一种2‑氨基丁醇手性纯度的HPLC分析方法

摘要

本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种2‑氨基丁醇手性纯度的HPLC分析方法。本发明采用(R)‑α‑甲基‑2‑萘乙酰氯为衍生化试剂与2‑氨基丁醇进行快速双衍生化反应，生成有紫外吸收的衍生物后，然后使用高效液相色谱与紫外联用对其进行定性、定量以及手性纯度的测定。该方法衍生反应条件快速、温和，检测灵敏度高、重复性好，可有效地用于检测2‑氨基丁醇手性纯度，易于标准化操作，因此具有实际应用价值与现实意义。

权利要求

1.一种2-氨基丁醇手性纯度的HPLC分析方法，其特征在于，具体包含如下步骤：步骤一、衍生化

将2-氨基丁醇溶于有机溶剂中，在一定的温度条件下，以(R)-α-甲基-2-萘乙酰氯为衍生化试剂，控制2-氨基丁醇和(R)-α-甲基-2-萘乙酰氯的摩尔比，进行双衍生化反应，得 到衍生化后的2-氨基丁醇，反应式见式I；

式I步骤二、分离检测

采用反相高效液相色谱-紫外检测器对衍生化后的2-氨基丁醇进行定性、定量和对映体过量率测定；

所述的一定温度是指从0℃到回流温度；

所述的反相高效液相色谱使用的色谱柱是普通反相柱；

所述的反相高效液相色谱的流动相由酸的水溶液和有机溶剂组成，有机溶剂选自甲醇、乙醇、异 丙醇和乙腈中的一种或两种；有机溶剂占流动相的体积比例范围为30% 90%。

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2.根据权利要求1所述的一种2-氨基丁醇手性纯度的HPLC分析方法，其特征在于，所述步骤一中的有机溶剂选自二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、甲苯、二甲苯、石油醚、四氢呋喃、氯仿和四氯化碳中的一种或两种以上的组合。

3.根据权利要求1所述的一种2-氨基丁醇手性纯度的HPLC分析方法，其特征在于，所述 的有机溶剂与2-氨基丁醇的体积比为0.5 300:1。

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4.根据权利要求1所述的一种2-氨基丁醇手性纯度的HPLC分析方法，其特征在于，所述 的有机溶剂与2-氨基丁醇的体积比为2 20:1。

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5.根据权利要求1所述的一种2-氨基丁醇手性纯度的HPLC分析方法，其特征在于，所述的一定温度为20 35℃。

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6.根据权利要求1所述的一种2-氨基丁醇手性纯度的HPLC分析方法，其特征在于，所述的2-氨基丁醇和(R)-α-甲基-2-萘乙酰氯的摩尔比为1:4 20。

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7.根据权利要求1所述的一种2-氨基丁醇手性纯度的HPLC分析方法，其特征在于，所述的紫外检测器的检测波长为200 300nm。

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8.根据权利要求1所述的一种2-氨基丁醇手性纯度的HPLC分析方法，其特征在于，所述的紫外检测器的检测波长为230 260nm。

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9.根据权利要求1所述的一种2-氨基丁醇手性纯度的HPLC分析方法，其特征在于，所述步骤二中有机溶剂占流动相的体积比例范围为60% 80%。

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10.根据权利要求1所述的一种2-氨基丁醇手性纯度的HPLC分析方法，其特征在于，所述的流动相的酸选自有机酸或无机酸。

11.根据权利要求1所述的一种2-氨基丁醇手性纯度的HPLC分析方法，其特征在于，所述的流动相的酸为无机酸，包括醋酸、硫酸、硝酸、和盐酸。

12.根据权利要求1所述的一种2-氨基丁醇手性纯度的HPLC分析方法，其特征在于，所述的流动相的酸为盐酸。

13.根据权利要求1所述的一种2-氨基丁醇手性纯度的HPLC分析方法，其特征在于，所述的反相高效液相色谱的流动相酸的水溶液的pH值为2.0 6.0。

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14.根据权利要求1所述的一种2-氨基丁醇手性纯度的HPLC分析方法，其特征在于，所述的反相高效液相色谱的流动相酸的水溶液的pH值为3.0 5.0。

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说明书

一种2-氨基丁醇手性纯度的HPLC分析方法

技术领域

[0001] 本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种2-氨基丁醇手性纯度的HPLC分析方法。

背景技术

[0002] (R)-2-氨基丁醇是合成右兰索拉唑的重要中间体。美国FDA于2009年1月30日批准日本武田制药公司研发的食管炎治疗新药右兰索拉唑(通用名为Dexlansoprazole)上市。该药是质子泵抑制剂兰索拉唑的对映体，又被称为右旋兰索拉唑，用于治疗与非糜烂性胃食管反流病相关的胃灼热及不同程度的糜烂性食道炎，临床表明该药物毒副作用较低且患者耐受性好。

[0003] 右兰索拉唑有一个手性中心，该手性中心是由(R)-2-氨基丁醇引入的，如果(R)-2-氨基丁醇的光学纯度较低，则会存在另一个异构体，这样就会降低右兰索拉唑的手性纯度，所以(R)-2-氨基丁醇的光学纯度直接影响着右兰索拉唑的光学纯度也就影响着右兰索拉唑治疗食道炎的疗效。尽管这种新药上市时间不是很长，但由于其高效的治疗食管炎作用以及低毒性引发了对这种新药的大量需求，从而导致对右兰索拉唑手性源(R)-2-氨基丁醇的大量需求。因此制备高标准、高光学纯度的(R)-2-氨基丁醇，对于合成新药右兰索拉唑具有重要的现实意义。

[0004] 冯桂春等（CN101024617 A）, 叶菲等（CN101863779 A）,臧力等（广州化工）通过测定比旋光度值进行手性纯度的分析。通过比旋光度值来测定手性纯度，对于高纯度(R)-2-氨基丁醇的测定误差较大。与带紫外吸收的手性试剂进行快速双衍生化，可以得到既有紫外吸收又形成三个手性基团的衍生物，既能在紫外检测器下检测，又能直接通过反相高效液相进行异构体的分离检测。

[0005] 2-氨基丁醇分子结构中含一个伯胺和一个羟基，没有紫外吸收的官能团，导致建立方便、快捷、可靠的光学纯度分析方法难度非常的大。HPLC检测法具有分离效率高，选择性好，检测灵敏度高，操作自动化，应用范围广等优点，是目前分析化学中常用的分析方法。但由于2-氨基丁醇及其手性异构体几乎没有紫外吸收，使用常规的紫外检测存在末端吸收干扰等问题，所以通常采用衍生化方法使之紫外吸收增强从而提高检测灵敏度。

发明内容

[0006] 本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种2-氨基丁醇手性纯度的HPLC分析方法，可以快捷准确的实现定性、定量和对映体过量率分析。

[0007] 为了实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：

[0008] 一种2-氨基丁醇手性纯度的HPLC分析方法，具体包含如下步骤：

[0009] 步骤一、衍生化

[0010] 将2-氨基丁醇溶于有机溶剂中，在一定的温度条件下，以 (R)-α-甲基-2-萘乙酰氯为衍生化试剂，控制2-氨基丁醇和 (R)-α-甲基-2-萘乙酰氯的摩尔比，进行衍生化反应，得到衍生化化后的2-氨基丁醇，反应式见式I；

[0011]

[0012] 式I

[0013] 步骤二、分离检测

[0014] 采用反相高效液相色谱-紫外检测器对衍生化后的2-氨基丁醇进行定性、定量和对映体过量率测定。

[0015] 所述的有机溶剂选自二氯甲烷、1,2-二氯乙烷、甲苯、二甲苯、石油醚、四氢呋喃、氯仿和四氯化碳中的一种或两种以上的组合。

[0016] 所述的有机溶剂与2-氨基丁醇的体积比为0.5 300:1，优选的为2 20:1。~ ~

[0017] 所述的一定温度是指从0℃到回流温度，优选为20 35℃。~

[0018] 本发明的回流温度具体数值与有机溶剂的选择有关，本领域技术人员可以根据溶剂的选择清楚的确定回流温度的范围。

[0019] 所述的2-氨基丁醇和(R)-α-甲基-2-萘乙酰氯的摩尔比为1:4 20。~

[0020] 所述的紫外检测器的检测波长为200 300 nm，优选230 260nm。~ ~

[0021] 所述的反相高效液相色谱使用的色谱柱是普通反相柱。优选的，色谱柱为反相C18柱，最优选的为迪马反相C18柱（250×4.6mm，5μm，pH范围2.0 8.0）。~

[0022] 所述的反相高效液相色谱的流动相由酸的水溶液和有机溶剂组成，有机溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇和乙腈中的一种或两种；有机溶剂占流动相的体积比例范围为30%～90%，优选范围为60% 80%。
~

[0023] 所述的流动相的酸可以为有机酸或无机酸，优选为无机酸，如醋酸、硫酸、硝酸、盐酸，更优选为盐酸，最优选为0.2 1mol/L的盐酸溶液。~

[0024] 所述的缓冲盐水溶液的pH值为2.0 6.0，优选pH值为3.0 5.0。~ ~

[0025] 所述的流动相流速在0.1 3.0mL/min，最佳流速为1.0mL/min。~

[0026] 本发明中，反相高效液相色谱分析条件优选为：迪马C18色谱柱，流动相为80%甲醇-20%盐酸溶液，所述盐酸溶液的摩尔浓度为0.2mol/L，pH值为4.5。紫外检测波长为254nm，流速为1.0mL/min，柱温为30℃，进样体积20μL。

[0027] 与现有技术相比，本发明所取得的有益效果如下：

[0028] 本发明给出了2-氨基丁醇的衍生化方法，通过控制反应条件，快速生成 (R)-α-甲基-2-萘乙酰氯和2-氨基丁醇的衍生物，并建立了对 (R)-α-甲基-2-萘乙酰氯衍生化后的2-氨基丁醇的定性、定量和对映异构体测定的高效液相色谱分析方法。该方法操作简单、重现性好、灵敏度高、准确性强，便于标准化操作。通过对 (R)-α-甲基-2-萘乙酰氯衍生化后的2-氨基丁醇进行定性、定量和手性纯度分析，从而实现对2-氨基丁醇的定性、定量和手性纯度分析。

附图说明

[0029] 图1： (R)-α-甲基-2-萘乙酰氯与(RS)-2-氨基丁醇衍生化后色谱图；

[0030] 在附图中：1为 (R)-α-甲基-2-萘乙酰氯与(R)-2-氨基丁醇的衍生物；2为( (R)-α-甲基-2-萘乙酰氯-和(S)-2-氨基丁醇的衍生物。

具体实施方式

[0031] 以下结合具体实施例对本发明进行进一步详细的叙述。

[0032] 实施例1： (R)-α-甲基-2-萘乙酰氯与(RS)-2-氨基丁醇的衍生物的液相色谱分析[0033] 取(RS)-2-氨基丁醇3.09g(0.03mol)，溶于50mL二氯甲烷中，30℃下搅拌，缓慢加入 (R)-α-甲基-2-萘乙酰氯19.67g (0.09mol)。TLC监测反应，反应结束后蒸干得 (R)-α-甲基-2-萘乙酰氯与(RS)-2-氨基丁醇衍生物。

[0034] 将 (R)-α-甲基-2-萘乙酰氯与(RS)-2-氨基丁醇衍生物用流动相溶解后采用高效液相色谱进行检测分析。液相色谱条件：迪马C18色谱柱，流动相为80%甲醇-20%盐酸溶液，所述盐酸溶液的摩尔浓度为0.2mol/L，pH值为4.5。紫外检测波长为254nm，流速为1.0mL/min，柱温为30℃，进样体积20μL，保留时间和手性纯度分析见表1，其图谱见图1。

[0035] 表1 (R)-α-甲基-2-萘乙酰氯衍生化后的2-氨基丁醇保留时间和手性e.e.%值[0036]

[0037] 实施例2：2-氨基丁醇和 (R)-α-甲基-2-萘乙酰氯的衍生化条件考察试验[0038] 2-1：取(RS)-2-氨基丁醇3.09g(0.03mol)，溶于30mL 1,2-二氯乙烷中，60℃下搅拌，缓慢加入 (R)-α-甲基-2-萘乙酰氯218.6g(0.1mol)。TLC监测反应，反应结束后蒸干得 (R)-α-甲基-2-萘乙酰氯与(RS)-2-氨基丁醇衍生物。

[0039] 将 (R)-α-甲基-2-萘乙酰氯与(RS)-2-氨基丁醇衍生物用流动相溶解后采用高效液相色谱进行检测分析。液相色谱条件：迪马C18色谱柱，流动相为80%甲醇-20%盐酸溶液，所述盐酸溶液的摩尔浓度为0.2mol/L，pH值为4.5。紫外检测波长为254nm，流速为1.0mL/min，柱温为30℃，进样体积20μL，保留时间和手性e.e.%值同实施例1。

[0040] ： (R)-α-甲基-2-萘乙酰氯与(RS)-2-氨基丁醇衍生物的液相色谱分析[0041] 取(RS)-2-氨基丁醇3.09g(0.03mol)，溶于40mL氯仿中，在40℃下搅拌，缓慢加入 (R)-α-甲基-2-萘乙酰氯26.23g(0.12mol)。TLC监测反应，反应结束后蒸干得 (R)-α-甲基-2-萘乙酰氯与(RS)-2-氨基丁醇衍生物。

[0042] 将 (R)-α-甲基-2-萘乙酰氯与(RS)-2-氨基丁醇衍生物用流动相溶解后采用高效液相色谱进行检测分析。液相色谱条件：迪马C18色谱柱，流动相为80%甲醇-20%盐酸溶液，所述盐酸溶液的摩尔浓度为0.2mol/L，pH值为4.5。紫外检测波长为254nm，流速为1.0mL/min，柱温为30℃，进样体积20μL，保留时间和手性e.e.%值同实施例1。

[0043] ：称取(RS)-2-氨基丁醇3.09g(0.03mol)，溶于40mL四氯化碳中，在30℃下搅拌，缓慢滴加 (R)-α-甲基-2-萘乙酰氯32.79g (0.15mol)。TLC监测反应，反应结束后蒸干得 (R)-α-甲基-2-萘乙酰氯与(RS)-2-氨基丁醇衍生物。

[0044] 将 (R)-α-甲基-2-萘乙酰氯与(RS)-2-氨基丁醇衍生物用流动相溶解后采用高效液相色谱进行检测分析。液相色谱条件：迪马C18色谱柱，流动相为80%甲醇-20%盐酸溶液，所述盐酸溶液的摩尔浓度为0.2mol/L，pH值为4.5。紫外检测波长为254nm，流速为1.0mL/min，柱温为30℃，进样体积20μL，保留时间和手性e.e.%值同实施例1。

[0045] ：称取(RS)-2-氨基丁醇3.09g(0.03mol)，溶于50mL石油醚中，0℃下搅拌，缓慢加入 (R)-α-甲基-2-萘乙酰氯65.58g(0.3mol)。TLC监测反应，反应结束后蒸干得 (R)-α-甲基-2-萘乙酰氯与(RS)-2-氨基丁醇衍生物。

[0046] 将 (R)-α-甲基-2-萘乙酰氯与(RS)-2-氨基丁醇衍生物用流动相溶解后采用高效液相色谱进行检测分析。液相色谱条件：迪马C18色谱柱，流动相为80%甲醇-20%盐酸溶液，所述盐酸溶液的摩尔浓度为0.2mol/L，pH值为4.5。紫外检测波长为254nm，流速为1.0mL/min，柱温为30℃，进样体积20μL，保留时间和手性e.e.%值同实施例1。

[0047] ：称取(RS)-2-氨基丁醇3.09 g (0.03mol)，溶于80mL四氢呋喃中，在0℃下搅拌，缓慢滴加 (R)-α-甲基-2-萘乙酰氯24.05g (0.11mol)。TLC监测反应，反应结束后蒸干得 (R)-α-甲基-2-萘乙酰氯与(RS)-2-氨基丁醇衍生物。

[0048] 将 (R)-α-甲基-2-萘乙酰氯与(RS)-2-氨基丁醇衍生物用流动相溶解后采用高效液相色谱进行检测分析。液相色谱条件：迪马C18色谱柱，流动相为80%甲醇-20%盐酸溶液，所述盐酸溶液的摩尔浓度为0.2mol/L，pH值为4.5。紫外检测波长为254nm，流速为1.0mL/min，柱温为30℃，进样体积20μL，保留时间和手性e.e.%值同实施例1。

[0049] ：取(RS)-2-氨基丁醇3.09g(0.03mol)，溶于80mL（石油醚:四氢呋喃1:2）中，38℃下搅拌，缓慢加入 (R)-α-甲基-2-萘乙酰氯13.12g(0.06mol)。TLC监测反应，反应结束后蒸干得 (R)-α-甲基-2-萘乙酰氯与(RS)-2-氨基丁醇衍生物。

[0050] 将 (R)-α-甲基-2-萘乙酰氯与(RS)-2-氨基丁醇衍生物用流动相溶解后采用高效液相色谱进行检测分析。液相色谱条件：迪马C18色谱柱，流动相为80%甲醇-20%盐酸溶液，所述盐酸溶液的摩尔浓度为0.2mol/L，pH值为4.5。紫外检测波长为254nm，流速为1.0mL/min，柱温为30℃，进样体积20μL，保留时间和手性e.e.%值同实施例1。

[0051] 实施例3：色谱条件考察试验

[0052] （1）衍生化

[0053] 取(RS)-2-氨基丁醇3.09g(0.03mol)，溶于50mL二氯甲烷中，30℃下搅拌，缓慢加入 (R)-α-甲基-2-萘乙酰氯19.67g(0.09mol)。TLC监测反应，反应结束后蒸干得 (R)-α-甲基-2-萘乙酰氯与(RS)-2-氨基丁醇衍生物。

[0054] （2）对 (R)-α-甲基-2-萘乙酰氯与(RS)-2-氨基丁醇衍生物采用以下不同色谱条件进行分离检测

[0055] A．将 (R)-α-甲基-2-萘乙酰氯与(RS)-2-氨基丁醇衍生物用流动相溶解后采用高效液相色谱进行检测分析。液相色谱条件：迪马C18色谱柱，流动相为40%乙腈-60%盐酸溶液，所述的盐酸溶液的浓度为0.3mol/L，pH值为3.5。紫外检测波长为254nm，流速为1.0mL/min，柱温为30℃，进样体积20μL，手性e.e.%值同实施例1。

[0056] B．将 (R)-α-甲基-2-萘乙酰氯与(RS)-2-氨基丁醇用流动相溶解后采用高效液相色谱进行检测分析。液相色谱条件：迪马C18色谱柱，流动相为80%异丙醇-20%盐酸溶液所述的盐酸溶液的浓度为0.3mol/L，pH值为3.0。紫外检测波长为254nm，流速为1.0 mL/min，柱温为25℃，进样体积20μL，手性e.e. %值同实施例1。

[0057] C．将 (R)-α-甲基-2-萘乙酰氯与(RS)-2-氨基丁醇衍生物用流动相溶解后采用高效液相色谱进行检测分析。液相色谱条件：迪马C18色谱柱，流动相为80%乙醇-20%盐酸溶液，所述的盐酸溶液的浓度为0.3mol/L，pH值为4.5。紫外检测波长为254nm，流速为1.0mL/min，柱温为25℃，进样体积20μL，手性e.e.%值同实施例1。

[0058] D. 将 (R)-α-甲基-2-萘乙酰氯与(RS)-2-氨基丁醇衍生物用流动相溶解后采用高效液相色谱进行检测分析。液相色谱条件：迪马C18色谱柱，流动相为30%甲醇-70%盐酸溶液水溶液，所述的盐酸溶液的浓度为0.1mol/L，pH值为5.0。紫外检测波长为254nm，流速为1.0mL/min，柱温为30℃，进样体积20μL，手性e.e.%值同实施例1。

[0059] E. 将 (R)-α-甲基-2-萘乙酰氯与(RS)-2-氨基丁醇衍生物用流动相溶解后采用高效液相色谱进行检测分析。液相色谱条件：迪马C18色谱柱，流动相为60%乙醇-40%盐酸溶液，所述的盐酸溶液的浓度为0.1mol/L，pH值为6.0。紫外检测波长为254nm，流速为1.0mL/min，柱温为30℃，进样体积20μL，手性e.e.%值同实施例1。

[0060] 以上所述实施方式仅为本发明的优选实施例，而并非本发明可行实施的穷举。对于本领域一般技术人员而言，在不背离本发明原理和精神的前提下对其所作出的任何显而易见的改动，都应当被认为包含在本发明的权利要求保护范围之内。