新型哌啶氨甲酰类化合物、制备方法及其用途转让专利
申请号 : CN201480069569.1
文献号 : CN105829293B
文献日 : 2018-11-09
发明人 : 钟武 , 李松 , 曾燕群 , 肖军海 , 周辛波 , 郑志兵 , 李行舟 , 王晓奎
申请人 : 中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所
摘要 :
本发明提供通式I化合物、其异构体、可药用盐或溶剂化物，其制备方法以及制备预防和/或治疗耐药性肿瘤或耐药性细菌引起的疾病或病症以及用于制备预防和/或治疗肿瘤、神经退行性疾病、异源移植的排斥反应、与感染有关的疾病或症状的药物中的用途；优选地，所述肿瘤、神经退行性疾病、异源移植的排斥反应、与感染有关的疾病或症状为热休克蛋白70(Hsp70)引起的疾病或症状。本发明本发明的化合物用以克服肿瘤耐药的难题、提高肿瘤治疗效果，为临床肿瘤治疗提供了新的医学策略。
权利要求 :
1.化合物或其可药用盐，其中所述化合物为：
(4)N-甲基-N-[1-(4-甲氧基嘧啶-2-基)哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯；
(5)N-甲基-N-[1-(2-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁基酯；
(8)N-甲基-N-[1-(2-甲硫基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸(1-叔丁氧基羰基哌啶-
4-基)酯；
(9)(S)-N-甲基-N-[1-(4-甲硫基嘧啶-2-基)哌啶-4-基]氨基甲酸(1-叔丁氧基羰基吡咯烷-3-基)酯；
(10)(S)-N-甲基-N-[1-(2-甲硫基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸(吡咯烷-3-基)酯盐酸盐；
(11)N-甲基-N-[1-(2-甲硫基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(2,4-二氯-苯磺酰基)哌啶-4-基]酯；
(12)(S)-N-甲基-N-[1-(2-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(咪唑-1-羰基)吡咯烷-3-基]酯；
(13)(S)-N-甲基-N-[1-(2-甲硫基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(2-噻吩基磺酰基)吡咯烷-3-基]酯；
(14)N-甲基-N-[1-(2-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸对氟苯硫酯；
(15)N-甲基-N-[1-(2-甲硫基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸对氟苯硫酯；
(16)N-甲基-N-[1-(4-甲氧基嘧啶-2-基)哌啶-4-基]氨基甲酸(1-乙酰基哌啶-4-基)酯；
(17)(S)-N-甲基-N-[1-(4-甲氧基嘧啶-2-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(2-噻吩磺酰基)吡咯烷-3-基]酯；
(18)N-甲基-N-[1-(2-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(3-氯苄基)哌啶-3-基]酯；
(19)N-甲基-N-[1-(4-甲氧基嘧啶-2-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(3-氯苄基)哌啶-4-基]酯；
(20)N-甲基-N-[1-(2-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(2，3-二氯苯磺酰基)哌啶-3-基]酯；
(21)N-甲基-N-[1-(2-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(2，4-二氯苯磺酰基)哌啶-4-基]酯；
(22)N-甲基-N-[1-(2-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(4-氟苄基)哌啶-3-基]酯；
(23)(S)-N-甲基-N-[1-(2-甲硫基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(2,3-二氯苯磺酰基)吡咯烷-3-基]酯；
(24)(S)-N-甲基-N-[1-(2-甲硫基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(2,4-二氯苯磺酰基)吡咯烷-3-基]酯；
(25)N-甲基-N-[1-(6-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸(1-乙酰哌啶-3-基)酯；
(26)N-甲基-N-[1-(6-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(2,2,2-三氟乙酰基)哌啶-3-基]酯；
(27)N-甲基-N-[1-(6-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(咪唑-1-羰基)哌啶-3-基]酯；
(28)N-甲基-N-[1-(2-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(2-噻吩磺酰基)哌啶-3-基]酯；
(29)N-甲基-N-[1-(4-甲氧基嘧啶-2-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(1-噻吩磺酰基)哌啶-4-基]酯；
(30)N-甲基-N-[1-(4-氯嘧啶-2-基)哌啶-4-基]-[2-(咪唑-1-基)]乙酰胺；
(31)N-甲基-N-[1-(4-氯嘧啶-2-基)哌啶-4-基]-2-(1H-1,2,4-三氮唑-1-基)乙酰胺；
(32)N-甲基-N-[1-(2-氯嘧啶-4-基)哌啶-4-基]-2-(2-氯苯并咪唑-1-基)乙酰胺；
(33)N-甲基-N-[1-(6-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]-[2-(咪唑-1-基)]乙酰胺；
(34)N-甲基-N-[1-(6-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]-2-(1H-1,2,4-三氮唑-1-基)乙酰胺；
(35)N-甲基-N-[1-(6-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]-2-(2-氯苯并咪唑-1-基)乙酰胺；
(36)N-甲基-N-[1-(2-甲硫基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]-2-{[3-(1H-1,2,4-三氮唑-1-甲基)]吡咯烷-1-基}乙酰胺；
(37)N-甲基-N-[1-(2-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]-2-{[2-(1H-1,2,4-三氮唑-1-甲基)]吡咯烷-1-基}乙酰胺；
(38)N-甲基-N-[1-(6-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]-2-{[2-(1H-1,2,4-三氮唑-1-甲基)]吡咯烷-1-基}乙酰胺；
(39)N-甲基-N-[1-(4-甲氧基嘧啶-2-基)哌啶-4-基]-2-{[2-(1H-1,2,4-三氮唑-1-甲基)]吡咯烷-1-基}乙酰胺；
(41)N-甲基-N-[1-(6-甲基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]-2-(2-氯-苯并咪唑-1-基)乙酰胺；
(42)N-甲基-N-[1-(4-甲氧基嘧啶-2-基)哌啶-4-基]-2-(1H-1,2,4-三氮唑-1-基)乙酰胺；
(43)N-甲基-N-[1-(2-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]-2-(1H-1,2,4-三氮唑-1-基)乙酰胺；或(44)N-甲基-N-[1-(2-甲硫基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]-2-(1H-1,2,4-三氮唑-1-基)乙酰胺。
2.药物组合物，其包含权利要求1所述的化合物或其可药用盐以及药学上可接受的载体或赋形剂。
3.权利要求2所述的药物组合物，其还包含一种或多种其它抗肿瘤药物。
4.权利要求3所述的药物组合物，其中所述其它抗肿瘤药物为替尼类抗肿瘤药物。
5.权利要求4所述的药物组合物，其中所述替尼类抗肿瘤药物选自吉非替尼，伊马替尼，甲磺酸伊马替尼，尼罗替尼，舒尼替尼和拉帕替尼。
6.权利要求1所述的化合物或其可药用盐用于制备预防和/或治疗耐药性肿瘤或耐药性细菌引起的疾病或病症的药物中的用途。
7.权利要求1所述的化合物或其可药用盐用于制备预防和/或治疗肿瘤、神经退行性疾病、异源移植的排斥反应、与感染有关的疾病或症状的药物中的用途。
8.权利要求7所述的用途，其中所述肿瘤、神经退行性疾病、异源移植的排斥反应、与感染有关的疾病或症状为热休克蛋白70(Hsp70)引起的疾病或症状。
9.权利要求6-8任一项所述的用途，其中所述肿瘤选自乳腺癌、前列腺癌、肝癌、食道癌、胃癌和皮肤癌。
10.权利要求7所述的用途，其中所述神经退行性疾病选自阿尔兹海默症、肌肉萎缩性侧索硬化症、共济失调毛细血管扩张症、克雅二氏病、亨廷顿氏病、小脑萎缩症、多发性硬化症、帕金森氏病、原发性侧索硬化和脊髓性肌萎缩症。
11.用于抵抗/逆转细胞中细菌耐药或肿瘤细胞耐药的方法，其包括给所述细胞施用有效量的权利要求1所述的化合物或其可药用盐，其中所述方法在体外进行。
12.用于抑制细胞中热休克蛋白70(Hsp70)表达的方法，其包括给所述细胞施用有效量的权利要求1所述的化合物或其可药用盐，其中所述方法在体外进行。
13.权利要求11或12所述的方法，其中所述细胞为细胞系，或者来自受试者的细胞。
14.权利要求11或12所述的方法，其中所述肿瘤细胞选自乳腺癌细胞、前列腺癌细胞、肝癌细胞、食道癌细胞、胃癌细胞、皮肤癌细胞。
15.权利要求13所述的方法，其中所述肿瘤细胞选自乳腺癌细胞、前列腺癌细胞、肝癌细胞、食道癌细胞、胃癌细胞、皮肤癌细胞。
16.权利要求1所述的化合物或其可药用盐用于制备试剂的用途，所述试剂用于抵抗/逆转细胞中细菌耐药或肿瘤细胞耐药。
17.权利要求1所述的化合物或其可药用盐用于制备试剂的用途，所述试剂用于抑制细胞中热休克蛋白70(Hsp70)活性。
18.权利要求16或17所述的用途，其中所述细胞为细胞系，或者来自受试者的细胞。
19.权利要求16或17所述的用途，其中所述肿瘤细胞选自乳腺癌细胞、前列腺癌细胞、肝癌细胞、食道癌细胞、胃癌细胞、皮肤癌细胞。
20.权利要求18所述的用途，其中所述肿瘤细胞选自乳腺癌细胞、前列腺癌细胞、肝癌细胞、食道癌细胞、胃癌细胞、皮肤癌细胞。
21.权利要求16或17所述的用途，其中所述试剂用于体外方法中。
22.权利要求16或17所述的用途，其中所述试剂用于体内方法中。
23.一种抵抗细胞中细菌耐药或肿瘤细胞耐药的试剂盒，所述试剂盒包括权利要求1所述的化合物或其可药用盐，且任选地还包括使用说明。
24.一种抑制细胞中热休克蛋白70(Hsp70)活性的试剂盒，所述试剂盒包括权利要求1所述的化合物或其可药用盐，且任选地还包括使用说明。
说明书 :
新型哌啶氨甲酰类化合物、制备方法及其用途
技术领域
[0001] 本发明属于医药领域，具体涉及新型哌啶氨甲酰类化合物、制备方法及其用途。
背景技术
[0002] 热休克蛋白70(Heat shock protein 70，Hsp70)广泛存在于细胞核、细胞质、内质网、线粒体和叶绿体细胞中，参与细胞内蛋白质从头合成、定位、蛋白质成熟以及错误折叠蛋白质的降解过程，因而影响细胞的生长和代谢功能。在细胞中，Hsp70与核糖体上新生多肽结合能够防止新生多肽错误折叠；Hsp70在哺乳动物细胞的胞饮作用过程中对网格蛋白的重塑是必需的；与非天然构象的蛋白质结合能够促进蛋白质的正确折叠和装配，并能维持蛋白质前体的伸展构象和防止其聚集变性和降解，使之易于向细胞器中运输。
[0003] 研究表明，Hsp70与许多疾病有关，如癌症、神经退行性疾病、异源移植的排斥、感染等。在肿瘤细胞中，Hsp70主要通过影响以下几个途径影响细胞凋亡：(1)线粒体途径。在线粒体前期，Hsp70通过阻断Bax的迁移，降低线粒体外膜的通透性，从而抑制线粒体释放cytc与AIF；在线粒体后期，Hsp70直接与Apaf1结合，阻断procaspase-9的聚集，使凋亡小体不能形成，下游的caspase-3不能被激活；(2)死亡受体途径。Hsp70通过抑制JNK的激活、与Akt和PKC结合，引发激酶的去磷酸化，使蛋白稳定、细胞存活；同样，Hsp70还可与DR4与DR5结合，抑制TRAIL诱导的DISC聚集与活性；(3)DNA降解途径。Hsp70、Hsp40、ICAD复合物能抑制DNase CAD的活性与折叠效应，使凋亡晚期的染色体DNA不能被降解，从而达到抗凋亡的作用。
[0004] Hsp70用于肿瘤治疗的研究已成为近年来的热点，但至今未发现高活性的抑制剂，其作用机制也未明确。在肿瘤细胞中Hsp70及其相关蛋白表达异常增高，实验证明，加药刺激后肿瘤细胞通过Hsp70蛋白发挥潜在的防御机制，产生抗药性，造成药物活性下降。Hsp70抑制剂有望逆转肿瘤细胞株对抗肿瘤药物的耐药性。
发明内容
[0005] 本发明的发明人设计合成了一类结构新颖的Hsp70抑制剂，其可用于预防或治疗与Hsp70相关的疾病或症状，并且有效逆转细菌或肿瘤细胞耐药性，本发明正是基于以上发现而完成。
[0006] 本发明第一方面涉及通式I化合物、其异构体、可药用盐或溶剂化物，
[0007]
[0008] 其中：
[0009] A代表CH2,S,O, 其中“---”端与R2相连；
[0010] R1代表芳基、芳香杂环基、芳基烷基、芳香杂环基烷基，其中所述的芳基、芳香杂环基、芳基烷基、芳香杂环基烷基未被取代或被1个或2个独立地选自下列的取代基取代：卤素、硝基、羟基、氨基、氰基、烷基、环烷基、烷氧基、烷硫基、烷氨基、环烷氧基、环烷硫基、环烷氨基、烷烯基、烷炔基；
[0011] R2代表氢、烷基、环烷基、取代环烷基、烷氧基、烷氧羰基、烷基酰基、取代烷基酰基、脂杂环基、取代脂杂环基、脂杂环基烷基、芳基、取代芳基、芳基烷基、取代芳基烷基、芳基磺酰基、取代芳基磺酰基、芳基酰基、取代芳基酰基、芳香杂环基、取代芳香杂环基、芳香杂环基烷基、芳香杂环基磺酰基、芳香杂环基酰基；其中所述的取代基包括C1-C6烷基、卤素、硝基、氰基、氨基、羟基、烷氧基、单(C1-C6)烷基氨基、二(C1-C6)烷基氨基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基、芳香杂环基烷基；
[0012] R3代表氢、C1-C3烷基、C3-C6环烷基。
[0013] 根据本发明第一方面任一项的通式I化合物、其异构体、可药用盐或溶剂化物，其中：
[0014] R1代表芳香杂环基或取代芳香杂环基，所述取代基选自：卤素、硝基、氨基、氰基、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷基硫基。
[0015] 根据本发明第一方面任一项的通式I化合物、其异构体、可药用盐或溶剂化物，其中：
[0016] R1代表嘧啶基、噻唑基，所述的嘧啶基、噻唑基未被取代或被1个或2个独立地选自下列的取代基取代：甲基、卤素、硝基、氨基、氰基、甲氧基、乙氧基、甲硫基、乙硫基。
[0017] 根据本发明第一方面任一项的通式I化合物、其异构体、可药用盐或溶剂化物，其中：
[0018] R2代表氢、C1-C6烷基、C1-C6烷氧羰基、C1-C6烷基酰基、取代C1-C6烷基酰基、五元或六元脂杂环基、取代的五元或六元脂杂环基、芳基、取代芳基、芳基C1-C6烷基、取代芳基C1-C6烷基、芳基磺酰基、取代芳基磺酰基、芳香杂环基、取代芳香杂环基、芳香杂环基磺酰基、芳香杂环基酰基；所述取代基选自：C1-C6烷基、卤素、硝基、氰基、氨基、C1-C6烷氧基、芳香杂环基C1-C3烷基。
[0019] 根据本发明第一方面任一项的通式I化合物、其异构体、可药用盐或溶剂化物，其中：
[0020] R3代表氢、甲基。
[0021] 根据本发明第一方面任一项的通式I化合物、其异构体、可药用盐或溶剂化物，其中：
[0022] A代表CH2,O，S， 其中“---”端与R2相连；
[0023] R1代表嘧啶基，其中所述的嘧啶基未被取代或被1个或2个独立地选自下列的取代基取代：甲基、卤素、硝基、氨基、氰基、甲氧基、乙氧基、甲硫基、乙硫基；
[0024] R2代表氢、叔丁基、叔丁氧基羰基、噻唑-2-磺酰基、咪唑-1-甲酰基、苯基、1-萘基、2-萘基、4-氟苯基、咪唑-1-基、三氮唑-1-基、2-氯-苯并咪唑-1-基、2,3-二氯苯磺酰基、2,
4-二氯苯磺酰基、3-氯苄基、4-氯苄基、4-氟苄基、乙酰基、三氟乙酰基、1,2,4-三氮唑-1-甲基吡咯烷-1-基；
4-二氯苯磺酰基、3-氯苄基、4-氯苄基、4-氟苄基、乙酰基、三氟乙酰基、1,2,4-三氮唑-1-甲基吡咯烷-1-基；
[0025] R3代表氢、甲基。
[0026] 在本发明的实施方案中，所述通式I的化合物、其异构体、可药用盐或溶剂化物，选自下面的化合物：
[0027] (1)N-甲基-N-[1-(4-氯嘧啶-2-基)哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁基酯
[0028] (2)N-甲基-N-[1-(2-氯嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁基酯；
[0029] (3)N-甲基N-[1-(6-氯嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯；
[0030] (4)N-甲基-N-[1-(4-甲氧基嘧啶-2-基)哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯；
[0031] (5)N-甲基-N-[1-(2-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁基酯；
[0032] (6)N-甲基-N-[1-(2-甲硫基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁基酯；
[0033] (7)N-甲基-N-[1-(6-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯；
[0034] (8)N-甲基-N-[1-(2-甲硫基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸(1-叔丁氧基羰基哌啶-4-基)酯；
[0035] (9)(S)-N-甲基-N-[1-(4-甲硫基嘧啶-2-基)哌啶-4-基]氨基甲酸(1-叔丁氧基羰基吡咯烷-3-基)酯；
[0036] (10)(S)-N-甲基-N-[1-(2-甲硫基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸(吡咯烷-3-基)酯盐酸盐；
[0037] (11)N-甲基-N-[1-(2-甲硫基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(2,4-二氯苯磺酰基)哌啶-4-基]酯；
[0038] (12)(S)-N-甲基-N-[1-(2-甲硫基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(咪唑-1-羰基)吡咯烷-3-基]酯；
[0039] (13)(S)-N-甲基-N-[1-(2-甲硫基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(2-噻吩基磺酰基)吡咯烷-3-基]酯；
[0040] (14)N-甲基-N-[1-(2-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸对氟苯硫酯；
[0041] (15)N-甲基-N-[1-(2-甲硫基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸对氟苯硫酯；
[0042] (16)N-甲基-N-[1-(4-甲氧基嘧啶-2-基)哌啶-4-基]氨基甲酸(1-乙酰基哌啶-4-基)酯；
[0043] (17)(S)-N-甲基-N-[1-(4-甲氧基嘧啶-2-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(2-噻吩磺酰基)吡咯烷-3-基]酯；
[0044] (18)N-甲基-N-[1-(2-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(3-氯苄基)哌啶-3-基]酯；
[0045] (19)N-甲基-N-[1-(4-甲氧基嘧啶-2-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(3-氯苄基)哌啶-4-基]酯；
[0046] (20)N-甲基-N-[1-(2-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(2，3-二氯苯磺酰基)哌啶-3-基]酯；
[0047] (21)N-甲基-N-[1-(4-甲氧基嘧啶-2-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(2，4-二氯苯磺酰基)哌啶-4-基]酯；
[0048] (22)N-甲基-N-[1-(2-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(4-氟苄基)哌啶-3-基]酯；
[0049] (23)(S)-N-甲基-N-[1-(2-甲硫基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(2,3-二氯-苯磺酰基)吡咯烷-3-基]酯；
[0050] (24)(S)-N-甲基-N-[1-(2-甲硫基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(2,4-二氯-苯磺酰基)吡咯烷-3-基]酯；
[0051] (25)N-甲基-N-[1-(6-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸(1-乙酰哌啶-3-基)酯；
[0052] (26)N-甲基-N-[1-(6-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(2,2,2-三氟乙酰基)哌啶-3-基]酯；
[0053] (27)N-甲基-N-[1-(6-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(咪唑-1-羰基)哌啶-3-基]酯；
[0054] (28)N-甲基-N-[1-(2-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(2-噻吩磺酰基)哌啶-3-基]酯；
[0055] (29)N-甲基-N-[1-(4-甲氧基嘧啶-2-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(1-噻吩磺酰基)哌啶-4-基]酯；
[0056] (30)N-甲基-N-[1-(4-氯嘧啶-2-基)哌啶-4-基]-[2-(咪唑-1-基)]乙酰胺；
[0057] (31)N-甲基-N-[1-(4-氯嘧啶-2-基)哌啶-4-基]-2-(1H-1,2,4-三氮唑-1-基)乙酰胺；
[0058] (32)N-甲基-N-[1-(2-氯嘧啶-4-基)哌啶-4-基]-2-(2-氯-苯并咪唑-1-基)乙酰胺；
[0059] (33)N-甲基-N-[1-(6-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]-[2-(咪唑-1-基)]乙酰胺；
[0060] (34)N-甲基-N-[1-(6-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]-2-(1H-1,2,4-三氮唑-1-基)乙酰胺；
[0061] (35)N-甲基-N-[1-(6-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]-2-(2-氯-苯并咪唑-1-基)乙酰胺；
[0062] (36)N-甲基-N-[1-(2-甲硫基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]-2-{[3-(1H-1,2,4-三氮唑-1-甲基)]吡咯烷-1-基}乙酰胺；
[0063] (37)N-甲基-N-[1-(2-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]-2-{[2-(1H-1,2,4-三氮唑-1-甲基)]吡咯烷-1-基}乙酰胺；
[0064] (38)N-甲基-N-[1-(6-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]-2-{[2-(1H-1,2,4-三氮唑-1-甲基)]吡咯烷-1-基}乙酰胺；
[0065] (39)N-甲基-N-[1-(4-甲氧基嘧啶-2-基)哌啶-4-基]-2-{[2-(1H-1,2,4-三氮唑-1-甲基)]吡咯烷-1-基}乙酰胺；
[0066] (40)N-甲基-N-[1-(6-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]-2-(1H-1,2,4-三氮唑-1-基)乙酰胺；
[0067] (41)N-甲基-N-[1-(4-甲基嘧啶-2-基)哌啶-4-基]-2-(2-氯-苯并咪唑-1-基)乙酰胺；
[0068] (42)N-甲基-N-[1-(4-甲氧基嘧啶-2-基)哌啶-4-基]-2-(1H-1,2,4-三氮唑-1-基)乙酰胺；
[0069] (43)N-甲基-N-[1-(2-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]-2-(1H-1,2,4-三氮唑-1-基)乙酰胺；
[0070] (44)N-甲基-N-[1-(2-甲硫基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]-2-(1H-1,2,4-三氮唑-1-基)乙酰胺。
[0071] 本发明第二方面涉及本发明第一方面任一项所述的通式I化合物、其异构体、可药用盐或溶剂化物的制备方法，其包括以下步骤：
[0072] (1)化合物2与1发生亲核取代，得到化合物3，化合物3被亲核试剂Nu-进攻得到化合物4，化合物4分别经氨基脱保护，酰胺化反应得到活性中间体6；其中，化合物1中A、B、C代表C或N原子，且至少一个为C原子；L为常规离去基团，如卤素、-OCOR、-OTs等，两个L可以相同也可以不同，优选为间位或对位；Pg为氨基保护基，如Boc；R1与R3定义同权利要求1所述；化合物6为化合物5酰胺化反应的产物，如化合物5与氯乙酰氯、羰基二咪唑或三光气等,根据酰胺化试剂的不同，化合物6可以分别是下述6-1、6-2或6-3三种形式；
[0073]
[0074] (2)根据权利要求1所述的通式I化合物中基团A的不同，其可分别经过以下步骤得到：
[0075] 当A为CH2时，R2H为亲核试剂，例如胺，R2H直接与化合物6-1发生亲核取代得到化合物I-1；其中R1、R2、R3定义同权利要求1中所述；
[0076]
[0077] 当A为S时，R2SH为亲核试剂，例如硫酚，R2SH直接与化合物6-2发生亲核加成得到化合物I-2；其中R1、R2、R3定义同权利要求1中所述；L为常规离去基团，如卤素；
[0078]
[0079] 当A为 m＝1、2，n＝2、3；且m＝1时，n＝2或3；m＝2时，n＝2；化合物6-3与化合物9发生亲和加成反应得到化合物7；化合物7上的氨基脱保护得到化合物8；最后，化合物8与R2L亲核取代得到化合物I-3；其中R1、R2、R3定义同权利要求1中所述；Pg为常规氨基保护基，如Boc；
[0080]
[0081] 上述化合物3、4、5、7、8、9、Ⅰ-1、Ⅰ-2和Ⅰ-3都在通式Ⅰ范围内，皆在本发明保护之列。
[0082] 亲核试剂是指具有亲核性的试剂，例如带有羟基、巯基、氨基等基团的化合物。
[0083] Pg为氨基常见保护基，具体的保护与脱保护方法可参考格林和伍兹编著的《有机合成中的保护基》一书中第七章“氨基的保护”。
[0084] 本发明第二方面所述的制备方法，其中，当R1为嘧啶环时，其包括如下反应路线，即首先用2，4-二氯嘧啶或4，6-二氯-嘧啶为起始原料，与N-甲基-N-(哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯在THF或DMF等溶剂中,在常温条件下，在碳酸钾、碳酸钠或碳酸氢钠中的存在下制得化合物3A；3A再与甲醇钠、乙醇钠或甲硫醇钠在相应的醇，或THF溶剂中，加热回流的条件下制得化合物4A；4A再经过与三氟乙酸，在室温下以DCM为溶剂去BOC保护制备中间体5A；5A与CDI在DMF中加热反应制得化合物6A；6A与相应的醇溶于DMF或是DMSO中在NaH的催化下室温分别与化合物7A-7D反应制得8A-8D；8B，8C，8D分别在三氟乙酸作用下，DCM中室温去保护得到化合物9B,9C,9D；9B,9C,9D再与相应的磺酰氯11(1)或是酰氯11(2)在THF或DMF等溶剂中,在常温条件下，通过使用碳酸钾、碳酸钠、碳酸氢钠中和反应过程中产生的酸，缩合得到本发明化合物10(1)B-10(1)D和10(2)B-10(2)D；或者，
[0085] 中间体5A溶于DCM中，加入TEA等中和反应过程中产生的酸与2-氯乙酰氯冰浴下缩合制得化合物12A，12A再与相应的胺在THF或DMF等溶剂中,在常温条件下，在碳酸钾、碳酸钠或碳酸氢钠的存在下制得本发明化合物13A；
[0086] 产物可以采用本领域中的标准技术来分离和纯化，例如萃取、色谱法、结晶和蒸馏等，
[0087]
[0088] 或者
[0089]
[0090] 其中，上式中提到的化合物11(1)和11(2)分别为： 7A-7D、8B-8D、9B-9D、10(1)B-10(1)D以及10(2)B-10(2)D分别为：
[0091]
[0092] 本发明第三方面提供一种药物组合物，其包含本发明第一方面任一项所述的通式I化合物、其异构体、可药用盐或溶剂化物，以及药学上可接受的载体或赋形剂。
[0093] 根据本发明第三方面任一项所述的药物组合物，其还包含一种或多种其它抗肿瘤药物，例如替尼类抗肿瘤药物，如吉非替尼，伊马替尼，甲磺酸伊马替尼，尼罗替尼，舒尼替尼，拉帕替尼。
[0094] 本发明第四方面提供本发明第一方面任一项所述的通式I化合物、其异构体、可药用盐或溶剂化物用于制备预防和/或治疗耐药性肿瘤或耐药性细菌引起的疾病或病症的药物中的用途。
[0095] 本发明第五方面提供本发明第一方面任一项所述的通式I化合物、其异构体，可药用盐或溶剂化物用于制备预防和/或治疗肿瘤、神经退行性疾病、异源移植的排斥反应、与感染有关的疾病或症状的药物中的用途；优选地，所述肿瘤、神经退行性疾病、异源移植的排斥反应、与感染有关的疾病或症状为热休克蛋白70(Hsp70)引起的疾病或症状。
[0096] 根据本发明第四方面或第五方面任一项所述的用途，其中所述肿瘤选自乳腺癌、前列腺癌、肝癌、食道癌、胃癌、皮肤癌。
[0097] 根据本发明第五方面任一项所述的用途，其中所述神经退行性疾病选自阿尔兹海默症、肌肉萎缩性侧索硬化症、共济失调毛细血管扩张症、克雅二氏病、亨廷顿氏病、小脑萎缩症、多发性硬化症、帕金森氏病、原发性侧索硬化、脊髓性肌萎缩症。
[0098] 本发明第六方面提供一种预防和/或治疗耐药性肿瘤或由耐药性细菌引起的疾病或病症的方法，所述方法包括向有需要的受试者给予预防和/或治疗有效量的本发明第一方面任一项所述的通式I化合物、其异构体，可药用盐或溶剂化物。
[0099] 本发明第七方面提供一种预防和/或治疗肿瘤、神经退行性疾病、异源移植的排斥反应、与感染有关的疾病或症状的方法，所述方法包括向有需要的受试者给予预防和/或治疗有效量的本发明第一方面任一项所述的通式I化合物、其异构体，可药用盐或溶剂化物，优选地，所述肿瘤、神经退行性疾病、异源移植的排斥反应、与感染有关的疾病或症状与为热休克蛋白70(Hsp70)引起的疾病或症状。
[0100] 根据本发明第六方面或第七方面任一项所述的方法，其中所述肿瘤选自乳腺癌、前列腺癌、肝癌、食道癌、胃癌、皮肤癌。
[0101] 根据本发明第七方面任一项所述的方法，其中所述神经退行性疾病选自阿尔兹海默症、肌肉萎缩性侧索硬化症、共济失调毛细血管扩张症、克雅二氏病、亨廷顿氏病、小脑萎缩症、多发性硬化症、帕金森氏病、原发性侧索硬化、脊髓性肌萎缩症。
[0102] 本发明第八方面提供本发明第一方面任一项所述的通式I化合物、其异构体，可药用盐或溶剂化物，其用于预防和/或治疗耐药性肿瘤或耐药性细菌引起的疾病。
[0103] 本发明第九方面提供本发明第一方面任一项所述的通式I化合物、其异构体，可药用盐或溶剂化物，其用于预防和/或治疗肿瘤、神经退行性疾病、异源移植的排斥反应、与感染有关的疾病或症状，优选地，所述肿瘤、神经退行性疾病、异源移植的排斥反应、与感染有关的疾病或症状与为热休克蛋白70(Hsp70)引起的疾病或症状。
[0104] 根据本发明第八方面或第九方面任一项所述的通式I化合物、其异构体，可药用盐或溶剂化物，其中所述肿瘤选自乳腺癌、前列腺癌、肝癌、食道癌、胃癌、皮肤癌。
[0105] 根据本发明第九方面任一项所述的通式I化合物、其异构体，可药用盐或溶剂化物，其中所述神经退行性疾病选自阿尔兹海默症、肌肉萎缩性侧索硬化症、共济失调毛细血管扩张症、克雅二氏病、亨廷顿氏病、小脑萎缩症、多发性硬化症、帕金森氏病、原发性侧索硬化、脊髓性肌萎缩症。
[0106] 本发明第十方面提供用于抵抗/逆转细胞中细菌耐药或肿瘤细胞耐药的方法，其包括给所述细胞施用有效量的本发明第一方面任一项所述的通式I化合物、其异构体，可药用盐或溶剂化物。
[0107] 本发明第十一方面提供用于抑制细胞中热休克蛋白70(Hsp70)表达的方法，其包括给所述细胞施用有效量的本发明第一方面任一项所述的通式I化合物、其异构体，可药用盐或溶剂化物。
[0108] 本发明第十方面或第十一方面任一项所述的方法，其中所述细胞为细胞系，或者来自受试者的细胞。
[0109] 本发明第十方面第十一方面任一项所述的方法，其中所述肿瘤细胞选自乳腺癌细胞、前列腺癌细胞、肝癌细胞、食道癌细胞、胃癌细胞、皮肤癌细胞。
[0110] 本发明第十方面第十一方面任一项所述的方法，其在体外进行。
[0111] 本发明第十方面第十一方面任一项所述的方法，其在体内进行。
[0112] 本发明第十二方面提供本发明第一方面任一项所述的通式I化合物、其异构体，可药用盐或溶剂化物用于制备试剂的用途，所述试剂用于抵抗/逆转细胞中细菌耐药或肿瘤细胞耐药。
[0113] 本发明第十三方面提供本发明第一方面任一项所述的通式I化合物、其异构体，可药用盐或溶剂化物用于制备试剂的用途，所述试剂用于抑制细胞中热休克蛋白70(Hsp70)活性。
[0114] 根据本发明第十二方面或第十三方面任一项所述的用途，其中所述细胞为细胞系，或者来自受试者的细胞。
[0115] 根据本发明第十二方面或第十三方面任一项所述的用途，其中所述肿瘤细胞选自乳腺癌细胞、前列腺癌细胞、肝癌细胞、食道癌细胞、胃癌细胞、皮肤癌细胞。
[0116] 根据本发明第十二方面或第十三方面任一项所述的用途，其中所述试剂用于体外方法中。
[0117] 根据本发明第十二方面或第十三方面任一项所述的用途，其中所述试剂用于体内方法中。
[0118] 本发明第十四方面提供本发明第一方面任一项所述的通式I化合物、其异构体，可药用盐或溶剂化物，其用于抵抗/逆转细胞中细菌耐药或肿瘤细胞耐药。
[0119] 本发明第十五方面提供本发明第一方面任一项所述的通式I化合物、其异构体，可药用盐或溶剂化物，其用于抑制细胞中热休克蛋白70(Hsp70)活性。
[0120] 根据本发明第十四方面或第十五方面任一项所述的通式I化合物、其异构体，可药用盐或溶剂化物，其中所述细胞为细胞系，或者来自受试者的细胞。
[0121] 根据本发明第十四方面或第十五方面任一项所述的通式I化合物、其异构体，可药用盐或溶剂化物，其中所述肿瘤细胞选自乳腺癌细胞、前列腺癌细胞、肝癌细胞、食道癌细胞、胃癌细胞、皮肤癌细胞。
[0122] 根据本发明第十四方面或第十五方面任一项所述的通式I化合物、其异构体，可药用盐或溶剂化物，其用于体外方法中。
[0123] 根据本发明第十四方面或第十五方面任一项所述的通式I化合物、其异构体，可药用盐或溶剂化物，其用于体内方法中。
[0124] 本发明第十六方面提供一种抵抗/逆转细胞中细菌耐药或肿瘤细胞耐药的试剂盒，所述试剂盒包括本发明第一方面任一项所述的通式I化合物、其异构体，可药用盐或溶剂化物，且，任选地还包括使用说明。
[0125] 本发明第十七方面提供一种抑制细胞中热休克蛋白70(Hsp70)活性的试剂盒，所述试剂盒包括本发明第一方面任一项所述的通式I化合物、其异构体，可药用盐或溶剂化物，且，任选地还包括使用说明。
[0126] 现将本申请说明书和权利要求书中出现的用于描述本发明的术语定义如下。对于特定的术语，如果本申请中定义的含义与本领域技术人员通常理解的含义不一致，则以本申请中定义的含义为准；如果在本申请中没有定义，则其具有本领域技术人员通常理解的含义。
[0127] 本发明中使用的术语“烷基”是指直链或支链一价饱和烃基，例如为C1-C10烷基、C1-C6烷基、C1-C3烷基。所述“C1-C10烷基”是指具有1～10个碳原子的直链或支链烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、异丁基、戊基、2-戊基、异戊基、新戊基、己基、2-己基、3-己基、3-甲基戊基、庚基和辛基等。术语“C1-C6烷基”意指具有1～6，即1、2、3、4、5或6个碳原子的直链或支链烷基，典型地为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基和己基等。相似地，术语“C1-C3烷基”意指具有1、2或3个碳原子的直链或支链烷基，即甲基、乙基、正丙基和异丙基。本发明中的烷基优选是C1-C6烷基。
[0128] 本发明中使用的术语“C2-C6烯基”是指具有2-6个碳原子的烯基，所述烯基具有1、2或3个碳碳双键，当具有一个以上的碳碳双键时，所述碳碳双键共轭或非共轭。本发明中的C2-C6烯基的实例包括乙烯基，丙烯基。
[0129] 本发明中使用的术语“C2-C6炔基”是指具有2-6个碳原子的炔基，所述炔基具有1、2或3个碳碳三键，当具有一个以上的碳碳三键时，所述碳碳三键共轭或非共轭。本发明中的C2-C6炔基的实例包括乙炔基，丙炔基。
[0130] 本发明中使用的术语“卤素”是指氟、氯、溴以及碘原子。
[0131] 本发明中使用的术语“芳基”是指包含至少一个不饱和芳环的任选被取代的单环或二环不饱和芳香体系，优选具有6～10个碳原子，即6、7、8、9或10个碳原子的芳基。本发明中的芳基的实例包括苯基、萘基、1,2,3,4-四氢萘基和茚基等。本发明中的芳基可以被以下基团取代：C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、氰基、卤素、羟基、氨基、硝基、单(C1-C6)烷基氨基、二(C1-C6)烷基氨基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基或C1-C6卤代烷氧基。具体地实例包括但不限于4-氟苯基。
[0132] 其中，当前述定义的“烷基”被一个或多个上述芳基取代，或磺酰基、酰基分别被上述定义的芳基取代后分别得到所述“芳基烷基”、“芳基磺酰基”、“芳基酰基”。
[0133] 当前述定义的“烷基”被一个或多个上述定义的取代芳基取代，或磺酰基、酰基分别被上述定义的取代芳基取代后分别得到所述“取代芳基烷基”、“取代芳基磺酰基”、“取代芳基酰基”，其中，所述芳基烷基例如为芳基Cl-C3烷基。
[0134] 本发明中“芳基烷基”、“芳基磺酰基”、“芳基酰基”、“芳基烷基”、“芳基磺酰基”或“芳基酰基”具体的实例包括但不限于苄基、苯乙基、3-氯苄基、4-氯苄基、4-氟苄基、2,3-二氯苯磺酰基、2,4-二氯苯磺酰基。
[0135] 本发明中使用的术语“芳香杂环基”是指包含至少一个，例如1个、2个、3个或4个独立地选自N、O或S的杂原子的任选被取代的单环或双环不饱和芳环系统，优选具有5～10，即5、6、7、8、9或10个原子的芳香杂环基。“芳香杂环基”的实例包括但不限于噻吩基、吡啶基、噻唑基、异噻唑基、呋喃基、吡咯基、三唑基、咪唑基、三嗪基、二唑基、恶唑基、异恶唑基、吡唑基、咪唑酮基、恶唑、噻唑酮基、四唑基、噻二唑基、苯并咪唑基、苯并恶唑基、苯并噻唑基、四氢三唑并吡啶基、四氢三唑并嘧啶基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、硫茚基、吲哚基、异吲哚基、吡啶酮基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基、喹啉基、酞嗪基、喹喔啉基、喹唑啉基、咪唑并吡啶基、恶唑并吡啶基、噻唑并吡啶基、咪唑并哒嗪基、恶唑并哒嗪基、噻唑并哒嗪基、蝶啶基、呋咱基、苯并三唑基、吡唑并吡啶基和嘌呤基等。
[0136] 本发明中使用的术语“脂杂环基”是指包含至少一个和最多四个，例如1个、2个、3个或4个独立地选自N、O或S的杂原子的任选被取代的单环或双环饱和、部分饱的环状系统，优选具有4～10，即4、5、6、7、8、9或10个原子的杂环基，条件是该杂环基的环不含两个相邻的O或S原子。优选的杂环基包括但不限于包含至少一个，例如1个、2个或3个独立地选自N、O或S的杂原子的饱和环烷基，优选具有3-8个原子，即3，4，5，6，7或8个原子的脂杂环基。“脂杂环基”的实例包括但不限于吡咯烷基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、四氢噻吩基、哌啶基、吗啉基或哌嗪基等。
[0137] 本发明中的芳香杂环基或脂杂环基可以被以下基团取代：C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、腈基、卤素、羟基、氨基、硝基、单(C1-C6)烷基氨基、二(C1-C6)烷基氨基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基或芳香杂环基烷基或取代芳香杂环基烷基得到所述“取代芳香杂环基”或“取代脂杂环基”。具体的实例包括但不限于2-氯嘧啶-4-基、4-氯嘧啶-2-基、6-氯嘧啶-4-基、2-甲氧基嘧啶-4-基、4-甲氧基嘧啶-2-基、6-甲氧基嘧啶-4-基、2-甲硫基嘧啶-4-基、4-甲硫基嘧啶-2-基、6-甲硫基嘧啶-4-基、1,2,4-三氮唑-1-甲基、2-甲基嘧啶-4-基、4-甲基嘧啶-2-基、6-甲基嘧啶-4-基、2-氯苯并咪唑-1-基、四氢吡喃甲基。
[0138] 其中，当前述定义的“烷基”被一个或多个上述芳香杂环基取代，或磺酰基、酰基分别被上述定义的芳香杂环基取代后分别得到所述“芳香杂环基烷基”、“芳香杂环基磺酰基”、“芳香杂环基酰基”。
[0139] 当前述定义的“烷基”被一个或多个上述定义的取代芳香杂环基取代，或磺酰基、酰基分别被上述定义的取代芳香杂环基取代后分别得到所述“取代芳香杂环基烷基”、“取代芳香杂环基磺酰基”、“取代芳香杂环基酰基”，其中，所述芳香杂环基烷基例如为5-或6-元芳香杂环基C1-C3烷基。
[0140] 本发明中“芳香杂环基烷基”、“芳香杂环基磺酰基”、“芳香杂环基酰基”、“取代芳香杂环基烷基”、“取代芳香杂环基磺酰基”或“取代芳香杂环基酰基”具体的实例包括但不限于吡啶乙基、咪唑-1-甲酰基、噻唑-2-磺酰基。
[0141] 本发明中使用的术语“C3-C6环烷基”是指具有3～6，即3、4、5、6个碳原子的饱和碳环基团。该环烷基可以是单环或者多环稠合系统，而且可以稠合在芳环上。这些基团的实例包括环丙基、环丁基、环戊基和环己基等。本文的环烷基可以是未取代的，或者在一个或多个可取代的位置被合适的基团取代。例如，本发明中的环烷基可任选被以下基团取代：C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、腈基、卤素、羟基、氨基、硝基、单(C1-C6)烷基氨基、二(C1-C6)烷基氨基、C2-C6烯基、C2-C6炔基、C1-C6卤代烷基或C1-C6卤代烷氧基。
[0142] 本发明中使用的术语“可药用盐”意指在制药上可接受的并且具有母体化合物的所需药理学活性的本发明化合物的盐。这类盐包括：与无机酸或与有机酸形成的酸加成的盐，所述的无机酸诸如盐酸，氢溴酸，硫酸，硝酸，磷酸等；所述的有机酸诸如乙酸，丙酸，己酸，环戊丙酸，乙醇酸，丙酮酸，乳酸，丙二酸，琥珀酸，苹果酸，马来酸，富马酸，酒石酸，柠檬酸，苯甲酸，肉桂酸，扁桃酸，甲磺酸，乙磺酸，苯磺酸，萘磺酸，樟脑磺酸，葡庚糖酸，葡糖酸，谷氨酸，羟基萘甲酸，水杨酸，硬脂酸，粘康酸等；或在母体化合物上存在的酸性质子被金属离子，例如碱金属离子或碱土金属离子取代时形成的盐；或与有机碱形成的配位化合物，所述的有机碱诸如乙醇胺，二乙醇胺，三乙醇胺，N-甲基葡糖胺等。
[0143] 本发明中使用的术语“溶剂化物”意指本发明化合物与制药上可接受的溶剂结合形成的物质。制药上可接受的溶剂包括水，乙醇，乙酸等。溶剂化物包括化学计算量的溶剂合物和非化学计算量的溶剂合物，优选为水合物。本发明的化合物可以用水或各种有机溶剂结晶或重结晶，在这种情况下，可能形成各种溶剂化物。
[0144] 本发明中使用的术语“受试者”包括哺乳动物和人，优选为人。
[0145] 本领域的技术人员能够理解，本发明的化合物存在立体异构现象，例如存在顺反异构体或对映异构体。因此，本说明书中当提及本发明的化合物时，本发明化合物包括所述通式I化合物、其异构体、可药用盐或溶剂化物。本发明的化合物还包括本发明化合物在哺乳动物体内的活性代谢物。
[0146] 说明书的“具体实施方式”部分举例说明了本发明化合物的制备方法及其抗肿瘤细胞的作用。
[0147] 本发明的药物组合物包括有效剂量的本发明通式I化合物、其异构体、可药用盐或溶剂化物，和一种或多种适宜的药学上可接受的载体。这里的药用载体包括但不限于：离子交换剂，氧化铝，硬脂酸铝，卵磷脂，血清蛋白如人血白蛋白，缓冲物质如磷酸盐，甘油，山梨酸，山梨酸钾，饱和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物，水，盐或电解质，如硫酸鱼精蛋白，磷酸氢二钠，磷酸氢钾，氯化钠，锌盐，胶态氧化硅，三硅酸镁，聚乙烯吡咯烷酮，纤维素物质，聚乙二醇，羧甲基纤维素钠，聚丙烯酸酯，蜂蜡，羊毛脂。
[0148] 本发明化合物的药物组合物可以以下面的任意方式施用：口服，喷雾吸入，直肠用药，鼻腔用药，颊部用药，局部用药，非肠道用药，如皮下，静脉，肌内，腹膜内，鞘内，心室内，胸骨内和颅内注射或输入，或借助一种外植储器用药。其中优选口服、腹膜内或静脉内给药方式。
[0149] 当口服用药时，本发明化合物可制成任意口服可接受的制剂形式，包括但不限于片剂、胶囊、水溶液或水悬浮液。其中，片剂使用的载体一般包括乳糖和玉米淀粉，另外也可加入润滑剂如硬脂酸镁。胶囊制剂使用的稀释剂一般包括乳糖和干燥玉米淀粉。水悬浮液制剂则通常是将活性成分与适宜的乳化剂和悬浮剂混合使用。如果需要，以上口服制剂形式中还可加入一些甜味剂、芳香剂或着色剂。
[0150] 当局部用药时，特别是治疗局部外敷容易达到的患面或器官，如眼睛、皮肤或下肠道神经性疾病时，可根据不同的患面或器官将本发明化合物制成不同的局部用药制剂形式，具体说明如下：
[0151] 当眼部局部施用时，本发明化合物可配制成一种微粉化悬浮液或溶液的制剂形式，所使用载体为等渗的一定pH的无菌盐水，其中可加入也可不加防腐剂如氯化苄基烷醇盐。对于眼用，也可将化合物制成膏剂形式如凡士林膏。
[0152] 当皮肤局部施用时，本发明化合物可制成适当的软膏、洗剂或霜剂制剂形式，其中将活性成分悬浮或溶解于一种或多种载体中。软膏制剂可使用的载体包括但不限于：矿物油，液体凡士林，白凡士林，丙二醇，聚氧化乙烯，聚氧化丙烯，乳化蜡和水；洗剂或霜剂可使用的载体包括但不限于：矿物油，脱水山梨糖醇单硬脂酸酯，吐温60，十六烷酯蜡，十六碳烯芳醇，2-辛基十二烷醇，苄醇和水。
[0153] 本发明化合物还可以无菌注射制剂形式用药，包括无菌注射水或油悬浮液或无菌注射溶液。其中，可使用的载体和溶剂包括水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。另外，灭菌的非挥发油也可用作溶剂或悬浮介质，如单甘油酯或二甘油酯。
[0154] 对受试者给予的本发明化合物的量取决于所述疾病或病况的类型和严重程度以及受试者的特征，如一般健康状况、年龄、性别、体重和对药物的耐受度，还取决于制剂的类型和药物的给药方式，以及给药周期或时间间隔等因素。本领域技术人员能够根据这些因素和其它因素来确定适当的剂量。一般而言，本发明的化合物用于治疗肿瘤的日剂量可为大约1～800毫克，该日剂量可以视情况一次或分多次给予。本发明化合物可以在剂量单位中提供，在剂量单位中的含量可以为0.1～200毫克，例如1～100毫克。
[0155] 发明的有益效果
[0156] 本发明提供了一类结构新颖的哌啶氨甲酰类化合物，其能有效抑制/逆转细菌或肿瘤耐药性，并能作为Hsp70抑制剂有效预防和/或治疗Hsp70引起的疾病或症状，为相关疾病的治疗提供了新的医学策略。
具体实施方式
[0157] 下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
[0158] 化合物的熔点由RY-1熔点仪测定，温度计未校正。质谱由MicromassZabSpec高分辨率质谱仪(分辨率1000)测定。1H NMR由JNM-ECA-400超导NMR仪测定，工作频率1H NMR300MHz，13C NMR100MHz。
[0159] 实施例1N-甲基-N-[1-(4-氯嘧啶-2-基)哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁基酯
[0160]
[0161] 将2,4-二氯嘧啶75g，4-N-叔丁氧羰基-4-N-甲基氨基哌啶129g，TEA75g和THF(700ml，10X)加入到三口圆底烧瓶中，室温反应，2h后结束反应，减压蒸去反应液，DCM和水萃取两次，饱合食盐水洗2次，将有机相合并，无水硫酸钠干燥，浓缩后粗品约为190g，取500mg过柱分离，极性小的为实施例1目标化合物N-甲基-N-[1-(4-氯嘧啶-2-基)哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁基酯，极性大的为实施例2所述化合物N-甲基-N-[1-(2-氯嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁基酯。1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.49(s,9H)；δ1.62-1.69(m,2H)；δ
1.74-1.73(t,2H)；δ2.73(s,3H)；δ2.89-2.95(m，2H)；δ4.28-4.32(m,2H)；δ4.86-4.90(m,
2H)；δ6.49-6.51(d,1H)；δ8.15-8.16(d,1H)。MS(TOF)326.85(M+)。
1.74-1.73(t,2H)；δ2.73(s,3H)；δ2.89-2.95(m，2H)；δ4.28-4.32(m,2H)；δ4.86-4.90(m,
2H)；δ6.49-6.51(d,1H)；δ8.15-8.16(d,1H)。MS(TOF)326.85(M+)。
[0162] 实施例2N-甲基-N-[1-(2-氯嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁基酯
[0163]
[0164] 采用实施例1的方法，分离得到极性较大的化合物为实施例2所述化合物。1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.495(s,9H)；δ1.60-1.70(m,2H)；δ1.79-1.82(t,2H)；δ2.73(s,3H)；δ2.94-3.00(t，2H)；δ4.20-4.30(m,2H)；δ4.50-4.54(m,2H)；δ6.43-6.44(d,1H)；δ8.04-8.06(d,1H)。MS(TOF)326.85(M+)。
[0165] 实施例3N-甲基-N-[1-(6-氯嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯
[0166]
[0167] 采用实施例1的方法，将其中的2，4-二氯嘧啶改为4，6-二氯嘧啶，得到产物50g。1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.47(s,9H)；δ1.60-1.61(m,2H)；δ1.63-1.64(m,2H)；δ2.79(s,
3H)；δ2.91-2.97(t,2H)；δ4.25(s,1H)；δ4.48(s,2H)；δ6.52(s,1H)；δ8.36(s,1H)。MS(TOF)
326.8(M+)。
3H)；δ2.91-2.97(t,2H)；δ4.25(s,1H)；δ4.48(s,2H)；δ6.52(s,1H)；δ8.36(s,1H)。MS(TOF)
326.8(M+)。
[0168] 实施例4N-甲基-N-[1-(4-甲氧基嘧啶-2-基)哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯
[0169]
[0170] 将实施例1得到的粗产品190g溶于800ml无水甲醇中，缓慢加入甲醇钠35g(1.2eq)反应放热。T＝70℃,反应6h结束反应，减压蒸去反应液，用DCM和水萃取两遍，合并有机相并干燥。浓缩，过柱得到化合物90g。1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.46(s,9H)；δ1.60-1.72(m,4H)；δ2.70(s,3H)；δ2.82-2.90(t,2H)；δ3.88(s,3H)；δ4.84-4.89(d,1H)；δ5.95-5.96(d,
1H)；δ8.02-8.04(d,1H)。MS(TOF)322.4(M+)。
1H)；δ8.02-8.04(d,1H)。MS(TOF)322.4(M+)。
[0171] 实施例5N-甲基-N-[1-(2-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁基酯[0172]
[0173] 采用实施例4的方法，通过柱层析分离提纯所得另一极性较实施例4产物小的化合物即为实例5目标化合物，40g。1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.46(s,9H)；δ1.62(m,2H)；δ1.72(m,2H)；δ2.70(s,3H)；δ2.90(t,2H)；δ3.91(s,3H)；δ4.49-4.51(m,3H)；δ6.18-6.19(m,2H)；δ8.00-8.01(d,1H)。MS(TOF)322.4(M+)。
[0174] 实施例6N-甲基-N-[1-(2-甲硫基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁基酯[0175]
[0176] 以实施例2所得产物为原料，采用实施例4的方法，将其中的甲醇钠换成甲硫醇钠，得到目标化合物36g。1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.494(s,9H)；δ1.615-1.651(m,2H)；δ1.752-1.785(m,2H)；δ2.521(s,3H)δ2.724(s,3H)；δ2.892-2.953(t，2H)；δ4.200-4.529(m,
2H)；δ4.532-4.569(m,2H)；δ6.223-6.239(d,1H)；δ8.025-8.040(d,1H)。MS(TOF)338.5(M+)。
2H)；δ4.532-4.569(m,2H)；δ6.223-6.239(d,1H)；δ8.025-8.040(d,1H)。MS(TOF)338.5(M+)。
[0177] 实施例7N-甲基-N-[1-(6-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯
[0178]
[0179] 采用实施例4的方法，将其中的原料换成实例3所述化合物，得到目标化合物33g。1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.47(s,9H)；δ1.55-1.65(m,2H)；δ1.72(m,2H)；δ2.70(s,3H)；δ
2.89(t,2H)；δ3.91(s,3H)；δ4.20(m,1H)；δ4.42-4.45(d,2H)；δ5.84(s,1H)；δ8.32(s,1H)。
MS(TOF)322.4(M+)。
2.89(t,2H)；δ3.91(s,3H)；δ4.20(m,1H)；δ4.42-4.45(d,2H)；δ5.84(s,1H)；δ8.32(s,1H)。
MS(TOF)322.4(M+)。
[0180] 实施例8N-甲基-N-[1-(2-甲硫基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸(1-叔丁氧基羰基哌啶-4-基)酯
[0181]
[0182] 将实施例6所述化合物加入浓盐酸脱Boc，再加碳酸钾得到游离胺。将20g所得游离胺(1eq)投入到200ml无水DCM中，搅拌，向其中加入17g(1.2eq)CDI,室温反应2h后，结束反应，减压蒸去反应液,将其溶于200mlDMF中。将17g原料4-羟基-1-哌啶基甲酸叔丁酯溶于200mlDMF中，向其中缓慢加入20g NaH，搅拌30min后。将其滴入反应液中。1h后反应完全，结束反应，将反应液用DCM和水萃取两遍，将有机相用饱和食盐水洗两遍，干燥，浓缩，过柱，得到10g纯品。1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.4642(s,9H)；δ1.62-1.74(m,8H)；δ2.50(s,3H)；δ
2.75(s,3H)；δ2.88-2.96(t,2H)；δ3.25-3.29(m,2H)；δ3.63-3.65(m,2H)；δ4.51-4.55(m,
2H)；δ4.88-5.05(m,1H)；δ6.21-6.25(d,1H)；δ8.01-8.06(d,1H)。MS(TOF)465.6(M+)。
2.75(s,3H)；δ2.88-2.96(t,2H)；δ3.25-3.29(m,2H)；δ3.63-3.65(m,2H)；δ4.51-4.55(m,
2H)；δ4.88-5.05(m,1H)；δ6.21-6.25(d,1H)；δ8.01-8.06(d,1H)。MS(TOF)465.6(M+)。
[0183] 实施例9(S)-N-甲基-N-[1-(2-甲硫基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸(1-叔丁氧基羰基吡咯烷-3-基)酯
[0184]
[0185] 采用实施例4的方法，将其中的甲醇钠改为甲硫醇钠，得到N-甲基-N-[1-(4-甲硫基嘧啶-2-基)哌啶-4-基]氨基甲酸叔丁酯，所得产品采用实施例8的方法，其中4-羟基-1-哌啶甲酸叔丁基酯换成(S)-3-羟基吡咯烷-1-基甲酸叔丁酯。得到5G产品。1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.47(s,9H)；δ1.62-1.71(m,5H)；δ2.05(m,2H)；δ2.72(s,3H)；δ2.79-2.90(m,2H)；δ3.41-3.45(m,4H)；δ3.90(s,3H)；δ4.87-4.91(m,2H)；δ5.26-5.30(m,1H)；δ5.26-5.30(m,1H)；δ5.98-5.99(d,1H)；δ8.04-8.06(d,1H)。MS(TOF)435.5(M+)。
[0186] 实施例10(S)-N-甲基-N-[1-(2-甲硫基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸(吡咯烷-3-基)酯盐酸盐
[0187]
[0188] 实施例6中得到的产品按顺序分别经实例8的方法、脱Boc，得到实例10所述化合物6g。将其中的(S)-4-羟基-1-哌啶甲酸叔丁基酯换成(S)-3-羟基吡咯烷-1-基甲酸叔丁酯
1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.099(t,1H)；δ1.685-1.787(m,4H)；δ2.208(m,2H)；δ2.686(s,
3H)；δ2.977-3.042(m，1H)；δ3.400-3.422(m,1H)；δ3.459-3.562(m,5H)；δ4.118-4.153(m,
2H)；δ4.712(s,3H)；δ5.124-5.156(m,1H)；δ5.288-5.294(m,1H)；δ6.645-6.664(d,1H)；δ
7.761-7.780(d,1H)。MS(TOF)387.9(M+)。
1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.099(t,1H)；δ1.685-1.787(m,4H)；δ2.208(m,2H)；δ2.686(s,
3H)；δ2.977-3.042(m，1H)；δ3.400-3.422(m,1H)；δ3.459-3.562(m,5H)；δ4.118-4.153(m,
2H)；δ4.712(s,3H)；δ5.124-5.156(m,1H)；δ5.288-5.294(m,1H)；δ6.645-6.664(d,1H)；δ
7.761-7.780(d,1H)。MS(TOF)387.9(M+)。
[0189] 实施例11N-甲基-N-[1-(2-甲硫基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(2,4-二氯-苯磺酰基)哌啶-4-基]酯
[0190]
[0191] 将400mg实例8所述化合物去BOC后，加入K2CO3游离出来，溶于3mlTHF中，常温反应，向其中加入0.5gK2CO3,227mg2，4-二氯苯磺酰氯。反应4h结束，加入少量水和乙酸乙酯，乙酸乙酯萃取3次，饱合氯化钠洗2次，无水硫酸钠干燥，浓缩，过柱，得到目标化合物130mg。1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.64-1.81(m,6H)；δ1.96-2.05(m,2H)；δ2.50(s,3H)；δ2.72(s,3H)；δ2.91(m,2H)；δ3.26(m,2H)；δ3.51(m,2H)；δ4.30(m,1H)；δ4.51(m,2H)；δ4.86-4.87(m,1H)；
δ6.20-6.22(d,1H)；δ7.26-7.36(dd,1H)；δ7.54-7.55(d,1H)；δ8.00(s,1H)；δ8.02-8.03(t,
1H)。MS(TOF)574.5(M+)。
δ6.20-6.22(d,1H)；δ7.26-7.36(dd,1H)；δ7.54-7.55(d,1H)；δ8.00(s,1H)；δ8.02-8.03(t,
1H)。MS(TOF)574.5(M+)。
[0192] 实施例12(S)-N-甲基-N-[1-(2-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(咪唑-1-羰基)吡咯烷-3-基]酯
[0193]
[0194] 实施例5中得到的产品按实施例10的方法，，将所得去BOC产物20g(1eq)投入到200ml无水DCM中，搅拌，向其中加入17g(1.2eq)CDI,室温反应2h后，分离所得产物20g。1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.24-1.28(m,4H)；δ1.65-1.74(d,1H)；δ2.05-2.23(d,1H)；δ2.73(s,3H)；δ2.94(m,2H)；δ3.70-3.78(m,4H)；δ3.93(s,3H)；δ4.3(m,1H)；δ4.53(m,2H)；δ5.30-
5.35(m,1H)；δ6.20-6.35(d,1H)；δ7.11(s,3H)；δ7.36(s,3H)；δ8.03-8.05(m,2H)。MS(TOF)
429.5(M+)。
5.35(m,1H)；δ6.20-6.35(d,1H)；δ7.11(s,3H)；δ7.36(s,3H)；δ8.03-8.05(m,2H)。MS(TOF)
429.5(M+)。
[0195] 实施例13(S)-N-甲基-N-[1-(2-甲硫基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(2-噻吩基磺酰基)吡咯烷-3-基]酯
[0196]
[0197] 采用实施例11的方法，将其中的2，4-二氯苯磺酰氯换成2-噻吩磺酰氯，得到化合物150mg。1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.54-1.68(m,4H)；δ2.04-2.07(m,2H)；δ2.42(s,2H)；δ2.50(s,2H)；δ2.75-2.90(m,3H)；δ3.36-3.54(m,4H)；δ4.24(m,1H)；δ4.50(m,1H)；δ5.15-
5.30(m,1H)；δ6.20-6.23(d,1H)；δ7.14(t,1H)；δ7.60-7.61(m,2H)；δ8.01-8.03(d,1H)。MS(TOF)497.7(M+)。
5.30(m,1H)；δ6.20-6.23(d,1H)；δ7.14(t,1H)；δ7.60-7.61(m,2H)；δ8.01-8.03(d,1H)。MS(TOF)497.7(M+)。
[0198] 实施例14N-甲基-N-[1-(2-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸对氟苯硫酯[0199]
[0200] 实施例5所得产物脱Boc得1g溶于20ml无水DCM中，再加入适量1mlTEA搅拌均匀。冰水浴条件下，将1g三光气溶于5ml无水DCM中，再把三光气溶液慢慢滴加进反应中，不断搅拌。反应1h后，将反反应液中投入1eq对氨基苯硫酚，1ml三乙室温反应。反应结束2小时后，停止反应，加入20ml水，DCM萃取3次,饱合氯化钠洗2次，无水硫酸钠干燥。过柱，分离得到化合物900mg。1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.73-1.85(m,5H)；δ2.77(s,5H)；δ3.96(s,3H)；δ4.57(s,3H)；δ6.23-6.24(d,1H)；δ7.09-7.13(m,2H)；δ7.47-7.51(m,2H)；δ8.05-8.07(d,
1H)。MS(TOF)376.4(M+)。
1H)。MS(TOF)376.4(M+)。
[0201] 实施例15N-甲基-N-[1-(2-甲硫基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸对氟苯硫酯[0202]
[0203] 将实施例6所得化合物采用实施例14的方法，得到化合物550mg。1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.72-1.84(m,5H)；δ2.53(s,3H)；δ2.94(s,5H)；δ2.67(m,3H)；δ6.24-6.25(d,1H)；δ7.09-7.13(m,2H)；δ7.47-7.51(m,2H)；δ8.05-8.06(d,1H)。MS(TOF)392.5(M+)。
[0204] 实施例16N-甲基-N-[1-(4-甲氧基嘧啶-2-基)哌啶-4-基]氨基甲酸(1-乙酰基哌啶-4-基)酯
[0205]
[0206] 实施例4所得化合物分别采用实施例8、实施例11的方法，将实施例11中的2，4-二氯苯磺酰氯改成乙酰氯，得到化合物160mg。1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.66-1.71(m,6H)；δ1.92(m,2H)；δ2.11(s,3H)；δ2.77(s,3H)；δ2.89(m,2H)；δ3.37-3.84(m,4H)；δ3.88(s,3H)；δ
4.30(m,1H)；δ4.88-4.91(m,3H)；δ5.97-5.98(d,1H)；δ8.04-8.05(d,1H)。MS(TOF)392.5(M+)。
4.30(m,1H)；δ4.88-4.91(m,3H)；δ5.97-5.98(d,1H)；δ8.04-8.05(d,1H)。MS(TOF)392.5(M+)。
[0207] 实施例17(S)-N-甲基-N-[1-(4-甲氧基嘧啶-2-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(2-噻吩磺酰基)吡咯烷-3-基]酯
[0208]
[0209] 将实施例9所得产品采用实施例11的方法，并将其中的2，4-二氯苯磺酰氯换成2-噻吩磺酰氯，得到化合物170mg。1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.58-1.66(m,4H)；δ2.03-2.08(m,2H)；δ2.44(s,2H)；δ3.40-3.60(m,4H)；δ3.90(s,3H)；δ4.87-4.90(d,2H)；δ5.16(s,1H)；δ5.99-6.00(d,1H)；δ7.15(m,1H)；δ7.61-7.62(t,1H)；δ8.05-8.06(d,1H)。MS(TOF)481.6(M+)。
[0210] 实施例18N-甲基-N-[1-(2-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(3-氯苄基)哌啶-3-基]酯
[0211]
[0212] 将实施例5所得化合物分别采用实施例8、实施例11的方法，并将实施例8中的4-羟基-1-哌啶甲酸叔丁酯改成3-羟基-1-哌啶甲酸叔丁酯，实施例11中的2，4-二氯苯磺酰氯改成3-氯苄氯，得到化合物150mg。1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.74-2.76(m,12H)；δ2.93(s,3H)；δ3.46(m,2H)；δ3.92(s,3H)；δ4.50-4.52(m,2H)；δ4.81(s,1H)；δ5.30(s,1H)；δ6.19-
6.20(d,1H)；δ7.21-7.22(m,2H)；δ7.33(s,1H)；δ8.01-8.02(d,1H)。MS(TOF)474(M+)。
6.20(d,1H)；δ7.21-7.22(m,2H)；δ7.33(s,1H)；δ8.01-8.02(d,1H)。MS(TOF)474(M+)。
[0213] 实施例19N-甲基-N-[1-(4-甲氧基嘧啶-2-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(3-氯苄基)哌啶-4-基]酯
[0214]
[0215] 将实施例4所得化合物分别采用实施例8、实施例11的方法，并将实施例11中的2，4-二氯苯磺酰氯改成3-氯苄氯，得到化合物145mg。1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.65-1.80(m,6H)；δ1.95-1.98(m,2H)；δ2.36(m,2H)；δ2.65(m,2H)；δ2.66(s,2H)；δ2.77(m,2H)；δ3.51(s,2H)；δ3.90(s,2H)；δ4.79(s,1H)；δ4.89-4.92(d,2H)；δ5.98-5.99(d,1H)；δ7.23-7.28(m,3H)；δ7.36(s,1H)；δ8.05-8.07(d,1H)。MS(TOF)474(M+)。
[0216] 实施例20N-甲基-N-[1-(2-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(2，3-二氯苯磺酰基)哌啶-3-基]酯
[0217]
[0218] 将实施例5所得化合物分别采用实施例8、实施例11的方法，并将实施例8中的4-羟基-1-哌啶甲酸叔丁酯改成3-羟基-1-哌啶甲酸叔丁酯，将实施例11中的2，4-二氯苯磺酰氯改成2，3-二氯苯磺酰氯，得到化合物156mg。1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.61-1.95(m,9H)；δ2.75-2.78(m,3H)；δ2.95(m,3H)；δ3.29(m,1H)；δ3.54(d,1H)；δ3.92(m,3H)；δ4.83(m,1H)；δ
6.19-6.21(d,1H)；δ7.28-7.35(m,1H)；δ7.64-7.66(d,1H)；δ8.00-8.03(d,1H)。MS(TOF)
558.5(M+)。
6.19-6.21(d,1H)；δ7.28-7.35(m,1H)；δ7.64-7.66(d,1H)；δ8.00-8.03(d,1H)。MS(TOF)
558.5(M+)。
[0219] 实施例21N-甲基-N-[1-(2-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(2，4-二氯苯磺酰基)哌啶-4-基]酯
[0220]
[0221] 将实施例4所得化合物分别采用实施例8、实施例11的方法，得到化合物151mg。1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.71-1.98(m,8H)；δ2.76(s,3H)；δ2.90(s,2H)；δ3.52(m,2H)；δ3.91(s,3H)；δδ4.89-4.92(d,3H)；δ5.99-6.00(d,1H)；δ7.28-7.29(d,1H)；δ7.56(s,1H)；δ8.02-8.07(m,2H)。MS(TOF)558.5(M+)。
[0222] 实施例22N-甲基-N-[1-(2-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(4-氟苄基)哌啶-3-基]酯
[0223]
[0224] 将实施例5所得化合物分别采用实施例8、实施例11的方法，并将实施例11中的2，4-二氯苯磺酰氯改成4-氟苄氯，得到化合物147mg。1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.63-2.23(m,10H)；δ2.55(m,1H)；δ2.76(s,3H)；δ2.77(m,1H)；δ2.93(t,2H)；δ3.50(m,2H)；δ4.20-
4.81(m,4H)；δ6.20-6.21(d,1H)；δ6.93-7.02(t,2H)；δ7.26-7.30(m,2H)；δ8.04-8.05(d,
1H)。MS(TOF)457.5(M+)。
4.81(m,4H)；δ6.20-6.21(d,1H)；δ6.93-7.02(t,2H)；δ7.26-7.30(m,2H)；δ8.04-8.05(d,
1H)。MS(TOF)457.5(M+)。
[0225] 实施例23(S)-N-甲基-N-[1-(2-甲硫基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(2,3-二氯-苯磺酰基)吡咯烷-3-基]酯
[0226]
[0227] 将实施例10中得到的未脱Boc的化合物采用实施例11的方法，将其中的2，4-二氯苯磺酰氯改成2，3-二氯苯磺酰氯，得到化合物165mg。1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.50-1.80(m,4H)；δ2.18(m,2H)；δ2.52(s,3H)；δ2.65(s,3H)；δ2.93(t,2H)；δ3.60(m,4H)；δ4.20-4.30(m,1H)；δ4.54(s,2H)；δ5.31(s,1H)；δ6.22-6.23(d,1H)；δ7.28-7.36(t,1H)；δ8.03-8.07(d,1H)。MS(TOF)560.5(M+)。
[0228] 实施例24(S)-N-甲基-N-[1-(2-甲硫基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(2,4-二氯-苯磺酰基)吡咯烷-3-基]酯
[0229]
[0230] 将实施例10中得到的未脱Boc的化合物采用实施例11的方法，得到化合物149mg。1
H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.24-1.27(m,4H)；δ1.71-1.74(m,2H)；δ2.50(s,3H)；δ2.63(s,
3H)；δ2.90(t,2H)；δ3.57-3.61(m,4H)；δ4.11-4.12(m,2H)；δ5.30(m,2H)；δ6.21-6.22(d,
1H)；δ7.37-7.39(d,1H)；δ8.01-8.03(m,1H)。MS(TOF)560.5(M+)。
H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.24-1.27(m,4H)；δ1.71-1.74(m,2H)；δ2.50(s,3H)；δ2.63(s,
3H)；δ2.90(t,2H)；δ3.57-3.61(m,4H)；δ4.11-4.12(m,2H)；δ5.30(m,2H)；δ6.21-6.22(d,
1H)；δ7.37-7.39(d,1H)；δ8.01-8.03(m,1H)。MS(TOF)560.5(M+)。
[0231] 实施例25N-甲基-N-[1-(6-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸(1-乙酰哌啶-3-基)酯
[0232]
[0233] 将实施例7所得化合物分别采用实施例8、实施例11的方法，并将实施例8中的4-羟基-1-哌啶甲酸叔丁酯改成3-羟基-1-哌啶甲酸叔丁酯，将实施例11中的2，4-二氯苯磺酰氯改成乙酰氯，得到化合物150mg。1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.72-1.86(m,8H)；δ2.07-2.11(m,4H)；δ2.73(s,3H)；δ2.90-2.93(m,2H)；δ3.24(t,1H)；δ3.53-3.56(m,2H)；δ3.93(s,4H)；δ4.45-4.48(d,2H)；δ4.78(m,1H)；δ5.85(s,1H)；δ8.33(s,1H)。MS(TOF)391.5(M+)。
[0234] 实施例26N-甲基-N-[1-(6-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(2,2,2-三氟乙酰基)哌啶-3-基]酯
[0235]
[0236] 将实施例7所得化合物分别采用实施例8、实施例11的方法，并将实施例8中的4-羟基-1-哌啶甲酸叔丁酯改成3-羟基-1-哌啶甲酸叔丁酯，并将实施例11中的2，4-二氯苯磺酰氯改成3，3，3-三氟乙酰氯，得到化合物156mg。1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.72-1.88(m,8H)；δ2.78(s,3H)；δ2.78-3.14(m,4H)；δ3.93(s,5H)；δ4.20-4.47(m,3H)；δ4.93(m,1H)；δ
5.83(s,1H)；δ8.33(s,1H)。MS(TOF)445.4(M+)。
5.83(s,1H)；δ8.33(s,1H)。MS(TOF)445.4(M+)。
[0237] 实施例27N-甲基-N-[1-(6-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(咪唑-1-羰基)哌啶-3-基]酯
[0238]
[0239] 将实施例7所得化合物分别采用实施例8、实施例11的方法，并将实施例8中的4-羟基-1-哌啶甲酸叔丁酯改成3-羟基-1-哌啶甲酸叔丁酯，并将实施例11中的2，4-二氯苯磺酰氯改成CDI，得到化合物153mg。1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.73(m,5H)；1.95-2.10(m,3H)；δ2.75(s,3H)；δ2.90(m,2H)；δ3.37-3.39(s,1H)；δ3.62(d,1H)；δ3.84-3.85(d,2H)；δ3.92(s,
3H)；δ4.26(m,1H)；δ4.74(m,2H)；δ4.91(s,1H)；δ5.87(s,1H)；δ7.11(s,1H)；δ7.22(s,1H)；δ
7.89(s,1H)；δ8.34(s,1H)。MS(TOF)443.5(M+)。
3H)；δ4.26(m,1H)；δ4.74(m,2H)；δ4.91(s,1H)；δ5.87(s,1H)；δ7.11(s,1H)；δ7.22(s,1H)；δ
7.89(s,1H)；δ8.34(s,1H)。MS(TOF)443.5(M+)。
[0240] 实施例28N-甲基-N-[1-(2-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(2-噻吩磺酰基)哌啶-3-基]酯
[0241]
[0242] 实施例5所得化合物分别采用实施例8、实施例11的方法，将实施例11中的2，4-二氯苯磺酰氯改成2-噻吩磺酰氯，得到化合物155mg。1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.26(m,2H)；δ1.68-1.91(m,9H)；δ2.78(s,4H)；δ2.96-3.17(m,3H)；δ3.94(s,3H)；δ4.12-4.53(m,3H)；δ
6.21-6.22(d,1H)；δ7.13-7.14(m,1H)；δ7.53-7.54(m,1H)；δ7.60-7.61(d,1H)；δ8.03-8.04(m,1H)。MS(TOF)495.6(M+)。
6.21-6.22(d,1H)；δ7.13-7.14(m,1H)；δ7.53-7.54(m,1H)；δ7.60-7.61(d,1H)；δ8.03-8.04(m,1H)。MS(TOF)495.6(M+)。
[0243] 实施例29N-甲基-N-[1-(4-甲氧基嘧啶-2-基)哌啶-4-基]氨基甲酸[1-(1-噻吩磺酰基)哌啶-4-基]酯
[0244]
[0245] 实施例4所得化合物分别采用实施例8、实施例11的方法，并将实施例11中的2，4-二氯苯磺酰氯改成2-噻吩磺酰氯，得到化合物150mg。1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.73(m,2H)；1.95-2.10(m,2H)；δ2.19(s,5H)；δ2.65(m,3H)；δ2.70-3.39(m,7H)；δ3.90(s,3H)；δ
4.84(m,3H)；δ4.74(m,2H)；δ5.97(dd,1H)；δ7.17(m,1H)；δ7.57(t,1H)；δ7.63(t,1H)；δ8.10(dd,1H)。MS(TOF)495.6(M+)。
4.84(m,3H)；δ4.74(m,2H)；δ5.97(dd,1H)；δ7.17(m,1H)；δ7.57(t,1H)；δ7.63(t,1H)；δ8.10(dd,1H)。MS(TOF)495.6(M+)。
[0246] 实施例30N-甲基-N-[1-(4-氯嘧啶-2-基)哌啶-4-基]-[2-(咪唑-1-基)]乙酰胺[0247]
[0248] 将实施例1所得化合物10g(1eq)投入到250ml三口圆底烧瓶中，加入三氟乙酸脱Boc，再加碳酸钾得到游离胺。再将所得的游离胺溶于二氯甲烷中，向其中加入6.8g三乙胺(1.5eq)，冰水浴，向其中缓慢滴加6g氯乙酰氯(1.2eq)，30min后滴加完毕。1h后反应完毕，加入二氯甲烷和水萃取两遍，合并有机相，干燥浓缩得到粗品。并将400mg所得粗品投入到反应中，加入5mlDMF，再加入500mgK2CO3,再投入200mg咪唑，4h反应完。将反应液慢慢滴加入水中，析出目标化合物100mg。1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.63-1.71(m,2H)；1.74-1.77(m,2H)；δ2.87-2.99(m,5H)；δ4.75(m,1H)；δ4.85-4.99(m,4H)；δ6.25-6.53(dd,1H)；δ7.02(s,
1H)；δ7.15(s,1H)；δ7.71(s,1H)；δ8.16-8.17(dd,1H)。MS(TOF)334.8(M+)。
1H)；δ7.15(s,1H)；δ7.71(s,1H)；δ8.16-8.17(dd,1H)。MS(TOF)334.8(M+)。
[0249] 实施例31N-甲基-N-[1-(4-氯嘧啶-2-基)哌啶-4-基]-2-(1H-1，2,4-三氮唑-1-基)乙酰胺
[0250]
[0251] 采用实施例30的方法，将其中的咪唑改为1H-1，2,4-三氮唑，得到化合物110mg。
[0252] 1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.63-1.76(m,4H)；δ2.85-2.97(m,5H)；δ4.72(m,1H)；δ4.88-4.92(m,4H)；δ5.06(s,2H)；δ6.51-6.52(dd,1H)；δ7.98(s,1H)；δ8.15-8.16(dd,1H)；δ
8.26(s,1H)。MS(TOF)335.8(M+)。
8.26(s,1H)。MS(TOF)335.8(M+)。
[0253] 实施例32N-甲基-N-[1-(2-氯嘧啶-4-基)哌啶-4-基]-2-(2-氯苯并咪唑-1-基)乙酰胺
[0254]
[0255] 将实施例2所得化合物采用实施例30的方法，将其中的咪唑改为2-氯-苯并咪唑，得到化合物111mg。1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.66-1.70(m,2H)；δ1.79-1.82(m,2H)；δ2.86-3.00(m,5H)；δ4.54(s,2H)；δ4.73(m,1H)；δ4.97(s,2H)；δ6.42-6.44(d,1H)；δ7.21-
7.22(m,1H)；δ7.28-7.31(dd,1H)；δ7.72-7.40(dd,1H),δ8.05-8.06(d,1H).MS(TOF)419.3(M+)。
7.22(m,1H)；δ7.28-7.31(dd,1H)；δ7.72-7.40(dd,1H),δ8.05-8.06(d,1H).MS(TOF)419.3(M+)。
[0256] 实施例33N-甲基-N-[1-(6-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]-[2-(咪唑-1-基)]乙酰胺
[0257]
[0258] 将实施例7所得化合物10g(1eq)投入到250ml三口圆底烧瓶中，向其中加入6.8g三乙胺(1.5eq)，冰水浴，向其中缓慢滴加6g氯乙酰氯(1.2eq)，30min后滴加完毕。1h后反应完毕，加入二氯甲烷和水萃取两遍，合并有机相，干燥浓缩得到粗品。将400mg所得粗品投入到反应中，加入5mlDMF，再加入500mgK2CO3,再投入200mg咪唑，4h反应完。将反应液慢慢滴加入水中，析出目标化合物100mg。1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.63-1.75(m,4H)；δ2.85-2.97(m,5H)；δ3.92(s,3H)；δ4.45-4.49(m,2H)；δ4.79(s,2H)；δ6.98(s,1H)；δ7.12(s,1H)；δ7.54(s,
1H)；δ8.33(s,1H)。MS(TOF)330.4(M+)。
1H)；δ8.33(s,1H)。MS(TOF)330.4(M+)。
[0259] 实施例34N-甲基-N-[1-(6-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]-2-(1H-1,2,4-三氮唑-1-基)乙酰胺
[0260]
[0261] 采用实施例33的方法，将其中的咪唑改为1H-1，2,4-三氮唑，得到化合物113mg。1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.63-1.74(m,4H)；δ2.84-2.95(m,5H)；δ3.91(s,3H)；δ4.44-4.48(m,2H)；δ4.72(m,2H)；5.05(s,2H)；δ5.84(s,1H)；δ7.97(s,1H)；δ8.25(s,1H)；δ8.32(s,
1H)。MS(TOF)331.4(M+)。
1H)。MS(TOF)331.4(M+)。
[0262] 实施例35N-甲基-N-[1-(6-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]-2-(2-氯苯并咪唑-1-基)乙酰胺
[0263]
[0264] 采用实施例33的方法，将其中的咪唑改为2-氯-苯并咪唑，得到化合物101mg。1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.68-1.72(m,4H)；δ2.85-2.93(dd,4H)；δ2,97(s,3H)；δ3.93(s,3H)；δ4.45-4.48(m,2H)；δ4.72(m,1H)；δ4.94(s,2H)；δ5.85(s,1H)；δ7.20-7.21(dd,1H)；δ
7.28-7.30(d,1H)；δ7.71-7.73(dd,1H),δ8.34(s,1H).MS(TOF)414.9(M+)。
7.28-7.30(d,1H)；δ7.71-7.73(dd,1H),δ8.34(s,1H).MS(TOF)414.9(M+)。
[0265] 实施例36N-甲基-N-[1-(2-甲硫基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]-2-{[3-(1,2,4-三氮唑-1-甲基)]吡咯烷-1-基}乙酰胺
[0266]
[0267] 将实施例6所得化合物采用实施例33的方法，并将实施例33中的咪唑改为吡咯烷-3-甲基-1H-1,2,4-三氮唑，得到化合物150mg。1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.43-1.68(m,
7H)；δ2.00-2.10(m,1H)；δ2,51(s,3H)；δ2.74(m,1H)；δ2.77(s,3H)；δ2.85-2.97(m,2H)；δ
3.17-3.60(m,3H)；δ3.32(m,2H)；δ4.14-4.15(m,2H)；δ4.54(s,2H)；δ4.74(m,1H)；δ6.21-
6.22(d,1H)；δ7.93(s,1H)；δ8.02-8.04(d,1H),δ8.20(s,1H).MS(TOF)430.6(M+)。
7H)；δ2.00-2.10(m,1H)；δ2,51(s,3H)；δ2.74(m,1H)；δ2.77(s,3H)；δ2.85-2.97(m,2H)；δ
3.17-3.60(m,3H)；δ3.32(m,2H)；δ4.14-4.15(m,2H)；δ4.54(s,2H)；δ4.74(m,1H)；δ6.21-
6.22(d,1H)；δ7.93(s,1H)；δ8.02-8.04(d,1H),δ8.20(s,1H).MS(TOF)430.6(M+)。
[0268] 实施例37N-甲基-N-[1-(2-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]-2-{[2-(1H-1,2,4-三氮唑-1-甲基)]吡咯烷-1-基}乙酰胺
[0269]
[0270] 将实施例5所得化合物采用实施例33的方法，并将实施例33中的咪唑改为吡咯烷-3-甲基-1H-1,2,4-三氮唑，得到化合物110mg。1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.62-1.66(m,
7H)；δ1.69-1.72(m,1H)；δ2,73(s,3H)；δ2.78(m,1H)；δ2.97(m,2H)；δ3.17-3.20(d,2H)；δ
3.34-3.38(d,2H)；δ3.94(s,3H)；δ4.15-4.15(m,2H)；δ4.54(s,2H)；δ4.74(m,1H)；δ6.20-
6.22(d,1H)；δ7.93(s,1H)；δ8.04-8.05(d,1H),δ8.21(s,1H).MS(TOF)414.5(M+)。
7H)；δ1.69-1.72(m,1H)；δ2,73(s,3H)；δ2.78(m,1H)；δ2.97(m,2H)；δ3.17-3.20(d,2H)；δ
3.34-3.38(d,2H)；δ3.94(s,3H)；δ4.15-4.15(m,2H)；δ4.54(s,2H)；δ4.74(m,1H)；δ6.20-
6.22(d,1H)；δ7.93(s,1H)；δ8.04-8.05(d,1H),δ8.21(s,1H).MS(TOF)414.5(M+)。
[0271] 实施例38N-甲基-N-[1-(6-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]-2-{[2-(1H-1,2,4-三氮唑-1-甲基)]吡咯烷-1-基}乙酰胺
[0272]
[0273] 将实施例7所得化合物采用实施例33的方法，并将实施例33中的咪唑改为吡咯烷-3-甲基-1H-1,2,4-三氮唑，得到化合物110mg。1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.61-1.67(m,
7H)；δ1.67-1.70(m,1H)；δ2,73(s,3H)；δ2.77(m,1H)；δ2.94(m,2H)；δ3.16-3.20(d,2H)；δ
3.29(d,2H)；δ3.92(s,3H)；δ4.13-4.15(m,2H)；δ4.43-4.47(d,2H)；δ4.72(m,1H)；δ5.84(s,
1H)；δ7.92(s,1H)；δ8.20(s,1H),δ8.32(s,1H)。MS(TOF)414.5(M+)。
7H)；δ1.67-1.70(m,1H)；δ2,73(s,3H)；δ2.77(m,1H)；δ2.94(m,2H)；δ3.16-3.20(d,2H)；δ
3.29(d,2H)；δ3.92(s,3H)；δ4.13-4.15(m,2H)；δ4.43-4.47(d,2H)；δ4.72(m,1H)；δ5.84(s,
1H)；δ7.92(s,1H)；δ8.20(s,1H),δ8.32(s,1H)。MS(TOF)414.5(M+)。
[0274] 实施例39N-甲基-N-[1-(4-甲氧基嘧啶-2-基)哌啶-4-基]-2-{[2-(1H-1,2,4-三氮唑-1-甲基)]吡咯烷-1-基}乙酰胺
[0275]
[0276] 将实施例4所得化合物采用实施例33的方法，并将实施例33中的咪唑改为吡咯烷-3-甲基-1H-1,2,4-三氮唑，得到化合物109mg。1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.59-1.65(m,
6H)；δ1.66-1.69(m,1H)；δ2.04(m,1H)；δ2,76(m,1H)；δ2,79(s,3H)；δ2.93(m,2H)；δ3.19-
3.22(m,2H)；δ3.35-3.39(d,2H)；δ3.90(s,3H)；δ4.16(m,2H)；δ4.88-4.92(m,1H)；δ5.31(m,
1H)；δ5.99-6.00(d,1H)；δ7.93(s,1H)；δ8.04-8.06(d,1H),δ8.21(s,1H).MS(TOF)414.5(M+)。
6H)；δ1.66-1.69(m,1H)；δ2.04(m,1H)；δ2,76(m,1H)；δ2,79(s,3H)；δ2.93(m,2H)；δ3.19-
3.22(m,2H)；δ3.35-3.39(d,2H)；δ3.90(s,3H)；δ4.16(m,2H)；δ4.88-4.92(m,1H)；δ5.31(m,
1H)；δ5.99-6.00(d,1H)；δ7.93(s,1H)；δ8.04-8.06(d,1H),δ8.21(s,1H).MS(TOF)414.5(M+)。
[0277] 实施例40N-甲基-N-[1-(6-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]-2-(1H-1，2，4-三氮唑-1-基)乙酰胺
[0278]
[0279] 将实施例7所得化合物采用实施例33的方法，并将实施例33中的咪唑改为1,2,4-三氮唑，得到化合物115mg。1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.37-1.40(m,3H)；δ1.98-2.02(m,2H)；δ3.06-3,07(m,2H)；δ3.93(s,3H)；δ4.07-4.09(m,1H)；δ4.23-4.26(m,2H)；δ4.87(s,
2H)；δ5.84(s,1H)；δ6.40(s,1H)；δ8.06(s,1H)；δ8.20(s,1H)；δ8.34(s,1H).MS(TOF)400.9(M+)。
2H)；δ5.84(s,1H)；δ6.40(s,1H)；δ8.06(s,1H)；δ8.20(s,1H)；δ8.34(s,1H).MS(TOF)400.9(M+)。
[0280] 实施例41N-甲基-N-[1-(6-甲基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]-2-(2-氯-苯并咪唑-1-基)乙酰胺
[0281]
[0282] 以2-氯-4-甲基嘧啶为原料分别采用实施例1、实施例33的方法，并将实施例33中的咪唑改为2-氯-苯并咪唑，得到化合物105mg。1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.70-1.73(m,4H)；δ2.35(s,3H)；δ2.86-2.93(m,3H)；δ2.98(s,2H)；δ4.95(m,1H)；δ4.98(s,3H)；δ5.06(m,
1H)；δ6.39-6.40(d,1H)；δ7.23-7.21(dd,1H)；δ7.29-7.30(m,2H)；δ7.71-7.74(t,1H),δ
8.17-8,20(d,1H).MS(TOF)398.9(M+)。
1H)；δ6.39-6.40(d,1H)；δ7.23-7.21(dd,1H)；δ7.29-7.30(m,2H)；δ7.71-7.74(t,1H),δ
8.17-8,20(d,1H).MS(TOF)398.9(M+)。
[0283] 实施例42N-甲基-N-[1-(4-甲氧基嘧啶-2-基)哌啶-4-基]-2-(1H-1,2,4-三氮唑-1-基)乙酰胺
[0284]
[0285] 实施例4所得化合物采用实施例33的方法，并将实施例33中的咪唑改为1,2,4-三氮唑，得到化合物120mg。1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.65-1.73(m,4H)；δ2.84-2.89(m,2H)；δ2.92(s,3H)；δ3.88(s,3H)；δ4.60-4.71(m,1H)；δ4.87-4.90(m,2H)；δ5.05(s,2H)；δ5.96-
5.89(d,1H)；δ7.91(s,1H)；δ8.02-8.04(d,1H),δ8.26(s,1H).MS(TOF)331.4(M+)。
5.89(d,1H)；δ7.91(s,1H)；δ8.02-8.04(d,1H),δ8.26(s,1H).MS(TOF)331.4(M+)。
[0286] 实施例43N-甲基-N-[1-(2-甲氧基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]-2-(1H-1，2，4-三氮唑-1-基)乙酰胺
[0287]
[0288] 实施例5所得化合物采用实施例33的方法，并将实施例33中的咪唑改为1,2,4-三氮唑，得到化合物150mg。1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.63-1.77(m,4H)；δ2.94(s,3H)；δ2.96-2.99(m,2H)；δ3.94-3.95(s,3H)；δ4.56(m,1H)；δ4.74(m,2H)；δ5.07(s,2H)；δ6.21-
6.22(d,1H)；δ7.98(s,1H)；δ8.04-8.06(d,1H),δ8.26(s,1H)。MS(TOF)331.4(M+)。
6.22(d,1H)；δ7.98(s,1H)；δ8.04-8.06(d,1H),δ8.26(s,1H)。MS(TOF)331.4(M+)。
[0289] 实施例44N-甲基-N-[1-(2-甲硫基嘧啶-4-基)哌啶-4-基]-2-(1H-1,2,4-三氮唑-1-基)乙酰胺
[0290]
[0291] 实施例6所得化合物采用实施例33的方法，并将实施例33中的咪唑改为1,2,4-三氮唑，得到化合物125mg。1H-NMR(300MHz,CDCl3-d)δ1.63-1.77(m,4H)；δ2.50(s,3H)；δ2.83-2.93(m,5H)；δ4.53-4.56(m,2H)；δ4.72(m,1H)；δ5.06(s,2H)；δ6.21-6.22(d,1H)；δ
7.98(s,1H)；δ8.02-8.03(d,1H),δ8.24(s,1H)。MS(TOF)347.4(M+)。
7.98(s,1H)；δ8.02-8.03(d,1H),δ8.24(s,1H)。MS(TOF)347.4(M+)。
[0292] 实施例45本发明化合物抗肿瘤生物活性评价
[0293] 1.实验材料
[0294] 细胞：
[0295]名称 代次 活率％
BT474 P103 100
BT/LapR1.0 / 97.12
MDA-MB-361 F72 97.76
SK-BR3 F28 95.95
SK/LapR1.0 / 93.35
MDA-MB-453 F8 96.8
BT474 P103 100
BT/LapR1.0 / 97.12
MDA-MB-361 F72 97.76
SK-BR3 F28 95.95
SK/LapR1.0 / 93.35
MDA-MB-453 F8 96.8
[0296] 注：BT474、SK-BR3是Lapatinib敏感的人乳腺癌细胞株，BT/LapR、SK/LapR是用Lapatinib刺激后，对Lapatinib继发耐药的人乳腺癌细胞株，MDA-MB-361、MDA-MB-453是Lapatinib天然耐药的人乳腺癌细胞株。BT474,MDA-MB-361,SK-BR3和MDA-MB-453均来源于美国菌种中心ATCC。
[0297] Lapatinib:10Mm in DMSO,BioVision,Cat:1624-100,Lot:50324；
[0298] ATPlit试剂盒：CellTiter-Glo Substrate,Promega,Part:G755B,Lot:32513501,EXP:2014-05。
[0299] 2.实验流程
[0300] 细胞铺板：将长满贴壁细胞的100mm培养皿，用1ml0.25％胰酶(GIBCO)37℃消化5min，2ml培养基(含10％FBS,GIBCO)终止反应，吹散收集细胞，计数后稀释成1×105cells/ml,50μl/孔，℃5000cells/well,接种到96孔板中，外围一圈去除不加细胞，加入PBS，总共
60个孔，37℃、孵育24小时贴壁。
60个孔，37℃、孵育24小时贴壁。
[0301] 加化合物和Lapatinib：将待测样品稀释于终浓度为5μM，对照孔为加入相应化合物溶剂浓度的培养基，每孔化合物溶剂浓度保持一致，每个浓度设5个平行孔，每孔25μL，补上25μL培养基(合用组加上25μL Lapatinib至终浓度1μM)，37℃孵育72h；
[0302] 37℃孵育72h检测：每孔加入50μL的ATPlite试剂盒底物液，震荡3min，避光静置10min，吸取裂解上清100μL/孔，于发光板中；将孵育好的发光板放入发光仪，读取发光值。
[0303] 3.数据处理
[0304] (1)细胞存活率(％)＝实验组RLU/空白对照组RLU×100％。利用GraphPad软件对实验数据进行数据分析及处理，结果见表1。
[0305] (2)采用两药相互作用指数(coefficient of drug interaction,CDI)评价两药相互作用性质，CDI按下列公式计算：CDI＝AB/(A×B)×100％.根据活细胞数(发光值)进行计算，当CDI<1时，两药作用性质为协同；当CDI<0.7时，协同作用非常显著；CDI＝1则两药作用性质为相加；CDI＞1则两药作用性质为拮抗。
[0306] 实施例30化合物与Lapatinib的两药相互作用指数(CDI)如表1所示：在乳腺癌MDA-MB-361和SK/LapR1.0细胞株中，CDI都小于1，特别是在SK/LapR1.0中，CDI<0.7,说明实施例30与Lapatinib的协同作用非常显著。
[0307]
[0308] 实施例46实施例化合物与Hsp70亲和力的测定
[0309] 材料与方法
[0310] 1.仪器：BIACORE T100生物分子相互作用分析仪(美国GE公司)
[0311] 2.试剂：PBS Buffer(×10)，P20，CM5芯片(美国GE公司)，HSP70(human，ADI-ESP-550-D)，Enzo Life Sciences产品。
[0312] 配制化合物
[0313] 化合物用DMSO配成30mM母液，使用前用DMSO稀释成2mM的应用液,取5μl加95μl 1.05X PBS稀释至100μM，用含5％DMSO的PBS以次稀释为10、3、1、0.3、0.1、0.03、0.01、0.003μM，0.3μM作重复。以含5％DMSO的PBS为溶剂对照。
[0314] 操作流程
[0315] 1.Hsp70蛋白和CM5芯片的偶联
[0316] Hsp70蛋白用10mmol/L的醋酸钠缓冲溶液(pH5.0)稀释到30μg/ml，通过标准化的伯胺偶合反应直接偶联在亲水的羧甲基右旋糖苷基质感应芯片M5上，RU＝11209，然后用PBS buffer以恒流的方式平衡芯片1-2h。
[0317] 2.化合物和Hsp70蛋白亲和力的测定
[0318] 按照30μl/ml的流速，以含5％DMSO的PBS作为流动相在25℃条件下化合物按照0.003、0.01、0.03、0.1、0.3、1、3、和10μM的顺序进样，结合时间90秒，解离时间120秒。
[0319] 3.结果分析：
[0320] 根据化合物与蛋白的结合特性选用Steady state model计算药物和蛋白质的结合常数(平衡解离常数KD),计算公式为：Conc*Rmax/[conc+KD]+offset。
[0321] 4.初筛结果表明，送筛的实施例化合物在10μM时与阳性化合物VER-155008(文献报道对Hsp70有明确结合力的化合物，Cancer Chemother Pharmacol 2010,66:535-545)作用相当的有实施例1、实施例2、实施例3、实施例5、实施例6、实施例13、实施例30及实施例42。表明这些实施例化合物与Hsp70的亲和力与阳性对照药物VER-155008(文献值0.3μM)相当。
[0322] 5、化合物与HSP70蛋白亲和力测定结果(KD值)
[0323] 按照30μl/ml的流速，以含5％DMSO的PBS作为流动相在25℃条件下化合物按照0.003、0.01、0.03、0.1、0.3、1、3、和10μM的顺序进样，结合时间90秒，解离时间120秒。对筛选出的44个化合物与HSP70蛋白亲和力进行了测定(结果如表2所示)。
[0324] 表2
[0325]化合物名称 KD(mol/L)
-7
VER-155008 3.00×10
实施例1 2.191×10-6
实施例2 2.466×10-7
实施例3 5.248×10-7
-5
实施例6 1.272×10
实施例13 5.199×10-7
实施例30 2.249×10-7
实施例42 4.339×10-7
-7
VER-155008 3.00×10
实施例1 2.191×10-6
实施例2 2.466×10-7
实施例3 5.248×10-7
-5
实施例6 1.272×10
实施例13 5.199×10-7
实施例30 2.249×10-7
实施例42 4.339×10-7
[0326] 尽管本发明的具体实施方式已经得到详细的描述，本领域技术人员将会理解。根据已经公开的所有教导，可以对那些细节进行各种修改和替换，这些改变均在本发明的保护范围之内。本发明的全部范围由所附权利要求及其任何等同物给出。