基于芳基醚的激酶抑制剂转让专利
申请号 : CN201380080835.6
文献号 : CN105683196B
文献日 : 2018-12-21
发明人 : V.M.弗鲁杜拉 , 潘森梁 , R.拉贾马尼 , J.E.马科 , J.J.布伦森 , C.D.兹尔巴 , S.J.纳拉 , M.S.卡拉索卢胡
申请人 : 百时美施贵宝公司
摘要 :
本发明大体上涉及可抑制AAK1(衔接子结合激酶1)的化合物、包含此类化合物的组合物及抑制AAK1的方法。
权利要求 :
1.化合物，其选自：
(S)-N-(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺；
(R)-N-(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺；
N-(8-(((S)-2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-4-基)乙酰胺；
N-(8-(((S)-2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5-环丙基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-4-基)乙酰胺；
(2S)-4-甲基-1-((5-(三氟甲基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-胺；
8-(((S)-2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5-环丙基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-4-胺；
(2S)-1-((5-异丙基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺；
(2S)-4-甲基-1-((5-(三氟甲基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-胺；
(S)-8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-N-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-4-胺；
(2S)-1-((5-异丙基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺；
(2S)-1-环丙基-3-((5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)丙-2-胺；
5,5,5-三氟-1-((5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-胺；
(S)-8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-N-乙基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-胺；
(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸甲酯；
(S)-N-(8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)异丁酰胺；
(S)-N-(8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-7-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺；
(S)-(8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸异丙酯；
N-(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-7-(二氟甲氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺；
N-(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-7-甲氧基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺；
(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸甲酯；
8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-胺；
(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-7-甲氧基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸甲酯；
(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸甲酯；
(S)-8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-9-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-胺；
(S)-N-(8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)-3,5-二氟苯甲酰胺；
(S)-N-(8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)丙酰胺；
(S)-(8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-7-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸甲酯；
(8-((2-氨基-1,1-氘-2,4-二甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸甲酯；
(S)-(8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸乙酯；
N-(8-((2-氨基-1,1-氘-2,4-二甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺；
(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-7-氰基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸甲酯；
(S)-(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-7-氰基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸甲酯；
(S)-(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸乙酯；
(S)-(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-1,9-二氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸甲酯；
(S)-(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-9-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸甲酯；
(S)-(8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-7-氰基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸甲酯；
(S)-N-(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-7-甲氧基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺；
(S)-(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-7-甲氧基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸甲酯；
(S)-8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-7-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-胺；
(S)-8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-胺；
(S)-N-(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-7-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺；
(S)-(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-7-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸甲酯；
(S)-(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-7-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸乙酯；
(8-((2-氨基-1,1-氘-2,4-二甲基戊基)氧基)-7-氰基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸甲酯；
(S)-(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-9-氟-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸甲酯；
(8-((2-氨基-1,1-氘-2,4-二甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸乙酯；
(S)-(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-5,5-氘-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸甲酯；
(S)-N-(8-((2-乙酰胺基-4-甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺；
(S)-N-(8-((4-甲基-2-(甲基磺酰胺基)戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺；
(S)-8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-2-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-5-酮；和(S)-8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-9-氯-2-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-5-酮；
或其药学上可接受的盐。
2.式(III)化合物：
或其药学上可接受的盐，其中：
R1及R2独立地选自氢、C3-C6环烷基及C1-C3烷基，其中所述C1-C3烷基任选被一个、两个或三个独立地选自卤素的基团取代；或R1及R2一起为氧代基；或
1 2
R及R与其所连接的碳原子一起形成氧杂环丁烷环；
R3为C2-C8烷基，其中所述C2-C8烷基任选被一个、两个、三个或四个独立地选自以下的基团取代：氨基、卤素、和C3-C8环烷基；
R4选自氢、C1-C3烷氧基羰基氨基、C1-C3烷基、C1-C3烷基氨基、C1-C3烷基羰基氨基、C3-C6环烷基羰基氨基、氨基、卤素；
R5选自氢、氰基、及卤素；
R6选自氢、C1-C3烷基、C1-C3烷基羰基氨基、氨基；
Rx为氢或卤素；
R7选自氢、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基、氰基、卤素、C1-C3卤代烷氧基及C1-C3卤代烷基；
条件是当Rx为氢时，R7为C1-C3卤代烷氧基；
R8选自氢及卤素。
3.权利要求2所述的化合物，或其药学上可接受的盐，其中：R1及R2为氢；
R3为C2-C8烷基，其中所述C2-C8烷基任选被一个氨基取代；
R4选自C1-C3烷氧基羰基氨基、C1-C3烷基羰基氨基及氨基；
R5为氢；
R6为氢；
x
R为氢或卤素；
R7选自氢及C1-C3卤代烷氧基，条件是当Rx为氢时，R7为C1-C3卤代烷氧基；且R8选自氢。
4.化合物，其选自：
(S)-N-(8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-7-(二氟甲氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺；
(S)-N-(8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-10-氟-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺；
(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-7-(二氟甲氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸甲酯；
(S)-N-(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-7-(二氟甲氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺；
(S)-(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-7-(二氟甲氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-
2-基)氨基甲酸甲酯；
(S)-N-(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-10-氟-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺；和(S)-8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-10-氟-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-胺；
或其药学上可接受的盐。
5.组合物，其包含药学上可接受的量的权利要求1所述的化合物，或其药学上可接受的盐，及药学上可接受的载体。
6.组合物，其包含药学上可接受的量的权利要求2所述的化合物，或其药学上可接受的盐，及药学上可接受的载体。
7.权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于抑制衔接子结合激酶1(AAK1)活性的药物中的用途。
8.权利要求2所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于抑制衔接子结合激酶1(AAK1)活性的药物中的用途。
9.治疗有效量的权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗或控制由AAK1活性介导的疾病或病症的药物中的用途。
10.权利要求9所述的用途，其中所述疾病或病症选自阿尔茨海默氏病、躁郁症、疼痛、帕金森氏病及精神分裂症。
11.权利要求10所述的用途，其中所述疼痛为神经性疼痛。
12.权利要求11所述的用途，其中所述神经性疼痛为纤维肌痛或周围神经病。
13.治疗有效量的权利要求2所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗或控制由AAK1活性介导的疾病或病症的药物中的用途。
14.权利要求13所述的用途，其中所述疾病或病症选自阿尔茨海默氏病、躁郁症、疼痛、帕金森氏病及精神分裂症。
15.权利要求14所述的用途，其中所述疼痛为神经性疼痛。
16.权利要求15所述的用途，其中所述神经性疼痛为纤维肌痛或周围神经病。
说明书 :
基于芳基醚的激酶抑制剂
[0001] 本公开大体上涉及可抑制衔接子结合激酶1(AAK1)的化合物、包含此类化合物的组合物及抑制AAK1的方法。
[0002] 衔接子结合激酶1(AAK1)为丝氨酸/苏氨酸激酶的Ark1/Prk1家族的成员。AAK1 mRNA以两种拼接形式(称为短形式及长形式)存在。长形式为主要形式且高度表达于脑及心脏中(Henderson及Conner, Mol. Biol. Cell. 2007, 18, 2698-2706)。AAK1富含于突触小体标本中且与所培养细胞中的内吞结构共定位。AAK1调节网格蛋白包覆的内吞作用，其为突触小泡再循环及受体介导的内吞作用中的一个重要过程。AAK1与AP2复合物有关，该复合物为将运货受体(receptor cargo)连接于网格蛋白包覆物的杂四聚体。网格蛋白结合于AAK1可刺激AAK1激酶活性(Conner等人, Traffic 2003, 4, 885-890；Jackson等人, J. Cell. Biol. 2003, 163, 231-236)。AAK1磷酸化AP-2的mu-2亚基，这促进mu-2结合于运货受体上含有酪氨酸的分选基序(Ricotta等人, J. Cell Bio. 2002, 156, 791-795；Conner及Schmid, J. Cell Bio. 2002, 156, 921-929)。受体摄取并不需要Mu2磷酸化，但磷酸化可提高内化的效率(Motely等人, Mol. Biol. Cell. 2006, 17, 5298-5308)。
[0003] AAK1已鉴别为PC12细胞中进行信号传导的神经调节蛋白(Neuregulin)-1/ErbB4的抑制剂。经由RNA干扰介导的基因沉默或用激酶抑制剂K252a(其抑制AAK1激酶活性)处理使AAK1表达缺失会使得神经调节蛋白-1诱导的神经突生长增强。这些处理使质膜中或质膜附近ErbB4的表达及ErbB4的积累增加(Kuai等人, Chemistry and Biology 2011, 18, 891-906)。NRG1及ErbB4为推定的精神分裂症敏感基因(Buonanno, Brain Res. Bull.
2010, 83, 122-131)。两种基因中的SNP与多种精神分裂症内表现型有关(Greenwood等人, Am. J. Psychiatry 2011, 168, 930-946)。神经调节蛋白1及ErbB4 KO小鼠模型已显示精神分裂症相关形态变化及行为表型(Jaaro-Peled等人, Schizophrenia Bulletin 2010,
36, 301-313；Wen等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2010, 107, 1211-1216)。另外，AAK1基因的内含子中的单核苷酸多态性与帕金森氏病(Parkinson's disease)的发作年龄有关(Latourelle等人, BMC Med. Genet. 2009, 10, 98)。这些结果表明抑制AAK1活性在治疗精神分裂症、精神分裂症中的认知缺陷、帕金森氏病、神经性疼痛、躁郁症及阿尔茨海默氏病(Alzheimer's disease)中可具有效用。
2010, 83, 122-131)。两种基因中的SNP与多种精神分裂症内表现型有关(Greenwood等人, Am. J. Psychiatry 2011, 168, 930-946)。神经调节蛋白1及ErbB4 KO小鼠模型已显示精神分裂症相关形态变化及行为表型(Jaaro-Peled等人, Schizophrenia Bulletin 2010,
36, 301-313；Wen等人, Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2010, 107, 1211-1216)。另外，AAK1基因的内含子中的单核苷酸多态性与帕金森氏病(Parkinson's disease)的发作年龄有关(Latourelle等人, BMC Med. Genet. 2009, 10, 98)。这些结果表明抑制AAK1活性在治疗精神分裂症、精神分裂症中的认知缺陷、帕金森氏病、神经性疼痛、躁郁症及阿尔茨海默氏病(Alzheimer's disease)中可具有效用。
[0004] 在第一方面中，本公开提供式(I)化合物：
[0005]
[0006] 或其药学上可接受的盐，其中：
[0007] R1及R2独立地选自氢、C3-C6环烷基及C1-C3烷基，其中所述C1-C3烷基任选被一个、两个 或三个独立地选自C1-C3烷氧基、C1-C3烷基氨基、氨基、氰基、C1-C3二烷基氨基、卤素及 羟基的基团取代；或
[0008] R1及R2一起为氧代基；或
[0009] R1及R2与其所连接的碳原子一起形成氧杂环丁烷环；
[0010] R3为C1-C3烷基-Y或C2-C8烷基，其中所述C2-C8烷基任选被一个、两个、三个或四个独立 地选自以下的基团取代：C1-C3烷氧基、C1-C3烷基氨基、C1-C3烷氧基C2-C3烷基氨基、氨 基、芳基、卤素、C1-C3卤代烷基氨基、C1-C3卤代烷基羰基氨基、羟基、-NRzRy及C3-C8环 烷基，其中所述环烷基进一步任选被一个、两个或三个独立地选自以下的基团取代：C1-C3烷氧基、C1-C3烷基、C1-C3烷基氨基、C1-C3烷氧基C2-C3烷基氨基、氨基、芳基、芳基C1- C3烷基、卤素、C1-C3卤代烷基、C1-C3卤代烷基氨基及羟基；
[0011] R4选自氢、C1-C3烷氧基、C1-C3烷氧基羰基氨基、C1-C3烷基、C1-C3烷基氨基、C1-C3烷基 羰基氨基、氨基、芳基氨基、芳基羰基氨基、C3-C6环烷基氨基、C3-C6环烷基羰基氨基、 C3-C6环烷氧基、卤素、C1-C3卤代烷氧基、C2-C3卤代烷基氨基、C2-C3卤代烷基羰基氨基及 羟基；
[0012] R5选自氢、C1-C3烷基、氰基、C3环烷基及卤素；
[0013] R6选自氢、C1-C3烷基、C1-C3烷基羰基氨基、氨基；
[0014] R7选自氢、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基、氰基、-CH2OH、-CH2OCH3、CH(CH3)OH、 C(CH3)2OH、卤素及C1-C3卤代烷基；
[0015] R8选自氢、C1-C3烷氧基、氰基及卤素；
[0016] Rz及Ry与其所连接的氮原子一起形成三至六元环；且
[0017] Y选自：
[0018]
[0019] 其中R9选自氢、C1-C6烷基、C3-C6环烷基及C1-C6烷基羰基；
[0020] n为0、1、2或3；
[0021] 各R10独立地选自氢、C1-C6烷基、芳基、芳基C1-C3烷基、C3-C6环烷基、卤素及C1-C3卤 代烷基；且
[0022] 各R11独立地选自氢、C1-C3烷氧基及羟基。
[0023] 在第一方面的第一实施方案中，本公开提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其 中R1及R2各自为氢。
[0024] 在第一方面的第二实施方案中，本公开提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其 中R1及R2之一为C1-C3烷基且另一个选自氢及C1-C3烷基。
[0025] 在第一方面的第三实施方案中，本公开提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其 中R1及R2之一为氢且另一个为C3-C6环烷基。
[0026] 在第一方面的第四实施方案中，本公开提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其 中R1及R2一起为氧代基；或R1及R2与其所连接的碳原子一起形成氧杂环丁烷环。
[0027] 在第二方面中，本公开提供式(II)化合物：
[0028]
[0029] 或其药学上可接受的盐，其中：
[0030] R1及R2独立地选自氢、C3-C6环烷基及C1-C3烷基，其中所述C1-C3烷基任选被一个、两个 或三个独立地选自C1-C3烷氧基、C1-C3烷基氨基、氨基、氰基、C1-C3二烷基氨基、卤素及 羟基的基团取代；或
[0031] R1及R2一起为氧代基；
[0032] R3为C1-C3烷基-Y或C2-C8烷基，其中所述C2-C8烷基任选被一个、两个或三个独立地选自 以下的基团取代：C1-C3烷氧基、C1-C3烷基氨基、C1-C3烷氧基C2-C3烷基氨基、氨基、芳 基、卤素、C1-C3卤代烷基氨基、C1-C3卤代烷基羰基氨基、羟基、-NRzRy及C3-C8环烷基， 其中所述环烷基进一步任选被一个、两个或三个独立地选自以下的基团取代：C1-C3烷氧 基、C1-C3烷基、C1-C3烷基氨基、C1-C3烷氧基C2-C3烷基氨基、氨基、芳基、芳基C1-C3烷 基、卤素、C1-C3卤代烷基、C1-C3卤代烷基氨基及羟基；
[0033] R4选自氢、C1-C3烷氧基、C1-C3烷氧基羰基氨基、C1-C3烷基、C1-C3烷基氨基、C1-C3烷基 羰基氨基、氨基、芳基氨基、芳基羰基氨基、C3-C6环烷基氨基、C3-C6环烷基羰基氨基、 C3-C6环烷氧基、卤素、C1-C3卤代烷氧基、C2-C3卤代烷基氨基、C2-C3卤代烷基羰基氨基及 羟基；
[0034] R5选自氢、C1-C3烷基、氰基、C3环烷基及卤素；
[0035] Rz及Ry与其所连接的氮原子一起形成三至六元环；且
[0036] Y选自：
[0037]
[0038] 其中R6选自氢、C1-C6烷基、C3-C6环烷基及C1-C6烷基羰基；
[0039] n为0、1、2或3；
[0040] 各R7独立地选自氢、C1-C6烷基、芳基、芳基C1-C3烷基、C3-C6环烷基、卤素及C1-C3卤代 烷基；且
[0041] 各R8独立地选自氢、C1-C3烷氧基及羟基。
[0042] 在第三个方面中，本公开提供式(III)化合物：
[0043]
[0044] 或其药学上可接受的盐，其中：
[0045] R1及R2独立地选自氢、C3-C6环烷基及C1-C3烷基，其中所述C1-C3烷基任选被一个、两个 或三个独立地选自C1-C3烷氧基、C1-C3烷基氨基、氨基、氰基、C1-C3二烷基氨基、卤素及 羟基的基团取代；或
[0046] R1及R2一起为氧代基；或
[0047] R1及R2与其所连接的碳原子一起形成氧杂环丁烷环；
[0048] R3为C1-C3烷基-Y或C2-C8烷基，其中所述C2-C8烷基任选被一个、两个、三个或四个独立 地选自以下的基团取代：C1-C3烷氧基、C1-C3烷基氨基、C1-C3烷氧基C2-C3烷基氨基、氨 基、芳基、卤素、C1-C3卤代烷基氨基、C1-C3卤代烷基羰基氨基、羟基、-NRzRy及C3-C8环 烷基，其中所述环烷基进一步任选被一个、两个或三个独立地选自以下的基团取代：C1-C3烷氧基、C1-C3烷基、C1-C3烷基氨基、C1-C3烷氧基C2-C3烷基氨基、氨基、芳基、芳基C1- C3烷基、卤素、C1-C3卤代烷基、C1-C3卤代烷基氨基及羟基；
[0049] R4选自氢、C1-C3烷氧基、C1-C3烷氧基羰基氨基、C1-C3烷基、C1-C3烷基氨基、C1-C3烷基 羰基氨基、氨基、芳基氨基、芳基羰基氨基、C3-C6环烷基氨基、C3-C6环烷基羰基氨基、 C3-C6环烷氧基、卤素、C1-C3卤代烷氧基、C2-C3卤代烷基氨基、C2-C3卤代烷基羰基氨基及 羟基；
[0050] R5选自氢、C1-C3烷基、氰基、C3环烷基及卤素；
[0051] R6选自氢、C1-C3烷基、C1-C3烷基羰基氨基、氨基；
[0052] Rx是氢或卤素；
[0053] R7选自氢、C1-C3烷氧基、C1-C3烷基、氰基、-CH2OH、-CH2OCH3、CH(CH3)OH、 C(CH3)2OH、x 7卤素、C1-C3卤代烷氧基及C1-C3卤代烷基；条件是当R为氢时，R为C1-C3卤代烷氧基；
[0054] R8选自氢、C1-C3烷氧基、氰基及卤素；
[0055] Rz及Ry与其所连接的氮原子一起形成三至六元环；且
[0056] Y选自：
[0057]
[0058] 其中R9选自氢、C1-C6烷基、C3-C6环烷基及C1-C6烷基羰基；
[0059] n为0、1、2或3；
[0060] 各R10独立地选自氢、C1-C6烷基、芳基、芳基C1-C3烷基、C3-C6环烷基、卤素及C1-C3卤 代烷基；且
[0061] 各R11独立地选自氢、C1-C3烷氧基及羟基。
[0062] 在第三方面的第一实施方案中，本公开提供式(III)化合物或其药学上可接受的盐，其中R1及R2为氢，R3为C2-C8烷基，其中所述C2-C8烷基任选被一个氨基取代；R4选自C1-C3烷氧基羰基氨基，C1-C3烷基羰基氨基及氨基；
[0063] R5为氢；
[0064] R6为氢；
[0065] Rx为氢或卤素；
[0066] R7选自氢及C1-C3卤代烷氧基, 条件是当Rx为氢时，R7为C1-C3卤代烷氧基；且[0067] R8选自氢。
[0068] 在第四方面中，本公开提供一种组合物，其包含药学上可接受的量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐及药学上可接受的载体。
[0069] 在第五方面中，本公开提供一种组合物，其包含药学上可接受的量的式(III)化合物或其药学上可接受的盐及药学上可接受的载体。
[0070] 在第六方面中，本公开提供一种抑制衔接子结合激酶1(AAK1)活性的方法，其包括使AAK1与式(I)化合物或其药学上可接受的盐接触。
[0071] 在第七方面中，本公开提供一种抑制衔接子结合激酶1(AAK1)活性的方法，其包括使AAK1与式(III)化合物或其药学上可接受的盐接触。
[0072] 在第八方面中，本公开提供一种治疗或控制由AAK1活性介导的疾病或病症的方法，该方法包括向需要其的患者给予治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在第八方面的第一实施方案中，该疾病或病症选自阿尔茨海默氏病、躁郁症、疼痛、帕金森氏病及精神分裂症。在第八方面的第二实施方案中，疼痛为神经性疼痛。在第八方面的第三实施方案中，神经性疼痛为纤维肌痛或周围神经病。
[0073] 在第九方面中，本公开提供一种治疗或控制由AAK1活性介导的疾病或病症的方法，该方法包含给与有需要的患者治疗有效量的式(III)化合物或其药学上可接受的盐。在第九方面的第一实施方案中，所述疾病或病症选自阿尔茨海默氏病、躁郁症、疼痛、帕金森氏病及精神分裂症。在第九方面的第二实施方案中，所述疼痛为神经性疼痛。在第九方面的第三实施方案中，所述神经性疼痛为纤维肌痛或周围神经病。
[0074] 本公开的其它方面可包括本文中所公开的实施方案的合适组合。
[0075] 其它方面及实施方案可见于本文所提供的描述中。
[0076] 附图简述
[0077] 图1说明本公开的各方面，该图显示自使用纯合(-/-)AAK1敲除小鼠及其野生型(+/+)同窝出生者的福尔马林疼痛模型获得的结果。纯合(-/-)AAK1敲除小鼠显示相较于其野生型(+/+)同窝出生者急性与持续性疼痛反应均明显减少。
[0078] 本公开部分基于AAK1敲除小鼠对疼痛展现高抗性的发现。这一发现促成最终导致发现AAK1抑制剂、包含其的组合物及其使用方法的研究。
[0079] 本文中，本公开的描述应理解为符合化学键结的规则及原理。在一些情况下，可能需要移除氢原子以在任何给定位置上容纳取代基。
[0080] 应了解，本公开所涵盖的化合物为适当地稳定而可用作药剂的化合物。
[0081] 意图在分子中的特定位置处的任何取代基或变量的定义与其在该分子中的其它位置处的定义无关。例如，当n为2时，两个R10基团各自可相同或不同。
[0082] 本说明书中所引用的所有专利、专利申请及参考文献均以全文引用的方式并入本文。在不一致的情况下，以本公开(包括定义)为准。
[0083] 除非上下文另外明确规定，否则如本文中所用的单数形式“一”及“该”包括复数指代。
[0084] 在一些情况下，在任何特定基团的描述前示出该基团中的碳原子数。举例而言，术语“C1-6烷基”表示含有一至六个碳原子的烷基。若存在这种命名，则其居先于本文所含的所有其它定义。
[0085] 本公开化合物中可存在不对称中心。应了解，本公开涵盖所有立体化学异构形式或其混合物，其具有抑制AAK1的能力。化合物的独立的立体异构体可由含有手性中心的市售起始物质以合成方式制备，或通过制备对映异构产物的混合物继而分离(诸如转化为非对映异构体的混合物继而分离或重结晶、层析技术或直接在手性层析柱上分离对映异构体)来制备。具有特定立体化学的起始化合物可购得或可通过本领域中已知的技术来制备和拆分。
[0086] 本公开的某些化合物也可以以可分离的不同稳定构象形式存在。归因于例如由于位阻或环应力而产生的围绕不对称单键的限制性旋转的扭转不对称性可允许分离不同构象异构体。本公开包括这些化合物的各构象异构体及其混合物。
[0087] 术语“本公开化合物”及等效表述意欲涵盖式(I)化合物及其药学上可接受的对映异构体、非对映异构体及盐。类似地，若上下文允许，则提及中间体意欲涵盖其盐。
[0088] 本公开意欲包括本公开化合物中存在的原子的所有同位素。同位素包括具有相同原子序数、但不同质量数的那些原子。举一般实例且不加以限制，氢的同位素包括氘及氚。碳的同位素包括13C及14C。经同位素标记的本公开化合物一般可通过本领域技术人员已知的常规技术或通过类似于本文所述的那些的方法使用适当的经同位素标记的试剂替代另外使用的未经标记的试剂来制备。此类化合物可具有各种可能用途，例如在测定生物活性时作为标准物及试剂。在稳定同位素的情况下，此类化合物可具有有利地修改生物学、药理学或药物动力学特性的潜能。
[0089] 本公开化合物可以以药学上可接受的盐形式存在。如本文所用的术语“药学上可接受的盐”表示本公开化合物的可溶解或分散于水或油的盐或两性离子形式，其在合理医学判断范畴内适于与患者的组织接触使用而无过度毒性、刺激、过敏反应或其它问题或并发症，与合理的效益/风险比相符，且对于其预期用途为有效的。这种盐可在化合物的最终分离及纯化期间制备或分别地通过使合适的氮原子与合适的酸反应来制备。代表性酸加成盐包括乙酸盐、己二酸盐、褐藻酸盐、柠檬酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐；二葡糖酸盐、二氢溴酸盐、二盐酸盐、二氢碘酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、甲酸盐、反丁烯二酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟基乙磺酸盐、乳酸盐、顺丁烯二酸盐、均三甲苯磺酸盐、甲磺酸盐、萘磺酸盐(naphthylenesulfonate)、烟酸盐、2-萘磺酸盐、草酸盐、双羟萘酸盐(palmoate)、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、丁二酸盐、酒石酸盐、三氯乙酸盐、三氟乙酸盐、磷酸盐、谷氨酸盐、碳酸氢盐、对甲苯磺酸盐及十一烷酸盐。可用于形成药学上可接受的加成盐的酸的实例包括无机酸，诸如盐酸、氢溴酸、硫酸及磷酸；及有机酸，诸如草酸、顺丁烯二酸、丁二酸及柠檬酸。
[0090] 碱加成盐可在化合物的最终分离及纯化期间通过使羧基与合适的碱(诸如金属阳离子的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐)或与氨或有机伯、仲或叔胺反应来制备。药学上可接受的盐的阳离子包括锂、钠、钾、钙、镁及铝，以及无毒季胺阳离子，诸如铵、四甲铵、四乙铵、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、二乙胺、乙胺、三丁胺、吡啶、N,N-二甲基苯胺、N-甲基哌啶、N-甲基吗啉、二环己胺、普鲁卡因(procaine)、二苄基胺、N,N-二苄基苯乙胺及N,N'-二苄基乙二胺。可用于形成碱加成盐的其它代表性有机胺包括乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、哌啶及哌嗪。
[0091] 本公开的一个实施方案涵盖体外与体内抑制衔接子结合激酶1(AAK1)的方法，其包括使AAK1与式I化合物或其药学上可接受的盐接触。
[0092] 当有可能将治疗有效量的式(I)化合物以及其药学上可接受的盐作为化学原料给药以用于治疗时，可以以药物组合物形式提供活性成分。因此，本公开进一步提供药物组合物，其包括治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐及一或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。除非另外指明，否则化合物的“治疗有效量”为在治疗或控制疾病或病状中足以提供治疗益处、或延缓或最小化一或多种与该疾病或病状有关的症状的量。术语“治疗有效量”可涵盖改善总体治疗、减少或避免疾病或病症的症状或原因、或提高另一治疗剂的治疗功效的量。
[0093] 如本文所用的术语“治疗有效量”指在治疗或控制疾病或病状中足以提供治疗益处、或延缓或最小化一或多种与该疾病或病状有关的症状的一种化合物或多种化合物的量。化合物的“治疗有效量”意指单独或与其它治疗组合的治疗剂在治疗或控制疾病或病状中提供治疗益处的量。术语“治疗有效量”可涵盖改善总体治疗、减少或避免疾病或病状的症状或原因、或提高另一治疗剂的治疗功效的量。当应用于单独给予的单个活性成分时，该术语仅指该成分。当应用于组合时，该术语指产生治疗作用的活性成分的组合量，而无论是组合、连续还是同时给予这些活性成分。式(I)化合物及其药学上可接受的盐如上所述。载体、稀释剂或赋形剂必须在与制剂的其它成分兼容且对其接受者无害的意义上为可接受的。根据本公开的另一方面，还提供一种制备药物制剂的方法，其包括混合式(I)化合物或其药学上可接受的盐与一或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。如本文所用的术语“药学上可接受的”指这些化合物、材料、组合物和/或剂型在合理医学判断范畴内适于与患者的组织接触使用而无过度毒性、刺激、过敏反应或其它问题或并发症，与合理的效益/风险比相符，且对于其预期用途为有效的。
[0094] 药物制剂可以以每单位剂量含有预定量的活性成分的单位剂型提供。每天约0.01毫克至约250毫克/千克体重(“mg/kg”)、优选每天约0.05 mg至约100 mg/kg体重的本公开化合物的剂量水平为预防及治疗疾病的单一疗法中的典型剂量。通常，本公开的药物组合物每天给药约1至约5次，或者以连续输注方式给药。此类给药可用作长期或短期治疗。可与载体材料合并以产生单一剂型的活性成分的量将根据所治疗的病状、病状的严重性、给药时间、给药途径、所用化合物的排泄率、治疗持续时间及患者的年龄、性别、体重及健康状况而变化。优选的单位剂量制剂为含有如上文所述的日剂量或亚剂量或其适当分数的活性成分的那些制剂。可以以实质上小于最佳剂量的小剂量的化合物开始治疗。此后，以小增量增加剂量直至达到这种情况下的最佳效果。一般而言，化合物最适宜以一般将提供有效结果但不会导致任何有害或不利副作用的浓度水平给药。
[0095] 当本公开组合物包含本公开化合物与一或多种其它治疗性或预防性药剂的组合时，所述化合物与所述其它药剂通常以单一治疗方案中通常所给予剂量的约10%至150%且更优选约10%至80%的剂量水平来提供。
[0096] 本公开化合物可与一或多种其它治疗性或预防性药剂组合给药。举例而言，当用于治疗疼痛时，可能的其它药剂包括免疫抑制剂、抗炎剂和/或用于治疗疼痛的其它药剂。
[0097] 适用于本公开的方法及组合物的免疫抑制剂包括本领域中已知的免疫抑制剂。实例包括氨基喋呤(aminopterin)、硫唑嘌呤(azathioprine)、环孢素A(cyclosporin A)、D-青霉胺(D-penicillamine)、金盐、羟氯喹(hydroxychloroquine)、来氟米特(leflunomide)、甲氨蝶呤(methotrexate)、米诺环素(minocycline)、雷帕霉素(rapamycin)、柳氮磺吡啶(sulfasalazine)、他克莫司(tacrolimus)(FK506)及其药学上可接受的盐。特定免疫抑制剂为甲氨蝶呤。
[0098] 免疫抑制剂的其它实例包括抗TNF抗体，诸如阿达木单抗(adalimumab)、赛妥珠单抗(certolizumab pegol)、依那西普(etanercept)及英利昔单抗(infliximab)。其它免疫抑制剂包括白介素-1阻断剂，诸如阿那白滞素(anakinra)。其它免疫抑制剂包括抗B细胞(CD20)抗体，诸如利妥昔单抗(rituximab)。其它免疫抑制剂包括T细胞活化阻断剂，诸如阿巴西普(abatacept)。
[0099] 其它免疫抑制剂包括肌苷单磷酸脱氢酶抑制剂，诸如吗替麦考酚酯(CellCept®)及霉酚酸(Myfortic®)。
[0100] 适用于本公开的方法及组合物的抗炎药包括本领域中已知的抗炎药。实例包括糖皮质激素及NSAID。糖皮质激素的实例包括醛固酮(aldosterone)、倍氯米松(beclometasone)、倍他米松(betamethasone)、皮质酮(cortisone)、脱氧皮质酮(deoxycorticosterone)、地塞米松(dexamethasone)、氟氢可的松(fludrocortisone)、氢化可的松(hydrocortisone)、甲基泼尼松龙(methylprednisolone)、泼尼松龙
(prednisolone)、泼尼松(prednisone)、曲安西龙(triamcinolone)及其药学上可接受的盐。
(prednisolone)、泼尼松(prednisone)、曲安西龙(triamcinolone)及其药学上可接受的盐。
[0101] NSAID的实例包括水杨酸盐(例如阿司匹林(aspirin)、阿莫西林(amoxiprin)、贝诺酯(benorilate)、水杨酸胆碱镁、二氟尼柳(diflunisal)、法斯拉胺(faislamine)、水杨酸甲酯、水杨酸镁、水杨酸水杨酯及其药学上可接受的盐)、芳基烷酸(例如双氯芬酸(diclofenac)、醋氯芬酸(aceclofenac)、阿西美辛(acemetacin)、溴芬酸(bromfenac)、依托度酸(etodolac)、吲哚美辛(indometacin)、萘丁美酮(nabumetone)、舒林酸(sulindac)、托美丁(tolmetin)及其药学上可接受的盐)、芳基丙酸(例如布洛芬(ibuprofen)、卡洛芬(carprofen)、芬布芬(fenbufen)、非诺洛芬(fenoprofen)、氟比洛芬(flurbiprofen)、酮洛芬(ketoprofen)、酮洛酸(ketorolac)、洛索洛芬(loxoprofen)、萘普生(naproxen)、奥沙普嗪(oxaprozin)、噻洛芬酸(tiaprofenic acid)、舒洛芬(suprofen)及其药学上可接受的盐)、芳基邻氨基苯甲酸(例如甲氯芬那酸(meclofenamic acid)、甲芬那酸(mefenamic acid)及其药学上可接受的盐)、吡唑烷衍生物(例如阿扎丙宗(azapropazone)、安乃近(metamizole)、羟布宗(oxyphenbutazone)、苯基丁氮酮(phenylbutazone)、磺吡酮(sulfinprazone)及其药学上可接受的盐)、昔康类(oxicams)(例如氯诺昔康(lornoxicam)、美洛昔康(meloxicam)、吡罗昔康(piroxicam)、替诺昔康(tenoxicam)及其药学上可接受的盐)、COX-2抑制剂(例如塞来昔布(celecoxib)、依托昔布(etoricoxib)、罗美昔布(lumiracoxib)、帕瑞昔布(parecoxib)、罗非昔布(rofecoxib)、伐地昔布(valdecoxib)及其药学上可接受的盐)及磺酰苯胺类(sulphonanilides)(例如尼美舒利(nimesulide)及其药学上可接受的盐)。
[0102] 用于治疗疼痛(包括(但不限于)神经性疼痛及炎性疼痛)的其它药剂包括(但不限于)如下药剂：例如普瑞巴林(pregabalin)、利多卡因(lidocaine)、度洛西汀(duloxetine)、加巴喷丁(gabapentin)、卡马西平(carbamazepine)、辣椒碱(capsaicin)及其它血清素/去甲肾上腺素/多巴胺再摄取抑制剂，及鸦片剂(诸如奥施康定(oxycontin)、吗啡(morphine)及可待因(codeine))。
[0103] 在治疗由已知疾病或病状(诸如糖尿病、感染(例如带状疱疹或HIV感染)或癌症)引起的疼痛中，本公开化合物可与一或多种针对潜在疾病或病状的其它治疗性或预防性药剂组合给药。举例而言，当用于治疗糖尿病性神经病时，本公开化合物可与一或多种抗糖尿病剂、抗高血糖剂、降血脂/降脂剂、减肥剂、抗高血压剂及食欲抑制剂组合给药。抗糖尿病剂的实例包括双胍类(例如二甲双胍(metformin)、苯乙双胍(phenformin))、葡糖苷酶抑制剂(例如阿卡波糖(acarbose)、米格列醇(miglitol))、胰岛素(包括胰岛素促泌素及胰岛素增敏剂)、美格列奈(meglitinide)(例如瑞格列奈(repaglinide))、磺酰脲类(sulfonylureas)(例如格列美脲(glimepiride)、格列本脲(glyburide)、格列齐特(gliclazide)、氯磺丙脲(chlorpropamide)及格列吡嗪(glipizide))、双胍/格列本脲组合(例如格鲁瓦斯(Glucovance))、噻唑烷二酮类(thiazolidinediones)(例如曲格列酮(troglitazone)、罗格列酮(rosiglitazone)及吡格列酮(pioglitazone))、PPAR-α激动剂、PPAR-γ激动剂、PPAR α/γ双重激动剂、糖原磷酸化酶抑制剂、脂肪酸结合蛋白(aP2)的抑制剂、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)或GLP-1受体的其它激动剂、二肽基肽酶IV(DPP4)抑制剂及钠-葡萄糖共转运体2(SGLT2)抑制剂(例如达格列净(dapagliflozin)、卡格列净(canagliflozin)及LX-4211)。
[0104] 药物制剂可适合通过任何适当途径给药，例如通过经口(包括颊内或舌下)、经直肠、经鼻、局部(包括颊内、舌下或经皮)、经阴道或胃肠外(包括皮下、皮内、肌肉内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、病灶内、静脉内或皮内注射或输注)途径。此类制剂可通过药剂学领域中已知的任何方法(例如，通过使活性成分与载体或赋形剂结合)来制备。优选经口给药或注射给药。
[0105] 适合于经口给药的药物制剂可呈离散单位形式，诸如胶囊或片剂；粉末或颗粒；水性或非水性液体中的溶液或悬浮液；可食用泡沫或搅打泡沫(whips)；或水包油型液体乳液或油包水型乳液。
[0106] 举例而言，为了呈片剂或胶囊的形式经口给药，可将活性药物组分与口服无毒的药学上可接受的惰性载体(诸如乙醇、甘油、水等)合并。通过将化合物粉碎至合适细度且与类似经粉碎的药物载体(诸如可食用碳水化合物，例如淀粉或甘露糖醇)混合来制备粉末。还可包含调味剂、防腐剂、分散剂及着色剂。
[0107] 通过如上所述制备粉末混合物且填充成型的明胶外壳来制备胶囊。在填充操作之前，可将助流剂及润滑剂(诸如胶体二氧化硅、滑石、硬脂酸镁、硬脂酸钙或固体聚乙二醇)添加至粉末混合物中。也可添加崩解剂或增溶剂(诸如琼脂、碳酸钙或碳酸钠)以改良摄取胶囊时药物的可利用性。
[0108] 此外，有必要或需要时，还可将合适的粘合剂、润滑剂、崩解剂及着色剂并入混合物中。合适的粘合剂包括淀粉、明胶、天然糖(诸如葡萄糖或β-乳糖)、玉米甜味剂、天然胶及合成胶(诸如阿拉伯胶、黄蓍胶或褐藻酸钠)、羧甲基纤维素、聚乙二醇等。用于这些剂型的润滑剂包括油酸钠、氯化钠等。崩解剂包括(但不限于)淀粉、甲基纤维素、琼脂、膨润土、黄原胶等。例如通过制备粉末混合物、粒化或击压、添加润滑剂及崩解剂且压成片剂来配制片剂。通过将经适当粉碎的化合物与上述稀释剂或基质混合且任选地与粘合剂(诸如羧甲基纤维素、褐藻酸盐、明胶或聚乙烯基吡咯烷酮)、溶解延迟剂(诸如石蜡)、再吸收促进剂(诸如季盐)和/或吸收剂(诸如膨润土、高岭土或磷酸氢钙)混合来制备粉末混合物。粉末混合物可通过用粘合剂(诸如糖浆、淀粉糊、阿卡迪亚粘液(acadia mucilage)、或纤维素或聚合材料的溶液)润湿且迫使其穿过筛网来粒化。作为粒化的替代方法，可使粉末混合物穿过压片机且结果为不完全成形的击压物裂解为颗粒。可借助于添加硬脂酸、硬脂酸盐、滑石或矿物油来润滑颗粒以防止粘附于片剂成形模具。随后，将经润滑的混合物压制成片剂。也可将本公开化合物与自由流动性惰性载体合并且不经粒化或击压步骤直接压制成片剂。可提供由虫胶的密封包衣、糖或聚合材料的包衣及蜡的抛光包衣组成的透明或不透明保护包衣。可将染料添加至此类包衣中以区分不同单位剂量。
[0109] 可以以单位剂型制备口服液(诸如溶液、糖浆及酏剂)以使得给定量含有预定量的化合物。糖浆可通过将化合物溶解于经适当调味的水溶液中来制备，而酏剂经由使用无毒媒介物来制备。还可添加增溶剂及乳化剂(诸如乙氧基化异硬脂醇及聚氧乙烯山梨糖醇醚)、防腐剂、调味添加剂(诸如薄荷油或天然甜味剂，或糖精或其它人工甜味剂)等。
[0110] 适当时，用于经口给药的剂量单位制剂可经微胶囊化。也可例如通过包衣或包埋微粒物质于聚合物、蜡等中来制备制剂以延长或持续释放。
[0111] 式(I)化合物及其药学上可接受的盐也可以以脂质体递送系统(诸如小单层囊泡、大单层囊泡及多层囊泡)的形式给药。脂质体可由各种磷脂(诸如胆固醇、硬脂胺或磷脂酰基胆碱)形成。
[0112] 式(I)化合物及其药学上可接受的盐也可通过使用单克隆抗体作为与化合物分子偶合的独立载体来递送。所述化合物也可与作为可靶向药物载体的可溶性聚合物偶合。这些聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羟基丙基甲基丙烯酰胺酚、聚羟基乙基天冬酰胺酚或经棕榈酰基残基取代的聚氧化乙烯聚赖氨酸。此外，所述化合物可与一类可用于实现药物受控释放的可生物降解聚合物偶合，这类聚合物例如为聚乳酸、聚ε己内酯、聚羟基丁酸、聚原酸酯、聚缩醛、聚二氢吡喃、聚氰基丙烯酸酯及水凝胶的交联或两亲性嵌段共聚物。
[0113] 适合于经皮给药的药物制剂可以以意欲与接受者的表皮保持紧密接触较长时段的离散贴片形式提供。举例而言，活性成分可通过如Pharmaceutical Research 1986, 3(6), 318中大体描述的离子电渗疗法自贴片递送。
[0114] 适合于局部给药的药物制剂可配制成软膏、乳膏、悬浮液、洗剂、粉末、溶液、糊状物、凝胶、喷雾剂、气雾剂或油剂。
[0115] 适合于经直肠给药的药物制剂可以以栓剂形式或以灌肠剂形式提供。
[0116] 适合于经鼻给药的药物制剂(其中载体为固体)包括粒径例如在20至500微米范围内的粗粉末，其以用鼻吸气的方式给药，即通过自贴近鼻子固持的粉末容器经由鼻孔快速吸入来给药。用于以经鼻喷雾剂或滴鼻剂形式给药的合适的制剂(其中载体为液体)包括活性成分的水溶液或油溶液。
[0117] 适合于通过吸入给药的药物制剂包括细粒粉末或雾状物，其可借助于各种类型的计量剂量加压气雾器、雾化器或吹入器而产生。
[0118] 适合于经阴道给药的药物制剂可以以子宫托、棉塞、乳膏、凝胶、糊状物、泡沫剂或喷雾制剂形式提供。
[0119] 适合于胃肠外给药的药物制剂包括可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂及使得制剂与预定接受者的血液等渗的溶质的水性及非水性无菌注射溶液；及可包括悬浮剂及增稠剂的水性及非水性无菌悬浮液。制剂可于单位剂量或多剂量容器(例如密封安瓿及小瓶)中提供，且可储存于冷冻干燥(冻干)条件下，仅需要在临使用前添加无菌液体载体(例如注射用水)。临时注射溶液及悬浮液可自无菌粉末、颗粒及片剂制备。
[0120] 应了解，除以上特别提及的成分以外，考虑到所述制剂的类型，制剂还可包括本领域中常规的其它试剂，例如适用于经口给药的制剂可包括调味剂。
[0121] 术语“患者”包括人类与其它哺乳动物。除非另外指明，否则术语“控制”涵盖防止已患有指定疾病或病症的患者的该疾病或病症复发，和/或延长已患有疾病或病症的患者保持缓解的时间。这些术语涵盖调节疾病或病症的临界值、发展和/或持续时间，或改变患者对疾病或病症作出反应的方式。
[0122] 术语“治疗”是指：(i)防止可能易患某一疾病、病症和/或病状但尚未被诊断为患有该疾病、病症和/或病状的患者的该疾病、病症或病状出现；(ii)抑制该疾病、病症或病状，即，使其发展停滞；及(iii)缓解该疾病、病症或病状，即，使该疾病、病症和/或病状消退。
[0123] 本公开意欲涵盖通过合成方法或通过代谢过程(包括在人类或动物体内(体内)进行的代谢过程或在体外进行的代谢过程)制备的具有式(I)的化合物。
[0124] 本申请、尤其包括以下说明性方案及实施例中所用的缩写为本领域技术人员所熟知的。使用的一些缩写如下：RT或rt或r.t.为室温；tR为保留时间；min或mins为分钟；h或hr或hrs为小时；MeOD为CD3OD；THF为四氢呋喃；ACN或MeCN为乙腈；DCM为二氯甲烷；MeOH为甲醇；EtOH为乙醇；t-BuOH为叔丁醇，DMSO为二甲亚砜；DMF为N,N-二甲基甲酰胺；EtOAc为乙酸乙酯；BOC或Boc为叔丁氧基羰基；Me为甲基；Et为乙基；Cyc-Pr为环丙基；phth为酞酰基；Ac为乙酰基；Ph为苯基；DPPA为二苯基磷酰基叠氮化物；Et3N或TEA为三乙胺；n-BuLi为正丁基锂；TFA为三氟乙酸；NBS为N-溴琥珀酰亚胺；NCS为N-氯琥珀酰亚胺；NIS为N-碘琥珀酰亚胺；DEA为二乙胺；LDA为二异丙基氨基锂；LAH为氢化锂铝；DBU为1,8-二氮杂双环十一碳-7-烯；
DMAP为N,N-二甲基氨基吡啶；DPPF或dppf为1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁；LDA为二异丙基氨基锂；NBS为N-溴琥珀酰亚胺；TMS为三甲基甲硅烷基；TBAF为氟化四丁铵；NCS为N-氯琥珀酰亚胺；TFA为三氟乙酸；NIS为N-碘琥珀酰亚胺；且Ac为乙酰基。
实施例
DMAP为N,N-二甲基氨基吡啶；DPPF或dppf为1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁；LDA为二异丙基氨基锂；NBS为N-溴琥珀酰亚胺；TMS为三甲基甲硅烷基；TBAF为氟化四丁铵；NCS为N-氯琥珀酰亚胺；TFA为三氟乙酸；NIS为N-碘琥珀酰亚胺；且Ac为乙酰基。
实施例
[0125] 本公开现将结合某些实施方案进行描述，这些实施方案不欲限制其范围。相反地，本公开涵盖可包括于权利要求范围内的所有替代、修改及等效形式。因此，以下实施例(包括特定实施方案)将说明本公开的一种实施方式，应了解这些实施例是用于说明某些实施方案的目的，且呈现以提供据信对其程序及概念性方面最有用及易于理解的描述。
[0126] 本公开化合物可使用此部分中所述的反应及技术以及本领域普通技术人员已知的其它合成方法制备。这些反应在适合于所用试剂及材料且适合于实现转化的溶剂中进行。此外，在描述下述合成方法时，应了解所提出的所有反应条件(包括所选溶剂、反应温度、实验持续时间及后处理程序)经选择为该反应的标准条件，其应易于由本领域技术人员所识别。有机合成领域的技术人员应了解，分子各部分上所存在的官能团必须与所提出的试剂及反应兼容。这些对于与反应条件兼容的取代基的限制将为本领域技术人员所显而易见，且因此必须使用替代方法。
[0127] 式6的化合物(其中R1及R2为H、烷基、环烷基或烯基)通过方案1中所概述的方法制备。可在环境温度下用经适当取代的炔丙基卤化物烷基化适当的苯酚钠，得到所要的炔丙基醚2。2中的醛官能团与适当的维蒂希试剂(Wittig reagent)发生维蒂希反应(Wittig reaction)可形成呈E型、Z型异构体的混合物形式的所要烯烃，其中E-异构体为主产物。由此获得的α,β-不饱和醛异构混合物3可通过在溶剂(诸如二氯甲烷)中在脱水剂(诸如MgSO4)存在下与1,1-二甲基肼反应而转化为腙衍生物4。由此获得的粗腙4可在自由基清除剂(诸如2,6-二-叔丁基-4-甲基酚)存在下在溶剂(诸如均三甲苯)中进行分子内[4 + 2]环加成反应(Dolle, R.E.等人, Tetrahedron Lett. 1988, 29, 6349-6352)，得到环化产物5。5中的溴可通过在钯催化的偶合反应中使用本领域技术人员熟知的反应条件按照诸如Gowrisankar等人, J. Am. Chem. Soc. 2010, 132, 11592-11598所述的程序与醇反应而被置换。出于自溴化物5制备由6表示的醚的目的，可用Protective Groups in Organic Synthesis (Greene, Wuts；第3版, 1999, John Wiley & Sons, Inc.)中所述的适当保护基试剂保护R3OH中能够干扰Pd偶合反应的任何其它官能基。这些保护基可随后通过以上相同参考文献中所述的方法去保护(unmasked)。举例而言，氨基可保护为邻苯二甲酰亚胺基衍生物，在Pd偶合反应得到7后，该衍生物可如方案1所示通过在乙醇中用肼处理去保护，得到8。
[0128] 方案1
[0129]
[0130] 式17的化合物(其中R1为H、烷基、烯基，R5为H、卤素、CN，且R3为H、烷基、环烷基)通过方案2中所概述的方法来制备。如Knutsen, L.等人(Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 2007, 17, 662-667)所述，4-溴吡啶或4-氯吡啶盐酸盐可用碱(诸如二异丙基氨基锂)进行碱介导的甲酰基化反应，得到相应的3-甲酰基吡啶。如Zhang, Lei等人(Journal of Medicinal Chemistry, 2011, 54, 1724-1739)所述，如此获得的醛9可与适当的偶合配偶物(诸如氟硼酸11)在标准铃木条件(Suzuki condition)下使用碱(诸如碳酸铯)及催化剂(诸如Pd(PPh3)4)进行铃木交叉偶合反应(Suzuki cross coupling reaction)。联芳基醛10可随后用标准还原剂(诸如硼氢化钠)还原为相应伯醇12(R1 = H)。为形成仲醇12(R1 =烷基、环烷基或烯基)，可在低温下在溶剂(诸如无水四氢呋喃)中用适当格氏试剂(Grignard reagent)处理醛10(先前由Itoh, Toshiyuki等人,Chemistry-A European Journal, 2006, 12, 9228-9237及Zhang等人, Tetrahedron Lett., 2010,
51, 3927-3930描述)。伯或仲醇12在惰性氛围下于溶剂(诸如THF)中用氢化物源(诸如氢化钠)处理后可得到限制性经卤素取代的核心13。在由式13表示的化合物中，经烯基取代(R1 =乙烯基)的化合物可使用标准氢化条件(诸如在氢气氛围下用钯/碳处理)来氢化，得到相应的经烷基取代的类似物。式13的化合物可随后按照诸如由Gowrisankar等人(J. Am. Chem. Soc. 2010, 132, 11592-11598)描述的程序进行钯催化的醚合成(包括本领域技术人员熟知的反应条件)。可使用经适当保护的光学纯(S)或(R)-氨基醇进行反应，得到光学纯醚14。式15的化合物(其中R5为卤素)可通过用卤化剂(根据情况可诸如为N-溴琥珀酰胺、N-氯琥珀酰胺或N-碘琥珀酰胺)处理14来制备。式16的化合物(其中R5为氰基)可由相应卤代化合物经由铜催化的偶合反应制备，反应条件为本领域技术人员所熟知(J.E. Callen, Organic syntheses, CV 3, 1955, 212)。或者，可在20℃至150℃范围内的温度下，在催化剂(诸如Pd(PPh3)4、Pd2(dba)3或PdCl2(PPh3)2)存在下，在有或无配体(诸如DPPF)的情况下，在溶剂(诸如甲苯、二氯乙烷、THF、DMF、甲醇、乙醇、水或其组合)中用氰化锌经由标准根岸偶合条件(Negishi coupling condition)引入氰基。为了自氯化物13制备由14表示的醚、或自卤化物15制备由16表示的氰化物，可用Protective Groups in Organic Synthesis (Greene, Wuts；第3版, 1999, John Wiley & Sons, Inc.)中所述的适当保护基试剂保护R3OH中能够干扰Cu或Pd偶合反应的任何其它官能基。这些保护基可随后通过以上相同参考文献中所述的方法去保护。如此获得的非对映异构混合物可使用制备型手性HPLC或制备型手性SFC技术拆分。
51, 3927-3930描述)。伯或仲醇12在惰性氛围下于溶剂(诸如THF)中用氢化物源(诸如氢化钠)处理后可得到限制性经卤素取代的核心13。在由式13表示的化合物中，经烯基取代(R1 =乙烯基)的化合物可使用标准氢化条件(诸如在氢气氛围下用钯/碳处理)来氢化，得到相应的经烷基取代的类似物。式13的化合物可随后按照诸如由Gowrisankar等人(J. Am. Chem. Soc. 2010, 132, 11592-11598)描述的程序进行钯催化的醚合成(包括本领域技术人员熟知的反应条件)。可使用经适当保护的光学纯(S)或(R)-氨基醇进行反应，得到光学纯醚14。式15的化合物(其中R5为卤素)可通过用卤化剂(根据情况可诸如为N-溴琥珀酰胺、N-氯琥珀酰胺或N-碘琥珀酰胺)处理14来制备。式16的化合物(其中R5为氰基)可由相应卤代化合物经由铜催化的偶合反应制备，反应条件为本领域技术人员所熟知(J.E. Callen, Organic syntheses, CV 3, 1955, 212)。或者，可在20℃至150℃范围内的温度下，在催化剂(诸如Pd(PPh3)4、Pd2(dba)3或PdCl2(PPh3)2)存在下，在有或无配体(诸如DPPF)的情况下，在溶剂(诸如甲苯、二氯乙烷、THF、DMF、甲醇、乙醇、水或其组合)中用氰化锌经由标准根岸偶合条件(Negishi coupling condition)引入氰基。为了自氯化物13制备由14表示的醚、或自卤化物15制备由16表示的氰化物，可用Protective Groups in Organic Synthesis (Greene, Wuts；第3版, 1999, John Wiley & Sons, Inc.)中所述的适当保护基试剂保护R3OH中能够干扰Cu或Pd偶合反应的任何其它官能基。这些保护基可随后通过以上相同参考文献中所述的方法去保护。如此获得的非对映异构混合物可使用制备型手性HPLC或制备型手性SFC技术拆分。
[0131] 方案2
[0132]
[0133] 式23的化合物通过方案3中所概述的方法来制备。4-氯吡啶吡啶3-甲酸17(其中R6 = H或烷基)可使用如Protective Groups in Organic Synthesis (Greene, Wuts；第3版, 1999, John Wiley & Sons, Inc.)中所述的方法转化为相应酯18。如Zhang, Lei等人(Journal of Medicinal Chemistry, 2011, 54, 1724-1739)所述，该酯可随后与适当的偶合配偶物(诸如氟硼酸11)在标准铃木条件下使用碱(诸如碳酸铯)及催化剂(诸如Pd(PPh3)4)进行铃木交叉偶合反应，得到由式19表示的化合物。联芳基酯19可在标准皂化条件下在溶剂(诸如甲醇、水、THF或其组合)中使用碱(诸如氢氧化钠或氢氧化锂)进行水解，得到相应羧酸20。该酸可随后在碱性条件下加热，得到内酯21。内酯可使用本领域技术人员熟知的反应条件按照诸如由Gowrisankar等人(J. Am. Chem. Soc. 2010, 132, 11592-
11598)描述的程序进行钯催化的醚合成。可使用经适当保护的光学纯(S)或(R)-氨基醇进行反应，得到光学纯醚。出于自卤化物21制备由22表示的醚的目的，可用Protective Groups in Organic Synthesis (Greene, Wuts； 第3版, 1999, John Wiley & Sons, Inc.)中所述的适当保护基试剂保护R3OH中能够干扰Pd偶合反应的任何其它官能基。式22的化合物(其中R5 =卤素)可通过使用卤化剂(诸如N-氯琥珀酰胺)卤化相应醚来制备。必要时，可使用如Protective Groups in Organic Synthesis (Greene, Wuts；第3版, 1999, John Wiley & Sons, Inc.)中所述的适当条件去除醚类似物侧链氨基的保护基，得到式23的化合物。
11598)描述的程序进行钯催化的醚合成。可使用经适当保护的光学纯(S)或(R)-氨基醇进行反应，得到光学纯醚。出于自卤化物21制备由22表示的醚的目的，可用Protective Groups in Organic Synthesis (Greene, Wuts； 第3版, 1999, John Wiley & Sons, Inc.)中所述的适当保护基试剂保护R3OH中能够干扰Pd偶合反应的任何其它官能基。式22的化合物(其中R5 =卤素)可通过使用卤化剂(诸如N-氯琥珀酰胺)卤化相应醚来制备。必要时，可使用如Protective Groups in Organic Synthesis (Greene, Wuts；第3版, 1999, John Wiley & Sons, Inc.)中所述的适当条件去除醚类似物侧链氨基的保护基，得到式23的化合物。
[0134] 方案3
[0135]
[0136] 式32及33的化合物(其中R6为NH2或NHAc)通过方案4中所概述的方法来制备。如Leslie等人(Australian Journal of Chemistry, 1982, 35, 2025-2034)所述，合成可以4-氯吡啶-2-甲酸24的库尔提斯重排(Curtius rearrangement)开始，得到N-Boc-2-氨基-
4-氯吡啶25。使用诸如由Charles等人(J. Med.Chem., 2010, 53, 3330-3348)描述的方法定向邻位金属化继而用二甲基甲酰胺处理可提供吡啶醛衍生物26。如Zhang, Lei等人(Journal of Medicinal Chemistry, 2011, 54, 1724-1739)所述，该醛可随后与适当偶合配偶物(诸如氟硼酸11)在标准铃木条件下使用碱(诸如碳酸铯)及催化剂(诸如Pd(PPh3)4)进行铃木交叉偶合反应，得到27。使用如Protective Groups in Organic Synthesis (Greene, Wuts；第3版, 1999, John Wiley & Sons, Inc.)中所述的适当条件移除胺上的保护基，继而由诸如硼氢化钠的试剂介导还原醛28(Eisai R&D Management Co., Ltd., 专利：EP1782811 A1, 2007)，可得到醇29。为形成仲醇29(R1 =烷基)，可在低温下在溶剂(诸如无水四氢呋喃)中用适当格氏试剂处理醛28(先前由Itoh, Toshiyuki等人, Chemistry-A European Journal, 2006, 12, 9228-9237及Zhang等人, Tetrahedron Lett., 2010, 51, 3927-3930描述)。由碱(诸如氢化钠)介导的环化可产生中间体30。在溶剂(诸如二氯甲烷)中在碱(诸如吡啶)存在下用乙酰氯进行碱催化的乙酰化可得到31。芳基氯31可随后使用本领域技术人员熟知的反应条件按照诸如由Gowrisankar等人(J. Am. Chem. Soc. 2010, 132, 11592-11598)描述的程序进行钯催化的醚合成，得到相应芳基醚。出于自卤化物31制备由32表示的醚的目的，可用Protective Groups in Organic Synthesis (Greene, Wuts； 第3版, 1999, John Wiley & Sons, Inc.)中所述的适当保
3
护基试剂保护R OH中能够干扰Pd偶合反应的任何其它官能基。可使用如相同参考文献中所述的适当条件实现保护基脱除，得到式32的化合物(其中R6为NHAc)。N-乙酰基可通过使用碱(诸如氢氧化钾)进行水解来脱除，得到式33的化合物(其中R6为NH2)。
4-氯吡啶25。使用诸如由Charles等人(J. Med.Chem., 2010, 53, 3330-3348)描述的方法定向邻位金属化继而用二甲基甲酰胺处理可提供吡啶醛衍生物26。如Zhang, Lei等人(Journal of Medicinal Chemistry, 2011, 54, 1724-1739)所述，该醛可随后与适当偶合配偶物(诸如氟硼酸11)在标准铃木条件下使用碱(诸如碳酸铯)及催化剂(诸如Pd(PPh3)4)进行铃木交叉偶合反应，得到27。使用如Protective Groups in Organic Synthesis (Greene, Wuts；第3版, 1999, John Wiley & Sons, Inc.)中所述的适当条件移除胺上的保护基，继而由诸如硼氢化钠的试剂介导还原醛28(Eisai R&D Management Co., Ltd., 专利：EP1782811 A1, 2007)，可得到醇29。为形成仲醇29(R1 =烷基)，可在低温下在溶剂(诸如无水四氢呋喃)中用适当格氏试剂处理醛28(先前由Itoh, Toshiyuki等人, Chemistry-A European Journal, 2006, 12, 9228-9237及Zhang等人, Tetrahedron Lett., 2010, 51, 3927-3930描述)。由碱(诸如氢化钠)介导的环化可产生中间体30。在溶剂(诸如二氯甲烷)中在碱(诸如吡啶)存在下用乙酰氯进行碱催化的乙酰化可得到31。芳基氯31可随后使用本领域技术人员熟知的反应条件按照诸如由Gowrisankar等人(J. Am. Chem. Soc. 2010, 132, 11592-11598)描述的程序进行钯催化的醚合成，得到相应芳基醚。出于自卤化物31制备由32表示的醚的目的，可用Protective Groups in Organic Synthesis (Greene, Wuts； 第3版, 1999, John Wiley & Sons, Inc.)中所述的适当保
3
护基试剂保护R OH中能够干扰Pd偶合反应的任何其它官能基。可使用如相同参考文献中所述的适当条件实现保护基脱除，得到式32的化合物(其中R6为NHAc)。N-乙酰基可通过使用碱(诸如氢氧化钾)进行水解来脱除，得到式33的化合物(其中R6为NH2)。
[0137] 方案4
[0138]
[0139] 式35的化合物(其中R5为卤素)通过方案5中所概述的方法来制备。由34表示的醚类似物可如方案2中制备且用卤化剂(诸如N-卤代琥珀酰胺)处理以在R5上安置卤素。使用如Protective Groups in Organic Synthesis (Greene, Wuts；第3版, 1999, John Wiley & Sons, Inc.)中所述的适当条件去除侧链氨基的保护基可得到由式33表示的化合物(其中R5为卤素)。
[0140] 方案5
[0141]
[0142] 式47的化合物通过方案6中所概述的方法来制备。可用溴化剂(诸如N-溴琥珀酰胺)处理4-氯吡啶-2-胺36，得到溴-氨基吡啶37。在溶剂(诸如二氯甲烷)中在碱(诸如吡啶)存在下用乙酰氯进行37的碱催化的乙酰化可得到酰基吡啶38。如Zhang, Lei等人(Journal of Medicinal Chemistry, 2011, 54, 1724-1739)所述，化合物38可与乙烯基硼酸酐在标准铃木条件下使用碱(诸如碳酸铯)及催化剂(诸如Pd(PPh3)4)进行铃木交叉偶合反应而安置乙烯基。乙烯基吡啶39可用氧化剂(诸如四氧化锇及过碘酸钠)在溶剂(诸如二噁烷及水)中进行氧化，得到醛40。如Zhang, Lei等人(Journal of Medicinal Chemistry, 2011, 54, 1724-1739)所述，如此获得的醛40可与适当偶合配偶物(诸如氟硼酸41)在标准铃木条件下使用碱(诸如碳酸铯)及催化剂(诸如Pd(PPh3)4)进行铃木交叉偶合反应。联芳基醛42可随后用标准还原剂(诸如硼氢化钠)还原为相应伯醇43(R1 = H)。为形成仲醇43(R1 =烷基、环烷基、烯基)，可在低温下在溶剂(诸如无水四氢呋喃)中用适当格氏试剂处理醛42(先前由Itoh, Toshiyuki等人, Chemistry-A European Journal, 2006, 12, 9228-9237及Zhang等人, Tetrahedron Lett., 2010, 51, 3927-3930描述)。在溶剂(诸如THF)中，在惰性氛围下，在环境温度下用碱(诸如氢化钠)处理化合物43、或在加热条件下用碱(诸如碳酸钾)处理化合物43之后可得到限制性经氯取代的核心44。式44的化合物(其中R = Me)可通过在低温下在溶剂(诸如THF)中使用碱(诸如氢化钠)及烷基化试剂(诸如甲基碘)使相应核心44(R = COOH)甲基化来制备。式44的化合物(其中R = COcyc-Pr、CO(OCH3))可基于Protective Groups in Organic Synthesis (Greene, Wuts；第3版, 1999, John Wiley & Sons, Inc.)中所述的保护及去保护程序通过在溶剂(诸如水及甲醇)中用试剂(诸如氢氧化钾)使44(R=COCH3)脱酰化，继而在碱(诸如吡啶)存在下用相应酰氯酰基化来制备。式
44的化合物可随后按照诸如由Gowrisankar等人(J. Am. Chem. Soc. 2010, 132, 11592-
11598)描述的程序进行钯催化的醚合成(包括本领域技术人员熟知的反应条件)。可例如使用经适当保护的外消旋或光学纯(S)或(R)-氨基醇进行反应，分别得到外消旋或光学纯醚。
出于自卤化物44制备由45表示的醚的目的，可用Protective Groups in Organic Synthesis (Greene, Wuts；第3版, 1999, John Wiley & Sons, Inc.)中所述的适当保护基试剂保护R3OH中能够干扰Pd偶合反应的任何其它官能基(诸如氨基醇的氨基)。可使用如相同参考文献中所述的适当条件实现保护基脱除，得到式47的化合物。式46的化合物(其中R5 =卤素)可通过使用卤化剂(诸如N-氯琥珀酰胺)卤化相应醚(R5 = H)来制备。经由钯催化反应获得的由化合物46表示的醚类似物必要时可使用如Protective Groups in Organic Synthesis (Greene, Wuts；第3版, 1999, John Wiley & Sons, Inc.)中所述的适当条件去除R3的保护基，得到由式47表示的化合物。如此获得的非对映异构混合物可使用制备型手性HPLC或制备型手性SFC技术拆分。
44的化合物可随后按照诸如由Gowrisankar等人(J. Am. Chem. Soc. 2010, 132, 11592-
11598)描述的程序进行钯催化的醚合成(包括本领域技术人员熟知的反应条件)。可例如使用经适当保护的外消旋或光学纯(S)或(R)-氨基醇进行反应，分别得到外消旋或光学纯醚。
出于自卤化物44制备由45表示的醚的目的，可用Protective Groups in Organic Synthesis (Greene, Wuts；第3版, 1999, John Wiley & Sons, Inc.)中所述的适当保护基试剂保护R3OH中能够干扰Pd偶合反应的任何其它官能基(诸如氨基醇的氨基)。可使用如相同参考文献中所述的适当条件实现保护基脱除，得到式47的化合物。式46的化合物(其中R5 =卤素)可通过使用卤化剂(诸如N-氯琥珀酰胺)卤化相应醚(R5 = H)来制备。经由钯催化反应获得的由化合物46表示的醚类似物必要时可使用如Protective Groups in Organic Synthesis (Greene, Wuts；第3版, 1999, John Wiley & Sons, Inc.)中所述的适当条件去除R3的保护基，得到由式47表示的化合物。如此获得的非对映异构混合物可使用制备型手性HPLC或制备型手性SFC技术拆分。
[0143] 方案6
[0144]
[0145] 式53的化合物通过方案7中所概述的方法来制备。经取代的4-溴吡啶或4-氯吡啶可用碱(诸如二异丙基氨基锂)及干冰进行碱介导的羧基化，得到相应吡啶-3-甲酸48。可使用本领域技术人员已知的标准条件(诸如用碱(诸如DBU)及烷基化试剂(诸如甲基碘)处理)使该酸酯化，得到由式49表示的酯。如Zhang, Lei等人(Journal of Medicinal Chemistry, 2011, 54, 1724-1739)所述，卤代吡啶49可随后与适当偶合配偶物(诸如氟硼酸11)在标准铃木条件下使用碱(诸如碳酸铯)及催化剂(诸如Pd(PPh3)4)进行铃木交叉偶合反应，得到由式50表示的化合物。该酯可通过用还原剂(诸如LAH)处理而转化为由式51表示的相应醇。该醇在惰性氛围下于溶剂(诸如THF)中用氢化物源(诸如氢化钠)处理后可得到限制性经卤素取代的核心52。式52的化合物可随后按照诸如由Gowrisankar等人(J. Am. Chem. Soc. 2010, 132, 11592-11598)描述的程序进行钯催化的醚合成(包括本领域技术人员熟知的反应条件)。出于自氯化物52制备由53表示的醚的目的，可用Protective Groups in Organic Synthesis (Greene, Wuts；第3版, 1999, John Wiley & Sons, 3
Inc.)中所述的适当保护基试剂保护R OH中能够干扰Pd偶合反应的任何其它官能基。这些保护基可随后通过以上相同参考文献中所述的方法去保护。
Inc.)中所述的适当保护基试剂保护R OH中能够干扰Pd偶合反应的任何其它官能基。这些保护基可随后通过以上相同参考文献中所述的方法去保护。
[0146] 方案7
[0147]
[0148] 式56的中间体通过方案8中所概述的方法来制备。可以使用在二氯甲烷中的甲酸随后用羟基丙酮和吡啶在低温下处理异氰酸氯磺酰酯以提供中间体54。使用(2-甲基烯丙基)氯化镁在THF中处理生成中间体55。可以使用CbzCl在叔丁醇钾存在下保护胺以提供中间体56。外消旋体可以通过手性HPLC分离成相应的对应异构体以提供中间体56-(S)和56-(R)。
[0149] 方案 8
[0150]
[0151] 使用方案1-7合成的各种类似物列于表1a中。所选化合物的AAK1功能(AAK1 IC50值(nM))及细胞(细胞IC50值(nM))效能显示于表1b中且以如下范围的IC50值形式列出，其中：a = <1 nM；b = 1-10 nM；c = 10-100 nM；d = 100-1200 nM。
[0152]
[0153]
[0154]
[0155]
[0156]
[0157]
[0158]
[0159]
[0160]
[0161]
[0162]
[0163]
[0164]
[0165]
[0166] 在以下实施例中，在Bruker 400或500 MHz NMR波谱仪上记录质子NMR谱。化学位移以相对于四甲基硅烷得出的δ值报导。在与Water Micromass ZQ耦接的Shimadzu LC上运行液相色谱(LC)/质谱。HPLC保留时间使用以下方法中的至少一种获得：
[0167] LC-MS方法：
[0168] 方法A：Phenomenex C18 2×50 mm(3 μm)，A= 95% H2O/5% MeCN，B= 95% MeCN/5% H2O，调节剂10 mM NH4OAc，0.00分钟=0% B，4分钟=100% B，5分钟=100% B，流速=0.8 mL/min。
[0169] 方法B：Phenomenex C18 2×50 mm(3 μm)，A= 95% H2O/5% ACN，B= 95% MeCN/5% H2O，调节剂10 mM NH4OAc，0.00分钟 =30% B，4分钟=100% B，5分钟=100% B，流速=0.8 mL/min。
[0170] LC/MS方法C = 柱：PUROSPHER@star RP-18(4×55 mm)，3 μm；缓冲液：20 mM NH4OAC水溶液；流动相A：缓冲液+ACN(90+10)；流动相B：缓冲液+MeCN(10+90)；流速：2.5 ml/min。
[0171] LC/MS 方法D = 柱：ZORBAX SB C18(46×50 mm)，5 μm；正离子模式流动相A：10% MeOH-90% H2O-0.1% TFA；流动相B：90% MeOH-10% H2O-0.1% TFA；流速：5 ml/min。
[0172] LC/MS 方法E = 柱-Ascentis Express C8(5×2.1 mm)，2.7 μm；流动相A：2% MeCN-98% H2O-10 mM NH4COOH；流动相B：98% ACN-2% H2O-10 mM NH4COOH；流速：1 mL/min。
[0173] LC/MS 方法F = 柱-ACQUITY UPLC BEH C18(2.1×50 mm)，1.7 μm；流动相A：0.1% TFA水溶液；流动相B：1% TFA的ACN溶液；流速：1 mL/min。
[0174] LC/MS 方法G = 柱-ACQUITY UPLC BEH C18(2.1×50 mm)，1.7 μm；流动相A：5 mM NH4OAc:ACN(95:5)；流动相B：5 mM NH4OAc:ACN(5:95)；流速：1mL/min。
[0175] LC/MS 方法H = 柱：Xbridge BEH C18(50×2.1 mm)2.5 μm，流动相A-1% HCOOH的H2O溶液；流动相B：ACN，流速1mL/min；tR =1.55分钟。
[0176] LC/MS 方法I = 柱-ACE Excel 2 C18(50×3.0)mm-2 μm；流动相A：2% MeCN-98% H2O-10 mM NH4COOH；流动相B：98% ACN-2% H2O-10 mM NH4COOH；流速：1.2 mL/min。
[0177] LC/MS 方法J = 柱：Xbridge C18(50×2.1 mm)2.5 μm，流动相A-10 mM碳酸氢铵，流动相B：ACN，流速1 mL/min。
[0178] LC/MS 方法K = 柱：Kinetex C18(50×2.1 mm-2.6 μm)，流动相A-2% ACN-98% H2O-10 mM甲酸铵，流动相B：98% ACN-2% H2O-10 mM甲酸铵，流速1 mL/min。
[0179] 制备型HPLC方法：
[0180] 方法A：Waters Atlantis 30×100 mm，A = 90% H2O/10% MeOH，B = 90% MeOH/10% H2O，调节剂0.1% TFA，0.00分钟= 10% B，12分钟= 100% B，15.0分钟= 100% B，流速=
40 mL/min。
40 mL/min。
[0181] 方法B：Waters Atlantis OBD 30×100 mm S5，A = 90% H2O/10% MeOH，B = 90% MeOH/10% H2O，调节剂0.1% TFA，0.00分钟= 10% B，15分钟= 100% B，18.0分钟= 100% B，流速= 40 mL/min。
[0182] 方法C：Waters Atlantis 30×100 mm，A = 90% H2O/10% MeOH，B = 90% MeOH/10% H2O，调节剂0.1% TFA，0.00分钟= 10% B，15分钟= 100% B，流速= 40 mL/min。
[0183] 手性HPLC方法：
[0184] 方法A：CHIRALCEL OJH(250×4.6)mm 5微米；
[0185] 流动相：0.2% DEA的正己烷溶液:乙醇(80:20)；
[0186] 方法B：CHIRALPAK AD-H(250×4.6)mm 5微米；
[0187] 流动相A：0.2% DEA的正己烷溶液(70)B:乙醇(30)；
[0188] 方法C：CHIRALPAK-ASH(250×4.6)mm 5微米；
[0189] 流动相A：0.2% DEA的正己烷溶液:乙醇(90:10)。
[0190] 分析型HPLC方法：
[0191] 方法A：Waters分析型C18 sunfire柱(4.6×150 mm，3.5 μm)；流动相：
[0192] 缓冲液：0.05% TFA的H2O溶液，pH = 2.5，用氨调节；
[0193] A =缓冲液及乙腈(95:5)，B =乙腈及缓冲液(95:5)；0-15分钟，0% B→50% B；15-18分钟，50% B→100% B；18-23分钟，100% B；流速= 1 mL/min；λ=254 nm及220 nm；运行时间=28分钟。
[0194] 方法B：Waters分析型phenyl xbridge柱(4.6×150 mm，3.5 μm)；流动相：
[0195] 缓冲液：0.05% TFA的H2O溶液，pH = 2.5，用氨调节；
[0196] A =缓冲液及乙腈(95:5)，B =乙腈及缓冲液(95:5)；0-15分钟，0% B→50% B；15-18分钟，50% B→100% B；18-23分钟，100% B；流速= 1 mL/min；λ=254 nm及220 nm；运行时间=28分钟。
[0197] 实施例1
[0198] (R)-1-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺
[0199]
[0200] 部分A. 4-溴-2-(丙-2-炔氧基)苯甲醛
[0201] 如下使4-溴-2-羟基苯甲醛转化为其钠盐：用1 N NaOH水溶液(15.7 mL，1.05当量)处理4-溴-2-羟基苯甲醛(3.0 g，24.9 mmol)于MeOH(约150 mL)中的溶液。在减压下浓缩所得浅黄色溶液。向残余物中添加EtOH(30 mL)且在减压下浓缩溶液。用EtOH(30 mL)随后用庚烷(50 mL)重复此操作。将所得黄色粉末状钠盐在搅拌下溶解于DMF(60 mL)中且向其中添加炔丙基溴/甲苯(80 wt%，2.33 mL，1.4当量)。在环境温度下搅拌反应混合物22小时，之后在减压下浓缩挥发物。使残余物分配于EtOAc(70 mL)与水(40 mL)之间。分离有机层且用木炭(约1 g)处理，随后干燥(Na2SO4)且过滤。在减压下浓缩滤液。使所得残余物自EtOAc及己烷(3:7)结晶。产物I提供呈无色针状的4-溴-2-(丙-2-炔氧基)苯甲醛(893 mg)。在减压下浓缩母液且再次自EtOAc及己烷(7:93)结晶，获得另一产物II 4-溴-2-(丙-2-炔氧基)苯甲醛(1.902 g)。再次浓缩母液且如先前所述再进行一次结晶。产物III产生额外的
4-溴-2-(丙-2-炔氧基)苯甲醛(344 mg)。合并所有三批产物，总共得到3.14 g(87%产率)呈无色针状的4-溴-2-(丙-2-炔氧基)苯甲醛。
4-溴-2-(丙-2-炔氧基)苯甲醛(344 mg)。合并所有三批产物，总共得到3.14 g(87%产率)呈无色针状的4-溴-2-(丙-2-炔氧基)苯甲醛。
[0202]
[0203]
[0204]
[0205] 部分B. (E)-3-(4-溴-2-(丙-2-炔氧基)苯基)丙烯醛
[0206] 在环境温度下在氮气下搅拌4-溴-2-(丙-2-炔氧基)苯甲醛(0.852 g，3.56 mmol)及甲酰基亚甲基三苯基膦(2.2g，7.12 mmol，2当量)悬浮于THF(20 mL)中的混合物18小时，随后在50℃下再搅拌24小时。经由硅胶床(约25 g)用EtOAc:己烷(1:4，300 mL)洗脱来过滤反应混合物。在减压下浓缩滤液且通过硅胶层析使用EtOAc:己烷(1:19至1:9)的线性梯度来纯化残余物。在减压下浓缩含有标题化合物及其Z-异构体(比率为39:11，通过NMR获悉)的经汇总的级分，得到(E)-3-(4-溴-2-(丙-2-炔氧基)苯基)丙烯醛(0.69 g，2.6 mmol，57%产率)。
[0207]
[0208] Z-异构体在δ 9.87(d, J=7.9 Hz)下显示醛质子，且在δ 6.22下显示烯烃质子的较小顺式偶合(J = 11.4 Hz)。LCMS (方法B) (ESI) m/e 265.0, 267.0 Br模式[(M+H)+, C12H9BrO2的计算值为265.0]。
[0209]
[0210] 部分C. (E)-2-((E)-3-(4-溴-2-(丙-2-炔氧基)苯基)亚烯丙基)-1,1-二甲基肼[0211] 在冰浴中在搅拌下冷却(E)-3-(4-溴-2-(丙-2-炔氧基)苯基)丙烯醛(2.85 g，10.8 mmol)于含有无水MgSO4(16 g)的二氯甲烷(200 mL)中的溶液。向冰冷溶液中逐滴添加1,1-二甲基肼(2.45 mL，32.4 mmol)且使反应混合物升温至环境温度且搅拌18小时。在减压下浓缩挥发物且将残余物依序与二氯甲烷(50 mL)、二氯乙烷(50 mL)及庚烷(50 mL)一起共蒸发。获得呈黄色粉状的(E)-2-((E)-3-(4-溴-2-(丙-2-炔氧基)苯基)亚烯丙基)-
1,1-二甲基肼(2.7 g，8.79 mmol，90%产率，90%纯度)。
1,1-二甲基肼(2.7 g，8.79 mmol，90%产率，90%纯度)。
[0212]
[0213]
[0214] 部分D. 8-溴-5H-色烯并[3,4-c]吡啶
[0215] 在50℃下通过氩气鼓泡约15分钟同时在厚玻璃小瓶中音波处理将(E)-2-((E)-3-(4-溴-2-(丙-2-炔氧基)苯基)亚烯丙基)-1,1-二甲基肼(116 mg，374 mmol)及2,6-二叔丁基-4-甲基酚(82 mg，374 mmol)于均三甲苯(4.5 mL)中的溶液脱气。在氩气下将小瓶封盖且在搅拌下在油浴中加热至140℃持续138小时(5.75天)。冷却反应混合物至环境温度且在减压下浓缩溶剂。通过硅胶层析用EtOAc:二氯甲烷(1:19)作为洗脱液来纯化深色残余物。合并含有所要产物的级分且在减压下浓缩，得到呈浅黄色粉末状的8-溴-5H-色烯并[3,4-c]吡啶(27 mg，0.088 mmol，25%产率，基于89%纯度)。
[0216]
[0217]
[0218] 部分E. (R)-2-(1-羟基-4-甲基戊-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮
[0219] 如WO 2005/041684 A2中所述制备标题化合物(75%产率，基于4 mmol规模)。所得产物具有与所报导类似的光谱特征。
[0220]
[0221] 部分F. (R)-1-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺
[0222] 使氮气缓慢鼓泡通过厚玻璃小瓶中的8-溴-5H-色烯并[3,4-c]吡啶(26 mg，0.1 mmol)、(R)-2-(1-羟基-4-甲基戊-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮(116 mg，0.47 mmol，4.7当量)、5-(二叔丁基膦基)-1',3',5'-三苯基-1'H-1,4'-联吡唑(30 mg，0.06 mmol，0.6当量)、Cs2CO3(49 mg，0.15 mmol，1.5当量)及Pd(OAc)2(7 mg，0.03 mmol，0.3当量)于甲苯(0.5 mL)中的悬浮液5分钟。将小瓶封盖，随后在80℃下加热19小时。冷却反应混合物至环境温度且通过硅藻土用二氯甲烷洗涤来过滤。在减压下浓缩经合并的滤液且通过硅胶层析用EtOAc:DCM(1:4)作为洗脱液来纯化所得残余物。在减压下浓缩含有所要产物(以及杂质)的级分，得到(R)-2-(1-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮：
[0223]
[0224]
[0225] 。通过质子NMR确定混合物为所要产物、试剂及衍生自催化剂的氧化膦，比率相应为约10:10:3。此混合物不经进一步纯化即如下进行下一步骤-去除邻苯二甲酰亚胺基的保护基：将(R)-2-(1-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮(44 mg，0.102 mmol)于乙醇(2 mL)中的溶液与肼(0.022 mL，714 mmol)合并且在
45℃下搅拌溶液3小时。冷却反应混合物至室温且用乙醚(10 mL)稀释，随后过滤。在减压下浓缩滤液且通过制备型HPLC(方法A)纯化残余物。获得呈浅黄色油状的(R)-1-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺(23 mg，0.077 mmol，43%产率，两个步骤)。
45℃下搅拌溶液3小时。冷却反应混合物至室温且用乙醚(10 mL)稀释，随后过滤。在减压下浓缩滤液且通过制备型HPLC(方法A)纯化残余物。获得呈浅黄色油状的(R)-1-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺(23 mg，0.077 mmol，43%产率，两个步骤)。
[0226]
[0227] 实施例2
[0228] (R)-1-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-3-苯基丙-2-胺
[0229]
[0230] 部分A. (R)-2-(1-羟基-3-苯基丙-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮
[0231] 按照实施例1部分E中关于合成(R)-2-(1-羟基-4-甲基戊-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮所述的相同方案制备标题化合物。由此制备的化合物具有Sikoraiova, J.等人, J. Heterocyclic. Chem. 2002, 39, 383中所述的特性。
[0232]
[0233] 部分B. (R)-1-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-3-苯基丙-2-胺
[0234] 按照实施例1部分F中所述的相同方案制备标题化合物(46%产率，基于30 mg(103 mmol)规模)。在制备型HPLC(方法B)纯化后，获得呈浅黄色油状的(R)-1-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-3-苯基丙-2-胺。
[0235]
[0236] 实施例3
[0237] (R)-1-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)丁-2-胺
[0238]
[0239] 部分A. (R)-2-(1-羟基丁-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮
[0240] 按照实施例1部分E中关于合成(R)-2-(1-羟基-4-甲基戊-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮所述的相同方案制备标题化合物。由此制备的化合物具有Sikoraiova, J.等人, J. Heterocyclic. Chem. 2002, 39, 383中所述的特性。
[0241]
[0242] 部分B. (R)-1-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)丁-2-胺
[0243] 按照实施例1部分F中所述的相同方案制备标题化合物(21%产率，基于26 mg(100 mmol)规模)。在制备型HPLC纯化(方法B)后，获得呈浅黄色油状的(R)-1-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)丁-2-胺：
[0244]
[0245] 。
[0246] 实施例4
[0247] (S)-1-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)丁-2-胺
[0248]
[0249] 部分A. (S)-2-(1-羟基丁-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮
[0250] 按照实施例1部分E中关于合成(R)-2-(1-羟基-4-甲基戊-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮所述的相同方案制备标题化合物。由此制备的化合物具有(Sikoraiova, J.等人, J. Heterocyclic. Chem. 2002, 39, 383)中所述的特性。
[0251]
[0252] 部分B. (S)-1-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)丁-2-胺
[0253] 按照实施例1部分F中所述的相同方案制备标题化合物(19%产率，基于26 mg(100 mmol)规模)。在制备型HPLC纯化(方法C)后，获得呈浅黄色油状的(S)-1-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)丁-2-胺：
[0254]
[0255] 。
[0256] 实施例5
[0257] (S)-1-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺
[0258]
[0259] 部分A. 4-溴烟碱醛
[0260] 在-78℃下在氮气氛围下向经搅拌的二异丙胺(9.02 mL，63.3 mmol)于THF(75 mL)中的溶液中逐滴添加正丁基锂(1.6 M于己烷中)(30 mL，76 mmol)。完成添加后，在-78℃下搅拌溶液30分钟。逐份添加4-溴吡啶盐酸盐(5 g，31.6 mmol)且在-78℃下搅拌所得溶液1小时。随后在-78℃下向溶液中逐滴添加DMF(2.94 mL，38.0 mmol)。使反应混合物缓慢升温至室温且搅拌12小时。用3 N HCl淬灭反应混合物且搅拌2小时。用饱和碳酸氢钠溶液中和溶液，用EtOAc(75 mL)萃取，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩，得到4-溴烟碱醛(3.75 g，20.16 mmol，64%产率)。粗产物不经纯化即用于下一步骤中。
[0261]
[0262]
[0263] 部分B. 4-(4-氯-2-氟苯基)烟碱醛
[0264] 向4-溴烟碱醛(3.00 g，16.13 mmol)、(4-氯-2-氟苯基)硼酸(2.81 g，16.13 mmol)、碳酸铯(10.51 g，32.3 mmol)及Pd(PPh3)4(0.932 g，0.806 mmol)的混合物中添加THF(50 mL)及水(8 mL)。使氮气鼓泡通过经搅拌的悬浮液5分钟。在85℃下在氮气氛围下搅拌反应混合物6小时。随后冷却反应混合物至室温且通过硅藻土过滤。用乙酸乙酯(30 mL)稀释滤液且用水(1×25 mL)及盐水(1×25 mL)洗涤。经硫酸钠干燥经合并的有机萃取物且在减压下浓缩。通过硅胶层析(乙酸乙酯/己烷)纯化粗残余物，得到4-(4-氯-2-氟苯基)烟碱醛(1.5 g，6.37 mmol，39%产率，两个步骤)。
[0265]
[0266]
[0267] 部分C. (4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)甲醇
[0268] 向已冷却至0℃的4-(4-氯-2-氟苯基)烟碱醛(3 g，12.73 mmol)于甲醇(5 mL)与四氢呋喃(5 mL)的混合物中的溶液中添加NaBH4(0.722 g，19.10 mmol)且搅拌溶液30分钟。通过添加水(10 mL)淬灭反应物。用乙酸乙酯(3×15 mL)萃取溶液。用水(1×15 mL)及盐水(1×15 mL)洗涤经合并的有机萃取物，用硫酸钠干燥且在减压下浓缩，得到(4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)甲醇，其不经进一步纯化即用于下一步骤中。LCMS (ESI) m/e 238 [(M+H)+, C12H10ClFNO的计算值为238.0]。
[0269]
[0270] 部分D. 8-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶
[0271] 在0℃下向(4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)甲醇(2.89 g，12.14 mmol)于THF(10 mL)中的经冷却溶液中添加氢化钠(1.94 g，48.6 mmol)于THF(10 mL)中的悬浮液，且在0℃下搅拌所得混合物40分钟。通过添加冷水(15 mL)淬灭反应物且用乙酸乙酯(3×15 mL)萃取。用硫酸钠干燥经合并的有机萃取物且在减压下浓缩。通过柱层析(50%乙酸乙酯/石油醚)纯化如此获得的残余物，得到呈白色固体状的8-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶(1.6 g，7.35 mmol，61%产率)。
[0272]
[0273]
[0274] 部分E. (S)-2-(1-((5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮
[0275] 向经搅拌的8-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶(1 g，4.59 mmol)、(S)-2-(1-羟基-4-甲基戊-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮(3.43 g，13.88 mmol)、二叔丁基(2',4',6'-三异丙基-[1,1'-联苯]-2-基)膦(1.17 g，2.76 mmol)及碳酸铯(2.245 g，6.89 mmol)于甲苯(4 mL)中的悬浮液中添加乙酸钯(II)(0.309 g，1.38 mmol)。使氮气鼓泡通过混合物5分钟，随后在80℃下加热混合物14小时。用乙酸乙酯(25 mL)稀释反应物且通过硅藻土过滤。用水(1×20 mL)及盐水(1×20 mL)洗涤滤液，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩。通过硅胶柱层析(60%乙酸乙酯/己烷)纯化残余物，得到呈半固体状的(S)-2-(1-((5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮(2 g，4.67 mmol，定量产率)。LCMS (ESI) m/e
429 [(M+H)+, C26H25N2O4的计算值为429.2]。
429 [(M+H)+, C26H25N2O4的计算值为429.2]。
[0276]
[0277] 部分F. (S)-1-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺
[0278] 在室温下在氮气氛围下向(S)-2-(1-((5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮(1.47 g，3.43 mmol)于乙醇(8 mL)中的溶液中添加肼(0.754 mL，24.02 mmol)，随后在45℃下于油浴中搅拌反应混合物3小时。在反应过程中形成白色沉淀物。通过添加水(15 mL)淬灭反应混合物且用乙酸乙酯(3×25 mL)萃取产物。用硫酸钠干燥经合并的有机萃取物且在减压下浓缩。通过制备型HPLC在反相C-18柱上使用10 mM乙酸铵缓冲液及乙腈梯度纯化残余物。在减压下浓缩级分且冻干，得到呈黄色固体状的(S)-1-((5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺(0.4 g，0.970 mmol，39%产率)。
[0279]
[0280] LC/MS保留时间(方法E): tR = 1.78分钟。HPLC保留时间(方法A): tR = 7.97分钟；手性HPLC保留时间(方法C): tR = 12.87分钟；旋光度: [α]20D (MeOH) = +7.1o。
[0281] 实施例6
[0282] (2S)-4-甲基-1-(5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)戊-2-胺
[0283]
[0284] 部分A. 1-(4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)乙醇
[0285] 在-60℃下向4-(4-氯-2-氟苯基)烟碱醛(0.12 g，0.509 mmol)(如实施例5部分B制备)于无水THF(15 mL)中的溶液中逐滴添加甲基溴化镁(3.0 M，于乙醚中)(0.364 g，3.06 mmol)。完成添加后，在-60℃下搅拌溶液10分钟。随后使反应混合物升温至室温且搅拌1小时。通过添加饱和氯化铵水溶液(15 mL)淬灭反应物。用乙酸乙酯(3×20 mL)萃取有机相且用水(1×15 mL)及盐水(1×15 mL)洗涤。经硫酸钠干燥经合并的有机萃取物且在减压下浓缩。通过制备型TLC(20%乙酸乙酯/己烷)纯化残余物，得到呈灰白色固体状的1-(4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)乙醇(40 mg，0.159 mmol，31%产率)：
[0286]
[0287] 。
[0288]
[0289] 部分B. 8-氯-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶
[0290] 向经搅拌的NaH(3.81 mg，0.159 mmol)于无水THF(5 mL)中的悬浮液中逐滴添加1-(4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)乙醇(20 mg，0.079 mmol)于THF(5 mL)中的溶液，且在室温下搅拌反应混合物4小时。通过添加饱和氯化铵水溶液(15 mL)淬灭反应物且用乙酸乙酯(3×20 mL)萃取产物。用水(1×15 mL)及盐水(1×15 mL)洗涤经合并的有机相，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩。通过制备型TLC(40%乙酸乙酯/己烷)纯化残余物，得到8-氯-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶(12 mg，0.052 mmol，63%产率)。
[0291]
[0292]
[0293] 部分C. 2-((2S)-4-甲基-1-(5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)戊-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮
[0294] 向经搅拌的8-溴-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶(200 mg，0.724 mmol)于甲苯(4 mL)中的溶液中添加(S)-2-(1-羟基-4-甲基戊-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮(537 mg，2.173 mmol)、二叔丁基(2',4',6'-三异丙基-[1,1'-联苯]-2-基)膦(185 mg，0.435 mmol)、碳酸铯(354 mg，1.086 mmol)及乙酸钯(II)(48.8 mg，0.217 mmol)。使氮气鼓泡通过反应混合物10分钟且在80℃下加热混合物12小时。冷却反应混合物至室温，通过硅藻土过滤且用乙酸乙酯冲洗残余物。在减压下浓缩滤液且通过制备型TLC(60%乙酸乙酯/石油醚)纯化，得到2-((2S)-4-甲基-1-(5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)戊-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮(205 mg，0.463 mmol，64%产率)。LCMS (ESI) m/e 443.2 [(M+H)+, C27H27N2O4的计算值为443.2]；LC/MS保留时间(方法C): tR = 2.27分钟。
[0295]
[0296] 部分D. (2S)-4-甲基-1-(5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)戊-2-胺[0297] 向1-((2S)-4-甲基-1-((5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-基)吡咯烷-2,5-二酮(205 mg，0.520 mmol)于乙醇(20 mL)中的溶液中添加单水合肼(260 mg，5.20 mmol)。在45℃下加热反应混合物5小时。冷却反应混合物至室温，添加乙醚(50 mL)且过滤混合物。在减压下浓缩滤液。将残余物溶解于二氯甲烷(2 mL)中且冷却至0℃。添加4 M HCl/二噁烷(2 mL)，搅拌溶液1小时。在减压下浓缩反应混合物且将残余物溶解于水(5 mL)中。用乙酸乙酯(3×25 mL)洗涤水层。向水层中添加乙腈(2 mL)且冻干溶液，得到盐酸盐形式的(2S)-4-甲基-1-(5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)戊-2-胺。通过制备型HPLC(0.1% TFA水溶液及MeCN)纯化粗产物，得到(2S)-4-甲基-1-(5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)戊-2-胺, 2TFA(145 mg，0.268 mmol，52%产率)：
[0298]
[0299] LC/MS保留时间(方法E): tR = 1.69分钟。
[0300] 通过制备型手性HPLC(0.2% DEA/正己烷、乙醇)拆分如此获得的非对映异构混合物。
[0301] 非对映异构体1：获得呈浅黄色油状的非对映异构体1(0.023 g，0.072 mmol，27%产率)：
[0302]
[0303] HPLC保留时间(方法A): tR = 7.41分钟；HPLC保留时间(方法B): tR = 8.97分钟。手性HPLC保留时间(方法B): tR = 14.88分钟。
[0304] 非对映异构体2：获得呈浅黄色油状的非对映异构体2(0.022 g，0.070 mmol，26%产率)：
[0305]
[0306] HPLC保留时间(方法A): tR = 7.45分钟；HPLC保留时间(方法B): tR = 8.93分钟。手性HPLC保留时间(方法B): tR = 19.41分钟。
[0307] 实施例7
[0308] (2R)-4-甲基-1-(5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)戊-2-胺
[0309]
[0310] 以类似于实施例6的方式制备(2R)-4-甲基-1-(5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)戊-2-胺。通过制备型手性HPLC(0.2% DEA/正己烷、乙醇)拆分如此获得的非对映异构混合物。
[0311] 非对映异构体1：获得呈黄色固体状的非对映异构体1(19 mg，0.061 mmol，26%产率)：
[0312]
[0313]
[0314] LC/MS保留时间(方法E): tR = 1.73分钟；HPLC保留时间(方法A): tR = 8.06分钟；HPLC保留时间(方法B): tR = 9.11分钟；手性HPLC保留时间(方法B): tR = 15.34分钟。
[0315] 非对映异构体2：获得呈黄色固体状的非对映异构体2(31 mg，0.099 mmol，43%产率)：
[0316]
[0317] LC/MS保留时间(方法E): tR = 1.72分钟；HPLC保留时间(方法B): tR = 13.14分钟，手性HPLC保留时间(方法B): tR = 12.06分钟。
[0318] 实施例8
[0319] (2S)-1-(5-环丙基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺
[0320]
[0321] 部分A. (4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)(环丙基)甲醇
[0322] 经20分钟向已冷却至-78℃的4-(4-氯-2-氟苯基)烟碱醛(1.6 g，6.79 mmol)(如实施例5部分B中制备)于THF(32 mL)中的溶液中逐滴添加环丙基溴化镁(27.2 mL，13.58 mmol)。在-78℃下搅拌反应混合物3小时。移除干冰浴且使反应混合物达室温。通过添加饱和氯化铵水溶液(30 mL)淬灭反应混合物。用乙酸乙酯(3×50 mL)萃取反应混合物。用盐水(1×50 mL)洗涤经合并的有机萃取物，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩。通过硅胶层析(30%乙酸乙酯/石油醚)纯化粗产物，得到(4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)(环丙基)甲醇(900 mg，3.24 mmol，48%产率)。LCMS (ESI) m/e 278.0 [(M+H)+, C15H14ClFNO的计算值为278.1]；LC/MS保留时间(方法C): tR = 1.62分钟。
[0323]
[0324] 部分B. 8-氯-5-环丙基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶
[0325] 经10分钟向已冷却至0℃的NaH(389 mg，9.72 mmol)于THF(9 mL)中的悬浮液中逐滴添加(4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)(环丙基)甲醇(900 mg，3.24 mmol)/THF(9 mL)。在0℃下搅拌反应混合物15分钟，随后升温至室温且搅拌15小时。通过添加冷水(10 mL)淬灭反应混合物且用乙酸乙酯(3×25 mL)萃取。用盐水(1×25 mL)洗涤经合并的有机萃取物，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩。通过硅胶柱层析(乙酸乙酯/己烷)纯化粗残余物，得到8-氯-5-环丙基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶(630 mg，2.45 mmol，75%产率)。LCMS (ESI) m/e
258.0 [(M+H)+, C15H13ClNO的计算值258.1]；LC/MS保留时间(方法C): tR = 2.08分钟。
258.0 [(M+H)+, C15H13ClNO的计算值258.1]；LC/MS保留时间(方法C): tR = 2.08分钟。
[0326]
[0327] 部分C. (2S)-1-(5-环丙基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基氨基甲酸叔丁酯
[0328] 向经搅拌的8-氯-5-环丙基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶(275 mg，1.067 mmol)于甲苯(3 mL)中的溶液中添加(S)-(1-羟基-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(696 mg，3.20 mmol)、碳酸铯(427 mg，1.310 mmol)、二叔丁基(2',4',6'-三异丙基-[1,1'-联苯]-2-基)膦(272 mg，0.640 mmol)及乙酸钯(II)(71.9 mg，0.320 mmol)。使氮气鼓泡通过反应混合物10分钟且在80℃下加热混合物12小时。冷却反应混合物至室温且通过硅藻土过滤。用水(10 mL)稀释滤液且用乙酸乙酯(3×5 mL)萃取。用盐水(1×15 mL)洗涤经合并的有机萃取物，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩。通过硅胶层析(乙酸乙酯/石油醚)纯化粗产物，得到(2S)-1-(5-环丙基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基氨基甲酸叔丁酯(250 mg，0.57 mmol，50%产率)。LCMS (ESI) m/e 439.2 [(M+H)+, C26H35N2O4的计算值为439.3]；LC/MS保留时间(方法C): tR = 2.16分钟。
[0329]
[0330] 部分D. (2S)-1-(5-环丙基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺[0331] 经5分钟向已冷却至0℃的((2S)-1-((5-环丙基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(250 mg，0.570 mmol)于CH2Cl2(4 mL)中的溶液中缓慢添加1 N HCl/二噁烷(2 mL，0.570 mmol)。在0℃下搅拌反应混合物5分钟，随后升温至室温且搅拌2小时。通过在减压下浓缩移除溶剂。用乙酸乙酯洗涤粗产物，得到盐酸盐形式的(2S)-1-(5-环丙基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺(240 mg 42%产率)。LCMS (ESI) m/e 339.2 [(M+H)+, C21H27N2O2的计算值339.2]；LC/MS保留时间(方法C): tR = 1.28分钟。通过手性制备型HPLC(0.2% DEA/正己烷、乙醇)拆分胺的非对映异构混合物。
[0332] 非对映异构体1：获得呈黄色油状的非对映异构体1(45 mg，0.133 mmol，23%产率)。
[0333]
[0334] LC/MS保留时间(方法C): tR = 1.46分钟；HPLC保留时间(方法A): tR = 8.92分钟；HPLC保留时间(方法B): tR = 10.33分钟；手性HPLC保留时间(方法C): tR = 10.3分钟。
[0335] 非对映异构体2：获得呈黄色油状的非对映异构体2(35 mg，0.103 mmol，18%产率)。
[0336]
[0337] LC/MS保留时间(方法C): tR = 1.46分钟；HPLC保留时间(方法A): tR = 8.89分钟；HPLC保留时间(方法B): tR = 10.34分钟；手性HPLC保留时间(方法C): tR = 14.11分钟。
[0338] 实施例9
[0339] (2R)-4-甲基-1-(5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)戊-2-胺
[0340]
[0341] 以类似于实施例8的方式制备(2R)-4-甲基-1-(5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)戊-2-胺。使用手性制备型HPLC(0.2% DEA/正己烷及乙醇)拆分非对映异构混合物。
[0342] 非对映异构体1：获得呈黄色油状的非对映异构体1(0.03 g，0.089 mmol，19%产率)：
[0343]
[0344] LC/MS保留时间(方法C): tR = 1.33分钟；HPLC保留时间(方法A): tR = 4.51分钟；HPLC保留时间(方法B): tR = 5.18分钟；手性HPLC保留时间(方法C): tR = 11.01分钟。
[0345] 非对映异构体2：获得呈黄色油状的非对映异构体2(0.028 g，0.083 mmol，18%产率)：
[0346]
[0347] LC/MS保留时间(方法C): tR = 1.34分钟；HPLC保留时间(方法A): tR = 4.55分钟；HPLC保留时间(方法B): tR = 5.18分钟；手性HPLC保留时间(方法C): tR = 14.57分钟。
[0348] 实施例10
[0349] (2S)-1-(5-乙基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺
[0350]
[0351] 部分A. 1-(4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)丙-2-烯-1-醇
[0352] 在-70℃下向经搅拌的4-(4-氯-2-氟苯基)烟碱醛(0.5 g，2.122 mmol)(如实施例5部分B中制备)于THF(25 mL)中的溶液中逐滴添加乙烯基溴化镁(1.0 M于THF中)(6.37 mL，6.64 mmol)且在此温度下搅拌溶液45分钟。用饱和氯化铵水溶液(20 mL)淬灭反应物且用乙酸乙酯(2×15 mL)萃取。用盐水(1×15 mL)洗涤经合并的有机萃取物，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩。粗产物不经纯化即用于下一步骤中。LCMS (ESI) m/e 264 [(M+H)+, C14H12ClFNO的计算值为264.0]；LC/MS保留时间(方法C): tR = 1.59分钟。
[0353]
[0354] 部分B. 8-氯-5-乙烯基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶
[0355] 向经搅拌的NaH(0.182 g，7.58 mmol)于THF(30 mL)中的悬浮液中添加1-(4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)丙-2-烯-1-醇(0.5 g，1.896 mmol)溶解于THF(5 mL)中的溶液，且在室温下搅拌反应混合物2小时。通过添加饱和氯化铵水溶液(5 mL)淬灭反应物且用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取。用盐水(1×10 mL)洗涤经合并的有机萃取物，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩。粗8-氯-5-乙烯基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶不经纯化即用于下一步骤中。
[0356]
[0357]
[0358] 部分C. 2-((2S)-4-甲基-1-(5-乙烯基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)戊-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮
[0359] 向经搅拌的8-氯-5-乙烯基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶(0.2 g，0.821 mmol)、(S)-2-(1-羟基-4-甲基戊-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.609 g，2.462 mmol)、2-二叔丁基膦基-2,4,6-三异丙基联苯(0.209 g，0.492 mmol)及碳酸铯(0.401 g，1.231 mmol)于甲苯(25 mL)中的悬浮液中添加乙酸钯(II)(0.055 g，0.246 mmol)。使氮气鼓泡通过混合物5分钟，随后加热反应混合物至80℃持续14小时。用乙酸乙酯(25 mL)稀释反应物且通过硅藻土过滤。用水(1×20 mL)及盐水(1×20 mL)洗涤滤液，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩。通过硅胶柱层析(60%乙酸乙酯/己烷)纯化残余物，得到2-((2S)-4-甲基-1-(5-乙烯基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)戊-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.3 g，0.660 mmol，40%产率，三个步骤)。
+
LCMS (ESI) m/e 455.2 [(M+H) , C28H27N2O4的计算值为455.2]；LC/MS保留时间(方法C): tR = 2.16分钟。
+
LCMS (ESI) m/e 455.2 [(M+H) , C28H27N2O4的计算值为455.2]；LC/MS保留时间(方法C): tR = 2.16分钟。
[0360]
[0361] 部分D. 2-((2S)-1-(5-乙基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮
[0362] 向经搅拌的2-((2S)-4-甲基-1-((5-乙烯基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.3 g，0.660 mmol)于甲醇(15 mL)中的溶液中添加10%钯/碳(0.070 g，0.660 mmol)。在室温下在氢气氛围(1个大气压)下搅拌所得混合物12小时。随后通过硅藻土过滤反应混合物且在减压下浓缩，得到粗2-((2S)-1-(5-乙基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.28 g，0.221 mmol，33%粗产率)；LCMS (ESI) m/e 457.2 [(M+H)+, C28H29N2O4的计算值为457.2]；LC/MS保留时间(方法C): tR = 2.32分钟。
[0363]
[0364] 部分E. (2S)-1-(5-乙基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺[0365] 向经搅拌的2-((2S)-1-(5-乙基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮(0.25 g，0.548 mmol)于乙醇(15 mL)中的溶液中添加肼(0.172 mL，5.48 mmol)，且在40℃下搅拌反应混合物6小时。冷却反应物至室温，随后用DCM(20 mL)稀释且通过硅藻土床过滤。在减压下浓缩滤液且通过制备型HPLC(0.1% TFA水溶液及甲醇)纯化，得到(2S)-1-((5-乙基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺(40 mg，
21%产率)。通过SFC(0.5% DEA/甲醇)拆分非对映异构混合物。
21%产率)。通过SFC(0.5% DEA/甲醇)拆分非对映异构混合物。
[0366] 非对映异构体1：获得呈灰白色粘稠固体状的非对映异构体1 (2S)-1-((5-乙基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺(12 mg，0.037 mmol，7%产率)。
[0367]
[0368] LC/MS保留时间(方法C): tR = 1.48分钟；HPLC保留时间(方法B): tR = 14.09分钟。
[0369] 非对映异构体2：获得呈灰白色粘稠固体状的非对映异构体2 (2S)-1-((5-乙基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺(13 mg，0.04 mmol，7%产率)：
[0370]
[0371] LC/MS保留时间(方法C): tR = 1.48分钟；HPLC保留时间(方法B): tR = 13.85分钟。
[0372] 实施例11
[0373] (S)-8-(2-氨基-4-甲基戊氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-5-酮
[0374]
[0375] 部分A. 4-氯烟酸甲酯
[0376] 在室温下向4-氯烟酸(0.5 g，3.17 mmol)于CH2Cl2(60 mL)中的溶液中逐滴添加乙二酰氯(1.007 g，7.93 mmol)，继而添加DMF(0.4 mL)。在室温下搅拌溶液3小时。逐滴添加甲醇(1.9 mL，46.8 mmol)且进一步搅拌该透明溶液30分钟。在减压下蒸发溶剂，得到4-氯烟酸甲酯(0.67 g，3.90 mmol，50%产率)。LCMS (ESI) m/e 172.5 [(M+H)+, C7H7ClNO2的计算值为172.0]；LCMS保留时间(方法D): tR = 1.15分钟。
[0377]
[0378] 部分B. 4-(4-氯-2-氟苯基)烟酸甲酯
[0379] 向用氮气吹洗5分钟的经搅拌的4-氯烟酸甲酯(7 g，40.8 mmol)、(4-氯-2-氟苯基)硼酸(7.11 g，40.8 mmol)及碳酸铯(26.6 g，82 mmol)于二噁烷(60 mL)与水(8 mL)的混合物中的溶液中添加Pd(PPh3)4(2.83 g，2.448 mmol)，且在85℃下加热所得混合物15小时。添加水(30 mL)且用EtOAc(1×50 mL)萃取混合物。用水(1×30 mL)及盐水(1×30 mL)洗涤有机层，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩。通过硅胶柱(30% EtOAc/己烷)纯化残余物，得到4-(4-氯-2-氟苯基)烟酸甲酯(5 g，18.82 mmol，40%产率)。LCMS (ESI) m/e 266.7 [(M+H)+, C13H10ClFNO2的计算值为266.0]；LCMS保留时间(方法C): tR = 1.73分钟。
[0380]
[0381] 部分C. 4-(4-氯-2-氟苯基)烟酸
[0382] 向4-(4-氯-2-氟苯基)烟酸甲酯(1 g，3.76 mmol)于MeOH(10 mL)及水(10 mL)中的溶液中添加NaOH(0.602 g，15.06 mmol)且在室温下搅拌溶液2小时。在减压下蒸发挥发性有机溶剂。冷却反应混合物至0℃且用50% HCl水溶液酸化。通过真空过滤收集如此形成的沉淀物，得到呈灰白色固体状的4-(4-氯-2-氟苯基)烟酸(0.3 g，1.192 mmol，30%粗产率)，其直接带入下一步骤中。
[0383]
[0384]
[0385] 部分D. 8-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-5-酮
[0386] 向4-(4-氯-2-氟苯基)烟酸(0.3 g，1.192 mmol)于无水DMSO(1 mL)中的溶液中添加Cs2CO3(0.388 g，1.192 mmol)且在60℃下对混合物进行微波加热2小时。用水稀释反应混合物且用乙酸乙酯(2×15 mL)萃取。用水(1×15 mL)及盐水(1×15 mL)洗涤经合并的有机萃取物，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩，得到8-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-5-酮(0.2 g，0.863 mmol，72%产率，2个步骤)。
[0387]
[0388] 的计算值为232.0]；LCMS保留时间(方法D): tR = 0.81分钟。
[0389]
[0390] 部分E. (4-甲基-1-((5-氧代-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯
[0391] 以类似于实施例8部分C的方式制备(4-甲基-1-((5-氧代-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯，得到标题产物(0.18 g，0.436 mmol，50%产率)。
[0392]
[0393] LCMS保留时间(方法D): tR = 0.96分钟。
[0394]
[0395] 部分F (S)-8-(2-氨基-4-甲基戊氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-5-酮
[0396] 以类似于实施例8部分D的方式去除(4-甲基-1-((5-氧代-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯的保护基，得到呈白色固体状的(S)-8-(2-氨基-4-甲基戊氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-5-酮(0.065 g，0.208 mmol，44%产率)。
[0397]
[0398] LC/MS保留时间(方法C): tR = 1.25分钟；HPLC保留时间(方法A): tR = 4.90分钟；HPLC保留时间(方法B): tR = 5.47分钟。
[0399] 实施例12
[0400] (S)-N-(8-(2-氨基-4-甲基戊氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-4-基)乙酰胺[0401]
[0402] 部分A. 4-氯吡啶-2-基氨基甲酸叔丁酯
[0403] 用氮气吹洗经搅拌的4-氯吡啶甲酸(0.2 g，1.269 mmol)、DPPA(0.351 g，1.269 mmol)及TEA(0.354 mL，2.54 mmol)于叔丁醇(15 mL)中的溶液5分钟且在100℃下加热反应混合物12小时。冷却混合物至室温且在减压下移除挥发物。用水(15 mL)稀释反应混合物且用乙酸乙酯(3×15 mL)萃取。用盐水(1×15 mL)洗涤经合并的有机萃取物，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩。通过硅胶层析(15%乙酸乙酯/己烷)纯化残余物，得到呈黄色固体状的(4-氯吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(0.17 g，0.743 mmol，59%产率)。
[0404]
[0405]
[0406] 部分B. 4-氯-3-甲酰基吡啶-2-基氨基甲酸叔丁酯
[0407] 向已冷却至-78℃的经搅拌的(4-氯吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(1.00 g，4.37 mmol)于THF(30 mL)中的溶液中逐滴添加正丁基锂(2.55 M于己烷中，4.1 mL，10.06 mmol)。完成添加后，在-78℃下搅拌溶液1小时。逐滴添加DMF(1.591 mL，20.55 mmol)且在-78℃下再搅拌所得溶液1小时。随后通过添加饱和氯化铵水溶液(20 mL)淬灭反应混合物且用乙酸乙酯(2×25 mL)萃取。用盐水(1×20 mL)洗涤经合并的有机萃取物，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩。通过中性氧化铝凝胶层析(乙酸乙酯/己烷)纯化粗残余物，得到呈黄色固体状的(4-氯-3-甲酰基吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(530 mg，2.07 mmol，27%产率)。
[0408]
[0409] LCMS保留时间(方法C): tR = 1.73分钟。
[0410]
[0411] 部分C. 4-(4-氯-2-氟苯基)-3-甲酰基吡啶-2-基氨基甲酸叔丁酯
[0412] 向经搅拌的(4-溴-3-甲酰基吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(100 mg，0.332 mmol)、(4-氯-2-氟苯基)硼酸(57.9 mg，0.332 mmol)及碳酸铯(216 mg，0.664 mmol)于THF(50 mL)及水(8 ml)中的悬浮液中添加Pd(PPh3)4(19.19 mg，0.017 mmol)，且加热反应混合物至85℃过夜。冷却反应混合物至室温，用水(30 mL)稀释且用乙酸乙酯(2×25 mL)萃取。用盐水(1×25 mL)洗涤经合并的有机萃取物，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩。通过硅胶层析(乙酸乙酯/己烷)纯化粗残余物，得到4-(4-氯-2-氟苯基)-3-甲酰基吡啶-2-基氨基甲酸叔丁酯(60 mg，0.171 mmol，35%产率)。LCMS (ESI) m/e 349.2 [(M-H)-, C17H15ClFN2O3的计算值为349.1]；LC/MS保留时间(方法C): tR = 2.05分钟。
[0413]
[0414] 部分D. 2-氨基-4-(4-氯-2-氟苯基)烟碱醛
[0415] 向经搅拌的(4-(4-氯-2-氟苯基)-3-甲酰基吡啶-2-基)氨基甲酸叔丁酯(0.9 g，2.57 mmol)于CH2Cl2(15 mL)中的溶液中添加TFA(3.95 mL，51.3 mmol)且在室温下搅拌反应混合物3小时。通过添加饱和碳酸氢钠水溶液(15 mL)淬灭反应物且用CH2Cl2(2×15 mL)萃取。用盐水(1×15 mL)洗涤经合并的有机萃取物，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩。粗2-氨基-4-(4-氯-2-氟苯基)烟碱醛(0.6 g，2.40 mmol，41%产率)不经进一步纯化即带入下一步骤中。LCMS (ESI) m/e 251.0 [(M+H)+, C12H9ClFN2O的计算值为251.0]；LC/MS保留时间(方法C): tR = 1.67分钟。
[0416]
[0417] 部分E. (2-氨基-4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)甲醇
[0418] 向经搅拌的2-氨基-4-(4-氯-2-氟苯基)烟碱醛(50 mg，0.199 mmol)于MeOH(2 mL)及THF(5 mL)中的溶液中添加硼氢化钠(9.06 mg，0.239 mmol)，随后搅拌溶液1小时。在减压下移除挥发性有机物且通过添加饱和氯化铵水溶液(10 mL)淬灭残余物。用CH2Cl2(2×10 mL)萃取反应混合物。用盐水(1×10 mL)洗涤经合并的有机萃取物，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩，得到(2-氨基-4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)甲醇(50 mg，0.198 mmol，21%产率，两个步骤)。LCMS (ESI) m/e 253 [(M+H)+, C12H11ClFN2O的计算值为253.0]；LC/MS保留时间(方法C): tR = 1.48分钟。
[0419]
[0420] 部分F. N-(8-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-4-基)乙酰胺
[0421] 在0℃下向经搅拌的8-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-4-胺(0.08 g，0.344 mmol)于吡啶(5 mL)中的溶液中添加乙酰氯(0.024 mL，0.344 mmol)且搅拌溶液2小时。在减压下移除挥发性有机物且用水(5 mL)稀释残余物。用CH2Cl2(2×15 mL)萃取反应混合物。用盐水(1×10 mL)洗涤经合并的有机萃取物，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩。粗残余物不经纯化即进行下一步骤。LCMS (ESI) m/e 273 [(M)-, C14H10ClN2O2的计算值为273.1]；LC/MS保留时间(方法C): tR = 1.89分钟。
[0422]
[0423] 部分G. (S)-N-(8-((2-(1,3-二氧代基异吲哚啉-2-基)-4-甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-4-基)乙酰胺
[0424] 在室温下向经搅拌的N-(8-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-4-基)乙酰胺(47 mg，0.171 mmol)、(S)-2-(1-羟基-4-甲基戊-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮(127 mg，0.513 mmol)、
2-二叔丁基膦基-2,4,6-三异丙基联苯(43.6 mg，0.103 mmol)及碳酸铯(84 mg，0.257 mmol)于甲苯(25 mL)中的溶液中添加乙酸钯(II)(11.52 mg，0.051 mmol)。使氮气鼓泡通过溶液5分钟，且在80℃下加热混合物14小时。冷却反应混合物至室温且用乙酸乙酯(30 mL)稀释，随后通过硅藻土过滤。添加水(30 mL)，分离有机层且用盐水(1×25 mL)洗涤，用硫酸钠干燥且在减压下浓缩。残余物不经进一步纯化即用于下一步骤中。LCMS (ESI) m/e
486.2 [(M+H)+, C28H28N3O5的计算值为486.2]；LC/MS保留时间(方法C): tR = 2.07分钟。
2-二叔丁基膦基-2,4,6-三异丙基联苯(43.6 mg，0.103 mmol)及碳酸铯(84 mg，0.257 mmol)于甲苯(25 mL)中的溶液中添加乙酸钯(II)(11.52 mg，0.051 mmol)。使氮气鼓泡通过溶液5分钟，且在80℃下加热混合物14小时。冷却反应混合物至室温且用乙酸乙酯(30 mL)稀释，随后通过硅藻土过滤。添加水(30 mL)，分离有机层且用盐水(1×25 mL)洗涤，用硫酸钠干燥且在减压下浓缩。残余物不经进一步纯化即用于下一步骤中。LCMS (ESI) m/e
486.2 [(M+H)+, C28H28N3O5的计算值为486.2]；LC/MS保留时间(方法C): tR = 2.07分钟。
[0425]
[0426] 部分H. (S)-N-(8-(2-氨基-4-甲基戊氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-4-基)乙酰胺
[0427] 在室温下向经搅拌的(S)-(1-((4-乙酰胺基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(150 mg，0.329 mmol)于CH2Cl2(10 mL)中的溶液中添加TFA(0.025 mL，0.329 mmol)且在室温下搅拌溶液3小时。在减压下浓缩溶液且通过制备型HPLC(0.1% TFA水溶液及甲醇)纯化样品，得到呈灰白色固体状的(S)-N-(8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-4-基)乙酰胺(40 mg，0.113 mmol，33%产率，三个步骤)。
[0428]
[0429] LC/MS保留时间(方法C): tR = 1.26分钟；HPLC保留时间(方法A): tR = 8.02分钟；HPLC保留时间(方法B): tR = 9.08分钟。
[0430] 实施例13
[0431] (S)-8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-4-胺
[0432]
[0433] 向经搅拌的(S)-N-(8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-4-基)乙酰胺(20 mg，0.056 mmol)(如实施例12部分H中制备)于乙醇(10 mL)与水(2 mL)的混合物中的溶液中添加KOH(31.6 mg，0.563 mmol)，且在70℃下加热反应物14小时。完成反应后，在减压下移除挥发性有机溶剂，添加水(20 mL)且用二氯甲烷(2×20 mL)萃取溶液。用水(1×20 mL)洗涤经合并的有机萃取物，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩，获得呈灰白色固体状的(S)-8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-4-胺(2.31 mg，7.15 μmol，13%产率)。
[0434]
[0435] LC/MS保留时间(方法C): tR = 1.21分钟；HPLC保留时间(方法A): tR = 7.52分钟；HPLC保留时间(方法B): tR = 8.68分钟。
[0436] 实施例14
[0437] (S)-1-(9-溴-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺
[0438]
[0439] 部分A. (S)-1-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基氨基甲酸叔丁酯
[0440] 向8-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶(0.489 g，2.247 mmol)(如实施例5部分D中制备)、(S)-(1-羟基-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(1.474 g，6.79 mmol)、二叔丁基(2',4',6'-三异丙基-[1,1'-联苯]-2-基)膦(0.572 g，1.348 mmol)、乙酸钯(II)(0.151 g，
0.674 mmol)及碳酸铯(1.098 g，3.37 mmol)中添加甲苯(4 mL)。使氮气鼓泡通过混合物5分钟，且在80℃下加热混合物15小时。冷却反应混合物至室温且通过硅藻土床过滤。向滤液中添加水(10 mL)且用乙酸乙酯(3×15 mL)萃取产物。用盐水(1×10 mL)洗涤经合并的有机萃取物，用硫酸钠干燥且在减压下浓缩。通过制备型TLC使用(50%乙酸乙酯/石油醚)纯化如此获得的残余物，得到呈半固体状的(1-((5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(0.4 g，1.00 mmol，45%产率)。LCMS (ESI) m/e 399.2 [(M+H)+, C23H31N2O4的计算值为399.5]；LC/MS保留时间(方法C): tR = 2.16分钟。
0.674 mmol)及碳酸铯(1.098 g，3.37 mmol)中添加甲苯(4 mL)。使氮气鼓泡通过混合物5分钟，且在80℃下加热混合物15小时。冷却反应混合物至室温且通过硅藻土床过滤。向滤液中添加水(10 mL)且用乙酸乙酯(3×15 mL)萃取产物。用盐水(1×10 mL)洗涤经合并的有机萃取物，用硫酸钠干燥且在减压下浓缩。通过制备型TLC使用(50%乙酸乙酯/石油醚)纯化如此获得的残余物，得到呈半固体状的(1-((5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(0.4 g，1.00 mmol，45%产率)。LCMS (ESI) m/e 399.2 [(M+H)+, C23H31N2O4的计算值为399.5]；LC/MS保留时间(方法C): tR = 2.16分钟。
[0441]
[0442] 部分B. (S)-1-(9-溴-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基氨基甲酸叔丁酯
[0443] 冷却(1-((5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(0.072 g，0.181 mmol)于乙腈(5 mL)中的溶液至0℃且搅拌2分钟。单份添加NBS(0.029 g，0.163 mmol)且在0℃下搅拌反应混合物2小时。在减压下移除溶剂且添加水(10 mL)。用乙酸乙酯(3×15 mL)萃取产物。用水(1×20 mL)洗涤经合并的有机萃取物，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩。通过制备型TLC(40% EtOAc:石油醚)纯化残余物，获得(S)-1-(9-溴-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基氨基甲酸叔丁酯(30 mg，0.063 mmol，35%产率)。
[0444]
[0445]
[0446] 部分C. (S)-1-(9-溴-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺[0447] 经5分钟向已冷却至0℃的(1-((9-溴-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(0.045 g，0.094 mmol)于二氯甲烷(4 mL)中的溶液中缓慢添加2 M盐酸的乙醚溶液(6 mL，0.094 mmol)。在0℃下搅拌反应混合物5分钟，随后在室温下搅拌2小时。通过在减压下浓缩移除溶剂。将粗产物溶解于水(10 mL)中且用乙醚(3×10 mL)洗涤。浓缩水层且通过反相HPLC(0.1% TFA水溶液及乙腈)纯化，得到呈黄色固体状的1-((9-溴-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺(0.016 g，0.042 mmol，45%产率)。
[0448]
[0449] 的计算值为377.1]；LC/MS保留时间(方法D): tR = 1.25分钟；HPLC保留时间(方法A): tR = 8.59分钟；HPLC保留时间(方法B): tR = 10.33分钟。
[0450] 实施例15
[0451] 8-(((S)-2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-4-胺[0452]
[0453] 部分A. 1-(2-氨基-4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)乙醇
[0454] 在-60℃下向经搅拌的2-氨基-4-(4-氯-2-氟苯基)烟碱醛(0.2 g，0.798 mmol)(如实施例12部分D中所述制备)于THF(15 mL)中的溶液中添加甲基溴化镁(3.0 M于THF中)(0.82 mL，2.394 mmol)且搅拌反应物30分钟。用饱和氯化铵溶液淬灭反应物，用乙酸乙酯(2×10 mL)萃取。用盐水(1×10 mL)洗涤经合并的有机层，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩，得到1-(2-氨基-4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)乙醇(0.2 g，0.691 mmol，87%产率)。LCMS (ESI) m/e 267.0 [(M+H)+, C13H13ClFN2O的计算值为267.1]；LC/MS保留时间(方法D): tR = 1.36分钟。
[0455]
[0456] 部分B. 8-氯-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-4-胺
[0457] 如实施例5部分D中所述使用1-(2-氨基-4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)乙醇制备，得到8-氯-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-4-胺(0.15 g，0.557 mmol，74%产率)。LCMS (ESI) m/e 247.0 [(M+H)+, C13H12ClN2O的计算值为247.05]；LC/MS保留时间(方法D): tR = 1.52分钟。
[0458]
[0459] 部分C. N-(8-氯-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-4-基)乙酰胺
[0460] 如实施例12部分F中所述使用8-氯-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-4-胺制备，得到N-(8-氯-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-4-基)乙酰胺(0.142 g，0.398 mmol，66%产率)。LCMS (ESI) m/e 289.0 [(M+H)+, C15H14ClN2O2的计算值为289.1]；LC/MS保留时间(方法B): tR = 1.62分钟。
[0461]
[0462] 部分D. (S)-(1-羟基-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯
[0463] 在室温下向经搅拌的(S)-2-氨基-4-甲基戊-1-醇(5 g，42.7 mmol)于四氢呋喃(100 mL)中的溶液中逐滴添加BOC2O(9.91 mL，42.7 mmol)且在室温下搅拌反应物5小时。完成反应后，在减压下移除溶剂，得到呈无色油状的(S)-(1-羟基-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(6.3 g，29.0 mmol，68%产率)。
[0464]
[0465]
[0466] 部分E. ((2S)-1-((4-乙酰胺基-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯
[0467] 如实施例8部分C中所述使用(S)-(1-羟基-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯及N-(8-氯-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-4-基)乙酰胺制备，得到呈黄色固体状的((2S)-1-((4-乙酰胺基-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(0.6 g，0.882 mmol，51%产率)。LCMS (ESI) m/e 470.2 [(M+H)+, C26H36N3O5的计算值为470.3]；LC/MS保留时间(方法C): tR = 1.89分钟。
[0468]
[0469] 部分F. N-(8-(((S)-2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-4-基)乙酰胺
[0470] 在室温下向经搅拌的((2S)-1-((4-乙酰胺基-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(0.15 g，0.319 mmol)于二氯甲烷(25 mL)中的溶液中添加TFA(0.246 mL，3.19 mmol)且搅拌混合物12小时。完成反应后，在减压下移除溶剂，得到呈棕色油状的N-(8-(((S)-2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-4-基)乙酰胺(0.18 g，0.281 mmol，58%产率)。产物不经进一步纯化即继续带入下一步骤中。LCMS (ESI) m/e 370.2 [(M+H)+, C21H28N3O3的计算值为370.2]；LC/MS保留时间(方法C): tR = 1.14分钟。
[0471]
[0472] 部分G. 8-(((S)-2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-4-胺
[0473] 如实施例13中所述使用N-(8-(((S)-2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-4-基)乙酰胺制备，得到呈黄色固体状的8-(((S)-2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-4-胺(15 mg，0.045 mmol，9%产率)。
[0474]
[0475] LC/MS保留时间(方法D): tR = 1.25分钟；HPLC保留时间(方法A): tR = 8.78分钟；HPLC保留时间(方法C): tR = 12.78分钟。
[0476] 实施例16
[0477] (S)-1-((1-氟-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺
[0478]
[0479] 部分A. 4-氯-5-氟烟酸
[0480] 向THF(20 mL)中添加1.6 M正丁基锂的己烷溶液(9.50 mL，15.21 mmol)且冷却至-78℃。向此溶液中依序添加二异丙胺(2.167 mL，15.21 mmol)及4-氯-3-氟吡啶(2 g，15.21 mmol)且在-78℃下搅拌溶液6小时。随后将反应混合物倾倒于碎干冰上且搅拌直至反应混合物升温至室温。通过添加氯化铵水溶液淬灭反应物，使用浓盐酸酸化至pH = 2且用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取。用盐水(10 mL)洗涤经合并的有机层，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩，得到呈浅黄色固体状的4-氯-5-氟烟酸(1.7 g，9.68 mmol，64%产率)。LCMS (ESI) m/e 175.9 [(M+H)+, C6H4ClFNO2的计算值为176.0]；LC/MS保留时间(方法F): tR = 0.57分钟。
[0481]
[0482] 部分B. 4-氯-5-氟烟酸甲酯
[0483] 冷却4-氯-5-氟烟碱酸(1.7 g，9.68 mmol)于乙腈(18 mL)中的溶液至0℃。向此溶液中逐滴添加DBU(3.65 mL，24.21 mmol)且搅拌所得溶液30分钟。逐滴添加碘甲烷(3.03 mL，48.4 mmol)且在室温下搅拌12小时。在减压下完全移除挥发物且通过硅胶层析使用乙酸乙酯/己烷的梯度纯化残余物，得到呈黄色固体状的4-氯-5-氟烟酸甲酯(1.2 g，6.33 mmol，65%产率)。LCMS (ESI) m/e 190.0 [(M+H)+, C7H6ClFNO2的计算值为190.0]；LC/MS保留时间(方法F): tR = 0.77分钟。
[0484]
[0485] 部分C. 4-(4-氯-2-氟苯基)-5-氟烟酸甲酯
[0486] 向4-氯-5-氟烟酸酯(1.2 g，6.33 mmol)于1,4-二噁烷(12 mL)及水(0.5 mL)中的溶液中添加(4-氯-2-氟苯基)硼酸(1.214 g，6.96 mmol)及磷酸氢二钾(2.205 g，12.66 mmol)。向此混合物中添加PdCl2(dppf)(0.371 g，0.506 mmol)且用N2吹洗溶液10分钟，随后加热至80℃持续12小时。冷却混合物至室温且添加水(25 mL)。用乙酸乙酯(3×25 mL)萃取溶液。用盐水(25 mL)洗涤经合并的有机层且在减压下浓缩，得到残余物，将其通过硅胶柱使用乙酸乙酯/己烷的梯度纯化，得到呈黄色固体状的4-(4-氯-2-氟苯基)-5-氟烟酸甲酯(900 mg，3.17 mmol，50%产率)。LCMS (ESI) m/e 284.0 [(M+H)+, C13H9ClF2NO2的计算值为284.0]；LC/MS保留时间(方法F): tR = 1.01分钟。
[0487]
[0488] 部分D. (4-(4-氯-2-氟苯基)-5-氟吡啶-3-基)甲醇
[0489] 向已冷却至0℃的4-(4-氯-2-氟苯基)-5-氟烟酸酯(300 mg，1.058 mmol)于四氢呋喃(7 mL)中的溶液中逐滴添加LAH(0.441 mL，1.058 mmol)/THF且搅拌溶液30分钟。随后使反应物升温至室温且搅拌12小时。用饱和氯化铵水溶液(5 mL)淬灭反应物且用乙酸乙酯(2×5 mL)萃取。经硫酸钠干燥经合并的有机层且在减压下浓缩，得到呈浅棕色油状的(4-(4-氯-2-氟苯基)-5-氟吡啶-3-基)甲醇(200 mg，0.782 mmol，74%产率)。LCMS (ESI) m/e 255.9 [(M+H)+, C12H9ClF2NO的计算值为256.0]；LC/MS保留时间(方法F): tR = 0.89分钟。
[0490]
[0491] 部分E. 8-氯-1-氟-5H-色烯并[3,4-c]吡啶
[0492] 如实施例8部分B中所述使用(4-(4-氯-2-氟苯基)-5-氟吡啶-3-基)甲醇制备，得到呈白色固体状的8-氯-1-氟-5H-色烯并[3,4-c]吡啶(35 mg，0.149 mmol，19%产率)。LCMS (ESI) m/e 235.9 [(M+H)+, C12H8ClFNO的计算值为236.0]；LC/MS保留时间(方法F): tR = 0.92分钟。
[0493]
[0494] 部分F. (S)-(1-((1-氟-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯
[0495] 如实施例8部分C中所述使用8-氯-1-氟-5H-色烯并[3,4-c]吡啶制备，得到呈浅黄色固体状的(S)-(1-((1-氟-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(35 mg，0.084 mmol，66%产率)。LCMS (ESI) m/e 417.1 [(M+H)+, C23H30FN2O4的计算值为417.2]；LC/MS保留时间(方法F): tR = 1.00分钟。
[0496]
[0497] 部分G. (S)-1-((1-氟-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺[0498] 如实施例8部分D中所述使用(S)-(1-((1-氟-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯制备，得到呈白色固体状的(S)-1-((1-氟-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺, 2 TFA(12.47 mg，0.022 mmol，26%产率)。
[0499]
[0500] LC/MS保留时间(方法F): tR = 0.62分钟；HPLC保留时间(方法A): tR = 10.68分钟；HPLC保留时间(方法B): tR = 11.50分钟。
[0501] 实施例17
[0502] 1-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-5,5,5-三氟戊-2-胺
[0503]
[0504] 部分A. 2-(二苯基亚甲基氨基)-5,5,5-三氟戊酸叔丁酯
[0505] 在氮气氛围下经30分钟向已冷却至-78℃的经搅拌的2-((二苯基亚甲基)氨基)乙酸叔丁酯(1 g，3.39 mmol)于THF(20 ml)中的溶液中逐滴添加2 M LDA于THF/庚烷/乙基苯中的溶液(2.54 ml，5.08 mmol)。随后向此混合物中添加三氟甲磺酸3,3,3-三氟丙酯(1.083 g，4.40 mmol)。使反应物逐渐升温至室温且搅拌4小时。通过在0℃下添加饱和氯化铵水溶液淬灭反应混合物。随后用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取反应混合物。用水及盐水洗涤经合并的有机萃取物，经硫酸钠干燥，随后在减压下浓缩。通过硅胶柱层析使用2%乙酸乙酯/己烷纯化粗产物，得到呈黄色油状的2-((二苯基亚甲基)氨基)-5,5,5-三氟戊酸叔丁酯(800 mg，2.02 mmol，60%产率)。LCMS (ESI) m/e 391.9 [(M+H)+, C22H24F3NO2的计算值为392.2]；LC/MS保留时间(方法E): tR = 2.49分钟。
[0506]
[0507] 部分B. (S)-2-氨基-5,5,5-三氟戊酸(盐酸盐)
[0508] 在100℃下加热经搅拌的2-((二苯基亚甲基)氨基)-5,5,5-三氟戊酸叔丁酯(800 mg，2.023 mmol)于50%盐酸水溶液(0.123 mL，2.023 mmol)中的溶液至回流持续8小时。冷却反应混合物至室温且用乙酸乙酯(10 mL)洗涤。在减压下浓缩水层，得到呈白色固体状的2-氨基-5,5,5-三氟戊酸盐酸盐(400 mg，1.82 mmol，90%产率)。LCMS (ESI) m/e 171.7 [(M+H)+, C5H7F3O2的计算值为172.1]；LC/MS保留时间(方法H): tR = 0.80分钟。
[0509]
[0510] 部分C. (S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-5,5,5-三氟戊酸
[0511] 在室温下向经搅拌的2-氨基-5,5,5-三氟戊酸盐酸盐(400 mg，1.503 mmol)于THF(8 mL)及水(8 mL)中的溶液中添加K2CO3(831 mg，6.01 mmol)且搅拌溶液10分钟。向此混合物中添加BOC2O(656 mg，3.01 mmol)。在室温下搅拌反应混合物8小时。在减压下浓缩反应混合物。用乙酸乙酯(3×5 mL)洗涤水层。用饱和柠檬酸溶液(5 mL)酸化水层，随后用乙酸乙酯(3×8 mL)萃取。依序用水(3×5 mL)及盐水(10 mL)洗涤经合并的有机层，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩，得到呈无色油状的定量2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5,5,5-三氟戊酸(500 mg，1.84 mmol)。粗物质不经进一步纯化即原样进行下一步骤。
[0512]
[0513]
[0514] 部分D. 5,5,5-三氟-1-羟基戊-2-基氨基甲酸叔丁酯
[0515] 在氮气氛围下向已冷却至-10℃的经搅拌的2-((叔丁氧基羰基)氨基)-5,5,5-三氟戊酸(500 mg，1.843 mmol)于THF(15 ml)中的溶液中依序逐滴添加N-甲基吗啉(0.223 ml，2.028 mmol)及氯甲酸异丁酯(0.266 ml，2.028 mmol)且搅拌30分钟。过滤反应混合物。将滤液添加至硼氢化钠(147 mg，3.87 mmol)/水(10 mL)中且搅拌5分钟。用乙酸乙酯(10 mL)稀释混合物。分离有机层且用盐水(2×10 mL)洗涤，干燥(Na2SO4)且在减压下蒸发，得到呈白色固体状的(5,5,5-三氟-1-羟基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(400 mg，1.55 mmol，84%产率)，其不经任何纯化即进行下一步骤。
[0516]
[0517] 部分E. 1-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-5,5,5-三氟戊-2-基氨基甲酸叔丁酯
[0518] 如实施例8部分C中所述使用8-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶制备，得到呈棕色固体状的(1-((5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-5,5,5-三氟戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(25 mg，9.12 μmol，4%产率)。LCMS (ESI) m/e 439.2 [(M+H)+, C22H26F3N2O4的计算值为439.2] LC/MS保留时间(方法C): tR = 2.04分钟。
[0519]
[0520] 部分F. 1-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-5,5,5-三氟戊-2-胺
[0521] 如实施例8部分D中所述使用(1-((5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-5,5,5-三氟戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯制备，得到呈黄色油状的1-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-5,5,5-三氟戊-2-胺(15 mg，0.041 mmol，18%产率)。
[0522]
[0523]
[0524] 的计算值为339.1]；LC/MS保留时间(方法E): tR = 1.76分钟；HPLC保留时间(方法A): tR = 7.46分钟；HPLC保留时间(方法B): tR = 8.75分钟。
[0525] 实施例18
[0526] (S)-N-(8-(2-氨基-4-甲基戊氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺[0527]
[0528] 部分A. 4-氯吡啶-2-胺
[0529] 在室温下向经搅拌的4-氯吡啶-2-胺(8 g，62.2 mmol)于乙腈(600 mL)中的溶液中逐份添加NBS(11.08 g，62.2 mmol)且搅拌反应物14小时。在减压下浓缩反应混合物。使残余物在乙酸乙酯及水中重构。用乙酸乙酯(3×50 mL)萃取有机相。用水(100 mL)、盐水(100 mL)洗涤经合并的有机层且经硫酸钠干燥。在减压下浓缩有机相，得到呈黄色固体状的5-溴-4-氯吡啶-2-胺(13 g，99%产率)，其不经进一步纯化即用于下一步骤中。LCMS (ESI) m/e 207.0 [(M+H)+, C5H5BrClN2的计算值为206.9]；LC/MS保留时间(方法B): tR = 0.8分钟； 。
[0530]
[0531] 部分B. N-(5-溴-4-氯吡啶-2-基)乙酰胺
[0532] 在0℃下向经搅拌的5-溴-4-氯吡啶-2-胺(11.6 g，55.9 mmol)于吡啶(100 mL)中的溶液中添加乙酰氯(3.98 mL，55.9 mmol)且在室温下搅拌反应物3小时。用冷水淬灭反应物。在减压下浓缩反应混合物。使残余物在乙酸乙酯及水中重构。用乙酸乙酯(3×50 mL)萃取有机相。用水(100 mL)、盐水(100 mL)洗涤经合并的有机层且经硫酸钠干燥。在减压下浓缩有机相，得到呈白色固体状的N-(5-溴-4-氯吡啶-2-基)乙酰胺(14.6 g，55.9 mmol，定量产率)，其不经进一步纯化即用于下一步骤中。LCMS (ESI) m/e 249 [(M+H)+, C7H7BrClN2O的计算值为248.9] LC/MS保留时间(方法B): tR = 1.64分钟；
[0533]。
[0534]
[0535] 部分C. N-(4-氯-5-乙烯基吡啶-2-基)乙酰胺
[0536] 向经搅拌的N-(5-溴-4-氯吡啶-2-基)乙酰胺(7 g，28.1 mmol)、2,4,6-三乙烯基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三硼杂环己烷与吡啶的复合物(1:1)(8.78 g，36.5 mmol)及碳酸钠(5.95 g，56.1 mmol)于7 mL水中的溶液在甲苯(50 mL)与乙醇(8 mL)的混合物中的溶液中添加Pd(PPh3)4(0.973 g，0.842 mmol)。通过用氮气鼓泡5分钟吹洗溶液，随后在85℃下加热
14小时。冷却反应物至室温且用乙酸乙酯(50 mL)稀释，随后通过硅藻土床过滤。用水稀释滤液且分离有机层，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥。在减压下浓缩有机相且通过硅胶柱层析使用乙酸乙酯/己烷的梯度纯化残余物。在30%乙酸乙酯/己烷下洗脱产物且浓缩所要级分，得到呈黄色固体状的N-(4-氯-5-乙烯基吡啶-2-基)乙酰胺(5.92 g，27.7 mmol，99%产率)。
+
LCMS (ESI) m/e 197.2 [(M+H) , C9H10ClN2O的计算值为197.04] LC/MS保留时间(方法A): tR = 1.50分钟；
14小时。冷却反应物至室温且用乙酸乙酯(50 mL)稀释，随后通过硅藻土床过滤。用水稀释滤液且分离有机层，用盐水洗涤，经硫酸钠干燥。在减压下浓缩有机相且通过硅胶柱层析使用乙酸乙酯/己烷的梯度纯化残余物。在30%乙酸乙酯/己烷下洗脱产物且浓缩所要级分，得到呈黄色固体状的N-(4-氯-5-乙烯基吡啶-2-基)乙酰胺(5.92 g，27.7 mmol，99%产率)。
+
LCMS (ESI) m/e 197.2 [(M+H) , C9H10ClN2O的计算值为197.04] LC/MS保留时间(方法A): tR = 1.50分钟；
[0537]
[0538] 。
[0539]
[0540] 部分D. N-(4-氯-5-甲酰基吡啶-2-基)乙酰胺
[0541] 在0℃下向经搅拌的N-(4-氯-5-乙烯基吡啶-2-基)乙酰胺(6 g，30.5 mmol)及2,6-二甲基吡啶(7.11 mL，61.0 mmol)于二噁烷(110 mL)与水(25 mL)的混合物中的溶液中添加2.5 wt%四氧化锇于2-甲基-2-丙醇中的溶液(9.58 mL，30.5 mmol)，继而添加高碘酸钠(19.58 g，92 mmol)且搅拌反应物4小时。用水稀释反应混合物且用乙酸乙酯(2×100 mL)萃取。用盐水溶液洗涤经合并的有机层，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩。通过二氧化硅柱使用己烷/乙酸乙酯纯化残余物，得到呈灰白色固体状的N-(4-氯-5-甲酰基吡啶-2-基)乙酰胺(5.8 g，28.1 mmol，92%产率)。LCMS (ESI) m/e 197.0 [(M)-, C8H6ClN2O2的计算值为
197.04] LC/MS保留时间(方法A): tR = 1.21分钟；
197.04] LC/MS保留时间(方法A): tR = 1.21分钟；
[0542] 。
[0543]
[0544] 部分E. N-(4-(4-氯-2-氟苯基)-5-甲酰基吡啶-2-基)乙酰胺
[0545] 向经搅拌的N-(4-氯-5-甲酰基吡啶-2-基)乙酰胺(3 g，15.11 mmol)、(4-氯-2-氟苯基)硼酸(2.63 g，15.11 mmol)、碳酸铯(9.84 g，30.2 mmol)于水(8 mL)与THF(25 mL)的混合物中的溶液中添加Pd(PPh3)4(19.19 mg，0.017 mmol)且加热反应物至85℃持续12小时。用水稀释反应混合物且用乙酸乙酯(2×25 mL)萃取。用水、盐水洗涤经合并的有机层，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩。通过硅胶层析使用己烷/乙酸乙酯作为洗脱液来纯化残余物，得到呈灰白色固体状的N-(4-(4-氯-2-氟苯基)-5-甲酰基吡啶-2-基)乙酰胺(2.8 g，9.01 mmol，60%产率)。LCMS (ESI) m/e 291.0 [(M)-, C14H9ClFN2O2的计算值为291.0] LC/MS保留时间(方法A): tR = 1.69分钟；
[0546] 。
[0547]
[0548] 部分F. N-(4-(4-氯-2-氟苯基)-5-(羟基甲基)吡啶-2-基)乙酰胺
[0549] 如实施例5部分C中所述使用N-(4-(4-氯-2-氟苯基)-5-甲酰基吡啶-2-基)乙酰胺(9 g，24.29 mmol)制备，得到呈棕色油状的N-(4-(4-氯-2-氟苯基)-5-(羟基甲基)吡啶-2-基)乙酰胺(9 g，定量产率)。其不经纯化即用于下一步骤中。LCMS (ESI) m/e 295.2 [(M)-, C14H13ClFN2O2的计算值为295.1] LC/MS保留时间(方法E): tR = 1.44分钟。
[0550]
[0551] 部分G. N-(8-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺
[0552] 向经搅拌的N-(4-(4-氯-2-氟苯基)-5-(羟基甲基)吡啶-2-基)乙酰胺(9 g，23.82 mmol)于DMF(90 mL)中的溶液中添加碳酸钾(9.88 g，71.5 mmol)，紧密密封所得混合物且在95℃下加热16小时。随后冷却反应混合物至室温且在减压下移除挥发物。将粗物质溶解于水(200 mL)中且过滤。用水(2×250 mL)洗涤残余物且在减压下干燥16小时，得到呈浅棕色固体状的N-(8-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺(5.5 g，20.02 mmol，84%产率)。LCMS (ESI) m/e 275.2 [(M)-, C14H12ClN2O2的计算值为275.1] LC/MS保留时间(方法D): tR = 1.77分钟；
[0553]
[0554] 。
[0555]
[0556] 部分H. (S)-1-(2-乙酰胺基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基氨基甲酸叔丁酯
[0557] 用氩气吹洗经搅拌的N-(8-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺(2.5 g，9.10 mmol)、(S)-(1-羟基-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(5.93 g，27.3 mmol)、二叔丁基(2',4',6'-三异丙基-3-甲氧基-6-甲基-[1,1'-联苯]-2-基)膦(RockPhos)(0.171 g，0.364 mmol)、碳酸铯(4.45 g，13.65 mmol)及分子筛4Å(1.5 g，9.10 mmol)于甲苯(10 mL)中的悬浮液10分钟，随后用氯化烯丙基钯(II)(0.067 g，0.182 mmol)处理。使氩气再次鼓泡15分钟，紧密密封所得混合物且在90℃下加热21小时。冷却反应物至室温，用乙酸乙酯(15 mL)稀释且通过硅藻土垫过滤。在减压下蒸发滤液，得到粗物质，通过硅胶柱层析(3%甲醇/氯仿)纯化，得到被Boc-亮氨醇污染的所要产物。随后用己烷(2×10 mL)处理油状混合物，得到白色固体，通过SFC方法(柱：Chiracel OJ-H，(250×4.6)mm，5 μ，0.5% DEA/乙腈)纯化，得到(S)-(1-((2-乙酰胺基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(2.4 g，5.24 mmol，58%产率)。
[0558]
[0559]
[0560] 部分I. (S)-N-(8-(2-氨基-4-甲基戊氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺
[0561] 如实施例8部分D中所述使用(S)-1-(2-乙酰胺基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基氨基甲酸叔丁酯(4.8 g，10.54 mmol)制备，得到呈黄色固体状的(S)-N-(8-(2-氨基-4-甲基戊氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺(3.26 g，9.06 mmol，86%产率)。LCMS (ESI) m/e 356.2 [(M)-, C20H26N3O3的计算值为356.2] LC/MS保留时间(方法H): tR = 1.55分钟；
[0562]
[0563] 。
[0564] 实施例19
[0565] (S)-4-甲基-1-(螺[色烯并[3,4-c]吡啶-5,3'-氧杂环丁烷]-8-基氧基)戊-2-胺[0566]
[0567] 部分A. 3-(4-氯吡啶-3-基)氧杂环丁烷-3-醇
[0568] 通过与无水甲苯一起在圆底烧瓶中共沸蒸馏来干燥4-氯吡啶(5 g，44.0 mmol)盐酸盐。在氮气氛围下向其中添加无水THF(100 mL)且冷却至-78℃。15分钟后，逐滴添加2 M LDA于THF/庚烷/乙基苯中的溶液(48.4 mL，97 mmol)且搅拌反应物30分钟。随后添加氧杂环丁烷-3-酮(3.81 g，52.8 mmol)且在-78℃下搅拌反应物5分钟，随后移除冷浴且使反应物逐渐升温至室温(约1小时)。通过添加氯化铵水溶液淬灭反应物且用乙酸乙酯(3×50 mL)萃取有机相。干燥经合并的有机萃取物且在减压下浓缩，得到呈黄色油状的3-(4-氯吡啶-3-基)氧杂环丁烷-3-醇(3.8 g，20.47 mmol，46%产率)。
[0569]
[0570] 部分B. 3-(4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)氧杂环丁烷-3-醇
[0571] 如实施例5部分B中所述使用3-(4-氯吡啶-3-基)氧杂环丁烷-3-醇制备，得到呈灰白色固体状的3-(4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)氧杂环丁烷-3-醇(750 mg，2.68 mmol，50%产率)。LCMS (ESI) m/e 280.0 [(M+H)+, C14H12ClFNO2的计算值为280.0]；LC/MS保留时间(方法E): tR = 1.90分钟。
[0572]
[0573] 部分C. 8-氯螺[色烯并[3,4-c]吡啶-5,3'-氧杂环丁烷]
[0574] 如实施例5部分D中所述使用3-(4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)氧杂环丁烷-3-醇制备，得到呈淡棕色固体状的8-氯螺[色烯并[3,4-c]吡啶-5,3'-氧杂环丁烷](40 mg，0.154 mmol，22%产率)。LCMS (ESI) m/e 260.0 [(M+H)+, C14H11ClNO2的计算值为260.0]；
LC/MS保留时间(方法E): tR = 1.92分钟。
LC/MS保留时间(方法E): tR = 1.92分钟。
[0575]
[0576] 部分D. (S)-2-(4-甲基-1-(螺[色烯并[3,4-c]吡啶-5,3'-氧杂环丁烷]-8-基氧基)戊-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮
[0577] 如实施例5部分E中所述使用8-氯螺[色烯并[3,4-c]吡啶-5,3'-氧杂环丁烷]制备，得到呈淡棕色固体状的2-(4-甲基-1-(螺[色烯并[3,4-c]吡啶-5,3'-氧杂环丁烷]-8-基氧基)戊-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮(35 mg，0.074 mmol，64%产率)。LCMS (ESI) m/e 471.2 [(M+H)+, C28H27N2O5的计算值为471.2]；LC/MS保留时间(方法E): tR = 2.14分钟。
[0578]
[0579] 部分E. (S)-4-甲基-1-(螺[色烯并[3,4-c]吡啶-5,3'-氧杂环丁烷]-8-基氧基)戊-2-胺
[0580] 如实施例5部分F中所述使用(S)-2-(4-甲基-1-(螺[色烯并[3,4-c]吡啶-5,3'-氧杂环丁烷]-8-基氧基)戊-2-基)异吲哚啉-1,3-二酮制备，得到呈浅棕色固体状的(S)-4-甲基-1-(螺[色烯并[3,4-c]吡啶-5,3'-氧杂环丁烷]-8-基氧基)戊-2-胺(13 mg，0.038 mmol，51%产率)。
[0581]
[0582] 的计算值为341.2]；LC/MS保留时间(方法E): tR = 1.71分钟；HPLC保留时间(方法A): tR = 6.93分钟；HPLC保留时间(方法B): tR = 8.53分钟。
[0583] 实施例20
[0584] (8-(((S)-2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5-(氯甲基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-5-基)甲醇
[0585]
[0586] 向已冷却至0℃的((S)-(4-甲基-1-(螺[色烯并[3,4-c]吡啶-5,3'-氧杂环丁烷]-8-基氧基)戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(10 mg，0.023 mmol)(如实施例19部分D中所述制备)于二氯甲烷(1 mL)中的溶液中逐滴添加1 M HCl/乙醚(23 μL，0.023 mmol)且搅拌溶液30分钟。随后使反应物升温至室温且搅拌2小时。完成反应后，在减压下移除挥发物且通过制备型HPLC纯化，得到呈黄色固体状的产物(8-(((S)-2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5-(氯甲基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-5-基)甲醇(2.08 mg，5.52 μmol，24%产率)。
[0587]
[0588]
[0589] 的计算值为377.2]；LC/MS保留时间(方法E): tR = 1.71分钟；HPLC保留时间(方法A): tR = 8.12分钟；HPLC保留时间(方法B): tR = 9.87分钟。
[0590] 实施例21
[0591] (2S)-1-(9-溴-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺[0592]
[0593] 部分A. (2S)-1-(9-溴-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基氨基甲酸叔丁酯
[0594] 如实施例14部分B中所述使用(2S)-4-甲基-1-(5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)戊-2-基氨基甲酸叔丁酯(如实施例6中所述制备)制备，得到(2S)-1-(9-溴-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基氨基甲酸叔丁酯(120 mg，0.24 mmol，定量)。LCMS (ESI) m/e 491.2 [(M+H)+, C24H32BrN2O4的计算值为491.1] LC/MS保留时间(方法C): tR = 2.44分钟。
[0595]
[0596] 部分B. (2S)-1-(9-溴-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺.
[0597] 如实施例8部分D中所述使用((2S)-1-((9-溴-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(20 mg，0.041 mmol)制备，得到呈黄色固体状的(2S)-1-((9-溴-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺(7 mg，0.018 mmol，44%产率)。
[0598]
[0599] 的计算值为391.1] LC/MS保留时间(方法C): tR = 1.64分钟。HPLC保留时间(方法A): tR = 8.36分钟及8.44分钟(非对映异构混合物)；HPLC保留时间(方法B): tR = 5.23分钟。
[0600] 实施例22
[0601] 8-((S)-2-氨基-4-甲基戊氧基)-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-9-甲腈[0602]
[0603]
[0604] 部分A. (2S)-1-(9-氰基-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基氨基甲酸叔丁酯
[0605] 向((2S)-1-((9-溴-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(100 mg，0.203 mmol)(如实施例21部分A中所述制备)及L-脯氨酸(23.43 mg，0.203 mmol)于DMF(2 mL)中的混合物中添加氰化铜(I)(36.5 mg，0.407 mmol)。使氩气鼓泡通过经搅拌的悬浮液5分钟。在120℃下在氩气氛围下搅拌反应混合物12小时。随后冷却混合物至室温，用乙酸乙酯(10 mL)稀释且通过硅藻土过滤。用水(10 mL)及盐水(10 mL)洗涤滤液。经硫酸钠干燥经合并的有机萃取物且在减压下浓缩，得到粗物质，通过硅胶层析(石油醚:乙酸乙酯流动相)纯化，得到((2S)-1-((9-氰基-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(15 mg，0.034 mmol，17%产率)。LCMS (ESI) m/e 438.2 [(M+H)+, C25H32N3O4的计算值为438.2] LC/MS保留时间(方法D): tR = 1.81分钟。
[0606]
[0607] 部分B. 8-((S)-2-氨基-4-甲基戊氧基)-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-9-甲腈[0608] 经1分钟向已冷却至0℃的((2S)-1-((9-氰基-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(15 mg，0.034 mmol)于二氯甲烷(2 mL)中的溶液中缓慢添加4 M HCl的二噁烷溶液(1.0 mL，4.00 mmol)。在0℃下搅拌反应混合物5分钟，随后升温至室温且搅拌2小时。在减压下移除溶剂且用5%甲醇/乙酸乙酯洗涤粗物质，得到呈黄色固体状的8-(((S)-2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-9-甲腈(9 mg，0.025 mmol，73%产率)。
[0609]
[0610] 的计算值为338.2] LC/MS保留时间(方法D): tR = 1.17分钟。HPLC保留时间(方法A): tR = 7.97分钟及8.03分钟(非对映异构混合物)；HPLC保留时间(方法B): tR = 8.77分钟(峰重叠)。
[0611] 实施例23
[0612] (S)-8-(2-氨基-4-甲基戊氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-9-甲腈
[0613]
[0614] 部分A. (S)-1-(9-氰基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基氨基甲酸叔丁酯
[0615] 如实施例22部分A中所述使用(S)-1-(9-溴-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基氨基甲酸叔丁酯(0.029 g，0.061 mmol)制备，得到呈淡棕色固体状的(S)-(1-((9-氰基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(8 mg，0.019 mmol，11%产率)。LCMS (ESI) m/e 424.2 [(M+H)+, C24H30N3O4的计算值为424.2] LC/MS保留时间(方法E): tR = 2.11分钟。
[0616]
[0617] 部分B. (S)-8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-9-甲腈[0618] 如实施例8部分D中所述使用(1-((9-氰基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(0.008 g，0.019 mmol)制备，得到呈黄色油状的8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-9-甲腈(3.19 mg，9.86 μmol，52%产率)。
[0619]
[0620]
[0621]
[0622] 的计算值为324.2]；LC/MS保留时间(方法E): tR = 1.79分钟；HPLC保留时间(方法A): tR = 7.05分钟；HPLC保留时间(方法B): tR = 7.87分钟。
[0623] 实施例24
[0624] (2S)-1-环戊基-3-(5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)丙-2-胺
[0625]
[0626] 部分A. 1-环戊基-3-羟基丙-2-基氨基甲酸叔丁酯
[0627] 向已冷却至-10℃的2-((叔丁氧基羰基)氨基)-3-环戊基丙酸(730 mg，2.84 mmol)于THF(7.5 mL)中的溶液中依序添加N-甲基吗啉(0.312 mL，2.84 mmol)及氯甲酸异丁酯(0.373 mL，2.84 mmol)。随后搅拌反应混合物5分钟。通过过滤移除所得固体且用THF(5 mL)洗涤。冷却滤液至-10℃且用NaBH4(161 mg，4.26 mmol)/水(5 mL)逐滴处理。在-10℃下搅拌反应混合物10分钟，升温至室温且再搅拌30分钟。随后用冷水(5 mL)淬灭反应混合物。用乙酸乙酯(3×20 mL)萃取水层。用盐水(20 mL)洗涤经合并的有机层，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩，得到残余物，通过柱层析(石油醚:乙酸乙酯)纯化，得到1-环戊基-3-羟基丙-2-基氨基甲酸叔丁酯(500 mg，2.05 mmol，72%产率)。
[0628]
[0629]
[0630] 部分B. (2S)-1-环戊基-3-(5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)丙-2-基氨基甲酸叔丁酯
[0631] 如实施例8部分C中所述使用8-氯-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶(100 mg，0.432 mmol)制备，得到粗残余物，通过硅胶层析(石油醚及乙酸乙酯作为流动相)纯化，得到呈灰白色固体状的(1-环戊基-3-((5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(30 mg，0.062 mmol，14%产率)。LCMS (ESI) m/e 439.3 [(M+H)+, C26H35N2O4的计算值为439.3] LC/MS保留时间(方法C): tR = 2.44分钟。
[0632]
[0633] 部分C. (2S)-1-环戊基-3-(5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)丙-2-胺[0634] 如实施例8部分D中所述使用(1-环戊基-3-((5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)丙-2-基)氨基甲酸叔丁酯(30 mg，0.068 mmol)制备，得到呈黄色油状的1-环戊基-3-((5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)丙-2-胺(14 mg，0.040 mmol，59%产率)。
[0635]
[0636] 的计算值为339.2]；LC/MS保留时间(方法C): tR = 1.53分钟；HPLC保留时间(方法：Eclipse XDB C18(4.6×150 mm，3.5 μm)，流动相：A= 20 mM NH4OAc水溶液；流动相B=乙腈；0-12分钟，0% B→10% B；12-15分钟，10% B→100% B；15-17分钟，100% B；流速=1 mL/min；λ=254 nm及220 nm；运行时间=17分钟): tR= 8.22分钟；HPLC保留时间(方法A): tR= 9.34分钟。
[0637] 实施例25
[0638] (S)-8-(2-氨基-4-甲基戊氧基)-9-溴-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-5-酮
[0639]
[0640]
[0641] 部分A. (S)-1-(9-溴-5-氧代-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基氨基甲酸叔丁酯
[0642] 向经搅拌的(S)-(4-甲基-1-((5-氧代-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(0.100 g，0.242 mmol)(如实施例11部分E中所述制备)于无水乙腈(2 mL)中的溶液中添加NBS(0.043 g，0.242 mmol)且加热混合物至80℃持续12小时。完成反应后，添加水(10 mL)且用乙酸乙酯(2×20 mL)萃取。经硫酸钠干燥经合并的有机萃取物且在减压下浓缩，得到粗化合物，通过制备型TLC纯化，得到呈浅黄色固体状的(S)-(1-((9-溴-5-氧代-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(80 mg，
0.163 mmol，67%产率)。LCMS (ESI) m/e 491.2 [(M+H)+, C23H28BrN2O5的计算值为491.1] LC/MS保留时间(方法F): tR = 1.12分钟。
0.163 mmol，67%产率)。LCMS (ESI) m/e 491.2 [(M+H)+, C23H28BrN2O5的计算值为491.1] LC/MS保留时间(方法F): tR = 1.12分钟。
[0643]
[0644] 部分B. (S)-8-(2-氨基-4-甲基戊氧基)-9-溴-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-5-酮[0645] 如实施例8部分D中所述使用(S)-(1-((9-溴-5-氧代-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯制备，得到呈白色固体状的(S)-8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-9-溴-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-5-酮(6 mg，0.015 mmol，1%产率)。
[0646]
[0647] 的计算值为391.1]；LC/MS保留时间(方法C): tR = 1.53分钟；HPLC保留时间(方法A): tR = 11.15分钟；HPLC保留时间(方法B): tR = 12.19分钟。
[0648] 实施例26
[0649] 4-氟-4-甲基-1-(5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)戊-2-胺
[0650]
[0651] 部分A. 4-氟-1-羟基-4-甲基戊-2-基氨基甲酸叔丁酯
[0652] 如实施例24部分A中所述使用2-(叔丁氧基羰基氨基)-4-氟-4-甲基戊酸(300 mg，1.203 mmol)制备，得到呈浅黄色油状的4-氟-1-羟基-4-甲基戊-2-基氨基甲酸叔丁酯(170 mg，0.73 mmol，60%产率)。
[0653]
[0654]
[0655] 部分B. 4-氟-4-甲基-1-(5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)戊-2-基氨基甲酸叔丁酯
[0656] 如实施例8部分C中所述使用(4-氟-4-甲基-1-((5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(100 mg，0.232 mmol)制备，得到呈淡棕色固体状的
4-氟-4-甲基-1-(5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)戊-2-基氨基甲酸叔丁酯(100 mg，0.204 mmol，47%产率)。LCMS (ESI) m/e 431.2 [(M+H)+, C19H24FN2O2的计算值为
431.2] LC/MS保留时间(方法D): tR = 1.02分钟。
4-氟-4-甲基-1-(5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)戊-2-基氨基甲酸叔丁酯(100 mg，0.204 mmol，47%产率)。LCMS (ESI) m/e 431.2 [(M+H)+, C19H24FN2O2的计算值为
431.2] LC/MS保留时间(方法D): tR = 1.02分钟。
[0657]
[0658] 部分C. 4-氟-4-甲基-1-(5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)戊-2-胺[0659] 如实施例8部分D中所述使用8-氯-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶(0.100 g，0.432 mmol)及(4-氟-1-羟基-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(0.168 g，0.712 mmol)制备，得到呈黄色油状的4-氟-4-甲基-1-(5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)戊-2-胺(80 mg，0.23 mmol，99%产率)。
[0660]
[0661] LC/MS保留时间(方法D): tR = 0.97分钟；HPLC保留时间(方法B): tR = 8.04分钟。
[0662] 实施例27
[0663] (2S)-1-((9-氯-5-(三氟甲基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺
[0664]
[0665] 部分A. 1-(4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)-2,2,2-三氟乙醇
[0666] 在0℃下搅拌经搅拌的4-(4-氯-2-氟苯基)烟碱醛(1.8 g，7.64 mmol)(如实施例5部分B中所述制备)及TMS-CF3(0.521 mL，3.52 mmol)于二氯甲烷(20 mL)中的溶液20分钟。逐滴缓慢添加TBAF(1.0 M于THF中)(0.4 mL，1.528 mmol)且搅拌溶液90分钟。添加水且用二氯甲烷(2×25 mL)萃取溶液。用盐水洗涤经合并的有机层，经硫酸钠干燥，浓缩且通过制备型TLC使用25%乙酸乙酯/己烷纯化，得到呈黄色油状的1-(4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)-2,2,2-三氟乙醇(1 g，2.64 mmol，35%产率)。LCMS (ESI) m/e 306.0 [(M+H)+, C13H9ClF4NO的计算值为306.02]；LC/MS保留时间(方法C): tR = 2.05分钟。
[0667]
[0668] 部分B. 8-氯-5-(三氟甲基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶
[0669] 如实施例5部分D中所述使用1-(4-(4-氯-2-氟苯基)吡啶-3-基)-2,2,2-三氟乙醇制备，得到呈黄色固体状的8-氯-5-(三氟甲基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶(800 mg，2.63 mmol，80%产率)。LCMS (ESI) m/e 286.0 [(M+H)+, C13H8ClF3NO的计算值为286.01]；LC/MS保留时间(方法C): tR = 2.11分钟。
[0670]
[0671] 部分C. ((2S)-4-甲基-1-((5-(三氟甲基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯
[0672] 如实施例8部分C中所述使用(S)-(1-羟基-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯及8-氯-5-(三氟甲基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶制备，得到呈黄色固体状的((2S)-4-甲基-1-((5-(三氟甲基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(0.28 g，0.516 mmol，49%产率)。LCMS (ESI) m/e 467.2 [(M+H)+, C24H30F3N2O4的计算值为467.2]；
LC/MS保留时间(方法C): tR = 2.19分钟。
LC/MS保留时间(方法C): tR = 2.19分钟。
[0673]
[0674] 部分D. ((2S)-1-((9-氯-5-(三氟甲基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯
[0675] 在氮气氛围下加热经搅拌的((2S)-4-甲基-1-((5-(三氟甲基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(50 mg，0.107 mmol)及NCS(14.31 mg，0.107 mmol)于乙腈(12 mL)中的溶液至60℃持续12小时。在减压下移除溶剂。将残余物分配于水(15 mL)与DCM(15 mL)之间。分离有机层，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩，得到呈黄色固体状的((2S)-1-((9-氯-5-(三氟甲基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(51 mg，0.092 mmol，86%产率)。LCMS (ESI) m/e 501.2 [(M+H)+, C24H29ClF3N2O4的计算值为501.2]；LC/MS保留时间(方法D): tR = 2.02分钟。
[0676]
[0677] 部分E. (2S)-1-((9-氯-5-(三氟甲基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺
[0678] 在室温下向经搅拌的((2S)-1-((9-氯-5-(三氟甲基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(50 mg，0.100 mmol)于DCM(10 mL)中的溶液中添加1 M HCl的乙醚溶液(0.100 mmol)且搅拌溶液14小时。在减压下移除溶剂，得到残余物，通过制备型HPLC使用0.1% TFA/甲醇纯化。纯化得到呈浅黄色固体状的(2S)-1-((9-氯-5-(三氟甲基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺(10 mg，0.023 mmol，
23%产率)。
23%产率)。
[0679]
[0680] 的计算值为401.1]；LC/MS保留时间(方法C): tR = 1.69分钟；HPLC保留时间(方法A): tR = 5.80分钟, 5.87分钟(非对映异构混合物)；HPLC保留时间(方法B): tR = 6.41分钟, 6.45分钟(非对映异构混合物)。
[0681] 实施例27a及27b
[0682] (S)-1-(((R)-9-氯-5-(三氟甲基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺及(S)-1-(((S)-9-氯-5-(三氟甲基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺
[0683]
[0684] 借助于制备型手性HPLC使用0.5%二乙胺/甲醇拆分非对映异构体，得到2种独立的非对映异构体(CF3的绝对化学为未知)。获得呈黄色胶状液体状的非对映异构体1(36 mg，0.082 mmol，16%产率)。
[0685]
[0686] 的计算值为401.1]；LC/MS保留时间(方法I): tR = 1.87分钟；HPLC保留时间(方法A): tR = 5.76分钟；HPLC保留时间(方法B): tR = 6.28分钟。手性SFC(0.5% DEA/甲醇-柱Chiralpak AD H(250×4.6)mm-5μ): tR =
1.52分钟。获得呈黄色胶状的非对映异构体2(38 mg，0.089 mmol，17%产率)：
1.52分钟。获得呈黄色胶状的非对映异构体2(38 mg，0.089 mmol，17%产率)：
[0687]
[0688]
[0689] 的计算值为401.1]；LC/MS保留时间(方法I): tR = 1.86分钟；HPLC保留时间(方法A): tR = 5.68分钟；HPLC保留时间(方法B): tR = 6.25分钟。手性SFC(0.5% DEA/甲醇-柱Chiralpak AD H (250×4.6)mm-5μ): tR = 3.93分钟。
[0690] 实施例28
[0691] (2S)-1-((9-溴-5-(三氟甲基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺
[0692]
[0693] 部分A. ((2S)-1-((9-溴-5-(三氟甲基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯
[0694] 如实施例14部分B中所述使用((2S)-4-甲基-1-((5-(三氟甲基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(实施例27部分C)制备，得到呈黄色固体状的((2S)-1-((9-溴-5-(三氟甲基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨+基甲酸叔丁酯(0.42 g，0.579 mmol，75%产率)。LCMS (ESI) m/e 545.2 [(M+H) , C24H29BrF3N2O4的计算值为545.1]；LC/MS保留时间(方法F) tR = 1.1分钟。
[0695]
[0696] 部分B. (2S)-1-((9-溴-5-(三氟甲基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺
[0697] 在室温下向经搅拌的((2S)-1-((9-溴-5-(三氟甲基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(50 mg，0.092 mmol)于二氯甲烷(10 mL)中的溶液中添加TFA(0.035 mL，0.458 mmol)且搅拌过夜。在减压下移除溶剂，得到残余物，通过制备型HPLC使用0.1% TFA/MeOH纯化。纯化得到呈黄色固体状的(2S)-1-((9-溴-5-(三氟甲基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺(15 mg，0.033 mmol，36%产率)。
[0698]
[0699] 的计算值为445.1]；LC/MS保留时间(方法C): tR = 1.74分钟；HPLC保留时间(方法A): tR = 5.66分钟, 5.75分钟(非对映异构混合物)；HPLC保留时间(方法B): tR = 6.27分钟, 6.34分钟(非对映异构混合物)。
[0700] 实施例29
[0701] 8-(((S)-2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-胺[0702]
[0703] 部分A. 8-氯-N,N-双(4-甲氧基苄基)-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-胺[0704] 在室温下向经搅拌的N-(8-氯-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺(250 mg，0.866 mmol)于DMF(25 mL)中的溶液中添加NaH(62.3 mg，2.60 mmol)且搅拌10分钟。逐滴添加4-甲氧基苄基氯(0.236 mL，1.732 mmol)且在室温下搅拌过夜。用冰淬灭反应物且用乙酸乙酯(25 mL)萃取。分离有机层，用水(25 mL)、盐水(25 mL)洗涤，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩，得到呈黄色油状的8-氯-N,N-双(4-甲氧基苄基)-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-胺(200 mg，0.20 mmol，24%产率)。其不经纯化即用于下一步骤中。LCMS (ESI) m/e +487.2 [(M+H) , C29H28ClN2O3的计算值为487.2]；LC/MS保留时间(方法C): tR = 2.52分钟。
[0705]
[0706] 部分B. (2S)-1-(2-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基氨基甲酸叔丁酯
[0707] 如实施例8部分C中所述使用8-氯-N,N-双(4-甲氧基苄基)-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-胺制备，得到呈棕色油状的(2S)-1-(2-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基氨基甲酸叔丁酯(110 mg，0.070 mmol，17%产率)。LCMS (ESI) m/e 668.6 [(M+H)+, C40H50N3O6的计算值为668.4]；LC/MS保留时间(方法F): tR = 1.49分钟。
[0708]
[0709] 部分C. 8-(((S)-2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-胺
[0710] 向经搅拌的((2S)-1-((2-(双(4-甲氧基苄基)氨基)-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(110 mg，0.165 mmol)于二氯甲烷(10 mL)中的溶液中添加TFA(0.254 mL，3.29 mmol)且在室温下搅拌反应物过夜。蒸发挥发物且通过制备型HPLC(0.1% TFA/MeOH)纯化粗物质，得到呈黄色固体状的8-(((S)-2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-胺(25 mg，0.069 mmol，42%产率)。
[0711]
[0712] 的计算值为328.2]；LC/MS保留时间(方法D): tR = 1.24分钟；HPLC保留时间(方法A): tR = 8.42分钟。
[0713] 实施例30
[0714] N-(8-(((S)-2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺
[0715]
[0716] 部分A. N-(4-(4-氯-2-氟苯基)-5-(1-羟基乙基)吡啶-2-基)乙酰胺
[0717] 如实施例6部分A中所述使用N-(4-(4-氯-2-氟苯基)-5-甲酰基吡啶-2-基)乙酰胺(实施例18部分E中所述的合成)制备，得到呈灰白色固体状的N-(4-(4-氯-2-氟苯基)-5-(1-羟基乙基)吡啶-2-基)乙酰胺(1.7 g，4.99 mmol，91%产率)。LCMS (ESI) m/e 309.2 [(M+H)+, C15H15ClFN2O2的计算值为309.1]；LC/MS保留时间(方法C): tR = 1.54分钟。
[0718]
[0719] 部分B. N-(8-氯-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺
[0720] 如实施例18部分G中所述使用N-(4-(4-氯-2-氟苯基)-5-(1-羟基乙基)吡啶-2-基)乙酰胺制备，得到呈黄色固体状的N-(8-氯-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺(1.5 g，3.58 mmol，65%产率)。LCMS (ESI) m/e 289.0 [(M+H)+, C15H14ClN2O2的计算值为289.1]；LC/MS保留时间(方法D): tR = 1.65分钟。
[0721]
[0722] 部分C. ((2S)-1-((2-乙酰胺基-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯
[0723] 如实施例8部分C中所述使用(S)-(1-羟基-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯及N-(8-氯-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺制备，得到呈黄色油状的((2S)-1-((2-乙酰胺基-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(290 mg，0.617 mmol，33%产率)。LCMS (ESI) m/e 470.3 [(M+H)+, C26H36N3O5的计算值为470.3]；LC/MS保留时间(方法F): tR = 0.99分钟。
[0724]
[0725] 部分D. N-(8-(((S)-2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺
[0726] 如实施例29部分C中所述使用((2S)-1-((2-乙酰胺基-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯制备，得到呈黄色固体状的N-(8-(((S)-2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺(8 mg，0.020 mmol，15%产率)。
[0727]
[0728] 的计算值为370.2]；LC/MS保留时间(方法D): tR = 1.36分钟；HPLC保留时间(方法A): tR = 9.09分钟。
[0729] 实施例31a及31b
[0730] (2S)-1-(9-碘-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺[0731]
[0732] 部分A. (2S)-1-(9-碘-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基氨基甲酸叔丁酯
[0733] 向((2S)-4-甲基-1-((5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(200 mg，0.485 mmol)于乙腈(4 mL)中的溶液中添加NIS(654 mg，2.91 mmol)且使混合物在80℃下回流12小时。在减压下移除挥发物。将残余物溶解于水(10 mL)中且用乙酸乙酯(3×10 mL)萃取水层。用盐水(15 mL)洗涤经合并的有机层。经Na2SO4干燥有机层且在减压下浓缩。通过硅胶层析(石油醚:乙酸乙酯)纯化粗产物，得到呈暗棕色油状的((2S)-1-((9-碘-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(150 mg，0.237 mmol，49%产率)。LCMS (ESI) m/e 539.0 [(M+H)+, C24H32IN2O4的计算值为539.1]；LC/MS保留时间(方法D): tR = 1.84分钟。
[0734]
[0735] 部分B. (2S)-1-(9-碘-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺
[0736] 如实施例8部分D中所述使用((2S)-1-((9-碘-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(150 mg，0.279 mmol)制备，得到呈黄色油状的(2S)-1-(9-碘-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺(85 mg，61%产率)。LCMS (ESI) m/e 439.0 [(M+H)+, C19H24IN2O2的计算值为439.1]；LC/MS保留时间(方法C): tR = 1.74分钟。通过制备型HPLC纯化(TFA水溶液:MeCN)将外消旋物(28 mg，0.06 mmol)拆分为非对映异构体，得到两种非对映异构体(Me的绝对立体化学未知)。获得呈灰白色固体状的非对映异构体1(7 mg，0.015 mmol，5%产率)及呈浅黄色粘稠固体状的非对映异构体2(8 mg，0.017 mmol，6%产率)。
[0737] 非对映异构体1：
[0738]
[0739] 的计算值为439.1] LC/MS保留时间(方法E): tR = 1.88分钟；HPLC保留时间(方法A): tR = 8.56分钟；HPLC保留时间(方法B): tR = 10.04分钟。方法：手性OD-H(250×4.6)mm 5微米，流动相：0.2% DEA/正己烷:乙醇(80:20): tR = 8.89分钟。
[0740] 非对映异构体2：
[0741]
[0742] 的计算值为439.1] LC/MS保留时间(方法E): tR = 1.89分钟；HPLC保留时间(方法A): tR = 8.63分钟；HPLC保留时间(方法B): tR = 10.03分钟。方法：手性OD-H(250×4.6)mm 5微米，流动相：0.2% DEA/正己烷:
乙醇(80:20): tR = 15.69分钟。
乙醇(80:20): tR = 15.69分钟。
[0743] 实施例32
[0744] (S)-N-(8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-9-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺
[0745]
[0746] 部分A. (S)-(1-((2-乙酰胺基-9-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯
[0747] 加热经搅拌的(S)-(1-((2-乙酰胺基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(100 mg，0.220 mmol)(如实施例18部分H中所述制备)及NCS(29.3 mg，0.220 mmol)于乙腈(15 mL)中的溶液至80℃持续12小时。冷却反应混合物至室温且在减压下移除溶剂。使残余物分配于水(25 mL)与DCM(25 mL)之间。用盐水洗涤有机层，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩，得到呈灰白色固体状的(S)-(1-((2-乙酰胺基-9-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(120 mg，0.174 mmol，79%产率)。产物不经纯化即原样用于下一步骤。LCMS (ESI) m/e 490.2 [(M+H)+, C25H33ClN3O5的计算值为490.2]；LC/MS保留时间(方法D): tR = 1.98分钟。
[0748]
[0749] 部分B. (S)-N-(8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-9-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺
[0750] 如实施例8部分D中所述使用(S)-(1-((2-乙酰胺基-9-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯制备，得到呈黄色固体状的(S)-N-(8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-9-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺(5 mg，0.012 mmol，11%产率)。
[0751]
[0752] 的计算值为390.2]；LC/MS保留时间(方法D): tR = 1.53分钟；HPLC保留时间(方法A): tR = 9.17分钟；HPLC保留时间(方法B): tR = 5.14分钟。
[0753] 实施例33
[0754] (S)-8-(2-氨基-4-甲基戊氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-胺
[0755]
[0756] 加热经搅拌的(S)-N-(8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺(40 mg，0.113 mmol)及NaOH(45.0 mg，1.125 mmol)于乙醇(10 mL)与水(4 mL)的混合物中的溶液至90℃持续18小时。在减压下移除挥发物且使残余物分配于水(20 mL)与二氯甲烷(15 mL)之间。分离各层且用二氯甲烷(15 mL)萃取水层。经硫酸钠干燥经合并的有机层且在减压下浓缩，得到粗(S)-8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-胺(23 mg，0.068 mmol，60%粗产率)，将其溶解于MeOH(2 mL)中且冷却至0℃。用1 M HCl/乙醚(15 mL，0.068 mmol))处理所得溶液且在室温下搅拌反应物14小时。随后冷却反应混合物至0℃，得到固体，过滤，用乙醚(10 mL)洗涤且在真空下干燥，得到呈棕色固体状的(S)-8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-胺二盐酸盐(11 mg，
0.025 mmol，37%产率，两个步骤)。
0.025 mmol，37%产率，两个步骤)。
[0757]
[0758] 的计算值为314.2]；LC/MS保留时间(方法D): tR = 1.1分钟；HPLC保留时间(方法A): tR = 5.16分钟；HPLC保留时间(方法B): tR =
8.96分钟。
8.96分钟。
[0759] 实施例34
[0760] (S)-8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-4-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-5-酮[0761]
[0762]
[0763] 部分A. 2,4-二氯烟碱醛
[0764] 在-78℃下向2,4-二氯吡啶(2 g，13.51 mmol)于四氢呋喃(20 mL)中的溶液中添加2 M LDA于THF/庚烷/乙基苯中的溶液(8.11 mL，16.22 mmol)且搅拌溶液30分钟。添加DMF(10.46 mL，135 mmol)，搅拌溶液1小时，随后升温至室温。用饱和NH4Cl溶液淬灭反应混合物且用乙酸乙酯(50 mL)稀释。用饱和NaHCO3(2×10 mL)、水(20 mL)洗涤有机层，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩，得到呈黄色固体状的2,4-二氯烟碱醛(2 g，11.36 mmol，84%产率)。
[0765]
[0766]
[0767] 部分B. 4-氯-2-甲基烟碱醛
[0768] 在100℃下加热2,4-二氯烟碱醛(1.1 g，6.25 mmol)、2,4,6-三甲基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三硼杂环己烷(0.942 g，7.50 mmol)、Cs2CO3(6.11 g，18.75 mmol)及PdCl2(dppf)(0.229 g，0.312 mmol)于1,4-二噁烷(9 mL)及水(1 mL)中的混合物18小时。冷却后，用乙酸乙酯(15 mL)及水(20 mL)稀释混合物。经Na2SO4干燥乙酸乙酯层，浓缩且通过硅胶层析纯化，得到呈黄色固体状的4-氯-2-甲基烟碱醛(0.16 g，1.028 mmol，16%产率)。
[0769]
[0770] 部分C. 4-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基烟碱醛
[0771] 在90℃下加热4-氯-2-甲基烟碱醛(100 mg，0.643 mmol)、(4-氯-2-氟苯基)硼酸(123 mg，0.707 mmol)、Cs2CO3(628 mg，1.928 mmol)及Pd(Ph3P)4(52.0 mg，0.045 mmol)于甲苯(5 mL)中的混合物16小时。冷却后，用EtOAc(10 mL)及水(10 mL)稀释反应混合物。浓缩乙酸乙酯层且通过硅胶层析(2:1己烷-EtOAc)纯化，得到呈黄色固体状的4-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基烟碱醛(0.15 g，0.601 mmol，35%产率)。LCMS (ESI) m/e 250.04 [(M+H)+, C13H10ClFNO的计算值为250.0]；LC/MS保留时间(方法G): tR = 0.96分钟。
[0772]
[0773] 部分D. (4-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基吡啶-3-基)甲醇
[0774] 在0℃下向4-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基烟碱醛(60 mg，0.240 mmol)于MeOH(2 mL)中的溶液中添加NaBH4(27.3 mg，0.721 mmol)且在室温下搅拌溶液3小时。浓缩混合物且用EtOAc(15 mL)及水(10 mL)稀释。经Na2SO4干燥有机层，过滤且在减压下浓缩，得到呈棕色固体状的(4-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基吡啶-3-基)甲醇(0.15 g，0.596 mmol，89%产率)。LCMS +(ESI) m/e 252.03 [(M+H) , C13H12ClFNO的计算值为252.1]；LC/MS保留时间(方法G): tR = 0.80分钟。
[0775]
[0776] 部分E. 8-氯-4-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶
[0777] 在0℃下向(4-(4-氯-2-氟苯基)-2-甲基吡啶-3-基)甲醇(70 mg，0.278 mmol)于四氢呋喃(3 mL)中的溶液中逐份添加NaH(33.4 mg，0.834 mmol)。使溶液升温至室温且搅拌5小时。用冰冷水淬灭反应混合物且用EtOAc(15 mL)稀释。经Na2SO4干燥有机层，过滤且在减压下浓缩，得到呈棕色固体状的8-氯-4-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶(0.11 g，0.475 mmol，73%产率)。LCMS (ESI) m/e 232.00 [(M+H)+, C13H12ClNO的计算值为232.01]；LC/MS保留时间(方法G): tR = 1.00分钟。
[0778]
[0779] 部分F. (S)-(4-甲基-1-((4-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯
[0780] 在80℃下加热8-氯-4-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶(60 mg，0.259 mmol)、(S)-(-)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-4-甲基-1-戊醇(113 mg，0.518 mmol)、2-二叔丁基膦基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯(6.60 mg，0.016 mmol)、Cs2CO3(127 mg，0.388 mmol)及Pd(OAc)2(1.744 mg，7.77 μmol)于甲苯(5 mL)中的混合物16小时。冷却至室温后，用EtOAc(10 mL)及水(10 mL)稀释混合物。经Na2SO4干燥有机层，过滤且在减压下浓缩，得到呈黄色固体状的(S)-(4-甲基-1-((4-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(0.2 g，0.485 mmol，30%产率)。LCMS (ESI) m/e 413.39 [(M+H)+, C24H33N2O4的计算值为413.24]；LC/MS保留时间(方法F): tR = 0.97分钟。
[0781]
[0782] 部分G. (S)-8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-4-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-5-酮
[0783] 冷却(S)-(4-甲基-1-((4-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(35 mg，0.085 mmol)于DCM(3 mL)中的溶液至0℃，随后添加TFA(0.033 mL，0.424 mmol)。在室温下搅拌反应混合物2小时，随后用饱和NaHCO3中和且用EtOAc(3×5 mL)萃取。经Na2SO4干燥有机层，过滤且在减压下浓缩，得到粗物质，通过硅胶柱层析纯化，得到的物质在纯化期间经空气氧化，得到呈黄色固体状的(S)-8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-4-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-5-酮(3 mg，9.19 μmol，10%产率)。
[0784]
[0785] 的计算值为327.2]；LC/MS保留时间(方法G): tR = 0.82分钟；HPLC保留时间(方法A): tR = 8.47分钟；HPLC保留时间(方法B): tR = 8.90分钟。
[0786] 实施例35
[0787] (S)-N-(8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-7-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺
[0788]
[0789] 部分A. 2-(4-氯-2-氟-3-甲基苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷[0790] 向已冷却至-10℃的经搅拌的1-溴-4-氯-2-氟-3-甲基苯(1.70 g，7.61 mmol)于四氢呋喃(45 mL)中的溶液中逐滴添加异丙基氯化镁(2.9 M于THF中)(3.0 mL，8.75 mmol)。在-10℃下搅拌反应混合物1小时，随后升温至0℃且搅拌1小时。冷却反应混合物至-10℃，继而逐滴添加2-异丙氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(1.785 mL，
8.75 mmol)。使反应物升温至室温且搅拌14小时。用1 N氢氧化钠水溶液淬灭反应混合物且搅拌10分钟。用浓HCl调节反应物的pH值至3且用乙酸乙酯(2×30 mL)萃取溶液。用水(50 mL)、盐水(50 mL)洗涤经合并的有机层，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩，得到2-(4-氯-2-氟-3-甲基苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(1.75 g，6.47 mmol，85%产率)，其不经纯化即进行下一步骤。
8.75 mmol)。使反应物升温至室温且搅拌14小时。用1 N氢氧化钠水溶液淬灭反应混合物且搅拌10分钟。用浓HCl调节反应物的pH值至3且用乙酸乙酯(2×30 mL)萃取溶液。用水(50 mL)、盐水(50 mL)洗涤经合并的有机层，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩，得到2-(4-氯-2-氟-3-甲基苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(1.75 g，6.47 mmol，85%产率)，其不经纯化即进行下一步骤。
[0791]
[0792] 部分B. N-(4-(4-氯-2-氟-3-甲基苯基)-5-甲酰基吡啶-2-基)乙酰胺
[0793] 如实施例5部分B中所述使用2-(4-氯-2-氟-3-甲基苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷制备，得到呈白色固体状的N-(4-(4-氯-2-氟-3-甲基苯基)-5-甲酰基吡啶-2-基)乙酰胺(1.02 g，3.04 mmol，82%产率)。LCMS (ESI) m/e 307.0 [(M+H)+, C15H13ClFN2O2的计算值为307.1]；LC/MS保留时间(方法E): tR = 1.95分钟。
[0794]
[0795] 部分C. N-(4-(4-氯-2-氟-3-甲基苯基)-5-(羟基甲基)吡啶-2-基)乙酰胺[0796] 如实施例5部分C中所述使用N-(4-(4-氯-2-氟-3-甲基苯基)-5-甲酰基吡啶-2-基)乙酰胺制备，得到呈灰白色固体状的N-(4-(4-氯-2-氟-3-甲基苯基)-5-(羟基甲基)吡啶-2-基)乙酰胺(1.1 g，2.39 mmol，73%产率)。LCMS (ESI) m/e 309.0 [(M+H)+, C15H15ClFN2O2的计算值为309.1]；LC/MS保留时间(方法E): tR = 1.85分钟。
[0797]
[0798] 部分D. N-(8-氯-7-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺
[0799] 如实施例5部分D中所述使用N-(4-(4-氯-2-氟-3-甲基苯基)-5-(羟基甲基)吡啶-2-基)乙酰胺制备，得到呈白色固体状的N-(8-氯-7-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺(150 mg，0.514 mmol，18%产率)。LCMS (ESI) m/e 289.0 [(M+H)+, C15H14ClN2O2的计算值为289.1]；LC/MS保留时间(方法E): tR = 1.9分钟。
[0800]
[0801] 部分E. (S)-(1-((2-乙酰胺基-7-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯
[0802] 如实施例8部分C中所述使用(S)-(1-羟基-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯及N-(8-氯-7-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺制备，得到呈棕色油状的(S)-(1-((2-乙酰胺基-7-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(168 mg，0.037 mmol，11%产率)。LCMS (ESI) m/e 470.3 [(M+H)+, C26H36N3O5的计算值为470.3]；LC/MS保留时间(方法F): tR = 0.96分钟。
[0803]
[0804] 部分F. (S)-N-(8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-7-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺
[0805] 如实施例8部分D中所述使用(S)-(1-((2-乙酰胺基-7-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯制备，得到呈黄色固体状的(S)-N-(8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-7-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺TFA盐(9 mg，0.022 mmol，64%产率)。
[0806]
[0807] 的计算值为370.2]；LC/MS保留时间(方法I): tR = 1.75分钟；HPLC保留时间(方法A): tR = 9.34分钟；HPLC保留时间(方法B): tR = 10.3分钟。
[0808] 实施例36
[0809] N-(8-((2-氨基-5,5,5-三氟戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺[0810]
[0811]
[0812] 部分A. 1-(2-乙酰胺基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-5,5,5-三氟戊-2-基氨基甲酸叔丁酯
[0813] 如实施例18部分H中所述使用N-(8-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺(0.1 g，0.175 mmol)(如实施例18部分G中所述制备)制备，得到呈黄色油状的(1-((2-乙酰胺基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-5,5,5-三氟戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(0.023 g，+
0.021 mmol，12%产率)。LCMS (ESI) m/e 496.6 [(M+H) , C24H29F3N3O5的计算值为496.2] LC/MS保留时间(方法F): tR = 0.88分钟。
0.021 mmol，12%产率)。LCMS (ESI) m/e 496.6 [(M+H) , C24H29F3N3O5的计算值为496.2] LC/MS保留时间(方法F): tR = 0.88分钟。
[0814]
[0815] 部分B. N-(8-((2-氨基-5,5,5-三氟戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺
[0816] 如实施例8部分D中所述使用(1-((2-乙酰胺基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-5,5,5-三氟戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(0.023 g，0.021 mmol)制备，得到呈黄色半固体状的N-(8-((2-氨基-5,5,5-三氟戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺, 2 TFA(6.02 mg，9.46 μmol，44%产率)。
[0817]
[0818] 的计算值为396.1]；
[0819] LC/MS保留时间(方法H): tR = 1.53分钟；HPLC保留时间(方法A): tR = 8.13分钟；HPLC保留时间(方法B): tR = 8.64分钟。
[0820] 实施例37
[0821] (S)-N-(8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-7-甲氧基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺
[0822]
[0823] 部分A. 3-溴-6-氯-2-氟酚
[0824] 向已冷却至-78℃的经搅拌的1-溴-4-氯-2-氟苯(5 g，23.87 mmol)于四氢呋喃(40 mL)中的溶液中逐滴添加2 M LDA于THF/庚烷/乙基苯中的溶液(14.92 mL，29.8 mmol)且在此温度下搅拌反应混合物30分钟。使溶液升温至-20℃且搅拌30分钟。冷却反应物至-78℃，逐滴添加溶解于THF(5 mL)中的硼酸三甲酯(3.47 mL，31.0 mmol)，使反应混合物升温至-20℃且搅拌1小时。冷却反应混合物至-78℃，逐滴添加过乙酸(16 mL，84 mmol)，使混合物升温至室温且搅拌12小时。冷却反应混合物至0℃，用5%氯化铵水溶液淬灭且用乙酸乙酯(2×50 mL)萃取。用盐水(50 mL)洗涤经合并的有机层。经硫酸钠干燥有机层且在减压下浓缩，得到呈黄色油状的3-溴-6-氯-2-氟酚(4.99 g，18.25 mmol，76%产率)。LCMS (ESI) m/e 225.1 [(M+H)+, C6H4BrClFO的计算值为224.9]；LC/MS保留时间(方法G): tR = 0.87分钟。
[0825]
[0826] 部分B. 1-溴-4-氯-2-氟-3-甲氧基苯
[0827] 向经搅拌的3-溴-6-氯-2-氟酚(4.2 g，18.63 mmol)于乙腈(35 mL)中的溶液中添加碳酸钾(5.15 g，37.3 mmol)，继而在室温下逐滴添加甲基碘(2.330 mL，37.3 mmol)。加热反应混合物至85℃持续3小时。蒸发挥发物；添加水(50 mL)且用乙酸乙酯(2×80 mL)萃取溶液。用盐水(100 mL)洗涤经合并的有机层，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩。粗物质不经进一步纯化即进行下一步骤。
[0828]
[0829]
[0830] 部分C. 2-(4-氯-2-氟-3-甲氧基苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷
[0831] 向已冷却至-10℃的经搅拌的1-溴-4-氯-2-氟-3-甲氧基苯(2.6 g，10.86 mmol)于四氢呋喃(30 mL)中的溶液中逐滴添加异丙基溴化镁(4.49 mL，13.03 mmol)且在此温度下搅拌反应混合物1小时。随后使反应混合物升温至0℃且搅拌1小时。冷却反应混合物至-10℃且逐滴添加2-异丙氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(2.215 mL，10.86 mmol)。使反应混合物升温至室温且继续搅拌16小时。用5%氢氧化钠水溶液淬灭反应物且用乙酸乙酯(2×25 mL)萃取。用盐水(25 mL)洗涤经合并的有机层，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩，得到呈棕色油状的2-(4-氯-2-氟-3-甲氧基苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(2.15 g，7.50 mmol，69%产率)。
[0832]
[0833]
[0834] 部分D. N-(4-(4-氯-2-氟-3-甲氧基苯基)-5-甲酰基吡啶-2-基)乙酰胺
[0835] 用氮气吹洗经搅拌的N-(4-氯-5-甲酰基吡啶-2-基)乙酰胺(1.947 g，8.72 mmol)(如实施例18部分D中所述制备)、2-(4-氯-2-氟-3-甲氧基苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(2.5 g，8.72 mmol)、碳酸铯(5.69 g，17.45 mmol)及Pd(PPh3)4(0.504 g，0.436 mmol)于二噁烷(30 mL)与水(5 mL)的混合物中的溶液5分钟，随后加热至85℃持续14小时。冷却反应混合物至室温且用水(10 mL)稀释。用乙酸乙酯(2×15 mL)萃取混合物。用盐水(20 mL)洗涤经合并的有机层，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩。通过硅胶层析使用乙酸乙酯/己烷的梯度纯化残余物，得到呈白色固体状的N-(4-(4-氯-2-氟-3-甲氧基苯基)-5-甲酰基吡啶-2-基)乙酰胺(1.78 g，2.95 mmol，34%产率)。LCMS (ESI) m/e 322.9 [(M+H)+, C15H13ClFN2O3的计算值为323.1]；LC/MS保留时间(方法F): tR = 0.89分钟。
[0836]
[0837] 部分E. N-(4-(4-氯-2-氟-3-甲氧基苯基)-5-(羟基甲基)吡啶-2-基)乙酰胺[0838] 向经搅拌的N-(4-(4-氯-2-氟-3-甲氧基苯基)-5-甲酰基吡啶-2-基)乙酰胺(1.7 g，2.370 mmol)于THF(15 mL)与甲醇(5 mL)的混合物中的溶液中分两份添加硼氢化钠(0.090 g，2.370 mmol)且在室温下搅拌反应混合物30分钟。移除挥发物，添加水(15 mL)且用乙酸乙酯(2×20 mL)萃取溶液。用盐水(15 mL)洗涤经合并的有机层，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩，得到呈棕色固体状的N-(4-(4-氯-2-氟-3-甲氧基苯基)-5-(羟基甲基)吡啶-2-基)乙酰胺(1.6 g，1.88 mmol，38%产率)。化合物不经进一步纯化即带入下一步骤中。
LCMS (ESI) m/e 324.9 [(M+H)+, C15H15ClFN2O3的计算值为325.1]；LC/MS保留时间(方法F): tR = 0.97分钟。
LCMS (ESI) m/e 324.9 [(M+H)+, C15H15ClFN2O3的计算值为325.1]；LC/MS保留时间(方法F): tR = 0.97分钟。
[0839]
[0840] 部分F. N-(8-氯-7-甲氧基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺
[0841] 如实施例5部分D中所述使用N-(4-(4-氯-2-氟-3-甲氧基苯基)-5-(羟基甲基)吡啶-2-基)乙酰胺制备，得到呈白色固体状的N-(8-氯-7-甲氧基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺(250 mg，0.743 mmol，34%产率)。LCMS (ESI) m/e 305.0 [(M+H)+, C15H14ClN2O3的计算值为305.1]；LC/MS保留时间(方法G): tR = 0.88分钟。
[0842]
[0843] 部分G. (S)-(1-((2-乙酰胺基-7-甲氧基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯
[0844] 如实施例18部分H中所述使用(S)-(1-羟基-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯及N-(8-氯-7-甲氧基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺制备，得到呈棕色油状的(S)-(1-((2-乙酰胺基-7-甲氧基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(112 mg，0.089 mmol，60%产率)。LCMS (ESI) m/e 486.2 [(M+H)+, C26H36N3O6的计算值为486.2]；LC/MS保留时间(方法F): tR = 0.91分钟。
[0845]
[0846] 部分H. (S)-N-(8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-7-甲氧基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺
[0847] 向经搅拌的(S)-(1-((2-乙酰胺基-7-甲氧基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(111 mg，0.088 mmol)于二氯甲烷(2 mL)中的溶液中逐滴添加TFA(0.027 mL，0.352 mmol)且在室温下搅拌反应混合物12小时。完成反应后，在减压下移除挥发物，得到残余物，通过制备型HPLC(Sunfire C18 3.5 μm，19×150 mm柱及10 mM乙酸铵/水)纯化，得到呈白色固体状的(S)-N-(8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-7-甲氧基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺(10 mg，0.022 mmol，25%产率)。
[0848]
[0849] 的计算值为386.2]；LC/MS保留时间(方法E): tR = 1.99分钟；HPLC保留时间(方法A): tR = 8.80分钟；HPLC保留时间(方法B): tR = 9.73分钟。
[0850] 实施例38
[0851] (S)-N-(8-(2-氨基-4-甲基戊氧基)-7-(二氟甲基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺
[0852]
[0853]
[0854] 部分A. N-(4-(4-氯-3-(二氟甲基)-2-氟苯基)-5-甲酰基吡啶-2-基)乙酰胺[0855] 如实施例37部分D中所述使用N-(4-氯-5-甲酰基吡啶-2-基)乙酰胺(如实施例18部分D中所述制备)制备，得到N-(4-(4-氯-3-(二氟甲基)-2-氟苯基)-5-甲酰基吡啶-2-基)乙酰胺(40 mg，0.1 mmol，28%产率)。LCMS (ESI) m/e 343.0 [(M+H)+, C15H11ClF3N2O2的计算值为343.03]；LC/MS保留时间(方法E): tR = 1.91分钟。
[0856]
[0857] 部分B. N-(4-(4-氯-3-(二氟甲基)-2-氟苯基)-5-(羟基甲基)吡啶-2-基)乙酰胺[0858] 如实施例5部分C中所述使用N-(4-(4-氯-3-(二氟甲基)-2-氟苯基)-5-甲酰基吡啶-2-基)乙酰胺制备，得到呈棕色固体状的N-(4-(4-氯-3-(二氟甲基)-2-氟苯基)-5-(羟基甲基)吡啶-2-基)乙酰胺(1.1 g，2.84 mmol，76%产率)。LCMS (ESI) m/e 345.0 [(M+H)+, C15H13ClF3N2O2的计算值为345.0]；LC/MS保留时间(方法: H): tR = 1.92分钟。
[0859]
[0860] 部分C. N-(8-氯-7-(二氟甲基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺
[0861] 如实施例5部分D中所述使用N-(4-(4-氯-3-(二氟甲基)-2-氟苯基)-5-(羟基甲基)吡啶-2-基)乙酰胺制备，得到呈浅黄色固体状的N-(8-氯-7-(二氟甲基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺(900 mg，2.66 mmol，94%产率)。LCMS (ESI) m/e 325.0 [(M+H)+, C15H12ClF2N2O2的计算值为325.0]；LC/MS保留时间(方法: H): tR = 2.21分钟。
[0862]
[0863] 部分D. (S)-1-(2-乙酰胺基-7-(二氟甲基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基氨基甲酸叔丁酯
[0864] 如实施例18部分H中所述使用N-(8-(((S)-2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-4-基)乙酰胺制备，得到呈灰白色固体状的(S)-(1-((2-乙酰胺基-
7-(二氟甲基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(130 mg，0.152 mmol，12%产率)。LCMS (ESI) m/e 506.2[(M+H)+, C26H34F2N3O5的计算值为
506.2]；LC/MS保留时间(方法E): tR = 2.09分钟。
7-(二氟甲基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(130 mg，0.152 mmol，12%产率)。LCMS (ESI) m/e 506.2[(M+H)+, C26H34F2N3O5的计算值为
506.2]；LC/MS保留时间(方法E): tR = 2.09分钟。
[0865]
[0866] 部分E. (S)-N-(8-(2-氨基-4-甲基戊氧基)-7-(二氟甲基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺
[0867] 如实施例8部分D中所述使用(S)-(1-((2-乙酰胺基-7-(二氟甲基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(130 mg，0.152 mmol)制备，得到呈白色固体状的(S)-N-(8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-7-(二氟甲基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺(50 mg，0.121 mmol，80%产率)。
[0868]
[0869] 的计算值为406.2]；LC/MS保留时间(方法J): tR = 1.87分钟；HPLC保留时间(方法A): tR = 9.34分钟；HPLC保留时间(方法B): tR =
9.95分钟。
9.95分钟。
[0870] 实施例39
[0871] (S)-4-甲基-1-((2-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-胺
[0872]
[0873] 部分A. 4-氯-6-甲基烟酸甲酯
[0874] 用氩气使4,6-二氯烟酸甲酯(2.0 g，9.71 mmol)、三甲基硼氧杂环己烷(0.731 g，5.82 mmol)、PdCl2(dppf)-CH2Cl2(0.396 g，0.485 mmol)及Cs2CO3(9.49 g，29.1 mmol)于1,
4-二噁烷(30 mL)及水(1.5 mL)中的溶液脱气15分钟，随后加热至110℃持续16小时。冷却后，用水(100 mL)稀释溶液且用乙酸乙酯(150 mL)萃取。经Na2SO4干燥有机层且在减压下浓缩。通过硅胶层析(20% EtOAc/石油醚)纯化残余物，得到呈黄色油状的4-氯-6-甲基烟酸甲酯(0.1 g，0.539 mmol，22%产率)。LCMS (ESI) m/e 186.0 [(M+H)+, C8H9ClNO2的计算值为
186.02]；LC/MS保留时间(方法E): tR = 1.75分钟。
4-二噁烷(30 mL)及水(1.5 mL)中的溶液脱气15分钟，随后加热至110℃持续16小时。冷却后，用水(100 mL)稀释溶液且用乙酸乙酯(150 mL)萃取。经Na2SO4干燥有机层且在减压下浓缩。通过硅胶层析(20% EtOAc/石油醚)纯化残余物，得到呈黄色油状的4-氯-6-甲基烟酸甲酯(0.1 g，0.539 mmol，22%产率)。LCMS (ESI) m/e 186.0 [(M+H)+, C8H9ClNO2的计算值为
186.02]；LC/MS保留时间(方法E): tR = 1.75分钟。
[0875]
[0876]
[0877] 部分B. 4-(4-氯-2-氟苯基)-6-甲基烟酸甲酯
[0878] 在80℃下加热4-氯-6-甲基烟酸甲酯(0.1 g，0.539 mmol)、(4-氯-2-氟苯基)硼酸(0.094 g，0.539 mmol)、Pd(PPh3)4(0.031 g，0.027 mmol)及Cs2CO3(0.527 g，1.616 mmol)于1,4-二噁烷(10 mL)中的混合物16小时。冷却后，用水(30 mL)及乙酸乙酯(50 mL)稀释混合物。收集有机相，经Na2SO4干燥且在减压下浓缩。通过硅胶层析(20% EtOAc/石油醚)纯化残余物，得到呈黄色液体状的4-(4-氯-2-氟苯基)-6-甲基烟酸甲酯(0.045 g，0.161 mmol，30%产率)。LCMS (ESI) m/e 280.0 [(M+H)+, C14H12ClFNO2的计算值为280.04]；LC/MS保留时间(方法H): tR = 2.51分钟。
[0879]
[0880] 部分C. (4-(4-氯-2-氟苯基)-6-甲基吡啶-3-基)甲醇
[0881] 在-10℃下向4-(4-氯-2-氟苯基)-6-甲基烟酸甲酯(0.32 g，1.144 mmol)于四氢呋喃(10 mL)中的溶液中逐份添加LAH(1.716 mL，1.716 mmol)。在室温下搅拌反应混合物2小时，随后用饱和NH4Cl水溶液(50 mL)稀释。用乙酸乙酯(80 mL)萃取混合物。分离有机层，经Na2SO4干燥且浓缩，得到呈灰白色固体状的(4-(4-氯-2-氟苯基)-6-甲基吡啶-3-基)甲醇(0.25 g，0.993 mmol，87%产率)。LCMS (ESI) m/e 252.0 [(M+H)+, C13H12ClFNO的计算值为252.0]；LC/MS保留时间(方法H):tR=1.60分钟；
[0882] 。
[0883]
[0884] 部分D. 8-氯-2-甲基-5H-色烯并[3, 4-c]吡啶
[0885] 在0℃下向经搅拌的(4-(4-氯-2-氟苯基)-6-甲基吡啶-3-基)甲醇(0.25 g，0.993 mmol)于四氢呋喃(25 mL)中的溶液中逐份添加NaH(0.06 g，1.49 mmol)。随后在室温下搅拌溶液16小时。用水(100 mL)淬灭反应混合物。通过过滤收集沉淀物且风干，得到呈白色固体状的8-氯-2-甲基-5H-色烯并[3, 4-c]吡啶(0.2 g，0.863 mmol，69%产率)。LCMS (ESI) m/e 232.0 [(M+H)+, C13H11ClNO的计算值为232.0]；LC/MS保留时间(方法D): tR = 2.06分钟；
[0886]
[0887] 。
[0888]
[0889] 部分E. (S)-(4-甲基-1-((2-甲基-5H-色烯并[3, 4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯
[0890] 加热8-氯-2-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶(0.2 g，0.863 mmol)、(S)-(1-羟基-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(0.225 g，1.036 mmol)、乙酸钯(II)(5.81 mg，0.026 mmol)、Cs2CO3(0.422 g，1.295 mmol)及2-二叔丁基膦基-2',4',6'-三异丙基联苯(0.022 g，0.052 mmol)于甲苯(5 mL)中的混合物至110℃持续18小时。冷却后，通过硅藻土过滤混合物且在减压下浓缩。通过硅胶层析(70% EtOAc/石油醚)纯化粗产物，得到呈半固体状的(S)-(4-甲基-1-((2-甲基-5H-色烯并[3, 4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(0.12 g，0.291 mmol，34%产率)。LCMS (ESI) m/e 413.4 [(M+H)+, C24H33N2O4的计算值为413.2]；LC/MS保留时间(方法D): tR = 2.42分钟。
[0891]
[0892] 部分F. (S)-4-甲基-1-((2-甲基-5H-色烯并[3, 4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-胺[0893] 向经搅拌的(S)-(4-甲基-1-((2-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(0.05 g，0.121 mmol)于MeOH(2 mL)中的溶液中添加4 N HCl/1,4-二噁烷(0.5 mL，16.46 mmol)。在室温下搅拌反应混合物4小时。随后浓缩反应混合物且将残余物溶解于乙酸乙酯(10 mL)中。用饱和NaHCO3(2×10 mL)及水(20 mL)洗涤有机层，经Na2SO4干燥，过滤且在减压下浓缩，得到残余物，通过制备型HPLC(0.1%乙酸铵/乙腈)纯化，得到呈胶状固体状的(S)-4-甲基-1-((2-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-胺(0.15 g，0.048 mmol，32%产率)。
[0894]
[0895] 的计算值为312.2]；LC/MS保留时间(方法E): tR = 1.63分钟；HPLC保留时间(方法A): tR = 7.96分钟；
HPLC保留时间(方法B): tR = 9.01分钟。
HPLC保留时间(方法B): tR = 9.01分钟。
[0896] 实施例40
[0897] (R)-N-(8-(2-氨基-4-甲基戊氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺[0898]
[0899]
[0900] 部分A. (R)-1-(2-乙酰胺基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基氨基甲酸叔丁酯
[0901] 如实施例18部分H中所述使用N-(8-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺(如实施例18部分G中所述制备)制备，得到呈黄色固体状的(R)-(1-((2-乙酰胺基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(100 mg)。LCMS (ESI) m/e 456.4 [(M+H)+, C25H34N3O5的计算值为456.2]；LC/MS保留时间(方法E): tR = 2.06分钟。
[0902]
[0903] 部分B. (R)-N-(8-(2-氨基-4-甲基戊氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺
[0904] 如实施例8部分D中所述使用(R)-(1-((2-乙酰胺基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯制备，得到(R)-N-(8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺(10.44 mg，0.029 mmol，47%产率)。
[0905]
[0906]
[0907] 的计算值为356.2]；LC/MS保留时间(方法E): tR = 1.63分钟。
[0908] 实施例41
[0909] (S)-N-(8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-7-氟-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺
[0910]
[0911] 部分A. 1-溴-2,3-二氟-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苯
[0912] 在室温下向经搅拌的4-溴-2,3-二氟酚(5 g，23.92 mmol)于乙腈(50 mL)中的溶液中添加碳酸钾(3.31 g，23.92 mmol)且搅拌反应混合物5分钟，继而逐滴添加1-(氯甲基)-4-甲氧基苯(3.75 g，23.92 mmol)，随后在室温下搅拌反应混合物16小时。完成反应后，在减压下移除挥发物。添加水(100 mL)且用乙酸乙酯(2×120 mL)萃取溶液。用盐水(100 mL)洗涤经合并的有机层，经硫酸钠干燥，过滤且在减压下浓缩，得到呈淡棕色固体状的1-溴-2,3-二氟-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苯(7.58 g，23.03 mmol，96%产率)。产物不经进一步纯化即继续使用。LCMS (ESI) m/e 329.1 [(M)-, C14H10BrF2O2的计算值为329.0]；LC/MS保留时间(方法G): tR = 1.20分钟。
[0913]
[0914] 部分B. 2-(2,3-二氟-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷
[0915] 如实施例37部分C中所述使用1-溴-2,3-二氟-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苯制备，得到呈浅黄色固体状的2-(2,3-二氟-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(3.52 g，9.36 mmol，77%产率)。
[0916]
[0917] 部分C. N-(4-(2,3-二氟-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苯基)-5-甲酰基吡啶-2-基)乙酰胺
[0918] 如实施例5部分B中所述使用2-(2,3-二氟-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷制备，得到呈白色固体状的N-(4-(2,3-二氟-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苯基)-5-甲酰基吡啶-2-基)乙酰胺(1.85 g，4.49 mmol，48%产率)。LCMS (ESI) m/e 413.2 [(M+H)+, C22H19F2N2O4的计算值为413.1]；LC/MS保留时间(方法E): tR =
1.99分钟。
1.99分钟。
[0919]
[0920] 部分D. N-(4-(2,3-二氟-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苯基)-5-(羟基甲基)吡啶-2-基)乙酰胺
[0921] 如实施例37部分E中所述使用N-(4-(2,3-二氟-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苯基)-5-甲酰基吡啶-2-基)乙酰胺制备，得到呈浅棕色固体状的N-(4-(2,3-二氟-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苯基)-5-(羟基甲基)吡啶-2-基)乙酰胺(2.1 g，3.29 mmol，75%产率)。LCMS (ESI) m/e 415.2 [(M+H)+, C22H21F2N2O4的计算值为415.1]；LC/MS保留时间(方法G): tR =
0.9分钟。
0.9分钟。
[0922]
[0923] 部分E. N-(7-氟-8-((4-甲氧基苄基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺
[0924] 如实施例5部分D中所述使用N-(4-(2,3-二氟-4-((4-甲氧基苄基)氧基)苯基)-5-(羟基甲基)吡啶-2-基)乙酰胺制备，得到呈灰白色固体状的N-(7-氟-8-((4-甲氧基苄基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺(750 mg，1.613 mmol，85%产率)。LCMS (ESI) m/e 395.2 [(M+H)+, C22H20FN2O4的计算值为395.1]；LC/MS保留时间(方法E): tR = 1.95分钟。
[0925]
[0926] 部分F. 甲磺酸(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲基戊酯
[0927] 在0℃下向经搅拌的(S)-(1-羟基-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(1.6 g，7.36 mmol)于二氯甲烷(15 mL)中的溶液中添加三乙胺(2.052 mL，14.73 mmol)且搅拌溶液5分钟。在0℃下向此混合物中逐滴添加甲磺酰氯(0.574 mL，7.36 mmol)且在室温下搅拌反应混合物1小时。用水(15 mL)淬灭反应物且用DCM(2×15 mL)萃取。用盐水(10 mL)洗涤经合并的有机层，经硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到呈黄色固体状的甲磺酸(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲基戊酯(1.7 g，5.75 mmol，78%产率)，其不经进一步纯化即继续使用。
[0928]
[0929] 部分G. N-(7-氟-8-羟基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺
[0930] 在室温下向经搅拌的N-(7-氟-8-((4-甲氧基苄基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺(150 mg，0.380 mmol)于二氯甲烷(5 mL)中的溶液中添加TFA(0.059 mL，0.761 mmol)且在室温下搅拌反应混合物2小时。完成反应后，在减压下移除挥发物。用乙醚(7 mL)洗涤残余物且搅拌5分钟。通过真空过滤收集固体且在真空下干燥，得到呈白色固体状的N-(7-氟-8-羟基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺, TFA(70 mg，0.170 mmol，45%产率)。LCMS (ESI) m/e 275.0 [(M+H)+, C14H12FN2O3的计算值为275.1]；LC/MS保留时间(方法E): tR = 2.0分钟。
[0931]
[0932] 部分H. (S)-(1-((2-乙酰胺基-7-氟-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯
[0933] 在室温下向经搅拌的N-(7-氟-8-羟基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺, TFA(70 mg，0.170 mmol)及碳酸钾(97 mg，0.704 mmol)于DMF(4 mL)中的溶液中添加甲磺酸(S)-2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲基戊酯(52.0 mg，0.176 mmol)且加热反应混合物至90℃持续1小时。完成反应后，在减压下移除挥发物，得到棕色残余物。向此残余物中添加水(15 mL)且用乙酸乙酯(2×20 mL)萃取溶液。用水(30 mL)、盐水(20 mL)洗涤经合并的有机层，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩，得到呈棕色油状的(S)-(1-((2-乙酰胺基-7-氟-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(90 mg，0.066 mmol，37%产率)。产物不经进一步纯化即继续使用。LCMS (ESI) m/e 472.2 [(M-H)-, C25H31FN3O5的计算值为472.2]；LC/MS保留时间(方法E): tR = 1.99分钟。
[0934]
[0935] 部分I. (S)-N-(8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-7-氟-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺
[0936] 如实施例37部分H中所述使用(S)-(1-((2-乙酰胺基-7-氟-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯制备，得到呈白色固体状的(S)-N-(8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-7-氟-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺, 0.5 TFA(16 mg，0.037 mmol，19%产率)。
[0937]
[0938] 的计算值为372.2]；LC/MS保留时间(方法E): tR = 2.01分钟；HPLC保留时间(方法A): tR = 9.04分钟；HPLC保留时间(方法B): tR = 9.89分钟。
[0939] 实施例42
[0940] (S)-N-(8-(2-氨基-4-甲基戊氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)环丙烷甲酰胺[0941]
[0942] 部分A. 8-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-胺
[0943] 将N-(8-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺(0.05 g，0.182 mmol)溶解于50% HCl水溶液(3 mL，99 mmol)中且回流3小时。冷却反应混合物至室温且在减压下蒸发挥发物。用水(3 mL)处理残余物且用二氯甲烷(2×6 mL)萃取。收集水层且在减压下浓缩，得到呈黄色油状的8-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-胺盐酸盐(50 mg，0.185 mmol，定量)。
LCMS (ESI) m/e 233.3 [(M+H)+, C12H10ClN2O的计算值为233.0]；LC/MS保留时间(方法G)； tR = 0.89分钟。
LCMS (ESI) m/e 233.3 [(M+H)+, C12H10ClN2O的计算值为233.0]；LC/MS保留时间(方法G)； tR = 0.89分钟。
[0944]
[0945] 部分B. N-(8-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)环丙烷甲酰胺
[0946] 向经搅拌的8-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-胺, HCl(0.05 g，0.186 mmol)于氯仿(2 mL)中的溶液中添加吡啶(0.090 mL，1.115 mmol)，继而在氮气氛围下添加环丙烷甲酰氯(0.034 mL，0.372 mmol)及DMAP(2.270 mg，0.019 mmol)。在室温下搅拌反应混合物12小时。用水(6 mL)稀释混合物，随后用二氯甲烷(2×10 mL)萃取。经硫酸钠干燥经合并的有机层且在减压下浓缩。通过反相HPLC(10 mM乙酸铵/乙腈及水)纯化残余物，得到呈白色固体状的N-(8-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)环丙烷甲酰胺(0.048 g，0.156 mmol，84%产率)。LCMS (ESI) m/e 301.0 [(M+H)+, C16H14ClN2O2的计算值为301.1]；LC/MS保留时间(方法E): tR = 2.53分钟。
[0947]
[0948] 部分C. (S)-1-(2-(环丙烷甲酰胺基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基氨基甲酸叔丁酯
[0949] 如实施例18部分H中所述使用N-(8-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)环丙烷甲酰胺(0.166 g，0.442 mmol)制备，得到(S)-1-(2-(环丙烷甲酰胺基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-基氨基甲酸叔丁酯(200 mg，0.415 mmol，55%产率)。LCMS (ESI) m/e 482.2 [(M+H)+, C27H36N3O5的计算值为482.2]；LC/MS保留时间(方法F): tR = 0.92分钟。
[0950]
[0951] 部分D. (S)-N-(8-(2-氨基-4-甲基戊氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)环丙烷甲酰胺
[0952] 如实施例8部分D中所述使用(S)-(1-((2-(环丙烷甲酰胺基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(0.2 g，0.241 mmol)制备，得到呈白色固体状的(S)-N-(8-(2-氨基-4-甲基戊氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)环丙烷甲酰胺(14 mg，0.036 mmol，15%产率)。LCMS (ESI) m/e 382.3 [(M+H)+, C22H28N3O3的计算值为382.2]；LC/MS保留时间(方法J): tR = 1.96分钟；HPLC保留时间(方法A): tR = 10.17分钟；HPLC保留时间(方法B): tR = 5.69分钟。
[0953]
[0954] 实施例43
[0955] (S)-8-(2-氨基-4-甲基戊氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基氨基甲酸甲酯[0956]
[0957] 部分A. 8-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基氨基甲酸甲酯
[0958] 如实施例42部分B中所述使用8-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-胺(0.1 g，0.301 mmol)(如实施例18部分G中制备)制备，得到粗物质，通过反相HPLC(10 mM乙酸铵/乙腈及水)纯化，得到呈白色固体状的(8-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸甲酯(0.011 +g，0.036 mmol，12%产率)。LCMS (ESI) m/e 291.0 [(M+H) , C14H12ClN2O3的计算值为291] LC/MS保留时间(方法E): tR = 1.96分钟；
[0959]
[0960] 。
[0961]
[0962] 部分B.(S)-(8-((2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸甲酯
[0963] 如实施例18部分H中所述使用(8-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸甲酯(0.16 g，0.176 mmol)制备，得到粗物质，通过使用硅胶层析(2.5%甲醇/氯仿)纯化，得到呈黄色油状的(S)-(8-((2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸甲酯(0.15 g，0.067 mmol，38%产率)。LCMS (ESI) m/e 472.2 [(M+H)+, C25H34N3O6的计算值为472.2]；LC/MS保留时间(方法F): tR = 0.95分钟。
[0964]
[0965] 部分C. (S)-8-(2-氨基-4-甲基戊氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基氨基甲酸甲酯
[0966] 如实施例8部分D中所述使用(S)-(8-((2-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸酯(0.15 g，0.067 mmol)制备，得到粗物质，通过反相HPLC(10 mM乙酸铵/乙腈及水)纯化，得到呈白色固体状的(S)-(8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸甲酯(5 mg，0.013 mmol，19%产率)。
[0967]
[0968] 的计算值为372.2]；LC/MS保留时间(方法E): tR = 2.13分钟；HPLC保留时间(方法A): tR = 9.39分钟；HPLC保留时间(方法B): tR = 10.15分钟。
[0969] 实施例44
[0970] N-(8-(2-氨基-2,4-二甲基戊氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺[0971]
[0972] 部分A. 2-(叔丁氧基羰基氨基)-2,4-二甲基戊酸
[0973] 向经搅拌的2-氨基-2,4-二甲基戊酸(1 g，6.89 mmol)于四氢呋喃(15 mL)及水(15 mL)中的溶液中添加K2CO3(3.81 g，27.5 mmol)，且在室温下搅拌反应混合物10分钟。向所得混合物中逐滴添加(BOC)2O(3.20 mL，13.77 mmol)且在室温下搅拌反应混合物14小时。随后在减压下浓缩反应混合物。用乙酸乙酯(3×15 mL)洗涤水层且用饱和柠檬酸水溶液(25 mL)酸化，随后用乙酸乙酯(3×50 mL)萃取。用水(2×15 mL)、盐水(20 mL)洗涤经合并的有机萃取物，经硫酸钠干燥且在减压下浓缩，得到呈白色固体状的2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2,4-二甲基戊酸(1.6 g，6.89 mmol，定量产率)。
[0974]
[0975] 部分B. 1-羟基-2,4-二甲基戊-2-基氨基甲酸叔丁酯
[0976] 在氮气氛围下向已冷却至-10℃的经搅拌的2-((叔丁氧基羰基)氨基)-2,4-二甲基戊酸(1.6 g，6.52 mmol)于四氢呋喃(40 mL)中的溶液中添加N-甲基吗啉(0.860 mL，7.83 mmol)，继而逐滴添加氯甲酸异丁酯(1.028 mL，7.83 mmol)且搅拌反应混合物30分钟。随后过滤反应混合物且将滤液逐滴添加至NaBH4(0.494 g，13.04 mmol)于水(20.0 mL)中的悬浮液中。搅拌反应混合物10分钟，随后用乙酸乙酯(30 mL)稀释。分离有机层且用盐水(2×20)洗涤，经(Na2SO4)干燥且在减压下蒸发。通过硅胶层析(30%乙酸乙酯/石油醚)纯化残余物，得到呈油状的(1-羟基-2,4-二甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(1.1 g，4.76 mmol，73%产率)。
[0977]
[0978] 部分C. 1-(2-乙酰胺基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-2,4-二甲基戊-2-基氨基甲酸叔丁酯
[0979] 如实施例18部分H中所述使用N-(8-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺(0.3 g，1.092 mmol)(如实施例18部分G中制备)制备，得到粗物质，通过反相HPLC(10 mM乙酸铵)纯化，得到呈黄色半固体状的外消旋(1-((2-乙酰胺基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-2,4-二甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(60 mg，0.116 mmol，12%产率)。
[0980]
[0981] 的计算值为470.25]；LC/MS保留时间(方法K): tR = 2.48分钟。
[0982]
[0983] 部分D. N-(8-(2-氨基-2,4-二甲基戊氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺
[0984] 如实施例8部分D中所述使用(1-((2-乙酰胺基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-2,4-二甲基戊-2-基)氨基甲酸叔丁酯(0.55 g，0.433 mmol)制备，得到粗物质，通过反相HPLC(10 mM乙酸铵/乙腈及水)纯化，得到N-(8-(2-氨基-2,4-二甲基戊氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺。为了制备盐酸盐，将化合物溶解于甲醇(1 mL)中，冷却至0℃且用4 M HCl/二噁烷(1.5 mL)处理且搅拌10分钟。在减压下浓缩挥发物且冻干溶液，得到呈浅黄色固体状的外消旋N-(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺, HCl(0.013 g，0.030 mmol，7%产率)。
[0985]
[0986] 的计算值为370.2]；LC/MS保留时间(方法J)；HPLC保留时间(方法A): tR = 9.51分钟；HPLC保留时间(方法B): tR = 9.98分钟。
[0987] 实施例 45
[0988] (S)-N-(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺
[0989]
[0990] 部分 A. 4-甲基-5H-1,2,3-氧杂噻唑 2,2-二氧化物
[0991] 步骤1 氨磺酰氯形成：向装有机械搅拌器和加料漏斗的1000ml 4颈圆底烧瓶中进料DCM (400 mL) 和氯磺酰异氰酸酯 (124 mL, 1430 mmol)。在N2下，该溶液冷却至0℃。随后将甲酸(53.9 mL, 1430 mmol)添加至DCM(100 mL)中，并将该溶液转移至加料漏斗并使溶液缓慢添加至大力搅拌的反应混合物中。逐步形成稠密的浆体。观察到缓慢放热，所以将额外的干冰添加至丙酮浴。一旦温度稳定，继续进行甲酸的添加。添加在 25分钟内完成。将~混合物逐步加温至室温并搅拌过夜。
[0992] 步骤2：向独立的5L 4颈反应烧瓶中进料羟基丙酮（72.5 mL, 953 mmol）、吡啶(116 mL, 1430 mmol)和DCM (2000 mL)。在N2下将该溶液冷却至-5℃。通过特氟龙管缓慢添加氨磺酰氯10分钟。在添加后，搅拌反应物15分钟，随后将冰浴移除，并且将反应混合物加温至室温。随着反应进程，形成胶质物质。通过硅胶层析（300g 硅胶，使用DCM洗脱）将所述物质纯化。以无色固体获得4-甲基-5H-1,2,3-氧杂噻唑 2,2-二氧化物(72.4 g, 536 mmol, 56 % 产率)。
[0993]
[0994]
[0995] 部分B. 2-(叔丁氧基羰基氨基)-2,4-二甲基戊酸 4-甲基-4-(2-甲基烯丙基)-1,2,3-氧杂噻唑烷 2,2-二氧化物
[0996] 将4-甲基-5H-1,2,3-氧杂噻唑 2,2-二氧化物 (0.541 g, 4mmol) 于甲基叔丁基醚(30 mL)中的悬浮液在冰/IPA浴中冷却至低于0℃。向冷却的溶液中添加0.5 M的(2-甲基烯丙基)氯化镁于THF中的溶液(9.60 mL, 4.80 mmol)。将反应混合物加温至室温过夜。随后用NH4Cl (50 mL)的饱和溶液进行淬灭并添加EtOAc (20 mL)。将有机相分离，使用盐水(50 mL)洗涤，使用Na2SO4干燥，过滤并在真空下浓缩以获得2-(叔丁氧基羰基氨基)-2,4-二甲基戊酸 4-甲基-4-(2-甲基烯丙基)-1,2,3-氧杂噻唑烷2,2-二氧化物 (0.567 g, 2.96 mmol, 74 % 产率)。
[0997]
[0998]
[0999] 部分C. 4-甲基-4-(2-甲基烯丙基)-1,2,3-氧杂噻唑烷-3-甲酸苄酯 2,2-二氧化物
[1000] 向N2冲洗的100mL圆底烧瓶中添加4-甲基-4-(2-甲基烯丙基)-1,2,3-氧杂噻唑烷 2,2-二氧化物 (0.55 g, 2.88 mmol)于THF (10 mL)中的溶液。添加叔丁醇钾（4.31 mL,
4.31 mmol）于THF中的溶液。温度升至27℃并且溶液变为悬浮液。将混合物在室温下搅拌
1h。缓慢添加氯甲酸苄酯（1.026 mL, 7.19 mmol）。将反应混合物在室温下搅拌2h。随后将反应混合物用水（50 mL）淬灭并使用EtOAc (2x70 mL)萃取。使用盐水（50 mL）洗涤有机萃取物，使用Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过硅胶层析（乙酸乙酯/己烷）纯化残留物以获得4-甲基-4-(2-甲基烯丙基)-1,2,3-氧杂噻唑烷-3-甲酸苄酯 2,2-二氧化物 (0.66 g, 2.028 mmol, 71 %产率)。
4.31 mmol）于THF中的溶液。温度升至27℃并且溶液变为悬浮液。将混合物在室温下搅拌
1h。缓慢添加氯甲酸苄酯（1.026 mL, 7.19 mmol）。将反应混合物在室温下搅拌2h。随后将反应混合物用水（50 mL）淬灭并使用EtOAc (2x70 mL)萃取。使用盐水（50 mL）洗涤有机萃取物，使用Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。通过硅胶层析（乙酸乙酯/己烷）纯化残留物以获得4-甲基-4-(2-甲基烯丙基)-1,2,3-氧杂噻唑烷-3-甲酸苄酯 2,2-二氧化物 (0.66 g, 2.028 mmol, 71 %产率)。
[1001]
[1002] 通过手性超临界流体层析（柱: OJ-H (3x25cm, 5µm）； 流动相: CO2/ MeOH (90/10))将外消旋化合物分离以获得两种对映异构体。
[1003] 分析超临界流体层析条件：柱OJ-H (0.46x25cm, 5µm)； BPR压力: 100 bars； 温度: 35℃； 流速: 3.0 mL/min； 流动相: CO2/ MeOH (90/10)； 检测器波长: UV 200-400nm。
[1004] 对映异构体 1: (S)-4-甲基-4-(2-甲基烯丙基)-1,2,3-氧杂噻唑烷-3-甲酸苄酯 2,2-二氧化物 HPLC保留时间= 2.53 min。
[1005] 对映异构体 2: (R)-4-甲基-4-(2-甲基烯丙基)-1,2,3-氧杂噻唑烷-3-甲酸苄酯 2,2-二氧化物 HPLC保留时间= 2.97 min。
[1006]
[1007] 部分D. (S)-(1-((2-乙酰胺基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-2,4-二甲基戊-4-烯-2-基)氨基甲酸苄酯
[1008] 向20 mL反应小瓶中添加N-(8-羟基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺（1.281 g, 5 mmol）（如实施例 18, 部分 G中制备）、(S)-4-甲基-4-(2-甲基烯丙基)-1,2,3-氧杂噻唑烷-3-甲酸苄酯 2,2-二氧化物 (2.011 g, 5.50 mmol)、碳酸钾 (1.382 g, 10.00 mmol) 和NMP (5.00 mL)。将反应混合物加热至60℃持续22 h。向反应混合物逐滴加入水（10 mL）。将悬浮液冷却至室温，搅拌30 min。随后将悬浮液过滤并且使用水（50 mL）洗涤滤饼并通过真空抽吸干燥3h。将粗产物（滤饼，2.40g）与甲基叔丁基醚（9 mL）在50℃研制30min。在冷却至室温后，过滤悬浮液并使用甲基叔丁基醚（20 mL）冲洗，并通过真空抽吸干燥2h以获得(S)-(1-((2-乙酰胺基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-2,4-二甲基戊-4-烯-2-基)氨基甲酸苄酯 (1.7 g, 3.39 mmol, 68 %产率)。
[1009]
[1010]
[1011] 部分E. (S)-(1-((2-乙酰胺基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-2,4-二甲基戊-4-烯-2-基)氨基甲酸苄酯
[1012] 向N2冲洗的250 mL 三颈圆底烧瓶中添加(S)-(1-((2-乙酰胺基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-2,4-二甲基戊-4-烯-2-基)氨基甲酸苄酯 (7.6g, 15.15 mmol)、THF (38 mL)和MeOH (38 mL)。使用N2使溶液鼓泡5 min。在N2下，添加10% Pd/C (干燥, 760mg, 10% w/w)。使反应混合物脱气并使用H2气球使其填充H2若干次。随后使用H2气球在H2下搅拌24h。反应混合物随后通过硅藻土垫过滤并使用50% MeOH/THF (300 mL)冲洗。在减压下浓缩滤液。通过超临界流体层析（0.3% DEA/甲醇； Chiralpak-IA柱）纯化残留物以获得为白色固体的(S)-N-(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺 (4.5 g, 12.16 mmol, 80 %产率)。(S) 对映异构体的保留时间= 4.68 min (分析超临界流体层析条件: 柱: Chiralpak-IA (250 x 4.6 mm, 5µm)； 流速: 5.0 mL/min； 流动相: 0.3% DEA/甲醇)；
[1013]
[1014] 。
[1015] 实施例 46
[1016] (R)-N-(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺
[1017]
[1018] 如在实施例 45中描述的使用外消旋的4-甲基-4-(2-甲基烯丙基)-1,2,3-氧杂噻唑烷-3-甲酸苄酯 2,2-二氧化物从部分C制备。通过手性超临界流体层析（柱：Chiralpak-IA； 流动相: 0.3% DEA/甲醇）将外消旋产物分离成相应的对映异构体，以获得为白色固体的(R)-N-(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺 (27 mg, 0.63 mmol, 98 %产率)。(R) 对映异构体的保留时间 = 6.49 min (分析超临界流体层析条件: 柱: Chiralpak-IA (250 x 4.6 mm, 5µm)； 流速: 5.0 mL/min； 流动相: 0.3% DEA/甲醇)；
[1019]
[1020] 。
[1021] 实施例 47
[1022] N-(8-(((S)-2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-4-基)乙酰胺
[1023]
[1024]
[1025] 。
[1026] 实施例 48
[1027] N-(8-(((S)-2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5-环丙基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-4-基)乙酰胺
[1028]
[1029]
[1030] 。
[1031] 实施例 49
[1032] (2S)-4-甲基-1-((5-(三氟甲基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-胺[1033]
[1034]
[1035]
[1036] 。
[1037] 实施例 50
[1038] 8-(((S)-2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5-环丙基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-4-胺[1039]
[1040]
[1041] 。
[1042] 实施例 51
[1043] (2S)-1-((5-异丙基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺[1044]
[1045]
[1046] 。
[1047] 实施例 52
[1048] (2S)-4-甲基-1-((5-(三氟甲基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-胺: 非对映异构体 1
[1049]
[1050]
[1051] 。
[1052] 实施例 53
[1053] (2S)-4-甲基-1-((5-(三氟甲基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-胺: 非对映异构体2
[1054]
[1055]
[1056] 。
[1057] 实施例 54
[1058] (S)-8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-N-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-4-胺[1059]
[1060]
[1061] 。
[1062] 实施例55
[1063] (2S)-1-((5-异丙基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)-4-甲基戊-2-胺[1064]
[1065]
[1066] 。
[1067] 实施例 56
[1068] (2S)-1-环丙基-3-((5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)丙-2-胺[1069]
[1070]
[1071] 。
[1072] 实施例57
[1073] 5,5,5-三氟-1-((5-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基)氧基)戊-2-胺
[1074]
[1075]
[1076] 。
[1077] 实施例58
[1078] (S)-8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-N-乙基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-胺[1079]
[1080]
[1081] 。
[1082] 实施例59
[1083] (S)-N-(8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-7-(二氟甲氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺
[1084]
[1085]
[1086] 。
[1087] 实施例60
[1088] (8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸甲酯
[1089]
[1090]
[1091] 。
[1092] 实施例61
[1093] (S)-N-(8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)异丁酰胺[1094]
[1095]
[1096] 。
[1097] 实施例62
[1098] (S)-N-(8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-10-氟-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺
[1099]
[1100]
[1101] 。
[1102] 实施例63
[1103] (S)-N-(8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-7-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺
[1104]
[1105]
[1106] 。
[1107] 实施例64
[1108] (S)-(8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸异丙酯
[1109]
[1110]
[1111] 。
[1112] 实施例65
[1113] N-(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-7-(二氟甲氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺
[1114]
[1115]
[1116] 。
[1117] 实施例66
[1118] N-(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-7-甲氧基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺
[1119]
[1120]
[1121] 。
[1122] 实施例67
[1123] (8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸甲酯
[1124]
[1125]
[1126] 。
[1127] 实施例68
[1128] 8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-胺
[1129]
[1130]
[1131] 。
[1132] 实施例69
[1133] (8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-7-甲氧基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸甲酯
[1134]
[1135]
[1136] 。
[1137] 实施例70
[1138] (8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸甲酯
[1139]
[1140]
[1141] 。
[1142] 实施例71
[1143] (S)-8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-9-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-胺[1144]
[1145]
[1146] 。
[1147] 实施例72
[1148] (S)-N-(8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)-3,5-二氟苯甲酰胺
[1149]
[1150]
[1151] 。
[1152] 实施例73
[1153] (S)-N-(8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)丙酰胺[1154]
[1155]
[1156] 。
[1157] 实施例74
[1158] (S)-(8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-7-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸甲酯
[1159]
[1160]
[1161] 。
[1162] 实施例75
[1163] (8-((2-氨基-1,1-氘-2,4-二甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸甲酯
[1164]
[1165]
[1166] 。
[1167] 实施例76
[1168] (8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-7-(二氟甲氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸甲酯
[1169]
[1170]
[1171] 。
[1172] 实施例77
[1173] (S)-(8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸乙酯
[1174]
[1175]
[1176] 。
[1177] 实施例78
[1178] N-(8-((2-氨基-1,1-氘-2,4-二甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺
[1179]
[1180]
[1181]。
[1182] 实施例79
[1183] (8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-7-氰基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸甲酯
[1184]
[1185]
[1186] 。
[1187] 实施例80
[1188] (S)-(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-7-氰基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸甲酯
[1189]
[1190]
[1191] 。
[1192] 实施例81
[1193] (S)-(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸乙酯
[1194]
[1195]
[1196]
[1197] 。
[1198] 实施例82
[1199] (S)-(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-1,9-二氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸甲酯
[1200]
[1201]
[1202] 。
[1203] 实施例83
[1204] (S)-(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-9-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸甲酯
[1205]
[1206]
[1207] 。
[1208] 实施例84
[1209] (S)-(8-((2-氨基-4-甲基戊基)氧基)-7-氰基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸甲酯
[1210]
[1211]
[1212] 。
[1213] 实施例85
[1214] (S)-N-(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-7-甲氧基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺
[1215]
[1216]
[1217] 。
[1218] 实施例86
[1219] (S)-(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-7-甲氧基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸甲酯
[1220]
[1221]
[1222] 。
[1223] 实施例87
[1224] (S)-N-(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-7-(二氟甲氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺
[1225]
[1226]
[1227] 。
[1228] 实施例88
[1229] (S)-8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-7-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-胺[1230]
[1231]
[1232] 。
[1233] 实施例89
[1234] (S)-(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-7-(二氟甲氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸甲酯
[1235]
[1236]
[1237]
[1238] 。
[1239] 实施例 90
[1240] (S)-8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-胺
[1241]
[1242]
[1243]。
[1244] 实施例 91
[1245] (S)-N-(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-7-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺
[1246]
[1247]
[1248] 。
[1249] 实施例 92
[1250] (S)-(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-7-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸甲酯
[1251]
[1252]
[1253] 。
[1254] 实施例 93
[1255] (S)-(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-7-氯-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸乙酯
[1256]
[1257]
[1258] 。
[1259] 实施例 94
[1260] (8-((2-氨基-1,1-氘-2,4-二甲基戊基)氧基)-7-氰基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸甲酯
[1261]
[1262]
[1263] 。
[1264] 实施例 95
[1265] (S)-(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-9-氟-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸甲酯
[1266]
[1267]
[1268] 。
[1269] 实施例 96
[1270] (8-((2-氨基-1,1-氘-2,4-二甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸乙酯
[1271]
[1272]
[1273] 。
[1274] 实施例 97
[1275] (S)-(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-5,5-氘-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)氨基甲酸甲酯
[1276]
[1277]
[1278] 。
[1279] 实施例 98
[1280] (S)-N-(8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-10-氟-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺
[1281]
[1282]
[1283] 。
[1284] 实施例 99
[1285] (S)-8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-10-氟-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-胺[1286]
[1287]
[1288] 。
[1289] 实施例 100
[1290] (S)-N-(8-((2-乙酰胺基-4-甲基戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺
[1291]
[1292]
[1293]。
[1294] 实施例 101
[1295] (S)-N-(8-((4-甲基-2-(甲基硫酰胺基)戊基)氧基)-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-2-基)乙酰胺
[1296]
[1297]
[1298] 。
[1299] 实施例 102
[1300] (S)-8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-2-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-5-酮[1301]
[1302]
[1303] 。
[1304] 实施例 103
[1305] (S)-8-((2-氨基-2,4-二甲基戊基)氧基)-9-氯-2-甲基-5H-色烯并[3,4-c]吡啶-5-酮
[1306]
[1307]
[1308] 。
[1309] 方法
[1310] AAK1激酶分析
[1311] 在U型底384孔盘中进行分析。最终分析体积为30 μl，其由将15 μl酶及底物(荧光素化肽(5-FAM)-Aha-KEEQSQITSQVTGQIGWR-NH2及ATP)及测试化合物添加于分析缓冲剂(10 mM Tris-HCL(pH 7.4)、10 mM MgCl2、0.01% Tween-20及1.0 mM DTT)中制备。通过组合在细菌中表达的GST-Xa-hAAK1与底物及测试化合物来引发反应。在室温下培育反应物3小时且通过向各样品中添加60 μl 35 mM EDTA缓冲剂来终止反应。在Caliper LabChip 3000(Caliper, Hopkinton, MA)上通过电泳分离荧光底物与磷酸化产物来分析反应物。通过与经EDTA淬灭的对照反应(100%抑制)及仅媒介物的反应(0%抑制)比较来计算抑制数据。分析中试剂的最终浓度为：ATP，22 μM；(5-FAM)-Aha-KEEQSQITSQVTGQIGWR-NH2，1.5 μM；GST-Xa-hAAK1，3.5 nM；及DMSO，1.6%。产生剂量反应曲线以确定抑制50%激酶活性所需的浓度(IC50)。将化合物以10 mM溶解于二甲亚砜(DMSO)中且在十一个浓度下进行评估。通过非线性回归分析得出IC50值。
[1312] 基于HEK281细胞的分析
[1313] 将HEK293F细胞培养于含有DMEM(Gibco，目录号11965)、10% FBS(SAFC Biosciences，目录号12103C)、1×GPS(谷氨酰胺、青霉素(penicillin)及链霉素(streptomycin))的培养基中。在第一天，将细胞涂布于10 cm培养皿上，使得其在转染时约80%融合。在转染时每10 cm培养皿中有约1200万个细胞。在第二天，用48 μg DNA及144 μl Lipofectamine 2000( Invitrogen，目录号11668-019)转染各培养皿。DNA由含有3 μg AAK1/HA/pIRES(全长人类，NCBI寄存编号NP_055726.2)、45 μg Flag/AP2MI/pcDNA(全长人类)及1.5 ml OPTI-MEM的混合物(每10 cm培养皿)组成。Lipofectamine2000由含有144 μl Lipofectamine2000及1.5 ml OPTI-MEM的混合物(每10 cm培养皿)构成。将各混合物转移至独立的15 ml管中且在室温下培育5分钟，随后合并两种混合物且在室温下培育20分钟。
随后自各10 cm培养盘吸出生长培养基且替换为10 ml DMEM+10% FBS(无GPS)。最后，向各
10 cm培养皿中添加3 ml DNA/Lipofectamine混合物且轻柔混合，继而在37℃及5% CO2下培育培养盘过夜。
随后自各10 cm培养盘吸出生长培养基且替换为10 ml DMEM+10% FBS(无GPS)。最后，向各
10 cm培养皿中添加3 ml DNA/Lipofectamine混合物且轻柔混合，继而在37℃及5% CO2下培育培养盘过夜。
[1314] 在第三天，以1000×最终浓度在100% DMSO中稀释化合物，继而进行3倍连续稀释，获得总共5个测试浓度。每10 cm培养皿测试四种化合物。随后将1 μl各化合物稀释液吸移至深孔96孔盘中，继而向各孔中添加500 μl DMEM + 0.5% FBS以获得2×最终浓度的各化合物。通过单纯吸取(此时HEK293细胞易于自培养盘脱落)将细胞再悬浮于10 cm培养皿中，随后转移至50 ml锥形管中且在1000 rpm下离心5分钟来集结(pellet)。随后将细胞集结团块再悬浮于2.75 ml DMEM + 0.5% FBS中(每10 cm培养皿)且将100 μl细胞悬浮液转移至96孔TC盘的各孔中。最后，随后将100 μl在DMEM +0.5% FBS中稀释的2×化合物添加至含有细胞悬浮液的孔中，获得1×最终浓度。随后在37℃及5% CO2下培育培养盘3小时，继而将细胞悬浮液自各孔转移至12管PCR连排管(PCR strip)中。将PCR连排管放在吸头置放架(tip rack)中，在1000 rpm下旋转5分钟，使细胞集结，且随后通过吸取但不扰动细胞集结团块来移除培养基。
[1315] 为了准备进行蛋白质印迹分析(Western Blot analysis)，将细胞集结团块再悬浮于40 μl 1×LDS-PAGE样品缓冲液(Invitrogen，目录号NP0008)+ 2×Halt磷酸酶及蛋白酶抑制剂混合物(Thermo Scientific，目录号1861284)中，继而各自用设定在第5档下的微量管(microtip)声波仪进行声波处理8-10秒。向各样品中添加5 μl 10× NuPage样品还原剂(含50 mM DTT)，继而在70C下在PCR器上热变性10分钟。每种样品总共取10 μl加载于4-20% Tris-甘氨酸Criterion 26孔凝胶(Biorad，目录号345-0034)的各泳道中以获得磷酸化mu2印迹，且加载10 μl于4-12% Bis-Tris(+MES缓冲液)NuPAGE 26孔凝胶(Invitrogen，目录号WG1403BX10)的各泳道中以获得mu2印迹。为进行对照，将2 ng磷酸化mu2或20 ng mu2/Flag蛋白质加载于各凝胶的最末孔中。在SDS-PAGE后，使用iBlot将各凝胶上的样品转移至PVDF膜中，且将膜在TBST + 5%乳中封闭1小时，继而用TBST洗涤3次5-10分钟。用含兔抗磷酸化mu2(1:5000；由New England Peptide制造且在Lexicon上进行亲和性纯化的兔多克隆抗体)的TBST + 5% BSA探测Criterion凝胶，而用含小鼠抗Flag(1:500；Sigma，目录号F1804)的TBST + 5%乳探测NuPAGE凝胶，且在4℃下在振荡器上培育这些初级抗体过夜。
[1316] 在第四天，用TBST洗涤蛋白质印迹3次持续5-10分钟，在室温下用含抗兔-HRP(1:2000；BioRad，目录号170-6515)或抗小鼠-HRP(1:2000；Biorad，目录号170-6516)的TBST +
5%乳探测1小时，用TBST洗涤3次持续10分钟，且用ECL试剂(GE Healthcare，目录号RPN2132)在Versadoc上显影。最后，安设相机以每30秒进行拍照持续10分钟，且保留各印迹的无饱和信号的最佳影像(当信号饱和时，将以红色突显条带)。对各条带进行体积分析以获得密度值。通过首先针对总Mu2表达水平进行标准化随后与0%及100%对照比较来计算各样品的抑制百分比。随后使用Excel拟合软件计算IC50值。
5%乳探测1小时，用TBST洗涤3次持续10分钟，且用ECL试剂(GE Healthcare，目录号RPN2132)在Versadoc上显影。最后，安设相机以每30秒进行拍照持续10分钟，且保留各印迹的无饱和信号的最佳影像(当信号饱和时，将以红色突显条带)。对各条带进行体积分析以获得密度值。通过首先针对总Mu2表达水平进行标准化随后与0%及100%对照比较来计算各样品的抑制百分比。随后使用Excel拟合软件计算IC50值。
[1317] AAK1敲除小鼠
[1318] 通过两种方法制备破坏AAK1基因的纯合(-/-)小鼠：基因捕获及同源重组。
[1319] 基因捕获为一种随机插入突变诱发的方法，其使用DNA中编码报导子或可选择标记基因的片段作为诱变剂。基因捕获载体经设计而以使细胞拼接机制可将载体编码的外显子拼接于细胞mRNA的方式整合于内含子或基因中。一般而言，基因捕获载体含有可选择标记序列，其位于强拼接受体序列之前且不在启动子之前。由此，当这种载体整合于基因中时，细胞拼接机制将所捕获基因的外显子拼接于可选择标记序列的5'端上。通常，这种可选择标记基因仅可在编码该基因的载体整合于内含子中时被表达。随后，所得基因捕获事件通过选择可在选择性培养中存活的细胞来鉴别。
[1320] 通过包括将经遗传工程改造的载体序列的至少一部分插入所关注基因中的方法使胚胎干细胞(来自衍生鼠类株A129的Lex-1细胞)突变，将经突变的胚胎干细胞显微注射于胚泡中，随后引入假孕雌性宿主中且使用既定方法到达产期。参见例如“Mouse Mutagenesis”, 1998, Zambrowicz等人编, Lexicon Press, The Woodlands, TX。随后使所得嵌合动物繁殖产生能够生殖系传递所关注基因中含有经工程改造的突变的等位基因的后代。
[1321] AAK1基因经破坏的小鼠还通过同源重组来制备。在此情况下，通过本领域中已知的方法移除鼠类AAK1基因的第二编码外显子(参见GenBank寄存编号NM_177762)。参见例如美国专利第5,487,992号、第5,627,059号及第5,789,215号。
[1322] 结合破坏AAK1基因的杂合(+/-)小鼠及野生型(+/+)同窝出生者研究破坏AAK1基因的纯合(-/-)小鼠。在此分析期间，使用经设计用以评定哺乳动物个体的主要器官系统的功能的一整套医疗诊断程序对小鼠进行医疗后处理。结合其杂合(+/-)及野生型(+/+)同窝出生者研究纯合(-/-)“敲除”小鼠。通过Southern分析证实对AAK1基因的破坏。通过RT-PCR在以下中检测AAK1的鼠类同源物的表达：鼠脑；脊髓；眼睛；胸腺；脾；肺；肾；肝；骨骼肌；骨；胃、小肠及结肠；心脏；脂肪；哮喘肺；LPS肝；血液；条带状心脏(banded heart)；主动脉树；
前列腺；及乳腺(5周龄未交配鼠、成熟未交配鼠、12 DPC、分娩后3天(泌乳期)、断乳后3天(退化早期)及断乳后7天(退化晚期))。
前列腺；及乳腺(5周龄未交配鼠、成熟未交配鼠、12 DPC、分娩后3天(泌乳期)、断乳后3天(退化早期)及断乳后7天(退化晚期))。
[1323] 使用福尔马林(formalin)爪测试来测试AAK1纯合(-/-)及其野生型(+/+)同窝出生者以评定其急性及持续性伤害感受性反应。在这些测试中，使用自动伤害感受分析仪(购自Ozaki实验室, University of California, San Diego)。在测试前30分钟将金属带放置在各小鼠左后爪周围。30分钟适应期后，将20 μl 5%福尔马林皮下注射于左后爪的背面。将小鼠独立放置于圆柱形室中45分钟。通过用蒸馏水稀释甲醛(Formalde-fresh 20%, Fisher Scientific, Fair Lawn, NJ)来制备新鲜5%福尔马林溶液。在福尔马林注射前30分钟给予研究化合物。
[1324] 计算机记录由电磁场引起的每分钟的退缩情况、I期的总退缩情况(急性期=前8分钟)及II期的总退缩情况(持续期= 20-40分钟)。参见Yaksh TL, Ozaki G, McCumber D, Rathbun M, Svensson C, Malkmus S, Yaksh MC. An automated flinch detecting system for use in the formalin nociceptive bioassay.J Appl Physiol., 2001；90:2386-402。
[1325] 如图1所示，使用纯合(-/-)雌性小鼠(n = 16)、野生型雌性小鼠(n = 15)、纯合(-/-)雄性小鼠(n = 9)及野生型雄性小鼠(n = 18)获得1期及2期的数据。在所有群组中且在两期中，AAK1纯合(-/-)小鼠展现的所记录的缩爪现象显著少于其野生型(+/+)同窝出生者。
[1326] AAK1敲除小鼠的研究显示，如使用上述福尔马林爪测试所测定的，破坏AAK1基因影响疼痛反应。使用相同测试证实给予AAK1抑制剂还可影响疼痛反应。
[1327] 在此分析中以不同剂量测试本公开化合物。使用加巴喷丁及普瑞巴林作为阳性对照。结果显示于下表2中，其中认为200 mg/kg加巴喷丁的作用为100%反应，其它化合物的反应%相对于200 mg/kg剂量的加巴喷丁来得出，“sc”意谓皮下给药。
[1328] 表2化合物 剂量(mg/kg) 反应
加巴喷丁 50 sc 60%
加巴喷丁 200 sc 100%
普瑞巴林 50 sc 90%
化合物5：(R)-1-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺 10 sc 45%化合物5：(R)-1-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺 30 sc 88%
加巴喷丁 50 sc 60%
加巴喷丁 200 sc 100%
普瑞巴林 50 sc 90%
化合物5：(R)-1-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺 10 sc 45%化合物5：(R)-1-(5H-色烯并[3,4-c]吡啶-8-基氧基)-4-甲基戊-2-胺 30 sc 88%