含有乌司他丁的组合物在制备治疗口腔癌药物中的用途

摘要

本发明属于医药领域，具体涉及含有乌司他丁的组合物在制备治疗口腔癌药物中的用途。本发明提供的含有乌司他丁的组合物在制备治疗口腔癌药物中的用途，经细胞体外试验发现，本发明提供的乌司他丁与三七总皂苷的组合物对体外口腔鳞状细胞癌细胞的生长具有显著的抑制作用。同时，本发明提供的含有乌司他丁组合物的注射液对采用DMBA诱发口腔癌的叙利亚金黄地鼠模型具有显著的治疗效果，乌司他丁与三七总皂苷的组合物可以显著降低口腔癌金黄地鼠口腔黏膜单纯增生、异常增生和癌的数目，更有利于口腔癌患者的康复。

权利要求

1.含有乌司他丁的组合物在制备治疗口腔癌药物中的用途，其特征在于，所述组合物包括乌司他丁和三七总皂苷；组合物中乌司他丁与三七总皂苷的重量比为1∶0.2-0.6。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述组合物中乌司他丁与三七总皂苷的重量比为1∶0.48。

3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述组合物为冻干粉针剂或注射液。

4.如权利要求3所述的用途，其特征在于，所述冻干粉针剂或注射液配以一种或多种添加剂。

5.如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述冻干粉针剂的添加剂选自甘露醇、乳糖、水解明胶、氯化钠和葡萄糖中的一种或其任意混合物。

6.如权利要求4所述的用途，其特征在于，所述注射液的添加剂选自注射用水、甘露醇、氯化钠和葡萄糖中的一种或其任意混合物。

说明书

含有乌司他丁的组合物在制备治疗口腔癌药物中的用途

技术领域

[0001] 本发明属于医药领域，具体涉及含有乌司他丁的组合物在制备治疗口腔癌药物中的用途。

背景技术

[0002] 口腔癌是发生在口腔的恶性肿瘤的总称，大部分属于鳞状上皮细胞癌，即口腔黏膜发生变异。在临床实践中，口腔癌包括牙龈癌、舌癌、软硬腭癌、颌骨癌、口底癌、口咽癌、涎腺癌、唇癌、和上颌窦癌以及发生于颜面部皮肤黏膜的癌症等，是头颈部较常见的恶性肿瘤之一。口腔癌主要是由人们不良的生活习惯所引起，例如：长期嗜好烟、酒，经常不清洁口腔，用异物长期刺激口腔，或长期处于紫外线和电离辐射等环境下都是引发口腔癌的主要因素。

[0003] 口腔癌患者的口腔常出现肿块、结节，或有白色、平滑式鳞状斑块状出现，口腔中无明显原因的反复出血、麻木、灼热或有干燥感，说话或吞咽时发生困难或不正常，严重影响患者的生活和工作，给患者带来极大的痛苦。

[0004] 目前，治疗口腔癌的常见治疗方式有：手术切除、放射线治疗、化学治疗、中药治疗。其中手术治疗和放射线治疗是最常用的方法，但是手术治疗的风险大、费用高，而放射线治疗副作用大，大大的增加了口腔癌患者的痛苦。近年来，市面上逐渐出现了一些治疗口腔癌的药物，例如：顺铂、5-氟尿嘧啶、博来霉素等。但是上述药物整体治疗效果不明显，而且易于复发。因此，研究和开发出一种治疗效果好，不易复发的口腔癌是当前亟需解决的难题。

[0005] 乌司他丁，又名人尿胰蛋白酶抑制剂(Human Urinary Trypsin Inhibitor，UTI)，是从人体尿液中分离纯化的由143个氨基酸组成的酸性糖蛋白，它不仅是一种广谱蛋白酶抑制剂，还有抗炎、抗肿瘤及免疫调节等多种作用，可以抑制免疫细胞的活化增殖，调节细胞因子网络，其抗炎和免疫调节与MS致病过种的靶点有重合。目前，乌司他丁的临床应用主要是用于治疗急性胰腺炎、抗休克、心肺复苏和抗手术侵袭等方面疾病。

[0006] 随着研究不断深入，乌司他丁越来越多的用途被发现。中国专利申请201510395846.4公开了乌司他丁在制备治疗宫颈癌的用途及药物组合物；张怀忠等发表了一篇题目为“乌司他丁对行食管癌根治术患者肺损伤的保护作用分析”的论文。但是，到目前为止，尚未有研究发现乌司他丁用于制备治疗口腔癌药物中的用途。

[0007] 三七总皂苷是五加科人参属植物三七的主要活性成分，含有多种单体皂苷。三七总皂苷具有扩张血管、降低心肌耗氧量、抑制血小板凝集、延长凝血时间、降血脂、清除自由基、抗炎、抗氧化等药理作用。有大量的研究发现，三七总皂苷对高脂血症具有明显的预防和治疗作用；其还能显著改善体表心电图的缺血表现，缩小心肌梗塞范围，可逆转劳累型心绞痛病人的左室舒张功能障碍，甚至可使之恢复正常。是一种治疗效果显著，副作用小的心血管疾病药物。

发明内容

[0008] 为了解决现有技术中对口腔癌尚未治疗效果确切的药物，本发明的目的在于提供含有乌司他丁的组合物在制备治疗口腔癌药物中的用途，为口腔癌患者提供一种新的药物。

[0009] 本发明提供了含有乌司他丁的组合物在制备治疗口腔癌药物中的用途，所述组合物包括乌司他丁和三七总皂苷。

[0010] 进一步地，所述组合物中乌司他丁与三七总皂苷的重量比为1∶0.2-0.6。

[0011] 进一步地，所述组合物中乌司他丁与三七总皂苷的重量比为1∶0.48。

[0012] 进一步地，所述组合物为冻干粉针剂或注射液。

[0013] 进一步地，所述冻干粉针剂或注射液配以一种或多种添加剂。

[0014] 进一步地，所述冻干粉针剂的添加剂选自甘露醇、乳糖、水解明胶、氯化钠和葡萄糖中的一种或其任意混合物。

[0015] 进一步地，所述注射液的添加剂选自注射用水、甘露醇、氯化钠和葡萄糖中的一种或其任意混合物。

[0016] 本发明提供的含有乌司他丁的组合物中的三七总皂苷可以通过常规手段提取或者市售得到。按中国药典方法鉴定，本品以高效液相色谱方法进行含量测定，本品按干燥品计算，含三七皂苷R1(C47H80O18)不得少于5.0％、人参皂苷Rg1(C42H72O14)不得少于25.0％、人参皂苷Re(C48H82O18)不得少于2.5％、人参皂苷Rb1(C54H92O23)不得少于30.0％、人参皂苷Rd(C48H82O18)不得少于5.0％，且三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd总量不得低于75％。

[0017] 本发明提供的含有乌司他丁的组合物对体外的口腔鳞状细胞癌细胞生长具有显著的抑制效果。与顺铂组相比，试验1组、试验2组和试验3组可以极显著(P＜0.01)的抑制口腔鳞状细胞癌细胞的生长，说明本发明提供的乌司他丁与三七总皂苷的组合物对口腔鳞状细胞癌细胞具有显著的抑制作用。其中试验2组的给药量对体外口腔鳞状细胞癌细胞的抑制作用最佳，即乌司他丁与三七总皂苷按重量比1∶0.48组成的组合物对体外口腔鳞状细胞癌细胞的抑制作用最强。

[0018] 进一步地，本发明提供的含有乌司他丁组合物的注射液对采用DMBA诱发口腔癌的叙利亚金黄地鼠模型具有显著的治疗作用。与模型组相比，顺铂组、乌司他丁组和乌司他丁+三七总皂苷组均可显著降低肿瘤的发生率；同时与模型组相比，顺铂组和乌司他丁组可以显著的(p＜0.05)降低口腔癌金黄地鼠口腔黏膜单纯增生、异常增生和癌的数目，乌司他丁+三七总皂苷组可以极显著的(p＜0.01)降低口腔癌金黄地鼠口腔黏膜单纯增生、异常增生和癌的数目。与顺铂组相比，乌司他丁+三七总皂苷组可以显著的(p＜0.05)降低口腔癌金黄地鼠口腔黏膜单纯增生、异常增生和癌的数目，说明本发明提供的乌司他丁与三七总皂苷的组合物对口腔癌具有显著的治疗作用。

[0019] 总之，与现有技术相比，本发明提供的技术方案具有以下优点：

[0020] (1)本发明提供的含有乌司他丁的组合物在制备治疗口腔癌药物中的用途，为口腔癌患者提供了一种新的治疗药物，为广大口腔癌带来福音。

[0021] (2)本发明提供的含有乌司他丁的组合物在制备治疗口腔癌药物中的用途，经试验证明含有乌司他丁的组合物可以显著抑制口腔鳞状细胞癌细胞的生长，而且还可以降低口腔黏膜单纯增生、异常增生和癌的数目，更有利于口腔癌患者的康复。具体实施方式：

[0022] 以下通过具体实施方式的描述对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本发明的基本思想，均在本发明的范围之内。

[0023] 实施例1、制备含有乌司他丁组合物的冻干粉针剂

[0024] 取过滤灭菌后的乌司他丁50g，加入三七总皂苷10g，再加入20克甘露醇和适量注射用水溶解，调节pH到中性，加注射用水至2000毫升，加氯化钠调节等渗，无菌过滤，分装于1000个西林瓶中，无菌条件下冷冻干燥，即得。

[0025] 实施例2、制备含有乌司他丁组合物的注射液

[0026] 取过滤灭菌后的乌司他丁50g，加入三七总皂苷24g，再加入20克甘露醇和适量注射用水溶解，调节pH到中性，加注射用水至2000毫升，加氯化钠调节等渗，无菌过滤，分装1000个西林瓶中，即得。

[0027] 实施例3、制备含有乌司他丁组合物的注射液

[0028] 取过滤灭菌后的乌司他丁50g，加入三七总皂苷30g，再加入20克葡萄糖和适量注射用水溶解，调节pH到中性，加注射用水至2000毫升，加氯化钠调节等渗，无菌过滤，分装1000个西林瓶中，即得。

[0029] 试验例一、含有乌司他丁的组合物对口腔鳞状细胞癌细胞的体外抑制试验[0030] 1、试验对象：选取某医院口腔科的20例口腔颌面部恶性肿瘤组织新鲜标本。

[0031] 2、试验材料：注射用顺铂，购于齐鲁制药有限公司，国药准字H37021358。

[0032] 3、试验方法：

[0033] 将恶性肿瘤组织新鲜标本去除血块和坏死组织后，加入2mg/ml的胰蛋白酶消化40min，置于1000r/min离心7min，弃上清，细胞混悬于适量RPMI1640培养基中，调节细胞数为5×106/ml，然后将细胞加入细胞培养板中，每孔200μl，每4孔为一组，设为试验组和对照组，置于37。C，5％CO2条件下培养24h，随机分为6组，分别为顺铂组、乌司他丁组、三七总皂苷组、试验1组、试验2组和试验3组，接着分别加入以下给药量：

[0034] 顺铂组：加入12.6μg/ml的顺铂；

[0035] 乌司他丁组：加入5mg/ml的乌司他丁；

[0036] 三七总皂苷组：加入2mg/ml的三七总皂苷；

[0037] 试验1组：加入2mg/ml的乌司他丁+0.4mg/ml的三七总皂苷；

[0038] 试验2组：加入2mg/ml的乌司他丁+0.96mg/ml的三七总皂苷；

[0039] 试验3组：加入2mg/ml的乌司他丁+1.2mg/ml的三七总皂苷；

[0040] 继续培养48h后每孔加入20μl浓度为5mg/ml的MTT，置于37。C，5％CO2条件下培养4h，离心，弃上清，每孔加入DMSO 100μl，利用ST-360型酶标仪检测各孔在450nm下的OD值。

[0041] 其中：(1)肿瘤细胞生长抑制率＝(1-A/B)×100％，A为给药孔平均OD值，B为对照孔平均OD值。

[0042] (2)给药敏感性判断标准：高度敏感，细胞生长抑制率≥50％；敏感，细胞生长抑制率≥30％；不敏感，细胞生长抑制率＜30％。

[0043] 4、试验结果：

[0044] 试验结果如表1所示。

[0045] 表1含有乌司他丁的组合物对口腔鳞状细胞癌细胞的体外抑制试验

[0046]

[0047] 与顺铂组相比，**P＜0.01。

[0048] 由表1可知，与顺铂组相比，试验1组、试验2组和试验3组可以极显著(P＜0.01)的抑制口腔鳞状细胞癌细胞的生长，说明本发明提供的乌司他丁与三七总皂苷的组合物对口腔鳞状细胞癌细胞具有显著的抑制作用。其中试验2组的给药量对体外口腔鳞状细胞癌细胞的抑制作用最佳，即乌司他丁与三七总皂苷按重量比1∶0.48组成的组合物对体外口腔鳞状细胞癌细胞的抑制作用最强。

[0049] 试验例二、含有乌司他丁的组合物对口腔癌金黄地鼠的影响试验

[0050] 1、试验对象：选取60只雄性叙利亚金黄地鼠，体重为65-85g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。

[0051] 2、试验材料：注射用顺铂，购于齐鲁制药有限公司，国药准字H37021358。

[0052] 3、口腔癌动物模型的建立：

[0053] 将60只叙利亚金黄地鼠常规饲养一周，从中随机挑选出12只设为对照组，其余48只金黄地鼠用0.5％的二甲基苯并蒽(DMBA)石蜡油涂于金黄地鼠左侧颊囊，每次涂100μL，涂3次/周，共涂6周。

[0054] 4、试验方法：

[0055] 从第7周开始，将48只金黄地鼠随机分为4组，每组12只，分别为模型组、顺铂组、乌司他丁组和乌司他丁+三七总皂苷组，各组给药途径均采用尾静脉注射方法，各组的给药量如下：

[0056] 对照组：注射等体积的生理盐水；

[0057] 模型组：注射等体积的生理盐水；

[0058] 顺铂组：注射2mg/kg的顺铂注射液；

[0059] 乌司他丁组：注射5mg/kg的乌司他丁注射液；

[0060] 乌司他丁+三七总皂苷组：注射5mg/kg的乌司他丁注射液+2.4mg/kg的三七总皂苷注射液；

[0061] 每周注射3次，连续注射18周，24周末处死金黄地鼠，并在金黄地鼠处死后，进行病理组织学观察。每个样本切25张切片，取第1号和第25号进行HE染色，在光镜下观察。按世界卫生组织口腔癌前病变协助中心的标准，病理改变分为正常黏膜、单纯增生、异常增生和癌，记数每只金黄地鼠口腔黏膜单纯增生、异常增生和癌的数目，计算其平均数，并统计癌的发生率。

[0062] 5、试验结果

[0063] 试验结果如表2所示。

[0064] 表2含有乌司他丁的组合物对DMBA诱发口腔癌的病理结果

[0065]

[0066] 注：与模型组相比，*p＜0.05，**p＜0.01；与顺铂组相比，#p＜0.05。

[0067] 由表2可知，与模型组相比，顺铂组、乌司他丁组和乌司他丁+三七总皂苷组均可显著降低肿瘤的发生率；同时与模型组相比，顺铂组和乌司他丁组可以显著的(p＜0.05)降低口腔癌金黄地鼠口腔黏膜单纯增生、异常增生和癌的数目，乌司他丁+三七总皂苷组可以极显著的(p＜0.01)降低口腔癌金黄地鼠口腔黏膜单纯增生、异常增生和癌的数目。与顺铂组相比，乌司他丁+三七总皂苷组可以显著的(p＜0.05)降低口腔癌金黄地鼠口腔黏膜单纯增生、异常增生和癌的数目，说明本发明提供的乌司他丁与三七总皂苷的组合物对口腔癌具有显著的治疗作用。