一种奥拉西坦光降解产物及其制备方法和分析检测方法转让专利
申请号 : CN201610096799.8
文献号 : CN105669515B
文献日 : 2018-11-16
发明人 : 徐建立
申请人 : 骆金玲
摘要 :
本发明公开了一种奥拉西坦光降解产物及其制备方法和分析检测方法。本发明发现了一种新的奥拉西坦光降解产物，该降解产物结构首次报道；本发明提供的所述光降解产物的制备方法简单易行，可大量制备该降解产物；本发明提供的液相分析方法能快速检测出所述降解产物，选择该降解产物的最大吸收波长作为检测波长，提高了该降解产物的检出率，结果准确可靠；本发明提供的光降解产物可以用于奥拉西坦及其制剂的有关物质检查，进一步提高奥拉西坦及其制剂的质量标准，提高其安全性和可控性。
权利要求 :
1.一种奥拉西坦光降解产物，其特征在于：化学结构如下，
2.一种权利要求1所述光降解产物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
(1)光照破坏样品制备：将奥拉西坦原料药光照破坏，先经冷白荧光灯照射，再经紫外荧光灯照射；
(2)降解产物富集：将上述光照破坏样品溶于甲醇体积百分浓度为70％～85％的甲醇溶液中，搅拌，抽滤，收集滤液，减压浓缩得浓缩物；
(3)降解产物粗品：将上述浓缩物用正相硅胶柱色谱分离，用体积比为8:1～10:1的二氯甲烷-甲醇混合溶剂等度洗脱，收集5～10个柱体积洗脱液，浓缩得降解产物粗品；
(4)反相硅胶柱制备：将上述降解产物粗品用反相硅胶柱纯化，固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇体积百分浓度为80％～90％的甲醇-水，等度洗脱，收集5～9个柱体积洗脱液，浓缩，冷冻干燥即得所述光降解产物。
3.根据权利要求2所述光降解产物的制备方法，其特征在于：步骤(1)所述光照破坏方法为：先经一百二十万勒克斯冷白荧光灯照射36～48小时，再经200瓦小时/平方米的紫外荧光灯照射24～36小时。
4.根据权利要求3所述光降解产物的制备方法，其特征在于：步骤(1)所述光照破坏方法为：先经一百二十万勒克斯冷白荧光灯照射42小时，再经200瓦小时/平方米的紫外荧光灯照射30小时。
5.根据权利要求2所述光降解产物的制备方法，其特征在于步骤(3)为：将步骤(2)浓缩物用正相硅胶柱色谱分离，用体积比为9:1的二氯甲烷-甲醇混合溶剂等度洗脱，收集7～8个柱体积洗脱液，浓缩得降解产物粗品。
说明书 :
一种奥拉西坦光降解产物及其制备方法和分析检测方法
技术领域
[0001] 本发明涉及药物技术领域，具体涉及一种奥拉西坦光降解产物，以及该光降解产物的制备方法和分析检测方法。
背景技术
[0002] 促智药是一类能促进学习记忆能力的新型中枢神经系统药物，与精神抑制药、抗抑郁药、抗焦虑药、精神兴奋药和致幻剂等精神药物均不同，它是通过对脑细胞中生物能量代谢(如葡萄糖、ATP、蛋白质、RNA、类脂等)的同化作用，选择性作用于大脑皮层和海马，保护、激活或促进神经细胞功能的恢复，改善与精神行为有关的脑整合机制(如记忆、学习、回答问题及分析问题、解决问题的能力)。目前最引人注目的促智药是吡咯烷酮类，其代表性药物奥拉西坦是一种合成的羟基氨基丁酸环状衍生物，又称奥拉酰胺、羟氧吡醋胺，商品名有neuromet和健朗星等，由意大利史克比切姆公司于1974年首次合成，是美国FDA批准的用于治疗老年痴呆的药物之一。其化学结构式如下：
[0003]
[0004] 奥拉西坦临床上用于治疗各种理化因素引起的脑损伤，各种脑缺氧和慢性脑功能不全等。对痴呆、休克、老年精神衰退综合症(如记忆力衰退、适应性降低、老年虚弱和精神性活动障碍等)、促进儿童大脑与智力的发育，对正常人的记忆力、工作效率的提高均有一定疗效。可用于治疗一氧化碳和慢性酒精中毒，对巴比妥和农药中毒的解救也有一定的作用。
[0005] 国际上公认的药品注册要符合人用药品注册技术国际协调会(ICH)及EP欧洲药典中的要求，其对药物中的杂质进行了严格的规定。ICH要求申报者应对原料药在合成、精制和储存过程中最可能产生的那些实际存在的和潜在的杂质进行概述，该描述应对合成中的化学反应、由原料引起的杂质及可能的降解产物进行合理的、科学地评估；并且申报资料中还应对那些在原料药中实际存在的表观量大于或等于0.05％(每日最大剂量大于2g)的杂质结构特征进行描述。
[0006] 可能的降解产物可通过破坏性试验和稳定性试验进行评估。但是，现有的奥拉西坦质量标准中，有关物质的液相分析方法洗脱强度较弱，可能并不能将降解产物都分离检测出来。这些漏检出的降解产物无疑降低了奥拉西坦的质量，如不对这些降解产物加以严格控制，可能会对人体产生严重的毒副作用。
发明内容
[0007] 为了克服上述缺陷，本发明采用洗脱强度高的洗脱剂对奥拉西坦的破坏性试验样品和稳定性试验样品进行分析，在光破坏样品中发现了一种新的降解产物，该降解产物在稳定性试验长期6个月未避光样品中开始检测到，且含量随时间增高，长期18月时达0.05％。因此：
[0008] 本发明的第一目的在于提供一种新的奥拉西坦光降解产物；
[0009] 本发明的第二目的在于提供所述光降解产物的制备方法；
[0010] 本发明的第三目的在于提供所述光降解产物的分析检测方法；
[0011] 本发明的第四目的在于提供所述光降解产物在奥拉西坦及其制剂的有关物质检查项中作为杂质对照品的用途。
[0012] 上述目的是通过如下技术方案实现的：
[0013] 一种奥拉西坦光降解产物，化学结构如下，
[0014]
[0015] 一种所述光降解产物的制备方法，包括如下步骤：
[0016] (1)光照破坏样品制备：将奥拉西坦原料药光照破坏，先经冷白荧光灯照射，再经紫外荧光灯照射；
[0017] (2)降解产物富集：将上述光照破坏样品溶于甲醇体积百分浓度为70％～85％的甲醇溶液中，搅拌，抽滤，收集滤液，减压浓缩得浓缩物；
[0018] (3)降解产物粗品：将上述浓缩物用正相硅胶柱色谱分离，用体积比为8:1～10:1的二氯甲烷-甲醇混合溶剂等度洗脱，收集5～10个柱体积洗脱液，浓缩得降解产物粗品；
[0019] (4)反相硅胶柱制备：将上述降解产物粗品用反相硅胶柱纯化，固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇体积百分浓度为80％～90％的甲醇-水，等度洗脱，收集5～9个柱体积洗脱液，浓缩，冷冻干燥即得所述光降解产物。
[0020] 进一步地，步骤(1)所述光照破坏方法为：先经一百二十万勒克斯冷白荧光灯照射36～48小时，再经200瓦小时/平方米的紫外荧光灯照射24～36小时。
[0021] 更进一步地，步骤(1)所述光照破坏方法为：先经一百二十万勒克斯冷白荧光灯照射42小时，再经200瓦小时/平方米的紫外荧光灯照射30小时。
[0022] 进一步地，步骤(3)为：将步骤(2)浓缩物用正相硅胶柱色谱分离，用体积比为9:1的二氯甲烷-甲醇混合溶剂等度洗脱，收集7～8个柱体积洗脱液，浓缩得降解产物粗品。
[0023] 更进一步地，步骤(3)所述正相硅胶粒径大小为200～300目。
[0024] 进一步地，步骤(4)为：将步骤(3)降解产物粗品用反相硅胶柱纯化，固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇体积百分浓度为85％的甲醇-水，等度洗脱，收集7～8个柱体积洗脱液，浓缩，冷冻干燥即得所述光降解产物。
[0025] 一种所述光降解产物的液相分析方法，HPLC色谱条件包括：
[0026] 色谱柱：Agilent ZORBAX XDB-C18(4.6mm×250mm，5μm)；
[0027] 流动相：A为乙腈，B为0.05mol/L正辛胺溶液(磷酸调节pH值至6.8)；
[0028] 梯度洗脱程序：0～6min，A 20％；6～15min，A 20％→75％；15～40min，A 75％；40～50min，A 75％→20％；50～60min，A 20％；
[0029] 流动相流速：1.0mL·min-1；
[0030] 检测波长：260nm；
[0031] 柱温：30℃；
[0032] 进样量：10μL。
[0033] 上述色谱条件下，所述光降解产物能与极性相近的杂质完全分离开，分离度大于1.5。流动相在260nm检测波长下紫外本底吸收低，且260nm为所述光降解产物的最大吸收波长，保证了所述光降解产物的响应灵敏度，提高检出量。
[0034] 所述的奥拉西坦光降解产物在奥拉西坦及其制剂的有关物质检查项中作为杂质对照品的用途。该光降解产物容易获得，且纯度高(大于98％)，可以使用该化合物作为对照品利用外标法对其进行质量控制。
[0035] 本发明的有益效果：
[0036] (1)本发明发现了一种新的奥拉西坦光降解产物，该降解产物结构首次报道；
[0037] (2)本发明提供的所述光降解产物的制备方法简单易行，可大量制备该降解产物；
[0038] (3)本发明提供的液相分析方法能快速检测出所述降解产物，选择该降解产物的最大吸收波长作为检测波长，提高了该降解产物的检出率，结果准确可靠；
[0039] (4)本发明提供的光降解产物可以用于奥拉西坦及其制剂的有关物质检查，进一步提高奥拉西坦及其制剂的质量标准，提高其安全性和可控性。
具体实施方式
[0040] 下面结合具体实施例详细说明本发明的技术方案。
[0041] 实施例1：奥拉西坦光降解产物的制备
[0042] 取50g奥拉西坦原料均匀摊在培养皿中，置于冷白荧光灯下光照42小时，光照强度为一百二十万勒克斯；取出表面皿，再置于紫外荧光灯下照射30小时，紫外荧光灯照射强度为200瓦小时/平方米，照射结束后取出。然后将光照破坏样品溶于甲醇体积百分浓度为75％的甲醇-水溶液中，搅拌20分钟，用抽滤漏斗抽滤，收集滤液，减压浓缩得浓缩物3.5g；
然后将浓缩物用5ml甲醇溶解，用4g粒度为100～200目的正相硅胶拌样，挥干溶剂，用80g粒度为200～300目的正相硅胶作为分离硅胶进行柱色谱分离，用体积比为9:1的二氯甲烷-甲醇混合溶剂等度洗脱，收集7～8个柱体积洗脱液，减压浓缩得降解产物粗品1.2g；然后将降解产物粗品用甲醇体积百分浓度为75％的甲醇水溶液溶解，用反相硅胶柱纯化，固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇体积百分浓度为85％的甲醇-水，等度洗脱，收集7～
8个柱体积的洗脱液，减压浓缩，冷冻干燥得淡黄色粉末750mg(光降解产物)。HPLC归一化纯度大于98％。
然后将浓缩物用5ml甲醇溶解，用4g粒度为100～200目的正相硅胶拌样，挥干溶剂，用80g粒度为200～300目的正相硅胶作为分离硅胶进行柱色谱分离，用体积比为9:1的二氯甲烷-甲醇混合溶剂等度洗脱，收集7～8个柱体积洗脱液，减压浓缩得降解产物粗品1.2g；然后将降解产物粗品用甲醇体积百分浓度为75％的甲醇水溶液溶解，用反相硅胶柱纯化，固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇体积百分浓度为85％的甲醇-水，等度洗脱，收集7～
8个柱体积的洗脱液，减压浓缩，冷冻干燥得淡黄色粉末750mg(光降解产物)。HPLC归一化纯度大于98％。
[0043] 光降解产物化学结构确证：
[0044] HR-ESIMS显示[M+H]+为m/z 141.0708，[M+Na]+为m/z 163.0512。结合核磁特征可得分子式为C6H8N2O2，不饱和度为4。核磁共振氢谱数据δH(ppm，DMSO-d6，500MHz)：2.87(m，2H)，4.35(m，2H)，5.24(m，1H)，7.28(m，1H)，7.32(m，2H)；核磁共振碳谱数据δC(ppm，DMSO-d6，150MHz)：36.9，56.2，104.8，128.4，170.1，177.4。确定其化学结构式如下：
[0045]
[0046] 实施例2：奥拉西坦光降解产物的制备
[0047] 取50g奥拉西坦原料均匀摊在培养皿中，置于冷白荧光灯下光照36小时，光照强度为一百二十万勒克斯；取出表面皿，再置于紫外荧光灯下照射24小时，紫外荧光灯照射强度为200瓦小时/平方米，照射结束后取出。然后将光照破坏样品溶于甲醇体积百分浓度为70％的甲醇-水溶液中，搅拌20分钟，用抽滤漏斗抽滤，收集滤液，减压浓缩得浓缩物3.5g；
然后将浓缩物用5ml甲醇溶解，用4g粒度为100～200目的正相硅胶拌样，挥干溶剂，用80g粒度为200～300目的正相硅胶作为分离硅胶进行柱色谱分离，用体积比为10:1的二氯甲烷-甲醇混合溶剂等度洗脱，收集9～10个柱体积洗脱液，减压浓缩得降解产物粗品1.2g；然后将降解产物粗品用甲醇体积百分浓度为70％的甲醇水溶液溶解，用反相硅胶柱纯化，固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇体积百分浓度为80％的甲醇-水，等度洗脱，收集8～9个柱体积的洗脱液，减压浓缩，冷冻干燥得淡黄色粉末750mg(光降解产物)。HPLC归一化纯度大于98％。
然后将浓缩物用5ml甲醇溶解，用4g粒度为100～200目的正相硅胶拌样，挥干溶剂，用80g粒度为200～300目的正相硅胶作为分离硅胶进行柱色谱分离，用体积比为10:1的二氯甲烷-甲醇混合溶剂等度洗脱，收集9～10个柱体积洗脱液，减压浓缩得降解产物粗品1.2g；然后将降解产物粗品用甲醇体积百分浓度为70％的甲醇水溶液溶解，用反相硅胶柱纯化，固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇体积百分浓度为80％的甲醇-水，等度洗脱，收集8～9个柱体积的洗脱液，减压浓缩，冷冻干燥得淡黄色粉末750mg(光降解产物)。HPLC归一化纯度大于98％。
[0048] 光降解产物化学结构确证同实施例1。
[0049] 实施例3：奥拉西坦光降解产物的制备
[0050] 取50g奥拉西坦原料均匀摊在培养皿中，置于冷白荧光灯下光照48小时，光照强度为一百二十万勒克斯；取出表面皿，再置于紫外荧光灯下照射36小时，紫外荧光灯照射强度为200瓦小时/平方米，照射结束后取出。然后将光照破坏样品溶于甲醇体积百分浓度为85％的甲醇-水溶液中，搅拌20分钟，用抽滤漏斗抽滤，收集滤液，减压浓缩得浓缩物3.5g；
然后将浓缩物用5ml甲醇溶解，用4g粒度为100～200目的正相硅胶拌样，挥干溶剂，用80g粒度为200～300目的正相硅胶作为分离硅胶进行柱色谱分离，用体积比为8:1的二氯甲烷-甲醇混合溶剂等度洗脱，收集5～6个柱体积洗脱液，减压浓缩得降解产物粗品1.2g；然后将降解产物粗品用甲醇体积百分浓度为85％的甲醇水溶液溶解，用反相硅胶柱纯化，固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇体积百分浓度为90％的甲醇-水，等度洗脱，收集5～
6个柱体积的洗脱液，减压浓缩，冷冻干燥得淡黄色粉末750mg(光降解产物)。HPLC归一化纯度大于98％。
然后将浓缩物用5ml甲醇溶解，用4g粒度为100～200目的正相硅胶拌样，挥干溶剂，用80g粒度为200～300目的正相硅胶作为分离硅胶进行柱色谱分离，用体积比为8:1的二氯甲烷-甲醇混合溶剂等度洗脱，收集5～6个柱体积洗脱液，减压浓缩得降解产物粗品1.2g；然后将降解产物粗品用甲醇体积百分浓度为85％的甲醇水溶液溶解，用反相硅胶柱纯化，固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，流动相为甲醇体积百分浓度为90％的甲醇-水，等度洗脱，收集5～
6个柱体积的洗脱液，减压浓缩，冷冻干燥得淡黄色粉末750mg(光降解产物)。HPLC归一化纯度大于98％。
[0051] 光降解产物化学结构确证同实施例1。
[0052] 实施例4：奥拉西坦稳定性试验长期6个月避光和未避光样品检测分析
[0053] 对照品溶液制备：精密称取2mg光降解杂质于200ml容量瓶中，用乙腈溶解定容，作为光降解杂质储备液；精密量取光降解杂质储备液1ml于20ml容量瓶中，用液相分析方法中初始比例的流动相稀释定容(约0.5μg/mL)。
[0054] 供试品溶液制备：从稳定性试验光照箱中取出6个月避光和未避光的奥拉西坦原料，分别精密称取20mg于20ml容量瓶中，用液相分析方法中初始比例的流动相溶解定容，分别得到长期6月避光原料供试品溶液和长期6月未避光原料供试品溶液，浓度均约为1mg/mL。
[0055] 液相色谱条件：
[0056] 高效液相色谱仪：Agilent 1260，二元泵，VWD；
[0057] 色谱柱：Agilent ZORBAX XDB-C18(4.6mm×250mm，5μm)；
[0058] 流动相：A为乙腈，B为0.05mol/L正辛胺溶液(磷酸调节pH值至6.5)；
[0059] 梯度洗脱程序：0～5min，A 20％；5～15min，A 20％→75％；15～40min，A 75％；40～50min，A 75％→20％；50～60min，A 20％；
[0060] 流动相流速：1.0mL·min-1；
[0061] 检测波长：260nm；
[0062] 柱温：30℃；
[0063] 进样量：10μL。
[0064] 分别精密量取光降解杂质对照品溶液和奥拉西坦供试品溶液10μL注入液相色谱仪分析。结果在长期6月未避光原料中检出光降解杂质，含量为0.05％，避光样品中未检测到，说明奥拉西坦应避光保存。该光降解杂质在稳定性试验中，随着时间推移呈增长趋势，且含量较高，应列入质量研究控制中。
[0065] 上述实施例的作用在于说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明的保护范围。本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和保护范围。