一种2‑氨基丁醇对映异构体的HPLC分离检测方法

摘要

本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种2‑氨基丁醇对映异构体的HPLC分离检测方法。该方法以(R)‑(+)‑1‑苯基乙磺酰氯为衍生化试剂与2‑氨基丁醇进行快速双衍生化反应，生成具有紫外吸收的衍生化产物，然后通过高效液相色谱与紫外联用对其衍生物进行定性、定量及其手性纯度的测定。本发明的衍生化反应过程简单、安全，高效液相色谱的检测限较高、重复性好、易于标准化操作。该方法很好的解决了2‑氨基丁醇没有紫外吸收的问题，能够有效实现的2‑氨基丁醇及其对映异构体分离和测定。

权利要求

1.一种2-氨基丁醇对映异构体的HPLC分离检测方法，其特征在于，具体包含如下步骤：步骤一、衍生化

将2-氨基丁醇溶于有机溶剂中，在一定的温度条件下，以(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯为衍生化试剂，控制2-氨基丁醇和(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯的摩尔比，进行双衍生化反应，得到衍生化后的2-氨基丁醇，反应式见式I；

式I步骤二、分离检测

采用反相高效液相色谱-紫外检测器对衍生化后的2-氨基丁醇进行定性、定量和对映体过量率测定；

所述的反相高效液相色谱使用的色谱柱是普通反相柱，所述的反相高效液相色谱的流动相由缓冲盐的水溶液和有机溶剂组成，有机溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇和乙腈中的一种或两种；有机溶剂占流动相的体积比例范围为50% 100%；

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所述的流动相中缓冲盐为碳酸氢钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、柠檬酸钾或醋酸钠，所述缓冲盐的水溶液的pH为2.0 6.0；

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所述的一定温度是指从0℃到回流温度。

2.根据权利要求1所述的一种2-氨基丁醇对映异构体的HPLC分离检测方法，其特征在于，所述的有机溶剂选自四氢呋喃、四氯化碳、二氯甲烷、1,2-二氯乙烷和石油醚中的一种或两种以上的组合。

3.根据权利要求1所述的一种2-氨基丁醇对映异构体的HPLC分离检测方法，其特征在于，所述的有机溶剂与2-氨基丁醇的体积比为1 300:1。

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4.根据权利要求1所述的一种2-氨基丁醇对映异构体的HPLC分离检测方法，其特征在于，所述的有机溶剂与2-氨基丁醇的体积比为为5 30:1。

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5.根据权利要求1所述的一种2-氨基丁醇对映异构体的HPLC分离检测方法，其特征在于，所述的一定温度为20 35℃。

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6.根据权利要求1所述的一种2-氨基丁醇对映异构体的HPLC分离检测方法，其特征在于，所述的2-氨基丁醇和(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯的摩尔比为1:2 20。

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7.根据权利要求1所述的一种2-氨基丁醇对映异构体的HPLC分离检测方法，其特征在于，所述的紫外检测器的检测波长为210 300nm。

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8.根据权利要求1所述的一种2-氨基丁醇对映异构体的HPLC分离检测方法，其特征在于，所述的紫外检测器的检测波长为230 270nm。

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9.根据权利要求1所述的一种2-氨基丁醇对映异构体的HPLC分离检测方法，其特征在于，所述缓冲盐的水溶液的pH为3.2 5.6。

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说明书

一种2-氨基丁醇对映异构体的HPLC分离检测方法

技术领域

[0001] 本发明属于药物分析技术领域，具体涉及一种2-氨基丁醇对映异构体的HPLC分离检测方法。

背景技术

[0002] 右兰索拉唑，化学名为：(R)-2-[[3-甲基-4-(2,2,2-三氟乙氧基)吡啶-2-基]甲基亚磺酰基]-1H-苯并咪唑，分子式：C16H14F3N3O2S，其化学结构如下式所示：

[0003]

[0004] 右兰索拉唑为质子泵抑制剂，该药是兰索拉唑的对映体，又被称为右旋兰索拉唑，用于非糜烂性胃食管反流病引起的胃灼热，糜烂性食管炎治疗和治愈后糜烂性食管炎的维持治疗。由日本武田制药公司研发，于2009年1月30日获得美国FDA批准上市。2010年在加拿大上市。具有不受饮食影响、每日服药一次且昼夜均可保持较高的抑酸水平、药物相互作用少、用药方便且病人依从性良好等优点，使得该药物在药品市场销售快速增长，目前在中国药品市场也算是重磅级品种。

[0005] 从右兰索拉唑的结构式中可以看出右兰索拉唑有一个手性中心，该手性中心是由(R)-2-氨基丁醇引入的，如果(R)-2-氨基丁醇的光学纯度较低，则会存在另一个异构体，这样就会生成兰索拉唑，而兰索拉唑的药效及毒副作用均没有右兰索拉唑好，所以(R)-2-氨基丁醇的光学纯度直接影响着右兰索拉唑的光学纯度也就影响着右兰索拉唑治疗食管炎的疗效。虽然该药品上市时间较短，但由于其用药方便且病人依从性良好等优点引发了对这种新药的大量需求，从而导致对右兰索拉唑手性源(R)-2-氨基丁醇的大量需求。因此制备高标准、高光学纯度的(R)-2-氨基丁醇，对于合成新药右兰索拉唑具有重要的意义。

[0006] 冯桂春等（CN101024617 A）, 叶菲等（CN101863779 A）,臧力等（广州化工）通过测定比旋光度值进行手性纯度的分析。通过比旋光度值来测定手性纯度，误差较大。

[0007] 2-氨基丁醇没有具有紫外吸收的官能团，所以不能直接用高效液相色谱与紫外联用来检测其含量以及对映异构体的分离，如何准确控制其手性纯度一直困扰业内人员的一大难题。

[0008] 通过与带紫外吸收的手性试剂进行快速双衍生化，得到既有紫外吸收又形成三个手性基团的衍生物，既能在紫外检测器下检测，又能直接通过反相高效液相进行异构体的分离检测。

发明内容

[0009] 本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种2-氨基丁醇对映异构体的分离检测方法，可以快捷准确的实现定性、定量和对映体过量率分析。

[0010] 为了实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：

[0011] 一种2-氨基丁醇对映异构体的分离检测方法，具体包含如下步骤：

[0012] 步骤一、衍生化

[0013] 将2-氨基丁醇溶于有机溶剂中，在一定的温度条件下，以(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯为衍生化试剂，控制2-氨基丁醇和(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯的摩尔比，进行双衍生化反应，得到衍生化化后的2-氨基丁醇，反应式见式I：

[0014]

[0015] 式I

[0016] 步骤二、分离检测

[0017] 采用反相高效液相色谱-紫外检测器对衍生化后的2-氨基丁醇进行定性、定量和对映体过量率测定。

[0018] 所述的有机溶剂选自四氢呋喃、四氯化碳、二氯甲烷、1,2-二氯乙烷和石油醚中的一种或两种以上的组合。

[0019] 所述的有机溶剂与2-氨基丁醇的体积比为1 300:1，优选的为5 30:1。~ ~

[0020] 所述的一定温度是指从0℃到回流温度，优选为20 35℃。~

[0021] 本发明的回流温度具体数值与有机溶剂的选择有关，本领域技术人员可以根据溶剂的选择清楚的确定回流温度的范围。

[0022] 所述的2-氨基丁醇和(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯的摩尔比为1:2 20。~

[0023] 所述的紫外检测器的检测波长为210 300nm，优选230 270nm。~ ~

[0024] 所述的反相高效液相色谱使用的色谱柱是普通反相柱。优选色谱柱为反相C18柱，最优选的为迪马反相C18柱（250×4.6mm，5μm，pH范围2.0 8.0）。~

[0025] 所述的反相高效液相色谱的流动相由缓冲盐的水液和有机溶剂组成，有机溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇和乙腈中的一种或两种；有机溶剂占流动相的体积比例范围为50%~100%。

[0026] 所述的流动相中缓冲盐为碳酸氢钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、柠檬酸钾和醋酸钠，优选为50mmol/L醋酸钠和30mmol/L三乙胺水溶液。

[0027] 所述的流动相的流速为0.2 3.0ml/min，优选流速为1.0mL/min。~

[0028] 本发明中，反相高效液相色谱分析条件优选为：紫外检测波长为254nm，柱温为30℃，流动相70%甲醇-30%（50mmol/L醋酸钠）水溶液，pH值为3.5，流速为1.0mL/min，进样体积为20μL。

[0029] 与现有技术相比，本发明所取得的有益效果如下：

[0030] 本发明采用衍生化的方法，使2-氨基丁醇和过量的衍生化试剂(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯反应生成2-氨基丁醇的衍生物，通过高效液相色谱-紫外检测器联用，C18色谱柱能够有效的分离测定2-氨基丁醇及其对映异构体。本发明解决了2-氨基丁醇没有紫外吸收且使用手性色谱柱较昂贵的问题，从而保证了用高效、高灵敏度的高效液相色谱方法使得 2-氨基丁醇及其对映异构体的分离。

附图说明

[0031] 图1：(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯与(RS)-2-氨基丁醇衍生化后色谱图；

[0032] 在附图中：1为(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯与(R)-2-氨基丁醇的衍生物；2为(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯和(S)-2-氨基丁醇的衍生物。

具体实施方式

[0033] 以下结合附图对本发明进行进一步详细的叙述。

[0034] 实施例1：(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯与2-氨基丁醇衍生物的液相色谱分析[0035] 1-1：(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯与(RS)-2-氨基丁醇衍生物的液相色谱分析[0036] 称取(RS)-2-氨基丁醇5.15g(0.05mol)，溶于60mL四氯化碳中，在40℃下磁力搅拌，缓慢滴加(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯40.93g(0.20mol)。TLC监测反应，反应结束后用减压真空泵蒸干溶剂得(RS)-2-氨基丁醇和(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯的衍生物。

[0037] 将(RS)-2-氨基丁醇和(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯的衍生物用流动相溶解后采用高效液相色谱进行检测分析。液相色谱条件：迪马C18色谱柱，流动相为甲醇-50mmol/L醋酸钠水溶液（体积比为70:30），pH值为3.5，紫外检测波长为254nm，流速为1.0mL/min，柱温为30℃，进样体积20μL，测得手性e.e.%值为0.22。保留时间和峰面积分析见表1，其图谱见图1。

[0038] 表1

[0039]

[0040] 1-2：(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯与(S)-2-氨基丁醇衍生物的液相色谱分析[0041] (R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯与(S)-2-氨基丁醇衍生物的液相色谱分析[0042] 称取(S)-2-氨基丁醇5.15g(0.05mol)，溶于60mL四氯化碳中，在40℃下磁力搅拌，缓慢滴加(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯40.93g(0.20mol)。TLC监测反应，反应结束后用减压真空泵蒸干溶剂得(S)-2-氨基丁醇和(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯的衍生物。

[0043] 将(S)-2-氨基丁醇和(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯的衍生物用流动相溶解后采用高效液相色谱进行检测分析。液相色谱条件：迪马C18色谱柱，流动相为甲醇-50mmol/L醋酸钠水溶液（体积比为70:30），pH值为3.5，紫外检测波长为254nm，流速为1.0mL/min，柱温为30℃，进样体积20μL，测得手性e.e.%值为99.7。

[0044] 1-3：(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯与(R)-2-氨基丁醇的衍生物的液相色谱分析[0045] 称取(R)-2-氨基丁醇5.15g(0.05mol)，溶于60mL四氯化碳中，在40℃下磁力搅拌，缓慢滴加(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯40.93g(0.20mol)。TLC监测反应，反应结束后用减压真空泵蒸干溶剂得(R)-2-氨基丁醇和(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯的衍生物。

[0046] 将(R)-2-氨基丁醇和(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯的衍生物用流动相溶解后采用高效液相色谱进行检测分析。液相色谱条件：迪马C18色谱柱，流动相为甲醇-50mmol/L醋酸钠水溶液（体积比为70:30），pH值为3.5，紫外检测波长为254nm，流速为1.0mL/min，柱温为30℃，进样体积20μL，测得手性e.e.%值为99.6。

[0047] 实施例2：(RS)-2-氨基丁醇和(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯的衍生化条件考察试验[0048] 2-1：取(RS)-2-氨基丁醇5.15g(0.05mol)，溶于50mL乙酸乙酯中，在30℃下磁力搅拌，缓慢加入(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯30.70g(0.15mol)。TLC监测反应，反应结束后用减压真空泵蒸干溶剂得(R)-2-氨基丁醇和(RS)-(+)-1-苯基乙磺酰氯的衍生物。

[0049] 将(RS)-2-氨基丁醇和(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯的衍生物用流动相溶解后采用高效液相色谱进行检测分析。液相色谱条件：迪马C18色谱柱，流动相为甲醇-50mmol/L醋酸钠水溶液（体积比为70:30），pH值为3.5，紫外检测波长为254nm，流速为1.0mL/min，柱温为30℃，进样体积20μL，色谱图同实施例1-1。

[0050] ：取(RS)-2-氨基丁醇5.15g(0.05mol)，溶于60mL二氯甲烷中，在30℃下磁力搅拌，缓慢加入(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯20.47g(0.1mol)。TLC监测反应，反应结束后用减压真空泵蒸干溶剂得(RS)-2-氨基丁醇和(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯的衍生物。

[0051] 将(RS)-2-氨基丁醇和(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯的衍生物用流动相溶解后采用高效液相色谱进行检测分析。液相色谱条件：迪马C18色谱柱，流动相为甲醇-50mmol/L醋酸钠水溶液（体积比为70:30），pH值为3.5，紫外检测波长为254nm，流速为1.0mL/min，柱温为30℃，进样体积20μL，色谱图同实施例1-1。

[0052] ：取(RS)-2-氨基丁醇5.15g(0.05mol)，溶于200mL石油醚中，35℃下磁力搅拌，缓慢加入(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯102.34g(0.5mol)。TLC监测反应，反应结束后用减压真空泵蒸干溶剂得(RS)-2-氨基丁醇和(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯的衍生物。

[0053] 将(RS)-2-氨基丁醇和(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯的衍生物用流动相溶解后采用高效液相色谱进行检测分析。液相色谱条件：迪马C18色谱柱，流动相为甲醇-50mmol/L醋酸钠水溶液（体积比为70:30），pH值为3.5，紫外检测波长为254nm，流速为1.0mL/min，柱温为30℃，进样体积20μL，色谱图同实施例1-1。

[0054] ：取(RS)-2-氨基丁醇2-氨基丁醇5.15g(0.05mol)，溶于300mL（二氯甲烷:乙酸乙酯1:2）中，20℃下磁力搅拌，缓慢加入(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯122.85g(0.6mol)。TLC监测反应，反应结束后用减压真空泵蒸干溶剂蒸干得(RS)-2-氨基丁醇和(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯的衍生物。

[0055] 将(RS)-2-氨基丁醇和(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯的衍生物用流动相溶解后采用高效液相色谱进行检测分析。液相色谱条件：迪马C18色谱柱，流动相为甲醇-50mmol/L醋酸钠水溶液（体积比为70:30），pH值为3.5，紫外检测波长为254nm，流速为1.0mL/min，柱温为30℃，进样体积20μL，色谱图同实施例1-1。

[0056] ：称取(RS)-2-氨基丁醇5.15g(0.05mol)，溶于300mL（石油醚:乙酸乙酯3:2）中，20℃下磁力搅拌，缓慢加入(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯143.27g(0.7mol)。TLC监测反应，反应结束后用减压真空泵蒸干溶剂得(RS)-2-氨基丁醇和(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯的衍生物。

[0057] 将(RS)-2-氨基丁醇和(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯的衍生物用流动相溶解后采用高效液相色谱进行检测分析。液相色谱条件：迪马C18色谱柱，流动相为甲醇-50mmol/L醋酸钠水溶液（体积比为70:30），pH值为3.5，紫外检测波长为254nm，流速为1.0mL/min，柱温为30℃，进样体积20μL，色谱图同实施例1-1。

[0058] ：称取(RS)-2-氨基丁醇5.15g(0.05mol)，溶于200mL四氢呋喃中，在60℃下磁力搅拌，缓慢滴加(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯163.74g (0.8mol)。TLC监测反应，反应结束后用减压真空泵蒸干溶剂得(RS)-2-氨基丁醇和(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯的衍生物。

[0059] 将(RS)-2-氨基丁醇和(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯的衍生物用流动相溶解后采用高效液相色谱进行检测分析。液相色谱条件：迪马C18色谱柱，流动相为甲醇-50mmol/L醋酸钠水溶液（体积比为70:30），pH值为3.5，紫外检测波长为254nm，流速为1.0mL/min，柱温为30℃，进样体积20μL，保色谱图同实施例1-1。

[0060] ：取(RS)-2-氨基丁醇5.15g(0.05mol)，溶于150mL1,2-二氯乙烷中，40℃下磁力搅拌，缓慢加入(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯61.40g(0.3mol)。TLC监测反应，反应结束后用减压真空泵蒸干溶剂得(RS)-2-氨基丁醇和(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯的衍生物。

[0061] 将(RS)-2-氨基丁醇和(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯的衍生物用流动相溶解后采用高效液相色谱进行检测分析。液相色谱条件：迪马C18色谱柱，流动相为甲醇-50mmol/L醋酸钠水溶液（体积比为70:30），pH值为3.5，紫外检测波长为254nm，流速为1.0mL/min，柱温为30℃，进样体积20μL，色谱图同实施例1-1。

[0062] 实施例3：色谱条件考察试验

[0063] （1）衍生化

[0064] 称取(RS)-2-氨基丁醇5.15g(0.05mol)，溶于60mL四氯化碳中，在40℃下磁力搅拌，缓慢滴加(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯40.93g(0.20mol)。TLC监测反应，反应结束后用减压真空泵蒸干溶剂得(RS)-2-氨基丁醇和(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯的衍生物。

[0065] （2）对(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯与(RS)-2-氨基丁醇衍生物采用以下不同色谱条件进行分离检测

[0066] A．将(RS)-2-氨基丁醇和(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯的衍生物用流动相溶解后采用高效液相色谱进行检测分析。液相色谱条件：迪马C18色谱柱，流动相为甲醇-30mmol/L三乙胺水溶液（体积比为60:40），pH值为3.5，紫外检测波长为254nm，流速为1.0mL/min，柱温为30℃，进样体积20μL，手性e.e.%值同实施例1-1。

[0067] B．将(RS)-2-氨基丁醇和(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯的衍生物用流动相溶解后采用高效液相色谱进行检测分析。液相色谱条件：迪马C18色谱柱，流动相为乙腈-50mmol/L醋酸钠水溶液（体积比为70:30），pH值为3.5，紫外检测波长为254nm，流速为1.0mL/min，柱温为30℃，进样体积20μL，手性e.e.%值同实施例1-1。

[0068] C．将(RS)-2-氨基丁醇和(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯的衍生物用流动相溶解后采用高效液相色谱进行检测分析。液相色谱条件：迪马C18色谱柱，流动相乙醇- 20mmol/L三乙胺水溶液（体积比为80:20），pH值为4.0，紫外检测波长为254nm，流速为1.0mL/min，柱温为30℃，进样体积20μL，手性e.e.%值同实施例1-1。

[0069] D．将(RS)-2-氨基丁醇和(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯的衍生物用流动相溶解后采用高效液相色谱进行检测分析。液相色谱条件：迪马C18色谱柱，流动相为异丙醇-50mmol/L醋酸钠（体积比为70:30），pH值为3.5，紫外检测波长为254nm，流速为1.0mL/min，柱温为28℃，进样体积20μL，手性e.e.%值同实施例1-1。

[0070] E．将(RS)-2-氨基丁醇和(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯的衍生物用流动相溶解后采用高效液相色谱进行检测分析。液相色谱条件：迪马C18色谱柱，流动相为甲醇-50mmol/L醋酸钠（体积比为85:15），pH值为4.5，紫外检测波长为254nm，流速为1.0mL/min，柱温为30℃，进样体积20μL，手性e.e.%值同实施例1-1。

[0071] F．将(RS)-2-氨基丁醇和(R)-(+)-1-苯基乙磺酰氯的衍生物用流动相溶解后采用高效液相色谱进行检测分析。液相色谱条件：迪马C18色谱柱，流动相为乙腈-50mmol/L醋酸钠水溶液（体积比90:10），pH值为5.0，紫外检测波长为254nm，流速为1.0mL/min，柱温为27℃，进样体积20μL，手性e.e.%值同实施例1-1。

[0072] 以上所述实施方式仅为本发明的优选实施例，而并非本发明可行实施的穷举。对于本领域一般技术人员而言，在不背离本发明原理和精神的前提下对其所作出的任何显而易见的改动，都应当被认为包含在本发明的权利要求保护范围之内。