一组鉴别阿胶及其制品中驴源性成分的多肽

摘要

本发明涉及一组鉴别阿胶及其制品中驴源性成分的多肽，以及使用所述多肽通过质谱法鉴定阿胶及其制品中驴源性成分的方法，所述的多肽组中的多肽具有特定的序列结构及特定m/z值(包括特定的母离子和一对子离子)，其序列如SEQ ID NO.1～35所示，所述肽段及其m/z为驴源阿胶特有，在牛源阿胶中未见存在。

权利要求

1.一组用于单独或任意组合检测阿胶及其制品中驴源性成分的多肽，所述的阿胶制品包括但不限于阿胶糕、阿胶膏、阿胶浆、阿胶口服液、阿胶糖、阿胶补血颗粒，所述的多肽的序列为：肽段4：SEQ ID NO.4：GPPGPMGPPGIAGPPGESGR；

肽段10：SEQ ID NO.10：GPAGPTGPVGK；

肽段15：SEQ ID NO.15：GPPGPVGPPGIAGPPGESGR；

肽段27：SEQ ID NO.27：SGQPGTVGPAGVR。

2.根据权利要求1所述多肽，其特征在于，所述多肽对应的m/z值及子离子分别为：肽段4：595.6；

肽段10：469.3；

肽段15：893.0；

肽段27：591.8；

。

3.一种检测阿胶及其制品中是否含有驴源性成分的检测方法，所述方法包括如下步骤：步骤(1)，对待测样本进行质谱前处理，获得待测多肽滤液：步骤(2)，通过质谱法检测步骤(1)获得的多肽滤液，检测待测样本中是否含有权利要求1或2所述肽段的质谱峰。

4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，步骤(1)所述的对待测样本进行质谱前处理，获得待测多肽滤液的步骤如下：(1)将待测样品均质成粉末状态，称取0.1g～0.5g阿胶样品或1.0～2.0g阿胶制品，加入1％NH4HCO3溶液，超声处理10～30min使样品完全溶解，定容至50mL；

(2)溶液过0.22μm滤膜；

(3)取10～20μL浓度为1μg/μL的Trypsin酶溶液加入到上述100μL～200μL滤液中，37℃酶解16-18小时，待上机检测。

5.根据权利要求3或4所述的检测方法，其特征在于，步骤(2)通过质谱法检验步骤(1)获得的多肽滤液的方法是下述方法A或方法B：方法A：采用AB SCIEX 5600质谱检测多肽滤液中是否含有权利要求1或2所述的肽段的质谱峰，

上机参数为：

流动相A：0.05～0.2％甲酸-乙腈溶液，流动相B：0.05～0.2％甲酸-水，流速：0.1～0.5mL/min，

TOF扫描范围：100-3000Da，正离子反应模式，GS1：35，GS2：45，Curtain Gas：35，ISVF：5500，TEM：500，DP：100，CE：

10；

方法B：采用AB SCIEX三重四级杆质谱检测多肽滤液中是否含有权利要求1或2所述的肽段的质谱峰，上机参数为：

流动相A：0.05～0.2％甲酸-乙腈，流动相B：0.05～0.2％甲酸-水，流速：0.1～0.5mL/min，

电喷雾离子源，正离子反应模式，检测方式：MRM，喷雾电压：5500V，离子传输管温度：

475℃；鞘气压力：40；辅助气压力：6。

6.使用权利要求1所述的各个多肽或其任意组合以检测目标阿胶及其制品样本中是否含有驴源性成分的方法，所述方法包括：质谱法、高效液相色谱法、核磁共振法。

7.权利要求1所述的各个多肽或其任意组合在检测目标阿胶及其制品样本中是否含有驴源性成分中的应用，所述的阿胶制品包括但不限于阿胶糕、阿胶膏、阿胶浆、阿胶口服液、阿胶糖、阿胶补血颗粒。

说明书

一组鉴别阿胶及其制品中驴源性成分的多肽

技术领域

[0001] 本发明属于生物技术领域，具体而言，涉及一组鉴别阿胶及其制品中驴源性成分的多肽及其使用方法。

背景技术

[0002] 阿胶为马科动物驴的皮，经煎煮、浓缩制成的固体胶，原产自山东省东阿县，至今已有近三千年历史。阿胶是传统的滋补上品、补血圣药，味甘平，入肺、肝、肾经，具有补血止血、滋阴润燥等功效，药食两用，长期服用可补血养血、美白养颜、抗衰老、抗疲劳、提高免疫力，适用人群广泛。李时珍著《本草纲目》载：“阿胶《本经》上品。弘景曰：‘出东阿，故名阿胶’”。阿胶是中药材中典型的最讲究“地道性”的药材，道地阿胶必汲取东阿之水，得传承人之奇秘技艺炼制而成。道地阿胶表面平整，无油气孔，质硬而脆，断面光亮细腻，碎片对光照视呈棕色半透明状，李时珍赞其"黄透如琥珀色，光黑如瑿漆”。

[0003] 早在1996年就曾曝光过假阿胶事件。时隔多年之后，阿胶造假不仅没有得到遏制，而且越演越烈。这些不法企业利用牛皮、马皮下脚料等劣质材料冒充驴皮制作伪劣阿胶，并以次充好向市场销售。

[0004] 导致阿胶造假事件屡禁不止的一部分原因是缺少鉴定的技术支持，动物皮经过熬制溶解之后，破坏了本身的特性，很难鉴别出动物皮的来源。目前国家也没有有效鉴别阿胶成分的方法，只能靠从生产源头进行控制，以上情况导致了许多不法企业钻空子。

[0005] 迫切需要一种高效准确鉴定阿胶及其制品真伪的方法。随着代谢组学技术的发展，利用肽组学直接鉴定动物源成分成为可能。

发明内容

[0006] 本发明对阿胶和牛皮胶中的多肽进行了研究，建立了从多肽水平对阿胶及其制品中驴源性成分进行鉴别的技术，填补了国内外阿胶及其制品鉴别的空白。

[0007] 本发明首先涉及一组用于单独或组合检测阿胶及其制品中驴源性成分的多肽，所述的阿胶制品包括但不限于阿胶糕、阿胶膏、阿胶浆、阿胶口服液、阿胶糖、阿胶补血颗粒，所述的多肽的序列为：

[0008] SEQ ID NO.1：DGTSGHPGPIGPPGPR；

[0009] SEQ ID NO.2：GPPGESGAAGPAGPIGSR；

[0010] SEQ ID NO.3：PGEAGPPGPPGPAGEK；

[0011] SEQ ID NO.4：GPPGPMGPPGIAGPPGESGR；

[0012] SEQ ID NO.5：GPNGEPGSTGPAGPPGIR；

[0013] SEQ ID NO.6：DGTLGHPGPIGPPGPR；

[0014] SEQ ID NO.7：GEQGPAGPPGFQGIPGPAGTAGEVGKPGER；

[0015] SEQ ID NO.8：TGPPGPSGISGPPGPPGAAGK；

[0016] SEQ ID NO.9：PGPTGLEGPPGER；

[0017] SEQ ID NO.10：GPAGPTGPVGK；

[0018] SEQ ID NO.11：GPSGPAGKDHR；

[0019] SEQ ID NO.12：GIPGVAGSIGEPGPIGIAGPPGAR；

[0020] SEQ ID NO.13：GEAGPAGPAGPIGPVGAR；

[0021] SEQ ID NO.14：GIPGPAGAAGATGAR；

[0022] SEQ ID NO.15：GPPGPVGPPGIAGPPGESGR；

[0023] SEQ ID NO.16：GIPGVAGSIGEPGPIGIAGPPGAR；

[0024] SEQ ID NO.17：GEPGPVGSVGPVGAVGPR；

[0025] SEQ ID NO.18：GPPGPVGPPGIAGPPGESGR；

[0026] SEQ ID NO.19：GPAGPNGIPGEK；

[0027] SEQ ID NO.20：GAPGAVGAPGPAGANGDRGEAGAAGPAGPAGPR；

[0028] SEQ ID NO.21：GEPGPTGLPGPPGER；

[0029] SEQ ID NO.22：GETGPSGPAGPTGAR；

[0030] SEQ ID NO.23：SGDRGEAGPAGPAGPIGPVGAR；

[0031] SEQ ID NO.24：IGAPGIIGIPGSR；

[0032] SEQ ID NO.25：GLTGPIGPPGPAGAPGDKGETGPSGPAGPTGAR；

[0033] SEQ ID NO.26：VGPPGPSGNAGPPGPPGPVGK；

[0034] SEQ ID NO.27：SGQPGTVGPAGVR；

[0035] SEQ ID NO.28：GDGGPPGVTGFPGAAGR；

[0036] SEQ ID NO.29：GSPGGPGAAGFPGAR；

[0037] SEQ ID NO.30：EGSPGAEGSPGR；

[0038] SEQ ID NO.31：GPPGAVGAPGVNGAPGEAGR；

[0039] SEQ ID NO.32：GEPGSTGPAGPPGIR；

[0040] SEQ ID NO.33：GPPGESGAAGPAGPIGSR；

[0041] SEQ ID NO.34：AGPPGPPGPVGK；

[0042] SEQ ID NO.35：TGPPGPSGISGPPGPPGAAGK。

[0043] 其m/z分别为：

[0044] 肽段1：519.6；

[0045] 肽段2：517.6；

[0046] 肽段3：731.8；

[0047] 肽段4：595.6；

[0048] 肽段5：825.9；

[0049] 肽段6：514.3；

[0050] 肽段7：940.8；

[0051] 肽段8：602.0；

[0052] 肽段9：640.3；

[0053] 肽段10：469.3；

[0054] 肽段11：539.8；

[0055] 肽段12：715.7；

[0056] 肽段13：765.9；

[0057] 肽段14：620.3；

[0058] 肽段15：893.0；

[0059] 肽段16：1073.1；

[0060] 肽段17：802.9；

[0061] 肽段18：601.0；

[0062] 肽段19：555.8；

[0063] 肽段20：914.4；

[0064] 肽段21：733.3；

[0065] 肽段22：656.3；

[0066] 肽段23：649.3；

[0067] 肽段24：620.4；

[0068] 肽段25：961.8；

[0069] 肽段26：614.6；

[0070] 肽段27：591.8；

[0071] 肽段28：751.4；

[0072] 肽段29：652.3；

[0073] 肽段30：566.7；

[0074] 肽段31：868.9；

[0075] 肽段32：691.3；

[0076] 肽段33：775.9；

[0077] 肽段34：531.8；

[0078] 肽段35：902.4。

[0079] 35条多肽对应的母离子、子离子见下表1，

[0080] 表1驴源性多肽序列及其对应的母离子、子离子

[0081]

[0082]

[0083]

[0084] 本发明所涉及前处理方法包括如下步骤：

[0085] (1)对待测样本进行质谱前处理，获得待测多肽滤液：

[0086] (2)通过质谱法检测待测样本的多肽成分，分析样本中的动物皮来源成分。

[0087] 所述的质谱前处理步骤如下：

[0088] (1)将待测样品均质成粉末状态，称取0.1g～0.5g阿胶样品或1.0-2.0g阿胶制品，加入1％NH4HCO3溶液，超声处理10～30min使样品完全溶解，定容至50mL；

[0089] (2)溶液过0.22μm滤膜；

[0090] (3)取10～20μLTrypsin酶溶液(1μg/μL的Trypsin酶溶液)加入到100μL～200μL上述滤液中，37℃酶解16-18小时，待上机检测。

[0091] 本发明还涉及两种检测阿胶及其制品的质谱方法，所述的质谱法检测为，[0092] 采用AB SCIEX 5600质谱检测，

[0093] 流动相A：0.05～0.2％甲酸-乙腈溶液，流动相B：0.05～0.2％甲酸-水，[0094] 流速：0.1～0.5mL/min，

[0095] TOF扫描范围：100-3000Da，

[0096] 正离子反应模式，GS1：35，GS2：45，Curtain Gas：35，ISVF：5500，TEM：500，DP：100，CE：10。

[0097] 采用AB SCIEX三重四级杆质谱检测，

[0098] 流动相A：0.05～0.2％甲酸-乙腈，流动相B：0.05～0.2％甲酸-水，

[0099] 流速：0.1～0.5mL/min，

[0100] 电喷雾离子源，正离子反应模式，检测方式：MRM，喷雾电压：5500V，离子传输管温度：475℃；鞘气压力：40；辅助气压力：6。

[0101] 所述的分析样本中的驴源性成分为，将待测样品的质谱结果对比SEQ ID NO.1～35的各条特异性多肽的质谱谱图，出现SEQ ID NO.1～35的各条特异性多肽的质谱检测谱图时，即可判断该组织样本存在驴源性成分。

附图说明

[0102] 图1，DGTSGHPGPIGPPGPR色谱图

[0103] 图2，GPPGESGAAGPAGPIGSR色谱图

[0104] 图3，PGEAGPPGPPGPAGEK色谱图

[0105] 图4，GPPGPMGPPGIAGPPGESGR色谱图

[0106] 图5，GPNGEPGSTGPAGPPGIR色谱图

[0107] 图6，DGTLGHPGPIGPPGPR色谱图

[0108] 图7，GEQGPAGPPGFQGIPGPAGTAGEVGKPGER色谱图

[0109] 图8，TGPPGPSGISGPPGPPGAAGK色谱图

[0110] 图9，PGPTGLEGPPGER色谱图

[0111] 图10，GPAGPTGPVGK色谱图

[0112] 图11，GPSGPAGKDHR色谱图

[0113] 图12，GIPGVAGSIGEPGPIGIAGPPGAR色谱图

[0114] 图13，GEAGPAGPAGPIGPVGAR色谱图

[0115] 图14，GIPGPAGAAGATGAR色谱图

[0116] 图15，GPPGPVGPPGIAGPPGESGR色谱图

[0117] 图16，GIPGVAGSIGEPGPIGIAGPPGAR色谱图

[0118] 图17，GEPGPVGSVGPVGAVGPR色谱图

[0119] 图18，GPPGPVGPPGIAGPPGESGR色谱图

[0120] 图19，GPAGPNGIPGEK色谱图

[0121] 图20，GAPGAVGAPGPAGANGDRGEAGAAGPAGPAGPR色谱图

[0122] 图21，GEPGPTGLPGPPGER色谱图

[0123] 图22，GETGPSGPAGPTGAR色谱图

[0124] 图23，SGDRGEAGPAGPAGPIGPVGAR色谱图

[0125] 图24，IGAPGIIGIPGSR色谱图

[0126] 图25，GLTGPIGPPGPAGAPGDKGETGPSGPAGPTGAR色谱图

[0127] 图26，VGPPGPSGNAGPPGPPGPVGK色谱图

[0128] 图27，SGQPGTVGPAGVR色谱图

[0129] 图28，GDGGPPGVTGFPGAAGR色谱图

[0130] 图29，GSPGGPGAAGFPGAR色谱图

[0131] 图30，EGSPGAEGSPGR色谱图

[0132] 图31，GPPGAVGAPGVNGAPGEAGR色谱图

[0133] 图32，GEPGSTGPAGPPGIR色谱图

[0134] 图33，GPPGESGAAGPAGPIGSR色谱图

[0135] 图34，AGPPGPPGPVGK色谱图

[0136] 图35，TGPPGPSGISGPPGPPGAAGK色谱图

[0137] 图36，在纯品牛阿胶胶原中检测SEQ ID NO.1～35所示多肽的色谱特征图

[0138] 图37，驴源性阿胶对照品检测结果色谱图

[0139] 图38，样品2检测结果色谱图

[0140] 图39，样品3检测结果色谱图

具体实施方式

[0141] 实施例1，筛选驴阿胶胶原特异性多肽

[0142] 通过质谱分析纯品驴胶原样本和牛胶原样本，利用ProteinPilot软件对质谱结果进行检索比对分析，从而确定最优选的驴胶原专属多肽序列。

[0143] 首先，对选取的纯品胶原样本进行质谱分析，步骤包括：

[0144] (一)样本前处理步骤：

[0145] (1)称取0.1g～0.5g均质成粉末状态的纯品样品，加入1％NH4HCO3溶液，超声处理10～30min使样品完全溶解，定容至50mL；

[0146] (2)溶液过0.22μm滤膜；

[0147] (3)取10～20μLTrypsin酶溶液(1μg/μL的Trypsin酶溶液)加入到100μL～200μL上述滤液中，37℃酶解16-18小时，待上机检测。

[0148] (二)上机检测，

[0149] (1)采用AB SCIEX 5600质谱检测方法如下，

[0150] 流动相A：0.05～0.2％甲酸-乙腈溶液，流动相B：0.05～0.2％甲酸-水，[0151] 流速：0.1～0.5mL/min，

[0152] TOF扫描范围：100-3000Da，

[0153] 正离子反应模式，GS1：35，GS2：45，Curtain Gas：35，ISVF：5500，TEM：500， DP：100，CE：10。

[0154] (2)采用AB SCIEX三重四级杆质谱检测方法如下，

[0155] 流动相A：0.05～0.2％甲酸-乙腈，流动相B：0.05～0.2％甲酸-水，

[0156] 流速：0.1～0.5mL/min，

[0157] 电喷雾离子源，正离子反应模式，检测方式：MRM，喷雾电压：5500V，离子传输管温度：475℃；鞘气压力：40；辅助气压力：6。

[0158] 其次，依据纯品胶原样本的质谱结果，利用ProteinPilot软件对质谱结果进行检索比对分析，筛选得到在驴胶原中确实存在的专属多肽组，组中的各条多肽序列信息如下：

[0159] SEQ ID NO.1：DGTSGHPGPIGPPGPR；

[0160] SEQ ID NO.2：GPPGESGAAGPAGPIGSR；

[0161] SEQ ID NO.3：PGEAGPPGPPGPAGEK；

[0162] SEQ ID NO.4：GPPGPMGPPGIAGPPGESGR；

[0163] SEQ ID NO.5：GPNGEPGSTGPAGPPGIR；

[0164] SEQ ID NO.6：DGTLGHPGPIGPPGPR；

[0165] SEQ ID NO.7：GEQGPAGPPGFQGIPGPAGTAGEVGKPGER；

[0166] SEQ ID NO.8：TGPPGPSGISGPPGPPGAAGK；

[0167] SEQ ID NO.9：PGPTGLEGPPGER；

[0168] SEQ ID NO.10：GPAGPTGPVGK；

[0169] SEQ ID NO.11：GPSGPAGKDHR；

[0170] SEQ ID NO.12：GIPGVAGSIGEPGPIGIAGPPGAR；

[0171] SEQ ID NO.13：GEAGPAGPAGPIGPVGAR；

[0172] SEQ ID NO.14：GIPGPAGAAGATGAR；

[0173] SEQ ID NO.15：GPPGPVGPPGIAGPPGESGR；

[0174] SEQ ID NO.16：GIPGVAGSIGEPGPIGIAGPPGAR；

[0175] SEQ ID NO.17：GEPGPVGSVGPVGAVGPR；

[0176] SEQ ID NO.18：GPPGPVGPPGIAGPPGESGR；

[0177] SEQ ID NO.19：GPAGPNGIPGEK；

[0178] SEQ ID NO.20：GAPGAVGAPGPAGANGDRGEAGAAGPAGPAGPR；

[0179] SEQ ID NO.21：GEPGPTGLPGPPGER；

[0180] SEQ ID NO.22：GETGPSGPAGPTGAR；

[0181] SEQ ID NO.23：SGDRGEAGPAGPAGPIGPVGAR；

[0182] SEQ ID NO.24：IGAPGIIGIPGSR；

[0183] SEQ ID NO.25：GLTGPIGPPGPAGAPGDKGETGPSGPAGPTGAR；

[0184] SEQ ID NO.26：VGPPGPSGNAGPPGPPGPVGK；

[0185] SEQ ID NO.27：SGQPGTVGPAGVR；

[0186] SEQ ID NO.28：GDGGPPGVTGFPGAAGR；

[0187] SEQ ID NO.29：GSPGGPGAAGFPGAR；

[0188] SEQ ID NO.30：EGSPGAEGSPGR；

[0189] SEQ ID NO.31：GPPGAVGAPGVNGAPGEAGR；

[0190] SEQ ID NO.32：GEPGSTGPAGPPGIR；

[0191] SEQ ID NO.33：GPPGESGAAGPAGPIGSR；

[0192] SEQ ID NO.34：AGPPGPPGPVGK；

[0193] SEQ ID NO.35：TGPPGPSGISGPPGPPGAAGK。

[0194] 上述35条多肽的质谱谱图和m/z的数值如下：

[0195] 图1是多肽DGTSGHPGPIGPPGPR在驴胶原中的色谱图，其m/z为519.6。

[0196] 图2是多肽GPPGESGAAGPAGPIGSR在驴胶原中的色谱图，其m/z为517.6。

[0197] 图3是多肽PGEAGPPGPPGPAGEK在驴胶原中的色谱图，其m/z为731.8。

[0198] 图4是多肽GPPGPMGPPGIAGPPGESGR在驴胶原中的色谱图，其m/z为595.6。

[0199] 图5是多肽GPNGEPGSTGPAGPPGIR在驴胶原中的色谱图，其m/z为825.9。

[0200] 图6是多肽DGTLGHPGPIGPPGPR在驴胶原中的色谱图，其m/z为514.3。

[0201] 图7是多肽GEQGPAGPPGFQGIPGPAGTAGEVGKPGER在驴胶原中的色谱图，其m/z为940.8。

[0202] 图8是多肽TGPPGPSGISGPPGPPGAAGK在驴胶原中的色谱图，其m/z为602.0。

[0203] 图9是多肽PGPTGLEGPPGER在驴胶原中的色谱图，其m/z为640.3。

[0204] 图10是多肽GPAGPTGPVGK在驴胶原中的色谱图，其m/z为469.3。

[0205] 图11是多肽GPSGPAGKDHR在驴胶原中的色谱图，其m/z为539.8。

[0206] 图12是多肽GIPGVAGSIGEPGPIGIAGPPGAR在驴胶原中的色谱图，其m/z为715.7。

[0207] 图13是多肽GEAGPAGPAGPIGPVGAR在驴胶原中的色谱图，其m/z为765.9。

[0208] 图14是多肽GIPGPAGAAGATGAR在驴胶原中的色谱图，其m/z为620.3。

[0209] 图15是多肽GPPGPVGPPGIAGPPGESGR在驴胶原中的色谱图，其m/z为893.0。

[0210] 图16是多肽GIPGVAGSIGEPGPIGIAGPPGAR在驴胶原中的色谱图，其m/z为1073.1。

[0211] 图17是多肽GEPGPVGSVGPVGAVGPR在驴胶原中的色谱图，其m/z为802.9。

[0212] 图18是多肽GPPGPVGPPGIAGPPGESGR在驴胶原中的色谱图，其m/z为601.0。

[0213] 图19是多肽GPAGPNGIPGEK在驴胶原中的色谱图，其m/z为555.8。

[0214] 图20是多肽GAPGAVGAPGPAGANGDRGEAGAAGPAGPAGPR在驴胶原中的色谱图，其m/z为914.4。

[0215] 图21是多肽GEPGPTGLPGPPGER在驴胶原中的色谱图，其m/z为733.3。

[0216] 图22是多肽GETGPSGPAGPTGAR在驴胶原中的色谱图，其m/z为656.3。

[0217] 图23是多肽SGDRGEAGPAGPAGPIGPVGAR在驴胶原中的色谱图，其m/z为649.3。

[0218] 图24是多肽IGAPGIIGIPGSR在驴胶原中的色谱图，其m/z为620.4。

[0219] 图25是多肽GLTGPIGPPGPAGAPGDKGETGPSGPAGPTGAR在驴胶原中的色谱图，其m/z为961.8。

[0220] 图26是多肽VGPPGPSGNAGPPGPPGPVGK在驴胶原中的色谱图，其m/z为614.6。

[0221] 图27是多肽SGQPGTVGPAGVR在驴胶原中的色谱图，其m/z为591.8。

[0222] 图28是多肽GDGGPPGVTGFPGAAGR在驴胶原中的色谱图，其m/z为751.4。

[0223] 图29是多肽GSPGGPGAAGFPGAR在驴胶原中的色谱图，其m/z为652.3。

[0224] 图30是多肽EGSPGAEGSPGR在驴胶原中的色谱图，其m/z为566.7。

[0225] 图31是多肽GPPGAVGAPGVNGAPGEAGR在驴胶原中的色谱图，其m/z为868.9。

[0226] 图32是多肽GEPGSTGPAGPPGIR在驴胶原中的色谱图，其m/z为691.3。

[0227] 图33是多肽GPPGESGAAGPAGPIGSR在驴胶原中的色谱图，其m/z为775.9。

[0228] 图34是多肽AGPPGPPGPVGK在驴胶原中的色谱图，其m/z为531.8。

[0229] 图35是多肽TGPPGPSGISGPPGPPGAAGK在驴胶原中的色谱图，其m/z为902.4。

[0230] 最后，用相同的方法处理并检测牛胶原样本，质谱检测结果进行匹配，结果显示，SEQ ID NO.1～35所示的各条多肽样本，在牛胶原中不存在。

[0231] 图36是在牛胶原中检测上述多肽SEQ ID NO.1～35的色谱特征图，可见谱图中未检出SEQ ID NO.1～35所述的色谱峰。

[0232] 实施例2，检测不特定阿胶样本，判断是否含有驴胶原成分

[0233] 对某市公安局送检的动物皮熬制的阿胶及其制品样本及市售阿胶产品进行质谱分析，确定是否含有驴胶原成分。

[0234] 对待测样品的处理和检测方法同实施例1中的处理和检测方法

[0235] 步骤(一)样本前处理步骤：

[0236] (1)将待测样品均质成粉末状态，称取0.1的阿胶样品或称取2.0g阿胶制品，加入1％NH4HCO3溶液，超声处理10-30min使样品完全溶解，定容至50mL；

[0237] (2)溶液过0.22μm滤膜；

[0238] (3)取10μLTrypsin酶溶液(1μg/μL的Trypsin酶溶液)加入到100μL上述滤液中，37℃酶解16-18小时，待上机检测。

[0239] 步骤(二)上机检测，

[0240] 采用AB SCIEX 5600质谱检测，

[0241] 流动相A：0.1％甲酸-乙腈，流动相B：0.1％甲酸-水，

[0242] 流速：0.25mL/min，

[0243] TOF扫描范围：350-1500Da，

[0244] 正离子反应模式，GS1：35，GS2：45，Curtain Gas：35，ISVF：5500，TEM：500，DP：100，CE：10。

[0245] 采用AB SCIEX三重四级杆质谱检测，

[0246] 流动相A：0.1％甲酸-乙腈，流动相B：0.1％甲酸-水，

[0247] 流速：0.3mL/min，

[0248] 电喷雾离子源，正离子反应模式，检测方式：MRM，喷雾电压：5500V，离子传输管温度：475℃；鞘气压力：40；辅助气压力：6。

[0249] 检测结果对比实施例1中的各条驴胶原特异性多肽的质谱谱图，出现实施例1所述质谱检测谱图时，即可判断该组织样本含有驴源性成分。

[0250] 经检测：某市公安局送检的样品中，

[0251] 样品1为对照品东阿阿胶仅检出驴源性成分，未检出牛源性成分：

[0252] 选取实施例1中的两条驴胶原多肽和已知两条牛胶原特异性多肽作为参考，相同的检测条件下，样品1中仅检出选取的两条驴胶原多肽的色谱峰(见图37左上、右上)，未见牛胶原特异性多肽色谱峰(见图37左下、右下)；

[0253] 样品2既检出驴源性成分也检出牛源性成分：

[0254] 选取实施例1中的两条驴胶原多肽和已知两条牛胶原特异性多肽作为参考，相同的检测条件下，样品2中既检出选取的两条驴胶原多肽的色谱峰(见图38左上、右上)，也可见牛胶原特异性多肽色谱峰(见图38左下、右下)；

[0255] 样品3为未检出驴源性成分，仅检出牛源性成分：

[0256] 选取实施例1中的两条驴胶原多肽和已知两条牛胶原特异性多肽作为参考，相同的检测条件下，样品3中未检出驴胶原多肽的色谱峰(见图39左上、右上)，检出牛胶原特异性多肽色谱峰(见图39左下、右下)；

[0257] 最后需要说明的是，以上实施例仅用作帮助本领域技术人员理解本发明的实质，不用作的本发明保护范围的限定。