一种从小叶莲中提取分离的半日花烷型二萜类化合物及其制备方法与应用转让专利
申请号 : CN201610199725.7
文献号 : CN105601516B
文献日 : 2017-07-07
发明人 : 孙彦君 , 万焱 , 王俊敏 , 沈继朵 , 裴莉昕 , 陈辉 , 郝志友 , 高美玲 , 付露
申请人 : 河南中医学院
摘要 :
权利要求 :
1.一种从小叶莲中提取分离的半日花烷型二萜类化合物的制备方法,其特征在于,该半日花烷型二萜类化合物为桃儿七萜A(Ⅰ)和桃儿七萜B(Ⅱ),分子结构式分别是:
制备方法是:
将小叶莲6–9kg加入小叶莲重量2–5倍、体积浓度为75%–95%的乙醇加热回流提取3次,提取温度为90–95℃,提取时间为1.5–2小时,减压回收乙醇,得浸膏状乙醇提取物,将乙醇提取物混悬于2–3.2L的蒸馏水中,依次以石油醚、二氯甲烷各萃取3次,每次2–3.2L;将二氯甲烷萃取部位上硅胶柱,依次用体积比为100:0、100:5、100:7、100:10的石油醚-丙酮混合溶剂进行梯度洗脱,每一梯度用10–15L洗脱液,流速为10–15mLmin-1,每200–300ml体积为一流份,收集168个流份,各个流份用GF254薄层板,以体积比1︰1的石油醚-丙酮作为展开剂,以体积比10︰90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂,105℃加热3–5min,进行硅胶薄层色谱检测分析,根据硅胶薄层色谱检测分析结果,合并流份1–50、51–134、135–168,得到组份Fr.1、组份Fr.2、组份Fr.3;将组份Fr.3经ODS柱色谱,以体积比20-85:15-80的甲醇-水作为洗脱液进行梯度洗脱,分别收集体积比40:60、60:40、85:15的甲醇-水洗脱液,得亚组份Fr.3-1、亚组份Fr.3-2、亚组份Fr.3-3;将亚组份Fr.3-3上硅胶柱,用体积比100:20的石油醚-丙酮洗脱,流速为1–2mLmin-1,每3–7ml为一流份,共收集亚组份Fr.3-3的38个流份,各个流份用GF254薄层板,分别以体积比2-3︰1的石油醚-丙酮作为展开剂,以体积比10︰90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂,105℃加热3–5min,由硅胶薄层色谱检测分析,分别合并含有目标物桃儿七萜A和桃儿七萜B的流份,得到桃儿七萜A(I)和桃儿七萜B(II)。
2.根据权利要求1所述的从小叶莲中提取分离的半日花烷型二萜类化合物的制备方法,其特征在于,将小叶莲9kg加入小叶莲重量3倍、体积浓度为95%的乙醇加热回流提取3次,提取温度为95℃,提取时间为1.5小时,减压回收乙醇,得浸膏状乙醇提取物,将乙醇提取物混悬于3.2L的蒸馏水中,依次以石油醚、二氯甲烷各萃取3次,每次3.2L;将二氯甲烷萃取部位上硅胶柱,依次用体积比为100:0、100:5、100:7、100:10的石油醚-丙酮混合溶剂进行梯度洗脱,每一梯度用15L洗脱液,流速为15mLmin-1,每300ml体积为一流份,收集168个流份,各个流份用GF254薄层板,以体积比1︰1的石油醚-丙酮作为展开剂,以体积比10︰90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂,105℃加热5min,进行硅胶薄层色谱检测分析,根据硅胶薄层色谱检测分析结果,合并流份1–50、51–134、135–168,得到组份Fr.1、组份Fr.2、组份Fr.3;将组份Fr.3经ODS柱色谱,以体积比20-85:15-80的甲醇-水作为洗脱液进行梯度洗脱,分别收集体积比40:60、60:40、85:15的甲醇-水洗脱液,得亚组份Fr.3-1、亚组份Fr.3-2、亚组份-1Fr.3-3;将亚组份Fr.3-3上硅胶柱,用体积比100:20的石油醚-丙酮洗脱,流速为2mLmin ,每7ml为一流份,共收集亚组份Fr.3-3的38个流份,各个流份用GF254薄层板,分别以体积比
3︰1的石油醚-丙酮作为展开剂,以体积比10︰90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂,105℃加热
5min,由硅胶薄层色谱检测分析,分别合并含有目标物桃儿七萜A和桃儿七萜B的流份,得到桃儿七萜A(I)和桃儿七萜B(II)。
3.根据权利要求1所述的从小叶莲中提取分离的半日花烷型二萜类化合物的制备方法,其特征在于,将小叶莲6kg加入小叶莲重量5倍、体积浓度为75%的乙醇加热回流提取3次,提取温度为92℃,提取时间为1.5小时,减压回收乙醇,得浸膏状乙醇提取物,将乙醇提取物混悬于2L的蒸馏水中,依次以石油醚、二氯甲烷各萃取3次,每次2L;将二氯甲烷萃取部位上硅胶柱,依次用体积比为100:0、100:5、100:7、100:10的石油醚-丙酮混合溶剂进行梯-1度洗脱,每一梯度用10L洗脱液,流速为10mLmin ,每200ml体积为一流份,收集168个流份,各个流份用GF254薄层板,以体积比1︰1的石油醚-丙酮作为展开剂,以体积比10︰90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂,105℃加热3min,进行硅胶薄层色谱检测分析,根据硅胶薄层色谱检测分析结果,合并流份1–50、51–134、135–168,得到组份Fr.1、组份Fr.2、组份Fr.3;将组份Fr.3经ODS柱色谱,以体积比20-85:15-80的甲醇-水作为洗脱液进行梯度洗脱,分别收集体积比40:60、60:40、85:15的甲醇-水洗脱液,得亚组份Fr.3-1、亚组份Fr.3-2、亚组份Fr.3-
3;将亚组份Fr.3-3上硅胶柱,用体积比100:20的石油醚-丙酮洗脱,流速为1mLmin-1,每3ml为一流份,共收集亚组份Fr.3-3的38个流份,各个流份用GF254薄层板,分别以体积比3︰1的石油醚-丙酮作为展开剂,以体积比10︰90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂,105℃加热3min,由硅胶薄层色谱检测分析,分别合并含有目标物桃儿七萜A和桃儿七萜B的流份,得到桃儿七萜A(I)和桃儿七萜B(II)。
4.根据权利要求1所述的从小叶莲中提取分离的半日花烷型二萜类化合物的制备方法,其特征在于,将小叶莲7kg加入小叶莲重量4倍、体积浓度为80%的乙醇加热回流提取3次,提取温度为93℃,提取时间为1.8小时,减压回收乙醇,得浸膏状乙醇提取物,将乙醇提取物混悬于2.5L的蒸馏水中,依次以石油醚、二氯甲烷各萃取3次,每次2.5L;将二氯甲烷萃取部位上硅胶柱,依次用体积比为100:0、100:5、100:7、100:10的石油醚-丙酮混合溶剂进行梯度洗脱,每一梯度用13L洗脱液,流速为13mLmin-1,每260ml体积为一流份,收集168个流份,各个流份用GF254薄层板,以体积比1︰1的石油醚-丙酮作为展开剂,以体积比10︰90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂,105℃加热3min,进行硅胶薄层色谱检测分析,根据硅胶薄层色谱检测分析结果,合并流份1–50、51–134、135–168,得到组份Fr.1、组份Fr.2、组份Fr.3;将组份Fr.3经ODS柱色谱,以体积比20-85:15-80的甲醇-水作为洗脱液进行梯度洗脱,分别收集体积比40:60、60:40、85:15的甲醇-水洗脱液,得亚组份Fr.3-1、亚组份Fr.3-2、亚组份Fr.3-3;将亚组份Fr.3-3上硅胶柱,用体积比100:20的石油醚-丙酮洗脱,流速为2mLmin-1,每5ml为一流份,共收集亚组份Fr.3-3的38个流份,各个流份用GF254薄层板,分别以体积比
2︰1的石油醚-丙酮作为展开剂,以体积比10︰90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂,105℃加热
3min,由硅胶薄层色谱检测分析,分别合并含有目标物桃儿七萜A和桃儿七萜B的流份,得到桃儿七萜A(I)和桃儿七萜B(II)。
5.根据权利要求1所述的从小叶莲中提取分离的半日花烷型二萜类化合物的制备方法,其特征在于,将小叶莲8kg加入小叶莲重量3倍、体积浓度为90%的乙醇加热回流提取3次,提取温度为95℃,提取时间为1.5小时,减压回收乙醇,得浸膏状乙醇提取物,将乙醇提取物混悬于2.8L的蒸馏水中,依次以石油醚、二氯甲烷各萃取3次,每次2.8L;将二氯甲烷萃取部位上硅胶柱,依次用体积比为100:0、100:5、100:7、100:10的石油醚-丙酮混合溶剂进行梯度洗脱,每一梯度用14L洗脱液,流速为14mLmin-1,每280ml体积为一流份,收集168个流份,各个流份用GF254薄层板,以体积比1︰1的石油醚-丙酮作为展开剂,以体积比10︰90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂,105℃加热4min,进行硅胶薄层色谱检测分析,根据硅胶薄层色谱检测分析结果,合并流份1–50、51–134、135–168,得到组份Fr.1、组份Fr.2、组份Fr.3;将组份Fr.3经ODS柱色谱,以体积比20-85:15-80的甲醇-水作为洗脱液进行梯度洗脱,分别收集体积比40:60、60:40、85:15的甲醇-水洗脱液,得亚组份Fr.3-1、亚组份Fr.3-2、亚组份Fr.3-3;将亚组份Fr.3-3上硅胶柱,用体积比100:20的石油醚-丙酮洗脱,流速为1mLmin-1,每6ml为一流份,共收集亚组份Fr.3-3的38个流份,各个流份用GF254薄层板,分别以体积比
3︰1的石油醚-丙酮作为展开剂,以体积比10︰90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂,105℃加热
4min,由硅胶薄层色谱检测分析,分别合并含有目标物桃儿七萜A和桃儿七萜B的流份,得到桃儿七萜A(I)和桃儿七萜B(II)。
说明书 :
一种从小叶莲中提取分离的半日花烷型二萜类化合物及其制
备方法与应用
技术领域
背景技术
发明内容
168,得到组份Fr.1、组份Fr.2、组份Fr.3;将组份Fr.3经ODS柱色谱,以体积比20-85:15-80的甲醇-水作为洗脱液进行梯度洗脱,分别收集体积比40:60、60:40、85:15的甲醇-水洗脱液,得亚组份Fr.3-1、亚组份Fr.3-2、亚组份Fr.3-3;将亚组份Fr.3-3上硅胶柱,用体积比
100:20的石油醚-丙酮洗脱,流速为1–2mLmin-1,每3–7ml为一流份,共收集亚组份Fr.3-3的
38个流份,各个流份用GF254薄层板,分别以体积比2-3︰1的石油醚-丙酮作为展开剂,以体积比10︰90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂,105℃加热3–5min,由硅胶薄层色谱检测分析,分别合并含有目标物桃儿七萜A和桃儿七萜B的流份,得到桃儿七萜A(I)和桃儿七萜B(II)。
具体实施方式
脱,流速为2mLmin ,每5ml为一流份,共收集亚组份Fr.3-3的38个流份,各个流份用GF254薄层板,分别以体积比2︰1的石油醚-丙酮作为展开剂,以体积比10︰90的硫酸-乙醇溶液作为显色剂,105℃加热3min,由硅胶薄层色谱检测分析,分别合并含有目标物桃儿七萜A和桃儿七萜B的流份,得到桃儿七萜A(I)和桃儿七萜B(II)。
1.70(3H,s),连接在脂肪季碳上的甲基信号δ0.74(3H,s),0.95(3H,s)和0.83(3H,s);两组连氧脂肪碳上的氢信号,δ3.22(1H,dd,J=11.2,4.5Hz),4.64(2H,d,J=7.2Hz);五组CH2质子信号δ1.07(1H,td,J=13.2,4.2Hz),1.84(1H,dt,J=13.2,3.4Hz),1.60(2H,m),1.95(2H,m),1.47(1H,m),1.25(1H,m),1.95(1H,m),2.22(1H,m)。还有一组苹果酸单乙酯结构片段δ4.18(2H,q,J=7.2Hz),1.26(3H,t,J=7.2Hz),3.22(2H,s)。13C NMR(125MHz,CDCl3)和DEPT谱共给出25个碳信号,除了一组苹果酸单乙酯结构单元δ166.7,41.7,166.6,62.3,
14.1之外,还给出特征性的半日花烷型二萜骨架碳信号,包括四个烯碳信号δ122.3、135.0、
117.9、143.3,五个甲基碳信号δ21.9,16.6,13.6,27.9,15.0;两个连氧sp3杂化碳信号δ
1 1
79.1,61.5。H-H COSY谱中,H-1/H-2,H-2/H-3相关;H-5/H-6,H-6/H-7相关;H-9/H-11及H-
11/H-12,从而确定(C-1to C-3),(C-5to C-7),(C9to C11to C12)这三部分的连接方式。在HMBC谱中,两个甲基δ0.95(3H,s,H-18)和0.83(3H,s,H-19)均与C-3(79.1)、C-4(38.6)、C-5(49.5)远程相关,一个甲基δ0.74(3H,s,H-20)与C-1(37.2)、C-10(36.6)、C-9(54.3)远程相关,一个甲基δ1.67(3H,s,H-17)与C-9(54.3)、C-8(135.0)、C-7(122.3)远程相关,一个甲基δ1.70(3H,s,H-16)与C-12(41.9)、C-13(143.2)、C-14(117.9)远程相关,因此确定该化合物骨架的平面结构为3,15-dihydroxy-7,13-labdadiene。亚甲基质子δ4.64(2H,d,J=7.2Hz)与苹果酸结构单元上的羰基δ166.7(C-1′)的HMBC远程相关,确证苹果酸单乙酯结构单元连接在C-15位。
14位双键为E式取向。将化合物I碱水解,得到水解产物Ia,通过Ia与(–)-labda-7,13-diene-3,15-diol的比旋光度比较发现,该化合物的骨架上的取代基取向与(–)-labda-7,
13-diene-3,15-diol一致。因此化合物I的结构为3β-hydroxy-15-(3′-ethoxy-3′-oxopropionyloxy)-7,13E-labdadien,命名为桃儿七萜A(sinoditerpene A),为一未见文献报道的新化合物:
1.68(6H,s),三个连接在脂肪季碳上的甲基信号δ0.73(3H,s),0.95(3H,s)和0.83(3H,s);
两组连氧脂肪碳上的氢信号,δ3.22(1H,dd,J=11.0,4.8Hz),4.58(2H,d,J=7.5Hz);五组CH2质子信号δ1.06(1H,td,J=13.1,4.5Hz),1.84(1H,dt,J=13.1,3.4Hz),1.60(2H,m),
1.95(2H,m),1.50(1H,m),1.25(1H,m),1.95(1H,m),2.20(1H,m)。还有一组3-羟基-3,4-二乙氧酰基丁酰氧基结构片段δ4.12(2H,q,J=7.2Hz)、1.28(3H,t,J=7.2Hz)、4.26(2H,q,J=7.2Hz)、1.26(3H,t,J=7.2Hz)、2.87(1H,d,J=15.6Hz)、2.76(1H,d,J=15.6Hz)、2.87(1H,d,J=15.6Hz)、2.76(1H,d,J=15.6Hz)。13C NMR(125MHz,CDCl3)和DEPT共给出30个碳信号,除了一组3-羟基-3,4-二乙氧酰基丁酰氧基结构单元δ14.1、61.0、14.0、62.3、
169.80、43.2、73.2、43.3、169.76、173.4之外,还给出特征性的半日花烷型二萜骨架碳信号,包括四个烯碳信号δ122.3、135.0、118.0、143.2,五个甲基碳信号δ21.9、16.6、13.6、
27.9、15.0;两个连氧sp3杂化碳信号δ79.1、61.8。1H-1H COSY谱中,H-1/H-2,H-2/H-3相关;
H-5/H-6,H-6/H-7相关;H-9/H-11及H-11/H-12,从而确定(C-1to C-3),(C-5to C-7),(C9to C11to C12)这三部分的连接方式。在HMBC谱中,两个甲基δ0.95(3H,s,H-18)和0.83(3H,s,H-19)均与C-3(79.1)、C-4(38.6)、C-5(49.5)远程相关,一个甲基δ0.73(3H,s,H-20)与C-1(37.2)、C-10(36.6)、C-9(54.2)远程相关,一个甲基δ1.68(3H,s,H-17)与C-9(54.2)、C-8(135.0)、C-7(122.3)远程相关,一个甲基δ1.68(3H,s,H-16)与C-12(41.8)、C-13(143.2)、C-14(118.0)远程相关,因此确定该化合物骨架的平面结构为3,15-dihydroxy-7,13-labdadiene。亚甲基质子δ4.58(2H,d,J=7.2Hz)与3-羟基-3,4-二乙氧酰基丁酰氧基结构片段上的羰基信号δ169.80的HMBC远程相关,确证3-羟基-3,4-二乙氧酰基丁酰氧基结构片段连接在C-15位。
7.5Hz,H-14)与2.20(1H,m,H-12)、1.95(1H,m,H-12)的NOE相关,表明H-13,14位双键为E式取向。将化合物II碱水解,得到水解产物IIa,通过IIa与(–)-labda-7,13-diene-3,15-diol的比旋光度比较发现,该化合物的骨架上的取代基取向与(–)-labda-7,13-diene-3,15-diol一致。因此化合物II的结构为3β-hydroxy-15-[(3′-hydroxy-3′,4′-bis(ethoxycarbonyl)-butyroxy)]-7,13E-Labdadien,命名为桃儿七萜B(sinoditerpene B),为一未见文献报道的新化合物:
桃儿七萜A 74.6±5.5 63.5±6.2
桃儿七萜B 88.3±7.1 75.2±6.8