一种卡格列净α、β异构体的分离方法

摘要

本发明公开了一种卡格列净α、β异构体的分离方法，采用高效液相色谱仪，以C18柱为色谱柱，以乙腈与水组成的混合液为流动相，控制流动相的流速为0.80～1.20mL/min；色谱柱温度为20～40℃；进样量为10μL；检测波长为210nm的条件下进行色谱分离；所述流动相按体积比计算，乙腈∶水为38～47∶53～62，先出峰的化合物为卡格列净β异构体，后出峰的化合物为卡格列净α异构体。本发明有效的实现了卡格列净α、β异构体的分离和测定，其分离度可达1.35～3.95。

权利要求

1.一种卡格列净α、β异构体的分离方法，其特征在于：称取卡格列净混旋体，采用高效液相色谱仪，色谱柱采用Phenomenex Luna 5 μm C18(2) 100A，所述的色谱柱的参数为

250*4.6 mm，在一个容器中加入乙腈和水组成的流动相，所述流动相按体积比计算，乙腈：水为43∶57，样品和流动相的质量体积比为20 mg∶10 mL，色谱分离条件为：流动相流速为1.00mL/min；

色谱柱温度为30℃；

进样量为10 μL；

检测波长为210 nm ；

先出峰的化合物为卡格列净β异构体，后出峰的化合物为卡格列净α异构体。

说明书

一种卡格列净α、β异构体的分离方法

技术领域

[0001] 本发明属于药物化学领域，涉及一种卡格列净α、β异构体，具体来说是一种卡格列净α、β异构体的分离方法。

背景技术

[0002] 卡格列净又名坎格列净(Canagliflozin,结构式如下式所示)，商品名为Invokana。化学名为(2S,3R,4R,5S,6R)-2-(3-((5-(4-氟苯基)噻吩-2-基)甲基)-4-甲基-苯基)-6-(羟甲基)四氢-2H-吡喃-3,4,5-三醇，化学分子式为C24H25FO5S。卡格列净是是由强生旗下杨森制药公司开发的一种SGLT2抑制剂药物，能将葡萄糖分解后通过肾脏排出体外的方式来降低血糖水平，临床研究显示卡格列净单独治疗II型糖尿病时具有服用安全，耐受性好、有明显的减肥效果及良好的血糖控制。

[0003]

[0004] 卡格列净异构体分为α构型和β构型，但只有β构型卡格列净具有药理活性。经合成得到卡格列净产品中可能存在α构型杂质，影响药品的品质。因此控制α构型含量对于提高抗糖尿病类药物质量，保证广大用药者的安全性具有重要的意义。

发明内容

[0005] 针对现有技术中的上述技术问题，本发明提供了一种卡格列净α、β异构体的分离方法，所述的这种卡格列净α、β异构体的分离方法解决了现有技术中的卡格列净产品中存在α构型杂质，影响药品的品质的技术问题。

[0006] 本发明提供了一种卡格列净α、β异构体的分离方法，采用高效液相色谱仪，[0007] 以C18柱为色谱柱，以乙腈和水组成的混合液为流动相，采用如下的色谱分[0008] 离条件进行分离：

[0009] 流动相流速为0.80～1.20mL/min；

[0010] 色谱柱温度为20～40℃；

[0011] 进样量为8～12μL；

[0012] 检测波长为200～254nm；

[0013] 所述流动相按体积比计算，乙腈：水为38～47：53～62。

[0014] 进一步的，上述的一种卡格列净α、β异构体的分离方法的具体步骤为：称取卡格列净样品，在一个容器中加入乙腈和水组成的流动相，所述流动相按体积比计算，乙腈∶水为43∶57，所述的样品和流动相的质量体积比为20mg∶10mL，采用高效液相色谱仪，色谱分离条件为：流动相流速为1.00mL/min；色谱柱温度为25℃；进样量为10μL；检测波长为210nm；先出峰的化合物为卡格列净β异构体，后出峰的化合物为卡格列净α异构体。

[0015] 进一步的，所述的色谱柱为Phenomenex Luna 5μ C18(2)100A柱。

[0016] 具体的，色谱柱为Phenomonex Luna 5μ C18(2)100A 250×4.6mm柱、Phenomonex Gemini 5μC18 110A 150×4.6mm柱、DIKMA Diamonsil 5μ C18(2)250×4.6mm柱、Agilent ZORBAX 300SB-C18 3.5μm 150×4.6mm柱，优选为Phenomonex Luna 5μ C18(2)100A 250×4.6mm柱。

[0017] 进一步的，所述的流动相流速为1.00mL/min。

[0018] 进一步的，色谱柱温度为30℃。

[0019] 进一步的，检测波长为210nm。

[0020] 进一步的，所述的进样量为10μL。

[0021] 进一步的，所述流动相按体积比计算，乙腈∶水＝43∶57。

[0022] 进一步的，所用的高效液相色谱仪为戴安UltiMate 3000。

[0023] 本发明由于采用了高效液相色谱法对卡格列净α、β构型进行分离，能够有效的将α、β构型在色谱图中完全分离，其分离度可达1.35～3.95，并准确的测出了其光学异构体的含量，解决了其质量控制问题，确保了最终产品卡格列净的质量，为工业化大生产带来了巨大的社会意义，具有很强的实用性。

[0024] 本发明和已有技术相比，其技术进步是显著的。本发明的方法灵敏度高，分离度良好，结果准确可靠，适用于卡格列净的光学质量控制。

附图说明

[0025] 图1为实施例1中卡格列净消旋体样品的色谱分离图，保留时间为15.038min的为β构型，保留时间为16.733min的为其对应的α构型，两者的分离度为3.62。

[0026] 图2为实施例2、3、4中卡格列净消旋体样品的色谱分离图，保留时间为14.808min的为β构型，保留时间为16.568min的为其对应的α构型，两者的分离度为3.77。

[0027] 图3为实施例5中卡格列净单构型的色谱分离图，保留时间为14.773min的为β构型。

具体实施方式

[0028] 下面通过具体实施例子并结合附图对本发明进一步阐述，但并不限制本发明。

[0029] 实施例所用到的仪器的型号及生产厂家的信息如下：

[0030] 戴安(DIONEX)UltiMate  3000,含UltiMate 3000 Pump,UltiMate  3000 Autosampler,UltiMate 3000 Column Compartment,UltiMate 3000 Photodiode Arrary detector,Chromeleon工作站，美国戴安公司；

[0031] Ultra Sonic Cleaner USK Type超声波清洗器；

[0032] 色谱柱：Luna 5μ C18(2)100A 250×4.6mm，广州费罗门科学仪器有限公司；Gemini 5μ C18(2)100A 250×4.6mm，广州费罗门科学仪器有限公司；ZORBAX 300SB-C18 
3.5μm 150×4.6mm，美国安捷伦有限公司；DIKMA Diamonsil 5μ C18(2)250×4.6mm，北京迪马科技有限公司。

[0033] 实施例1

[0034] 一种卡格列净α、β异构体的高效液相色谱分离方法，其步骤如下：取卡格列净消旋体标准样品约20mg，置于10mL的容量瓶中，加乙腈-水溶解定容至刻度，作为待测样品溶液；即采用高效液相色谱仪，以乙腈和水组成的混合液为流动相，采用如下的色谱柱和分离条件进行分离：

[0035] 色谱柱分别为Phenomonex Luna 5μ C18(2)100A 250×4.6mm柱、Phenomonex Gemini 5μC18 110A 150×4.6mm柱、DIKMA Diamonsil 5μ C18(2)250×4.6mm柱、Agilent ZORBAX 300SB-C18 3.5μm 150×4.6mm柱；

[0036] 流动相流速为1.0mL/min；

[0037] 色谱柱温度为30℃；

[0038] 进样量为10μL；

[0039] 检测波长为210nm；

[0040] 流动相乙腈∶水为43％∶57％。

[0041] 色谱分离结果如表所示:

[0042]

[0043] 表中t1为β构型的保留时间，t2为α构型保留时间。

[0044] 从上表的结果可以看出，本实施例中色谱柱的型号和生产厂家的不同对色谱峰分离度有影响。综合保留时间和分离度，选择Phenomonex Luna 5μ C18(2)100A 250×4.6mm柱为卡格列净α、β异构体高效液相色谱分离的最佳色谱柱；分离结果见图1。

[0045] 实施例2

[0046] 分离色谱柱，采用如下分离条件进行分离：

[0047] 流动相乙腈∶水为38～47％∶53～62(V∶V)

[0048] 流动相流速为1.0mL/min；

[0049] 色谱柱温度为25℃；

[0050] 进样量为10μL；

[0051] 检测波长为210nm；

[0052] 色谱分离结果如表所示:

[0053]

[0054] 从上表的结果可以看出，本实施例中研究的一系列流动相比例对色谱峰分离度有影响。随着乙腈含量的增加，虽在乙腈∶水＝41∶59有较大的分离度，但保留时间较长。综合保留时间和分离度两方面的因素，最后选择相对较好的流动相比例为乙腈∶水＝43∶57；分离结果见图2。

[0055] 实施例3

[0056] 一种卡格列净α、β异构体的高效液相色谱分离方法，其步骤如下：取卡格列净消旋体标准样品约20mg，置于10mL的容量瓶中，加乙腈-水溶解定容至刻度，作为待测样品溶液，以Phenomonex Luna 5μ C18(2)100A 250×4.6mm柱为分离色谱柱，采用如下分离条件进行分离：

[0057] 色谱柱温度为20～40℃；

[0058] 流动相流速为1.0mL/min；

[0059] 进样量为10μL；

[0060] 检测波长为210nm；

[0061] 流动相乙腈∶水为43％∶57％(V∶V)。

[0062] 色谱分离结果如表所示:

[0063]温度/℃ t1/min t2/min R
20 14.293 16.125 3.95
25 14.808 16.568 3.77
30 15.038 16.733 3.62
35 14.972 16.592 3.63

[0064] 从上表的结果可以看出，本实施例中研究的一系列温度对色谱峰分离度有影响。随着乙腈含量的增加，虽在乙腈∶水＝41∶59有较大的分离度，但是保留时间较长。综合保留时间和分离度两方面的因素，最后选择相对较好的流动相比例为乙腈∶水＝43∶57；分离结果见图2。

[0065] 实施例4

[0066] 一种卡格列净α、β异构体的高效液相色谱分离方法，其步骤如下：取卡格列净消旋体标准样品约20mg，置于10mL的容量瓶中，加乙腈-水溶解定容至刻度，作为待测样品溶液，以Phenomonex Luna 5μ C18(2)100A 250×4.6mm柱为分离色谱柱，采用如下分离条件进行分离：

[0067] 流动相流速为0.8～1.2mL/min；

[0068] 色谱柱温度为25℃；

[0069] 进样量为10μL；

[0070] 检测波长为210nm；

[0071] 流动相乙腈∶水为43％∶57％(V/V)。

[0072] 色谱分离结果如表所示:

[0073]流速mL/min t1/min t2/min R
0.8 18.125 20.302 3.80
0.9 16.187 18.133 3.62
1.0 14.808 16.568 3.77
1.1 13.297 14.892 3.51
1.2 12.180 13.633 3.46

[0074] 从上表的结果可以看出，本实施例中研究的一系列的流速对色谱峰分离度有影响。随着流速的增加而增加，在1.0mL/min的流速下而达到最大后随着流速的 增大而减小。综合保留时间和分离度两方面的因素，最后选择1.0mL/min为最佳流速；分离结果见图2。

[0075] 实施例5

[0076] 一种卡格列净α、β异构体的高效液相色谱分离方法中β构型出峰位置的标定，其步骤如下：

[0077] 取标准品β构型卡格列净约20mg，置于10mL的容量瓶中，加乙腈-水溶解定容至刻度，作为待测样品溶液；

[0078] 按照色谱条件：色谱柱：Luna，流动相：乙腈∶水(43∶57)，流速1.00mL/min，柱温：25℃，紫外检测器波长210nm，进样量10μL，进行高效液相色谱法分析；色谱图分离结果见图3所示。

[0079] 从图3中可以看出，保留时间为14.773min的为卡格列净，并与实施例1进行比较，由于实施例3与实施例1所用的液相方法相同，说明在实施例1以及其他实施例中后出峰的化合物为α构型，先出峰的化合物为β构型。

[0080] 综上所述，本发明的一种卡格列净α、β异构体的高效液相色谱分离方法，可以有效的将卡格列净消旋体很好的分离，其分离度可达1.35～3.95。

[0081] 以上所述仅是本发明的实施方式的举例，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。