对照品溶液；
[0012] (3)色谱条件：以4.6mm×250mm，5μm的C18为色谱柱，以乙腈为流动相A，以水-0.1％冰乙酸为流动相B，按照如下程序进行梯度洗脱：0min，A：B为10％：90％；0min-15min，A：B为10％：90％→17％：83％；15min，A：B为17％：83％；15min-25min，A：B为17％：83％→
23％：77％；25min，A：B为23％：77％；25min-30min，A：B为23％：77％→35％：65％；30min，A：
B为35％：65％；30min-33min，A：B为35％：65％→10％：90％；33min-37min，A：B为10％：
90％；检测波长335nm；柱温20℃～30℃；流速1.0mL/min；
[0013] (4)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液8～12μL，注入高效液相色谱仪，测定；
[0014] 所述重量份与体积份的关系为g/mL。
[0015] 优选地，本发明上述具有养血除烦、宁心安神作用的药物制剂的检测方法中，[0016] 该检测方法包括如下对斯皮诺素的含量测定步骤：
[0017] (1)供试品溶液的制备：取待测药物制剂，精密称定，研细，取0.4重量份～0.6重量份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入65％～75％甲醇或65％～75％乙醇20体积份～30体积份，称定重量，超声8～12分钟或加热回流8～12分钟，放冷，称定重量，用65％～75％甲醇或65％～75％乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得；
[0018] (2)对照品溶液的制备：精密称取斯皮诺素对照品适量，加甲醇适量，制成含斯皮诺素0.008～0.012mg/mL的对照品溶液；
[0019] (3)色谱条件：以4.6mm×250mm，5μm的C18为色谱柱，以乙腈为流动相A，以水-0.1％冰乙酸为流动相B，按照如下程序进行梯度洗脱：0min，A：B为10％：90％；0min-15min，A：B为10％：90％→17％：83％；15min，A：B为17％：83％；15min-25min，A：B为17％：83％→
23％：77％；25min，A：B为23％：77％；25min-30min，A：B为23％：77％→35％：65％；30min，A：
B为35％：65％；30min-33min，A：B为35％：65％→10％：90％；33min-37min，A：B为10％：
90％；检测波长335nm；柱温23℃～27℃；流速1.0mL/min；
[0020] (4)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液9～11μL，注入高效液相色谱仪，测定。
[0021] 进一步优选地，本发明上述具有养血除烦、宁心安神作用的药物制剂的检测方法中，
[0022] 该检测方法包括如下对斯皮诺素的含量测定步骤：
[0023] (1)供试品溶液的制备：取待测药物制剂，精密称定，研细，取0.5重量份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇或70％乙醇25体积份，称定重量，超声10分钟或加热回流10分钟，放冷，称定重量，用70％甲醇或70％乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得；
[0024] (2)对照品溶液的制备：精密称取斯皮诺素对照品适量，加甲醇适量，制成含斯皮诺素0.010mg/mL的对照品溶液；
[0025] (3)色谱条件：以4.6mm×250mm，5μm的C18为色谱柱，以乙腈为流动相A，以水-0.1％冰乙酸为流动相B，按照如下程序进行梯度洗脱：0min，A：B为10％：90％；0min-15min，A：B为10％：90％→17％：83％；15min，A：B为17％：83％；15min-25min，A：B为17％：83％→
23％：77％；25min，A：B为23％：77％；25min-30min，A：B为23％：77％→35％：65％；30min，A：
B为35％：65％；30min-33min，A：B为35％：65％→10％：90％；33min-37min，A：B为10％：
90％；检测波长335nm；柱温25℃；流速1.0mL/min；
[0026] (4)分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液10μL，注入高效液相色谱仪，测定。
[0027] 进一步优选地，本发明上述具有养血除烦、宁心安神作用的药物制剂的检测方法中，所述色谱柱选自4.6mm×250mm，5μm的Perkin Elmer C18或4.6×250mm，5μm的Agilent C18或4.6×250mm，5μm的Inertsil ODS-3。
[0028] 进一步优选地，本发明上述具有养血除烦、宁心安神作用的药物制剂的检测方法中，还包括如下阴性对照品溶液的制备的步骤：
[0029] 所述阴性对照品的原料药组成为：远志、茯苓、栀子、六神曲、甘草；
[0030] 取待测阴性对照品，精密称定，研细，取0.2重量份～0.8重量份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50％～100％甲醇或50％～100％乙醇15体积份～35体积份，称定重量，超声5～50分钟或加热回流5～50分钟，放冷，称定重量，用50％～100％甲醇或50％～100％乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得所述阴性对照品溶液。
[0031] 进一步优选地，本发明上述具有养血除烦、宁心安神作用的药物制剂的检测方法中，
[0032] 取待测阴性对照品，精密称定，研细，取0.4重量份～0.6重量份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入65％～75％甲醇或65％～75％乙醇20体积份～30体积份，称定重量，超声8～12分钟或加热回流8～12分钟，放冷，称定重量，用65％～75％甲醇或65％～75％乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得所述阴性对照品溶液。
[0033] 进一步优选地，本发明上述具有养血除烦、宁心安神作用的药物制剂的检测方法中，所述阴性对照品溶液的制备的步骤为：取待测阴性对照品，精密称定，研细，取0.5重量份，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇或70％乙醇25体积份，称定重量，超声10分钟或加热回流10分钟，放冷，称定重量，用70％甲醇或70％乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得所述阴性对照品溶液。
[0034] 进一步优选地，本发明上述具有养血除烦、宁心安神作用的药物制剂的检测方法中，所述高效液相色谱仪选自日本岛津、Agilent 1100或Agilent 1260。
[0035] 进一步优选地，本发明上述具有养血除烦、宁心安神作用的药物制剂的检测方法中，所述药物制剂的原料药组成为：所述药物制剂的原料药组成为：炒酸枣仁220-280重量份、远志140-190重量份、茯苓140-190重量份、栀子50-110重量份、六神曲50-110重量份、甘草50-110重量份；
[0036] 所述阴性对照品的原料药组成为：远志140-190重量份、茯苓140-190重量份、栀子50-110重量份、六神曲50-110重量份、甘草50-110重量份。
[0037] 进一步优选地，本发明上述具有养血除烦、宁心安神作用的药物制剂的检测方法中，所述药物制剂的原料药组成为：炒酸枣仁250重量份、远志167重量份、茯苓167重量份、栀子83重量份、六神曲83重量份、甘草83重量份；
[0038] 所述阴性对照品的原料药组成为：远志167重量份、茯苓167重量份、栀子83重量份、六神曲83重量份、甘草83重量份。
[0039] 进一步优选地，本发明上述具有养血除烦、宁心安神作用的药物制剂的检测方法中，所述药物制剂为片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、蜜炼丸剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂、口服液体制剂或注射制剂。
[0040] 进一步优选地，本发明上述具有养血除烦、宁心安神作用的药物制剂的检测方法中，所述药物制剂由以下方法制备：
[0041] (1)取选定重量份的甘草和六神曲，粉碎，过筛，混匀，得细粉；
[0042] (2)取选定重量份的炒酸枣仁、栀子、远志和茯苓，加水煎煮两次，第一次煎煮3小时，第二次煎煮2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至50℃相对密度为1.05-1.20的清膏；
[0043] (3)将所述细粉加入至所述清膏中，混匀，加入常规辅料、按照常规工艺制成临床可接受的剂型；
[0044] 所述阴性对照品由以下方法制备：
[0045] (1)取选定重量份的甘草和六神曲，粉碎，过筛，混匀，得细粉；
[0046] (2)取选定重量份的栀子、远志和茯苓，加水煎煮两次，第一次煎煮3小时，第二次煎煮2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至50℃相对密度为1.05-1.20的清膏；
[0047] (3)将所述细粉加入至所述清膏中，混匀，加入常规辅料、按照常规工艺制成临床可接受的剂型。
[0048] 进一步优选地，本发明上述具有养血除烦、宁心安神作用的药物制剂的检测方法中，所述药物制剂为片剂，所述片剂由以下方法制备：
[0049] (1)取选定重量份的甘草和六神曲，粉碎，过筛，混匀，得细粉；
[0050] (2)取选定重量份的炒酸枣仁、栀子、远志和茯苓，加水煎煮两次，第一次煎煮3小时，第二次煎煮2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至50℃相对密度为1.05-1.20的清膏；
[0051] (3)将所述细粉加入至所述清膏中，混匀，加入辅料适量、制颗粒，加入硬脂酸镁适量，混匀，干燥，压制成片，包衣，即得片剂。
[0052] 本发明的技术方案具有如下优点：
[0053] 本发明具有养血除烦、宁心安神作用的药物制剂的检测方法，通过选择提取溶剂、提取时间、提取方法等，使得心神宁片中的斯皮诺素最大程度的被提取；通过选择色谱柱、梯度洗脱的方法等，使得心神宁片中的斯皮诺素与其它化学成分的分离效果最好，从而准确地对心神宁片中的斯皮诺素的含量进行测定。该检测方法准确、灵敏、简便、稳定性和重现性良好，HPLC色谱图峰型佳，从而准确地对心神宁片中的斯皮诺素的含量进行测定，有利于对该药物的质量进行有效控制，有助于提高该药物使用的安全性和稳定性。
附图说明
[0054] 为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0055] 图1为本发明实验例1中心神宁片阴性对照品溶液的高效液相色谱图；
[0056] 图2为本发明实验例1中心神宁片供试品溶液的高效液相色谱图；
[0057] 图3为本发明实验例1中斯皮诺素对照品溶液的高效液相色谱图；
[0058] 图4为本发明实验例2中斯皮诺素对照品溶液的高效液相色谱图；
[0059] 图5为本发明实验例2中心神宁片供试品溶液的高效液相色谱图。
具体实施方式
[0060] 下面将结合附图对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
[0061] 实验例1
[0062] 1仪器与材料
[0063] Agilent1260高效液相色谱仪，蒸发光检测器检测器；VWD检测器；KQ-500DE医用数控超声波清洗器；AE 240十万分之一电子分析天平，瑞士梅特勒。
[0064] 斯皮诺素对照品(批号111869-201203)由中国食品药品检定研究院购买；乙腈(美国Fisher)、甲醇(美国Fisher)为色谱纯；甲醇(天津佳兴化工玻璃仪器工贸有限公司)，冰乙酸(天津市光复科技发展有限公司)为分析纯，水(三级反渗法制得纯化水)。
[0065] 心神宁片(批号492043)、心神宁片阴性对照品、制备心神宁片阴性对照品所用的原料均由颈复康药业集团有限公司提供，由颈复康药业集团有限公司工程师中药鉴别师鉴定为真品。心神宁片按照实施例1的方法制备，心神宁片阴性对照品按照实施例2的方法制备。
[0066] 2.2.1色谱条件
[0067] 采用Perkin Elmer C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；A(乙腈)-B(0.1％冰乙酸)为流动相，在线梯度洗脱，0-15min-25min-30min-33min-37min，A相为10％-17％-23％-35％-10％-10％；检测波长：335nm；柱温：25℃；流速：1.0mL/min；进样体积：10μL。
[0068] 2.2.2对照品溶液的制备
[0069] 精密称取斯皮诺素对照品适量，加甲醇适量，制成含斯皮诺素0.01mg/mL的对照品溶液。
[0070] 2.2.3供试品溶液的制备
[0071] 取心神宁片数片，除去包衣，精密称定，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇25mL，称定重量，超声10分钟，放冷，称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液即得。
[0072] 2.2.4阴性对照品溶液的制备
[0073] 按处方中的药味比例配制不含酸枣仁药材的阴性样品，依“2..2.3”项下方法制备阴性对照液。
[0074] 2.2.5专属性实验
[0075] 按上述实验条件，分别将阴性对照品溶液、供试品溶液及对照品溶液注入液相色谱仪测定，所得高效液相色谱图分别见图1、图2和图3。
[0076] 由图1可知，该色谱条件下，阴性对照品溶液无干扰。
[0077] 2.2.6线性关系考察
[0078] 精密称取对照品适量，加甲醇制成含斯皮诺素0.053424mg/mL的对照品液，采用倍比稀释法制成系列质量浓度溶液，使斯皮诺素的浓度分别为0.026712mg/mL，0.013356mg/mL，0.006678mg/mL，0.003339mg/mL。按照“2.2.1”项下色谱条件进行HPLC分析。以斯皮诺素的峰面积Y对斯皮诺素的浓度X绘制标准曲线得回归方程Y＝20043X+4.4708，r＝0.9999(n＝5)。
[0079] 结果表明，心神宁片中的斯皮诺素在3.339-53.424μg/mL范围内线性关系良好。
[0080] 2.2.7精密度实验
[0081] 取含量为0.013356mg/mL的对照品溶液，按照“2.2.1”项下的色谱条件，重复进样6次，记录每次的色谱峰面积，计算RSD值。
[0082] 结果表明，心神宁片中的斯皮诺素RSD值为0.75％。即，该检测方法精密度良好。
[0083] 2.2.8重复性实验
[0084] 精密称取同一批号心神宁片(批号492043)，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液6份，按“2.2.1”项下色谱条件测定，记录色谱峰面积。
[0085] 结果表明，心神宁片中的斯皮诺素的平均含量为0.1623mg/片，RSD为1.46％(n＝6)。即，该检测方法重现性好。
[0086] 2.2.9稳定性实验
[0087] 取按照“2.2.2”项下方法制备的供试品溶液，分别在制备后0，2，4，6，8，10，12h进样10μL，记录色谱峰面积。
[0088] 结果表明，心神宁片中的斯皮诺素色谱峰面积RSD值为1.46％。即，供试品溶液在12h内稳定性良好。
[0089] 2.2.10加样回收率实验
[0090] 精密称取已测定斯皮诺素(0.1530mg/片)含量的心神宁片(批号492043)9份，精密称定0.25g，加入一定量对照品，按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.2.1”项下色谱条件进行测定，以供试品溶液中绝对质量分数计算加样回收率，具体实验结果见表2。
[0091] 表2 斯皮诺素加样回收率实验结果(n＝9)
[0092]
[0093] 由表2可知，心神宁片中的斯皮诺素平均回收率为100.91％，RSD值为1.36％。
[0094] 2.2.10定量限的确定
[0095] 取标准曲线工作液中最低浓度的对照品溶液稀释，按“2.2.1”项下的色谱条件进行检测，进样量为10μL，然后不断按倍数稀释，测定。
[0096] 结果表明，心神宁片中的斯皮诺素浓度为0.001166667mg/mL的溶液信噪比为10:1，确定定量限为11.66667ng。
[0097] 2.2.11检测限的确定
[0098] 取标准曲线工作液中最低浓度的对照品溶液稀释，按“2.2.1”项下的色谱条件进行检测，进样量为10μL，然后不断按倍数稀释，测定。
[0099] 结果表明，心神宁片中的测出斯皮诺素浓度为0.000875mg/mL的溶液信噪比为3:1，确定检测限为8.75ng。
[0100] 2.2.12样品含量测定
[0101] 按上述色谱条件测定颈复康药业集团有限公司心神宁片(批号392170 030，492009 029，492016，492043)和市面上某厂家的心神宁片(批号140519，140802，140804)中的斯皮诺素，具体实验结果见表3。
[0102] 表3 样品含量测定结果
[0103]样品批号 斯皮诺素含量(mg/片)
392170 0.1598
492009 0.1820
492016 0.1597
492043 0.1530
140802 0.1237
140804 0.1313
140519 0.1482
[0104] 由表3可知，本发明具有养血除烦、宁心安神作用的药物制剂的检测方法，可以准确地对心神宁片中的斯皮诺素的含量进行测定，进而对该药物的质量进行控制。
[0105] 综上所述，本发明具有养血除烦、宁心安神作用的药物制剂的检测方法，准确、灵敏、简便、稳定性和重现性良好，HPLC色谱图峰型佳，从而准确地对心神宁片中的斯皮诺素的含量进行测定，有利于对该药物的质量进行有效控制，有助于提高该药物使用的安全性和稳定性。
[0106] 实验例2
[0107] 对比例1
[0108] 本对比例与实施例3的区别仅在于以4.6×250mm，5μm的Agilent C18为色谱柱，其余实验条件和操作步骤与实施例3相同。
[0109] 结果表明，本对比例中心神宁片中的斯皮诺素的分离效果不如实施例3心神宁片中的斯皮诺素的分离效果好，保留时间不适中。
[0110] 对比例2
[0111] 本对比例与实施例3的区别仅在于以4.6×250mm，5μm的Inertsil ODS-3为色谱柱，其余实验条件和操作步骤与实施例3相同。
[0112] 结果表明，本对比例中心神宁片中的斯皮诺素的分离效果不如实施例3心神宁片中的斯皮诺素的分离效果好，保留时间不适中。
[0113] 对比例3
[0114] 本实施例与实施例3的区别仅在于，供试品溶液的制备中，加热回流10分钟，其余实验条件和操作步骤与实施例3相同。
[0115] 结果表明，本对比例测定的心神宁片中的斯皮诺素的含量与实施例3测定的心神宁片中的含量相同。
[0116] 对比例4
[0117] 本对比例与实施例3的区别仅在于，供试品溶液的制备中，精密加入50％乙醇25mL，用50％乙醇补足减失的重量，其余实验条件和操作步骤与实施例3相同。
[0118] 结果表明，本对比例测定的心神宁片中的斯皮诺素的含量比实施例3测定的心神宁片中的含量低。
[0119] 对比例5
[0120] 本对比例与实施例3的区别仅在于，供试品溶液的制备中，精密加入50％甲醇25mL，用50％甲醇补足减失的重量，其余实验条件和操作步骤与实施例3相同。
[0121] 结果表明，本对比例测定的心神宁片中的斯皮诺素的含量比实施例3测定的心神宁片中的含量低。
[0122] 对比例6
[0123] 本对比例与实施例3的区别仅在于，供试品溶液的制备中，精密加入100％乙醇25mL，用100％乙醇补足减失的重量，其余实验条件和操作步骤与实施例3相同。
[0124] 结果表明，本对比例测定的心神宁片中的斯皮诺素的含量比实施例3测定的心神宁片中的含量低。
[0125] 对比例7
[0126] 本对比例与实施例3的区别仅在于，供试品溶液的制备中，精密加入100％甲醇25mL，用100％甲醇补足减失的重量，其余实验条件和操作步骤与实施例3相同。
[0127] 结果表明，本对比例测定的心神宁片中的斯皮诺素的含量比实施例3测定的心神宁片中的含量低。
[0128] 对比例8
[0129] 本对比例与实施例3的区别仅在于，供试品溶液的制备中，超声20分钟，其余实验条件和操作步骤与实施例3相同。
[0130] 结果表明，本对比例测定的心神宁片中的斯皮诺素的含量与实施例3测定的心神宁片中的含量相同。
[0131] 对比例9
[0132] 本对比例与实施例3的区别仅在于，供试品溶液的制备中，超声30分钟，其余实验条件和操作步骤与实施例3相同。
[0133] 结果表明，本对比例测定的心神宁片中的斯皮诺素的含量与实施例3测定的心神宁片中的含量相同。
[0134] 对比例10
[0135] 本对比例与实施例3的区别仅在于，供试品溶液的制备中，超声45分钟，其余实验条件和操作步骤与实施例3相同。
[0136] 结果表明，本对比例测定的心神宁片中的斯皮诺素的含量与实施例3测定的心神宁片中的含量相同。
[0137] 对比例11
[0138] 本对比例与实施例3的区别仅在于，用Diamonsil C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)；以乙腈(A)-水(0.1％乙酸)(B)为流动相梯度洗脱；按照如下程序进行梯度洗脱：0min，A：B为19％：81％；0min-5min，A：B为19％：91％→23％：77％；15min，A：B为23％：77％；15min-25min，A：B为23％：77％→70％：30％；25min，A：B为70％：30％；25min-35min，A：B为
70％：30％→90％：10％；30min，A：B为90％：10％；35min-40min，A：B为90％：10％→100％：
0％；40min，A：B为10％：90％，其余实验条件和操作步骤与实施例3相同。
[0139] 具体实验结果如图4和图5所示。
[0140] 由图4和图5可知，心神宁片中的其他化学成分的色谱峰对斯皮诺素的色谱峰有干扰，斯皮诺素与其他化学成分的分离效果较差，从而导致不能进行含量测定。因此，对比例11的方法不能用于测定心神宁片中的斯皮诺素的含量。
[0141] 实施例1 心神宁片的制备
[0142] 【处方】炒酸枣仁250g、远志167g、茯苓167g、栀子83g、六神曲83g、甘草83g。
[0143] 【制备方法】所述片剂由以下方法制备：
[0144] (1)取选定重量份的甘草和六神曲，粉碎，过筛，混匀，得细粉；
[0145] (2)取选定重量份的炒酸枣仁、栀子、远志和茯苓，加水煎煮两次，第一次煎煮3小时，第二次煎煮2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至50℃相对密度为1.05-1.20的清膏；
[0146] (3)将所述细粉加入至所述清膏中，混匀，加入辅料适量、制颗粒，加入硬脂酸镁适量，混匀，干燥，压制成片，包衣，即得片剂。
[0147] 实施例2 心神宁片阴性对照品的制备
[0148] 【处方】炒酸枣仁250g、远志167g、茯苓167g、栀子83g、六神曲83g、甘草83g。
[0149] 【制备方法】所述片剂由以下方法制备：
[0150] (1)取选定重量份的甘草和六神曲，粉碎，过筛，混匀，得细粉；
[0151] (2)取选定重量份的栀子、远志和茯苓，加水煎煮两次，第一次煎煮3小时，第二次煎煮2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至50℃相对密度为1.05-1.20的清膏；
[0152] (3)将所述细粉加入至所述清膏中，混匀，加入辅料适量、制颗粒，加入硬脂酸镁适量，混匀，干燥，压制成片，包衣，即得片剂。
[0153] 实施例3
[0154] 本实施例具有养血除烦、宁心安神作用的药物制剂的检测方法，该检测方法包括如下对斯皮诺素的含量测定步骤：
[0155] (1)供试品溶液的制备：取待测药物制剂，精密称定，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇25mL，称定重量，超声10分钟，放冷，称定重量，用70％甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得；
[0156] (2)对照品溶液的制备：精密称取斯皮诺素对照品适量，加甲醇适量，制成含斯皮诺素0.010mg/mL的对照品溶液；
[0157] (3)阴性对照品溶液的制备：取待测阴性对照品，精密称定，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇或乙醇25mL，称定重量，超声或加热回流10分钟，放冷，称定重量，用70％甲醇或乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得；
[0158] (4)色谱条件：以4.6mm×250mm，5μm的Perkin Elmer C18为色谱柱，以乙腈为流动相A，以水-0.1％冰乙酸为流动相B，按照如下程序进行梯度洗脱：0min，A：B为10％：90％；0min-15min，A：B为10％：90％→17％：83％；15min，A：B为17％：83％；15min-25min，A：B为
17％：83％→23％：77％；25min，A：B为23％：77％；25min-30min，A：B为23％：77％→35％：
65％；30min，A：B为35％：65％；30min-33min，A：B为35％：65％→10％：90％；33min-37min，A：B为10％：90％；检测波长335nm；柱温25℃；流速1.0mL/min；
[0159] (5)分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照品溶液10μL，注入高效液相色谱仪，测定。
[0160] 实施例4
[0161] 本实施例具有养血除烦、宁心安神作用的药物制剂的检测方法，该检测方法包括如下对斯皮诺素的含量测定步骤：
[0162] (1)供试品溶液的制备：取待测药物制剂，精密称定，研细，取0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇20mL，称定重量，超声8分钟，放冷，称定重量，用75％甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得；
[0163] (2)对照品溶液的制备：精密称取斯皮诺素对照品适量，加甲醇适量，制成含斯皮诺素0.008mg/mL的对照品溶液；
[0164] (3)阴性对照品溶液的制备：取待测阴性对照品，精密称定，研细，取0.4g～0.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇20mL，称定重量，超声8分钟，放冷，称定重量，用75％甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得；
[0165] (4)色谱条件：4.6mm×250mm，5μm的Perkin Elmer C18为色谱柱，以乙腈为流动相A，以水-0.1％冰乙酸为流动相B，按照如下程序进行梯度洗脱：0min，A：B为10％：90％；0min-15min，A：B为10％：90％→17％：83％；15min，A：B为17％：83％；15min-25min，A：B为
17％：83％→23％：77％；25min，A：B为23％：77％；25min-30min，A：B为23％：77％→35％：
65％；30min，A：B为35％：65％；30min-33min，A：B为35％：65％→10％：90％；33min-37min，A：B为10％：90％；检测波长335nm；柱温27℃；流速1.0mL/min；
[0166] (5)分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照品溶液11μL，注入高效液相色谱仪，测定。
[0167] 实施例5
[0168] 本实施例具有养血除烦、宁心安神作用的药物制剂的检测方法，该检测方法包括如下对斯皮诺素的含量测定步骤：
[0169] 该检测方法包括如下对斯皮诺素的含量测定步骤：
[0170] (1)供试品溶液的制备：取待测药物制剂，精密称定，研细，取0.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入65％乙醇30mL，称定重量，超声12分钟，放冷，称定重量，用65％乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得；
[0171] (2)对照品溶液的制备：精密称取斯皮诺素对照品适量，加甲醇适量，制成含斯皮诺素0.012mg/mL的对照品溶液；
[0172] (3)阴性对照品溶液的制备：取待测阴性对照品，精密称定，研细，取0.4g～0.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入65％乙醇30mL，称定重量，超声或加热回流8～12分钟，放冷，称定重量，用65％乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤，取续滤液，即得；
[0173] (4)色谱条件：4.6mm×250mm，5μm的Perkin Elmer C18为色谱柱，以乙腈为流动相A，以水-0.1％冰乙酸为流动相B，按照如下程序进行梯度洗脱：0min，A：B为10％：90％；0min-15min，A：B为10％：90％→17％：83％；15min，A：B为17％：83％；15min-25min，A：B为
17％：83％→23％：77％；25min，A：B为23％：77％；25min-30min，A：B为23％：77％→35％：
65％；30min，A：B为35％：65％；30min-33min，A：B为35％：65％→10％：90％；33min-37min，A：B为10％：90％；检测波长335nm；柱温23℃；流速1.0mL/min；
[0174] (5)分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照品溶液9μL，注入高效液相色谱仪，测定。
[0175] 显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。
