一种新苯丙素苷类化合物及其制备方法和用途

摘要

本发明公开了从大蓟(Cirsium japonicum)中提取分离得到的一种新苯丙素苷类化合物及其制备方法；本发明还涉及该化合物的抗肿瘤用途。化学名为：5"‑羟甲基‑1"‑1‑[9‑(3',5'‑二甲氧基‑4'‑羟基苯氧基)‑丙烯基]‑3,5‑二甲氧基‑苯氧基‑四氢化‑吡喃‑2",3",4"‑三醇，所述的新苯丙素苷类化合物在制备抗肿瘤药物中的用途。本发明的优点在于所得化合物为新苯丙素苷类化合物，化合物结构新颖，具有抑制肿瘤细胞生长的活性，并且提取分离方法简易，便于对其进行进一步的药理和临床研究，这为开发疗效好且毒副作用小的新型抗肿瘤药物奠定了重要的理论基础。

权利要求

1.一种新苯丙素苷类化合物，化学名为：5"-羟甲基-1"-1-[9-(3', 5' -二甲氧基-4'-羟基苯氧基)-丙烯基]-3,5-二甲氧基-苯氧基-四氢化-吡喃-2",3",4"-三醇，该化合物结构式Ⅰ为：。

2.一种制备如权利要求 1所述新苯丙素苷类化合物的方法，其特征在于该制备方法包括以下步骤：取干燥的大蓟地上部分为原料，用95%的乙醇提取3次，每次2小时，经低温减压浓缩得到稠膏，将稠膏混悬于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取，分别得到石油醚部分、乙酸乙酯部分，正丁醇部分；根据前期的药理筛选结果，然后有针对性地对大蓟的活性部位——正丁醇萃取部分进行重点分离，利用将正丁醇萃取部分上硅胶柱100-

200目，依次用流动相石油醚：丙酮=10：1—1：5进行梯度洗脱，分别得到各个粗馏分；将粗馏分石油醚：丙酮=4：1上硅胶柱200-300目，依次用流动相石油醚：丙酮=5：1—3：1进行梯度洗脱，分别得到各个亚馏分，然后将中间亚馏分上Sephadex LH-20凝胶柱，得到次馏分，再将次馏分上半制备液相色谱进行分离纯化，最终得到上述新苯丙素苷类化合物化合物Ⅰ单体。

3.权利要求1所述的新苯丙素苷类化合物在制备抗肿瘤药物中的用途。

说明书

一种新苯丙素苷类化合物及其制备方法和用途

技术领域

[0001] 本发明属于植物化学领域，具体涉及从大蓟(Cirsium japonicum)中提取分离得到的一种新苯丙素苷类化合物及其制备方法；本发明还涉及该化合物的抗肿瘤用途。

背景技术

[0002] 大蓟(Cirsium japonicum)系菊科蓟属植物，多年生草本，茎直立，有细纵纹，基部具白色丝状毛，在我国各地均有大量分布。大蓟性凉，味甘、苦，归心、肝经，功效为凉血止血、散瘀解毒消痈。现代文献报道大蓟中含有黄酮及黄酮苷类、长链（烯）炔醇类、挥发油类、三萜和甾醇类及其它类等化学成分。近年来，药理研究发现大蓟具有凉血止血、抑菌、降压、抗氧化等作用。因此，大蓟作为一种极具开发潜力药用植物越来越受到人们的重视。

[0003] 为了进一步对大蓟这一丰富自然资源进行开发利用，深入挖掘其有效成分，明确其药理活性与有效成分的关系。因此，本发明选取大蓟作为研究对象，对其化学成分进行系统研究，最终分离得到一种新苯丙素苷类化合物，并采用MTT法对其抗肿瘤活性进行了测定。结果表明该化合物具有一定的抗肿瘤活性，迄今在国内外尚未见该化合物结构及活性的相关文献或专利报道。

发明内容

[0004] 本发明提供一种以大蓟为原料提取分离得到的新苯丙素苷类化合物，并提供了该化合物在制备抗肿瘤药物中的用途。

[0005] 本发明所述新苯丙素苷类化合物的结构式Ⅰ为：

[0006]

[0007] 化学名为:

[0008] 5"-羟甲基-1"-1-[9-(3', 5' -二甲氧基-4'-羟基苯氧基)-丙烯基]-3,5-二甲氧基-苯氧基-四氢化-吡喃-2",3",4"-三醇。

[0009] 该化合物是从菊科蓟属植物大蓟中分离得到的新化合物。

[0010] 为得到上述化合物，本发明采取的制备方法包括以下步骤：取干燥的大蓟地上部分为原料，用95%的乙醇提取3次，每次2小时，经低温减压浓缩得到稠膏，将稠膏混悬于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取，分别得到石油醚部分、乙酸乙酯部分，正丁醇部分；根据前期的药理筛选结果，然后有针对性地对大蓟的活性部位——正丁醇萃取部分进行重点分离，综合运用硅胶、Sephadex LH-20等柱填料和半制备色谱分离手段，得到上述新苯丙素苷类化合物化合物Ⅰ单体。

[0011] 本发明化合物Ⅰ为浅黄色粉末(甲醇)，HR-ESI-MS m/z 547.2541 [M+Na]+提示其分子组成为C25H32O12 (calcd. for C25H32O12Na，547.2553)，不饱和度为10。化合物Ⅰ的UV (MeOH) λmax: 205，330 nm；IRνmax: 3430.2，1608.4，1574.9 cm-1；1H NMR (CD3OD，400 MHz)和13C NMR (CD3OD，400 MHz)数据见Table 1。根据化合物Ⅰ的波谱数据和HMBC、NOESY、1H-1H COSY等偶联相关，最终确定化合物Ⅰ为一个新苯丙素苷类化合物。

[0012] 所述的新苯丙素苷类化合物在制备抗肿瘤药物中的用途。

[0013] 本发明的优点在于所得化合物为新苯丙素苷类化合物，化合物结构新颖，具有抑制肿瘤细胞生长的活性，并且提取分离方法简易，便于对其进行进一步的药理和临床研究，这为开发疗效好且毒副作用小的新型抗肿瘤药物奠定了重要的理论基础。

附图说明

[0014] 下面结合附图，对本发明做进一步说明。

[0015] 图1是本发明所述化合物Ⅰ的制备流程图。

[0016] 图2是本发明所述化合物Ⅰ的偶联相关图。

具体实施方式

[0017] 本发明为新苯丙素苷类化合物，化学名为：5"-羟甲基-1"-1-[9-(3', 5' -二甲氧基-4'-羟基苯氧基)-丙烯基]-3,5-二甲氧基-苯氧基-四氢化-吡喃-2",3",4"-三醇，该化合物结构如下图所示 ：

[0018]

[0019] 该化合物是从菊科蓟属植物大蓟中分离得到的新化合物。

[0020] 上述化合物Ⅰ的制备：

[0021] 本发明的制备方法包括以下步骤：取干燥的大蓟地上部分12.5千克为原料，用95%的乙醇(18 L×3)提取3次，每次2小时，经低温减压浓缩得到稠膏1.4千克。将稠膏混悬于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇进行萃取，分别得到石油醚部分99.6克、乙酸乙酯部分210.4克，正丁醇部分294.5克。根据前期的药理筛选结果，本发明有针对性地对大蓟的活性部位——正丁醇萃取部分进行重点分离，综合运用硅胶、Sephadex LH-20等柱填料和半制备色谱等分离手段，得到单体化合物Ⅰ，其分离流程如图1所示。

[0022] 本发明化合物Ⅰ为浅黄色粉末(甲醇)，HR-ESI-MS m/z 547.2541 [M+Na]+提示其分子组成为C25H32O12 (calcd. for C25H32O12Na，547.2553)，不饱和度为10。化合物Ⅰ的UV (MeOH) λmax: 205，330 nm；IRνmax: 3430.2，1608.4，1574.9 cm-1；1H NMR (CD3OD，400 MHz)和13C NMR (CD3OD，400 MHz)数据见Table 1。根据化合物Ⅰ的波谱数据和HMBC、NOESY、1H-1H COSY等偶联相关(图2)，最终确定化合物Ⅰ为一个新苯丙素苷类化合物。

[0023] 表1化合物Ⅰ的1H NMR、13C NMR和HMBC相关数据

[0024]

[0025] 2.化合物Ⅰ在抗肿瘤方面的活性：

[0026] （1）实验细胞：

[0027] MCF-7、U87、HCT116、A549

[0028] （2）细胞培养：

[0029] 选取含有10%牛胎血清、100 U/mL青霉素和100 mg/L的RRMI1640作为培养基，将实验细胞放在37°C、5% CO2饱和湿度培养箱中进行传代培养，进行药理实验时选用对数生长期细胞。

[0030] （3） MTT法：

[0031] A．取对数生长期的细胞，消化后充分吹打成单细胞悬液，计数后稀释成1×104 cell/mL，在96孔培养板中进行接种，100 μL/孔。样品设4-5个浓度级别，然后在实验孔中加入100μL不同浓度级别样品的培养基，每一浓度级别平行3孔。对照组加入等体积溶剂。

[0032] ．将96孔培养板置于37  °C、5% CO2饱和湿度培养箱中培养96小时，然后弃去培养液，每孔加入新鲜配置的含0.20 mg/mLMTT的无血清培养基，在37  °C下继续培养4小时，然后离心，除去上清夜。每孔加入150 μL DMSO溶解formazan沉淀，置微量震荡器上震荡5分钟使其充分溶解。

[0033] ．在BIORAD 550型酶标仪上测定570 nm处的光密度值。按下列公式计算肿瘤细胞生成抑制率，再以药物浓度对肿瘤细胞生成抑制率作图得到计量曲线，从曲线上读取药物的半数抑制浓度（IC50）值。肿瘤细胞生长抑制率（%）=（1-实验孔测定值/对照孔测定值）×100%。

[0034] （4）实验结果：

[0035] 在 MTT 法测试中， 化合物 I 对MCF-7（人乳腺癌细胞）、U87（人胶质瘤细胞）、HCT116（人结肠癌细胞）、A549（人肺癌细胞）、等癌细胞系的 IC 50 (μM) 分别见表 2。

[0036] 表2 化合物Ⅰ的MTT法药理筛选结果

[0037]

[0038] （5）结论：

[0039] MTT法药理结果表明化合物 I 具有明显的肿瘤细胞增殖抑制作用，可以作为细胞增殖抑制剂或抗肿瘤剂用于抗肿瘤的研究。因此，本发明所述的新苯丙素苷类化合物对于研制具有抗肿瘤的药物具有重要意义。