一种葛根素的分离纯化方法

摘要

本发明涉及葛根素提取领域，特别涉及一种葛根素的分离纯化方法，包括以下步骤：将葛根粉碎，用体积浓度为80％±5％的乙醇水溶液回流提取，得到的提取液经减压浓缩得到浸膏；将浸膏萃取，萃取采用的萃取液为水饱和正丁醇和醋酸铵的混合液，醋酸铵在所述水饱和正丁醇中的浓度为46?50g/L，混合液的pH为4.4?4.6；萃取得到的浸膏经稀释后采用大孔树脂进行分离纯化，经梯度洗脱得到的洗脱液经真空干燥和重结晶即得到所述葛根素。本发明提供的葛根素的分离纯化方法，最终得到的葛根素的纯度在98％以上，且回收率达84％以上。

权利要求

1.一种葛根素的分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

将葛根粉碎，用体积浓度为80％±5％的乙醇水溶液回流提取，得到的提取液经减压浓缩得到浸膏；

将所述浸膏萃取，所述萃取采用的萃取液为水饱和正丁醇和醋酸铵的混合液，所述醋酸铵在所述水饱和正丁醇中的浓度为46-50g/L，所述混合液的pH为4.4-4.6；

萃取得到的浸膏经稀释后采用大孔树脂进行分离纯化，经梯度洗脱得到的洗脱液经真空干燥和重结晶即得到所述葛根素。

2.根据权利要求1所述的葛根素的分离纯化方法，其特征在于，所述葛根为干燥的葛根，所述粉碎的目数不小于60目。

3.根据权利要求1所述的葛根素的分离纯化方法，其特征在于，所述回流提取分2-4次进行，每次回流提取所用的乙醇水溶液的体积为葛根粉碎物体积的7-9倍，所述回流提取的总时间为8-10h。

4.根据权利要求3所述的葛根素的分离纯化方法，其特征在于，所述回流提取分3次进行，每次回流提取所用的乙醇水溶液的体积为葛根粉碎物体积的8倍，每次回流提取的时间为170-200min。

5.根据权利要求1所述的葛根素的分离纯化方法，其特征在于，所述醋酸铵在所述水饱和正丁醇中的浓度为47-48g/L。

6.根据权利要求1所述的葛根素的分离纯化方法，其特征在于，浸膏稀释采用体积浓度为30％±3％乙醇水溶液进行。

7.根据权利要求1所述的葛根素的分离纯化方法，其特征在于，所述梯度洗脱为：先用水洗，然后用体积浓度为10％±2％的乙醇水溶液洗脱，再用体积浓度为30％±3％的乙醇水溶液洗脱。

8.根据权利要求7所述的葛根素的分离纯化方法，其特征在于，按稀释后的浸膏体积计，水洗用水量为3.8-4.2倍量，体积浓度为10％±2％的乙醇水溶液的用量为1.8-2.2倍量，体积浓度为30％±3％乙醇水溶液的用量为2-3倍量。

9.根据权利要求8所述的葛根素的分离纯化方法，其特征在于，水洗脱得到的洗脱液废除。

10.根据权利要求1-9任一项所述的葛根素的分离纯化方法，其特征在于，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。

说明书

一种葛根素的分离纯化方法

技术领域

[0001] 本发明涉及葛根素提取领域，具体而言，涉及一种葛根素的分离纯化方法。

背景技术

[0002] 葛根素是从豆科植物野葛根中提取的一种单一成份黄酮苷，具有活血化瘀、改善微循环、扩张冠状动脉和脑血管、降低心肌耗氧量等作用，其制剂葛根素注射剂临床用于治疗心脑血管疾病及视网膜血管病、眼底病及突发性耳聋等。随着葛根素在临床广泛使用，对葛根素的需求也日益增多。

[0003] 现有的葛根素的提取方法有很多种，如申请号为201410168838.1公开了一种葛根素提取工艺，取葛根于-4～0℃低温粉碎过30-100目筛，加1-7倍重于葛根重量的蒸馏水，在室温下浸泡5-8h后用搅拌机搅拌，制得葛根浆液后加入酶制剂进行酶解反应，同时进行低强度超声波处理，然后进行固液分离并收集滤出液，即得葛根提取物浓缩液；申请号为201510518805.X公开了分离纯化葛根素的方法，是以乙酸乙酯、正丁醇和水组成的三元溶剂体系为分离溶剂体系，采用高速离心分配色谱法对葛根素提取物进行分离纯化，得到葛根素；申请号为201410611834.6公开了膜技术分离纯化葛根素的方法，采用陶瓷膜粗滤去杂、超滤膜超滤分离脱色、纳滤分离纯化并浓缩、乙醇重结晶，最后将晶体真空干燥。但上述这些方法得到的葛根素虽然纯度很高，但回收率均在70％以下，因此，其回收率还有待进一步提升。

[0004] 有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

[0005] 本发明的目的在于提供一种葛根素的分离纯化方法，该方法采用正丁醇与醋酸铵的混合液萃取，重结晶得到葛根素的纯度大于98％，且回收率达85％以上。

[0006] 为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

[0007] 一种葛根素的分离纯化方法，包括以下步骤：

[0008] 将葛根粉碎，用体积浓度为80％±5％的乙醇水溶液回流提取，得到的提取液经减压浓缩得到浸膏；

[0009] 将所述浸膏萃取，所述萃取采用的萃取液为水饱和正丁醇和醋酸铵的混合液，所述醋酸铵在所述水饱和正丁醇中的浓度为46-50g/L，所述混合液的pH为4.4-4.6；

[0010] 萃取得到的浸膏经稀释后采用大孔树脂进行分离纯化，经梯度洗脱得到的洗脱液经真空干燥和重结晶即得到所述葛根素。

[0011] 本发明提供的葛根素的分离纯化方法，先将葛根粉碎，然后用特定浓度的乙醇水溶液进行充分提取，提取率为96％以上；然后将提取液制成浸膏，进行萃取以去除其中的杂质，萃取后得到的浸膏中的葛根素的提取率仍达92％以上，萃取后的浸膏经稀释后洗脱，结晶得到的葛根素的纯度在98％以上，且回收率达84％以上。

[0012] 其中，本发明中的所用的原料葛根可以为鲜葛根，也可以为干燥的葛根，若为鲜葛根，则将葛根清洗后去除表面的水分，切碎后进行回流提取即可；若为干燥后的葛根，即鲜葛根收获后一般经清洗、切片、晒干后进行保存，得到市售的葛根，则一般再经稍微烘干后，直接用粉碎机粉碎即可。

[0013] 另外，萃取液的pH为4.4-4.6，是先将醋酸铵在水饱和正丁醇中按比例混匀后，然后加入酸调节pH至4.4-4.6。酸一般采用盐酸,盐酸的浓度一般为1-4M。

[0014] 为了便于将葛根中的葛根素更充分的提取出来，优选地，所述葛根为干燥的葛根，所述粉碎的目数不小于60目。

[0015] 为了将葛根中的葛根素更充分的提取出来，优选地，所述回流提取分2-4次进行，每次回流提取所用的乙醇水溶液的体积为葛根粉碎物体积的7-9倍，所述回流提取的总时间为8-10h。

[0016] 为了兼顾时间与成本，更优选地，所述回流提取分3次进行，每次回流提取所用的乙醇水溶液的体积为葛根粉碎物体积的8倍，每次回流提取的时间为170-200min。

[0017] 添加醋酸铵，其主要作用是促进葛根中的葛根素沉淀，从而在萃取的过程中能尽量减少葛根素自身的损失，为了达到更好的萃取效果，且尽量少的减少葛根素的损失，更优选地，所述醋酸铵在所述水饱和正丁醇中的浓度为47-48g/L。

[0018] 为了便于用大孔树脂进行分离纯化，优选地，浸膏稀释采用体积浓度为30％±3％乙醇水溶液进行。

[0019] 优选地，所述梯度洗脱为：先用水洗，然后用体积浓度为10％±2％的乙醇水溶液洗脱，再用体积浓度为30％±3％的乙醇水溶液洗脱。

[0020] 用水洗脱是为了洗涤一下去除其中的杂质，然后再用不同浓度的乙醇水溶液将葛根素洗脱下来。

[0021] 为了达到更好的洗涤效果和洗脱效果，进一步地，按稀释后的浸膏体积计，水洗用水量为3.8-4.2倍量，体积浓度为10％±2％的乙醇水溶液的用量为1.8-2.2倍量，体积浓度为30％±3％乙醇水溶液的用量为2-3倍量。

[0022] 更优选地，按稀释后的浸膏体积计，水洗用水量为4倍量，体积浓度为10％±2％的乙醇水溶液的用量为2倍量，体积浓度为30％±3％乙醇水溶液的用量为2-3倍量。

[0023] 进一步地，水洗脱得到的洗脱液废除。

[0024] 洗头时，分别收集洗脱液，水洗得到的洗脱液废弃，不同乙醇浓度的洗脱液分别收集，检测洗脱液中葛根素含量，若小于70％，则重新回柱洗脱，直到得到的洗脱液中葛根素含量不小于70％。

[0025] 经验证，采用AB-8型大孔吸附树脂进行分离纯化，分离纯化效果好。优选地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。

[0026] 经多次试验，分离纯化后得到的洗脱液经结晶，得到的葛根素的纯度大于98％。其中，结晶采用常规的结晶方法进行。

[0027] 与现有技术相比，本发明的有益效果为：

[0028] (1)本发明提供的一种葛根素的分离纯化方法，该方法先采用特定体积浓度的乙醇水溶液充分提取，然后采用正丁醇与醋酸铵的混合液萃取，经洗脱后进行重结晶，得到葛根素的纯度大于98％，且回收率达84％以上。

[0029] (2)本发明还限定了回流提取的具体步骤，以充分的将葛根中的葛根素充分的提取出来。

[0030] (3)本发明还限定了梯度洗脱所用的溶剂，以达到更好的洗涤效果和洗脱效果。

具体实施方式

[0031] 下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

[0032] 实施例1

[0033] 取野葛根，烘干后粉碎，粉碎后过60目筛，得到的筛下物用于回流提取；

[0034] 回流提取的溶剂为体积浓度为80％乙醇水溶液，共回流提取3次，每次回流提取所用的80％乙醇水溶液的体积为葛根粉体积的8倍，每次提取时间为3小时，得到提取液；

[0035] 将提取液合并，减压浓缩得到浸膏，经计算提取率为97％，葛根素含量约为11％；

[0036] 取浸膏，用有机溶剂萃取，有机溶剂为水饱和正丁醇和醋酸铵的混合液，混合液的pH调节为4.5，醋酸铵的添加量为：醋酸铵在水饱和正丁醇中的浓度为48g/L，萃取后得到的浸膏含量可达32.1％，回收率94％；

[0037] 萃取后的浸膏用30％乙醇水溶液进行稀释，装柱，柱子的成分为AB-8型大孔吸附树脂；

[0038] 经过充分吸附后进行梯度洗脱，梯度洗脱为：先用水洗，然后用体积浓度为10％的乙醇水溶液洗脱，再用体积浓度为30％的乙醇水溶液洗脱；按稀释后的浸膏体积计，先水洗，水洗用水量为4倍量；再用体积浓度为10％的乙醇水溶液洗脱，其的使用量为2倍量；最后用体积浓度为30％乙醇水溶液洗脱，其使用量为2倍量；

[0039] 分别收集洗脱液，水洗得到的洗脱液废弃，不同乙醇浓度的洗脱液分别收集，检测洗脱液中葛根素含量，若小于70％，则重新回柱洗脱，直到得到的洗脱液中葛根素含量不小于70％；

[0040] 最终得到的洗脱液经真空干燥和重结晶，得到葛根素成品。

[0041] 对得到的葛根素成品进行检测，纯度为99.5％，计算回收率为85％。

[0042] 实施例2

[0043] 取野葛根，烘干后粉碎，粉碎后过60目筛，得到的筛下物用于回流提取；

[0044] 回流提取的溶剂为体积浓度为75％乙醇水溶液，共回流提取4次，每次回流提取所用的75％乙醇水溶液的体积为葛根粉体积的7倍，每次提取时间为2小时，得到提取液；

[0045] 将提取液合并，减压浓缩得到浸膏，经计算提取率为96.2％，葛根素含量约为11％；

[0046] 取浸膏，用有机溶剂萃取，有机溶剂为水饱和正丁醇和醋酸铵的混合液，用盐酸将混合液的pH调节为4.4，醋酸铵的添加量为：醋酸铵在水饱和正丁醇中的浓度为46g/L，萃取后得到的浸膏中葛根素含量为31.5％，回收率92％；

[0047] 萃取后的浸膏用27％乙醇水溶液进行稀释，装柱，柱子的成分为AB-8型大孔吸附树脂；

[0048] 经过充分吸附后进行梯度洗脱，梯度洗脱为：先用水洗，然后用体积浓度为8％的乙醇水溶液洗脱，再用体积浓度为27％的乙醇水溶液洗脱；按稀释后的浸膏体积计，先水洗，水洗用水量为3.8倍量；再用体积浓度为8％的乙醇水溶液洗脱，其的使用量为1.8倍量；最后用体积浓度为27％乙醇水溶液洗脱，其使用量为2倍量；

[0049] 分别收集洗脱液，水洗得到的洗脱液废弃，不同乙醇浓度的洗脱液分别收集，检测洗脱液中葛根素含量，若小于70％，则重新回柱洗脱，直到得到的洗脱液中葛根素含量不小于70％；

[0050] 最终得到的洗脱液经真空干燥和重结晶，得到葛根素成品。

[0051] 对得到的葛根素成品进行检测，纯度为98.5％，计算回收率达84％。

[0052] 实施例3

[0053] 取野葛根，烘干后粉碎，粉碎后过60目筛，得到的筛下物用于回流提取；

[0054] 回流提取的溶剂为体积浓度为85％乙醇水溶液，共回流提取2次，每次回流提取所用的85％乙醇水溶液的体积为葛根粉体积的9倍，每次提取时间为5小时，得到提取液；

[0055] 将提取液合并，减压浓缩得到浸膏，经计算提取率为96.5％，葛根素含量约为11％；

[0056] 取浸膏，用有机溶剂萃取，有机溶剂为水饱和正丁醇和醋酸铵的混合液，用盐酸将混合液的pH调节为4.6，醋酸铵的添加量为：醋酸铵在水饱和正丁醇中的浓度为50g/L，萃取后得到的浸膏中葛根素含量为32.3％，回收率92.7％；

[0057] 萃取后的浸膏用33％乙醇水溶液进行稀释，装柱，柱子的成分为AB-8型大孔吸附树脂；

[0058] 经过充分吸附后进行梯度洗脱，梯度洗脱为：先用水洗，然后用体积浓度为12％的乙醇水溶液洗脱，再用体积浓度为33％的乙醇水溶液洗脱；

[0059] 按稀释后的浸膏体积计，先水洗，水洗用水量为4.2倍量；再用体积浓度为12％的乙醇水溶液洗脱，其的使用量为2.2倍量；最后用体积浓度为33％乙醇水溶液洗脱，其使用量为3倍量；

[0060] 分别收集洗脱液，水洗得到的洗脱液废弃，不同乙醇浓度的洗脱液分别收集，检测洗脱液中葛根素含量，若小于70％，则重新回柱洗脱，直到得到的洗脱液中葛根素含量不小于70％；

[0061] 最终得到的洗脱液经真空干燥和重结晶，得到葛根素成品。

[0062] 对得到的葛根素成品进行检测，纯度为99.2％，计算回收率为86％。

[0063] 实施例4

[0064] 取野葛根，烘干后粉碎，粉碎后过60目筛，得到的筛下物用于回流提取；

[0065] 回流提取的溶剂为体积浓度为78％乙醇水溶液，共回流提取3次，每次回流提取所用的78％乙醇水溶液的体积为葛根粉体积的8倍，每次提取时间为3小时，得到提取液；

[0066] 将提取液合并，减压浓缩得到浸膏，经计算提取率为96.5％，葛根素含量约为11％；

[0067] 取浸膏，用有机溶剂萃取，有机溶剂为水饱和正丁醇和醋酸铵的混合液，用盐酸将混合液的pH调节为4.5，醋酸铵的添加量为：醋酸铵在水饱和正丁醇中的浓度为47g/L，萃取后得到的浸膏中葛根素含量为31.8％，回收率92.5％；

[0068] 萃取后的浸膏用30％乙醇水溶液进行稀释，装柱，柱子的成分为AB-8型大孔吸附树脂；

[0069] 经过充分吸附后进行梯度洗脱，梯度洗脱为：先用水洗，然后用体积浓度为10％的乙醇水溶液洗脱，再用体积浓度为30％的乙醇水溶液洗脱；按稀释后的浸膏体积计，先水洗，水洗用水量为4倍量；再用体积浓度为10％的乙醇水溶液洗脱，其的使用量为2倍量；最后用体积浓度为30％乙醇水溶液洗脱，其使用量为2倍量；

[0070] 分别收集洗脱液，水洗得到的洗脱液废弃，不同乙醇浓度的洗脱液分别收集，检测洗脱液中葛根素含量，若小于70％，则重新回柱洗脱，直到得到的洗脱液中葛根素含量不小于70％；

[0071] 最终得到的洗脱液经真空干燥和重结晶，得到葛根素成品。

[0072] 对得到的葛根素成品进行检测，纯度为99.5％，计算回收率达85.2％。

[0073] 实施例5

[0074] 取野葛根，烘干后粉碎，粉碎后过60目筛，得到的筛下物用于回流提取；

[0075] 回流提取的溶剂为体积浓度为82％乙醇水溶液，共回流提取3次，每次回流提取所用的82％乙醇水溶液的体积为葛根粉体积的8倍，每次提取时间为200min，得到提取液；

[0076] 将提取液合并，减压浓缩得到浸膏，经计算提取率为96.8％，葛根素含量约为11％；

[0077] 取浸膏，用有机溶剂萃取，有机溶剂为水饱和正丁醇和醋酸铵的混合液，用盐酸将混合液的pH调节为4.5，醋酸铵的添加量为：醋酸铵在水饱和正丁醇中的浓度为48g/L，萃取后得到的浸膏中葛根素含量为31.5％，回收率93％；

[0078] 萃取后的浸膏用30％乙醇水溶液进行稀释，装柱，柱子的成分为AB-8型大孔吸附树脂；

[0079] 经过充分吸附后进行梯度洗脱，梯度洗脱为：先用水洗，然后用体积浓度为10％的乙醇水溶液洗脱，再用体积浓度为30％的乙醇水溶液洗脱；按稀释后的浸膏体积计，先水洗，水洗用水量为4倍量；再用体积浓度为10％的乙醇水溶液洗脱，其使用量为2倍量；最后用体积浓度为30％乙醇水溶液洗脱，其使用量为3倍量；

[0080] 分别收集洗脱液，水洗得到的洗脱液废弃，不同乙醇浓度的洗脱液分别收集，检测洗脱液中葛根素含量，若小于70％，则重新回柱洗脱，直到得到的洗脱液中葛根素含量不小于70％；

[0081] 最终得到的洗脱液经真空干燥和重结晶，得到葛根素成品。

[0082] 对得到的葛根素成品进行检测，纯度为99.3％，计算回收率为85.2％。

[0083] 实施例6

[0084] 取野葛根，烘干后粉碎，粉碎后过60目筛，得到的筛下物用于回流提取；

[0085] 回流提取的溶剂为体积浓度为80％乙醇水溶液，共回流提取4次，每次回流提取所用的80％乙醇水溶液的体积为葛根粉体积的7倍，每次提取时间为170min，得到提取液；

[0086] 将提取液合并，减压浓缩得到浸膏，经计算提取率为96.2％，葛根素含量约为11％；

[0087] 取浸膏，用有机溶剂萃取，有机溶剂为水饱和正丁醇和醋酸铵的混合液，用盐酸将混合液的pH调节为4.5，醋酸铵的添加量为：醋酸铵在水饱和正丁醇中的浓度为48g/L，萃取后得到的浸膏中葛根素含量为32.5％，回收率92.3％；