一种井冈霉素和种菌唑的杀菌组合物及其应用

摘要

本发明公开了一种井冈霉素和种菌唑杀菌组合物，井冈霉素与种菌唑的重量比为1～68∶40～1。本发明的杀菌组合物在防治麦类赤霉病、麦类白粉病、麦类锈病、麦类纹枯病、麦类叶枯病、稻瘟病、稻曲病、水稻纹枯病上具有明显的增效作用，尤其在防治麦类赤霉病上增效作用更加明显，能显著降低谷物DON毒素的污染水平。本发明在农业生产中能大幅减少用药量和用药次数、降低生产成本、减少环境污染和农药残留，对增加社会、经济、生态效益将具有重要的现实意义。

权利要求

1.一种井冈霉素和种菌唑的杀菌组合物，其特征在于所述的井冈霉素和种菌唑的重量比为1∶68～40∶1。

2.根据权利要求1所述的一种井冈霉素和种菌唑的杀菌组合物，其特征在于所述的井冈霉素和种菌唑的重量比为1∶34～20∶1。

3.根据权利要求1所述的一种井冈霉素和种菌唑的杀菌组合物，其特征在于所述的井冈霉素和种菌唑的重量比为1∶17～10∶1。

4.根据权利要求1～3任一所述的一种井冈霉素和种菌唑的杀菌组合物，其特征在于所述的井冈霉素和种菌唑的重量百分含量为所述杀菌组合物总含量的2～80％，余量为在农药中可接受的载体和/或助剂。

5.根据权利要求4所述的一种井冈霉素和种菌唑的杀菌组合物，其特征在于所述的井冈霉素和种菌唑的重量百分含量为所述杀菌组合物总含量的10～70％，余量为在农药中可接受的载体和/或助剂。

6.根据权利要求1所述的一种井冈霉素和种菌唑的杀菌组合物，其特征在于所述的杀菌组合物制剂为可湿性粉剂、悬浮剂、微乳剂或水分散粒剂。

7.根据权利要求4所述的一种井冈霉素和种菌唑的杀菌组合物，其特征在于所述的载体为水、高岭土、硅藻土、凹凸棒土或轻质碳酸钙中的一种或几种。

8.根据权利要求4所述的一种井冈霉素和种菌唑的杀菌组合物，其特征在于所述的助剂为乙醇、甲醇、乙二醇、丙二醇、NNO-1、NNO-7、黄原胶、聚乙二醇、甘油、拉开粉、十二烷基硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠、硫酸铵、烷基酚聚氧乙烯醚、月桂醇聚氧乙烯醚、苯乙基酚甲醛树酯聚氧乙基醚、烷基酚聚氧乙烯基醚磷酸酯、脂肪酸聚氧乙烯酯、磺酸聚甲醛缩合物、N-甲基吡咯烷酮、烷基苯磺酸钙、丁基萘磺酸钠、苯甲酸、木质素磺酸钠、羧甲基纤维素、硅酮类化合物、硅酸镁铝或聚乙烯醇中的一种或几种。

9.权利要求1所述的杀菌组合物在防治麦类赤霉病、麦类纹枯病、麦类白粉病、麦类锈病、麦类叶枯病上的应用。

10.权利要求1所述的杀菌组合物在防治稻瘟病、稻曲病、水稻纹枯病上的应用。

说明书

一种井冈霉素和种菌唑的杀菌组合物及其应用

技术领域

[0001] 本发明涉及一种井冈霉素和种菌唑的杀菌组合物及其应用，属于农药技术领域具有增效减量作用的农药组合物，其活性成分为井冈霉素和种菌唑。

背景技术

[0002] 井冈霉素，又称有效霉素，英文通用名：Validamycin或jinggangmycin，是一种放线菌的次生代谢物，含有A、B、C、D、E、F六种类似氨基葡聚糖苷类衍生物。国内外大量研究表明，A组分是井冈霉素的主要活性组分。因此，在本发明中涉及的井冈霉素主要成分为井冈霉素A。井冈霉素在离体条件下表现专一性干扰担子菌中的丝核菌属真菌(Rhizoctonia spp.)顶端菌丝发育。因此，井冈霉素自20世纪70年代被发现以来，一直作为农用抗生素专一性地防治丝核菌引起的植物病害，或与防治其他植物有害生物的农药加工成复配剂兼治丝核菌(Rhizoctonia spp.)病害。这些丝核菌病害主要包括水稻纹枯病、小麦纹枯病和其他作物纹枯病或立枯病。近年，井冈霉素又被发现还可以用于防治一种难以培养的半知菌(Ustilaginoidea virens)引起的稻曲病。

[0003] 种菌唑是一种三唑类麦角甾醇生物合成抑制剂，英文通用名称：Ipconazole，分子式：C18H24ClN3O，化学名称：2-((4-氯苄基)甲基-5-(1-异丙基)-1-(1H-1，2，4-三唑-1-甲基)环戊醇，CAS：125225-28-7，具有内吸、保护和治疗活性，能有效地防治子囊菌、担子菌和半知菌所致病害，通过种子处理由根部向茎叶传导，对赤霉病、叶斑病、枯萎病有很好的防效。

[0004] 在农作物生长过程中，不可避免地会出现一些病害，如不及时进行防治则会对作物产量造成严重损失，但是频繁使用同一种药剂防治这些病害，常导致这些病菌产生抗药性，为了解决这些问题，将不同作用机理的农药进行配比组合，既能有效延缓病原群体抗药性的产生，也对植物病害的防治具有增效减量作用。井冈霉素或有效霉素在离体下只表现对丝核菌具有专化性抗菌活性，对引起赤霉病的镰刀菌没有抗菌活性，因此，几十年来人们一直以丝核菌为对象，研究井冈霉素的选择性机制，发现有效霉素/井冈霉素干扰丝核菌肌醇和海藻糖代谢，从而破坏细胞壁的构造，阻止丝核菌侵染植物，具有良好的保护作用。本发明人在研究镰刀菌DON毒素生物合成途径及调控机制的基础上，开展了抑制DON毒素生物合成的大量化合物筛选。在筛选过程中，令人惊讶地发现井冈霉素在一定处理剂量下，能够强烈抑制小麦赤霉病菌DON毒素生物合成早期途径中的生物化学反应。因此，井冈霉素单剂虽不能有效防控麦类赤霉病，但对镰刀菌的次生代谢产物-DON毒素具有一定的抑制作用，本发明人在国际上首次研究了井冈霉素/有效霉素抑制镰刀菌致病因子DON合成，及其与其他各种杀菌剂的混合物在田间防治麦类赤霉病的增效配方筛选，创造性地发现井冈霉素与种菌唑组合物防治麦类作物赤霉病具有显著增效、降低DON毒素污染和大幅度减少农药用量的有益效果。发明人通过试验还发现本发明在稻瘟病、稻曲病、水稻纹枯病等水稻病害的防治上也具有显著的增效作用，可有效减缓抗药性的产生，减少农药的使用量和使用次数，降低防治成本。

发明内容

[0005] 发明目的：本发明的目的在于提供一种防治麦类赤霉病、降低谷物DON毒素污染的含井冈霉素和种菌唑的杀菌组合物。本发明的另一目的在于提供上述杀菌组合物在防治稻瘟病、稻曲病、水稻纹枯病、麦类真菌病害上的应用。

[0006] 技术方案：为达到上述发明目的，本发明提供了一种井冈霉素和种菌唑的杀菌组合物，其中所述的井冈霉素与种菌唑的重量比为1∶68～40∶1。

[0007] 根据本发明的一种优选实施方式，上述井冈霉素和种菌唑的重量比为1∶34～20∶1。

[0008] 根据本发明的另一种优选实施方式，上述井冈霉素和种菌唑的重量比为1∶17～10∶1。

[0009] 本发明提供的一种井冈霉素和种菌唑的杀菌组合物，所述的井冈霉素和种菌唑的重量百分含量为所述杀菌组合物总含量的2～80％，余量为在农药中可接受的载体和/或助剂。

[0010] 根据本发明的一种优选实施方式，所述的井冈霉素和种菌唑的重量百分含量为所述杀菌组合物总含量的10～70％，余量为在农药中可接受的载体和/或助剂。

[0011] 根据本发明的另一种优选实施方式，所述的杀菌组合物制剂为可湿性粉剂、悬浮剂、微乳剂或水分散粒剂。

[0012] 根据本发明的另一种优选实施方式，所述的载体为水、高岭土、硅藻土、凹凸棒土或轻质碳酸钙中的一种或几种。

[0013] 根据本发明的另一种优选实施方式，所述的助剂为乙醇、甲醇、乙二醇、丙二醇、NNO-1、NNO-7、黄原胶、聚乙二醇、甘油、拉开粉、十二烷基硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠、硫酸铵、烷基酚聚氧乙烯醚、月桂醇聚氧乙烯醚、苯乙基酚甲醛树酯聚氧乙基醚、烷基酚聚氧乙烯基醚磷酸酯、脂肪酸聚氧乙烯酯、磺酸聚甲醛缩合物、N-甲基吡咯烷酮、烷基苯磺酸钙、丁基萘磺酸钠、苯甲酸、木质素磺酸钠、羧甲基纤维素、硅酮类化合物、硅酸镁铝或聚乙烯醇中的一种或几种。

[0014] 根据本发明的另一种优选实施方式，所述的杀菌组合物在防治麦类赤霉病、麦类纹枯病、麦类白粉病、麦类锈病、麦类叶枯病上的应用。

[0015] 根据本发明的另一种优选实施方式，所述的杀菌组合物在防治稻瘟病、稻曲病、水稻纹枯病上的应用。

[0016] 有益效果：发明人通过对植物病害的发生、防治药剂使用技术、作用机制和抗药性的研究，为本发明提供了理论和技术基础。本发明通过利用井冈霉素与种菌唑进行复配筛选，其目的是获得增效配方、减少农药用量和使用次数，降低生产成本、提高防效、治理抗药性。

[0017] 本发明经室内和田间药效试验，其结果表明，井冈霉素与种菌唑理化性质互容，使用安全，药效显著。与其他农药相比具有如下优点：

[0018] 1.本发明的杀菌组合物杀菌谱广，通过对井冈霉素与种菌唑的组合扩大了应用靶标。既能有效防治麦类赤霉病、白粉病、锈病、纹枯病和叶枯病，也能防治稻瘟病、稻曲病和水稻纹枯病，减少了病害对农作物生产造成的为害，提高了农产品的产量和品质。

[0019] 2.本发明的杀菌组合物防治效果显著，在防治麦类赤霉病、白粉病、锈病、纹枯病、叶枯病和稻瘟病、稻曲病、水稻纹枯病上具有显著的增效作用，降低了农药使用量，节省了农药使用成本，增加了社会、经济和生态效益。

[0020] 3.本发明的杀菌组合物中井冈霉素和种菌唑分别为不同作用机理的杀菌剂，与过去防治麦类赤霉病的主流药剂多菌灵无交互抗药性。更为重要的是，该杀菌组合物能降低谷物DON毒素污染，降低了毒素污染给人类粮食和食品安全带来的风险。

[0021] 4.本发明的杀菌组合物属于复配农药，具有相容性、高效、低毒、低残留、速效性好、持效期长、对环境友好等优点。

[0022] 5.该杀菌组合物是生物与化学农药复配组合，能降低病原菌对化学药剂的抗药性风险水平，有利于病原菌敏感度的保持，同时能延缓病菌对配方中单剂出现抗药性。

具体实施方式

[0023] 下面通过具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不受以下实施例所限定，各组分的加入按重量份数计量。

[0024] 实施例1：16％井冈霉素·种菌唑可湿性粉剂

[0025] 井冈霉素8％、种菌唑8％、NNO-1 1％、拉开粉3％、十二烷基苯磺酸钠2％、凹凸棒土30％、其余为轻质碳酸钙补充至100％。将上述组分充分混匀，经砂磨机粉碎和过300目筛，得到16％井冈霉素·种菌唑可湿性粉剂。

[0026] 实施例2：60％井冈霉素·种菌唑可湿性粉剂

[0027] 井冈霉素40％、种菌唑20％、NNO-1 1％、拉开粉3％、十二烷基苯磺酸钠2％、凹凸棒土30％、其余为轻质碳酸钙补充至100％。将上述组分充分混匀，经砂磨机粉碎和过300目筛，得到60％井冈霉素·种菌唑可湿性粉剂。

[0028] 实施例3：42％井冈霉素·种菌唑可湿性粉剂

[0029] 井冈霉素30％、种菌唑12％、NNO-1 1％、拉开粉3％、十二烷基苯磺酸钠2％、凹凸棒土30％、其余为轻质碳酸钙补充至100％。将上述组分充分混匀，经砂磨机粉碎和过300目筛，得到42％井冈霉素·种菌唑可湿性粉剂。

[0030] 实施例4：10％井冈霉素·种菌唑悬浮剂

[0031] 井冈霉素4％、种菌唑6％、乙二醇4％、丙二醇4％、NNO-1 1％、NNO-7 1％分散剂、黄原胶粘着剂0.5％、聚乙二醇1％，其余为水补充至100％，将上述组分充分混匀，经砂磨机粉碎至90％的药剂颗粒直径≤5μm，得到10％井冈霉素·种菌唑悬浮剂。

[0032] 实施例5：48％井冈霉素·种菌唑悬浮剂

[0033] 井冈霉素36％、种菌唑12％、乙二醇4％、丙二醇4％、NNO-1 1％、NNO-7 1％分散剂、黄原胶粘着剂0.5％、聚乙二醇1％，其余为水补充至100％，将上述组分充分混匀，经砂磨机粉碎至90％的药剂颗粒直径≤5μm，得到48％井冈霉素·种菌唑悬浮剂。

[0034] 实施例6：24％井冈霉素·种菌唑微浮剂

[0035] 井冈霉素4％、种菌唑20％、N-甲基吡咯烷酮1％、烷基苯磺酸钙2％、苯乙基酚甲醛树酯聚氧乙基醚2％、乙二醇1.5％、硅酮类化合物0.8％、黄原胶1％、硅酸镁铝1％，其余为水补充至100％。

[0036] 将上述比例的井冈霉素、种菌唑、溶剂N-甲基吡咯烷酮、乳化剂烷基苯磺酸钙和苯乙基酚甲醛树酯聚氧乙基醚加在一起，溶解成均匀油相；将水、抗冻剂乙二醇、增稠剂黄原胶、消泡剂硅酮类化合物混合在一起，成均一水相。在高速搅拌下，将水相加入油相，即可制得24％井冈霉素·种菌唑微浮剂。

[0037] 实施例7：20％井冈霉素·种菌唑水分散粒剂

[0038] 井冈霉素4％、种菌唑16％、硫酸铵10％、烷基酚聚氧乙烯醚2.5％、十二烷基苯磺酸钠2.5％、脂肪酸聚氧乙烯酯3.5％，其余为轻质碳酸钙补充至100％，将上述组分充分混匀，经过粉碎制备母粉，将母粉与适量水溶液混合均匀，高速剪切并砂磨机研磨，然后进行流化床造粒，干燥、过筛，即可制得20％井冈霉素·种菌唑水分散粒剂。

[0039] 实施例8：30％井冈霉素·种菌唑水分散粒剂

[0040] 井冈霉素10％、种菌唑20％、硫酸铵10％、烷基酚聚氧乙烯醚2.5％、十二烷基苯磺酸钠2.5％、脂肪酸聚氧乙烯酯3.5％，其余为轻质碳酸钙补充至100％，将上述组分充分混匀，经过粉碎制备母粉，将母粉与适量水溶液混合均匀，高速剪切并砂磨机研磨，然后进行流化床造粒，干燥、过筛，即可制得30％井冈霉素·种菌唑水分散粒剂。

[0041] 实验例1：井冈霉素在离体条件下对种菌唑抑制镰刀菌菌丝生长的影响[0042] 本发明采用杀菌剂生物测定的常规方法，将井冈霉素和种菌唑分别用灭菌水及甲醇配制成2mg/mL母液，对照药剂多菌灵原药溶于0.1M/L盐酸溶液、氰烯菌酯溶于甲醇，制成2mg/mL母液。在马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)冷却至温度约45℃时，分别加入井冈霉素和种菌唑至设计浓度(见表1)，然后倒入培养皿制成不同药剂处理的平板，每处理3皿重复，接种引起麦类赤霉病的常见禾谷镰刀菌Fusarium graminearum和亚洲镰刀菌Fusarium asiaticum野生敏感菌株(简称敏感菌株)及多菌灵和氰烯菌酯抗性菌株(简称抗药性菌株)的菌丝块，在温度25℃下培养4天，十字交叉法量取菌落直径，计算不同处理抑制病菌生长
50％的有效中剂量(EC50)，并比较抗菌活性。

[0043] 试验结果表明，井冈霉素在离体下无论是单剂还是与种菌唑混用对引起赤霉病的这两种镰刀菌敏感菌株和抗药性菌株的生长基本没有抑制活性，只有井冈霉素高达50μg/mL浓度时，对两种镰刀菌生长才有6.5％～7.8％的抑制作用。但种菌唑对两种镰刀菌的敏感菌株的菌丝生长具有相似的强烈抑制作用，0.1μg/mL种菌唑处理对菌丝生长的抑制作用即可超过50％。井冈霉素在离体条件下对种菌唑抑制菌丝生长没有增效作用(表1)。

[0044] 根据亚洲镰刀菌和禾谷镰刀菌野生敏感菌株及多菌灵和氰烯菌酯抗性菌株在种菌唑不同剂量处理下的生长抑制率，计算种菌唑对不同药敏性菌株生长抑制的有效中剂量(EC50)，结果发现敏感菌株、多菌灵抗性菌株、氰烯菌酯抗性菌株对种菌唑的敏感性相似，EC50为0.89～0.11μg/mL，试验结果列于表2中。

[0045] 以药剂EC50为参数，比较不同杀菌剂抑制镰刀菌生长的活性，发现种菌唑的活性约是多菌灵对敏感菌株活性(对两种镰刀菌EC50均为0.45μg/mL)的4.5倍，氰烯菌酯对敏感菌株活性(对两种镰刀菌EC50均为0.165μg/mL)的1.5倍。该结果说明种菌唑具有强烈抑制野生敏感菌株和多菌灵及氰烯菌酯抗性镰刀菌生长的活性，利于降低侵染谷物的DON毒素污染水平和防治抗药性病害。

[0046] 表1：井冈霉素和种菌唑离体条件下对两种镰刀菌敏感菌株生长的影响[0047]

[0048]

[0049] *F.g和F.a分别是Fusarium graminearum和Fusarium asiaticum的缩写，下同。

[0050] 表2：种菌唑对两种镰刀菌敏感及多菌灵和氰烯菌酯抗性菌株的生长抑制活性[0051]

[0052] 实验例2：井冈霉素对镰刀菌毒素生物合成能力的抑制活性

[0053] 由于禾谷镰刀菌与亚洲镰刀菌对井冈霉素和种菌唑的药敏性相同，发明人选用毒素合成能力(单位菌量合成DON重量，μgDON/g干重菌丝)较强的亚洲镰刀菌Fusarium asiaticum作为进一步研究毒素合成的材料。将引起麦类赤霉病的多菌灵抗性亚洲镰刀菌接种于灭菌的3％绿豆汤中，在温度25℃和12/24小时散射光下摇培3d，离心收集分生孢子。将分生孢子按最终为102/mL接种于含井冈霉素不同剂量的GYEP培养液中在温度25℃和避光下摇培，在7d和14d后，过滤培养物，分别检测培养液中的毒素含量和测量菌丝干重，分析毒素合成能力(单位重菌丝产生的毒素量)。

[0054] 毒素测定方法：培养滤液分别与乙酸乙酯等体积萃取2次，合并萃取液后减压蒸馏干燥，用1mL乙腈溶解转移到新离心管，再蒸馏干燥，-20℃保存待测。检测时加入100μLTMS衍生化试剂(TMSI∶TMCS＝100∶1)，混匀10min后加入1mL超纯水，震荡分层后吸取上清液加到GC进样瓶，用装有电子捕获监测器的气相色谱(GC-ECD)进行毒素含量检测。以Sigma的DON试剂为标样，建立标准曲线，计算培养液中的DON含量，包括DON、3ADON和15ADON。同时将滤出菌丝在80℃下烘至恒重，称量菌丝干重。此外，在摇培3d时取菌丝检测毒素合成关键基因Tri5的表达水平。

[0055] 从实验结果(表3)中发现赤霉病菌的菌丝生长量随着培养时间延长而增加，但在含有不同剂量井冈霉素处理的培养基中摇培，菌丝生长量与空白对照没有显著变化。说明井冈霉素对液体培养的赤霉病菌的生长没有抑制作用，与在PDA平板上的线性生长速率测定结果一致。但是，首次发现单位菌丝重量合成DON毒素的量(μg DON/g干重菌丝)则随井冈霉素处理剂量增加而显著减少。而且井冈霉素对DON合成的抑制作用随培养时间延长而下降，尤其是低浓度处理下降幅度更大。说明井冈霉素随着试验时间的延长可能发生降解，从而降低了对毒素生物合成的抑制作用。

[0056] 根据处理3d时的毒素合成基因表达水平分析，创造性地发现井冈霉素在离体条件下虽然对镰刀菌的生长及菌丝形态没有不良影响，但在很低处理剂量下能够强烈抑制DON毒素合成关键基因tri5表达，降低菌体毒素生物合成能力，减少DON生物合成，其试验结果列于表4中。

[0057] 表3：井冈霉素抑制镰刀菌DON毒素合成能力的作用

[0058]

[0059] 表4：井冈霉素对镰刀菌DON合成基因Tri5基因表达的影响

[0060]井冈霉素处理剂量(μg/ml) Tri5基因相对表达水平 Tri5基因相对表达水平抑制率(％)
0 1 /
1 0.41 59
10 0.34 66
100 0.16 84
1000 0.13 87
10000 0.10 90

[0061] 实验例3：种菌唑对井冈霉素抑制镰刀菌DON毒素生物合成能力的增效作用[0062] 种菌唑处理能够破坏赤霉病菌的细胞膜透性，抑制菌丝生长。种菌唑与井冈霉素组合物处理时，能够增加病菌对井冈霉素的吸收利用。在实验例2中测定井冈霉素抑制镰刀菌DON毒素生物合成的同时，测定了井冈霉素在存在0.1μg/mL种菌唑的情况下，培养7d和14d时对Fusarium asiaticum的DON毒素生物合成能力的抑制作用，分析种菌唑对井冈霉素抑制DON毒素生物合成的增效作用。DON检测方法与实验例2相同。

[0063] 从实验例1和实验例2中已知0.1μg/ml种菌唑单独处理，对赤霉病菌的菌丝生长具有高于50％的抑制率。从表5结果可以看出，0.1μg/ml种菌唑处理7d和14d时对镰刀菌毒素的生物合成能力与空白对照的毒素合成能力相比没有显著的抑制作用，说明种菌唑只有菌丝生长抑制活性，没有毒素合成能力的抑制作用。但在井冈霉素各处理浓度下存在0.1μg/ml种菌唑时，对DON毒素生物合成能力的抑制作用大幅度提高。而且随着培养时间延长，井冈霉素对毒素合成能力的抑制作用下降速度显著低于没有种菌唑的对照处理，尤其对低浓度井冈霉素处理的增效及延长作用时间更加明显。基于同时实验的表3结果，计算存在种菌唑0.10μg/mL剂量情况下，对井冈霉素处理7d和14d时抑制镰刀菌毒素生物合成的增效作用，结果列于表5中。这些结果说明：(1)井冈霉素具有强烈降低镰刀菌DON毒素生物合成能力的作用，种菌唑则没有这种作用；(2)种菌唑对井冈霉素抑制镰刀菌毒素生物合成具有明显的增效作用，并随井冈霉素处理剂量降低，增效作用增强；(3)种菌唑能够延长井冈霉素对镰刀菌毒素合成的抑制作用时间，增效作用随处理时间延长而增强。

[0064] 表5：0.1μg/mL种菌唑对井冈霉素抑制小麦赤霉病菌DON毒素合成的增效作用[0065]

[0066] *增效系数计算方法：存在0.1μg/ml种菌唑时，井冈霉素对毒素合成的抑制率除以井冈霉素单独处理相应剂量的毒素合成抑制率(表3)，乘以100。

[0067] 应用实施例1：井冈霉素与种菌唑组合物防治小麦赤霉病的增效作用及降低毒素作用

[0068] 将实施例1～8的杀菌组合物制剂进行小麦赤霉病的田间防控药效试验。试验地安排在小麦赤霉病菌对多菌灵已经产生抗药性的江苏淮安白马湖农场。小麦品种分别为淮麦22号。2012年11月落谷播种，田间管理按常规进行，未使用其他农药。2013年5月2日即小麦扬花初期采用农稼乐16L背负式电动喷雾器进行第一次施药，根据天气预报5月9日(灌浆初期)进行第二次施药。各小区面积为50平方米，4个重复，用水量为50kg/亩，空白对照不施药。同时设50％多菌灵可湿性粉剂每亩用80克处理作为对照药剂。2013年5月26日进行病情调查，防治效果见表6。40％井冈霉素可湿性粉剂为浙江省桐庐汇丰生物科技有限公司提供，40％种菌唑可湿性粉剂为本实验室加工制成。按照农业部颁发的杀菌剂田间药效试验准则行业标准规定的相应方法，在乳熟期调查小麦赤霉病发生情况，根据各处理防治赤霉病的实际效果，计算组合物的增效作用。按照Abbott(Abbott，1925)方法计算组合物的理论防效〔E＝X+(100-X)Y/100，其中E为理论防效，X为井冈霉素单剂防效，Y为种菌唑单剂防效〕及增效系数(组合物应用的实际防效除以理论防效×100)。

[0069] 毒素测定方法：在蜡熟期各处理5点取样200麦穗，室内脱粒，烘干后随机取样30克麦粒粉碎。按Goswami和Kistler方法，取5克面粉置于离心管中，加入20mL的乙腈∶水(84∶16)提取液，涡旋机混匀后摇床上震荡24小时，5000rpm离心10min，取上清2mL于Eppendorf离心管中氮气吹干-20℃保藏。检测时加入100μLTMS衍生化试剂(TMSI∶TMCS＝100∶1)，混匀
10min后加入1mL超纯水，震荡分层后吸取上清液加到GC进样瓶，用装有电子捕获监测器的气相色谱(GC-ECD)进行毒素含量检测，结果见表6。

[0070] 表6：井冈霉素与种菌唑组合物防治小麦赤霉病的增效作用及减少DON毒素污染的作用

[0071]

[0072]

[0073] 本发明防治小麦赤霉病的杀菌组合物增效作用田间筛选及试验结果表明，井冈霉素与种菌唑组合物在小麦扬花初期至灌浆期喷施，在实施例1～8的不同制剂在一定的剂量下均对小麦赤霉病的防治具有显著增效作用(增效系数大于100)。而且井冈霉素与种菌唑组合物应用后，对降低谷物的DON污染水平具有显著增效作用，可以减少DON含量90％以上，将毒素污染水平控制在1mg DON/kg谷物以下的安全水平。

[0074] 应用实施例2：井冈霉素与种菌唑组合物防治小麦其他病害的试验效果[0075] 将实施例1～8的杀菌组合物制剂进行小麦病害的田间防控药效试验。试验地安排在江苏盐城新洋农场进行。小麦品种分别为淮麦33号，在小麦扬花初期采用农稼乐16L背负式电动喷雾器进行第一次施药，间隔5d进行第二次施药，用水量为50kg/亩，每小区面积50平方米，各处理重复3次，空白对照不施药。同时设50％多菌灵可湿性粉剂每亩用80克处理作为对照药剂。按照农业部颁发的杀菌剂田间药效试验准则行业标准规定的相应方法，在乳熟期调查小麦白粉病、锈病、纹枯病和叶枯病发生情况，计算病情指数和防治效果，结果见表7。

[0076] 表7：井冈霉素与种菌唑组合物防治小麦病害的田间药效试验

[0077]

[0078] 实施例1～8田间应用结果表明，井冈霉素与种菌唑组合杀菌剂在有效防治小麦赤霉病的同时，对小麦叶枯病、白粉病、锈病和纹枯病也具有较好的防治效果，远好于常用的多菌灵(经检测试验地病原菌群体中对多菌灵表现抗药性的病菌占37.7％)，而且对包括抗药性赤霉病菌引起的赤霉病具有极其显著的增效防治作用，其结果与同年在白马湖农场的田间试验结果类似。因此，本发明的杀菌组合物具有用药量少，成本低，利于环境保护，社会效益明显等诸多优点。

[0079] 应用实施例3：井冈霉素与种菌唑组合物防治大麦病害的防治效果及对减少毒素污染的效果

[0080] 将实施例1～8的杀菌组合物制剂进行大麦病害的田间防控药效试验，其中设计井冈霉素和种菌唑不同剂量的单剂处理。2014年在大麦扬花初期进行第一次施药，间隔5d进行第二次施药，用水量为50kg/亩，每小区面积50平方米，各处理重复3次，空白对照不施药。用常规药剂多酮可湿性粉剂作为对照药剂。按照农业部颁发的杀菌剂田间药效试验准则行业标准规定的相应方法，在乳熟期调查大麦赤霉病、白粉病、锈病和叶枯病发生情况，计算病情指数和防治效果，结果见表8。蜡熟期每处理5点随机取麦穗各150穗，带回室内脱粒，按应用实施例1的方法检测并计算麦粒毒素含量。药剂处理剂量、防效及对毒素含量的影响见表8。

[0081] 表8：井冈霉素与种菌唑组合物防治大麦病害的效果

[0082]

[0083] 组合物田间应用表明，种菌唑单剂处理对大麦赤霉病、叶枯病、白粉病和锈病均有较好防效，而井冈霉素单剂除了对赤霉病有较低防效以外，对其他病害基本没有效果。从表中可以看出，本发明实施例1～8中杀菌组合物制剂，对赤霉病、叶枯病、白粉病和锈病的防效大幅度提高，防治效果达到70％～90％以上，好于对照常用药剂多酮及单剂的效果，增效作用显著。因此，本发明的生物-化学杀菌组合物，可大幅度降低化学杀菌剂种菌唑的用量，减轻农药的环境压力，降低麦粒的毒素污染。

[0084] 应用实施例4：井冈霉素与种菌唑组合物防治水稻病害的试验效果

[0085] 将实施例1～8的杀菌组合物制剂进行水稻病害的田间防控药效试验。试验地安排在江苏省南京市江宁区淳化街道土桥镇。水稻品种为镇稻18，每个小区面积50平方米，各处理重复3次，空白对照不施药。水稻纹枯病在水稻分蘖末期(上3叶未出)第一次施药，孕穗期第二次施药，齐穗期第三次施药，用浙江省桐庐汇丰生物科技有限公司生产的40％井冈霉素可湿性粉剂单剂作为对照药剂。稻曲病在破口前5～7天第一次施药，齐穗期第二次施药，用拜耳作物科学公司生产的430g/L戊唑醇悬浮剂单剂作为对照药剂。稻瘟病在水稻破口期第一次施药，齐穗期第二次施药，用江苏丰登作物保护股份有限公司生产的75％三环唑可湿性粉剂单剂作为对照药剂。病情稳定后调查发病情况，计算病情及防效。

[0086] 表9：井冈霉素与种菌唑组合物防治水稻病害的田间试验效果

[0087]

[0088] 田间试验结果表明，井冈霉素和种菌唑组合杀菌剂在防治稻瘟病、稻曲病和水稻纹枯病方面都具有优异的防治效果，与目前常用的主流杀菌剂相比，均具有较显著的防治效果。本发明所提供的井冈霉素和种菌唑杀菌组合物能同时防治稻瘟病、稻曲病和水稻纹枯病，不仅提高了防效，而且大大降低了用药量和用药次数，节省了大量的经济投入，对增加社会、经济和生态效益将具有重要的现实意义。