金塔柽柳的组织培养生根方法

摘要

本发明公开了金塔柽柳的组织培养生根方法，包括：(1)选择金塔柽柳当年生嫩枝作为生根培养的外植体；(2)将外植体剪成长度为10‑15cm的中段，冲洗掉表面的泥沙后做深层清洗；(3)在超净工作台上对外植体进行灭菌处理；(4)将外植体剪成长1.5‑2.5cm的小段，接种于生根培养基(1/2MS+IBA 0.4mg/l+蔗糖25g/l)中；(5)设置培养条件：温度24±2℃、光照强度1500‑2000lx、光照时间10‑14h/d。本发明的有益之处在于：金塔柽柳不仅发根早，在第5天即开始第一次发根，而且生根快，生根时间缩短至15‑21天，21天后平均根长达到9cm左右，根较长，根的平均数量达到5条，毛根多，生根率达到100％，上部长势好，育苗成本大大降低，实现了金塔柽柳的产业化生产。

权利要求

1.一种金塔柽柳的组织培养生根方法，其特征在于，包括以下步骤：Step1：选择金塔柽柳当年生嫩枝作为生根培养的外植体；

Step2：将外植体剪成长度为10-15cm的中段，冲洗掉表面的泥沙后做深层清洗；

Step3：将清洗干净的外植体置于超净工作台上，进行灭菌处理；

Step4：将已灭菌的外植体剪成长1.5-2.5cm的小段，接种于生根培养基中，所述生根培养基为：1/2MS+IBA 0.4mg/l+蔗糖25g/l，pH值为5.8-6.0；

Step5：将接种后的外植体进行培养，培养条件为：温度24±2℃、光照强度1500-

2000lx、光照时间10-14h/d。

2.根据权利要求1所述的金塔柽柳的组织培养生根方法，其特征在于，在Step1中，在晴朗天气的下午剪取外植体。

3.根据权利要求1所述的金塔柽柳的组织培养生根方法，其特征在于，在Step2中，对外植体进行深层清洗的方法为：先用洗衣粉清洗枝条，洗衣粉泡沫冲洗干净后用玻璃棒蘸取一滴吐温80进行深层清洗，之后将外植体置于流水下冲洗2-6小时。

4.根据权利要求1所述的金塔柽柳的组织培养生根方法，其特征在于，在Step3中，对外植体进行灭菌处理的方法为：先用70％的乙醇浸泡10-15s，然后用无菌水冲洗3-4遍，再用0.1％的升汞浸泡2min，最后用无菌水再冲洗5-7遍。

5.根据权利要求1所述的金塔柽柳的组织培养生根方法，其特征在于，在Step4中，外植体剪成小段前，先将基部切口剪除，然后吸干外植体表面的水分。

6.根据权利要求1所述的金塔柽柳的组织培养生根方法，其特征在于，在Step4中，每瓶接种一个外植体。

说明书

金塔柽柳的组织培养生根方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种植物的生根方法，具体涉及一种金塔柽柳的组织培养生根方法，属于无性繁殖技术领域。

背景技术

[0002] 植物组织培养是从植物体分离出符合需要的组织、器官或细胞、原生质体等的无性繁殖方法，即通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得完整再生植株或生产具有经济价值的其他产品的繁殖技术。

[0003] 在大多数苗木的繁殖过程中，传统的有性繁殖也可以达到生根快繁的目的，但在繁殖过程中易改变母本植物原有的优良性状，使后代发生变异。

[0004] 作为目前应用广泛的无性繁殖方法，组织培养不受地理环境和季节条件的限制，能避免植物在生长过程中出现性状分离；此外，该方法具有繁殖速率快、成本低、成活率高、成苗速度快等特点，解决了有性繁殖中出现的一系列问题，从而获得大量无菌生根苗。

[0005] 金塔柽柳(Tama Tamarix jintaenia)属杨柳科柳属，主要分布于甘肃河西走廊金塔县附近的丘间低地。该树种花序茂密，花色紫红美丽，枝叶浓绿，可作荒漠地区居民点附近观赏及固沙造林树种。金塔柽柳喜光不耐阴，在遮阴处多生长不良。根系发达，既耐干又耐水湿，抗风能力强，耐盐碱土，能在含盐量1.2％的盐碱地上正常生长，对荒漠区土地改良有很好的作用。

[0006] 但近年来，由于分布区地形、环境及气候条件恶劣多变，金塔柽柳天然更新受到极大的限制，实生苗正日趋减少。目前，研究者主要采取扦插方法对该树进行繁殖，而在此过程中出现了插穗难以保存、插穗成活率低、扦插后成苗速度慢等问题。

[0007] 因此，急需采取新的无性繁殖的方法来解决这一问题。

发明内容

[0008] 本发明的目的在于提供一种金塔柽柳的组织培养生根方法，该方法可使金塔柽柳在较短时间内快速、高效的繁殖，从而创造出较高的经济效益。

[0009] 为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：

[0010] 一种金塔柽柳的组织培养生根方法，其特征在于，包括以下步骤：

[0011] Step1：选择金塔柽柳当年生嫩枝作为生根培养的外植体；

[0012] Step2：将外植体剪成长度为10-15cm的中段，冲洗掉表面的泥沙后做深层清洗；

[0013] Step3：将清洗干净的外植体置于超净工作台上，进行灭菌处理；

[0014] Step4：将已灭菌的外植体剪成长1.5-2.5cm的小段，接种于生根培养基中，前述生根培养基为：1/2MS+IBA 0.4mg/l+蔗糖25g/l，pH值为5.8-6.0；

[0015] Step5：将接种后的外植体进行培养，培养条件为：温度24±2℃、光照强度1500-2000lx、光照时间10-14h/d。

[0016] 前述的金塔柽柳的组织培养生根方法，其特征在于，在Step1中，在晴朗天气的下午剪取外植体。

[0017] 前述的金塔柽柳的组织培养生根方法，其特征在于，在Step2中，对外植体进行深层清洗的方法为：

[0018] 先用洗衣粉清洗枝条，洗衣粉泡沫冲洗干净后用玻璃棒蘸取一滴吐温80进行深层清洗，之后将外植体置于流水下冲洗2-6小时。

[0019] 前述的金塔柽柳的组织培养生根方法，其特征在于，在Step3中，对外植体进行灭菌处理的方法为：

[0020] 先用70％的乙醇浸泡10-15s，然后用无菌水冲洗3-4遍，再用0.1％的升汞浸泡2min，最后用无菌水再冲洗5-7遍。

[0021] 前述的金塔柽柳的组织培养生根方法，其特征在于，在Step4中，外植体剪成小段前，先将基部切口剪除，然后吸干外植体表面的水分。

[0022] 前述的金塔柽柳的组织培养生根方法，其特征在于，在Step4中，每瓶接种一个外植体。

[0023] 本发明的有益之处在于：采用本发明的方法培养金塔柽柳时，金塔柽柳不仅发根早，在第5天即开始第一次发根，而且生根快，生根时间缩短至15-21天，21天后平均根长达到9cm左右，根较长，根的平均数量达到5条，毛根多，生根率达到100％，上部长势好，育苗成本大大降低，实现了金塔柽柳的产业化生产。

附图说明

[0024] 图1是外植体在JS1培养基中培养28d后根的生长情况图；

[0025] 图2是外植体在JS1培养基中培养28d后植株的生长情况图；

[0026] 图3是外植体在JS2培养基中培养28d后根的生长情况图；

[0027] 图4是外植体在JS2培养基中培养28d后植株的生长情况图；

[0028] 图5是外植体在JS3培养基中培养28d后根的生长情况图；

[0029] 图6是外植体在JS4培养基中培养28d后根的生长情况图；

[0030] 图7是外植体在JS4培养基中培养28d后植株的生长情况图；

[0031] 图8是外植体在JS5培养基中培养28d后根和植株的生长情况图；

[0032] 图9是外植体在JS6培养基中培养28d后根和植株的生长情况图；

[0033] 图10是外植体在JS7培养基中培养28d后根和植株生长情况图；

[0034] 图11是外植体在JS8培养基中培养28d后根的生长情况图；

[0035] 图12是外植体在JS8培养基中培养28d后植株的生长情况图；

[0036] 图13是外植体在JS9培养基中培养28d后根的生长情况图；

[0037] 图14是外植体在JS10培养基中培养28d后根和植株生长情况图；

[0038] 图15是外植体在JS11培养基中培养28d后根和植株生长情况图；

[0039] 图16是外植体在JS12培养基中培养28d后根的生长情况图；

[0040] 图17是外植体在JS12培养基中培养28d后植株的生长情况图；

[0041] 图18是外植体在JS13培养基中培养28d后根的生长情况图；

[0042] 图19是外植体在JS13培养基中培养28d后植株的生长情况图。

具体实施方式

[0043] 以下结合附图和具体实施例对本发明作具体的介绍。

[0044] 一、外植体的选择

[0045] 选择适宜的外植体是组织培养的基础步骤。

[0046] 本发明选择金塔柽柳当年生嫩枝作为生根培养的外植体，在晴朗天气的下午剪不同林龄的外植体。

[0047] 二、外植体的清洗

[0048] 1、初步冲洗

[0049] 在室内，先将采集的外植体剪成长度为10-15cm的小段，之后用自来水冲洗表面的泥沙。

[0050] 2、深层清洗

[0051] 先用洗衣粉清洗枝条，洗衣粉泡沫冲洗干净后用玻璃棒蘸取一滴吐温80进行深层清洗，之后将外植体置于流水下冲洗2-6小时。

[0052] 三、外植体的灭菌及剪取

[0053] 1、灭菌

[0054] 将清洗干净的外植体置于超净工作台上，先用70％的乙醇浸泡10-15s，然后用无菌水冲洗3-4遍，再用0.1％的升汞浸泡2min，最后用无菌水冲洗5-7遍。

[0055] 2、剪取

[0056] 将已灭菌的外植体基部切口剪除，用已灭菌的滤纸吸干外植体表面的水分，剪成长1.5-2.5cm的小段，待用。

[0057] 四、生根培养

[0058] 1、筛选培养基

[0059] 在本发明中，金塔柽柳的生根培养以MS为基本培养基(其中大量元素、微量元素、铁盐、有机母液含量均没有变化)，并配以不同浓度的吲哚丁酸(IBA)、蔗糖和活性炭(AC)。

[0060] 具体实验过程分为两个阶段，具体如下：

[0061] 第一阶段：筛选适宜金塔柽柳生根培养的最佳IBA浓度

[0062] JS1：MS；

[0063] JS2：1/2MS；

[0064] JS3：1/2MS+IBA 0.2mg/l+蔗糖30g/l；

[0065] JS4：1/2MS+IBA 0.4mg/l+蔗糖30g/l；

[0066] JS5：1/2MS+IBA 0.6mg/l+蔗糖30g/l；

[0067] JS6：1/2MS+IBA 0.8mg/l+蔗糖30g/l；

[0068] JS7：1/2MS+IBA 1.0mg/l+蔗糖30g/l。

[0069] 以上各培养基的pH值均在5.8-6.0范围内。

[0070] 将长度为1.5-2.5cm的外植体小段接种于上述培养基中，每瓶接种一个外植体。

[0071] 培养条件设置：温度24±2℃、光照强度1500-2000lx、光照时间10-14h/d。

[0072] 接种后分别调查已接种外植体的生根情况，主要包括第一次发根时间、根长、根的数量、根系及植株生长情况。

[0073] 调查结果如下：

[0074]

[0075] 通过上述表格和附图我们发现，金塔柽柳生根时间最早且植株长势最好的培养基为JS4：1/2MS+IBA 0.4mg/l+蔗糖30g/l。

[0076] 这一阶段培养基中蔗糖的含量保持30g/l不变，只是调整生长素IBA的含量，发现当1/2MS培养基中加入0.4mg/l的IBA时，金塔柽柳在第6d就可以生根，且毛根很多，上部植株长势良好。

[0077] 第二阶段：调整蔗糖与活性炭的浓度筛选最佳的培养基配方

[0078] 研究表明，适当减少蔗糖的含量和在培养基中加入适量的活性炭(AC)有利于组织培养过程中外植体的生根培养，因此在第二阶段培养中我们仍以MS为基本培养基，在第一阶段筛选出的最佳生长素浓度(IBA0.4mg/l)的基础上，调整蔗糖与活性炭(AC)的浓度，进一步筛选最佳激素组合的培养基配方。

[0079] JS8：1/2MS+IBA 0.4mg/l+蔗糖5g/l；

[0080] JS9：1/2MS+IBA 0.4mg/l+蔗糖10g/l；

[0081] JS10：1/2MS+IBA 0.4mg/l+蔗糖15g/l；

[0082] JS11：1/2MS+IBA 0.4mg/l+蔗糖20g/l；

[0083] JS12：1/2MS+IBA 0.4mg/l+蔗糖25g/l；

[0084] JS13：1/2MS+IBA 0.4mg/l+蔗糖30g/l；

[0085] JS14：1/2MS+IBA 0.4mg/l+蔗糖30g/l+AC 0.5g/l；

[0086] JS15：1/2MS+IBA 0.4mg/l+蔗糖30g/l+AC 1.0g/l；

[0087] JS16：1/2MS+IBA 0.4mg/l+蔗糖30g/l+AC 2.0g/l；

[0088] JS17：1/2MS+IBA 0.4mg/l+蔗糖30g/l+AC 5.0g/l。

[0089] 以上各培养基的pH值均在5.8-6.0范围内。

[0090] 将长度为1.5-2.5cm的外植体小段接种于上述培养基中，每瓶接种一个外植体。

[0091] 培养条件设置：温度24±2℃、光照强度1500-2000lx、光照时间10-14h/d。

[0092] 接种后分别调查已接种外植体的生根情况，主要包括第一次发根时间、根长、根的数量、根系及植株生长情况。

[0093] 调查结果如下：

[0094]

[0095] 通过上述表格和附图我们发现，金塔柽柳在JS12：1/2MS+IBA0.4mg/l+蔗糖25g/l培养基中培养时，生根效果最好，主要表现为第一次生根时间较早(5d)，主根发达，根毛较多，根上部植株长势良好，颜色嫩绿，生根率为100％。

[0096] 通过两个不同阶段的培养，我们最终筛选出了最适合金塔柽柳外植体生根的培养基配方，具体如下：

[0097] 1/2MS+IBA 0.4mg/l+蔗糖25g/l(JS12)。

[0098] 2、接种

[0099] 将长度为1.5-2.5cm的外植体小段接种于最终筛选出来的生根培养基中，该生根培养基的配方为：1/2MS+IBA 0.4mg/l+蔗糖25g/l，每瓶接种一个外植体。

[0100] 3、培养

[0101] 生根培养条件设置：温度24±2℃、光照强度1500-2000lx、光照时间10-14h/d。

[0102] 4、观察

[0103] 观察结果：在第5天开始第一次发根(发根早)，在第21天平均根长达到9cm左右(生根快、根较长)，根的平均数量达到5条，毛根多，上部长势好，生根率达到100％。

[0104] 由此可见，本发明采用的无性繁殖方法保持了原有品种的优良性状，所提出的最适合生根的培养基使得金塔柽柳外植体出根时间早、整齐、出根量大、生根苗粗壮、叶子嫩绿、长势好。

[0105] 此外，本发明方法还具有繁殖速度快、繁殖系数大、管理方便、生产成本低、成苗率高、培养周期短、可周年生产和有利于实现工厂化生产、不受季节的限制的特点和优点，可为大规模工厂化生产提供有利条件。

[0106] 由于该树种根系发达，又具有良好的抗风蚀能力及耐盐碱性，该发明中组培生根培养基的研究可为荒漠化综合防治及荒漠区土地改良提供充足、优质的种苗来源。

[0107] 综上所述，组织培养方法是无性繁殖领域进行物种快速繁殖的重要方法，进年来在苗木、花卉、药材快速繁殖方面已广泛应用并已取得显著效果，而利用组织培养快速生根的方法在金塔柽柳无性繁殖研究中还没有涉及。本发明利用无性繁殖领域的组织培养方法，通过两个阶段的筛选确定了适合金塔柽柳组培生根的基本培养基配方与激素组合，实现了金塔柽柳在较短时间内快速、高效的繁殖，突破了在金塔柽柳无性繁殖过程中单独采用扦插繁殖的方法，大大提高了该树种的繁殖速度和效果，有效解决了金塔柽柳生根难的问题，这对该属植物其它品种及其扦插繁殖难以生根物种起到很好的参考与借鉴作用。

[0108] 需要说明的是，上述实施例不以任何形式限制本发明，凡采用等同替换或等效变换的方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围内。