用于治疗口腔粘膜炎的新型肽和类似物

摘要

在化疗诱发的粘膜炎、放射诱发的粘膜炎、嗜中性白血球减少症感染和结肠炎的模型中得到的临床前数据指示口腔粘膜炎是先天防御调节因子(IDR)肽的希望指示。在粘膜炎的小鼠和仓鼠模型中通过IDR得到的临床前疗效结果表示每三天给药应当能够通过七至十四剂量覆盖粘膜炎“窗口”，这取决于化疗或放射接触的持续时间。IDR还示出在化疗诱发的口腔和胃肠粘膜炎的小鼠模型中的疗效，与先天免疫响应对化疗和/或放射损伤的响应一致。IDR在降低细菌负荷上也是有效的，并在存在或不存在抗生素治疗的情况下改善多种鼠科感染模型中的存活率。

权利要求

1.有效量的由SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:92的氨基酸序列组成的肽或其药学盐、酯或酰胺以及药用载体、稀释剂或赋形剂在制备用于在已经接触损伤量的放射或化疗试剂的受试者中治疗口腔粘膜炎的药物中的用途，所述治疗包括给予患者所述药物。

2.根据权利要求1所述的用途，其中，所述肽是SEQ ID NO:5。

3.根据权利要求1所述的用途，其中，经口、皮下、肌内、静脉内、经皮、鼻内、经肺给予或通过渗透泵给予所述肽。

4.根据权利要求1所述的用途，其中，肽的所述有效量是至少1.5mg/kg。

5.根据权利要求1所述的用途，其中，在放射或化疗试剂给予期间，每三天将所述肽给予所述患者。

6.根据权利要求1所述的用途，其中，将所述肽与局部活性的皮质类固醇或其代谢产物的口服剂型组合给予患者，其中，所述口服剂型有效用于局部或当地治疗所述患者的胃肠道和口腔，且进一步其中，所述患者由于放射或化疗治疗引起的组织损伤表现出炎症的症状。

7.根据权利要求6所述的用途，其中，所述局部活性的皮质类固醇是二丙酸氯地米松。

8.根据权利要求6所述的用途，其中，所述代谢产物是17-单丙酸氯地米松。

9.根据权利要求6所述的用途，其中，所述局部活性的皮质类固醇的有效量是8mg/天。

10.根据权利要求1所述的用途，其中，与有效量的抗生素组合给予所述肽。

11.一种由氨基酸序列SEQ ID NO.92组成的分离肽或其药学盐、酯或酰胺。

12.一种由以下的氨基酸序列组成的分离肽：

RIV(mp2)A-NH2，

其中，mp2＝4-氨基-1-甲基-1H-吡咯-2-羧酸，

13.由SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:92的氨基酸序列组成的肽在制备用于治疗遭受粘膜炎的个体的药物中的用途，所述治疗包括给予所述个体所述药物。

14.根据权利要求13所述的用途，其中，与有效量的抗生素组合给予所述肽。

说明书

用于治疗口腔粘膜炎的新型肽和类似物

[0001] 由奥雷奥拉·多尼尼，高贵林，BC；安尼特·罗泽克，满地宝，BC；杰克逊·李，里士满，BC；约翰·诺思，科莫克斯，BC；以及迈克尔·艾布拉姆斯，西雅图，WA

[0002] 相关申请

[0003] 本申请要求于2013年9月13日提交的美国临时申请号61/877,767的优先权，通过引用将其全部内容结合于此。

背景技术

[0004] 介绍

[0005] 先天免疫系统

[0006] 先天免疫响应是与组织和外部环境之间的屏障，诸如皮肤、口胃粘膜和呼吸道相关的进化上保守的保护性系统。其往往与炎症响应相关且是激活获得性免疫的关键贡献者，提供识别和消灭入侵病原体以及对细胞损伤的响应。先天防御由结合病原体和/或损伤相关分子(PAMP或DAMP)至模式识别受体(包括Toll样受体(TLR))引发。模式识别受体发现在许多细胞类型中和其上，其分布在循环和组织驻留室(resident compartment)两者的整个体内，并作用于提供早期“危险”信号，导致以高度协调的方式释放非特异性抗微生物分子、细胞因子、趋化因子和宿主防御蛋白和肽以及招募免疫细胞(嗜中性粒细胞、巨噬细胞、单核细胞)(Janeway 2002；Beutler 2003；Beutler 2004；Athman 2004；Tosi 2005；Doyle 2006；Foster 2007；Matzinger 2002)。此外，先天免疫系统直接涉及生成对胃肠道中的共生菌群的耐性和胃肠修复以及免疫防御(Santaolalla,2011；Molloy 2012)。

[0007] 粘膜炎

[0008] 粘膜炎(mucositis)是通过抗癌疗法进行的粘膜损伤的临床术语。它可以发生在任何粘膜区域，但是最长见与嘴相关，随后是肠。尽管临床上使用许多粘膜炎等级，但是两个最常使用的级别系统是NCI和WHO等级。

[0009] 已经广泛研究了粘膜炎的机制且近年来将其联系至化疗和/或放射疗法与先天防御系统的相互作用(Sonis 2010)。现在将溃疡病变的细菌感染视为由疗法诱发的细胞死亡引发的异常局部炎症的次要结果，而不是病变的主要原因。粘膜炎在美国每年影响500,000人并在接受化疗的40％患者中发生(Sonis 2010，Curr.Op.)。粘膜炎几乎总是发生在用放射疗法治疗的头颈癌患者中(>80％严重粘膜炎发病率(Elting et al.2008)。粘膜炎常见于经受高剂量化疗和干细胞移植(SCT)的患者中(40-100％发病率)，其中，粘膜炎的发病率和严重度较大程度上取决于用于骨髓细胞清除(myeloablation)的调理方案的性质(Murphy 2007)。在得到确认的化疗药物中，5-FU和伊立替康因引起粘膜炎而特别出名，但是粘膜炎也在较新试剂诸如mTOR抑制剂和激酶抑制剂下发生(Mateus et al.2009；Sankhala et al.2009)。粘膜炎可以非常弱以及可以导致感染、败血症、对肠外营养和麻醉止痛的需要。肠损伤引起严重腹泻。这些症状可以限制剂量和癌症治疗的持续时间，因此导致次佳治疗出现，包括降低的存活率。估计粘膜炎的直接和间接结果增加每位患者约$18K的癌症治疗成本(Nonzee et al.2008)。粘膜炎在开始放射后3-12周，或开始化疗后3-12周发生，并且假设没有进行进一步的化疗或放射治疗，在2-3周后恢复。

[0010] RIVPA(SEQ ID NO.5)是IDR(先天防御调节因子)，一种具有新型机制的新类型的短的、合成肽。设计为模拟近年来发现的天然粘膜防御肽的功能，IDR不具有直接的抗生素活性但是调节宿主响应，增加感染大量细菌革兰氏阴性和革兰氏阳性病原体之后的存活率，以及加速恢复继接触多种包括细菌病原体的试剂、创伤和化疗或放疗之后的组织损伤。

[0011] 基于在化疗诱发的粘膜炎、放射诱发的粘膜炎、嗜中性白血球减少症感染和结肠炎的模型中得到的临床前数据，口腔粘膜炎是RIVPA(SEQ ID NO.5)和其他IDR肽的希望指示。由于化疗输液或放射之后，会很快给出药物，所以RIVPA(SEQ ID NO.5)的IV剂型非常适用于粘膜炎指示。在粘膜炎的小鼠和仓鼠模型中通过RIVPA(SEQ ID NO.5)得到的临床前疗效结果表示每三天的剂量应当能够通过七至十四剂量覆盖粘膜炎“窗口”，这取决于化疗或放射接触的持续时间。

[0012] 对于乳腺癌，接受ACT疗法的约20％患者在他们的第一轮化疗中遭受溃烂性粘膜炎，但是该子集患者中的约70％将在他们的第二轮中具有溃烂性粘膜炎(Sonis 2010)。这代表将受益于RIVPA(SEQ ID NO.5)治疗的“高风险”患者群体。目前没有批准用于缓解该群体中的粘膜炎的合成试剂。

[0013] 经受高剂量化疗和SCT用于治疗血液癌症的患者是感染风险高的免疫抑制群体。在这种治疗中，高剂量的化疗(有时与放射组合)，一种“调理方案”，用于杀死大部分的癌细胞。这些治疗水平将引起致命的骨髓抑制，除非之后给予干细胞(来自骨髓或血液)来允许血细胞重组。自体移植是使用患者自己的干细胞用于该目的，而异体移植使用来自匹配的健康供体的细胞。往往在治疗多发性骨髓瘤(MM)和非霍奇金淋巴瘤(NHL)中，最常使用自体移植。异体移植通常用于治疗白血病，诸如AML。

[0014] 对于SCT，直到最近，多种调理化疗方案都导致相对高比率的口腔粘膜炎(40-100％)，并且在大部分的US中心，将这些患者管理在医院中。与用于头颈癌的放射和/或化学放射疗法相关的口腔粘膜炎是主要问题，其中，85％受试者遭受不同程度的粘膜炎—
42％是级别3或4。

[0015] 急性放射综合征

[0016] 急性放射综合征(ARS)是当全身(或身体大部分)接受高剂量的放射时，通常超过短时间段时，发生的重病。19世纪40年代广岛和长崎原子弹中的许多生还者和首先响应1986年的Chernobyl核电站事故的许多消防员患上ARS(CDC 2013)。

[0017] 接受放射的个体仅在以下情况下患有ARS：

[0018] ·放射剂量高(来自医疗规程的，诸如胸腔X-射线的剂量太低而不会导致ARS)，[0019] ·放射是穿透性的(即，能够到达内脏器官)，

[0020] ·个人的全身或身体大部分接受该剂量，以及

[0021] ·在短时间内接受放射，通常在几分钟内。

[0022] 放射诱发哺乳动物细胞和组织剂量比例的伤口。以小剂量，伤口可能限于躯体和/或生殖细胞系DNA中的点突变，这可能与长期影响，诸如增加的癌症或出生缺陷风险相关。以中间剂量，放射诱发染色体异常，诸如断裂或易位，其再次增加癌症和出生缺陷的风险，且如果足够严重，将导致分裂细胞在接触数小时内快速死亡。以非常高的剂量，放射可以使蛋白质变性，导致细胞和组织的几乎立即死亡。最常受适度剂量的放射影响的具有快速分裂细胞的组织包括骨髓、胃肠道和睾丸。接触放射与以下相关：急性影响，包括皮疹和烧伤、骨髓衰竭，包括贫血、白血细胞数减少、和血小板减少症，以及胃肠毒性，诸如腹泻，和更慢性的影响，诸如肿瘤发展，尤其是肉瘤和白血病，和出生缺陷。

[0023] ARS的第一症状通常是恶心、呕吐和腹泻。这些症状将在接触的数分钟内开始至数天，将持续数分钟到几天，并可以往复。然后个人通常看起来并感觉临时健康，之后他或她将再次生病，食欲不振、疲劳、发烧、恶心、呕吐、腹泻并甚至痉挛和昏迷。这种重病阶段可能持续几小时到几个月。

[0024] 患有ARS的人还具有一些皮肤损伤。这些损伤开始可以在接触之后的几小时内出现并包括肿胀、发痒、皮肤发红和脱发。如同其他症状一样，皮肤可以临时治愈，随后数天或数周之后，继续肿胀、发痒和发红。皮肤完全痊愈可能消耗几周到几年，这取决于个人皮肤接受的放射剂量。

[0025] ARS的胃肠表现称为胃肠急性放射综合征或GI-ARS。GI-ARS包括腹泻、脱水、肠道菌感染，和严重情况下的脓毒性休克以及死亡(Potten1990)。接触放射之后，认为GI-ARS由利氏肠隐窝的基体内的干细胞的直接损伤导致，导致有丝分裂停止和经由凋亡机制的死亡(Potten 1997a，Potten 1997b)。胃肠粘膜的完整性取决于隐窝底部聚集的多能干细胞的快速增殖(Brittan 2002，Gordon 1994，Potten 1997b)。因此，认为干细胞死亡是该过程的关键元素，因为存活的肠干细胞看起来足以重组隐窝-绒毛单元(Potten 1990)。肠上皮屏障的补充取决于类似于造血系统的活性干细胞室。肠隐窝-绒毛前体克隆源(clonogen)细胞对离子放射特别敏感，使得随着放射剂量增加，隐窝-绒毛克隆源细胞不能产生足够的细胞来恢复长绒毛。这导致减弱和减少绒毛高度和最终的功能性无能，造成营养吸收和屏障功能降低、液体和电解液损失以及经由肠屏障的细菌转移(Monti2005，Zhao 2009)。在8灰度(Gy)以上，剂量依赖性的干细胞死亡造成隐窝再生降低，直到再生水平不足以拯救GI粘膜。从小鼠的研究中，放射6天或7天后，上皮的逐渐脱落造成由于GI综合症的死亡。当核分裂能力重新开始时，隐窝的急剧消耗跟着发生，大概是隐窝克隆源的生殖死亡发作的结果(Withers 1971)。在较低剂量的范围内(8-13Gy)，存活的克隆源再生隐窝系统，造成受伤的粘膜完全恢复。以超过14Gy的剂量，大量克隆源损失引起隐窝-绒毛系统坍塌、粘膜脱落和因肠型综合征的动物死亡(Paris 2001；Potten 1990；Withers 1971；Withers 1969)。

[0026] 肠干细胞室不是对离子放射敏感的唯一室。涉及GI道对主要物理攻击的响应的另一个关键因素是肠管的灌注不足。持续的肠道灌注不足是全身炎症响应综合症和多器官衰竭(MOF)的发展中的一个重要激发事件(Moore 1999)。在照射之后的早期阶段观察到增高的肠血管通透性与毛细管渗漏(Cockerham 1984；Eddy 1968，Willoughby 1960)。其他的照射后改变包括小动脉血管的适度扩张和弯曲、血管数目和/或长度的降低，随后是之后发生的出血模式(Eddy 1968)。正在进行关于照射之后的原发性损害是肠上皮干细胞死亡还是内皮细胞死亡的结果的讨论(Kirsch 2010)。不考虑原发性损害，清楚的是照射导致复杂的伤害响应，包括肠上皮细胞死亡、内皮细胞和肠道灌注不足(Williams 2010)。

[0027] 治疗形态，诸如造血生长因子，即粒性白血细胞集群和/或粒性白血细胞-巨噬细胞集群刺激因子(G-CSF和G/M-CSF)和促红细胞生成因子(EPO)、和造血干细胞/骨髓移植可用于减弱由于造血衰竭的死亡率。

[0028] 患有ARS的人的存活机会随着放射剂量增加而降低。接触放射15天内的死亡原因通常是GI道的损伤，而15天后的死亡通常是骨髓伤害的结果。对于生还者，恢复过程可以持续几周到2年(CDC 2013)。

[0029] 急需发展放射缓和剂，因为目前没有批准用于治疗急性放射综合征的缓和剂。RIVPA(SEQ ID NO.5)可能降低ARS中的急性死亡率，能够支持护理努力以及帮助恢复皮肤损伤。

[0030] 感染

[0031] 多种微生物，包括病毒、细菌、真菌和寄生虫，可以导致疾病。微生物细胞不同于不能在自然中独立生活、仅作为多细胞有机体的部分的动物和植物细胞。微生物细胞可以是致病的或非致病的，这部分取决于微生物和宿主的状况。例如，在免疫损害的宿主中，正常无害的细菌可以变成病原体。进入宿主细胞是在细胞内环境中复制的细菌性病原体存活的关键。对于在细胞外位点复制的有机体，没有明确定义细菌进入宿主细胞的重要性。

[0032] 耐药性仍然是正在进行的对抗感染的努力的障碍。例如，青霉素在直到细菌变得有耐性之前在治疗金黄色葡萄球菌中是有效的。贯穿20世纪的下半世纪，发展了新抗生素，诸如万古霉素和甲氧西林，这些成功治愈了金黄色葡萄球菌感染。然而，金黄色葡萄球菌的耐甲氧西林菌株在19世纪70年代演变，并从那时到现在在全世界传播。近年来，金黄色葡萄球菌的耐万古霉素菌株已经浮出水面。

[0033] 随着耐抗微生物药物的威胁增加以及新传染性疾病的出现，存在对于新型治疗化合物的持续需要。期望作用于宿主而不是病原体的治疗剂，因为它们不会激发病原体耐性。具体地，通过先天免疫系统作用于宿主的药物提供了治疗剂的希望来源。存在证据指示先天响应对控制大多数感染有帮助，且还有助于炎症响应。由感染引发的炎症响应已知是疾病发病机理的中心组成部分。增加宿主对感染的耐性同时控制炎症的能力将非常有益于正在进行的针对感染的战斗，包括由耐有机体引起的感染。

[0034] IDR和先天免疫系统

[0035] 先天防御调节因子(IDR)与细胞内信号事件相互作用并调节先天防御响应。然而，最初针对IDR的大量工作集中对抗感染上，同时对抗炎症，而化疗或放射诱发的粘膜炎和伤口的动物模型中的最近医治结果表明IDR在响应超出病原体的广泛诱发损伤试剂的期间可以是有益的。IDR通过选择性修改被PAMP或DAMP激活的身体的先天防御响应治疗和预防感染，而不引发相关的炎症响应(Matzinger 2002)。相同的机制优先于在粘膜炎和伤口医治模型中看到的积极效果，而识别DAMP的信号下游受影响。已经证实RIVPA(SEQ ID NO.5)在人类中是安全的，并且在部分放射诱发和化疗诱发的口腔粘膜炎的动物模型中、化疗诱发对胃肠道的损伤的模型中以及免疫活性和免疫损害宿主中局部以及全身革兰氏阳性和革兰氏阴性感染的模型中是有疗效的。

附图说明

[0036] 图1.RIVPA(SEQ ID NO.5)降低部分放射模型中的严重口腔粘膜炎的持续时间。

[0037] 图2.RIVPA(SEQ ID NO.5)使用优化的剂量方案降低部分放射模型中的严重口腔粘膜炎的持续时间。

[0038] 图3.通过在第7、14和21天的内窥镜检查(A)和第21天的组织病理学(B，C，D)测得，RIVPA(SEQ ID NO.5)降低DSS诱发的结肠炎的严重度。

[0039] 图4.RIVPA(SEQ ID NO.5)降低化疗模型中严重的口腔粘膜炎的持续时间(A)、结肠炎的严重度(B)和体重减轻(C)(第一次研究)。

[0040] 图5.RIVPA(SEQ ID NO.5)降低化疗模型中严重的口腔粘膜炎的持续时间(A)、结肠炎的严重度(B)和体重减轻(C)(第二次研究)。

[0041] 图6.RIVPA(SEQ ID NO.5)以剂量响应方式降低化疗模型中严重的口腔粘膜炎的持续时间(A)、结肠炎的严重度(B)和体重减轻(C)。

[0042] 图7.RIVPA(SEQ ID NO.5)和万古霉素治疗在MRSA IP感染模型中的组合。

[0043] 图8.大腿脓肿MRSA感染模型中嗜中性白血球减少症小鼠中的RIVPA(SEQ ID NO.5)活性。

[0044] 图9.RIVPA(SEQ ID NO.5)在免疫活性小鼠中的MRSA菌血症模型中的剂量响应。

[0045] 图10.RIVPA(SEQ ID NO.5)在缺少T细胞小鼠中的MRSA菌血症模型中的剂量响应。

[0046] 图11.治疗剂RIVPA(SEQ ID NO.5)在金黄色葡萄球菌急性腹膜感染模型中的效率。

[0047] 图12.大腿脓肿金黄色葡萄球菌感染模型中嗜中性白血球减少症小鼠中的RIVPA(SEQ ID NO.5)活性。

[0048] 图13.RIVPA(SEQ ID NO.5)在高(A)和低(B)细菌感染的克雷伯氏杆菌属腹膜感染模型中的疗效。*(A)中不存在柱指示所有小鼠死亡(0％存活率)。

[0049] 图14.RIVPA(SEQ ID NO.5)增强局部MRSA感染的皮肤中的组织损伤的恢复率。48h细菌负荷(A)、96h散布图(B)、48h盲摄影(blindedphotographic)等级(C)、96h盲摄影等级(D)。*(C)和(D)中不存在柱指示所有小鼠等级为零，产生平均(SEM)为0±0的平均和标准误差。

[0050] 图15.在CD-1小鼠中诱发白血球减少症后，循环血细胞白细胞(A)或中性白细胞(B)的恢复中缺少RIVPA(SEQ ID NO.5)。

[0051] 图16.R(tBg)V1KR(tBg)V2(SEQ ID NO.91)降低化疗模型中口腔粘膜炎的严重度。

[0052] 图17.RIV(mp2)A-NH2(SEQ ID NO.92)降低化疗模型中口腔粘膜炎的严重度。

[0053] 图18.R(tBg)V1KR(tBg)V2(SEQ ID NO.91)增强MRSA菌血症模型中的存活率。

[0054] 图19.RIV(mp2)A-NH2(SEQ ID NO.92)增强MRSA菌血症模型中的存活率。

具体实施方式

[0055] 本发明的一个目的是提供由R(tBg)V1KR(tBg)V2的氨基酸序列组成的分离肽，其中，tBg＝叔丁基甘氨酸，且进一步其中，R(tBg)V2通过V1和K之间的酰胺键连接。

[0056] 本发明的一个目的是提供由RIV(mp2)A-NH2的氨基酸序列组成的分离肽，

[0057] 其中，mp2＝4-氨基-1-甲基-1H-吡咯-2-羧酸，

[0058]

[0059] 本发明的再一个目的是提供在已经接触(暴露于，exposed to)损伤量的放射或化疗试剂的受试者中治疗口腔粘膜炎的方法，包括给予患者有效量的以下物质：

[0060] a)包含表1的氨基酸序列的肽；或

[0061] b)包含SEQ ID NO:5、7、10、14、17、18、22、23、24、27、28、31、34、35、63、64、66-69、72、76、77、90、91和92的任意氨基酸序列的肽或其药学盐、酯或酰胺和药用载体、稀释剂或赋形剂。

[0062] 本发明的一个目的是提供在已经接触损伤量的放射或化疗试剂的受试者中治疗口腔粘膜炎的方法，包括给予患者有效量的以下物质：

[0063] a)包含至多7个氨基酸的氨基酸序列的肽，所述肽包含X1X2X3P(SEQ ID NO:56)的氨基酸序列，其中：

[0064] X1是R；

[0065] X2是I或V，其中，X2可以是N-甲基化的；

[0066] X3是I或V，其中，X3可以是N-甲基化的；

[0067] P是脯氨酸或脯氨酸类似物；

[0068] 其中，SEQ ID NO:56，条件是前四个氨基酸在肽的N端，或其药学盐、酯或酰胺和药用载体、稀释剂或赋形剂；或

[0069] b)包含SEQ ID NO:5、7、10、14、17、18、22、23、24、27、28、31、34、35、63、64、66-69、72、76、77、90和92的任意氨基酸序列的肽或其药学盐、酯或酰胺和药用载体、稀释剂或赋形剂。

[0070] 本发明的另一个目的是提供在已经接触损伤量的放射或化疗试剂的受试者中治疗口腔粘膜炎的方法，其中，肽是SEQ ID NO:5或其药学盐、酯或酰胺和药用载体、稀释剂或赋形剂。

[0071] 本发明的另一个目的是提供在已经接触损伤量的放射或化疗试剂的受试者中治疗口腔粘膜炎的方法，其中，经口、肠胃外、经皮、鼻内给予肽。

[0072] 本发明的再一个目的是提供在已经接触损伤量的放射或化疗试剂的受试者中治疗口腔粘膜炎的方法，其中，给予受试者的肽的有效量是至少1mg/kg。在一个优选的实施方式中，给予受试者的肽的有效量是约1.5mg/kg至6mg/kg。

[0073] 本发明的再一个目的是提供在已经接触损伤量的放射或化疗试剂的受试者中治疗口腔粘膜炎的方法，其中，在放射或化疗试剂给予期间每三天将肽给予至受试者。

[0074] 本发明的又一个目的是提供在已经接触损伤量的放射或化疗试剂的受试者中治疗口腔粘膜炎的方法，其中，与局部活性的皮质类固醇(糖皮质激素，corticosteroid)或其代谢产物的口服剂型组合将肽给予至受试者，其中，口服剂型有效用于局部或当地治疗受试者的胃肠道和口腔，且进一步其中，受试者表现出由于放射或化疗治疗引起的组织损伤的炎症的症状。代表性的局部活性的皮质类固醇包括但不限于氯地米松17,21-二丙酸酯、阿氯米松二丙酸酯、布地缩松、22S布地缩松、22R布地缩松、氯地米松-17-单丙酸酯、丙酸氯倍他索、醋酸双氟拉松、氟尼缩松、氟氢缩松、丙酸氟替卡松、丙酸卤倍他索、哈西奈德、糠酸莫米松和曲安奈德。在本发明的一个优选的实施方式中，局部活性的皮质类固醇是二丙酸氯地米松。每个剂型中的局部活性皮质类固醇的有效量可以在患者与患者之间变化，并且本领域技术人员通过熟知的剂量-响应研究可以容易确定。这种有效量一般在约0.1mg/天至约8mg/天之间的范围内，且更通常在约2mg/天至约4mg/天的范围内。

[0075] 本发明的又一个目的是提供缓解受试者中急性放射综合征的胃肠、造血和皮肤影响的方法，所述受试者在短时间段内接受高的、穿透性剂量的放射至它们身体的基本所有部分。

[0076] 本发明的又一个目的是提供在受试者中治疗急性放射综合征的方法，所述受试者在短时间段内接受了高的、穿透性剂量的放射至它们身体的基本所有部分，其中，与局部活性的皮质类固醇或其代谢产物的口服剂型组合将肽给予至受试者，其中，口服剂型有效用于局部或当地治疗受试者的胃肠道和口腔，且进一步其中，受试者表现出由于放射或化疗治疗引起的组织损伤的炎症的症状。代表性的局部活性的皮质类固醇包括但不限于氯地米松17,21-二丙酸酯、阿氯米松二丙酸酯、布地缩松、22S布地缩松、22R布地缩松、氯地米松-17-单丙酸酯、丙酸氯倍他索、醋酸双氟拉松、氟尼缩松、氟氢缩松、丙酸氟替卡松、丙酸卤倍他索、哈西奈德、糠酸莫米松和曲安奈德。在本发明的一个优选的实施方式中，局部活性的皮质类固醇是二丙酸氯地米松。每个剂型中的局部活性皮质类固醇的有效量可以在患者与患者之间变化，并且本领域技术人员通过熟知的剂量-响应研究可以容易确定。这种有效量一般在约0.1mg/天至约8mg/天之间的范围内，且更通常在约2mg/天至约4mg/天的范围内。

[0077] 本发明的又一个目的是提供通过给予受试者具有或包含表1的氨基酸序列的肽或其类似物、衍生物或变体或其显而易见的化学等价物，在受试者中治疗和/或预防感染(例如，微生物感染)的方法。通过实施例，受试者可以具有或有风险患有感染。在一个实施方式中，肽调节受试者中的先天免疫，从而治疗和/或预防受试者中的感染。

[0078] 通过本发明的方法可以治疗和/或预防的示例性感染包括由于细菌(例如革兰氏阳性或革兰氏阴性细菌)的感染、由于真菌的感染、由于寄生虫的感染和由于病毒的感染。在本发明的一个实施方式中，感染是细菌感染(例如，由于大肠杆菌、克雷白氏杆菌、绿脓杆菌、沙门氏菌属、金黄色葡萄球菌、链球菌属或抗万古霉素肠球菌的感染)。在另一个实施方式中，感染是真菌感染(例如，由于霉菌、酵母或高级真菌的感染)。在又一个实施方式中，感染是寄生虫感染(例如，由于单细胞或多细胞寄生虫，包括蓝氏贾第鞭毛虫、隐孢子虫、环孢子虫和龚地弓形虫的感染)。在再一个实施方式中，感染是病毒感染(例如，由于与AIDS相关的病毒感染、禽流感、禽痘、感冒疮；唇疱疹、感冒、胃肠炎、传染性单核白细胞增多、流感、麻疹、腮腺炎、咽炎、肺炎、风疹、SARS和下或上呼吸道感染(例如，呼吸道合胞病毒))。剂型的配制。

[0079] RIVPA(SEQ ID NO.5)的剂型是含水的、无菌处理的、灭菌注射液。每种病毒包含5mL的60mg/mL溶液(300mg的RIVPA(SEQ ID NO.5))。在水中配制RIVPA(SEQ ID NO.5)用于注射，并调节pH至靶值6.0。配制品不包含赋形剂并具有约300mOsm/kg的渗透压。

[0080] 给予途径

[0081] 将RIVPA(SEQ ID NO.5)药物产物稀释在灭菌的盐水中至用于注射的适当浓度，通过接受者的重量和指定的剂量水平以mg/kg基础确定所述浓度。作为25mL静脉(IV)输液给予稀释的RIVPA(SEQ ID NO.5)，每三天一次。

[0082] 实施例

[0083] 肽合成

[0084] 使用固相肽合成技术合成表1中的肽。

[0085] 相对于期望的1mmol肽，三倍摩尔过量称重所有需要的Fmoc保护氨基酸。然后将氨基酸溶解在二甲基甲酰胺(DMF)(7.5mL)中以制备3mMol溶液。考虑树脂的替代品，称重适当量的Rink酰胺MBHA树脂。然后将树脂转移至自动的合成响应器中并用二氯甲烷(DCM)预浸泡15分钟。

[0086] 通过添加DMF中的25％哌啶(30mL)至树脂并混合20分钟脱保护树脂。脱保护树脂之后，通过混合3mMol氨基酸溶液与4mMol 2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU)和8mMol N,N-二异丙基乙胺(DIEPA)进行第一次偶联。在添加至树脂之前，允许预活化溶液5分钟。允许氨基酸偶联45分钟。

[0087] 偶联之后，用DMF和二甲基乙酰胺(DMA)充分冲洗树脂。以上述相同的方式脱保护连接的Fmoc保护氨基酸，并使用相同的偶联方案AA:HBTU:DIEPA连接下一个氨基酸。

[0088] 完成合成之后，通过使用包含97.5％三氟乙酸(TFA)和2.5％水的裂解混合物将肽从树脂中裂解。允许树脂在裂解混合物中漂浮1/2小时。然后使用Buchner漏斗通过重力过滤溶液，并将滤液收集在50ml离心管中。通过用冷冻的二乙醚沉淀来分离肽。离心并倾析出二乙醚之后，用二乙醚再次洗涤粗肽，之后在真空干燥器中干燥2小时。然后将肽溶解在去离子水中(10ml)，在80℃下冻结并冻干。然后将干燥的肽准备好用于HPLC纯化。

[0089] 由于这些肽的亲水性，二乙醚肽的分离不能进行。因此，需要氯仿萃取。蒸发TFA并将得到的肽残留溶解在10％乙酸(15ml)中。通过用氯仿(30ml)洗涤溶液两次，从乙酸肽溶液中除去杂质和净化剂。然后在-80℃下冰冻肽的水溶液并冻干，得到准备用于HPLC纯化的粉末肽。

[0090] 肽+RIxVPA(SEQ ID NO.33)和+RIVPAx(SEQ ID NO.34)各自包含一个N-甲基氨基酸。通过将N-甲基氨基酸、PyBroP和N-羟基苯并三唑*H2O(HOBt)和DIEPA溶液一起组合在包含树脂的RV中，进行这种偶联。允许偶联45分钟之后，然后双倍偶联N-甲基氨基酸以保证偶联完成。观察到继N-甲基氨基酸之后的偶联没有完全完成。因此，使用N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)脲六氟磷酸盐(HATU)代替HBTU，进行这种偶联。这仍然得到通常包含两种杂质的粗肽，总杂质总共占30-40％。在改性的HPLC条件下纯化肽，以从封闭洗脱的杂质中分离最多的纯肽。

[0091] R(tBg)V1KR(tBg)V2(SEQ ID NO.91)是8残基肽树枝状聚合物，对称的支链存在于具有两个功能氨基的第四氨基酸赖氨酸上。用固相肽合成技术，利用二-Fmoc保护的第四氨基酸来促进支链的偶联，使用上述的一般合成技术合成了上述肽。

[0092] 此外，这些肽还可以用溶液相肽合成技术(Tsuda et al.2010)合成且是本领域专家通常已知的。

[0093] 口腔粘膜炎的疗效

[0094] RIVPA(SEQ ID NO.5)和其他IDR调节对组织伤害的先天防御响应，降低由炎症级联反应导致的损伤严重度并加快疾病恢复。在小鼠的化疗诱发的口腔和GI粘膜炎中、在仓鼠的放射诱发的口腔粘膜炎中以及在小鼠的DSS诱发的结肠炎中已经证实了IDR的属性。在这些模型的每个中，认为最初的损伤引发先天防御信号的级联反应，其增加伤害的严重度(Marks 2011；Sonis 2010)。RIVPA(SEQ ID NO.5)和其他IDR抵消信号级联反应，降低产生的伤害的严重度并降低严重的组织损伤的持续时间。

[0095] 在伤害模型中进一步确认了在MRSA菌血症模型中定性的RIVPA(SEQ ID NO.5)和其他IDR的最佳剂量方案，其中，较长的疾病持续时间使得重复剂量更有益。发现每三天25mg/Kg的剂量是最佳的，响应了RIVPA和其他IDR(SEQ ID NO.5)的持续药效影响，而不管其在小鼠循环中快速的PK清除(数分钟内)。

[0096] RIVPA(SEQ ID NO.5)显著降低了仓鼠中放射诱发的口腔粘膜炎的模型中的粘膜炎的严重度和持续时间，特别是当部分放射疗法期间每三天给予时。这些研究确认RIVPA(SEQ ID NO.5)的最佳剂量包括每三天给药且25mg/kg剂量水平是有效的。在该模型中，在第0、1、2、3、6、7、8和9天用7.5Gy放射治疗插入导管的雄性金黄仓鼠，在外翻的左边颊囊引导。在第7和35天之间每两天评价粘膜炎，其中，峰值粘膜炎严重度一般发生在约第19天。在第一次研究中，从第0天开始并继续到第33天(Q3d d0-33)每三天，或在放射疗法的天里(第0、1、2、3、4、7、8、9)或从第6天开始继续到第24天(Q3d d6-24)每三天给予RIVPA(SEQ ID NO.5)。在给予RIVPA(SEQ ID NO.5)和放射两者的天里，放射后2小时给出RIVPA(SEQ ID NO.5)。该研究的结果示于图1中。当在放射期间或放射的天里每三天给予时，RIVPA(SEQ ID NO.5)治疗是最有效的，而从发起放射后6天开始的治疗没有益处(即，Q3d d6-24)。进行后续研究以评价Q3d d0-33、放射的天里、或放射治疗期间每三天(即，第0、3、6和9天)的25mg/kg IV RIVPA(SEQ ID NO.5)的剂量。该研究的结果示于图2中。发现在放射期间每三天的治疗是最佳的，似乎反应RIVPA(SEQ ID NO.5)药效效果的持久性，伴随着由这些小型啮齿类中较少的IV注射剂引起的注射压力的降低。

[0097] 还示出了RIVPA(SEQ ID NO.5)在化疗诱发的口腔和胃肠粘膜炎的小鼠模型中的疗效，与对化疗和/或放射损伤的先天免疫响应的响应一致。在这些研究中，RIVPA(SEQ ID NO.5)给予与小鼠中化疗诱发的粘膜炎的模型中的严重口腔粘膜炎的持续时间的统计学显著降低相关。还观察到倾向于降低的结肠炎，尽管对照组中轻度的GI损伤致使结果不是统计学显著的。在每个研究中，在第-4天和第-2天，将5-氟尿嘧啶(60mg/kg IP)给予至雄性C3H/HeN小鼠。在第0天，将化学烧伤施加至小鼠舌头的下侧，诱发一般在第2天达到峰值的粘膜炎。从第1天至第14天每天记录小鼠舌头粘膜炎的等级，等级≥3代表严重的粘膜炎。而且每天测量体重，并通过在第4天和第7天视频内窥镜检查确定结肠炎严重度。在第一次研究中，或者在化疗之前第-4天立即一次，或者在化疗之后立即在第-4天和第-2天两次或在第-1、2和5天3次给予RIVPA(SEQ ID NO.5)(25mg/kg IV)。在峰值粘膜炎损伤期间的多个时机的RIVPA(SEQ ID NO.5)给予是最有效的(即，在第-1、2和5天)。该研究的结果示于图4中。在第二次研究中，在第-1、2和5天或第-1、1和3天或第0、2和4天给予RIVPA(SEQ ID NO.5)(25mg/kg IV)。该研究的结果示于图5中。严重粘膜炎的持续时间(图5-面(panel)A)、第4天结肠炎的严重度(图5-面B)和平均体重减轻(图5-面C)的统计学显著变化在组之间存在联系。在第三次研究中，在第-1、2和5天或第1和3天给予RIVPA(SEQ ID NO.5)(25或5mg/kg IV，根据指示)。再次，每三天利用RIVPA(SEQ ID NO.5)的剂量方案是最有效的，其中，降低的剂量水平导致降低的疗效。来自该研究的粘膜炎、结肠炎和体重结果分别示于图6的A、B和C中。使用卡方检验分析评估口腔粘膜炎的统计学显著性，并用ANOVA排列评估曲线下面积(AUC)的体重的统计学显著性。还证实了R(tBg)V1KR(tBg)V2(SEQ ID NO.91)和92在化疗诱发的粘膜炎的小鼠模型中的疗效，其中，在诱发粘膜炎4天后评价粘膜炎等级(图16，图
17)。在第-1天和第2天以25mg/kg IV的剂量给予通过R(tBg)V1KR(tBg)V2(SEQ ID NO.91)和RIV(mp2)A-NH2(SEQ ID NO.92)的治疗。

[0098] 对放射损伤的响应疗效

[0099] RIVPA(SEQ ID NO.5)和其他IDR调节对组织伤害的先天防御响应，降低由炎症级联反应引起的损伤严重度并加快疾病恢复。如上述，IDR在口腔粘膜炎模型中可以缓解对放射损伤的响应(图1，图2)。在另一个模型中，评估对放射诱发的粘膜炎的预防(在第0天给予25Gy至小鼠嘴中)，RIVPA(SEQ ID NO.5)(每两天给予5剂量的25mg/kg IV)对疾病进展没有任何显著影响。通过组织病理学分析每单位面积和每单位长度基本的和上基部的凋亡的、有丝分裂的和总的上皮细胞的数目，在第0、2、4、6、8和10天评估小鼠逐渐变薄的舌头。应当注意的是选择使用的放射剂量(25Gy)使得观察到舌头上皮细胞逐渐变薄，但是没有明显的粘膜炎发生。该结果证实缺少RIVPA(SEQ ID NO.5)的潜在增殖，并表明仅在有关途径被明显的组织损伤或病原体入侵刺激时可观察到RIVPA(SEQ ID NO.5)效果。

[0100] 胃肠道中的疗效

[0101] 在DSS诱发的结肠炎模型中确认预先或治疗时给予的IV RIVPA(SEQ ID NO.5)直接保护GI粘膜表面的能力。在该模型中，在研究的第0至5天，作为饮用水中的3％DSS溶液给予DSS至雄性C57BL/6小鼠。在第7、14和21天通过视频内窥镜检查监控结肠炎。从第0至18天(Q3d d0-18)、从第3至18天(Q3d d3-18)或从第6至18天(Q3d d6-18)每三天给予RIVPA(SEQ ID NO.5)(25mg/kg IV)。研究结果示于图3中。第14天，所有RIVPA(SEQ ID NO.5)治疗方案证实了内窥镜结肠炎严重等级的统计学显著降低。然而，第7天等级的降低仅在该时间(即，Q3d d0-18和Q3d d3-18但没有Q3d d6-18)接受至少2剂量的RIVPA(SEQ ID NO.5)的组中观察到。第21天，所有3个治疗组看起来以类似方式响应。第21天的结肠的组织病理学指示一些RIVPA(SEQ ID NO.5)治疗的组统计学上显著降低了水肿和坏死，而其他RIVPA(SEQ ID NO.5)治疗的组具有没有达到统计学显著性的类似响应。使用t测试进行统计分析，且星号指示与对照的统计学显著差值(p<.05)。

[0102] 如上述，IDR还能够降低化疗诱发的粘膜炎模型中的胃肠粘膜炎的持续时间和/或严重度(图4，图5，图6)。

[0103] 受感染动物中的疗效

[0104] RIVPA(SEQ ID NO.5)在存在或不存在抗生素治疗的情况下降低多种鼠科感染模型中的细菌负荷并改善存活率，在25mg/kg IV以上的剂量水平具有一致的疗效并且具有至多5天的持续药效效果。RIVPA(SEQ ID NO.5)疗效在正常的和免疫损害的小鼠两者中与抗生素治疗互补。已经证实了RIVPA(SEQ ID NO.5)针对由革兰氏阳性(金黄色葡萄球菌和MRSA)和革兰氏阴性(克雷伯氏杆菌属、大肠杆菌和类鼻疽伯克氏菌)感染引起的疾病的疗效。

[0105] 金黄色葡萄球菌

[0106] 在与万古霉素治疗组合和作为单独的治疗两者中测试了RIVPA(SEQ ID NO.5)。

[0107] 当与次佳的万古霉素(研究#：D-7-E-11)的抗生素剂量组合给予时，RIVPA(SEQ ID NO.5)治疗增加MRSA腹膜感染模型中的存活率。在接种MRSA(UC6685；8.2×107集群形成单位[cfu])之前的48或72h IV给予RIVPA(SEQ ID NO.5)(50mg/kg)或盐水治疗至雌性CF-1小鼠(N＝10/组)。感染后1和5h皮下(SC)给予万古霉素治疗(3mg/Kg)。仅每天监控一次存活率，持续5天。该研究的结果示于图7中。

[0108] 当自身给予时，RIVPA(SEQ ID NO.5)也是有效的。在MRSA菌血症模型中进行通过IV给予RIVPA(SEQ ID NO.5)的多次研究。RIVPA(SEQ ID NO.5)给予证实在免疫活性的Balb/c小鼠或缺少T细胞的nu/nu小鼠的该模型中的剂量响应，其中，单次剂量50mg/kg相对于盐水对照导致统计学显著提高的存活率。在第一次研究中，在时间0通过IV注射将MRSA(USA300，7.3log10 cfu)给予至雌性Balb/c小鼠的尾静脉。感染前四个小时，将指示剂量水平的单次剂量盐水或RIVPA(SEQ ID NO.5)IV注射至尾静脉。感染后立即一次性口腔给予次佳的抗生素治疗(利奈唑酮，6.25mg/kg)。感染后监控存活率21天。该研究的结果示于图9中。在第二次研究中，在被MRSA(菌株USA300，7.0log10 cfu)感染之前的4h，通过尾静脉将RIVPA(SEQ ID NO.5)(IV)或盐水(IV)给予至雌性nu/nu小鼠。如图10所示，监控存活率14天。使用Kaplan Meier分析相对于盐水对照评估每个治疗组，通过50mg/kg剂量水平发现了存活率的统计学显著差值(即，p≤0.05)。

[0109] 总之，在多种金黄色葡萄球菌感染中使用独立的IV RIVPA(SEQ ID NO.5)治疗的探究证实：

[0110] ·RIVPA(SEQ ID NO.5)的效果在1和50mg/Kg之间在小鼠中是剂量依赖性的，25mg/Kg以上的剂量水平一致证实了疗效(表2；图9和图10)。该剂量水平在伤害模型中可获得的更慢性疾病情况中也是有效的(图1至图6)。

[0111] 表2：通过单次IV RIVPA(SEQ ID NO.5)治疗成功治疗金黄色葡萄群菌感染的速率与剂量水平的函数

[0112]

[0113] (i)成功治疗证实相对于有关盐水对照的存活率的至少20％增加。

[0114] (ii)研究#：TPS-8-B-100，TPS-8-B-150，TPS-8-B-116，D-7-E-9

[0115] (iii)研究#：TPS-8-B-100，TPS-8-B-150，TPS-8-B-120，TPS-8-B-112

[0116] (iv)研究#：TPS-8-B-100，TPS-8-B-150，TPS-8-B-116，TPS-8-B-114，TPS-8-B-120，TPS-8-B-101

[0117] (v)研究#：TPS-8-B-100，TPS-8-B-150

[0118] ·不需要日剂量的RIVPA(SEQ ID NO.5)并且每2天或每3天的剂量是足够的。在伤害模型中可获得的更慢性疾病的情况中，进一步确认每3天的剂量看起来是最佳的(没有示出数据)。

[0119] ·可以至多在MRSA菌血症模型中开始感染后24h给予RIVPA

[0120] (SEQ ID NO.5)，并仍带来存活益处(没有示出数据)。因此其行为是快速的。

[0121] ·根据剂量水平，可以至多在开始感染之前5天给予单次剂量的RIVPA(SEQ ID NO.5)，并仍带来存活益处(没有示出数据)，反映了RIVPA(SEQ ID NO.5)的持续药物代谢动力学影响，尽管它在小鼠循环中快速的药物代谢动力学(PK)清除(数分钟内)。

[0122] ·RIVPA(SEQ ID NO.5)治疗带来的存活益处可以维持至少21天(图9)。

[0123] RIVPAY*(SEQ ID NO.90)和R(tBg)V1KR(tBg)V2(SEQ ID NO.91)(感染之前4h给予5mg/Kg)也改善了MRSA菌血症模型中的存活率(图18，图19)。

[0124] 还证实了当局部给予至感染位点时，RIVPA(SEQ ID NO.5)的局部给予是有效的。在小鼠的革兰氏阳性腹膜感染模型中，RIVPA(SEQ ID NO.5)通过7logs(研究#：D-7-E-14)显著降低了细菌负载。将金黄色葡萄球菌(登录号25923，ATCC，6×107cfu)与5％粘蛋白的腹膜内(IP)注射剂IP给予至雌性CD-1小鼠(N＝8/组)，并在4h之后IP注射RIVPA(SEQ ID NO.5)(9.5mg/kg)。小鼠在感染后24h死亡，并评估腹腔灌洗流体用于细菌计数。该研究的结果示于图11中(每个数据点代表来自个体小鼠的结果-死亡的小鼠被给出了在该研究中得到的任何小鼠中最高的细菌计数并表示为图中开放符号)。

[0125] 当作为局部肌内注射(IM)注射剂给予时，RIVPA(SEQ ID NO.5)还显著降低了金黄色葡萄球菌大腿脓肿感染模型中的嗜中性白血球减少症小鼠中的细菌负载。在用金黄色葡萄球菌(登录号29213，ATCC，约9.5×105cfu)感染之前3天和1天，通过用Cp(100mg/kg)处理致使雌性白鼠(N＝8/组)患嗜中性白血球减少症。在感染之前24h IM给予RIVPA(SEQ ID NO.5)(50mg/kg)，并在感染后1、6和18h SC给予万古霉素(100mg/Kg)。在每个组中感染开始后的24h，评估感染的大腿中存在的细菌数目cfu。该研究的结果示于图12中。

[0126] 克雷伯氏杆菌属

[0127] 当局部(IP)或全身(IV)给予时，RIVPA(SEQ ID NO.5)增加革兰氏阴性腹膜感染模型中的存活率。值得注意的，全身给予看起来良好或比局部给予好。将RIVPA(SEQ ID NO.5)治疗(24mg/kg)IP(感染之前24h或感染后4h)或IV(感染后4h)给予至接种2.8×105cfu(图13-面A)或5.3×102cfu(图13-面B)的克雷白氏杆菌(登录号43816，ATCC)的雌性Balb/c小鼠(N＝8/组)中，并在24h内监控存活率。这种情况中RIVPA(SEQ ID NO.5)的保护效果示于图13中。示出了接受较高的细菌接种物的动物的存活率端点(面A)。感染后24h所有组中所有接受较低接种物的动物存活(面B)，并评估其临床迹象(例如立毛、运行减少、腹部隆起等)；将这些总结为临床等级。

[0128] 皮肤损伤的疗效

[0129] 全身给予RIVPA(SEQ ID NO.5)在皮肤伤害和感染的情况中也是有效的，其加速MRSA皮肤感染模型中的皮肤治愈。除去每个小鼠背部的毛之后1天，开始感染。感染之前4h以及指示的感染后的多个时间给予RIVPA(SEQ ID NO.5)(25mg/kg IV或100mg/kg SC)。将利奈唑酮用作比较，并每天给予12.5mg/kg。第0天(在-1h)，使用异氟烷麻醉每只小鼠，并通过7个连续应用损伤剃掉毛的背部皮肤，并除去外科胶带。然后立即通过局部给予10μL细菌悬浮液感染该病区，递送每只小鼠7.6log10cfu的总挑战。细菌挑战之后通过48h(图14-面A)和96h(图14，面B)钻取皮肤的活组织检查测量细菌负荷来评价疗效，并通过盲、经过职业检验的病理学家在感染后48h(图14-面C)和96h(图14，面D)肉眼评估皮肤数字图像评价疗效。值得注意的，尽管没有确定任何分离的细菌的位置(即，在皮肤表面或在组织内)，但是相对于对照，利奈唑酮或RIVPA(SEQ ID NO.5)在48h或96h的活组织检查中都没有降低细菌负载。不过，创伤愈合清晰地发生。通过使用平均值的t测试比较，假设不等方差，在表格上进行，每个治疗组的平均细菌负荷与它的时间匹配的盐水对照的平均细菌负荷相比是统计学显著的。认为返回p值≤0.05的比较是统计学不同的。

[0130] 健康动物中的安全药理学：

[0131] 使用静脉注射(IV；缓慢丸剂)途径的给予，用RIVPA(SEQ ID NO.5)在小鼠和食蟹猴中进行两个试行的和2个确定的重复剂量的毒性研究。通过LAB Research Inc.,Canada进行所有研究。

[0132] 非GLP试行毒物学研究指示在小鼠中作为IV注射液在30至60秒内给予的单次给予RIVPA(SEQ ID NO.5)的最大耐药量(MTD)是88mg/kg(实际剂量)。在非人类灵长类(NHP)的非GLP试行研究中，在给予90(1只动物)、180(两只动物)和220(1只动物)mg/kg RIVPA(SEQ ID NO.5)剂量期间或之后不久注意到1只或两只动物中轻微的临床迹象(浅/深呼吸、活性降低、部分闭眼和肌肉颤搐)。这些在几分钟内恢复，没有可检测的残余效果。

[0133] 在小鼠和食蟹猴中的GLP研究中也评价了多次每天注射RIVPA(SEQ ID NO.5)的安全性。在小鼠中，IV给出20、60或90mg/kg/天的剂量，持续14天。观察到以高剂量的死亡，主要经历深呼吸和暂停。在给出60mg/Kg的1只动物中也观察到了毁坏性，但是以该剂量的其他动物中没有表现出临床迹象。以20mg/kg没有观察到测试制品相关的死亡或临床迹象。在所有组的生还者中，没有任何器官的毒性或反常生物化学或血液学的证据。以20mg/Kg，持续14天，没有观察到不良效果。

[0134] 以20、80、160mg/kg/天IV给出RIVPA(SEQ ID NO.5)至食蟹猴，持续14天。在前3天的大多数动物中的160mg/kg剂量期间或之后不久继续观察到活性暂时降低和部分闭眼，然后在整个剩余期间零散观察到。在所有情况中，这些临床迹象在几分钟内恢复。没有观察到对于任何其他测量参数或通过显微镜观察的任何组织中的不良效果。以20和80mg/kg/天的剂量给予RIVPA(SEQ ID NO.5)没有导致任何毒性证据。认为80mg/Kg/天的剂量水平是该研究中没有观察到不良效果的水平(NOAEL)。

[0135] 在任何研究中以任何剂量水平没有在中枢神经系统(CNS)上观察到RIVPA(SEQ ID NO.5)的效果，或在小鼠CNS中以20或90mg/kg的剂量水平发现少量或没有发现放射性标记的RIVPA(SEQ ID NO.5)。在RIVPA(SEQ ID NO.5)和一连串的CNS受体及体内离子通道之间没有检测到相互作用。

[0136] 使用20或80mg/kg的单次IV剂量在食蟹猴中的心血管(CV)/肺部研究没有显示心血管效果或心电图(ECG)参数的变化。以20或80mg/kg的剂量没有观察到呼吸效果。在该研究中以80mg/Kg，RIVPA(SEQ ID NO.5)与剂量期间的眼睑暂时下垂和虚脱相关。以220mg/Kg，给予RIVPA(SEQ ID NO.5)与暂时的、严重的临床迹象相关，诸如眼睑暂时下垂、颤抖、虚脱、苍白、痉挛和衰竭。在1只动物中，高剂量引起呼吸速率的明显降低，随后是心搏徐缓、血压过低和死亡。

[0137] 总的说来，由于暂时的临床迹象限于单次研究并且以该剂量水平的98次给予中仅发生2个实例，所以认为NOAEL对于食蟹猴是80mg/Kg/天。

[0138] 没有用RIVPA(SEQ ID NO.5)进行致癌性、诱变性或生殖毒性研究。

[0139] RIVPA(SEQ ID NO.5)对先天防御系统的效果是高度选择性的。与这些发现一致，在小鼠和NHP-14天毒性研究期间没有观察到免疫相关的器官重量、组织病理学、血液学和临床化学的变化。在后者研究中，在NHP中静脉注射RIVPA(SEQ ID NO.5)剂量的14天之后，没有观察到T细胞、B细胞或NK细胞的效果。RIVPA(SEQ ID NO.5)不能促进小鼠或人类正常体内血细胞的增殖，也不促进主要的人类体内白血病细胞的增殖。总起来说，不存在RIVPA(SEQ ID NO.5)引起免疫毒性或非特异性免疫激活的指示。在给予RIVPA(SEQ ID NO.5)之后，没有检测到获得性免疫响应的过度活化或抑制，或与获得性免疫相关的细胞表现型的其他影响。

[0140] 总之，主要的毒理学发现是急性发作的呼吸抑制，伴随着呼吸困难、暂停和活性暂时降低。最严重的情况是，急性毒性导致死亡。当终止给药时，临床迹象所有都是可逆的，并观察到动物在数分钟内恢复，随后没有临床症状或毒理学发现的不利后遗症。非人类灵长类中的心血管/肺部安全药理学研究确认没有心脏毒性或QT延长发生。

[0141] 观察到的呼吸抑制发生在不同物种中的不同剂量水平，并不能通过异速等级预测。具体地，小鼠看起来是最敏感的物种，其中，急性中毒很少发生在60mg/Kg(HED：约5mg/kg)以及常发生在90mg/Kg(HED：约7mg/kg)在NHP(食蟹猴)中相反，急性中毒偶尔发生在160mg/kg(HED：约50mg/kg)而不断发生在240mg/kg(HED：约78mg/kg)。在急性小鼠毒性研究中通过RIVPA(SEQ ID NO.5)的进一步研究指示毒性与进料相关而与分子的特异性结构(氨基酸序列)或靶蛋白结合状况无关，表明急性中毒是由于进料分子的瞬时浓度高，所述进料分子与血容量成比例，而不是单独作用。此外，小鼠中的机械研究指示呼吸抑制是由于膈神经的活性改变。

[0142] 用于白血球减少症和/或感染的安全药理学

[0143] 在非GLP药理学研究中，在CD-1小鼠中诱发白血球减少症后，RIVPA(SEQ ID NO.5)没有改变循环血细胞群的恢复。用Cp(第1天150mg/kg以及第4天100mg/kg)的2次IP注射液诱发白血球减少症，导致第4天得到确认的白血球减少症，其一直持续至约第10天。在第5、7、9和11天，IV给予盐水或RIVPA(SEQ ID NO.5)(20或50mg/kg)。每组中六只动物在第6、8、
10、12和14天的每天中死亡，并评价其的全部血球数和差值。当与载体对照组相比时，在恢复过程中总白细胞和差值白血细胞数的水平或动态都没有改变(图15)。

[0144] 白细胞减少症动物中的感染研究显示RIVPA(SEQ ID NO.5)对抗生素疗效没有干扰。

[0145] 缺少CYP450酶对RIVPA(SEQ ID NO.5)的处理或抑制CYP450酶，RIVPA(SEQ ID NO.5)通过整个身体组织中蛋白酶的主要新陈代谢以及RIVPA(SEQ ID NO.5)清除中通过尿液、排泄物和胆汁排泄扮演的非常小的角色表明药物代谢动力学-药物相互作用将是最小的。

[0146] iv.临床经验

[0147] 在阶段1研究中得到了RIVPA(SEQ ID NO.5)的临床经验。该研究的主要目的是确定在健康志愿者中IV给予之后，单次和重复升高RIVPA(SEQ ID NO.5)可注射溶液的剂量的最大耐药量(MTD)。该研究的次要目的包括在单次和重复升高RIVPA(SEQ ID NO.5)的IV剂量之后，评估RIVPA(SEQ ID NO.5)的剂量限度毒性(DLT)、安全性、PK和药效(PD)曲线。该研究分为2个阶段：单次升高剂量(SAD)阶段和多次升高剂量(MAD)阶段。

[0148] 人类安全性

[0149] 完好耐受RIVPA(SEQ ID NO.5)的单次IV剂量达到测试的最大值(8mg/kg)，以及完好耐受每天的IV剂量达到测试的最大值(6.5mg/kg，持续7天)。不存在剂量限度毒性(DLT)，且在试验的每个阶段都没有达到MTD。研究期间，没有报告死亡或临床显著的、严重的或重型不利事件(AE)。对于药物治疗的和安慰剂对照受试者之间的生命指征测量、临床实验室或心电图(ECG)结果，没有观察到安全性担忧或从基准线的平均值或变化的显著差值。

[0150] 单次升高剂量阶段：

[0151] 对于接受RIVPA(SEQ ID NO.5)的那些受试者，TEAE的发病率不是剂量相关的，且接受RIVPA(SEQ ID NO.5)的受试者与接受安慰剂的受试者相比，事件没有以临床显著高的速率发生。最常报告的TEAE(在接受RIVPA(SEQ ID NO.5)的多于一个受试者中并以高于安慰剂受试者的比例(％)观察到)是研究治疗规程相关的事件(一般紊乱和给予位点病症)，诸如血管穿刺位点血肿、血管穿刺位点反应和血管穿刺位点疼痛。所有血管穿刺相关的事件是轻微的，并且确定与通过QI的研究治疗无关。第二最常报告的TEAE是神经系统紊乱，确切是头痛和头晕；这些事件仅是轻微至适中的。仅通过1个受试者在任何给出的剂量水平(最大为3剂量水平)报告了所有其他TEAE。对于任何研究群组，没有证实自然的临床显著趋势或TEAE的持续时间。

[0152] 多次升高剂量阶段：

[0153] 在2个最高的剂量水平(4.5和6.5mg/kg/天)观察到TEAE的最高发病率。“可能相关”事件的发病率在2个最高剂量水平上也是最高的。然而，由于样品尺寸小(每个群组中4个受试者接受活性治疗)，不可能推断结果一定代表剂量-响应。大部分的TEAE与研究治疗不相关且在严重度上是轻微的，其中仅一个事件报告为适中。对于接受RIVPA(SEQ ID NO.5)的受试者，最常报告的TEAE是一般紊乱和给予位点病症(即，规程相关的事件)，诸如血管穿刺位点血肿、血管穿刺位点响应和血管穿刺位点疼痛。所有血管穿刺相关的事件是轻微的，并且判断其与治疗无关。通过接受RIVPA(SEQ ID NO.5)的3个(15.0％)受试者报告了增加的丙氨酸转氨酶(ALT)和背痛，以及在接受安慰剂的仅一个(10.0％)受试者中观察到这些事件。

[0154] 人类药物代谢动力学

[0155] 人类受试者中IV给予之后以及与动物研究中的发现一致，由于数分钟内的循环，RIVPA(SEQ ID NO.5)清除。在健康志愿者阶段1试验的单次剂量阶段，快速消除了RIVPA(SEQ ID NO.5)，其中，血浆水平在4分钟IV输液之后9min内降低至最大浓度(Cmax)的小于10％。快速下降之后，观察到较慢的消除阶段。开始输液0.15mg/kg至8mg/kg剂量范围之后，最大浓度(Tmax)的平均时间在约4min和约4.8min之间的范围内。最大血浆浓度和总接触水平与剂量成比例，且RIVPA(SEQ ID NO.5)从循环中清除是快速的，与小鼠和NHP经验一致。

[0156] 按照高清除率和短消除半衰期，预期每天注射之后不含发生聚集。在多次剂量阶段1研究中，每天给予RIVPA(SEQ ID NO.5)，持续7天，并且在第5、6、7以及在第8天(第7天开始输液后24h)测量的预剂量浓度在用于所有受试者的量的下限以下(LLOQ)。

[0157] 人类药效学

[0158] 在使用阶段1健康人类志愿者研究中得到的血样的体外探究中，在用LPS体内刺激全血4小时后，量化许多细胞因子和趋化因子分析物。分析物水平中的内部个体变化性大于任何实时变化或对给予RIVPA(SEQ ID NO.5)或安慰剂的响应的任何变化，因此，使用个体预剂量分析物水平自归一化数据，以使每个个体受试者的所有响应标准化(活性比)。RIVPA(SEQ ID NO.5)对分析物活性比(AR)的效果在所有时间中不是恒定的，也不是与剂量响应呈线性关系。不过，在0.15-2mg/kg的剂量范围内，由“抗炎症状况”增加(即，LPS刺激每个个体的血液之后，连同较低的TNFα和IL-1β水平的较高抗炎症TNF RII和IL-1ra水平)的证据。

[0159] b.IDR注射的科学的理论基础

[0160] 粘膜炎

[0161] 粘膜炎与先天防御系统的调节障碍有关系，导致炎症的级联反应，其进一步损伤粘膜并造成明显的粘膜炎(Sonis，2004)。具体地，当化疗或放射治疗引起对内皮和上皮的损伤时，先天防御系统对得到“DAMPS”的响应导致炎症级联反应，其加剧这种损伤。近年来评价动物和人类中对紧密的口腔粘膜炎的基因表达水平的研究提出先天防御系统在疾病中的角色(Sonis，2010)。此外，较低的胃肠道粘膜炎也归因于类似的机制(Bowen，2008)。

[0162] 急性放射综合征

[0163] 急性放射接触与上皮(皮肤)、骨髓(造血综合症)和胃肠道(GI)的损伤相关。此外，随着接触放射增加，死亡变得越来越急剧，限制疗法干预的可能性。接触急性放射之后的早期死亡(<2周)与胃肠道的损伤相关。急性放射引起对肠隐窝的基体内的干细胞的直接损伤，导致有丝分裂停止和它们通过凋亡机制的死亡(Potten 1997a，Potten 1997b)。已经证实这种损伤的恢复和/或长期后遗症与GI微生物和先天免疫修复响应有关(Crawford 2005；Garg,2010)。正在进行的对正常和致癌组织的放射生物学的研究证实先天免疫系统对放射的响应的显著角色(Schaue和McBride,2010，Lauber 2012，Burnette 2012)。此外，示出靶向先天防御系统的激动剂(即，TLR-9激动剂)在GI ARS设置中避免受辐射影响(Saha,2012)。

[0164] 由于放射肿瘤疗法的口腔和GI粘膜炎用作ARS的GI组分的相关替代物。与IDR的功能和粘膜炎中先天防御的角色一致，在广泛组合的粘膜炎损伤模型中证实了IDR的疗效。具体地，化疗和放射诱发的口腔和胃肠粘膜炎两者中的研究显示IDR可以降低粘膜炎的峰值密集度和持续时间，产生严重粘膜炎持续时间的约50％降低(图1、图2、图4、图5、图6、图7、图8、图16、图17)。

[0165] 还与IDR对宿主先天免疫的影响一致，在免疫活性(例如，图9)和免疫损害(白细胞减少或缺少T细胞)的小鼠两者中，用革兰氏阴性和革兰氏阳性(图9、图10、图18、图19)细菌性病原体两者证实了感染模型中的疗效。

[0166] 全身给予IDR并使其影响粘膜表面(例如，口腔粘膜、结肠[图3]以及皮肤，且IDR在全身(图7、图8、图9和图10)和局部感染中是有效的。

[0167] 总之，IDR调节对损伤的先天防御响应(图1至图8、图16、图17)。确切地，RIVPA(SEQ ID NO.5)缓解由放射导致的损伤(图1、图2)，并且是全身活性的，其中，在胃肠道对化疗的响应中观察到显著的保护效果(图3、图4、图5和图6)。此外，IDR在免疫活性和白细胞减少的动物中都是有效的-表明伴随ARS的GI组分发生的造血影响不会削弱RIVPA(SEQ ID NO.5)的疗效。给出了其抗传染功能，RIVPA(SEQ ID NO.5)在ARS的造血综合征(hematopoietic subsyndrome)中也可以是有效的，但是对其的唯一直接评价利用了次佳的腹腔内注射剂量。预期RIVPA(SEQ ID NO.5)在药物代谢动力学上不会干扰伴随的疗法，并且已经证实其不会干扰大部分类别的抗生素(没有示出数据)。RIVPA(SEQ ID NO.5)不会干扰白血球减少症的恢复(图15)。与证实的RIVPA(SEQ ID NO.5)在人类志愿者研究中的安全性组合(参见以上4.a.iv)，这些研究强有力地支持使用RIVPA(SEQ ID NO.5)和其他IDR治疗来响应急性放射接触，从而降低急性死亡率。

[0168] 参考文献

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[0205] 表1

[0206] 除非另外指出，否则所有C端酰胺化＊＊＊＊

[0207]

[0208] 表1

[0209] 除非另外指出，否则所有C端酰胺化＊＊＊＊

[0210]

[0211] ****OH表示肽的自由算形式。Ac指示乙酰化的。O指示鸟氨酸，Cit指示瓜氨酸，[0212] tBG＝叔丁基甘氨酸，mp2＝4-氨基-1-甲基-1H-吡咯-2-羧酸

[0213] x指示NMe骨架(相对酰胺骨架)。