复方硫酸庆大-小诺霉素注射液及其制备方法

摘要

本发明公开了一种复方硫酸庆大‑小诺霉素注射液及其制备方法，每100mL注射液由以下组分组成：硫酸庆大‑小诺霉素0.8~2.2g，半胱氨酸盐酸盐0.02~0.18g，抗氧剂0.01~0.20g，金属离子螯合剂0.01~0.05g，用量足以控制体系pH值为3.5~6.5的pH调节剂，余量为注射用水。本发明将硫酸庆大‑小诺霉素和半胱氨酸盐酸盐组合注射用药，在抗菌的同时抗炎，可迅速缓解动物急性感染性病症，缩短治愈期，达到标本兼治的目的。其组方合理，安全稳定，治疗效果优于硫酸庆大‑小诺霉素单方制剂，且制备工艺简单，操作方便，易于实现工业化。与抗菌药和抗炎药分别给药或多次注射相比，本发明复方注射液还具有成本低、剂量小、使用方便、动物应激反应小、治疗效率高等优点。

权利要求

1.复方硫酸庆大-小诺霉素注射液，其特征在于，每100mL注射液由以下组分组成：硫酸庆大-小诺霉素0.8 2.2g，半胱氨酸盐酸盐0.02 0.18g，抗氧剂0.01 0.20g，金属离子螯合~ ~ ~剂0.01 0.05g，用量足以控制体系pH值为4.0 6.5的pH调节剂，余量为注射用水；所述抗氧~ ~剂为甲醛合次硫酸钠、亚硫酸氢钠或焦亚硫酸钠；所述金属离子螯合剂为乙二胺四乙酸二钠；所述pH调节剂为盐酸或氢氧化钠。

2.如权利要求1所述的复方硫酸庆大-小诺霉素注射液，其特征在于，每100mL注射液由以下组分组成：硫酸庆大-小诺霉素0.8 2.2g，半胱氨酸盐酸盐0.04 0.18g，抗氧剂0.05~ ~ ~

0.15g，金属离子螯合剂0.02 0.05g，用量足以控制体系pH值为4.0 6.5的pH调节剂，余量为~ ~注射用水。

3.如权利要求1或2所述的复方硫酸庆大-小诺霉素注射液，其特征在于，所述抗氧剂为焦亚硫酸钠。

4.权利要求1至3任一项所述复方硫酸庆大-小诺霉素注射液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：将配方量的抗氧剂和金属离子螯合剂溶解于部分配方量的注射用水中，搅拌混匀得溶液A；向溶液A中加入配方量的硫酸庆大-小诺霉素和半胱氨酸盐酸盐，搅拌使溶解，用pH调节剂调节pH值，再补加注射用水至全量，过滤，滤液充氮气分装，灭菌，得复方硫酸庆大-小诺霉素注射液。

说明书

复方硫酸庆大-小诺霉素注射液及其制备方法

技术领域

[0001] 本发明属于兽药制剂技术领域，涉及一种兽用硫酸庆大-小诺霉素复方制剂及其制备方法。

背景技术

[0002] 硫酸庆大-小诺霉素（Gentamycin Micronomicin Sulfate）是由小单孢菌（Micromono-sporae）产生的一种氨基糖苷类抗生素，对多种革兰氏阴性菌和金黄色葡萄球菌（包括产β-内酰胺酶菌株）均有抗菌作用。其特点是对氨基糖苷乙酰转移酶稳定，该酶能使卡那霉素、庆大霉素等钝化，故硫酸庆大-小诺霉素对产生该酶的耐药菌敏感。目前主要用于大肠杆菌、克雷白杆菌、变形杆菌、肠杆菌属、沙雷杆菌、绿脓杆菌等革兰阴性杆菌引起的呼吸道、泌尿道、腹腔以及外伤感染，也可用于败血症。

[0003] 随着我国畜牧业的快速发展、养殖量的逐渐加大、养殖规模的不断转变，由细菌等敏感菌引起的败血症、泌尿生殖道感染、呼吸道感染、胃肠道感染（包括腹膜炎）、胆道感染、乳腺炎及皮肤和软组织感染性疾病不断发生，且常以混合感染，呈现多种疾病症状出现。在使用抗生素药物治疗的同时辅助消炎，可迅速缓解和控制临床症状，对急性动物疾病的疗程和预后起到重要作用。因此，具有这两种效能的制剂的研发成为目标和热点。

发明内容

[0004] 有鉴于此，本发明的目的之一在于提供一种具有抗菌和抗炎双重作用的复方硫酸庆大-小诺霉素注射液；目的之二在于提供一种制备所述复方硫酸庆大-小诺霉素注射液的方法，工艺简单，操作方便，易于实现工业化。

[0005] 经研究，本发明提供如下技术方案：

[0006] 复方硫酸庆大-小诺霉素注射液，每100mL注射液由以下组分组成：硫酸庆大-小诺霉素0.8 2.2g，半胱氨酸盐酸盐0.02 0.18g，抗氧剂0.01 0.20g，金属离子螯合剂0.01~ ~ ~ ~0.05g，用量足以控制体系pH值为3.5 6.5的pH调节剂，余量为注射用水。
~

[0007] 上述配方中，半胱氨酸盐酸盐的量小于0.02g时注射液不稳定，大于0.18g时注射液成本增加；抗氧剂的量小于0.01g时抗氧效果不足，大于0.20g时影响注射液的安全性；金属离子螯合剂可螯合设备和注射用水中存在的微量金属离子，防止其催化药物氧化，起到抗氧化作用，金属离子螯合剂的量小于0.01g时抗氧化效果不好，大于0.05g时注射液成本增加。此外，就本发明而言，pH值是延缓药物氧化、提高稳定性的关键因素。

[0008] 进一步，每100mL注射液由以下组分组成：硫酸庆大-小诺霉素0.8 2.2g，半胱氨酸~盐酸盐0.04 0.18g，抗氧剂0.05 0.15g，金属离子螯合剂0.02 0.05g，用量足以控制体系pH~ ~ ~
值为4.0 6.5的pH调节剂，余量为注射用水。
~

[0009] 进一步，所述抗氧剂为甲醛合次硫酸钠、亚硫酸氢钠或焦亚硫酸钠。

[0010] 进一步，所述抗氧剂为焦亚硫酸钠。

[0011] 进一步，所述金属离子螯合剂为乙二胺四乙酸二钠。

[0012] 进一步，所述pH调节剂为盐酸或氢氧化钠。

[0013] 复方硫酸庆大-小诺霉素注射液的制备方法，包括以下步骤：将配方量的抗氧剂和金属离子螯合剂溶解于部分配方量的注射用水中，搅拌混匀得溶液A；向溶液A中加入配方量的硫酸庆大-小诺霉素和半胱氨酸盐酸盐，搅拌使溶解，用pH调节剂调节pH值，再补加注射用水至全量，过滤，滤液充氮气分装，灭菌，得复方硫酸庆大-小诺霉素注射液。

[0014] 上述制备方法中，先在注射用水中溶入抗氧剂和金属离子螯合剂，再加入硫酸庆大-小诺霉素，可以明显增强抗氧化效果，防止硫酸庆大-小诺霉素氧化变色。

[0015] 本发明的有益效果在于：本发明将硫酸庆大-小诺霉素和半胱氨酸盐酸盐组合注射用药，在抗菌的同时抗炎，可迅速缓解动物急性感染性病症，缩短治愈期，达到标本兼治的目的。其组方合理，安全稳定，治疗效果优于硫酸庆大-小诺霉素单方制剂，且制备工艺简单，操作方便，易于实现工业化。与抗菌药和抗炎药分别给药或多次注射相比，本发明的复方注射液还具有成本低、剂量小、使用方便、动物应激反应小、治疗效率高等优点。

具体实施方式

[0016] 为了使本发明的目的、技术方案和有益效果更加清楚，下面对本发明的优选实施例进行详细的描述。

[0017] 制备例1

[0018] 复方硫酸庆大-小诺霉素注射液，每100mL由以下组分组成：

[0019] 硫酸庆大-小诺霉素       1.0g

[0020] 半胱氨酸盐酸盐          0.08g

[0021] 焦亚硫酸钠              0.10g

[0022] EDTA-2Na                0.05g

[0023] 盐酸或氢氧化钠          调节体系pH值至5.0 6.0~

[0024] 注射用水                余量

[0025] 制备方法：将焦亚硫酸钠0.10g和EDTA-2Na 0.05g溶解于适量注射用水中，搅拌混匀得溶液A；向溶液A中加入硫酸庆大-小诺霉素1.0g和半胱氨酸盐酸盐0.08g，搅拌使溶解，用盐酸或氢氧化钠调节pH值至5.0 6.0，再用注射用水定容至100mL，过滤，滤液充氮气分~装，蒸汽灭菌15 30分钟，得复方硫酸庆大-小诺霉素注射液1。
~

[0026] 制备例2

[0027] 复方硫酸庆大-小诺霉素，每100mL由以下组分组成：

[0028] 硫酸庆大-小诺霉素       2.0g

[0029] 半胱氨酸盐酸盐          0.18g

[0030] 焦亚硫酸钠              0.10g

[0031] EDTA-2Na                0.05g

[0032] 盐酸或氢氧化钠          调节体系pH值至5.0 6.0~

[0033] 注射用水                余量

[0034] 制备方法：将焦亚硫酸钠0.10g和EDTA-2Na 0.05g溶解于适量注射用水中，搅拌混匀得溶液A；向溶液A中加入硫酸庆大-小诺霉素2.0g和半胱氨酸盐酸盐0.18g，搅拌使溶解，用盐酸或氢氧化钠调节pH值至5.0 6.0，再用注射用水定容至100mL，过滤，滤液充氮气分~装，蒸汽灭菌15 30分钟，得复方硫酸庆大-小诺霉素注射液2。
~

[0035] 制备例3

[0036] 复方硫酸庆大-小诺霉素注射液，每100mL由以下组分组成：

[0037] 硫酸庆大-小诺霉素       1.5g

[0038] 半胱氨酸盐酸盐          0.13g

[0039] 甲醛合次硫酸钠          0.10g

[0040] EDTA-2Na                0.03g

[0041] 盐酸或氢氧化钠          调节体系pH值至4.0 5.0~

[0042] 注射用水                余量

[0043] 制备方法：将甲醛合次硫酸钠0.10g和EDTA-2Na 0.03g溶解于适量注射用水中，搅拌混匀得溶液A；向溶液A中加入硫酸庆大-小诺霉素1.5g和半胱氨酸盐酸盐0.13g，搅拌使溶解，用盐酸或氢氧化钠调节pH值至4.0 5.0，再用注射用水定容至100mL，过滤，滤液充氮~气分装，蒸汽灭菌15 30分钟，得复方硫酸庆大-小诺霉素注射液3。
~

[0044] 制备例4

[0045] 复方硫酸庆大-小诺霉素注射液，每100mL由以下组分组成：

[0046] 硫酸庆大-小诺霉素       2.0g

[0047] 半胱氨酸盐酸盐          0.08g

[0048] 焦亚硫酸钠              0.10g

[0049] EDTA-2Na                0.05g

[0050] 盐酸或氢氧化钠          调节体系pH值至5.0 6.0~

[0051] 注射用水                余量

[0052] 制备方法：将焦亚硫酸钠0.10g和EDTA-2Na 0.05g溶解于适量注射用水中，搅拌混匀得溶液A；向溶液A中加入硫酸庆大-小诺霉素2.0g和半胱氨酸盐酸盐0.08g，搅拌使溶解，用盐酸或氢氧化钠调节pH值至5.0 6.0，再用注射用水定容至100mL，过滤，滤液充氮气分~装，蒸汽灭菌15 30分钟，得复方硫酸庆大-小诺霉素注射液4。
~

[0053] 制备例5

[0054] 复方硫酸庆大-小诺霉素注射液，每100mL由以下组分组成：

[0055] 硫酸庆大-小诺霉素        0.5g

[0056] 半胱氨酸盐酸盐           0.04g

[0057] 焦亚硫酸钠               0.10g

[0058] EDTA-2Na                 0.05g

[0059] 盐酸或氢氧化钠           调节体系pH值至5.0 6.0~

[0060] 注射用水                 余量

[0061] 制备方法：将焦亚硫酸钠0.10g和EDTA-2Na 0.05g溶解于适量注射用水中，搅拌混匀得溶液A；向溶液A中加入硫酸庆大-小诺霉素0.5g和半胱氨酸盐酸盐0.04g，搅拌使溶解，用盐酸或氢氧化钠调节pH值至5.0 6.0，再用注射用水定容至100mL，过滤，滤液充氮气分~装，蒸汽灭菌15 30分钟，得复方硫酸庆大-小诺霉素注射液5。
~

[0062] 制备例6

[0063] 复方硫酸庆大-小诺霉素注射液，每100mL由以下组分组成：

[0064] 硫酸庆大-小诺霉素       2.2g

[0065] 半胱氨酸盐酸盐          0.18g

[0066] 亚硫酸氢钠              0.15g

[0067] EDTA-2Na                0.05g

[0068] 盐酸或氢氧化钠          调节体系pH值至4.5 5.5~

[0069] 注射用水                余量

[0070] 制备方法：将亚硫酸氢钠0.15g和EDTA-2Na 0.05g溶解于适量注射用水中，搅拌混匀得溶液A；向溶液A中加入硫酸庆大-小诺霉素2.2g和半胱氨酸盐酸盐0.18g，搅拌使溶解，用盐酸或氢氧化钠调节pH值至4.5 5.5，再用注射用水定容至100mL，过滤，滤液充氮气分~装，蒸汽灭菌15 30分钟，得复方硫酸庆大-小诺霉素注射液6。
~

[0071] 制备例7

[0072] 复方硫酸庆大-小诺霉素注射液，每100mL由以下组分组成：

[0073] 硫酸庆大-小诺霉素        1.5g

[0074] 半胱氨酸盐酸盐           0.15g

[0075] 亚硫酸氢钠               0.08g

[0076] EDTA-2Na                 0.04g

[0077] 盐酸或氢氧化钠           调节体系pH值至5.5 6.5~

[0078] 注射用水                 余量

[0079] 制备方法：将亚硫酸氢钠0.08g和EDTA-2Na 0.04g溶解于适量注射用水中，搅拌混匀得溶液A；向溶液A中加入硫酸庆大-小诺霉素1.5g和半胱氨酸盐酸盐0.15g，搅拌使溶解，用盐酸或氢氧化钠调节pH值至5.5 6.5，再用注射用水定容至100mL，过滤，滤液充氮气分~装，蒸汽灭菌15 30分钟，得复方硫酸庆大-小诺霉素注射液7。
~

[0080] 对比制备例（单方硫酸庆大-小诺霉素注射液，不加入抗氧剂与金属离子螯合剂）[0081] 单方硫酸庆大-小诺霉素注射液，每100mL由以下组分组成：

[0082] 硫酸庆大-小诺霉素          1g

[0083] 盐酸或氢氧化钠             调节体系pH值至5.0 6.0~

[0084] 注射用水                   余量

[0085] 制备方法：将硫酸庆大-小诺霉素1.0g溶解于适量注射用水中，搅拌使溶解，用盐酸或氢氧化钠调节pH值至5.0 6.0，再用注射用水定容至100mL，过滤，滤液充氮气分装，蒸~汽灭菌15 30分钟，得单方硫酸庆大-小诺霉素注射液。
~

[0086] 试验例1：稳定性试验

[0087] 将制备例1至7制得的复方硫酸庆大-小诺霉素注射液1至7及对比制备例制得的单方硫酸庆大-小诺霉素注射液分别进行稳定性试验。试验方法：（1）将样品于40±2℃条件下放置考察6个月，若不稳定，下调温度至30±2℃条件下放置考察6个月；（2）将样品于20-25℃条件下放置考察12个月；（3）将样品于4±2℃低温条件下放置考察12个月；考察指标：色泽外观、含量（HPLC法检测，参见《兽药国家标准（化学药品、中药卷）第一册》）。结果见表1。

[0088] 表1 复方硫酸庆大-小诺霉素注射液稳定性试验结果

[0089]

[0090]

[0091] 从表1可以看出，单方硫酸庆大-小诺霉素注射液在40±2℃条件下放置5天即有结晶析出，温度降至30±2℃考察，放置第10天也有结晶析出，说明不加入抗氧剂和金属离子螯合剂的单方硫酸庆大-小诺霉素注射液对热极不稳定；同时，单方硫酸庆大-小诺霉素注射液在20-25℃室温条件下放置12个月有结晶析出；在4±2℃低温条件下放置12个月也有结晶析出，说明不加入抗氧剂和金属离子螯合剂的单方硫酸庆大-小诺霉素注射液稳定性差。而在上述相同规定条件的考察期内，复方硫酸庆大-小诺霉素注射液1至7的色泽外观均未发生明显变化，含量检测数据变化均在2%以内，说明加入抗氧剂和金属离子螯合剂的复方硫酸庆大-小诺霉素注射液稳定性良好。

[0092] 试验例2：高温试验

[0093] 将制备例1和4制得的复方硫酸庆大-小诺霉素注射液1和4分别进行高温试验。试验条件：将样品于60℃条件下放置考察10天；考查指标：色泽、澄明度、pH值、含量。结果见表2。

[0094] 表2 复方硫酸庆大-小诺霉素注射液高温试验结果

[0095]

[0096] 从表2可以看出，在60℃条件下考察10天，复方硫酸庆大-小诺霉素注射液1和4的各项考查指标均符合规定，硫酸庆大-小诺霉素的含量在第10天虽然较0天略有下降，但差异无显著性。

[0097] 试验例3：加速试验

[0098] 将制备例1和4制得的复方硫酸庆大-小诺霉素注射液1和4分别进行加速试验。试验条件：将样品于37±2℃、相对湿度55±5%条件下放置考察6个月；考查指标：色泽、澄明度、pH值、含量。结果见表3。

[0099] 表3 复方硫酸庆大-小诺霉素注射液加速试验结果

[0100]

[0101] 从表3可以看出，加速试验6个月，复方硫酸庆大-小诺霉素注射液1和4的各项考查指标均无明显变化，说明本发明制备的复方硫酸庆大-小诺霉素注射液稳定性良好。

[0102] 试验例4：体外抑菌试验

[0103] 分别取硫酸庆大-小诺霉素1g与半胱氨酸盐酸盐0.08g的混合物（A组）、硫酸庆大-小诺霉素1g（B组）、半胱氨酸盐酸盐0.08g（C组）、制备例1制备的复方硫酸庆大-小诺霉素注射液1（D组）、对比制备例制备的单方硫酸庆大-小诺霉素注射液（1g/100mL，E组）与自制的单方半胱氨酸盐酸盐注射液（0.08g/100mL，F组），同时对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌、猪链球菌进行体外抑菌试验，考察半胱氨酸盐酸盐对硫酸庆大-小诺霉素抗菌作用的影响。试验操作按CLSI（Clinical and Laboratory Standards Institute）微量肉汤稀释5
法进行。采用96孔灭菌聚苯乙烯板。细菌悬液浓度为5×10 CFU/mL。倍比稀释药物浓度范围：硫酸庆大-小诺霉素为0.02-3000μg/mL，半胱氨酸盐酸盐为0.005-500μg/mL。结果判断以小孔内完全抑制细菌生长的最低药物浓度为最小抑菌浓度（MIC）。

[0104] 结果：B、E组单独的硫酸庆大-小诺霉素或其注射液对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌、猪链球菌的MIC值分别为1.20、0.80、0.60、0.49μg/mL。A组硫酸庆大-小诺霉素与半胱氨酸盐酸盐的混合物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、沙门氏菌、猪链球菌的MIC值分别为1.13、0.10、0.65、0.38μg/mL，对大肠杆菌的抑菌效果更优。D组与A组结果基本相同。C、F组单独的半胱氨酸盐酸盐或其注射液对上述四种菌的MIC值不低于800μg/mL。表明硫酸庆大-小诺霉素与半胱氨酸盐酸盐组合用药的抑菌效果明显优于硫酸庆大-小诺霉素单独用药。

[0105] 试验例5：抗炎试验

[0106] 将体重30±2g的健康小鼠60只随机分为6组，每组10只，雌雄各半。6组分别为：复方注射液高剂量组（制备例2制备的复方硫酸庆大-小诺霉素注射液2）、复方注射液中剂量组（制备例1制备的复方硫酸庆大-小诺霉素注射液1）、复方注射液低剂量组（制备例5制备的复方硫酸庆大-小诺霉素注射液5）、单方硫酸庆大-小诺霉素注射液组（1g/100mL）、单方半胱氨酸盐酸盐注射液组（0.08g/100mL）和对照组（生理盐水）。每只小鼠腹腔注射0.5mL，每日1次，连续给药5天。末次给药12小时后，将致炎剂二甲苯0.1mL均匀涂布于小鼠右耳致炎，左耳为对照，不作任何处理。致炎1小时后，将小鼠颈椎脱臼处死，沿耳廓线剪下双耳，用9mm 直径打孔器分别在同一部位打下圆耳片，电子天平称重。左右耳片重量差值计为肿胀度，按下述公式计算肿胀抑制率：肿胀抑制率=(给药组肿胀度－对照组肿胀度)/对照组肿胀度，用肿胀抑制率表示药品的抗炎强度。

[0107] 结果见表4，由硫酸庆大-小诺霉素与半胱氨酸盐酸盐组成的复方注射液的抗炎效果明显优于单方硫酸庆大-小诺霉素注射液或单方半胱氨酸盐酸盐注射液。

[0108] 表4 复方硫酸庆大-小诺霉素注射液抗炎试验结果

[0109]

[0110] 试验例6：临床治疗试验

[0111] 在养猪场选取自然感染伴发热诊断为猪流感伴呼吸道感染的病例，其症状为体温39.8 40.9℃，咳嗽、气喘、不食、无精神。将其随机分为7组：复方注射液高剂量组（制备例2~
制备的复方硫酸庆大-小诺霉素注射液2）、复方注射液中剂量组（制备例1制备的复方硫酸庆大-小诺霉素注射液1）、复方注射液低剂量组（制备例5制备的复方硫酸庆大-小诺霉素注射液5）、单方硫酸庆大-小诺霉素注射液组（1g/100mL）、单方半胱胺酸盐酸盐注射液组（0.08g/100mL）、阴性对照组（发病不给药）和健康对照组（不发病不给药）。除2个对照组外，其余5组每头猪肌内注射0.1 0.2mL/kg（体重），每日2次，连续给药3天。疗效判定指标：治愈~
标准为用药3天后试验猪体温恢复正常，咳嗽、喘、哆嗦等病症消失，食欲、精神状态恢复正常，一周内不发热，无病症反复；有效标准为用药3天后试验猪体温下降，咳嗽、喘、哆嗦等病症减轻，食欲、精神状态好转或恢复正常；无效标准为用药后无明显好转甚至出现死亡，或一周内病症反复，即体温又出现升高，发病或病症加重等现象。

[0112] 结果见表5，以3天之内治愈数和未治愈数为指标，复方注射液中剂量组与同剂量给药的单方硫酸庆大-小诺霉素注射液组和单方半胱氨酸盐酸盐注射液组比较均差异显著（P<0.05）。以在规定治疗期有效数和无效数为指标，复方注射液中剂量组与单方硫酸庆大-小诺霉素注射液组和单方半胱氨酸盐酸盐注射液组比较均差异极显著（P<0.01）。表明由硫酸庆大-小诺霉素与半胱氨酸盐酸盐组成的复方注射液临床治疗能明显提高治愈率和有效率，具有缩短疗程，增强疗效，防止反复和继发感染的作用，其治疗效果优于单方硫酸庆大-小诺霉素注射液或单方半胱氨酸盐酸盐注射液。两药组合在抗菌的同时辅以抗炎，起到显著的增效作用。

[0113] 表5 复方硫酸庆大-小诺霉素注射液临床治疗试验结果

[0114]

[0115] 最后说明的是，以上优选实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过上述优选实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本领域技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。