本发明涉及一种用于家畜褥草的杀菌剂、或用于有机废弃物或家畜褥草的堆肥化促进剂，以及使用这些剂作为有效成分对家畜褥草进行杀菌的方法、或促进有机废弃物或家畜褥草的堆肥化的方法，所述用于家畜褥草的杀菌剂、或用于有机废弃物或家畜褥草的堆肥化促进剂含有至少1种凝结芽孢杆菌嗜热菌、或该至少1种凝结芽孢杆菌嗜热菌和至少1种枯草芽孢杆菌嗜中温菌的组合作为有效成分，其中，作为优选的细菌，凝结芽孢杆菌嗜热菌在40～60℃的温度下是有活力的且枯草芽孢杆菌嗜中温菌在30～50℃的温度下是有活力的，该嗜中温菌也对褥草中的有害菌具有杀菌作用。
1.一种对家畜褥草进行杀菌的方法，所述方法包括：将至少1种凝结芽孢杆菌嗜热菌、或该至少1种凝结芽孢杆菌嗜热菌和至少1种枯草芽孢杆菌嗜中温菌的组合添加于家畜褥草，使褥草发酵的工序，其中所述凝结芽孢杆菌嗜热菌是凝结芽孢杆菌CP3425菌株(国际保藏号NITE BP-01693)或凝结芽孢杆菌CP3424菌株(国际保藏号NITE BP-01692)和凝结芽孢杆菌CP3425菌株(国际保藏号NITE BP-01693)的组合。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，凝结芽孢杆菌嗜热菌在40～60℃的温度是有活力的。
3.根据权利要求1所述的方法，其中，枯草芽孢杆菌嗜中温菌在30～50℃的温度是有活力的。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，仅利用微生物的发酵热。
5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，仅利用微生物的发酵热。
6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，仅利用微生物的发酵热。
7.根据权利要求1所述的方法，其中，枯草芽孢杆菌嗜中温菌为枯草芽孢杆菌C-3102菌株(国际保藏号FERM BP-1096)。
8.根据权利要求1所述的方法，其中，凝结芽孢杆菌嗜热菌为凝结芽孢杆菌CP3425菌株(国际保藏号NITE BP-01693)，且枯草芽孢杆菌嗜中温菌为枯草芽孢杆菌C-3102菌株(国际保藏号FERM BP-1096)。
9.一种促进有机废弃物的堆肥化的方法，所述方法包括：将至少1种凝结芽孢杆菌嗜热菌、或该至少1种凝结芽孢杆菌嗜热菌和至少1种枯草芽孢杆菌嗜中温菌的组合添加于有机废弃物，使有机废弃物发酵的工序，其中所述凝结芽孢杆菌嗜热菌是凝结芽孢杆菌CP3425菌株(国际保藏号NITE BP-01693)或凝结芽孢杆菌CP3424菌株(国际保藏号NITE BP-
01692)和凝结芽孢杆菌CP3425菌株(国际保藏号NITE BP-01693)的组合。
10.根据权利要求9所述的方法，其中，凝结芽孢杆菌嗜热菌在40～60℃的温度是有活力的。
11.根据权利要求9所述的方法，其中，枯草芽孢杆菌嗜中温菌在30～50℃的温度是有活力的。
12.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，仅利用微生物的发酵热。
13.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，仅利用微生物的发酵热。
14.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，仅利用微生物的发酵热。
15.根据权利要求9所述的方法，其中，枯草芽孢杆菌嗜中温菌为枯草芽孢杆菌C-3102菌株(国际保藏号FERM BP-1096)。
16.根据权利要求9所述的方法，其中，凝结芽孢杆菌嗜热菌为凝结芽孢杆菌CP3425菌株(国际保藏号NITE BP-01693)，且枯草芽孢杆菌嗜中温菌为枯草芽孢杆菌C-3102菌株(国际保藏号FERM BP-1096)。
17.一种促进家畜褥草的堆肥化的方法，所述方法包括：将至少1种凝结芽孢杆菌嗜热菌、或该至少1种凝结芽孢杆菌嗜热菌和至少1种枯草芽孢杆菌嗜中温菌的组合添加于家畜褥草，使家畜褥草发酵的工序，其中所述凝结芽孢杆菌嗜热菌是凝结芽孢杆菌CP3425菌株(国际保藏号NITE BP-01693)或凝结芽孢杆菌CP3424菌株(国际保藏号NITE BP-01692)和凝结芽孢杆菌CP3425菌株(国际保藏号NITE BP-01693)的组合。
18.根据权利要求17所述的方法，其中，凝结芽孢杆菌嗜热菌在40～60℃的温度是有活力的。
19.根据权利要求17所述的方法，其中，枯草芽孢杆菌嗜中温菌在30～50℃的温度是有活力的。
20.根据权利要求17所述的方法，其特征在于，仅利用微生物的发酵热。
21.根据权利要求18所述的方法，其特征在于，仅利用微生物的发酵热。
22.根据权利要求19所述的方法，其特征在于，仅利用微生物的发酵热。
23.根据权利要求17所述的方法，其中，枯草芽孢杆菌嗜中温菌为枯草芽孢杆菌C-3102菌株(国际保藏号FERM BP-1096)。
24.根据权利要求17所述的方法，其中，凝结芽孢杆菌嗜热菌为凝结芽孢杆菌CP3425菌株(国际保藏号NITE BP-01693)，且枯草芽孢杆菌嗜中温菌为枯草芽孢杆菌C-3102菌株(国际保藏号FERM BP-1096)。
25.一种分离的细菌，所述细菌是凝结芽孢杆菌CP3424菌株(国际保藏号NITE BP-
26.一种分离的细菌，所述细菌是凝结芽孢杆菌CP3425菌株(国际保藏号NITE BP-
27.一种用于家畜褥草的杀菌剂，所述杀菌剂含有至少1种凝结芽孢杆菌嗜热菌、或该至少1种凝结芽孢杆菌嗜热菌和至少1种枯草芽孢杆菌嗜中温菌的组合作为有效成分，其中所述凝结芽孢杆菌嗜热菌是凝结芽孢杆菌CP3425菌株(国际保藏号NITE BP-01693)或凝结芽孢杆菌CP3424菌株(国际保藏号NITE BP-01692)和凝结芽孢杆菌CP3425菌株(国际保藏号NITE BP-01693)的组合。
28.根据权利要求27所述的杀菌剂，其中，凝结芽孢杆菌嗜热菌在40～60℃的温度是有活力的。
29.根据权利要求27所述的杀菌剂，其中，枯草芽孢杆菌嗜中温菌在30～50℃的温度是有活力的。
30.根据权利要求27所述的杀菌剂，其中，枯草芽孢杆菌嗜中温菌为枯草芽孢杆菌C-
3102菌株(国际保藏号FERM BP-1096)。
31.根据权利要求27所述的杀菌剂，其中，凝结芽孢杆菌嗜热菌为凝结芽孢杆菌CP3425菌株(国际保藏号NITE BP-01693)，且枯草芽孢杆菌嗜中温菌为枯草芽孢杆菌C-3102菌株(国际保藏号FERM BP-1096)。
32.一种用于有机废弃物的堆肥化促进剂，所述堆肥化促进剂含有至少1种凝结芽孢杆菌嗜热菌、或该至少1种凝结芽孢杆菌嗜热菌和至少1种枯草芽孢杆菌嗜中温菌的组合作为有效成分，其中所述凝结芽孢杆菌嗜热菌是凝结芽孢杆菌CP3425菌株(国际保藏号NITE BP-01693)或凝结芽孢杆菌CP3424菌株(国际保藏号NITE BP-01692)和凝结芽孢杆菌CP3425菌株(国际保藏号NITE BP-01693)的组合。
33.根据权利要求32所述的堆肥化促进剂，其中，凝结芽孢杆菌嗜热菌在40～60℃的温度是有活力的。
34.根据权利要求32所述的堆肥化促进剂，其中，枯草芽孢杆菌嗜中温菌在30～50℃的温度是有活力的。
35.根据权利要求32所述的堆肥化促进剂，其中，枯草芽孢杆菌嗜中温菌为枯草芽孢杆菌C-3102菌株(国际保藏号FERM BP-1096)。
36.根据权利要求32所述的堆肥化促进剂，其中，凝结芽孢杆菌嗜热菌为凝结芽孢杆菌CP3425菌株(国际保藏号NITE BP-01693)，且枯草芽孢杆菌嗜中温菌为枯草芽孢杆菌C-
3102菌株(国际保藏号FERM BP-1096)。
37.一种用于家畜褥草的堆肥化促进剂，所述堆肥化促进剂含有至少1种凝结芽孢杆菌嗜热菌、或该至少1种凝结芽孢杆菌嗜热菌和至少1种枯草芽孢杆菌嗜中温菌的组合作为有效成分，其中所述凝结芽孢杆菌嗜热菌是凝结芽孢杆菌CP3425菌株(国际保藏号NITE BP-
01693)或凝结芽孢杆菌CP3424菌株(国际保藏号NITE BP-01692)和凝结芽孢杆菌CP3425菌株(国际保藏号NITE BP-01693)的组合。
38.根据权利要求37所述的堆肥化促进剂，其中，凝结芽孢杆菌嗜热菌在40～60℃的温度是有活力的。
39.根据权利要求37所述的堆肥化促进剂，其中，枯草芽孢杆菌嗜中温菌在30～50℃的温度是有活力的。
40.根据权利要求37所述的堆肥化促进剂，其中，枯草芽孢杆菌嗜中温菌为枯草芽孢杆菌C-3102菌株(国际保藏号FERM BP-1096)。
41.根据权利要求37所述的堆肥化促进剂，其中，凝结芽孢杆菌嗜热菌为凝结芽孢杆菌CP3425菌株(国际保藏号NITE BP-01693)，且枯草芽孢杆菌嗜中温菌为枯草芽孢杆菌C-
3102菌株(国际保藏号FERM BP-1096)。
利用微生物对家畜褥草进行杀菌的方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种通过使用特定的凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)嗜热菌、或该嗜热菌和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis；也有时被称为“枯草杆菌”。)嗜中温菌的组合而对家畜褥草进行杀菌的方法。进行了杀菌的褥草可作为家畜用褥草再利用。
[0002] 本发明还涉及一种通过使用特定的凝结芽孢杆菌嗜热菌、或该嗜热菌和枯草芽孢杆菌嗜中温菌的组合而促进有机废弃物或褥草的堆肥化的方法。
背景技术
[0003] 已知芽孢杆菌属细菌可在有机废弃物的堆肥化等的处理等中被利用。
[0004] 例如，在专利文献1中记载了一种对垃圾等有机废弃物或褥草的堆肥化、或褥草的再利用中的有害菌、特别是产生恶臭的细菌或病原菌进行杀菌的有效方法，在该方法中，可使用选自由Bacillus(芽孢杆菌)属、Geobacillus(地芽孢杆菌)属及Aeribacillus(气芽孢杆菌)属构成的组中的至少1种微生物。
[0005] 在专利文献2中，记载了一种有机废弃物的处理方法，其特征在于，使在15～50℃下具有活性的嗜中温菌及在50～70℃下具有活性的嗜热菌存在于有机废弃物中，嗜中温菌为枯草芽孢杆菌C-3102菌株(FERM BP-1096)，嗜热菌为苍白芽孢杆菌TK6004菌株(FERM BP-08597)。
[0006] 专利文献3中公开了：以动物粪便为主要原料，将原料进行搅拌的同时在高温下进行加热而进行杀菌处理，其后添加分解并发酵有机物的菌和抑止家畜的病原菌的有用菌，进行搅拌同时使动物粪便的有机成分进行分解并发酵，同时，使抑止家畜的病原菌的有用菌增殖，其后使其干燥成粉粒状而制造的家畜用褥草。就杀菌而言，记载为使用燃烧器等，在90～110℃下实施1～2小时以上。
[0007] 现有技术文献
[0008] 专利文献
[0009] 专利文献1：日本特开2013-060378号公报
[0010] 专利文献2：日本国专利4503530号公报
[0011] 专利文献3：日本特开2006-238820号公报
发明内容
[0012] 发明所要解决的课题
[0013] 在一次性使用的家畜褥草中，除褥草之外，混入有家畜排泄物(通常为粪尿)。为了将其进行再使用，需要将混入的有害菌进行杀菌、除去水分并设为干燥状态、降低氨水平，要求在短期间内有效地进行处理。本发明的发明人等开发的某些特定的需氧性芽孢杆菌属细菌可在褥草的杀菌或堆肥化中被利用。该方法利用发酵热而进行有害菌的杀菌或水分蒸发，包括重复褥草的堆积形成、翻动(切返し)(氧气供给)、铺开的操作并实施。
[0014] 由于使用微生物的杀菌不需要热源，因此，在成本上是有利的，具有能够将大量的褥草一次性地进行处理的优点。该方法的要点在于，使用能够杀菌的微生物将有害菌减至基本上不产生不良影响的水平。这样的微生物通过发酵热可以使对象的有害菌的菌数为十万分之一以下被认为是大致标准。只要能够发现这种有用的微生物，就可以对褥草进一步有效地进行杀菌。但是，在许多情况下，褥草可使用难分解性的植物性褥草或基于木质的褥草，因此，存在菌的生长出乎意料地难、且不能进行有效的杀菌处理的问题。
[0015] 用于解决课题的技术方案
[0016] 本发明的发明人现通过发现能够对家畜褥草进行有效杀菌的芽孢杆菌属细菌、或这些菌的组合，完成了本发明。
[0017] 本发明包含以下的特征。
[0018] (1)一种对家畜褥草进行杀菌的方法，所述方法包括：将至少1种凝结芽孢杆菌嗜热菌、或该至少1种凝结芽孢杆菌嗜热菌和至少1种枯草芽孢杆菌嗜中温菌的组合添加于家畜褥草，使褥草发酵的工序。
[0019] (2)一种促进有机废弃物或家畜褥草的堆肥化的方法，所述方法包括：将至少1种凝结芽孢杆菌嗜热菌、或该至少1种凝结芽孢杆菌嗜热菌和至少1种枯草芽孢杆菌嗜中温菌的组合添加于有机废弃物或家畜褥草，使有机废弃物或褥草发酵的工序。
[0020] (3)如(1)或(2)所述的方法，其中，凝结芽孢杆菌嗜热菌在至少40～60℃的温度下是有活力的。
[0021] (4)如(1)或(2)所述的方法，其中，枯草芽孢杆菌嗜中温菌在至少30～50℃的温度下是有活力的。
[0022] (5)如(1)～(4)中任一项所述的方法，其特征在于，仅利用微生物的发酵热。
[0023] (6)根据权利要求(1)～(3)及(5)中任一项所述的方法，其中，凝结芽孢杆菌嗜热菌选自由凝结芽孢杆菌CP3424菌株(国际保藏号NITE BP-01692)、凝结芽孢杆菌CP3425菌株(国际保藏号NITE BP-01693)及它们的突变菌株构成的组。
[0024] (7)如(1)、(2)、(4)及(5)中任一项所述的方法，其中，枯草芽孢杆菌嗜中温菌为枯草芽孢杆菌C-3102菌株(国际保藏号FERM BP-1096)或其突变菌株。
[0025] (8)如(1)～(7)中任一项所述的方法，其中，凝结芽孢杆菌嗜热菌为凝结芽孢杆菌CP3425菌株(国际保藏号NITE BP-01693)或其突变菌株，且枯草芽孢杆菌嗜中温菌为枯草芽孢杆菌C-3102菌株(国际保藏号FERM BP-1096)或其突变菌株。
[0026] (9)凝结芽孢杆菌CP3424菌株(国际保藏号NITE BP-01692)或其突变菌株。
[0027] (10)凝结芽孢杆菌CP3425菌株(国际保藏号NITE BP-01693)或其突变菌株。
[0028] (11)一种用于家畜褥草的杀菌剂，所述杀菌剂含有至少1种凝结芽孢杆菌嗜热菌、或该至少1种凝结芽孢杆菌嗜热菌和至少1种枯草芽孢杆菌嗜中温菌的组合作为有效成分。
[0029] (12)如(11)所述的杀菌剂，其中，凝结芽孢杆菌嗜热菌在至少40～60℃的温度下是有活力的。
[0030] (13)如(11)所述的杀菌剂，其中，枯草芽孢杆菌嗜中温菌在至少30～50℃的温度下是有活力的。
[0031] (14)如(11)或(12)所述的杀菌剂，其中，凝结芽孢杆菌嗜热菌选自由凝结芽孢杆菌CP3424菌株(国际保藏号NITE BP-01692)、凝结芽孢杆菌CP3425菌株(国际保藏号NITE BP-01693)及它们的突变菌株构成的组。
[0032] (15)如(11)或(13)所述的杀菌剂，其中，枯草芽孢杆菌嗜中温菌为枯草芽孢杆菌C-3102菌株(国际保藏号FERM BP-1096)或其突变菌株。
[0033] (16)如(11)～(15)中任一项所述的杀菌剂，其中，凝结芽孢杆菌嗜热菌为凝结芽孢杆菌CP3425菌株(国际保藏号NITE BP-01693)或其突变菌株，且枯草芽孢杆菌嗜中温菌为枯草芽孢杆菌C-3102菌株(国际保藏号FERM BP-1096)或其突变菌株。
[0034] (17)一种用于有机废弃物或家畜褥草的堆肥化促进剂，所述堆肥化促进剂含有至少1种凝结芽孢杆菌嗜热菌、或该至少1种凝结芽孢杆菌嗜热菌和至少1种枯草芽孢杆菌嗜中温菌的组合作为有效成分。
[0035] (18)如(17)所述的用于有机废弃物或家畜褥草的堆肥化促进剂，其中，凝结芽孢杆菌嗜热菌在至少40～60℃的温度下是有活力的。
[0036] (19)如(17)所述的用于有机废弃物或家畜褥草的堆肥化促进剂，其中，枯草芽孢杆菌嗜中温菌在至少30～50℃的温度下是有活力的。
[0037] (20)如(17)或(18)所述的堆肥化促进剂，其中，凝结芽孢杆菌嗜热菌选自由凝结芽孢杆菌CP3424菌株(国际保藏号NITE BP-01692)、凝结芽孢杆菌CP3425菌株(国际保藏号NITE BP-01693)及它们的突变菌株构成的组。
[0038] (21)如(17)或(19)所述的堆肥化促进剂，其中，枯草芽孢杆菌嗜中温菌为枯草芽孢杆菌C-3102菌株(国际保藏号FERM BP-1096)或其突变菌株。
[0039] (22)如(17)～(21)中任一项所述的堆肥化促进剂，其中，凝结芽孢杆菌嗜热菌为凝结芽孢杆菌CP3425菌株(国际保藏号NITE BP-01693)或其突变菌株，且枯草芽孢杆菌嗜中温菌为枯草芽孢杆菌C-3102菌株(国际保藏号FERM BP-1096)或其突变菌株。
[0040] (23)一种用于褥草杀菌或促进堆肥化的组合物，所述组合物由凝结芽孢杆菌嗜热菌和枯草芽孢杆菌嗜中温菌构成。
[0041] 根据本发明，具有通过使用特定的芽孢杆菌属细菌的组合可以将家畜褥草有效地杀菌的优点。
[0042] 本说明书包含作为本申请的优先权的基础的美国临时专利申请US61/878,499号(申请日09/16/2013)的说明书和/或附图中所记载的内容。
附图说明
[0043] 图1显示褥草的堆积物。
[0044] 图2显示褥草的堆积物的剖面图，其中显示了温度测定部位。对上部(Up)、下部(Down)、侧部(Lateral)进行测定，所述上部(Up)是离堆积物的顶面20cm的部位、所述下部(Down)是离堆积物的底面10cm的部位、所述侧部(Lateral)是离侧面11.5cm的部位。
[0045] 图1及图2为实施的一种方式，且堆积物的大小可以每次进行调整。
具体实施方式
[0046] 对本发明进一步详细地进行描述。
[0047] 1.用于家畜褥草的杀菌剂及杀菌方法
[0048] 本发明提供一种对家畜褥草进行杀菌的方法，所述方法包括：将至少1种凝结芽孢杆菌嗜热菌、或该至少1种凝结芽孢杆菌嗜热菌和至少1种枯草芽孢杆菌嗜中温菌的组合添加于家畜褥草，使褥草发酵的工序。
[0049] 根据本发明的实施方式，凝结芽孢杆菌嗜热菌在至少40～60℃的温度下是有活力的，由于伴随在褥草中的生长产生的发酵热而对有害菌具有杀菌作用。
[0050] 根据本发明的其它实施方式，枯草芽孢杆菌嗜中温菌在至少30～50℃的温度下是有活力的，由于伴随在褥草中的生长产生的发酵热而对有害菌具有杀菌作用。
[0051] 根据本发明的其它实施方式，其特征在于，在上述工序中，仅利用上述微生物的发酵热。
[0052] 该方法能够杀死对家畜有害的大肠杆菌群、沙门氏菌属细菌、弯曲杆菌属细菌等混入褥草的细菌。根据本发明的发明人实施的试验，为了有效地减少或杀死褥草中的有害菌，需要54℃以上的温度，为了得到杀菌效果，优选维持在60℃以上的温度。
[0053] 凝结芽孢杆菌嗜热菌除在40～60℃的温度下是有活力的性质之外，具有通过发酵热而将含有家畜排泄物(通常为粪尿)的褥草的温度提高至54℃以上的能力，因此，褥草中的有害菌可被有效杀死。凝结芽孢杆菌嗜热菌和/或枯草芽孢杆菌嗜中温菌在例如通过进行家畜氨耐受性试验、之后为褥草的发酵试验而选择。
[0054] 凝结芽孢杆菌嗜热菌的具体实例为凝结芽孢杆菌CP3424菌株(国际保藏号NITE BP-01692)、凝结芽孢杆菌CP3425菌株(国际保藏号NITE BP-01693)及它们的突变菌株。
[0055] 另外，枯草芽孢杆菌嗜中温菌的具体实例为枯草芽孢杆菌C-3102菌株(国际保藏号FERM BP-1096)或其突变菌株。
[0056] 作为优选的细菌菌株的组合，凝结芽孢杆菌嗜热菌为凝结芽孢杆菌CP3425菌株(国际保藏号NITE BP-01693)或其突变菌株，且枯草芽孢杆菌嗜中温菌为枯草芽孢杆菌C-3102菌株(国际保藏号FERM BP-1096)或其突变菌株。
[0057] 凝结芽孢杆菌CP3424菌株(国际保藏号NITE BP-01692)及凝结芽孢杆菌CP3425菌株(国际保藏号NITE BP-01693)在作为国际保藏机关的独立行政法人制品评价技术基盘机构专利微生物保藏中心(邮编292-0818日本国千叶县木更津市上总镰足2-5-8 122号室)在2013年8月13日被保藏，赋予上述的国际保藏号。这些菌株通过将16S rDNA序列与公知的菌种进行比较，这些菌株被鉴定为属于凝结芽孢杆菌。
[0058] 根据本发明，仅通过这些凝结芽孢杆菌嗜热菌菌株的任一种或两种、或通过这些凝结芽孢杆菌菌株的至少1种和枯草芽孢杆菌嗜中温菌的组合，可以对褥草进行杀菌。
[0059] 枯草芽孢杆菌嗜中温菌为被添加于褥草中时、可通过发酵热而将褥草升温至40℃以上的细菌。优选的嗜中温菌为枯草芽孢杆菌C-3102菌株(国际保藏号FERM BP-1096)或与该C-3102菌株实质上具有同等杀菌作用的其突变菌株。C-3102菌株在1985年12月25日在日本国茨城县筑波市东1丁目1番地1(保藏时；日本国茨城县筑波郡谷田部町东1丁目1番地3)的独立行政法人产业技术综合研究所专利生物保藏中心(保藏时；通商产业省工业技术院微生物工业技术研究所)作为保藏号微工研寄第8584号进行原保藏，在1986年6月28日在同机关作为保藏号FERM BP-1096(移交时；微工研条寄第1096号)向国际保藏移交。该保藏菌株目前在独立行政法人制品评价技术基盘机构专利生物保藏中心(邮政编码292-0818日本国千叶县木更津市上总镰足2-5-8 120号室)被保管、管理。该菌株另外还记载于日本特开昭63-209580号公报、日本特开昭62-232343号公报等。
[0060] 在本发明中，可以使用上述的3种保藏菌株的突变菌株，这种突变菌株具有与各亲本菌株同等的杀菌作用。突变菌株可以通过将亲本菌株在亚硝基胍、亚硝基脲、乙磺酸甲酯、它们的衍生物等化学诱变剂的存在下进行培养、或对培养的亲本菌株照射紫外线、γ射线、X射线等高能射线等方法而得到。
[0061] 另外，本发明中所使用的上述的3种保藏菌株或它们的突变菌株可以以芽孢的形式添加。芽孢为在不适于生存的环境下形成的用于保护细菌本身的结构，在适合的环境时，可以萌发成为营养型细菌。
[0062] 将上述的菌株以CP3424菌株+C-3102菌株、或CP3425菌株+C-3102菌株的各组合添加于褥草时，分别与C-3102菌株的单独添加相比，显示高的杀菌效果(参照后述的实施例)。
[0063] 如此，根据本发明，通过将枯草芽孢杆菌嗜中温菌与选自由凝结芽孢杆菌CP3424菌株(国际保藏号NITE BP-01692)、凝结芽孢杆菌CP3425菌株(国际保藏号NITE BP-01693)及它们的突变菌株构成的组中的至少1种凝结芽孢杆菌嗜热菌组合，可以对褥草有效地进行杀菌。
[0064] 将上述的凝结芽孢杆菌嗜热菌、或凝结芽孢杆菌嗜热菌和枯草芽孢杆菌嗜中温菌的组合添加于家畜褥草时，可以将各菌以例如适当的量添加于褥草，但只要可以在褥草内生长、且在褥草中得到杀菌所需要的发酵热，则并不限于该范围。
[0065] 各菌株可以在通常用于培养凝结芽孢杆菌或枯草芽孢杆菌的培养基、培养温度、培养时间等培养条件下需氧培养并增殖。
[0066] 培养基为含有碳源、氮源、微量元素等的液体培养基或固体培养基。具体而言，在培养基中可以含有蛋白胨、聚蛋白胨、肉提取物、酵母提取物、麦芽提取物、玉米浆等有机氮源；硫酸铵、氯化铵等铵盐，硝酸钠等硝酸盐等无机氮源；葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、淀粉、山梨糖醇、麦芽低聚糖、糊精等碳源；镁、钙、钠、钾、铁、锌、铜等的磷酸盐、盐酸盐、硝酸盐、硫酸盐等无机盐等。
[0067] 培养温度可以设为30～60℃，另外，培养基的pH可以设为6.0～8.5。
[0068] 培养时间可以设为10～72小时。
[0069] 可将培养后的菌株作为通过离心分离、膜分离等分离方法进行浓缩而得到的浓缩物、将培养的菌株通过冷冻干燥等干燥法进行干燥而得到的干燥物等形式保存。
[0070] 在对褥草进行杀菌的方法中，在褥草中添加上述的菌株而开始发酵，利用发酵热(发酵温度为约55～80℃)对褥草进行杀菌。杀菌处理所需要的时间没有特别限制，通常为1～2周。
[0071] 各菌的添加可以为同时添加或分别添加的任一种。在分别添加的情况下，优选先添加枯草芽孢杆菌嗜中温菌，确认温度伴随褥草的发酵而上升之后，将凝结芽孢杆菌嗜热菌添加于褥草即可。
[0072] 就菌的添加方式而言，只要可以均匀地添加于褥草，就没有特别限制，例如，可以通过将使用时制备的菌悬浮液散布于褥草、将菌粉末散布于褥草等方法而进行。
[0073] 家畜褥草为鸡、牛、猪、山羊、火鸡、鹌鹑等家畜的褥草，说明书中的“褥草”是指用于家畜的铺的藁草或铺窝的干草，通常由稻草、稻壳、牧草、基于木质的褥草(锯末等)等构成。说明书中，只要没有特殊说明，“褥草”是指使用完的、其中含有家畜的排泄物(通常为粪尿)、存在有害菌的褥草。在有害菌中，如上所描述的含有大肠杆菌群、沙门氏菌属细菌、弯曲杆菌属细菌等，本发明的方法可以杀死这些有害菌，可以进行褥草的再利用。优选的褥草为鸡粪褥草或牛粪褥草。
[0074] 本发明还提供了凝结芽孢杆菌CP3424菌株(国际保藏号NITE BP-01692)或其突变菌株、以及凝结芽孢杆菌CP3425菌株(国际保藏号NITE BP-01693)或其突变菌株。
[0075] 这些菌株或突变菌株，如以上所描述。任一种突变菌株都具有与各亲本菌株实质上同等的褥草有害菌杀菌作用。在说明书中，术语“实质上同等”是指：杀菌效果的水平和/或有害菌的种类可以不完全相同，但几乎相同。
[0076] 本发明还提供一种用于家畜褥草的杀菌剂，所述杀菌剂含有可以在上述的杀菌方法中使用的至少1种凝结芽孢杆菌嗜热菌、或该至少1种凝结芽孢杆菌嗜热菌和至少1种枯草芽孢杆菌嗜中温菌的组合作为有效成分。
[0077] 根据本发明的实施方式，凝结芽孢杆菌嗜热菌在至少40～60℃的温度下是有活力的，由于伴随在褥草中的生长产生的发酵热而对有害菌具有杀菌作用。
[0078] 根据本发明的其它实施方式，枯草芽孢杆菌嗜中温菌在至少30～50℃的温度下是有活力的，由于伴随在褥草中的生长产生的发酵热而对有害菌具有杀菌作用。
[0079] 凝结芽孢杆菌嗜热菌及枯草芽孢杆菌嗜中温菌可以使用上述的选择步骤从家畜褥草中选择。
[0080] 本发明的杀菌剂的具体实例为含有凝结芽孢杆菌嗜热菌的杀菌剂，所述凝结芽孢杆菌嗜热菌为选自由凝结芽孢杆菌CP3424菌株(国际保藏号NITE BP-01692)、凝结芽孢杆菌CP3425菌株(国际保藏号NITE BP-01693)及它们的突变菌株构成的组中的菌株。
[0081] 本发明的杀菌剂的其它实例为含有至少1种凝结芽孢杆菌嗜热菌和枯草芽孢杆菌嗜中温菌作为有效成分的杀菌剂，所述至少1种凝结芽孢杆菌嗜热菌选自由凝结芽孢杆菌CP3424菌株(国际保藏号NITE BP-01692)、凝结芽孢杆菌CP3425菌株(国际保藏号NITE BP-01693)及它们的突变菌株构成的组，所述枯草芽孢杆菌嗜中温菌为枯草芽孢杆菌C-3102菌株(国际保藏号FERM BP-1096)或其突变菌株。
[0082] 优选的杀菌剂的实例为含有凝结芽孢杆菌嗜热菌和枯草芽孢杆菌嗜中温菌作为有效成分的杀菌剂，所述凝结芽孢杆菌嗜热菌为凝结芽孢杆菌CP3425菌株(国际保藏号NITE BP-01693)或其突变菌株，所述枯草芽孢杆菌嗜中温菌为枯草芽孢杆菌C-3102菌株(国际保藏号FERM BP-1096)或其突变菌株。
[0083] 本发明的杀菌剂既可以为上述菌株的混合物的形式，或者也可以为其中各菌株被单独包装的、所谓试剂盒的形式。菌株只要在使用时能够增殖，可以为粉末、颗粒、悬浮液、浓缩物、载体固定化等任意的形式，另外，也可以为固体、液体、半固体、凝胶等任一种状态。
[0084] 本发明的杀菌剂可以为组合物的形式，即，可以为由上述定义的凝结芽孢杆菌嗜热菌和上述定义的枯草芽孢杆菌嗜中温菌构成的用于对褥草进行杀菌的组合物。
[0085] 2.用于有机废弃物或家畜褥草的堆肥化促进剂及堆肥化促进方法
[0086] 本发明还提供一种用于促进有机废弃物或褥草的堆肥化的方法，所述方法包括：将至少1种凝结芽孢杆菌嗜热菌、或该至少1种凝结芽孢杆菌嗜热菌和至少1种枯草芽孢杆菌嗜中温菌的组合添加于有机废弃物或家畜褥草，使有机废弃物或褥草发酵的工序。
[0087] 根据本发明的实施方式，凝结芽孢杆菌嗜热菌在至少40～60℃的温度下是有活力的，具有有机废弃物或家畜褥草的堆肥化促进作用。
[0088] 根据本发明的其它实施方式，枯草芽孢杆菌嗜中温菌在至少30～50℃的温度下是有活力的，具有有机废弃物或家畜褥草的堆肥化促进作用。
[0089] 根据本发明的其它实施方式，其特征在于，在上述工序中，仅利用上述微生物的发酵热。
[0090] 凝结芽孢杆菌嗜热菌及枯草芽孢杆菌嗜中温菌可以通过上述的选择步骤、例如从家畜褥草中选择。
[0091] 凝结芽孢杆菌嗜热菌的具体实例选自由凝结芽孢杆菌CP3424菌株(国际保藏号NITE BP-01692)、凝结芽孢杆菌CP3425菌株(国际保藏号NITE BP-01693)及它们的突变菌株构成的组。
[0092] 枯草芽孢杆菌嗜中温菌的具体实例为枯草芽孢杆菌C-3102菌株(国际保藏号FERM BP-1096)或其突变菌株。
[0093] 作为优选的菌的组合，凝结芽孢杆菌嗜热菌为凝结芽孢杆菌CP3425菌株(国际保藏号NITE BP-01693)或其突变菌株，且枯草芽孢杆菌嗜中温菌为枯草芽孢杆菌C-3102菌株(国际保藏号FERM BP-1096)或其突变菌株。
[0094] 各菌株及剂、褥草等，如上述第1节中所描述，且在该第2节中也应该同样地参照。
[0095] 以上描述的对褥草进行杀菌的方法还可用于不再需要的或计划被丢弃的褥草，或从生产现场、烹饪现场、家庭内被废弃的垃圾等有机废弃物的堆肥化。即，通过在这种褥草或有机废弃物中添加上述菌株的组合，使褥草或有机废弃物发酵，通过利用发酵热而促进有机废弃物或褥草的堆肥化。发酵温度为约55～80℃，因此，在促进发酵的同时，进行水分的蒸发及有害菌的杀菌。在堆肥化时，优选通过将褥草或有机废弃物有时或始终进行搅拌或混合并掺入空气，由此进行有效的发酵和堆肥化。
[0096] 该方法中所添加的菌株的添加时的量设为使菌株增殖并促进堆肥化的量。另外，堆肥化处理中需要的时间没有特别限制，通常为2～3个月。
[0097] 通过上述的方法得到的堆肥可以在植物的栽培等农业领域中使用。
[0098] 本发明还提供一种用于有机废弃物或家畜褥草的堆肥化促进剂，所述堆肥化促进剂含有可在上述的堆肥化促进方法中使用的至少1种凝结芽孢杆菌嗜热菌、或该至少1种凝结芽孢杆菌嗜热菌和至少1种枯草芽孢杆菌嗜中温菌的组合作为有效成分。
[0099] 根据本发明的实施方式，凝结芽孢杆菌嗜热菌在至少40～60℃的温度下是有活力的，具有有机废弃物或家畜褥草的堆肥化促进作用。
[0100] 根据本发明的其它实施方式，枯草芽孢杆菌嗜中温菌在至少30～50℃的温度下是有活力的，具有有机废弃物或家畜褥草的堆肥化促进作用。
[0101] 关于上述剂的形式等，与上述关于杀菌剂中描述的形式相同，具体而言，应该参照上述1节的描述。
[0102] 凝结芽孢杆菌嗜热菌及枯草芽孢杆菌嗜中温菌可以使用上述的选择步骤从家畜褥草中选择。
[0103] 本发明的堆肥化促进剂的具体实例为含有凝结芽孢杆菌嗜热菌的堆肥化促进剂，所述凝结芽孢杆菌嗜热菌为选自由凝结芽孢杆菌CP3424菌株(国际保藏号NITE BP-01692)、凝结芽孢杆菌CP3425菌株(国际保藏号NITE BP-01693)及它们的突变菌株构成的组中的菌株。
[0104] 本发明的堆肥化促进剂的其它实例为含有至少1种凝结芽孢杆菌嗜热菌和枯草芽孢杆菌嗜中温菌作为有效成分的堆肥化促进剂，所述至少1种凝结芽孢杆菌嗜热菌选自由凝结芽孢杆菌CP3424菌株(国际保藏号NITE BP-01692)、凝结芽孢杆菌CP3425菌株(国际保藏号NITE BP-01693)及它们的突变菌株构成的组，所述枯草芽孢杆菌嗜中温菌为枯草芽孢杆菌C-3102菌株(国际保藏号FERM BP-1096)或其突变菌株。
[0105] 优选的堆肥化促进剂的实例为含有为凝结芽孢杆菌CP3425菌株(国际保藏号NITE BP-01693)或其突变菌株的凝结芽孢杆菌嗜热菌、和为枯草芽孢杆菌C-3102菌株(国际保藏号FERM BP-1096)或其突变菌株的枯草芽孢杆菌嗜中温菌作为有效成分的堆肥化促进剂。
[0106] 本发明的堆肥化促进剂可以为组合物的形式，即，可以为由上述定义的凝结芽孢杆菌嗜热菌和上述定义的枯草芽孢杆菌嗜中温菌构成的用于促进褥草堆肥化的组合物。
[0107] 实施例
[0108] 参照以下的实施例，对本发明进一步具体地进行描述，但本发明的技术的范围并不受这些实施例限制。
[0109] 实施例1
[0110] 1.微生物的分离及鉴定
[0111] 将在日本收集的褥草用灭菌水悬浮并稀释，涂抹于标准琼脂培养基或CYC琼脂培养基(ATCC medium 2591)，并在50℃或60℃下进行培养，形成菌落。将分离的菌落纯化，并基于16S rRNA基因序列的同源性进行鉴定。
[0112] 2.利用氨耐受性的筛选
[0113] 将分离、鉴定的菌株的培养的菌体在灭菌水中悬浮并稀释，逐滴添加于添加有铵盐的TS培养基及高铵盐培养基。在50℃下培养约12小时，以含有氨盐的TS培养基及高铵盐培养基中的菌落的大小为基准选择微生物。通过选择具有对氨耐受性的微生物的方法，选择地衣芽孢杆菌群及凝结芽孢杆菌群。
[0114] 3.利用发酵温度的筛选
[0115] 在600kg的含有1×105cfu/g枯草芽孢杆菌C-3102菌株(FERM BP-1096)的用于鸡的饲养的褥草中添加分离得到的地衣芽孢杆菌群及凝结芽孢杆菌群并混合。在4-5天后翻动，进一步发酵4天，观察通过地衣芽孢杆菌群或凝结芽孢杆菌群的添加是否提高发酵时的热量。就热量而言，测定褥草堆积物(图1)的3处(图2)的温度，用式1算出(表1)。
[0116] 式1
[0117]
[0118] 式中，z＝5、T(r)＝54、T(t)＝所测定的温度。
[0119] 表1-1
[0120] 热量(将仅C-3102菌株设为100的相对值)
[0121]
[0122] 表1-2
[0123] 热量(将仅C-3102菌株设为100的相对值)
[0124]
[0125] 表中，上部(Up)、下部(Down)及侧部(Lateral)表示图2所示的位置。
[0126] 其结果，与地衣芽孢杆菌群相比，在加入凝结芽孢杆菌群的情况下观察到了热量的提高。
[0127] 接着，研究构成凝结芽孢杆菌群的各菌株是否实际上有助于褥草的温度上升。在500kg的含有1×105cfu/g枯草芽孢杆菌C-3102菌株(FERM BP-1096)的用于鸡的饲养的褥草中添加作为凝结芽孢杆菌群的构成菌株的凝结芽孢杆菌CP3424菌株及CP3425菌株并混合。在4日后翻动，进一步发酵4天，观察是否提高热量。就热量而言，测定褥草堆积物(图1)的3处(图2)的温度，用式1算出(表2)。
[0128] 表2
[0129] 热量(将仅C-3102菌株设为100的相对值)
[0130]
[0131] 其结果得知：与单独的枯草芽孢杆菌C-3102菌株(FERM BP-1096)相比，在添加凝结芽孢杆菌CP3424菌株及凝结芽孢杆菌CP3425菌株时热量升高。特别是在凝结芽孢杆菌CP3425菌株的上部中，获得枯草芽孢杆菌C-3102菌株的约10倍的热量。由这些情况可以得知，通过凝结芽孢杆菌CP3424菌株及CP3425菌株的添加，促进褥草的温度上升，通过提高热量，可以对褥草有效地进行杀菌。
[0132] 实施例2
[0133] 1.使用脱脂大豆的发酵温度的确认
[0134] 关于枯草芽孢杆菌C-3102菌株(FERM BP-1096)和凝结芽孢杆菌CP3425菌株，将各自芽孢化的菌体在水中悬浮的液体与500g脱脂大豆进行混合。将该混合物填充于泡沫塑料容器并进行培养，测定其中央部分3天间的温度变化。就热量而言，测定泡沫塑料容器的中央部分的温度，用式1算出(表3)。
[0135] 表3
[0136] 热量(将仅C-3102菌株设为100的相对值)
[0137]
[0138] 其结果，与枯草芽孢杆菌C-3102菌株(FERM BP-1096)相比，在添加凝结芽孢杆菌CP3425菌株时热量升高。
[0139] 产业上的可利用性
[0140] 根据本发明，可以对家畜褥草进行有效的杀菌，可以进行褥草的再使用。该情况对畜牧业而言是有用的。
[0141] 保藏物
[0142] 凝结芽孢杆菌CP3424菌株(国际保藏号NITE BP-01692)。
[0143] 凝结芽孢杆菌CP3425菌株(国际保藏号NITE BP-01693)。
[0144] 枯草芽孢杆菌C-3102菌株(国际保藏号FERM BP-1096)。
[0145] 将本说明书中引用的全部的发行物、专利及专利申请直接作为参考引入本说明书中。
