一种测定琥珀酸曲格列汀原料中有关物质的方法

摘要

一种测定琥珀酸曲格列汀原料中有关物质的方法，涉及分析化学领域。所述方法采用高效液相色谱法，将样品溶液注入高效液相色谱仪，完成琥珀酸曲格列汀原料中有关物质的测定，色谱条件为：色谱柱：Kromasil公司的100-5C18色谱柱；流动相：流动相A与流动相B均为酸性水溶液与有机溶剂的混合溶液，流动相A的体积百分比与流动相B的体积百分比的和始终保持为100％，进行线性梯度洗脱。本发明采用Kromasil公司的100-5C18色谱柱，通过对流动相梯度洗脱程序进行优化，能够有效的分离琥珀酸曲格列汀原料中的有关物质。本发明解决了琥珀酸曲格列汀原料有关物质的分离测定问题，从而确保了琥珀酸曲格列汀原料的质量可控。

权利要求

1.一种测定琥珀酸曲格列汀原料中有关物质的方法，其特征在于：所述方法采用高效液相色谱法，将样品溶液注入高效液相色谱仪，完成曲格列汀原料中有关物质的测定，色谱条件为：色谱柱：以十八烷基键合硅胶为填料的色谱柱；

流动相：流动相A与流动相B均为酸性水溶液与有机溶剂的混合溶液，流动相A的体积百分比与流动相B的体积百分比的和始终保持为100%，进行线性梯度洗脱；所述线性洗脱梯度如下：所述色谱柱为Kromasil公司的100-5C18色谱柱；所述流动相A为酸性水溶液与有机溶剂体积比为90:10的混合溶液；流动相B为酸性水溶液与有机溶剂体积比为40:60的混合溶液；所述酸性水溶液为高氯酸水溶液，并用碱调节溶液pH值至3.0，所述酸性水溶液中高氯酸的体积百分比为0.1%；所述有机溶剂为乙腈；所述流动相的流速为1.0ml/min；所述色谱柱的温度为40℃；所述检测波长为224nm。

2.根据权利要求1所述的测定琥珀酸曲格列汀原料中有关物质的方法，其特征在于所述方法还包括供试品溶液的制备：取琥珀酸曲格列汀原料药样品适量，用所述酸性水溶液溶解并稀释样品，配制成每1ml含琥珀酸曲格列汀0.5mg的样品溶液。

说明书

一种测定琥珀酸曲格列汀原料中有关物质的方法

技术领域

[0001] 本发明涉及分析化学领域，具体涉及一种测定曲格列汀原料中有关物质的方法。

背景技术

[0002] 在抗糖尿病药物中，口服给药的小分子化合物DPP-IV抑制剂研究最为活跃。DPP-IV是体内的一种酶，能够引发肠促胰岛素，即胰葡萄糖素样肽-1和葡萄糖依赖性促胰岛素多肽的失活，而这2种肠降胰岛素在血糖调节中发挥着重要作用。抑制DPP-IV能够增加血糖水平依赖性胰岛素分泌，从而控制血糖水平。

[0003] DPP-IV抑制剂类药物被命名为“列汀类”，此类药物共有17个，其中的曲格列汀由武田制药开发，于2014年首次在日本获批上市，是一种超长效的DPP-IV抑制剂，每周只需要口服一次，可产生持续的DPP-IV抑制作用，不仅降糖效果理想，同时具有不增加体重和不会引起低血糖反应等优越性。曲格列汀(Trelagliptin)化学名称为：2-[6-3-氨基-哌啶-1-基]-3-甲基-2，4-二氧代-3，4-二氢-2H-嘧啶-1-基甲基]-4-氟-苄腈。其化学结构式如下：

[0004]

[0005] 在琥珀酸曲格列汀中我们发现了工艺杂质，A、N、O、V、W，结构式如下，在降解实验中发现了降解杂质P和R。以上杂质，即有关物质均会影响到药品的纯度和质量，因此需要建立合适的分析方法对杂质的含量加以控制。曲格列汀中潜在杂质的名称和化学结构信息如下：

[0006]

[0007]

[0008] 中国专利申请(申请公布号CN 104237421 A)提供一种琥珀酸曲格列汀及其制剂的有关物质检测方法，采用二极管阵列检测器，该方法采用的色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，流动相A为磷酸盐缓冲液，流动相B为乙腈，且所述的磷酸盐缓冲液与乙腈的体积比为60∶40～85∶15，磷酸盐缓冲液的pH值为5.0～5.5，磷酸盐缓冲液的浓度为0.05～0.1mol/L，检测波长为278nm。但该方法存在以下问题：1.该专利中未给出任何已知杂质，无法判断该方法的适用性；2.该分析方法的波长参数设置为278nm，不能涵盖所有杂质，经过对各个已知杂质的光谱图分析，杂质P在278nm没有任何紫外吸收。以上问题表明，该分析方法无法保证对本品的质量控制。

发明内容

[0009] 针对上述技术问题，本发明提供一种测定琥珀酸曲格列汀原料中有关物质的方法，所述方法采用高效液相色谱法，将样品溶液注入高效液相色谱仪，完成曲格列汀原料中有关物质的测定，色谱条件为：

[0010] 色谱柱：以十八烷基键合硅胶为填料的色谱柱；

[0011] 流动相：流动相A与流动相B均为酸性水溶液与有机溶剂的混合溶液，流动相A的体积百分比与流动相B的体积百分比的和始终保持为100％，进行线性梯度洗脱；所述线性洗脱梯度如下：

[0012]

[0013]

[0014] 进一步地，所述色谱柱为Kromasil公司的100-5C18色谱柱。

[0015] 进一步地，所述流动相A为酸性水溶液与有机溶剂体积比为90∶10的混合溶液；流动相B为酸性水溶液与有机溶剂体积比为40∶60的混合溶液。

[0016] 进一步地，所述酸性水溶液为三氟乙酸或高氯酸水溶液，并用碱调节溶液pH值至3.0，所述酸性水溶液中三氟乙酸或高氯酸的体积百分比为0.1％。

[0017] 具体地，所述酸性水溶液优选为高氯酸水溶液。

[0018] 进一步地，所述有机溶剂为甲醇或乙腈。

[0019] 具体地，所述有机溶剂优选乙腈。

[0020] 进一步地，所述流动相的流速为0.8ml/min～1.0ml/min；所述色谱柱的温度为35℃～40℃；所述方法还包括检测波长，所述检测波长为197nm～235nm。

[0021] 具体地，所述流动相的流速优选1.0ml/min；所述色谱柱的温度优选40℃；所述检测波长优选224nm。

[0022] 进一步地，所述方法还包括供试品溶液的制备：取琥珀酸曲格列汀原料药样品适量，用所述酸性水溶液溶解并稀释样品，配制成每1ml含琥珀酸曲格列汀0.5mg的样品溶液。

[0023] 本发明所述的测定方法，可按照以下方法实现：

[0024] (1)取琥珀酸曲格列汀原料药样品适量，用0.1％高氯酸水溶液(pH3.0)溶解样品，配制成每1ml含琥珀酸曲格列汀0.5mg的样品溶液。

[0025] (2)设置流动相的流速为0.8ml/min～1.0ml/min，检测波长为197nm～235nm，色谱柱温度为35℃～40℃。

[0026] (3)取(1)的样品溶液10μl，注入液相色谱仪，完成琥珀酸曲格列汀原料药中有关物质的分离测定。其中：

[0027] 高效液相色谱仪的型号，无特别要求，本发明采用的色谱仪为岛津公司的仪器：LC-20AD，色谱柱：100-5C18(Kromasil，250×4.6mm，5μm)，流动相A为用三乙胺调节pH值至
3.0的0.1％(v/v)高氯酸水溶液∶乙腈＝90∶10(v/v)的混合溶液，流动相B为用三乙胺调节pH值至3.0的0.1％(v/v)高氯酸水溶液∶乙腈＝40∶60(v/v)的混合溶液；按表1进行梯度洗脱；优选流速为1.0ml/min；优选柱温为40℃；优选检测波长为224nm；进样体积10μl。

[0028] <表1>

[0029]

[0030] 本发明采用100-5C18(Kromasil，250×4.6mm，5μm)色谱柱，通过优化流动相梯度洗脱程序，实现对琥珀酸曲格列汀原料药中有关物质，即所述杂质A、N、O、V、W、P和R的有效分离。本发明解决了琥珀酸曲格列汀原料药中有关物质的分离测定问题，从而保证了琥珀酸曲格列汀原料药的质量可控。

[0031] 为了更好地理解和实施，下面结合附图详细说明本发明。

附图说明

[0032] 图1为实施例1空白溶液的高效液相色谱图；

[0033] 图2为实施例1琥珀酸曲格列汀原料药混合杂质对照品高效液相色谱图；

[0034] 图3为实施例2波长197nm空白溶液的高效液相色谱图；

[0035] 图4为实施例2波长197nm琥珀酸曲格列汀原料药混合杂质对照品高效液相色谱图；

[0036] 图5为实施例2波长197nm琥珀酸曲格列汀原料药样品测定高效液相色谱图；

[0037] 图6为实施例2波长224nm空白溶液的高效液相色谱图；

[0038] 图7为实施例2波长224nm琥珀酸曲格列汀原料药混合杂质对照品高效液相色谱图；

[0039] 图8为实施例2波长224nm琥珀酸曲格列汀原料药样品测定高效液相色谱图；

[0040] 图9为实施例2波长235nm空白溶液的高效液相色谱图；

[0041] 图10为实施例2波长235nm琥珀酸曲格列汀原料药混合杂质对照品高效液相色谱图；

[0042] 图11为实施例2波长235nm琥珀酸曲格列汀原料药样品测定高效液相色谱图；

[0043] 图12实施例3波长197nm空白溶液的高效液相色谱图；

[0044] 图13实施例3波长197nm琥珀酸曲格列汀原料药混合杂质对照品高效液相色谱图；

[0045] 图14实施例3波长197nm琥珀酸曲格列汀原料药样品测定高效液相色谱图；

[0046] 图15实施例3波长224nm空白溶液的高效液相色谱图；

[0047] 图16实施例3波长224nm琥珀酸曲格列汀原料药混合杂质对照品高效液相色谱图；

[0048] 图17实施例3波长224nm琥珀酸曲格列汀原料药样品测定高效液相色谱图；

[0049] 图18实施例3波长235nm空白溶液的高效液相色谱图；

[0050] 图19实施例3波长235nm琥珀酸曲格列汀原料药混合杂质对照品高效液相色谱图；

[0051] 图20实施例3波长235nm琥珀酸曲格列汀原料药样品测定高效液相色谱图。

具体实施方式

[0052] 空白溶液：0.1％(v/v)高氯酸水溶液，用三乙胺调节溶液pH值至3.0。

[0053] 杂质对照品储备液：分别精密称取杂质A、N、O、V、W、P和R的对照品约10mg，分别置于200ml容量瓶中，用空白溶液溶解并稀释至刻度，混匀。

[0054] 混合杂质对照品溶液：取琥珀酸曲格列汀供试品约25mg，精密称定，置于50ml容量瓶中，用适量空白溶液溶解后，精密加入杂质A、N、O、V、W、P和R的储备液各0.5ml，用空白溶液定容至刻度，混匀。

[0055] 实施例1

[0056] 仪器与实验条件

[0057] 高效液相色谱仪：岛津LC-20AD

[0058] 色谱柱：100-5C18(Kromasil，250×4.6mm，5μm)

[0059] 流动相A为用三乙胺调节pH值至3.0的0.1％(v/v)高氯酸水溶液∶乙腈＝90∶10(v/v)的混合溶液，流动相B为用三乙胺调节pH值至3.0的0.1％(v/v)高氯酸水溶液∶乙腈＝40∶60(v/v)的混合溶液；按表2梯度洗脱。

[0060] <表2>

[0061]

[0062] 流速为1.0ml/min；

[0063] 柱温40℃；

[0064] 检测波长224nm；

[0065] 进样体积10μl。

[0066] 实验步骤：

[0067] 分别取空白溶液和混合杂质对照品溶液，按上述实验条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见附图1和附图2。

[0068] 图2中为曲格列汀和各个已知杂质对应的色谱图，由图可以看出，曲格列汀与其各个已知杂质能够达到基线分离，符合杂质测定要求。

[0069] 实施例2

[0070] 仪器与实验条件

[0071] 高效液相色谱仪：岛津LC-20AD

[0072] 色谱柱：100-5 C18(Kromasil，250×4.6mm，5μm)

[0073] 流动相A为用三乙胺调节pH值至3.0的0.1％(v/v)高氯酸水溶液∶乙腈＝90∶10(v/v)的混合溶液，流动相B为用三乙胺调节pH值至3.0的0.1％(v/v)高氯酸水溶液∶乙腈＝40∶60(v/v)的混合溶液；按表3线性梯度洗脱。

[0074] <表3>

[0075]

[0076] 流速为1.0ml/min；

[0077] 柱温40℃；

[0078] 检测波长197nm、224nm、235nm；

[0079] 进样体积10μl。

[0080] 实验步骤：

[0081] 取琥珀酸曲格列汀原料药剂样品约25mg(WY022-12批)，置50ml容量瓶中，用空白溶液溶解样品，配制成每1ml含琥珀酸曲格列汀0.5mg的样品溶液。

[0082] 分别取空白溶液、混合杂质对照品溶液和琥珀酸曲格列汀原料药样品溶液，按上述实验条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，附图3～5为波长197nm下的检测图谱，附图6～8为波长224nm下的检测图谱，附图9～11为波长224nm下的检测图谱。各检测波长下，空白图谱无干扰，混合杂质对照品溶液图谱中各杂质峰分离度均大于1.5，可满足分离要求；各样品检测图谱中主峰与相邻杂质峰分离良好。

[0083] 实施例3

[0084] 仪器与实验条件

[0085] 高效液相色谱仪：岛津LC-20AD

[0086] 色谱柱：100-5 C18(Kromasil，250×4.6mm，5μm)

[0087] 流动相A为用三乙胺调节pH值至3.0的0.1％(v/v)高氯酸水溶液∶乙腈＝90∶10(v/v)的混合溶液，流动相B为用三乙胺调节pH值至3.0的0.1％(v/v)高氯酸水溶液∶乙腈＝40∶60(v/v)的混合溶液；按表4线性梯度洗脱。

[0088] <表4>

[0089]

[0090] 流速为0.8ml/min；

[0091] 柱温35℃；

[0092] 检测波长197nm、224nm、235nm；

[0093] 进样体积10μl。

[0094] 实验步骤：

[0095] 取琥珀酸曲格列汀原料药样品约25mg(WY022-12批)，置50ml容量瓶中，用空白溶液溶解样品，配制成每1ml含曲格列汀0.5mg的样品溶液。

[0096] 分别取空白溶液、混合杂质对照品溶液和琥珀酸曲格列汀原料药样品溶液，按上述实验条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，附图12～14为波长197nm下的检测图谱，附图15～17为波长224nm下的检测图谱，附图18～20为波长224nm下的检测图谱。各检测波长下，空白图谱无干扰，混合杂质对照品溶液图谱中各杂质峰分离度均大于1.5，可满足分离要求；各样品检测图谱中主峰与相邻杂质峰分离良好。

[0097] 从实验结果可知，本发明公开的有关物质分析方法，可以将曲格列汀和其他的杂质完全分离，并可以准确测定各个杂质的含量，从而有效地控制琥珀酸曲格列汀的产品质量。

[0098] 本发明并不局限于上述实施方式，如果对本发明的各种改动或变形不脱离本发明的精神和范围，倘若这些改动和变形属于本发明的权利要求和等同技术范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变形。