一种治疗阿尔茨海默症的玫瑰组合物及其应用

摘要

本发明属于中药技术领域，具体涉及一种治疗阿尔茨海默症的玫瑰组合物及其应用。本发明所述玫瑰组合物含有黄芪，山药，党参，知母，葛根，麦冬，当归，玫瑰花。该玫瑰组合物对秀丽隐杆线虫阿尔茨海默症病理模型具有显著的治疗作用，可在制备治疗阿尔茨海默症的药物中应用，亦可在制备预防和辅助治疗阿尔茨海默症的相关保健品中应用。

权利要求

1.一种玫瑰组合物在制备治疗阿尔茨海默症的药物中的应用，其特征在于，所述玫瑰组合物由下述重量比的原料药组成:黄芪15份，山药20份，党参15份，知母9份，葛根10份，麦冬10份，当归12份，玫瑰花4份。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，该玫瑰组合物作为药效成分的药物制剂为胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、口服液、丸剂。

说明书

一种治疗阿尔茨海默症的玫瑰组合物及其应用

技术领域

[0001] 本发明属于中药技术领域，具体涉及一种治疗阿尔茨海默症的玫瑰组合物及其应用。

背景技术

[0002] 阿尔茨海默症(Alzheimer'sM disease,AD)，是一种以进行性认知障碍和记忆损伤为主的神经系统退行性疾病，是老年痴呆症最常见的一种形式。临床上以记忆障碍、失语、失认、视空间技能损害、执行功能障碍以及人格和行为改变等全面性痴呆表现为特征。在痴呆患者中所占比例超过75％。随着我国老龄化程度的加剧，AD会成为影响老年人健康的主要疾病之一，有效预防和治疗AD成为摆在我们面前的又一重大课题。

[0003] 淀粉样蛋白沉积(Aβ蛋白)和神经纤维缠结是AD的两大主要病理学特征。现代医学对AD的发病机制进行了多年的研究，但是由于其病因复杂，该病的发病机制至今仍不明确，“Aβ级联假说”是当前被科学界广为接受的机制之一。该学说认为患者大脑中异常沉积的Aβ通过自由基反应、线粒体氧化损伤和炎症反应等一系列级联反应，直接或者间接作用于神经元和神经胶质细胞，最终导致神经元功能异常或者死亡，引发认知损伤及记忆衰退，最终引起痴呆。在家族性阿尔茨海默病症患者中发现淀粉样前体蛋白(APP)基因和早老素基因发生突变，导致Aβ在大脑的过度表达成为该学说最为有力的证据。因此β淀粉样蛋白已成为公认的筛选抗AD药物靶标。

[0004] AD病因复杂、病程漫长、且发病环节较多，需要长期服药，目前主要的抗阿尔茨海默病药物乙酰胆碱酯酶抑制剂(如加兰他敏)和N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDA受体)拮抗剂(如美金刚)，但上述药物价格昂贵，服药后幻觉、意识混沌、头晕、头痛和疲倦等副作用显著，且只能延缓，却不能控制或逆转患者病情。

[0005] 而中药组合物具有多种活性组分、多靶点的特征，一定程度上可以克服西药的不足之处，使得从中药组合物宝库中筛选用于治疗AD的药物候选物前景广阔。

[0006] 玫瑰是一味行气活血的中药，大马氏革玫瑰氯仿提取物被证明可促进体外培养的大鼠胚神经元细胞轴突生长，并抑制Aβ(25－35)引起的神经元轴突萎缩(Awale et al.,2011)。这提示玫瑰具有抗AD作用。但当发明人在研究玫瑰水煎剂对秀丽隐杆线虫AD病理模型的治疗作用时，发现虽然玫瑰水煎剂剂量依赖地减缓秀丽隐杆线虫的AD病理特征，但是任何浓度的玫瑰对线虫卵的孵化均具有显著的抑制作用。因此，玫瑰抗AD作用的同时具有显著的毒性作用。

[0007] 秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)是一个非常有用的多功能药物筛选和药物作用机 制的研究平台。它廉价、易培养；世代周期短、后代数目多，同时可获得大量背景一致的个体，保证实验重复性和采用大样本量进行实验，从而排除个体差异的影响；与高等生物在基因和分子通路方面高度保守(Kaletta and Hengartner，2006)。它作为一个从细胞体外水平药物初筛到小鼠体内水平药物复筛的一个桥梁，越来越受到药学家的青睐。美国devGen公司利用人源化线虫筛选的抗心律不齐药物已被FDA批准进入临床研究。

[0008] 人源化秀丽隐杆线虫AD病理模型的建立是将人源Aβ1-42基因转入肌球蛋白启动子下游并受温度控制表达，该线虫株系可在15℃正常生长，当转移至25℃条件下Aβ1-42表达并在其肌肉内累积，导致线虫失去运动能力而麻痹。加入受试药物可延缓肌肉麻痹表型，其结果以肌肉麻痹线虫数量占受试线虫群体数量的百分比表示。未麻痹线虫比率越高，药物抗AD效果越显著。这一模型早已被用于抗AD疾病发生机制和抗AD药物及候选物作用机制研究(Link,1995；2001)。

[0009] 基于上述研究现状，本发明现提供一种治疗阿尔茨海默症的玫瑰组合物，所述玫瑰组合物不但具有显著的抗AD作用，并且发挥协同作用减缓玫瑰的毒性。本发明同时提供该玫瑰组合物的应用。

[0010] 参考文献

[0011] Kaletta T,Hengartner MO.Finding function in novel targets:C.elegans as a model organism.Nat Rev Drug Discov 2006,5:387e398.

[0012] Link CD.Expression of human beta-amyloid peptide in transgenic Caenorhabditis elegans.Proc Natl Acad Sci USA 1995,92:9368e9372.

[0013] Link CD.Transgenic invertebrate models  of age-associated neurodegenerative diseases.Mech Ageing Dev 2001,122:1639e1649.

[0014] Awale S，Tohda C，Tezuka T et al.Protective Effects of Rosa damascena and its active constituent on Aβ(25–35)-induced neuritic atrophy.Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine 2011,doi:10.1093/ecam/nep149.发明内容

[0015] 本发明目的是提供一种治疗阿尔茨海默症的玫瑰组合物，该玫瑰组合物具有治疗阿尔茨海默症的潜力。

[0016] 本发明另一个目的是提供上述玫瑰组合物的应用。

[0017] 本发明所述的上述目的是通过以下技术方案实现的：

[0018] 一种治疗阿尔茨海默症的玫瑰组合物，所述的玫瑰组合物含有黄芪，山药，党参，知母，葛根，麦冬，当归，玫瑰花。

[0019] 一种治疗阿尔茨海默症的玫瑰组合物，所述玫瑰组合物含有下述重量比的原料药：黄芪15份，山药20份，党参15份，知母9份，葛根10份，麦冬10份，当归12份，玫瑰花4份。

[0020] 所述玫瑰组合物可在制备治疗阿尔茨海默症的药物中应用。

[0021] 该玫瑰组合物作为药效成分的药物制剂为胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、口服液、丸剂。

[0022] 所述玫瑰组合物可在制备预防和辅助治疗阿尔茨海默症的保健品中的应用。

[0023] 该玫瑰组合物作为有效成分的保健品剂型为胶囊剂、片剂、颗粒剂、散剂、口服液、丸剂。

[0024] 本发明的有益效果：

[0025] 1、本发明以秀丽隐杆线虫AD病理模型进行实验，结果表明：该玫瑰组合物对秀丽隐杆线虫AD病理模型具有显著的治疗作用。可以显著延缓秀丽隐杆线虫AD病理模型的麻痹表型，提示该玫瑰组合物具有治疗阿尔茨海默症的潜力，可在制备治疗阿尔茨海默症的药物中应用，亦可在制备预防和辅助治疗阿尔茨海默症的保健品中应用。

[0026] 2、玫瑰单用时对秀丽隐杆线虫AD病理模型具有显著的治疗作用，但是，高浓度的玫瑰水煎液对秀丽隐杆线虫的生长甚至是线虫卵的孵化具有显著的抑制作用，从而显示出玫瑰显著的毒性。本发明提供的玫瑰组合物，通过其它药味的加入降低了玫瑰的毒性，同时可以提升玫瑰用量，从而提升玫瑰抗AD的药效。

[0027] 下面结合具体实施例进一步详细描述本发明的技术方案，但本发明的保护范围不局限于以下所述。

附图说明

[0028] 图1玫瑰对延缓AD秀丽隐杆线虫麻痹的作用

[0029] C-空白对照组，L-玫瑰花水煎液低剂量组，M-玫瑰花水煎液中剂量组，H-玫瑰花水煎液高剂量组

[0030] 图2玫瑰组合物对延缓AD秀丽隐杆线虫麻痹的作用

[0031] C-空白对照组，ZHW-玫瑰组合物组，DZ1-对照组1，DZ2-对照组2，DZ3-对照组3，DZ4-对照组4。

具体实施方式

[0032] 实施例1本发明所述玫瑰组合物的制备方法

[0033] 称取黄芪15g、山药20g、党参15g、知母9g、葛根10g、麦冬10g、当归12g、玫瑰4g，加水395ml，加热至沸腾并保持30分钟，定容至197mL，过滤除菌，备用。

[0034] 实施例2本发明所述玫瑰对AD秀丽隐杆线虫的治疗作用

[0035] 1.生物材料

[0036] (1)秀丽隐杆线虫CL4176购自Caenorhabditis Genetics Center(CGC)；为转基因品系，在25℃温度诱导下肌肉特异性表达人类Aβ1-42，Aβ1-42在肌肉组织聚集，最终导致线虫麻痹，本实施例采用秀丽线虫CL4176株系作为筛选抗AD药物的病理模型。

[0037] (2)大肠杆菌OP50(尿嘧啶渗漏突变株)，购自Caenorhabditis Genetics Center(CGC)，作为秀丽隐杆线虫的食物。

[0038] 2.试剂

[0039] (1)固体NGM(Nematode Growth Medium)培养基成分与制作(以1升为例)：

[0040]成分 含量
NaCl 3.00g
K2HPO4 2.34g
KH2PO4 17.23g
蛋白胨 2.50g
琼脂 17.00g
补充H2O至 1000mL

[0041] 固体NGM培养基配制好后，121℃下高压恒温灭菌20min，在无菌操作台下加入5mg/mL胆固醇1mL，1M MgSO41mL,1M CaCl21mL摇匀，趁热倒入已灭菌的9cm培养板，约20mL/板。静置等待培养基凝固，备用。

[0042] (2)M9液配方

[0043]成分 含量
Na2HPO4 6.00g
KH2PO4 3.00g
NaCl 5.00g
1M MgSO4 1.00mL
补充H2O至 1000mL

[0044] (3)裂解液的配制：6.4％NaClO溶液和1M NaOH溶液按体积比1:1混合。

[0045] 3.配制含有玫瑰花水煎液的NGM平板

[0046] 玫瑰花水煎液的制备：

[0047] 玫瑰花4g，加水100mL，加热煮沸并保持30分钟，定容至50mL，过滤除菌，备用，玫瑰花水煎液浓度为80mg/mL。

[0048] 配置含有玫瑰花水煎液的NGM平板：

[0049] 取适宜稀释度的玫瑰水煎液，加入NGM培养基中，倒板。

[0050] 取玫瑰花水煎液，加入NGM培养基中，使含药NGM培养皿中玫瑰花水煎液的终浓度换算为生药量后达到0.4mg/mL、0.8mg/mL和1.6mg/mL。静置等待培养基凝固。在培养基上均匀涂布大肠杆菌OP50作为线虫的食物。

[0051] 4.实施步骤

[0052] (1)线虫的培养：

[0053] 将线虫接在涂有大肠杆菌OP50的固体NGM板上，然后置于16℃的培养箱中培养，当线虫长到成虫时进行同步化处理。

[0054] (2)线虫同步化：

[0055] 挑选含有大量成虫并且有部分线虫卵已经孵出的NGM培养基，用M9液将线虫从培养基上冲下，转移到离心管中，静置使线虫自由沉降至管底，弃上清。视线虫量多少向离心管中加入裂解液，在漩祸搅拌器上振荡5-7分钟待线虫全部断裂时停止涡旋,并分装于1.5mL离心管中，用M9溶液洗线虫卵三次。

[0056] (3)实验组设置：

[0057] 空白对照组(C)：无菌水。

[0058] 玫瑰花水煎液低剂量组(L)：含药NGM培养皿中玫瑰花水煎液的终浓度为0.4mg/mL；

[0059] 玫瑰花水煎液中剂量组(M)：含药NGM培养皿中玫瑰花水煎液的终浓度为0.8mg/mL；

[0060] 玫瑰花水煎液高剂量组(H)：含药NGM培养皿中玫瑰花水煎液的终浓度为1.6mg/mL。

[0061] (4)实验步骤

[0062] 将同步化后分装于离心管中的线虫卵转移到涂布有OP50并混合不同浓度的玫瑰花水煎液的NGM培养皿中，空白对照组为涂布有OP50并加有与玫瑰花水煎液等体积的无菌水的NGM培养皿，每个培养皿60条线虫，每个药物浓度三个培养皿作为平行，16℃培养3天至L3期。其中，含药NGM培养皿中玫瑰花水煎液的终浓度为0.4mg/mL、0.8mg/mL和1.6mg/mL。

[0063] 为了使线虫表达Aβ，将L3期线虫转在25℃下进行诱导，34h后开始计数线虫麻痹条数。每两小时计数一次，直至所有线虫都麻痹(麻痹是指机械刺激线虫身体时，线虫不能运动或者只有头部运动)。结果见图1。

[0064] (5)实验结果

[0065] 图1的纵坐标表示没有麻痹的秀丽隐杆线虫占的百分比，在同一个时间点，此值越大，表明该处理组中没有麻痹的秀丽隐杆线虫比例越大，即药物延缓麻痹的作用越强。

[0066] 实验结果表明，玫瑰花水煎液剂量依赖地对秀丽隐杆线虫AD病理模型具有治疗作用。但是实验同时发现，不论何种浓度的玫瑰花水煎液对秀丽隐杆线虫虫卵的孵化都有抑制作用，其中，玫瑰花水煎液中剂量组(M)和玫瑰花水煎液高剂量组(H)的玫瑰花水煎液对秀丽隐杆线虫生长具有显著抑制作用(表1)。

[0067] 表1 玫瑰花水煎液对秀丽隐杆线虫卵孵化数及生长情况的影响

[0068]

[0069] 注：不同字母意味着差异显著，P<0.05。

[0070] 实施例3玫瑰组合物中各组分间协同作用对AD秀丽隐杆线虫的治疗作用[0071] (1)实验组设置

[0072] 空白对照组(C)：无菌水

[0073] 玫瑰组合物组(ZHW)：称取黄芪15g、山药20g、党参15g、知母9g、葛根10g、麦冬10g、当归12g、玫瑰4g加水395份，加热至沸腾并保持30分钟，定容至197mL，过滤除菌，备用。

[0074] 对照组1(DZ1)：称取黄芪15g、山药20g、党参15g，加水395份，加热至沸腾并保持30分钟，定容至197mL，过滤除菌，备用。

[0075] 对照组2(DZ2)：称取知母9g,葛根10g,麦冬10g，加水395份，加热至沸腾并保持30分钟，定容至197mL，过滤除菌，备用。

[0076] 对照组3(DZ3)：称取当归12g、玫瑰4g，加水395份，加热至沸腾并保持30分钟，定容至197mL，过滤除菌，备用。

[0077] 对照组4(DZ4)：称取黄芪15g、山药20g、党参15g、知母9g、葛根10g、麦冬10g、当归12g，加水395mL，加热至沸腾并保持30分钟，定容至197mL，过滤除菌，备用。

[0078] 含药的NGM板玫瑰组合物组(ZHW)终浓度为12.5倍稀释，对照组1(DZ1)，对照组2(DZ2)，对照组3(DZ3)和对照组4(DZ4)也是12.5倍稀释。

[0079] (2)其它实验操作步骤同实施例2。

[0080] (3)实验结果

[0081] 图2的纵坐标表示没有麻痹的秀丽隐杆线虫占的百分比，在同一个时间点，此值越大，表明该处理组中没有麻痹的秀丽隐杆线虫比例越大，即药物延缓麻痹的作用越强。

[0082] 表2 玫瑰组合物及其拆方组合物对秀丽隐杆线虫卵孵化数及生长情况的影响[0083]

[0084] 注：不同字母代表具有显著性差异P<0.05。

[0085] 表3 玫瑰与玫瑰组合物对线虫麻痹半数麻痹时间PT50的影响

[0086]

[0087] 注：不同字母意味着差异显著，P<0.05。

[0088] 实验结果表明，玫瑰组合物组(ZHW)中玫瑰对AD秀丽隐杆线虫的治疗发挥主要作用，如果仅将当归与玫瑰联用(DZ3)，其减缓AD作用效果与全方相似(图2)，但不能缓解玫瑰毒性(表2)。由于玫瑰单用在玫瑰花水煎液中剂量组(M)时已显示显著的抑制生长作用，其它药味加入形成的玫瑰组合物(ZHW)全方显示不再对生长具有抑制作用的有益效果(表2)。

[0089] 在实验中，仅有当归和玫瑰的DZ3也显示具有显著抑制生长的作用，在实验中，观察到线虫个体细小(表2)。麦冬也被报道具有抗AD作用，但在本发明中含麦冬的DZ2的抗AD作用效果显著低于玫瑰组合物ZHW。本发明ZHW全方抗AD作用效果和玫瑰的抗AD作用效果无差异，在药效上未显示协同(表3)，但是毒性显著低于相同浓度的玫瑰花水煎液(表2)。

[0090] 通过以上实施例证明，本发明提供的玫瑰组合物对秀丽隐杆线虫阿尔茨海默症病理模型 具有显著的治疗作用，可在制备治疗阿尔茨海默症的药物中应用，亦可在制备预防和辅助治疗阿尔茨海默症的相关保健品中应用。