一种中药饮片中黄曲霉毒素的检测方法

摘要

本发明公开了一种中药饮片中黄曲霉毒素的检测方法，包括粉碎、酸浸、清洗、提取、高效液相色谱检测步骤。与现有技术相比，本发明具有以下优点：(1)本发明所述方法通过对中药饮片进行预处理，使得真菌壁得到破碎，从而提高检测的准确性；(2)本发明所述方法检测黄曲霉毒素效率高。

权利要求

1.一种中药饮片中黄曲霉毒素的检测方法，其特征在于，包含以下步骤：（1）将中药饮片加入粉碎机中，功率为1.5kW/h、转速为3000转/分钟、每小时投入饮片量为3.5kg，粉碎研磨至粉状，粉末粒径为300目；

（2）将步骤（1）获得的粉末置于质量浓度为1.7%的乙酸中浸润2小时，用蒸馏水冲洗至中性，并置于烘箱中在69℃条件下烘干；

（3）将步骤（2）烘干后的粉末用质量浓度81%乙腈提取，提取液振荡20分钟，在4℃、7000转/分钟条件下离心8分钟，取上清液；

（4）采用高效液相色谱检测步骤（3）中的上清液，流动相为4mol/L的醋酸铵与0.2%的乙酸按体积比2:1混合，流速为0.6mL/min，柱温为26℃，样品温度为5℃，进样体积为6μL。

说明书

一种中药饮片中黄曲霉毒素的检测方法

技术领域

[0001] 本发明属于分析化学领域，涉及一种真菌毒素检测方法，尤其涉及一种中药饮片中黄曲霉素的检测方法。

背景技术

[0002] 真菌毒素是真菌产生的有毒次生代谢产物，种类繁多，广泛污染农作物、食品及饲料等，严重威胁着人类健康，已经引起了全球的广泛关注。

[0003] 黄曲霉毒素(aflatoxins，简称AF)是由黄曲霉、寄生曲霉等多种菌株产生的一组化学结构类似的二呋喃香豆素类真菌毒素。至今已分离出的黄曲霉毒素及其衍生物有二十多种，主要包括黄曲霉毒素B1(AFB1)、黄曲霉毒素B2(AFB2)、黄曲霉毒素G1(AFG1)和黄曲霉毒素G2(AFG2)等。黄曲霉毒素具有很强的肝毒性，其中以AFB1的毒性最强，1993年被世界卫生组织的癌症研究机构(IARC)划定为Ⅰ类致癌物。目前，世界上已有六十多个国家对其进行限量控制，如欧盟规定直接供人类食用的食物及组成食品组分中的AFB1含量不得大于2μg/kg；AFB1，AFB2，AFG1和AFG2的总量不得大于4μg/kg。

[0004] 中药及其相关产品种类繁多，药材种植地区广泛，在生产、加工、运输、贮存过程中，很容易发生霉变而污染各种真菌，产生对人体有害的真菌毒素，中药真菌毒素污染问题也引起了业内人士的重视。2001年，中华人民共和国商务部公布了《药用植物及制剂外经贸绿色行业标准》，规定黄曲霉毒素B1限量应小于等于5μg/kg。《中国药典》2010年版一部收录了中药中黄曲霉毒素B1，B2，G1，G2的高效液相色谱荧光检测方法，对桃仁、胖大海、陈皮等中药规定了AFB1最高限量为5μg/kg，AF(B1+B2+G1+G2)最高限量为10μg/kg。因此，无论从保障中药及其相关产品的安全性，还是中药进出口的管理方面，均有必要建立一个真菌毒素多残留污染检测的技术平台，进一步完善中药及其产品的质量管理规范。

[0005] 现有技术中，常采用高效液相色谱荧光检测方法来检测黄曲霉毒素的含量，但是该方法存在以下不足：首先黄曲霉毒素是一种真菌毒素，而真菌破壁较难，所以能够检测到的毒素含量要低于实际含量，因而不利于检测人员准确判断结果；其次，单纯采用高效液相色谱荧光检测方法效率不高。

发明内容

[0006] 本发明解决的技术问题是：为了克服现有技术的缺陷，获得一种能够准确测定中药饮片中黄曲霉毒素含量，且检测效率高的方法，本发明提供了一种中药饮片中黄曲霉素的检测方法。

[0007] 技术方案：一种中药饮片中黄曲霉毒素的检测方法，包含以下步骤：

[0008] (1)将中药饮片加入粉碎机中，功率为1.3～1.7kW/h、转速为2800～3200转/分钟、每小时投入饮片量为2～5kg，粉碎研磨至粉状，粉末粒径为200～400目；

[0009] (2)将步骤(1)获得的粉末置于质量浓度为0.5％～2.5％的乙酸中浸润0.5～3小时，用蒸馏水冲洗至中性，并置于烘箱中在56～78℃条件下烘干；

[0010] (3)将步骤(2)烘干后的粉末用质量浓度78～84％乙腈提取，提取液振荡10～25分钟，在4℃、6000～8000转/分钟条件下离心5～10分钟，取上清液；

[0011] (4)采用高效液相色谱检测步骤(3)中的上清液，流动相为3～5mol/L的醋酸铵与0.1～0.3％的乙酸按体积比1～3:1混合，流速为0.3～0.8mL/min，柱温为24～28℃，样品温度为4～6℃，进样体积为5～10μL。

[0012] 优选的，步骤(1)中将中药饮片加入粉碎机中，功率为1.5kW/h、转速为3000转/分钟、每小时投入饮片量为3.5kg，粉碎研磨至粉状，粉末粒径为300目。

[0013] 优选的，步骤(2)中将步骤(1)获得的粉末置于质量浓度为1.7％的乙酸中浸润2小时，用蒸馏水冲洗至中性，并置于烘箱中在69℃条件下烘干。

[0014] 优选的，步骤(3)中将步骤(2)烘干后的粉末用质量浓度81％乙腈提取，提取液振荡20分钟，在4℃、7000转/分钟条件下离心8分钟，取上清液。

[0015] 优选的，步骤(4)中将采用高效液相色谱检测步骤(3)中的上清液，流动相为4mol/L的醋酸铵与0.2％的乙酸按体积比2:1混合，流速为0.6mL/min，柱温为26℃，样品温度为5℃，进样体积为6μL。

[0016] 有益效果：(1)本发明所述方法通过对中药饮片进行预处理，使得真菌壁得到破碎，从而提高检测的准确性；(2)本发明所述方法检测黄曲霉毒素效率高。

具体实施方式

[0017] 实施例1

[0018] 一种中药饮片中黄曲霉毒素的检测方法，包含以下步骤：

[0019] (1)将中药饮片加入粉碎机中，功率为1.3kW/h、转速为2800转/分钟、每小时投入饮片量为2kg，粉碎研磨至粉状，粉末粒径为200目；

[0020] (2)将步骤(1)获得的粉末置于质量浓度为0.5％％的乙酸中浸润0.5小时，用蒸馏水冲洗至中性，并置于烘箱中在56℃条件下烘干；

[0021] (3)将步骤(2)烘干后的粉末用质量浓度78％乙腈提取，提取液振荡10分钟，在4℃、6000转/分钟条件下离心5分钟，取上清液；

[0022] (4)采用高效液相色谱检测步骤(3)中的上清液，流动相为3mol/L的醋酸铵与0.1％的乙酸按体积比1:1混合，流速为0.3mL/min，柱温为24℃，样品温度为4℃，进样体积为5μL。实施例2

[0023] 一种中药饮片中黄曲霉毒素的检测方法，包含以下步骤：

[0024] (1)将中药饮片加入粉碎机中，功率为1.5kW/h、转速为3000转/分钟、每小时投入饮片量为3.5kg，粉碎研磨至粉状，粉末粒径为300目；

[0025] (2)将步骤(1)获得的粉末置于质量浓度为1.7％的乙酸中浸润2小时，用蒸馏水冲洗至中性，并置于烘箱中在69℃条件下烘干；

[0026] (3)将步骤(2)烘干后的粉末用质量浓度81％乙腈提取，提取液振荡20分钟，在4℃、7000转/分钟条件下离心8分钟，取上清液；

[0027] (4)采用高效液相色谱检测步骤(3)中的上清液，流动相为4mol/L的醋酸铵与0.2％的乙酸按体积比2:1混合，流速为0.6mL/min，柱温为26℃，样品温度为5℃，进样体积为6μL。实施例3

[0028] 一种中药饮片中黄曲霉毒素的检测方法，包含以下步骤：

[0029] (1)将中药饮片加入粉碎机中，功率为1.7kW/h、转速为3200转/分钟、每小时投入饮片量为5kg，粉碎研磨至粉状，粉末粒径为400目；

[0030] (2)将步骤(1)获得的粉末置于质量浓度为2.5％的乙酸中浸润3小时，用蒸馏水冲洗至中性，并置于烘箱中在78℃条件下烘干；

[0031] (3)将步骤(2)烘干后的粉末用质量浓度84％乙腈提取，提取液振荡25分钟，在4℃、8000转/分钟条件下离心10分钟，取上清液；

[0032] (4)采用高效液相色谱检测步骤(3)中的上清液，流动相为5mol/L的醋酸铵与0.3％的乙酸按体积比3:1混合，流速为0.8mL/min，柱温为28℃，样品温度为6℃，进样体积为10μL。

[0033] 采用上述实施例1～3所述的检测方法对中药饮片中的黄曲霉毒素进行检测，结果如下表所示：

[0034]