作为激酶抑制剂的取代的烟酰胺衍生物转让专利
申请号 : CN201480066924.X
文献号 : CN105814021B
文献日 : 2020-03-13
发明人 : S·博罗 , S·王 , T·马隆 , J·沃斯特 , J·沈 , M·罗宾逊
申请人 : 阿勒根公司
摘要 :
本发明涉及能够调整酪氨酸激酶信号转导以便调节、调整和/或抑制异常细胞增生的有机分子。
权利要求 :
1.一种式I或II的化合物
其中：
R1是氢或NH2；
R2是氢或NH2；
X是
Y是CH或N；
Ar1在式I中是苯基或呋喃基基团，其中所述苯基或呋喃基基团可任选用卤素、三卤代甲基或C1-C4-烷基取代；
Ar1在式II中是苯基、噁唑基和呋喃基基团；
R3是氢、C1-C4-烷基、
R4是氢、C1-C4-烷基、(CH2)nCOOR6或(CH2)nCOR7；
R5是氢或C1-C4-烷基；
R6是氢或C1-C4-烷基；
R7是取代的胺，其可选自：
并且n是0或1至6的整数；
或其药学上可接受的盐、外消旋混合物和对映体。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中X是–NH-C(O)-。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中Y是CH。
1
4.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物具有式I，并且Ar选自苯基和呋喃基及其取代的衍生基团，其中所述取代的衍生基团是C1-C4-烷基和/或卤基取代的苯基和呋喃基。
5.根据权利要求4所述的化合物，其中Ar1选自3-甲基-2-呋喃基和2-氟-5-甲基苯基。
2
6.根据权利要求1所述的化合物，其中R是H。
7.根据权利要求1所述的化合物，其中R3选自
8.根据权利要求7所述的化合物，其中R3是-C(O)N(R4)(R5)。
9.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物具有式II，且所述苯基、噁唑基和呋喃基基团用一个或多个C1-C4-烷氧基、卤素、三卤代烷基或C1-C4-烷基自由基取代。
10.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物具有式II，且其中Ar1选自苯基、噁唑基、呋喃基和C1-C4-烷基、C1-C4-烷基氧基和卤基取代的苯基、噁唑基和呋喃基。
11.如权利要求10所述的化合物，其中Ar1选自
3-甲基呋喃基；
2-氟5-甲基苯基；
4-氯5-叔丁基苯基；
3-甲氧基苯基；和
5-丁基噁唑基。
12.如权利要求1所述的化合物，其中所述化合物选自：
1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-
1λ4,4-噻嗪烷-4-甲酸叔丁酯1-氧化物、
4
5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)-N-(1-氧撑-1λ,4-噻嗪烷-1-亚基)烟酰胺、
1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-
1λ4,4-噻嗪烷-4-甲酰胺1-氧化物、
3-({[1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1-氧撑-1λ4,4-噻嗪烷-4-基]羰基}氨基)丙酸乙酯、
4-({[1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1-氧撑-1λ4,4-噻嗪烷-4-基]羰基}氨基)丁酸乙酯、
3-({[1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1-氧撑-1λ4,4-噻嗪烷-4-基]羰基}氨基)丙酸、
4-({[1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1-氧撑-1λ4,4-噻嗪烷-4-基]羰基}氨基)丁酸、N-[3-(3-羟基吡咯烷-1-基)-3-氧代丙基]-1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1λ4,4-噻嗪烷-4-甲酰胺1-氧化物、N-[4-(3-羟基吡咯烷-1-基)-4-氧代丁基]-1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1λ4,4-噻嗪烷-4-甲酰胺1-氧化物；
N-{4-[(2,3-二羟丙基)氨基]-4-氧代丁基}-1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1λ4,4-噻嗪烷-4-甲酰胺1-氧化物、({[1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1-氧撑-1λ4,4-噻嗪烷-4-基]羰基}氨基)乙酸乙酯、({[1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1-氧撑-1λ4,4-噻嗪烷-4-基]羰基}氨基)乙酸、
1-({[6-氨基-5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1λ4,4-噻嗪烷-4-甲酸叔丁酯1-氧化物、4
6-氨基-5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)-N-(1-氧撑-1λ,4-噻嗪烷-1-亚基)烟酰胺、
1-({[6-氨基-5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1λ4,4-噻嗪烷-4-甲酰胺1-氧化物、
1-({[6-氨基-5-({3-[(2-氟-5-甲基苯甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1λ4,4-噻嗪烷-4-甲酸叔丁酯1-氧化物、
6-氨基-5-({3-[(2-氟-5-甲基苯甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)-N-(1-氧撑-1λ4,4-噻嗪烷-1-亚基)烟酰胺、
1-({[6-氨基-5-({3-[(2-氟-5-甲基苯甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1λ4,4-噻嗪烷-4-甲酰胺1-氧化物；
5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)-N-(4-氧撑-1,4λ4-氧硫杂环己烷-4-亚基)烟酰胺、
6-氨基-5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)-N-(4-氧撑-1,4λ4-氧硫杂环己烷-4-亚基)烟酰胺、
6-氨基-5-({3-[(2-氟-5-甲基苯甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)-N-(4-氧撑-1,4λ4-氧硫杂环己烷-4-亚基)烟酰胺、
6-氨基-5-[(3-{[(2-氟-5-甲基苯基)氨基]羰基}苯基)乙炔基]-N-(4-氧撑-1,4λ4-氧硫杂环己烷-4-亚基)烟酰胺、
6-氨基-5-{[3-({[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]氨基}羰基)苯基]乙炔基}-N-(4-氧撑-1,
4λ4-氧硫杂环己烷-4-亚基)烟酰胺、
6-氨基-5-[(3-{[(5-叔丁基异噁唑-3-基)氨基]羰基}苯基)乙炔基]-N-(4-氧撑-1,44
λ-氧硫杂环己烷-4-亚基)烟酰胺，和
6-氨基-5-[(3-{[(3-甲氧基苯基)氨基]羰基}苯基)乙炔基]-N-(4-氧撑-1,4λ4-氧硫杂环己烷-4-亚基)烟酰胺；
或其药学上可接受的盐或其药学上可接受的盐。
13.如权利要求1-12中任一项所述的化合物在制备一种用于治疗与不受调节的酪氨酸激酶信号转导有关的疾病的药物中的用途。
14.如权利要求13所述的用途，其中所述疾病选自癌症、血管增生性病症、纤维化病症、系膜细胞增生性病症和代谢性疾病。
15.如权利要求14所述的用途，其中所述血管增生性病症选自糖尿病性视网膜病变、渗出性与年龄有关的黄斑变性、早产儿的视网膜病变、翼状胬肉、红斑痤疮、关节炎和再狭窄。
16.如权利要求14所述的用途，其中所述纤维化病症选自肝硬化和动脉粥样硬化。
17.如权利要求14所述的用途，其中所述系膜细胞增生性病症选自肾小球性肾炎、糖尿病性肾病变、恶性肾硬化、血栓性微血管病变综合症、移植排斥和肾小球病变。
18.如权利要求14所述的用途，其中所述代谢性疾病选自银屑病、糖尿病、伤口愈合及神经变性疾病。
19.如权利要求14所述的用途，其中所述疾病是眼科疾病。
20.如权利要求19所述的用途，其中所述眼科疾病选自翼状胬肉、与自动发炎的翼状胬肉有关的充血、切除外科手术之后的复发性翼状胬肉、用以防止切除后的复发性翼状胬肉的预防性治疗、接近视轴的进行性翼状胬肉、与翼状胬肉相关的慢性低度充血、角膜新生血管化、新生血管性青光眼、虹膜新生血管化、慢性过敏性结膜炎、眼红斑痤疮、睑结膜炎、复发性巩膜外层炎、干燥性角结膜炎、眼移植物抗宿主病、糖尿病性视网膜病变、糖尿病性黄斑水肿、增生性糖尿病性视网膜病变、渗出性或新生血管性与年龄有关的黄斑变性、患有干性与年龄有关的黄斑变性的高危眼、与视网膜静脉阻塞相关的新生血管性疾病、与以下相关的新生血管性疾病：病理性近视、弹性假黄瘤、视神经脉络膜小疣、外伤性脉络膜破裂、特发性病因、推测的眼组织胞浆菌病综合症和早产儿的视网膜病变。
21.如权利要求14所述的用途，其中所述疾病是选自日光灼伤、湿疹、银屑病和接触性皮炎的皮肤病学适应症。
22.如权利要求1所述的化合物，其为5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)-N-(4-氧撑-1,4λ4-氧硫杂环己烷-4-亚基)烟酰胺或其药学上可接受的盐。
23.如权利要求1所述的化合物，其为6-氨基-5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)-N-(4-氧撑-1,4λ4-氧硫杂环己烷-4-亚基)烟酰胺或其药学上可接受的盐。
24.如权利要求1所述的化合物，其为6-氨基-5-[(3-{[(2-氟-5-甲基苯基)氨基]羰基}苯基)乙炔基]-N-(4-氧撑-1,4λ4-氧硫杂环己烷-4-亚基)烟酰胺或其药学上可接受的盐。
25.如权利要求1所述的化合物，其为6-氨基-5-[(3-{[(5-叔丁基异噁唑-3-基)氨基]羰基}苯基)乙炔基]-N-(4-氧撑-1,4λ4-氧硫杂环己烷-4-亚基)烟酰胺或其药学上可接受的盐。
说明书 :
作为激酶抑制剂的取代的烟酰胺衍生物
[0001] 相关申请的交叉参考
[0002] 本申请要求各自于2013年12月12日提交的第61/915,186和61/915,209号美国临时专利申请的优先权及权益，上述申请的公开内容据此以全文引用的方式并入。
[0003] 发明背景1.发明领域
[0004] 本发明涉及能够调整、调节和/或抑制酪氨酸激酶信号转导的新颖化合物。本发明还涉及调节、调整或抑制无论是受体还是非受体类的酪氨酸激酶的方法，用于预防和/或治疗与不受调节的酪氨酸激酶信号转导有关的病症，包括细胞生长、代谢性和血管增生性病症。
[0005] 2.相关技术的描述
[0006] 蛋白酪氨酸激酶(PTK)包括大量不同类别的具有酶活性的蛋白质。PTK在控制细胞生长和分化中发挥重要作用。
[0007] 例如，受体酪氨酸激酶介导的信号转导是通过与特定生长因子(配体)的细胞外相互作用、接着是受体二聚化、内在蛋白酪氨酸激酶活性的瞬态刺激和磷酸化引发的。从而为细胞内信号转导分子产生结合位点并导致与一系列细胞质信号传导分子形成促进适当的细胞应答(例如，细胞分裂、代谢平衡和对细胞外微环境应答)的复合物。
[0008] 关于受体酪氨酸激酶，也已经显示酪氨酸磷酸化位点起到信号传导分子的SH2(src同源)结构域的高亲和力结合位点的作用。已经确认了与受体酪氨酸激酶(RTK)相关的若干细胞内底物蛋白。它们可被分成两个主要组：(1)具有催化结构域的底物；和(2)缺乏这种结构域但充当衔接子并与催化活性分子缔合的底物。受体或蛋白质与它们的底物的SH2结构域之间的相互作用的特异性是由直接地围绕磷酸化酪氨酸残基的氨基酸残基决定的。SH2结构域与围绕特定受体上的磷酸酪氨酸残基的氨基酸序列之间的结合亲和力差异与观察到的它们的底物磷酸化概况的差异一致。这些观察表明，每种受体酪氨酸激酶的功能不仅由其表达的模式和配体可用性决定，而且还由通过特定受体激活的下游信号转导途径的阵列决定。因此，磷酸化提供重要的调节步骤，其决定由特定的生长因子受体以及分化因子受体恢复的信号传导途径的选择性。
[0009] 已显示PTK中的异常表达或突变导致不受控制的细胞增生(例如恶性肿瘤生长)或导致关键发育过程中的缺陷。因此，生物医学界已花费了大量的资源来探索PTK家族成员的特定生物学作用、它们在分化过程中的功能、它们在肿瘤发生及在其它疾病中的参与、经配体刺激激活的其信号转导途径所依据的生化机制以及新药的开发。
[0010] 酪氨酸激酶可以是受体型(具有细胞外跨膜和细胞内结构域)或非受体型(全细胞内)的。
[0011] 受体型酪氨酸激酶(RTK)包括具有不同生物活性的跨膜受体大家族。RTK的内在功能经配体结合激活，其导致受体和多种细胞底物的磷酸化，并随后导致各种细胞应答。非受体酪氨酸激酶代表缺乏细胞外和跨膜序列的细胞酶的集合。以引用的方式并入本文的Cowan-Jacob Cell Mol.Life Sci.，2006，63，2608-2625中提供了对受体和非受体酪氨酸激酶的更详细的讨论。
[0012] 有许多其中已发现RTK激酶参与导致病理状况的细胞信号传导途径的例子，所述病理状况包括渗出性与年龄有关的黄斑变性(Ni等人，Opthalmologica 2009 223 401-410；Chappelow等人，Drugs 2008 68 1029-1036)、糖尿病性视网膜病变(Zhang等人，Int.J.Biochem.Cell Biol.2009 41 2368-2371)、癌症(Aora等人，
J.Path.Exp.Ther.2006，315，971)、银屑病(Heidenreich等人，Drug News Perspective
2008 21 97-105)和红斑痤疮(Smith，J.R.、V.B.Lanier等人，Br J Ophthalmol 2007，91(2)：226-229)。在诸如渗出性与年龄有关的黄斑变性和糖尿病性视网膜病变的眼科疾病中，VEGF受体的异常激活可导致不正常的血管生长。由包括 和
EYLEATM在内的多种抗VEGF靶向剂的临床成功显而易见VEGFR信号传导在渗出性与年龄有关的黄斑变性疾病过程中的重要性(Barakat等人，Expert Opin.Investig.Drugs 2009，18，
637)。最近已经提出多个RTK信号传导途径的抑制可提供比靶向单个RTK信号传导途径更大的治疗效果。例如在诸如渗出性与年龄有关的黄斑变性和糖尿病性视网膜病变的新生血管性眼部病症中，VEGFR和PDGFRβ两者的抑制可通过使疾病中存在的现有新生血管性血管退化而提供更大的治疗效果(Adamis等人，Am.J.Pathol.2006 168 2036-2053)。在癌症中，已经提出多个RTK信号传导途径的抑制具有比抑制单个RTK途径更大的效果(DePinho等人，Science 2007 318 287-290；Bergers等人，J.Clin Invest.2003 111 1287-1295)。
J.Path.Exp.Ther.2006，315，971)、银屑病(Heidenreich等人，Drug News Perspective
2008 21 97-105)和红斑痤疮(Smith，J.R.、V.B.Lanier等人，Br J Ophthalmol 2007，91(2)：226-229)。在诸如渗出性与年龄有关的黄斑变性和糖尿病性视网膜病变的眼科疾病中，VEGF受体的异常激活可导致不正常的血管生长。由包括 和
EYLEATM在内的多种抗VEGF靶向剂的临床成功显而易见VEGFR信号传导在渗出性与年龄有关的黄斑变性疾病过程中的重要性(Barakat等人，Expert Opin.Investig.Drugs 2009，18，
637)。最近已经提出多个RTK信号传导途径的抑制可提供比靶向单个RTK信号传导途径更大的治疗效果。例如在诸如渗出性与年龄有关的黄斑变性和糖尿病性视网膜病变的新生血管性眼部病症中，VEGFR和PDGFRβ两者的抑制可通过使疾病中存在的现有新生血管性血管退化而提供更大的治疗效果(Adamis等人，Am.J.Pathol.2006 168 2036-2053)。在癌症中，已经提出多个RTK信号传导途径的抑制具有比抑制单个RTK途径更大的效果(DePinho等人，Science 2007 318 287-290；Bergers等人，J.Clin Invest.2003 111 1287-1295)。
[0013] WO 2013/062843 A1提到作为酪氨酸激酶抑制剂的吡啶-亚砜亚胺。
[0014] WO 2008/061236 A2提到作为激酶抑制剂的亚砜亚胺-烟碱衍生物以及它们的制备、药物组合物和在增生性疾病治疗中的用途。
[0015] 因此期望的是确认通过调整受体和非受体酪氨酸激酶的活性来特异性地抑制信号转导以调节和调整不正常或不适当的细胞增生的有效小分子化合物，并且这是本发明的一个目的。
[0016] 上述参考文献据此以全文引用的方式并入，其目的是为了公开其制备的起始材料及方法、用以确定请求保护的化合物调整、调节和/或抑制细胞增生的能力的筛选和测定、可用所述化合物、制剂治疗的适应症和施用的途径、有效剂量等等。
[0017] 发明概述
[0018] 本发明涉及能够通过阻断VEGF和/或PDGF受体来调整、调节和/或抑制酪氨酸激酶信号转导的有机分子。这类化合物适用于治疗与不受调节的酪氨酸激酶信号转导有关的疾病，包括血管增生性病症，如糖尿病性视网膜病变、与年龄有关的黄斑变性和早产儿的视网膜病变。
[0019] 在一个说明性实施方案中，本发明的化合物具有以下通式I：
[0020]
[0021] 其中
[0022] R1是氢或NH2
[0023] R2是氢或NH2
[0024]
[0025] Y是CH或N
[0026] Ar1是芳基，即碳环芳基或杂芳基基团，
[0027] R3是氢或低级烷基，或
[0028]
[0029] R4是氢、低级烷基、(CH2)nCOOR6或(CH2)nCOR7，
[0030] R5是氢或低级烷基，
[0031] R6是氢或低级烷基，
[0032] R7是胺，例如取代的胺，其可选自
[0033]
[0034] 且n是0或1至6的整数，并且进一步包括其前药、药学上可接受的盐、外消旋混合物和对映体。
[0035] 优选地，在式I中，X是-NH-C(O)-。
[0036] 优选地，在式I中，Y是CH。
[0037] 优选地，在式I中，Ar1选自苯基和呋喃基，例如低级烷基和/或卤基取代的苯基和呋喃基。最优选Ar1选自3-甲基-2-呋喃基和2-氟-5-甲基苯基。
[0038] 优选地，在式I中，R2是H。
[0039] 优选地，在式I中，R3选自
[0040]
[0041] 其中R4和R5定义如上。
[0042] 更优选在式I中，R3选自
[0043] -C(O)N(R4)(R5)
[0044] 其中R4和R5定义如上。
[0045] 在另一说明性实施方案中，本发明的化合物具有以下通式II：
[0046]
[0047] 其中
[0048] R1是氢或NH2
[0049] R2是氢或NH2
[0050] X是
[0051]
[0052] Y是CH或N
[0053] Ar1是芳基基团，即碳环芳基基团或杂芳基基团，进一步包括其前药、药学上可接受的盐、外消旋混合物和对映体。所述碳环芳基或杂芳基基团可任选用一个或多个烷氧基、卤素、三卤代烷基(例如，三氟甲基)或低级烷基自由基取代。
[0054] 优选地，在式II中，X是-NHC(O)-或-C(O)NH-
[0055] 优选地，在式II中，Y是CH。
[0056] 优选地，在式II中，Ar1选自苯基、噁唑基和呋喃基以及低级烷基、烷基氧基和/或卤基取代的苯基、噁唑基和呋喃基。
[0057] 最优选在式II中，Ar1选自3-甲基呋喃基、2-氟5-甲基苯基、4-氯5-叔丁基苯基、3-甲氧基苯基和5-丁基噁唑基。
[0058] 优选地，在式II中，R2是H。
[0059] 最优选地，所述式I和II的化合物选自：
[0060] 1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨4
基)-1λ，4-噻嗪烷-4-甲酸叔丁酯1-氧化物
基)-1λ，4-噻嗪烷-4-甲酸叔丁酯1-氧化物
[0061] 1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1λ4，4-噻嗪烷-4-甲酰胺1-氧化物
[0062] 1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1λ4，4-噻嗪烷-4-甲酰胺1-氧化物
[0063] 3-({[1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1-氧撑-1λ4，4-噻嗪烷-4-基]羰基}氨基)丙酸乙酯
[0064] 4-({[1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰4
基}亚氨基)-1-氧撑-1λ，4-噻嗪烷-4-基]羰基}氨基)丁酸乙酯
基}亚氨基)-1-氧撑-1λ，4-噻嗪烷-4-基]羰基}氨基)丁酸乙酯
[0065] 3-({[1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1-氧撑-1λ4，4-噻嗪烷-4-基]羰基}氨基)丙酸
[0066] 4-({[1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰4
基}亚氨基)-1-氧撑-1λ，4-噻嗪烷-4-基]羰基}氨基)丁酸
基}亚氨基)-1-氧撑-1λ，4-噻嗪烷-4-基]羰基}氨基)丁酸
[0067] N-[3-(3-羟基吡咯烷-1-基)-3-氧代丙基]-1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1λ4，4-噻嗪烷-4-甲酰胺1-氧化物[0068] N-[4-(3-羟基吡咯烷-1-基)-4-氧代丁基]-1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰4
基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1λ，4-噻嗪烷-4-甲酰胺1-氧化物[0069] N-{4-[(2，3-二羟丙基)氨基]-4-氧代丁基}-1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1λ4，4-噻嗪烷-4-甲酰胺1-氧化物[0070] ({[1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1-氧撑-1λ4，4-噻嗪烷-4-基]羰基}氨基)乙酸乙酯
基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1λ，4-噻嗪烷-4-甲酰胺1-氧化物[0069] N-{4-[(2，3-二羟丙基)氨基]-4-氧代丁基}-1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1λ4，4-噻嗪烷-4-甲酰胺1-氧化物[0070] ({[1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1-氧撑-1λ4，4-噻嗪烷-4-基]羰基}氨基)乙酸乙酯
[0071] ({[1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1-氧撑-1λ4，4-噻嗪烷-4-基]羰基}氨基)乙酸
[0072] 1-({[6-氨基-5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1λ4，4-噻嗪烷-4-甲酸叔丁酯1-氧化物
[0073] 6-氨基-5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)-N-(1-氧撑-1λ4，4-噻嗪烷-1-亚基)烟酰胺
[0074] 1-({[6-氨基-5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1λ4，4-噻嗪烷-4-甲酰胺1-氧化物
[0075] 1-({[6-氨基-5-({3-[(2-氟-5-甲基苯甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1λ4，4-噻嗪烷-4-甲酸叔丁酯1-氧化物
[0076] 6-氨基-5-({3-[(2-氟-5-甲基苯甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)-N-(1-氧撑-1λ4，4-噻嗪烷-1-亚基)烟酰胺
[0077] 1-({[6-氨基-5-({3-[(2-氟-5-甲基苯甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1λ4，4-噻嗪烷-4-甲酰胺1-氧化物
[0078] 5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)-N-(4-氧撑-1，4λ4-氧硫杂环己烷-4-亚基)烟酰胺、
[0079] 6-氨基-5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)-N-(4-氧撑-1，4λ4-氧硫杂环己烷-4-亚基)烟酰胺、
[0080] 6-氨基-5-({3-[(2-氟-5-甲基苯甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)-N-(4-氧撑-1，4λ4-氧硫杂环己烷-4-亚基)烟酰胺、
[0081] 6-氨基-5-[(3-{[(2-氟-5-甲基苯基)氨基]羰基}苯基)乙炔基]-N-(4-氧撑-1，4λ4-氧硫杂环己烷-4-亚基)烟酰胺、
[0082] 6-氨基-5-{[3-({[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]氨基}羰基)苯基]乙炔基}-N-(4-氧撑-1，4λ4-氧硫杂环己烷-4-亚基)烟酰胺、
[0083] 6-氨基-5-[(3-{[(5-叔丁基异噁唑-3-基)氨基]羰基}苯基)乙炔基]-N-(4-氧撑-1，4λ4-氧硫杂环己烷-4-亚基)烟酰胺和
[0084] 6-氨基-5-[(3-{[(3-甲氧基苯基)氨基]羰基}苯基)乙炔基]-N-(4-氧撑-1，4λ4-氧硫杂环己烷-4-亚基)烟酰胺。
[0085] 式I和II的化合物可用作激酶抑制剂。如此，式I的化合物将适用于治疗与不受调节的酪氨酸激酶信号转导有关的疾病，例如癌症、血管增生性病症、纤维化病症和神经变性疾病。特别是，本发明的化合物适用于治疗系膜细胞增生性病症和代谢性疾病、翼状胬肉、关节炎、再狭窄、肝硬化、动脉粥样硬化、银屑病、红斑痤疮、糖尿病、伤口愈合及神经变性疾病，并且优选是眼科疾病，即糖尿病性视网膜病变、与年龄有关的黄斑变性、早产儿的视网膜病变、翼状胬肉、睑结膜炎、慢性过敏性结膜炎、复发性巩膜外层炎、干燥性角结膜炎。此外可用本发明的化合物治疗以下皮肤病学适应症：日光灼伤、湿疹、银屑病、接触性皮炎。
具体实施方式
[0086] 本发明进一步涉及包含药学上有效量的一种或多种上述化合物和药学上可接受的载体或赋形剂的药物组合物，其中所述组合物用于治疗上述疾病和病状是有效的；特别是眼科疾病和病状。据信这种组合物通过酪氨酸激酶或通过抑制催化活性、对ATP的亲和力或与底物相互作用的能力来调整信号转导。
[0087] 更具体地，本发明的组合物可包括在治疗疾病的方法中，所述疾病包括增生、纤维化或代谢性病症，例如癌症、纤维化、银屑病、红斑痤疮、动脉粥样硬化、关节炎及与不正常的血管发生和/或血管生成有关的其它病症，如渗出性与年龄有关的黄斑变性和糖尿病性视网膜病变。本发明的组合物也适用于治疗翼状胬肉、睑结膜炎、慢性过敏性结膜炎、复发性巩膜外层炎、干燥性角结膜炎。此外可治疗以下皮肤病学适应症：日光灼伤、湿疹、银屑病接触性皮炎
[0088] 最优选地，本发明的化合物适用于治疗眼科疾病，其中所述眼科疾病选自翼状胬肉、与自动发炎的翼状胬肉有关的充血、切除外科手术之后的复发性翼状胬肉、用以防止切除后的复发性翼状胬肉的预防性治疗、接近视轴的进行性翼状胬肉、与翼状胬肉相关的慢性低度充血、角膜新生血管化、新生血管性青光眼、虹膜新生血管化、慢性过敏性结膜炎、眼红斑痤疮、睑结膜炎、复发性巩膜外层炎、干燥性角结膜炎、眼移植物抗宿主病、糖尿病性视网膜病变、糖尿病性黄斑水肿、增生性糖尿病性视网膜病变、渗出性或新生血管性与年龄有关的黄斑变性、患有干性与年龄有关的黄斑变性的高危眼(即对侧眼有新生血管性与年龄有关的黄斑变性)、与视网膜静脉阻塞相关的新生血管性疾病、与以下相关的新生血管性疾病(包括脉络膜新生血管化)：病理性近视、弹性假黄瘤、视神经脉络膜小疣、外伤性脉络膜破裂、特发性病因、推测的眼组织胞浆菌病综合症和早产儿的视网膜病变。
[0089] 本说明书通篇中使用以下定义的术语：
[0090] “BOP”是指苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸盐
[0091] “BOC”是指二碳酸二叔丁酯
[0092] “DCM”是指二氯甲烷
[0093] “DIPEA”是指二异丙基乙胺
[0094] “DMAP”是指二甲基甲酰胺
[0095] “DMF”是指二甲基甲酰胺
[0096] “EDCI”是指N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺
[0097] “PDGF”是指血小板衍生的生长因子。
[0098] “PDGFR”是指血小板衍生的生长因子受体。
[0099] “Ph”是指苯基
[0100] “PTK”是指蛋白酪氨酸激酶
[0101] “RT”是指室温
[0102] “RTK”是指受体酪氨酸激酶
[0103] “THF”是指四氢呋喃
[0104] “VEGF”是指血管内皮生长因子
[0105] “VEGFR”是指血管内皮生长因子受体
[0106] “烃基”是指只有碳和氢原子的烃自由基。优选地，烃基自由基具有1至20个碳原子，更优选1至12个碳原子，且最优选1至7个碳原子。
[0107] “取代的烃基”是指这样的烃基自由基，其中一个或多个但非全部的氢和/或碳原子被卤素、氮、氧、硫或磷原子或包括卤基、氮、氧、硫或磷原子的自由基(例如氟、氯、氰基、硝基、二烷基氨基、羟基、磷酸酯、硫醇等)置换。
[0108] 式I和II的化合物可形成盐，这些盐也属于本发明的范围以内。除另指出外，提及本文的式I或II的化合物被理解为包括提及其盐。如本文所采用的术语“盐”表示与无机和/或有机酸形成的酸性盐以及与无机和/或有机碱形成的碱性盐。此外，当式I或II的化合物含有碱性部分(如但不限于吡啶或咪唑)和酸性部分(如但不限于羧酸)两者时，可能形成两性离子(“内盐”)并且其包括在本文所用的术语“盐”含义内。药学上可接受的(即，无毒性生理上可接受的)盐是优选的，尽管其它的盐也适用。可例如通过使式I或II的化合物与一定数量的酸或碱(如当量数量)于诸如盐在其中沉淀的介质中或者于水性介质中反应，接着进行冷冻干燥，来形成式I和II的化合物的盐。
[0109] 示例性酸加成盐包括乙酸盐、抗坏血酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、硼酸盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、富马酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、萘磺酸盐、硝酸盐、草酸盐、磷酸盐、丙酸盐、水杨酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐(toluenesulfonate/tosylate)等。另外，例如由P.Stahl等人，Camille G.(编辑)Handbook of Pharmaceutical Salts.Properties，Selection and Use.(2002)Zurich：Wiley-VCH；S.Berge等人，Journal of Pharmaceutical Sciences(1977)66(1)1-19；P.Gould，International J.of
Pharmaceutics(1986)33201-217；Anderson等人，The Practice of Medicinal Chemistry(1996)，Academic Press，New York；和在The Orange Book(Food&Drug Administration，Washington，D.C.，在其网站上)中讨论了通常被认为适合于由碱性药物化合物形成药学上有用的盐的酸。这些公开内容以对其引用的方式并入本文。
Pharmaceutics(1986)33201-217；Anderson等人，The Practice of Medicinal Chemistry(1996)，Academic Press，New York；和在The Orange Book(Food&Drug Administration，Washington，D.C.，在其网站上)中讨论了通常被认为适合于由碱性药物化合物形成药学上有用的盐的酸。这些公开内容以对其引用的方式并入本文。
[0110] 示例性碱性盐包括铵盐；碱金属盐，如钠、锂和钾盐；碱土金属盐，如钙和镁盐；与有机碱(例如，有机胺)(如二环己基胺、叔丁胺)的盐；和与氨基酸(如精氨酸、赖氨酸等)的盐。碱性含氮基团可用诸如以下的试剂季铵化：低级烷基卤化物(例如甲基、乙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物)；硫酸二烷基酯(例如硫酸二甲酯、二乙酯和二丁酯)；长链卤化物(例如癸基、月桂基和硬脂酰基氯化物、溴化物和碘化物)；芳烷基卤化物(例如苄基和苯乙基溴化物)；等等。出于本发明的目的，所有这类酸盐和碱盐旨在为本发明范围内的药学上可接受的盐，并且所有的酸和碱盐被认为是等同于相应化合物的游离形式。
[0111] 本文中也设想本发明的化合物的前药和溶剂合物。在T.Higuchi和V.Stella，A.C.S.Symposium Series的Pro-drugs as Novel Delivery Systems(1987)14中和在Bioreversible Carriers in Drug Design，(1987)Edward B.Roche编辑，American Pharmaceutical Association and Pergamon Press中提供了前药的讨论。术语“前药”意指体内转化以产生式(I)的化合物或化合物的药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物的化合物(例如，药物前体)。可通过各种机制发生转化(例如，通过代谢或化学过程)，举例如通过在血液中水解。由T.Higuchi和W.25Stella，A.C.S.Symposium Series的第14卷，“Pro-drugs as Novel Delivery Systems，”和在Bioreversible Carriers in Drug Design，Edward B.Roche编辑，American Pharmaceutical Association and Pergamon Press，1987中提供了前药的用途讨论。
[0112] “烷基”是指直链、支链或环状饱和脂族烃。优选地，烷基基团具有1至12个碳。更优选地，其是1至7个碳、最优选1至4个碳的低级烷基。典型的烷基基团包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、己基等。烷基基团可任选用一个或多个选自羟基、氰基、烷氧基、＝O、＝S、NO2、卤素、二甲基氨基和SH的取代基取代。
[0113] “烷氧基”是指O-烷基。
[0114] “芳基”是指具有至少一个具有共轭π电子体系的环的芳族基团，并且包括碳环芳基、杂环芳基和联芳基基团。芳基基团可任选用一个或多个选自卤素、三卤代甲基(例如，三氟甲基)、羟基、SH、OH、NO2、胺、硫醚、氰基、烷氧基、烷基和氨基的取代基取代。
[0115] “碳环芳基”是指其中环原子是碳的芳基基团
[0116] “杂芳基”或“杂环芳基”是指具有1至3个杂原子作为环原子、其余的环原子是碳的芳基基团。杂原子包括氧、硫和氮。因此，杂芳基基团包括呋喃基、噻吩基、吡啶基、吡咯基、N-低级烷基吡咯并、嘧啶基、吡嗪基、咪唑基等。
[0117] “杂环”是指具有至少一个被束缚的杂原子的环状基团，并且包括芳族和非芳族环状基团。
[0118] 下表中给出本发明的化合物的具体实施例和所述化合物的结构。然而，本发明不限于以下的化合物和结构。
[0119]
[0120]
[0121]
[0122]
[0123]
[0124] 式I的化合物的路线由下面提供的方案示出，但不限于下文提供的方案：
[0125] 方案1
[0126]
[0127] 方案2
[0128]
[0129] 式II的化合物的路线由下面提供的方案示出，但不限于下文提供的方案：
[0130] 方案3
[0131]
[0132] 方案4
[0133]
[0134] 通过以下非限制性实施例对本发明进行进一步说明。
[0135] 制备1
[0136]
[0137] 硫代吗啉-4-甲酸叔丁酯
[0138] 在氮气氛和搅拌条件下向硫代吗啉(4.84mL，50mmol，1eq)于DCM(200mL)中的溶液中添加Et3N(14.6mL，2.1eq)和二碳酸二叔丁酯(12.0g，1.1eq)。将所得到的澄清溶液在RT下搅拌过夜。将反应溶液用H2O(1X)、NH4Cl水溶液(1X)、盐水(1X)洗涤并经无水MgSO4干燥。通过硅藻土垫过滤有机溶液并浓缩滤液。在搅拌条件下用EtOAc-己烷(1∶25)处理白色固体残留物，然后在冰箱中冷却30min。收集形成的白色固体得到标题化合物，为白色结晶固体(10.1g，定量)。1H NMR(DMSO-d6)δ：3.54-3.59(m，4H)，2.48-2.54(m，4H)，1.40(s，9H)[0139] 制备2
[0140]
[0141] 硫代吗啉-4-甲酸叔丁酯1-氧化物
[0142] 在配有磁力搅拌器的250mL圆底烧瓶中放入粉状偏高碘酸钠(5.68g，1.05eq)和水(50mL)。首先将混合物在RT下搅拌，然后冷却到0℃，接着添加硫代吗啉-4-甲酸叔丁酯(5.08g，25mmol，1eq)。然后向此混合物中添加二噁烷(dixane)(30mL)和MeOH(40mL)。将反应混合物在0℃下搅拌5.5小时。然后将其通过布氏漏斗进行过滤，用CHCl3(3X50mL)洗涤白色固体，并将所得到的水-氯仿滤液转移到分离漏斗当中。移除下部的氯仿并用CHCl3(3X 150mL)萃取水层。将有机相合并且经无水Na2SO4干燥过夜。然后倾析上部澄清层并浓缩，得到标题化合物，为白色固体(5.41g，99％)。1H NMR(DMSO-d6)δ：3.81(d，J＝13.4Hz，2H)，3.60(br.s.，2H)，2.76-2.84(m，2H)，2.65-2.71(m，2H)，1.41(s，9H)
[0143] 制备3
[0144]
[0145] 1-亚氨基-1λ4，4-噻嗪烷-4-甲酸叔丁酯1-氧化物
[0146] 将三氟乙酰胺(5.82g，2eq)、氧化镁(4.05g，4eq)和二聚乙酸铑(II)(330mg，0.03eq)放入250mL圆底烧瓶中。然后在搅拌条件和氮气氛下添加二氯甲烷(70mL)，接着添加硫代吗啉-4-甲酸叔丁酯1-氧化物(5.41g，1eq)和二乙酰氧基碘苯(12.1g，1.5eq)。将反应混合物在RT下搅拌过夜。然后将其通过硅藻土和硅胶垫进行过滤，首先用DCM然后用EtOAc洗涤。浓缩滤液并将所得到的油状残留物溶于MeOH(250mL)，向其中添加碳酸钾(17.3g，5eq)。将反应混合物在RT下搅拌2小时，通过硅藻土和硅胶垫进行过滤并用MeOH洗涤。减压浓缩滤液，并在RT和搅拌条件下用EtOAc处理所得到的浅棕色油状残留物。将混合物再次过滤并将滤液浓缩，产生标题化合物，为粗品浅棕色软固体，将其直接使用而无需进一步纯化。1H NMR(DMSO-d6)δ：3.84(ddd，J＝14.4，4.5，4.4Hz，2H)，3.79(s，1H)，3.49-3.58(m，2H)，2.96(t，J＝4.3Hz，4H)，1.41(s，9H)
[0147] 实施例1：
[0148]
[0149] 1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1λ4，4-噻嗪烷-4-甲酸叔丁酯1-氧化物
[0150] 将1-亚氨基-1λ4，4-噻嗪烷-4-甲酸叔丁酯1-氧化物(468mg，2mmol，1eq)和5-{3-[(3-甲基-呋喃-2-羰基)-氨基]-苯基乙炔基}-烟酸(730mg，1.05eq)于DMF(7mL)中的搅拌溶液在氮气氛下用DIPEA(0.70mL，2eq)和BOP(1.0g，1.1eq)处理。将所得到的反应混合物在RT下搅拌15分钟，然后用EtOAc稀释。将混合物依次用饱和aqNaHCO3(2X)、aq NH4Cl(1X)和盐水(1X)洗涤，然后用无水Na2SO4干燥并浓缩。通过梯度色谱法(EtOAc-Hex从1∶3至1∶1)纯化残留物，得到标题化合物，为白色泡沫状物(820mg，73％)。1H NMR(DMSO-d6)δ：10.21(s，1H)，9.11(d，J＝2.0Hz，1H)，8.93(d，J＝2.0Hz，1H)，8.44(t，J＝2.1Hz，1H)，8.14(t，J＝1.7Hz，
1H)，7.77-7.83(m，2H)，7.39-7.44(m，1H)，7.34(dt，J＝7.8，1.0Hz，1H)，6.61(d，J＝1.2Hz，
1H)，3.99-4.10(m，2H)，3.80-3.86(m，2H)，3.55-3.67(m，4H)，2.35(s，3H)，1.43(s，9H)[0151] 实施例2：
1H)，7.77-7.83(m，2H)，7.39-7.44(m，1H)，7.34(dt，J＝7.8，1.0Hz，1H)，6.61(d，J＝1.2Hz，
1H)，3.99-4.10(m，2H)，3.80-3.86(m，2H)，3.55-3.67(m，4H)，2.35(s，3H)，1.43(s，9H)[0151] 实施例2：
[0152]
[0153] 5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)-N-(1-氧撑-1λ4，4-噻嗪烷-1-亚基)烟酰胺
[0154] 将1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1λ4，4-噻嗪烷-4-甲酸叔丁酯1-氧化物(260mg，0.46mmol，1eq)于DCM(2.0mL)中的0℃溶液用三氟乙酸(0.72mL)逐滴处理，并在RT和搅拌条件下反应3小时。将反应混合物用氯仿稀释，用饱和aq NaHCO3(1X)、盐水(1X)洗涤，并用无水Na2SO4干燥过夜。倾析上部澄清层，浓缩，并通过柱色谱法(MeOH-CHCl31∶100至1∶25)纯化油状残留物，得到标题化合物，为白色固体(172mg，81％)。1H NMR(DMSO-d6)δ：10.21(s，1H)，9.11(d，J＝2.0Hz，1H)，8.93(d，J＝2.1Hz，1H)，8.42(t，J＝2.0Hz，1H)，8.13(t，J＝1.7Hz，1H)，7.78-7.82(m，2H)，7.39-7.43(m，1H)，7.34(dt，J＝7.6，1.2Hz，1H)，6.61(d，J＝1.5Hz，1H)，3.75(dt，J＝13.9，2.6Hz，
2H)，3.33-3.40(m，2H)，3.24-3.30(m，2H)，3.00-3.09(m，2H)，2.35(s，3H)。
2H)，3.33-3.40(m，2H)，3.24-3.30(m，2H)，3.00-3.09(m，2H)，2.35(s，3H)。
[0155] 实施例3
[0156]
[0157] 1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨4
基)-1λ，4-噻嗪烷-4-甲酰胺1-氧化物
基)-1λ，4-噻嗪烷-4-甲酰胺1-氧化物
[0158] 按类似于实施例5中描述的方式，将5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)-N-(1-氧撑-1λ4，4-噻嗪烷-1-亚基)烟酰胺和异氰酸根合三甲基硅烷转化成标题化合物。
[0159] 1H NMR(DMSO-d6)δ：10.21(s，1H)，9.12(d，J＝2.0Hz，1H)，8.93(d，J＝2.1Hz，1H)，8.44(t，J＝2.1Hz，1H)，8.13(t，J＝1.6Hz，1H)，7.82(d，J＝1.5Hz，1H)，7.78-7.81(m，1H)，
7.39-7.43(m，1H)，7.34(dt，J＝7.7，1.1Hz，1H)，6.61(d，J＝1.5Hz，1H)，6.35(s，2H)，4.05-
4.12(m，2H)，3.77-3.83(m，2H)，3.56-3.64(m，2H)，3.46-3.53(m，2H)，2.35(s，3H)[0160] 实施例4
7.39-7.43(m，1H)，7.34(dt，J＝7.7，1.1Hz，1H)，6.61(d，J＝1.5Hz，1H)，6.35(s，2H)，4.05-
4.12(m，2H)，3.77-3.83(m，2H)，3.56-3.64(m，2H)，3.46-3.53(m，2H)，2.35(s，3H)[0160] 实施例4
[0161]
[0162] 3.({[1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1-氧撑-1λ4，4-噻嗪烷-4-基]羰基}氨基)丙酸乙酯
[0163] 按类似于实施例5中描述的方式，将5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)-N-(1-氧撑-1λ4，4-噻嗪烷-1-亚基)烟酰胺和3-异氰酸根合丙酸乙酯转化成标题化合物。
[0164] 1H NMR(DMSO-d6)δ：10.21(s，1H)，9.12(d，J＝2.0Hz，1H)，8.93(d，J＝2.1Hz，1H)，8.44(t，J＝2.0Hz，1H)，8.13(t，J＝1.7Hz，1H)，7.82(d，J＝1.6Hz，1H)，7.78-7.81(m，1H)，
7.39-7.43(m，1H)，7.34(dt，J＝7.6，1.1Hz，1H)，7.02(t，J＝5.3Hz，1H)，6.61(d，J＝1.5Hz，
1H)，4.02-4.10(m，4H)，3.77-3.83(m，2H)，3.56-3.64(m，2H)，3.44-3.51(m，2H)，3.26-3.30(m，2H)，2.45-2.49(m，2H)，2.35(s，3H)，1.18(t，J＝7.1Hz，3H)
7.39-7.43(m，1H)，7.34(dt，J＝7.6，1.1Hz，1H)，7.02(t，J＝5.3Hz，1H)，6.61(d，J＝1.5Hz，
1H)，4.02-4.10(m，4H)，3.77-3.83(m，2H)，3.56-3.64(m，2H)，3.44-3.51(m，2H)，3.26-3.30(m，2H)，2.45-2.49(m，2H)，2.35(s，3H)，1.18(t，J＝7.1Hz，3H)
[0165] 实施例5
[0166]
[0167] 4-({[1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1-氧撑-1λ4，4-噻嗪烷-4-基]羰基}氨基)丁酸乙酯
[0168] 向5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)-N-(1-氧撑-1λ4，4-噻嗪烷-1-亚基)烟酰胺_(实施例2)(170mg，0.368mmol，1eq)于DMF(2mL)中的溶液中滴加4-异氰酸根合丁酸乙酯(179mg，3eq)，并在RT下搅拌反应3小时。然后将反应物倒入饱和aq NaHCO3当中并用EtOAc萃取。然后用aq NH4Cl(1X)、盐水(1X)洗涤分离的有机层，用无水Na2SO4干燥并浓缩。通过梯度柱色谱法(EtOAc-Hex 3∶1至6∶1)纯化残留物，得到标题化合物，为白色固体(196mg，86％)。
[0169] 1H NMR(DMSO-d6)δ：10.21(s，1H)，9.12(d，J＝2.1Hz，1H)，8.93(d，J＝2.1Hz，1H)，8.44(t，J＝2.0Hz，1H)，8.13(t，J＝1.7Hz，1H)，7.82(d，J＝1.6Hz，1H)，7.78-7.81(m，1H)，
7.39-7.43(m，1H)，7.34(dt，J＝7.7，1.2Hz，1H)，6.90(t，J＝5.4Hz，1H)，6.61(d，J＝1.6Hz，
1H)，4.01-4.12(m，4H)，3.76-3.83(m，2H)，3.62(dd，J＝13.1，9.4Hz，2H)，3.46-3.53(m，
2H)，3.04-3.09(m，2H)，2.35(s，3H)，2.31(t，J＝7.5Hz，2H)，1.68(quin，J＝7.2Hz，2H)，
1.17(t，J＝7.1Hz，3H)
7.39-7.43(m，1H)，7.34(dt，J＝7.7，1.2Hz，1H)，6.90(t，J＝5.4Hz，1H)，6.61(d，J＝1.6Hz，
1H)，4.01-4.12(m，4H)，3.76-3.83(m，2H)，3.62(dd，J＝13.1，9.4Hz，2H)，3.46-3.53(m，
2H)，3.04-3.09(m，2H)，2.35(s，3H)，2.31(t，J＝7.5Hz，2H)，1.68(quin，J＝7.2Hz，2H)，
1.17(t，J＝7.1Hz，3H)
[0170] 实施例6
[0171]
[0172] 3-({[1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1-氧撑-1λ4，4-噻嗪烷-4-基]羰基}氨基)丙酸
[0173] 按类似于实施例7中描述的方式，将3-({[1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1-氧撑-1λ4，4-噻嗪烷-4-基]羰基}氨基)丙酸乙酯转化成标题化合物。
[0174] 1H NMR(DMSO-d6)δ：12.09(br.s.，1H)，10.21(s，1H)，9.12(d，J＝2.0Hz，1H)，8.93(d，J＝2.1Hz，1H)，8.44(t，J＝2.0Hz，1H)，8.13(t，J＝1.6Hz，1H)，7.77-7.83(m，2H)，7.39-7.43(m，1H)，7.34(d，J＝7.7Hz，1H)，7.00(t，J＝5.0Hz，1H)，6.61(d，J＝1.6Hz，1H)，4.04-
4.11(m，2H)，3.76-3.83(m，2H)，3.56-3.64(m，2H)，3.44-3.52(m，2H)，3.23-3.29(m，2H)，
2.40(t，J＝7.0Hz，2H)，2.35(s，3H)
4.11(m，2H)，3.76-3.83(m，2H)，3.56-3.64(m，2H)，3.44-3.52(m，2H)，3.23-3.29(m，2H)，
2.40(t，J＝7.0Hz，2H)，2.35(s，3H)
[0175] 实施例7
[0176]
[0177] 4-({[1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1-氧撑-1λ4，4-噻嗪烷-4-基]羰基}氨基)丁酸
[0178] 将4-({[1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1-氧撑-1λ4，4-噻嗪烷-4-基]羰基}氨基)丁酸乙酯(实施例5)(182mg，0.294mmol，1eq)于THF(4mL)中的溶液用1NKOH(1.5mL)逐滴处理，并在RT下搅拌反应3小时。
将反应物冷却到0℃并滴加2N aq HCl(0.6mL)。将所得到的混合物在aq NH4Cl与EtOAc之间分配。将有机层分离，用盐水(1X)洗涤，并经无水Na2SO4干燥。将澄清的上部溶液倾析、浓缩。
通过柱色谱法(MeOH-DCM 1∶20至1∶10)纯化残留物，得到标题化合物，为白色固体(148mg，
77％)。
将反应物冷却到0℃并滴加2N aq HCl(0.6mL)。将所得到的混合物在aq NH4Cl与EtOAc之间分配。将有机层分离，用盐水(1X)洗涤，并经无水Na2SO4干燥。将澄清的上部溶液倾析、浓缩。
通过柱色谱法(MeOH-DCM 1∶20至1∶10)纯化残留物，得到标题化合物，为白色固体(148mg，
77％)。
[0179] 1H NMR(DMSO-d6)δ：12.00(br.s.，1H)，10.21(s，1H)，9.12(d，J＝2.1Hz，1H)，8.93(d，J＝2.1Hz，1H)，8.44(t，J＝2.0Hz，1H)，8.13(dt，J＝6.8，1.6Hz，1H)，7.78-7.83(m，2H)，7.39-7.44(m，1H)，7.34(dd，J＝7.6，1.2Hz，1H)，6.90(t，J＝5.3Hz，1H)，6.61(d，J＝1.1Hz，
1H)，4.05-4.13(m，2H)，3.77-3.84(m，2H)，3.57-3.65(m，2H)，3.45-3.52(m，2H)，3.03-3.09(m，2H)，2.35(s，3H)，2.23(t，J＝7.3Hz，2H)，1.66(quin，J＝7.2Hz，2H)。
1H)，4.05-4.13(m，2H)，3.77-3.84(m，2H)，3.57-3.65(m，2H)，3.45-3.52(m，2H)，3.03-3.09(m，2H)，2.35(s，3H)，2.23(t，J＝7.3Hz，2H)，1.66(quin，J＝7.2Hz，2H)。
[0180] 实施例8
[0181]
[0182] N-[3-(3-羟基吡咯烷-1-基)-3-氧代丙基]-1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1λ4，4-噻嗪烷-4-甲酰胺1-氧化物[0183] 按类似于实施例9中描述的方式，将3-({[1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1-氧撑-1λ4，4-噻嗪烷-4-基]羰基}氨基)丙酸和DL-吡咯烷-3-醇转化成标题化合物。
[0184] 1H NMR(DMSO-d6)δ：10.21(s，1H)，9.12(d，J＝2.0Hz，1H)，8.93(d，J＝2.1Hz，1H)，8.44(t，J＝2.1Hz，1H)，8.13(t，J＝1.6Hz，1H)，7.82(d，J＝1.5Hz，1H)，7.78-7.81(m，1H)，
7.39-7.43(m，1H)，7.34(dt，J＝7.6，1.1Hz，1H)，6.96(t，J＝5.3Hz，1H)，6.61(d，J＝1.3Hz，
1H)，4.88-4.99(m，1H)，4.20-4.31(m，1H)，4.07(dd，J＝16.0，2.8Hz，2H)，3.77-3.83(m，
2H)，3.60(dd，J＝13.9，9.0Hz，2H)，3.36-3.52(m，4H)，3.21-3.29(m，4H)，2.37-2.46(m，
2H)，2.35(s，3H)，1.72-1.96(m，2H)
7.39-7.43(m，1H)，7.34(dt，J＝7.6，1.1Hz，1H)，6.96(t，J＝5.3Hz，1H)，6.61(d，J＝1.3Hz，
1H)，4.88-4.99(m，1H)，4.20-4.31(m，1H)，4.07(dd，J＝16.0，2.8Hz，2H)，3.77-3.83(m，
2H)，3.60(dd，J＝13.9，9.0Hz，2H)，3.36-3.52(m，4H)，3.21-3.29(m，4H)，2.37-2.46(m，
2H)，2.35(s，3H)，1.72-1.96(m，2H)
[0185] 实施例9
[0186]
[0187] N-[4-(3-羟基吡咯烷-1-基)-4-氧代丁基]-1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1λ4，4-噻嗪烷-4-甲酰胺1-氧化物[0188] 在0℃下将4-({[1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1-氧撑-1λ4，4-噻嗪烷-4-基]羰基}氨基)丁酸(实施例7)(65mg，
0.11mmol，1eq)和DL-3-吡咯烷醇(43.6mg，5eq)于DMF(1mL)中的溶液用1-羟基-苯并三唑水合物(25.2mg，1.5eq)、DIPEA(0.14mL，7eq)和BOP(73mg，1.5eq)处理。将反应混合物在0℃下搅拌30分钟，然后将其倒入aq NH4Cl当中。用EtOAc萃取反应混合物。将有机层用饱和aq NaHCO3和盐水的组合(1X)、盐水(1X)洗涤，并最后用无水Na2SO4干燥。通过梯度柱色谱法(从纯EtOAc至MeOH-EtOAc 1∶5)纯化残留物，得到标题化合物，为白色固体(39mg，53％)。
0.11mmol，1eq)和DL-3-吡咯烷醇(43.6mg，5eq)于DMF(1mL)中的溶液用1-羟基-苯并三唑水合物(25.2mg，1.5eq)、DIPEA(0.14mL，7eq)和BOP(73mg，1.5eq)处理。将反应混合物在0℃下搅拌30分钟，然后将其倒入aq NH4Cl当中。用EtOAc萃取反应混合物。将有机层用饱和aq NaHCO3和盐水的组合(1X)、盐水(1X)洗涤，并最后用无水Na2SO4干燥。通过梯度柱色谱法(从纯EtOAc至MeOH-EtOAc 1∶5)纯化残留物，得到标题化合物，为白色固体(39mg，53％)。
[0189] 1H NMR(DMSO-d6)δ：10.21(s，1H)，9.12(d，J＝2.0Hz，1H)，8.93(d，J＝2.2Hz，1H)，8.44(t，J＝2.1Hz，1H)，8.13(t，J＝1.6Hz，1H)，7.78-7.83(m，2H)，7.39-7.43(m，1H)，7.34(dt，J＝7.6，1.1Hz，1H)，6.91(t，J＝4.9Hz，1H)，6.61(d，J＝1.5Hz，1H)，4.87-4.98(m，1H)，
4.20-4.31(m，1H)，4.09(d，J＝16.1Hz，2H)，3.77-3.82(m，2H)，3.62(dd，J＝13.6，9.4Hz，
2H)，3.35-3.52(m，4H)，3.20-3.30(m，2H)，3.07(q，J＝5.9Hz，2H)，2.35(s，3H)，2.18-2.28(m，2H)，1.63-1.93(m，4H)。
4.20-4.31(m，1H)，4.09(d，J＝16.1Hz，2H)，3.77-3.82(m，2H)，3.62(dd，J＝13.6，9.4Hz，
2H)，3.35-3.52(m，4H)，3.20-3.30(m，2H)，3.07(q，J＝5.9Hz，2H)，2.35(s，3H)，2.18-2.28(m，2H)，1.63-1.93(m，4H)。
[0190] 实施例10
[0191]
[0192] N-{4-[(2，3-二羟丙基)氨基]-4-氧代丁基}-1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1λ4，4-噻嗪烷-4-甲酰胺1-氧化物[0193] 按类似于实施例9中描述的方式，将4-({[1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1-氧撑-1λ4，4-噻嗪烷-4-基]羰基}氨基)丁酸和3-氨基丙烷-1，2-二醇的溶液转化成标题化合物。
[0194] 1H NMR(DMSO-d6)δ：10.21(s，1H)，9.12(d，J＝2.0Hz，1H)，8.93(d，J＝2.2Hz，1H)，8.44(t，J＝2.1Hz，1H)，8.13(t，J＝1.6Hz，1H)，7.76-7.83(m，3H)，7.39-7.43(m，1H)，7.34(d，J＝7.8Hz，1H)，6.90(t，J＝5.1Hz，1H)，6.61(d，J＝1.5Hz，1H)，4.72(d，J＝4.9Hz，1H)，
4.50(t，J＝5.9Hz，1H)，4.06-4.12(m，2H)，3.77-3.83(m，2H)，3.61(dd，J＝13.4，9.8Hz，
2H)，3.44-3.52(m，3H)，3.26(dtd，J＝10.5，5.5，5.3Hz，2H)，3.18(ddd，J＝13.3，5.6，
5.5Hz，1H)，3.01-3.07(m，2H)，2.93-2.99(m，1H)，2.35(s，3H)，2.11(t，J＝7.5Hz，2H)，1.65(dt，J＝14.5，7.3Hz，2H)
4.50(t，J＝5.9Hz，1H)，4.06-4.12(m，2H)，3.77-3.83(m，2H)，3.61(dd，J＝13.4，9.8Hz，
2H)，3.44-3.52(m，3H)，3.26(dtd，J＝10.5，5.5，5.3Hz，2H)，3.18(ddd，J＝13.3，5.6，
5.5Hz，1H)，3.01-3.07(m，2H)，2.93-2.99(m，1H)，2.35(s，3H)，2.11(t，J＝7.5Hz，2H)，1.65(dt，J＝14.5，7.3Hz，2H)
[0195] 实施例11
[0196]
[0197] ({[1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1-氧撑-1λ4，4-噻嗪烷-4-基]羰基}氨基)乙酸乙酯
[0198] 按类似于实施例5中描述的方式，将5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)-N-(1-氧撑-1λ4，4-噻嗪烷-1-亚基)烟酰胺和2-异氰酸根合乙酸乙酯转化成标题化合物。
[0199] 1H NMR(DMSO-d6)δ：10.21(s，1H)，9.12(d，J＝2.0Hz，1H)，8.93(d，J＝2.1Hz，1H)，8.45(t，J＝2.0Hz，1H)，8.13(s，1H)，7.78-7.83(m，2H)，7.39-7.47(m，2H)，7.34(d，J＝
7.7Hz，1H)，6.61(d，J＝1.6Hz，1H)，4.05-4.14(m，4H)，3.81-3.87(m，2H)，3.78(d，J＝
5.7Hz，2H)，3.65(dd，J＝13.3，9.7Hz，2H)，3.44-3.51(m，2H)，2.35(s，3H)，1.17-1.21(m，
3H)
7.7Hz，1H)，6.61(d，J＝1.6Hz，1H)，4.05-4.14(m，4H)，3.81-3.87(m，2H)，3.78(d，J＝
5.7Hz，2H)，3.65(dd，J＝13.3，9.7Hz，2H)，3.44-3.51(m，2H)，2.35(s，3H)，1.17-1.21(m，
3H)
[0200] 实施例12
[0201]
[0202] ({[1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1-氧撑-1λ4，4-噻嗪烷-4-基]羰基}氨基)乙酸
[0203] 按类似于实施例7中描述的方式，将({[1-({[5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1-氧撑-1λ4，4-噻嗪烷-4-基]羰基}氨基)乙酸乙酯转化成标题化合物。
[0204] 1H NMR(DMSO-d6)δ：10.21(s，1H)，9.12(d，J＝2.1Hz，1H)，8.93(d，J＝2.1Hz，1H)，8.45(t，J＝2.0Hz，1H)，8.13(t，J＝1.6Hz，1H)，7.82(d，J＝1.5Hz，1H)，7.78-7.81(m，1H)，
7.39-7.43(m，1H)，7.34(dt，J＝7.6，1.1Hz，1H)，6.99(br.s.，1H)，6.61(d，J＝1.5Hz，1H)，
4.07-4.14(m，2H)，3.84(dd，J＝11.6，2.8Hz，2H)，3.62(dd，J＝13.6，9.9Hz，2H)，3.48-3.56(m，4H)，2.35(s，3H)
7.39-7.43(m，1H)，7.34(dt，J＝7.6，1.1Hz，1H)，6.99(br.s.，1H)，6.61(d，J＝1.5Hz，1H)，
4.07-4.14(m，2H)，3.84(dd，J＝11.6，2.8Hz，2H)，3.62(dd，J＝13.6，9.9Hz，2H)，3.48-3.56(m，4H)，2.35(s，3H)
[0205] 实施例13
[0206]
[0207] 1-({[6-氨基-5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1λ4，4-噻嗪烷-4-甲酸叔丁酯1-氧化物
[0208] 按类似于实施例1中描述的方式，将1-亚氨基-1λ4，4-噻嗪烷-4-甲酸叔丁酯1-氧化物和6-氨基-5-((3-(3-甲基呋喃-2-甲酰胺基)苯基)乙炔基)烟酸转化成标题化合物。
[0209] 1H NMR(DMSO-d6)δ：10.13(s，1H)，8.60(d，J＝1.5Hz，1H)，8.09(s，2H)，7.81(s，1H)，7.74(d，J＝7.6Hz，1H)，7.32-7.45(m，2H)，7.04(br.s.，2H)，6.61(s，1H)，3.95-4.06(m，2H)，3.70-3.82(m，2H)，3.46-3.67(m，4H)，2.35(s，3H)，1.43(s，9H
[0210] 实施例14
[0211]
[0212] 6-氨基-5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)-N-(1-氧撑-1λ4，4-噻嗪烷-1-亚基)烟酰胺
[0213] 按类似于实施例2中描述的方式，将1-({[6-氨基-5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1λ4，4-噻嗪烷-4-甲酸叔丁酯1-氧化物转化成标题化合物。
[0214] 1H NMR(DMSO-d6)δ：10.13(s，1H)，8.59(d，J＝2.3Hz，1H)，8.08(t，J＝1.8Hz，2H)，7.81(d，J＝1.6Hz，1H)，7.74(ddd，J＝8.4，1.5，1.2Hz，1H)，7.40-7.44(m，1H)，7.34-7.39(m，1H)，7.01(br.s.，2H)，6.61(d，J＝1.6Hz，1H)，3.68(dt，J＝13.6，2.4Hz，2H)，3.19-3.30(m，4H)，2.96-3.04(m，2H)，2.42-2.47(m，1H)，2.35(s，3H)
[0215] 实施例15
[0216]
[0217] 1-({[6-氨基-5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1λ4，4-噻嗪烷-4-甲酰胺1-氧化物
[0218] 按类似于实施例5中描述的方式，将6-氨基-5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)-N-(1-氧撑-1λ4，4-噻嗪烷-1-亚基)烟酰胺和异氰酸根合三甲基硅烷转化成标题化合物。
[0219] 1H NMR(DMSO-d6)δ：10.13(s，1H)，8.60(d，J＝2.2Hz，1H)，8.08-8.11(m，2H)，7.81(d，J＝1.2Hz，1H)，7.74(d，J＝7.8Hz，1H)，7.40-7.44(m，1H)，7.34-7.39(m，1H)，7.03(br.s.，2H)，6.61(d，J＝1.5Hz，1H)，6.33(s，2H)，4.00-4.07(m，2H)，3.70-3.77(m，2H)，3.52-3.60(m，2H)，3.37-3.45(m，2H)，2.35(s，3H)
[0220] 实施例16
[0221]
[0222] 1-({[6-氨基-5-({3-[(2-氟-5-甲基苯甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1λ4，4-噻嗪烷-4-甲酸叔丁酯1-氧化物
[0223] 按类似于实施例1中描述的方式，将1-亚氨基-1λ4，4-噻嗪烷-4-甲酸叔丁酯1-氧化物和6-氨基-5-((3-(2-氟-5-甲基苯甲酰胺基)苯基)乙炔基)烟酸转化成标题化合物。
[0224] 1H NMR(DMSO-d6)δ：10.46(s，1H)，8.60(d，J＝2.2Hz，1H)，8.09(d，J＝2.2Hz，1H)，8.02(s，1H)，7.68(d，J＝7.9Hz，1H)，7.43-7.50(m，2H)，7.36-7.42(m，2H)，7.22-7.26(m，
1H)，7.05(br.s.，2H)，3.97-4.01(m，2H)，3.73-3.79(m，2H)，3.61(br.s.，2H)，3.48-3.55(m，2H)，2.35(s，3H)，1.42(s，9H)
1H)，7.05(br.s.，2H)，3.97-4.01(m，2H)，3.73-3.79(m，2H)，3.61(br.s.，2H)，3.48-3.55(m，2H)，2.35(s，3H)，1.42(s，9H)
[0225] 实施例17
[0226]
[0227] 6-氨基-5-({3-[(2-氟-5-甲基苯甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)-N-(1-氧撑-1λ4，4-噻嗪烷-1-亚基)烟酰胺
[0228] 按类似于实施例2中描述的方式，将1-({[6-氨基-5-({3-[(2-氟-5-甲基苯甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1λ4，4-噻嗪烷-4-甲酸叔丁酯1-氧化物转化成标题化合物。
[0229] 1H NMR(DMSO-d6)δ：10.46(s，1H)，8.59(d，J＝2.2Hz，1H)，8.08(d，J＝2.2Hz，1H)，8.02(s，1H)，7.68(d，J＝7.9Hz，1H)，7.48(dd，J＝6.6，1.6Hz，1H)，7.44-7.46(m，1H)，7.36-
7.42(m，2H)，7.22-7.26(m，1H)，7.03(br.s.，2H)，3.68(ddd，J＝13.7，2.5，2.3Hz，2H)，
3.21-3.31(m，4H)，3.01(ddd，J＝13.6，9.0，1.8Hz，2H)，2.57(br.s.，1H)，2.35(s，3H)[0230] 实施例18
7.42(m，2H)，7.22-7.26(m，1H)，7.03(br.s.，2H)，3.68(ddd，J＝13.7，2.5，2.3Hz，2H)，
3.21-3.31(m，4H)，3.01(ddd，J＝13.6，9.0，1.8Hz，2H)，2.57(br.s.，1H)，2.35(s，3H)[0230] 实施例18
[0231]
[0232] 1-({[6-氨基-5-({3-[(2-氟-5-甲基苯甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)吡啶-3-基]羰基}亚氨基)-1λ4，4-噻嗪烷-4-甲酰胺1-氧化物
[0233] 按类似于实施例5中描述的方式，将6-氨基-5-({3-[(2-氟-5-甲基苯甲酰基)氨4
基]苯基}乙炔基)-N-(1-氧撑-1λ，4-噻嗪烷-1-亚基)烟酰胺和异氰酸根合三甲基硅烷转化成标题化合物。
基]苯基}乙炔基)-N-(1-氧撑-1λ，4-噻嗪烷-1-亚基)烟酰胺和异氰酸根合三甲基硅烷转化成标题化合物。
[0234] 1H NMR(DMSO-d6)δ：10.46(s，1H)，8.60(d，J＝2.2Hz，1H)，8.10(d，J＝2.2Hz，1H)，8.02(s，1H)，7.68(d，J＝7.9Hz，1H)，7.48(dd，J＝6.7，1.8Hz，1H)，7.44-7.47(m，1H)，7.36-
7.42(m，2H)，7.24(dd，J＝9.9，8.7Hz，1H)，7.04(br.s.，2H)，6.32(s，2H)，4.00-4.06(m，
2H)，3.71-3.76(m，2H)，3.57(dd，J＝13.1，9.2Hz，2H)，3.38-3.44(m，2H)，2.35(s，3H)[0235] 实施例19
7.42(m，2H)，7.24(dd，J＝9.9，8.7Hz，1H)，7.04(br.s.，2H)，6.32(s，2H)，4.00-4.06(m，
2H)，3.71-3.76(m，2H)，3.57(dd，J＝13.1，9.2Hz，2H)，3.38-3.44(m，2H)，2.35(s，3H)[0235] 实施例19
[0236]
[0237] 5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)-N-(4-氧撑-1，4λ4-氧硫杂环己烷-4-亚基)烟酰胺
[0238] 按类似于本文中描述的方式，将5-碘-N-(4-氧撑-1，4λ4-氧硫杂环己烷-4-亚基)烟酰胺和3-甲基-呋喃-2-甲酸(3-乙炔基-苯基)-酰胺转化成标题化合物。
[0239] 1H NMR(DMSO-d6)δ：10.21(s，1H)，9.13(d，J＝2.1Hz，1H)，8.94(d，J＝2.1Hz，1H)，8.44(t，J＝2.1Hz，1H)，8.13(t，J＝1.8Hz，1H)，7.82(d，J＝1.5Hz，1H)，7.78-7.81(m，1H)，
7.40-7.43(m，1H)，7.34(dt，J＝7.6，1.2Hz，1H)，6.61(d，J＝1.5Hz，1H)，4.16-4.20(m，2H)，
3.96-4.00(m，2H)，3.91(dt，J＝14.2，2.6Hz，2H)，3.65-3.70(m，2H)，2.35(s，3H)[0240] 制备4
7.40-7.43(m，1H)，7.34(dt，J＝7.6，1.2Hz，1H)，6.61(d，J＝1.5Hz，1H)，4.16-4.20(m，2H)，
3.96-4.00(m，2H)，3.91(dt，J＝14.2，2.6Hz，2H)，3.65-3.70(m，2H)，2.35(s，3H)[0240] 制备4
[0241]
[0242] 6-氨基-5-碘烟酸
[0243] 将6-氨基-5-碘烟酸甲酯(2.78g，10mmol，1eq)和氢氧化钾(2.8g，5eq)于THF/H2O(120mL，3∶1)中的混合物在50℃下加热48小时。然后将反应物冷却到室温并滴加浓HCl，直到pH达到3～4左右。浓缩溶液并通过过滤收集所得到的沉淀物，得到标题化合物，为浅棕色固体(1.77g)。
[0244] 1H NMR(DMSO-d6)δ：12.64(br.s.，1H)，8.47(d，J＝2.1Hz，1H)，8.25(d，J＝1.8Hz，1H)，6.88(br.s.，2H)
[0245] 制备5
[0246]
[0247] 6-氨基-5-碘-N-(4-氧撑-1，4λ4-氧硫杂环己烷-4-亚基)烟酰胺
[0248] 向1，4-氧硫杂环己烷(510mg，3.21mmol，1.05eq)于无水DMF(8mL)中的溶液中添加6-氨基-5-碘烟酸(806mg，1.0eq)、二异丙基乙胺(1.1mL，2eq)和BOP(1.484g，1.1eq)。将反应混合物在60℃下加热20小时，然后在EtOAc与aq NH4Cl之间分配。将有机层分离，用饱和aq NaHCO3(1X)、盐水(1X)进一步洗涤，并用无水Na2SO4干燥过夜。倾析上部溶液层，浓缩，并使棕色油状残留物经受柱色谱法(EtOAc-Hex 1∶5至3∶1)。浓缩产物洗脱级分得到标题化合物，为白色固体(889mg，77％)。
[0249] 1H NMR(DMSO-d6)δ：8.57(d，J＝2.1Hz，1H)，8.35(d，J＝2.1Hz，1H)，6.78(br.s.，2H)，4.10-4.15(m，2H)，3.91(ddd，J＝12.6，8.5，2.1Hz，2H)，3.79-3.84(m，2H)，3.55-3.60(m，2H)
[0250] 实施例20
[0251]
[0252] 6-氨基-5-({3-[(3-甲基-2-呋喃甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)-N-(4-氧撑-1，4λ4-氧硫杂环己烷-4-亚基)烟酰胺
[0253] 在氮气氛下向6-氨基-5-碘-N-(4-氧撑-1，4λ4-氧硫杂环己烷-4-亚基)烟酰胺(57.2mg，0.15mmol，1.0eq)和3-甲基-呋喃-2-甲酸(3-乙炔基-苯基)-酰胺(43.9mg，1.3eq)于无水DMF(1mL)中的溶液中添加双(三苯基膦)二氯化钯(II)(10.5mg，0.1eq)、三乙胺(0.11mL，5.0eq)和碘化铜(I)(5.7mg，0.2eq)。将反应混合物在RT下搅拌15分钟，然后在饱和aq NaHCO3与EtOAc之间分配。分离有机层，用NH4Cl水溶液、盐水进一步洗涤，并用无水Na2SO4干燥。倾析有机相，干燥并浓缩。使残留物经受梯度色谱法(EtOAc-己烷从1∶9至纯EtOAc)。浓缩产物洗脱级分，得到标题化合物，为白色固体(56mg)。
[0254] 1H NMR(DMSO-d6)δ：10.13(s，1H)，8.61(d，J＝2.1Hz，1H)，8.08-8.10(m，2H)，7.81(d，J＝1.8Hz，1H)，7.72-7.75(m，1H)，7.41-7.43(m，1H)，7.35-7.39(m，1H)，7.04(br.s.，2H)，6.60(d，J＝1.5Hz，1H)，4.12-4.17(m，2H)，3.93(ddd，J＝12.5，8.7，2.1Hz，2H)，3.82-
3.86(m，2H)，3.56-3.61(m，2H)，2.35(s，3H)
3.86(m，2H)，3.56-3.61(m，2H)，2.35(s，3H)
[0255] 实施例21
[0256]
[0257] 6-氨基-5-({3-[(2-氟-5-甲基苯甲酰基)氨基]苯基}乙炔基)-N-(4-氧撑-1，4λ4-氧硫杂环己烷-4-亚基)烟酰胺
[0258] 按类似于上面实施例中描述的方式，将6-氨基-5-碘-N-(4-氧撑-1，4λ4-氧硫杂环己烷-4-亚基)烟酰胺和N-(3-乙炔基苯基)-2-氟-5-甲基苯甲酰胺转化成标题化合物。
[0259] 1H NMR(DMSO-d6)δ：10.46(s，1H)，8.61(d，J＝2.1Hz，1H)，8.10(d，J＝2.1Hz，1H)，8.03(s，1H)，7.68(d，J＝8.2Hz，1H)，7.44-7.49(m，2H)，7.36-7.42(m，2H)，7.24(dd，J＝
9.8，8.7Hz，1H)，7.06(br.s.，2H)，4.12-4.16(m，2H)，3.93(ddd，J＝12.5，8.7，1.9Hz，2H)，
3.81-3.86(m，2H)，3.56-3.61(m，2H)，2.35(s，3H)
9.8，8.7Hz，1H)，7.06(br.s.，2H)，4.12-4.16(m，2H)，3.93(ddd，J＝12.5，8.7，1.9Hz，2H)，
3.81-3.86(m，2H)，3.56-3.61(m，2H)，2.35(s，3H)
[0260] 实施例22
[0261]
[0262] 6-氨基-5-[(3-{[(2-氟-5-甲基苯基)氨基]羰基}苯基)乙炔基]-N-(4-氧撑-1，4λ4-氧硫杂环己烷-4-亚基)烟酰胺
[0263] 按类似于上面实施例中描述的方式，将6-氨基-5-碘-N-(4-氧撑-1，4λ4-氧硫杂环己烷-4-亚基)烟酰胺和3-乙炔基-N-(2-氟-5-甲基苯基)苯甲酰胺转化成标题化合物。
[0264] 1H NMR(DMSO-d6)δ：10.15(s，1H)，8.62(d，J＝2.3Hz，1H)，8.27(s，1H)，8.12(d，J＝2.3Hz，1H)，7.96(d，J＝7.6Hz，1H)，7.91(d，J＝7.9Hz，1H)，7.58(t，J＝7.8Hz，1H)，7.41(dd，J＝7.3，1.5Hz，1H)，7.18(dd，J＝10.1，8.7Hz，1H)，7.14(br.s.，2H)，7.06-7.09(m，
1H)，4.12-4.17(m，2H)，3.91-3.96(m，2H)，3.83(ddd，J＝14.2，2.6，2.3Hz，2H)，3.57-3.62(m，2H)，2.31(s，3H)
1H)，4.12-4.17(m，2H)，3.91-3.96(m，2H)，3.83(ddd，J＝14.2，2.6，2.3Hz，2H)，3.57-3.62(m，2H)，2.31(s，3H)
[0265] 制备6
[0266]
[0267] N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-3-碘苯甲酰胺
[0268] 向3-碘苯甲酸(1.28g，5.04mmol，1eq)和4-氯-3-(三氟甲基)-苯胺(1.48g，1.5eq)于无水DMF(15mL)中的混合物中添加催化量的DMAP(123.1mg，0.2eq)和EDCI(1.16g，1.2eq)。在70℃下搅拌反应20小时。然后将其在EtOAc与饱和aq NaHCO3之间分配。用NH4Cl水溶液、盐水进一步洗涤有机层，并用无水硫酸钠干燥。倾析有机层，干燥并浓缩。使残留物经受梯度柱色谱法(从纯Hex至EtOAc-Hex1∶25)。收集产物级分，浓缩，用EtOAc-Hex(1∶25)研磨固体残留物，并将形成的固体收集且干燥，得到标题化合物，为白色固体(1.996g，
93％)。
93％)。
[0269] 1H NMR(DMSO-d6)δ：10.68(s，1H)，8.31-8.34(m，2H)，8.10(dd，J＝8.8，2.3Hz，1H)，7.96-8.00(m，2H)，7.73(d，J＝8.8Hz，1H)，7.37(t，J＝7.8Hz，1H)
[0270] 制备7
[0271]
[0272] 6-氨基-N-(4-氧撑-1，4λ4-氧硫杂环己烷-4-亚基)-5-[(三甲基甲硅烷基)乙炔基]烟酰胺
[0273] 在无水氮气氛下向含有无水DMF(4mL)中的6-氨基-5-碘-N-(4-氧撑-1，4λ4-氧硫杂环己烷-4-亚基)烟酰胺，(570mg，1.50mmol，1eq)和三甲基甲硅烷基乙炔(1.24mL，6eq)的反应容器中添加三乙胺(1.67mL，8eq)、双(三苯基膦)二氯化钯(II)(105mg，0.1eq)和碘化铜(I)(57.1mg，0.2eq)。将反应混合物在室温下搅拌15分钟，然后在饱和aqNaHCO3与EtOAc之间分配。分离有机层，用aq NH4Cl(1X)和盐水(1X)洗涤，接着用无水Na2SO4干燥。倾析有机相，浓缩，并使棕色油状残留物经受梯度柱色谱法(EtOAc-Hex 1∶10至5∶1)。浓缩产物洗脱级分，得到标题化合物，为白色泡沫状物(525mg)。
[0274] 实施例23
[0275]
[0276] 6-氨基-5-{[3-({[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]氨基}羰基)苯基]乙炔基}-N-(4-氧撑-1，4λ4-氧硫杂环己烷-4-亚基)烟酰胺
[0277] 在氮气氛下向无水DMF(2mL)中的6-氨基-N-(4-氧撑-1，4λ4-氧硫杂环己烷-4-亚基)-5-[(三甲基甲硅烷基)乙炔基]烟酰胺，(71mg，0.2mmol，1eq)和N-[4-氯-3-(三氟甲基)苯基]-3-碘苯甲酰胺(112mg，1.3eq)中添加碘化铜(I)(8.0mg，0.2eq)、三乙胺(0.14mL，5eq)和双(三苯基膦)二氯化钯(II)(14mg，0.1eq)，接着最后添加四丁基氟化铵(在THF中
1.0M；0.22mL，1.1eq)。在环境温度下搅拌反应15分钟。然后将其在EtOAc与aq NH4Cl之间分配。分离有机层，用饱和aqNaHCO3和盐水洗涤，并用无水Na2SO4干燥。倾析有机层，干燥并浓缩。使残留物经受梯度柱色谱法(EtOAc-Hex 1∶5至1∶2)，其接着经受另一梯度柱色谱法(从纯CHCl3至MeOH-CHCl31∶50)。收集产物级分，浓缩。浓缩的同时通过过滤收集形成的固体并干燥，得到标题化合物，为黄色固体(58mg)。
1.0M；0.22mL，1.1eq)。在环境温度下搅拌反应15分钟。然后将其在EtOAc与aq NH4Cl之间分配。分离有机层，用饱和aqNaHCO3和盐水洗涤，并用无水Na2SO4干燥。倾析有机层，干燥并浓缩。使残留物经受梯度柱色谱法(EtOAc-Hex 1∶5至1∶2)，其接着经受另一梯度柱色谱法(从纯CHCl3至MeOH-CHCl31∶50)。收集产物级分，浓缩。浓缩的同时通过过滤收集形成的固体并干燥，得到标题化合物，为黄色固体(58mg)。
[0278] 1H NMR(DMSO-d6)δ：10.73(s，1H)，8.63(d，J＝2.3Hz，1H)，8.37(d，J＝2.6Hz，1H)，8.29(t，J＝1.5Hz，1H)，8.11-8.15(m，2H)，7.95(dd，J＝16.9，7.8Hz，2H)，7.74(d，J＝
8.8Hz，1H)，7.61(t，J＝7.8Hz，1H)，7.15(br.s.，2H)，4.12-4.17(m，2H)，3.91-3.96(m，2H)，
3.83(dt，J＝14.3，2.7Hz，2H)，3.57-3.62(m，2H)
8.8Hz，1H)，7.61(t，J＝7.8Hz，1H)，7.15(br.s.，2H)，4.12-4.17(m，2H)，3.91-3.96(m，2H)，
3.83(dt，J＝14.3，2.7Hz，2H)，3.57-3.62(m，2H)
[0279] 实施例24
[0280]
[0281] 6-氨基-5-[(3-{[(5-叔丁基异噁唑-3-基)氨基]羰基}苯基)乙炔基]-N-(4-氧撑-1，4λ4-氧硫杂环己烷-4-亚基)烟酰胺
[0282] 按类似于实施例23中描述的方式，将6-氨基-N-(4-氧撑-1，4λ4-氧硫杂环己烷-4-亚基)-5-[(三甲基甲硅烷基)乙炔基]烟酰胺和N-(5-(叔丁基)异噁唑-3-基)-3-碘苯甲酰胺转化成标题化合物。
[0283] 1H NMR(DMSO-d6)δ：11.41(s，1H)，8.63(d，J＝2.3Hz，1H)，8.31(t，J＝1.6Hz，1H)，8.12(d，J＝2.1Hz，1H)，7.99(dt，J＝7.9，1.4Hz，1H)，7.91(dt，J＝7.6，1.2Hz，1H)，7.58(t，J＝7.8Hz，1H)，7.13(br.s.，2H)，6.73(s，1H)，4.12-4.17(m，2H)，3.94(ddd，J＝12.5，8.7，
2.1Hz，2H)，3.81-3.85(m，2H)，3.57-3.62(m，2H)，1.33(s，9H)
2.1Hz，2H)，3.81-3.85(m，2H)，3.57-3.62(m，2H)，1.33(s，9H)
[0284] 实施例25
[0285]
[0286] 6-氨基-5-[(3-{[(3-甲氧基苯基)氨基]羰基}苯基)乙炔基]-N-(4-氧撑-1，4λ4-氧硫杂环己烷-4-亚基)烟酰胺
[0287] 按类似于实施例23中描述的方式，将6-氨基-N-(4-氧撑-1，4λ4-氧硫杂环己烷-4-亚基)-5-[(三甲基甲硅烷基)乙炔基]烟酰胺和3-碘-N-(3-甲氧基苯基)苯甲酰胺转化成标题化合物。
[0288] 1H NMR(DMSO-d6)δ：10.30(s，1H)，8.62(d，J＝2.3Hz，1H)，8.26(t，J＝1.5Hz，1H)，8.12(d，J＝2.1Hz，1H)，7.94(ddd，J＝7.8，1.3，1.2Hz，1H)，7.90(dt，J＝7.6，1.2Hz，1H)，
7.58(t，J＝7.8Hz，1H)，7.47(t，J＝2.2Hz，1H)，7.39(dd，J＝8.1，1.0Hz，1H)，7.26(t，J＝
8.1Hz，1H)，7.14(br.s.，2H)，6.70(dd，J＝8.2，2.1Hz，1H)，4.12-4.17(m，2H)，3.93(ddd，J＝12.5，8.5，1.9Hz，2H)，3.83(dt，J＝14.3，2.7Hz，2H)，3.76(s，3H)，3.57-3.62(m，2H)。
7.58(t，J＝7.8Hz，1H)，7.47(t，J＝2.2Hz，1H)，7.39(dd，J＝8.1，1.0Hz，1H)，7.26(t，J＝
8.1Hz，1H)，7.14(br.s.，2H)，6.70(dd，J＝8.2，2.1Hz，1H)，4.12-4.17(m，2H)，3.93(ddd，J＝12.5，8.5，1.9Hz，2H)，3.83(dt，J＝14.3，2.7Hz，2H)，3.76(s，3H)，3.57-3.62(m，2H)。
[0289] 通过采用以下测定法产生本发明的化合物的生物学数据。
[0290] VEGFR2激酶测定
[0291] 在用75μg/孔的于10mM磷酸盐缓冲盐水(PBS)，pH 7.4中的poly-Glu-Tyr(4∶1)涂布过夜的96孔微量滴定板中进行生化KDR激酶测定。将涂布板用2ml/孔的PBS+0.05％Tween-20(PBS-T)洗涤，通过用含1％BSA的PBS温育封闭，然后在开始反应之前用2ml/孔的PBS-T洗涤。反应以在激酶缓冲液(50mM Hepes缓冲液pH 7.4，20mM MgCl2，0.1mM MnCl2和0.2mM Na3VO4)中含有2.7μM ATP的100μL反应体积进行。将测试化合物在100％DMSO中重构并添加到反应物中，得到5％的最终DMSO浓度。通过添加20ul/孔的激酶缓冲液引发反应，所述激酶缓冲液含有200-300ng纯化的胞质结构域KDR蛋白(BPS Bioscience，San Diego，CA)。在30℃下温育15分钟后，用2ml/孔的PBS-T洗涤反应物。将100μl以1∶10,000在PBS-T中稀释的单克隆抗-磷酸酪氨酸抗体-过氧化物酶缀合物添加到孔中达30分钟。在用PBS-Tween-20每孔2ml洗涤后，向孔中添加100μl于含过氧化氢脲的磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液中的邻苯二胺二盐酸盐达7-10分钟作为过氧化物酶的比色底物。通过向每个孔中添加100μl的2.5N H2SO4终止反应并使用设置在492nm的微孔板ELISA读数器进行读数。直接由光密度(任意单位)对化合物浓度的曲线图减去空白值后计算出化合物抑制的IC50值。
[0292] VEGFR2细胞测定
[0293] 自动FLIPR(荧光成像板读数器)技术用于筛选在荧光染料加载的内皮细胞中VEGF诱导的细胞内钙水平增加的抑制剂。在37℃/5％CO2下将HUVEC(人脐静脉内皮细胞)(Clonetics)接种在384孔纤连蛋白涂布的黑壁板中过夜。在37℃下将细胞用钙指示剂Fluo-4加载45分钟。洗涤细胞2次(Elx405，Biotek Instruments)以除去细胞外的染料。为了筛选，将细胞用测试剂以单一浓度(10uM)或以0.0001至10.0uM的浓度范围预温育30分钟，接着进行VEGF165刺激(10ng/mL)。使用冷却的CCD相机在所有384个孔中同时测量在516nm处的荧光变化。通过测定未刺激的、刺激的和药物处理的样品的最大-最小荧光水平产生数据。由在缺乏抑制剂情况下的VEGF刺激的响应的抑制％来计算测试化合物的IC50值。
[0294] PDGFRβ激酶测定
[0295] 在用75μg的于10mM磷酸盐缓冲盐水(PBS)，pH 7.4中的poly-Glu-Tyr(4∶1)涂布过夜的96孔微量滴定板中进行生化PDGFRβ激酶测定。将涂布板用2ml/孔的PBS+0.05％Tween-20(PBS-T)洗涤，通过用含1％BSA的PBS温育封闭，然后在开始反应之前用2ml/孔的PBS-T洗涤。反应以在激酶缓冲液(50mM Hepes缓冲液pH 7.4，20mM MgCl2，0.1mM MnCl2和0.2mM Na3VO4)中含有36μM ATP的100μL反应体积进行。将测试化合物在100％DMSO中重构并添加到反应物中，得到5％的最终DMSO浓度。通过添加20ul/孔的激酶缓冲液引发反应，所述激酶缓冲液含有200-300ng纯化的胞质结构域PDGFR-b蛋白(Millipore)。在30℃下温育60分钟后，用2ml/孔的PBS-T洗涤反应物。将100μl以1∶10,000在PBS-T中稀释的单克隆抗-磷酸酪氨酸抗体-过氧化物酶缀合物添加到孔中达30分钟。在用PBS-Tween-20每孔2ml洗涤后，向孔中添加100μl于含过氧化氢脲的磷酸盐-柠檬酸盐缓冲液中的邻苯二胺二盐酸盐达7-10分钟作为过氧化物酶的比色底物。通过向每个孔中添加100μl的2.5N H2SO4终止反应并使用设置在492nm的微孔板ELISA读数器进行读数。直接由光密度(任意单位)对化合物浓度的曲线图减去空白值后计算出化合物抑制的IC50值。
[0296] PDGFRβ细胞测定
[0297] 自动FLIPR(荧光成像板读数器)技术用于筛选在荧光染料加载的内皮细胞中PDGF诱导的细胞内钙水平增加的抑制剂。在37℃/5％CO2下将NHDF-Ad(Normal Human Dermal Fibroblasts，Adult；Lonza)接种在384孔纤连蛋白涂布的黑壁板中过夜。在37℃下将细胞用钙指示剂Fluo-4加载45分钟。洗涤细胞2次(Elx405，Biotek Instruments)以除去细胞外的染料。为了筛选，将细胞用测试剂以单一浓度(10uM)或以0.0001至10.0uM的浓度范围预温育30分钟，接着进行PDGF-BB刺激(30ng/mL)。使用冷却的CCD相机在所有384个孔中同时测量在516nm处的荧光变化。通过测定未刺激的、刺激的和药物处理的样品的最大-最小荧光水平产生数据。由在缺乏抑制剂情况下的PDGF-BB刺激的响应的抑制％来计算测试化合物的IC50值。
[0298] 式I的化合物的生物学结果示于下表2。
[0299]
[0300]
[0301]
[0302]
[0303]
[0304]
[0305]
[0306]
[0307] 实施例3、11、13、16和17是最优选的式I化合物，因为它们对VEGFR2和PDGFRβ受体均有最大效力。
[0308] 要注意的是，实施例19至25的化合物对VEGF和PDGF受体均有活性。
[0309] 实施例19和20的化合物对式II的化合物的VEGFR2受体有最佳活性。
[0310] 实施例22和24的化合物对式II的化合物的PDGFRβ受体有最佳活性。
[0311] 本发明的范围并不限于所例举的实施方案，这些所例举的实施方案仅旨在对本发明的单方面进行说明。实际上，本领域技术人员由前述说明书将显而易见本发明除了本文描述的方面之外的各种修改方式。这类修改旨在属于所附权利要求的范围之内。
[0312] 本文引用的所有参考文献均以全文引用的方式并入。并且，可通过这类参考文献中公开的各种体外和体内测定法测试本发明的化合物以验证要求保护的效用。