一种高纯度熊果酸的制备方法

摘要

本发明公开了一种高纯度熊果酸的制备方法，包括如下步骤：步骤一、将低含量熊果酸提取物加水搅拌，经过滤除去水溶性杂质，得到粗提取物；步骤二、向粗提取物中加入乙醇除杂，经过滤干燥得到除杂提取物；步骤三、向除杂提取物中加入乙酸乙酯与石油醚的混合溶剂搅拌脱脂，并经过滤干燥得到脱脂提取物；步骤四、向脱脂提取物中加入碱性热乙醇溶解后进行脱色处理，经过滤得到脱色提取液；步骤五、调节脱色提取液的pH至7～8，静置析晶得到析晶熊果酸；步骤六、向析晶熊果酸中加入碱性热乙醇溶解，并调节pH至7，静置析晶即得高纯度熊果酸。该制备方法工艺简单安全、成本低，利于大规模生产。

权利要求

1.一种高纯度熊果酸的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、将低含量熊果酸提取物加水搅拌，经过滤除去水溶性杂质，得到粗提取物；

步骤二、向粗提取物中加入乙醇除杂，经过滤干燥得到除杂提取物；

步骤三、向除杂提取物中加入乙酸乙酯与石油醚的混合溶剂搅拌脱脂，再加入果胶—淀粉复合酶液搅拌离心去除油脂层，并经过滤干燥得到脱脂提取物；

步骤四、向脱脂提取物中加入碱性热乙醇溶解后进行脱色处理，经过滤得到脱色提取液；

步骤五、调节脱色提取液的pH至7～8，静置析晶得到析晶熊果酸；

步骤六、向析晶熊果酸中加入碱性热乙醇溶解，并调节pH至7，静置析晶即得高纯度熊果酸；

所述步骤一中的低含量熊果酸提取物为熊果酸含量在20～25％之间的熊果酸提取物；

所述步骤一中的加水量为低含量熊果酸提取物用量的10～15倍，除杂温度为20～30℃，除杂时间1～2h；

所述步骤二中的乙醇浓度为60～70％，其用量为粗提取物的10～15倍，除杂温度为20～30℃，除杂时间为1～2h；

所述步骤三中果胶—淀粉复合酶液的加酶量为混合溶剂用量的1000～3000u/g；

所述步骤四中碱性热乙醇的浓度为80～85％，pH为12～13，其用量为脱脂提取物的10～15倍；

所述步骤四中脱色处理过程为：脱脂提取物中加入碱性热乙醇溶解后，加入废白土进行预脱色，得到预脱色提取物，再向预脱色提取物中加入凹凸棒土和硅藻土进行复脱色处理，经过滤得到脱色提取液。

2.如权利要求1所述的高纯度熊果酸的制备方法，其特征在于，预脱色工艺参数如下：废白土的加入量为1.0～2.0％，预脱色时间为1.5～2h，预脱色温度为75～80℃。

3.如权利要求2所述的高纯度熊果酸的制备方法，其特征在于，复脱色工艺参数如下：凹凸棒土的加入量为2.0～3.0％，硅藻土的加入量为0.1～0.2％，复脱色时间为2～3h，复脱色温度为80～90℃。

4.如权利要求1所述的高纯度熊果酸的制备方法，其特征在于，所述步骤五中向脱色提取液中加入浓度为2～2.5mol/L的盐酸调节pH至7～8，静置析晶温度为20～30℃，析晶时间为12～18h。

说明书

一种高纯度熊果酸的制备方法

技术领域

[0001] 本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种高纯度熊果酸的制备方法。

背景技术

[0002] 熊果酸(ursolic acid,UA)是一种弱极性的五环三萜类化合物，分子式为C30H48O3，分子量为456.68，结构复杂。由于其具有多样的药理功能，因而受到国内外广泛关注，市场需求量很大；熊果酸在植物界分布广泛，但其含量较低，目前国内外尚未实现人工合成，因而深入研究熊果酸的提取纯化工艺，对开发熊果酸的系列产品具有重要意义。

发明内容

[0003] 针对上述技术中存在的不足之处，本发明提供了一种工艺简单安全的高纯度熊果酸的制备方法。

[0004] 本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种高纯度熊果酸的制备方法，包括如下步骤：步骤一、将低含量熊果酸提取物加水搅拌，经过滤除去水溶性杂质，得到粗提取物；步骤二、向粗提取物中加入乙醇除杂，经过滤干燥得到除杂提取物；步骤三、向除杂提取物中加入乙酸乙酯与石油醚的混合溶剂搅拌脱脂，再加入果胶—淀粉复合酶液搅拌离心去除油脂层，并经过滤干燥得到脱脂提取物；步骤四、向脱脂提取物中加入碱性热乙醇溶解后进行脱色处理，经过滤得到脱色提取液；步骤五、调节脱色提取液的pH至7～8，静置析晶得到析晶熊果酸；步骤六、向析晶熊果酸中加入碱性热乙醇溶解，并调节pH至7，静置析晶即得高纯度熊果酸。

[0005] 优选的，所述步骤一中的低含量熊果酸提取物为熊果酸含量在20～25％之间的熊果酸提取物。

[0006] 优选的，所述步骤一中的加水量为低含量熊果酸提取物用量的10～15倍，除杂温度为20～30℃，除杂时间1～2h。

[0007] 优选的，所述步骤二中的乙醇浓度为60～70％，其用量为粗提取物的10～15倍，除杂温度为20～30℃，除杂时间为1～2h。

[0008] 优选的，所述步骤三中果胶—淀粉复合酶液的加酶量为混合溶剂用量的1000～3000u/g。

[0009] 优选的，所述步骤四中碱性热乙醇的浓度为80～85％，pH为12～13，其用量为脱脂提取物的10～15倍。

[0010] 优选的，所述步骤四中脱色处理过程为：脱脂提取物中加入碱性热乙醇溶解后，加入废白土进行预脱色，得到预脱色提取物，再向预脱色提取物中加入凹凸棒土和硅藻土进行复脱色处理，经过滤得到脱色提取液。

[0011] 优选的，预脱色工艺参数如下：废白土的加入量为1.0～2.0％，预脱色时间为1.5～2h，预脱色温度为75～80℃。

[0012] 优选的，复脱色工艺参数如下：凹凸棒土的加入量为2.0～3.0％，硅藻土的加入量为0.1～0.2％，复脱色时间为2～3h，复脱色温度为80～90℃。

[0013] 优选的，所述步骤五中向脱色提取液中加入浓度为2～2.5mol/L的盐酸调节pH至7～8，静置析晶温度为20～30℃，析晶时间为12～18h。

[0014] 本发明与现有技术相比，其有益效果是：本发明提供的高纯度熊果酸的制备方法，通过将脱脂提取物先后经预脱色和复脱色处理，并在析晶前调节提取液至适宜的pH，克服了转移率低的缺陷，提高了纯化效率；熊果酸总转移率可达到85％以上，纯度高达98％以上；该制备方法工艺简单安全、成本低，利于大规模生产。

具体实施方式

[0015] 本发明提供了一种高纯度熊果酸的制备方法，包括如下步骤：

[0016] 步骤一、将熊果酸含量在20～25％之间的低含量熊果酸提取物加水搅拌，经过滤除去水溶性杂质，加水量为低含量熊果酸提取物用量的10～15倍，除杂温度为20～30℃，除杂时间1～2h，得到粗提取物；

[0017] 步骤二、向粗提取物中加入乙醇除杂，乙醇浓度为60～70％，其用量为粗提取物的10～15倍，除杂温度为20～30℃，除杂时间为1～2h，经过滤干燥得到除杂提取物；

[0018] 步骤三、向除杂提取物中加入乙酸乙酯与石油醚的混合溶剂(1：1，V/V)搅拌脱脂，再加入果胶—淀粉复合酶液搅拌离心去除油脂层，所述果胶—淀粉复合酶液的加酶量为混合溶剂用量的1000～3000u/g，并经过滤干燥得到脱脂提取物；

[0019] 步骤四、向脱脂提取物中加入碱性热乙醇溶解后，加入废白土进行预脱色，得到预脱色提取物，再向预脱色提取物中加入凹凸棒土和硅藻土进行复脱色处理，经过滤得到脱色提取液；

[0020] 其中，碱性热乙醇的浓度为80～85％，pH为12～13，其用量为脱脂提取物的10～15倍；预脱色工艺参数如下：废白土的加入量为1.0～2.0％，预脱色时间为1.5～2h，预脱色温度为75～80℃；复脱色工艺参数如下：凹凸棒土的加入量为2.0～3.0％，硅藻土的加入量为0.1～0.2％，复脱色时间为2～3h，复脱色温度为80～90℃；

[0021] 步骤五、向脱色提取液中加入浓度为2～2.5mol/L的盐酸调节pH至7～8，静置析晶得到析晶熊果酸，静置析晶温度为20～30℃，析晶时间为12～18h；

[0022] 步骤六、向析晶熊果酸中加入碱性热乙醇溶解，并调节pH至7，静置析晶即得高纯度熊果酸。

[0023] 不同析晶pH的收率情况，如下表所示:

[0024]

[0025] 实施例1：

[0026] 将熊果酸含量25％的低含量熊果酸提取物加水搅拌，经过滤除去水溶性杂质，加水量为低含量熊果酸提取物用量的15倍，除杂温度为25℃，除杂时间2h，得到粗提取物；向粗提取物中加入乙醇除杂，乙醇浓度为70％，其用量为粗提取物的15倍，除杂温度为25℃，除杂时间为2h，经过滤干燥得到除杂提取物；向除杂提取物中加入乙酸乙酯与石油醚的混合溶剂搅拌脱脂，再加入果胶—淀粉复合酶液搅拌离心去除油脂层，所述果胶—淀粉复合酶液的加酶量为混合溶剂用量的1000u/g，并经过滤干燥得到脱脂提取物；向脱脂提取物中加入碱性热乙醇溶解后，加入废白土进行预脱色，得到预脱色提取物，再向预脱色提取物中加入凹凸棒土和硅藻土进行复脱色处理，经过滤得到脱色提取液；其中，碱性热乙醇的浓度为85％，pH为13，其用量为脱脂提取物的15倍；预脱色工艺参数如下：废白土的加入量为2.0％，预脱色时间为1.5h，预脱色温度为75℃；复脱色工艺参数如下：凹凸棒土的加入量为
3.0％，硅藻土的加入量为0.15％，复脱色时间为2h，复脱色温度为80℃；向脱色提取液中加入浓度为2.5mol/L的盐酸调节pH至8，静置析晶得到熊果酸含量为65％的析晶熊果酸，静置析晶温度为25℃，析晶时间为18h；向析晶熊果酸中加入碱性热乙醇溶解，并调节pH至7，静置析晶即得高纯度熊果酸，熊果酸含量为98.2％。

[0027] 实施例2：

[0028] 将熊果酸含量23％的低含量熊果酸提取物加水搅拌，经过滤除去水溶性杂质，加水量为低含量熊果酸提取物用量的10倍，除杂温度为30℃，除杂时间1.5h，得到粗提取物；向粗提取物中加入乙醇除杂，乙醇浓度为65％，其用量为粗提取物的12倍，除杂温度为30℃，除杂时间为1.5h，经过滤干燥得到除杂提取物；向除杂提取物中加入乙酸乙酯与石油醚的混合溶剂搅拌脱脂，再加入果胶—淀粉复合酶液搅拌离心去除油脂层，所述果胶—淀粉复合酶液的加酶量为混合溶剂用量的3000u/g，并经过滤干燥得到脱脂提取物；向脱脂提取物中加入碱性热乙醇溶解后，加入废白土进行预脱色，得到预脱色提取物，再向预脱色提取物中加入凹凸棒土和硅藻土进行复脱色处理，经过滤得到脱色提取液；其中，碱性热乙醇的浓度为82％，pH为12.5，其用量为脱脂提取物的10倍；预脱色工艺参数如下：废白土的加入量为1.0％，预脱色时间为2h，预脱色温度为80℃；复脱色工艺参数如下：凹凸棒土的加入量为2.5％，硅藻土的加入量为0.1％，复脱色时间为3h，复脱色温度为85℃；向脱色提取液中加入浓度为2.3mol/L的盐酸调节pH至7.5，静置析晶得到熊果酸含量为63.5％的析晶熊果酸，静置析晶温度为30℃，析晶时间为15h；向析晶熊果酸中加入碱性热乙醇溶解，并调节pH至7，静置析晶即得高纯度熊果酸，熊果酸含量为98.1％。

[0029] 实施例3：

[0030] 将熊果酸含量20％的低含量熊果酸提取物加水搅拌，经过滤除去水溶性杂质，加水量为低含量熊果酸提取物用量的12倍，除杂温度为20℃，除杂时间1h，得到粗提取物；向粗提取物中加入乙醇除杂，乙醇浓度为60％，其用量为粗提取物的10倍，除杂温度为20℃，除杂时间为1.5h，经过滤干燥得到除杂提取物；向除杂提取物中加入乙酸乙酯与石油醚的混合溶剂搅拌脱脂，再加入果胶—淀粉复合酶液搅拌离心去除油脂层，所述果胶—淀粉复合酶液的加酶量为混合溶剂用量的2000u/g，并经过滤干燥得到脱脂提取物；向脱脂提取物中加入碱性热乙醇溶解后，加入废白土进行预脱色，得到预脱色提取物，再向预脱色提取物中加入凹凸棒土和硅藻土进行复脱色处理，经过滤得到脱色提取液；其中，碱性热乙醇的浓度为80％，pH为12，其用量为脱脂提取物的12倍；预脱色工艺参数如下：废白土的加入量为1.5％，预脱色时间为1.8h，预脱色温度为75℃；复脱色工艺参数如下：凹凸棒土的加入量为
2.0％，硅藻土的加入量为0.2％，复脱色时间为2.5h，复脱色温度为90℃；向脱色提取液中加入浓度为2mol/L的盐酸调节pH至7，静置析晶得到熊果酸含量为62.6％的析晶熊果酸，静置析晶温度为20℃，析晶时间为12h；向析晶熊果酸中加入碱性热乙醇溶解，并调节pH至7，静置析晶即得高纯度熊果酸，熊果酸含量为99.2％。