抗OX40抗体和使用方法转让专利
申请号 : CN201580015643.6
文献号 : CN106103486A
文献日 : 2016-11-09
发明人 : 杜常春 , J·金 , J·朱 , J·贝弗斯 , K·沃尔什 , P·德阿梅达 , J·安德亚 , Y·沈
申请人 : 豪夫迈·罗氏有限公司
摘要 :
权利要求 :
1.一种抗人OX40激动性抗体,其中该抗体在体外消减表达人OX40的细胞且以小于或等于约1nM的亲和力结合人OX40。
2.权利要求1的抗体,其中该细胞是CD4+效应T细胞。
3.权利要求1的抗体,其中该细胞是Treg细胞。
4.前述权利要求任一项的抗体,其中该消减是通过ADCC和/或吞噬进行的。
5.权利要求4的抗体,其中该消减是通过ADCC进行的。
6.前述权利要求任一项的抗体,其中该抗体以小于或等于约0.45nM的亲和力结合人OX40。
7.权利要求6的抗体,其中该抗体以小于或等于约0.4nM的亲和力结合人OX40。
8.权利要求6或7的抗体,其中抗体结合亲和力是使用放射免疫测定法测定的。
9.前述权利要求任一项的抗体,其中该抗体结合人OX40和食蟹猴OX40。
10.权利要求9的抗体,其中结合是使用FACS测定法测定的。
11.权利要求9或10的抗体,其中对人OX40的结合具有小于或等于0.2ug/ml的EC50。
12.权利要求9或10的抗体,其中对人OX40的结合具有小于或等于0.3ug/ml或更低的EC50。
13.权利要求9-12任一项的抗体,其中对食蟹猴OX40的结合具有小于或等于1.5ug/ml的EC50。
14.权利要求13的抗体,其中对食蟹猴OX40的结合具有小于或等于1.4ug/ml的EC50。
15.前述权利要求任一项的抗体,其中与抗人OX40激动性抗体处理之前的增殖和/或细胞因子生成相比,该抗体提高CD4+效应T细胞增殖和/或提高CD4+效应T细胞的细胞因子生成。
16.权利要求15的抗体,其中该细胞因子是γ-干扰素。
17.前述权利要求任一项的抗体,其中该抗体提高记忆T细胞增殖和/或提高记忆细胞的细胞因子生成。
18.权利要求17的抗体,其中该细胞因子是γ-干扰素。
19.前述权利要求任一项的抗体,其中该抗体抑制Treg功能。
20.权利要求19的抗体,其中该抗体抑制效应T细胞功能的Treg遏制。
21.权利要求20的抗体,其中效应T细胞功能是效应T细胞增殖和/或细胞因子生成。
22.权利要求20或21的抗体,其中该效应T细胞是CD4+效应T细胞。
23.前述权利要求任一项的抗体,其中该抗体提高表达OX40的靶细胞中的OX40信号转导。
24.权利要求23的抗体,其中OX40信号转导是通过监测NFkB下游信号传导来检测的。
25.前述权利要求任一项的抗体,其中该抗体于40℃处理2周后是稳定的。
26.前述权利要求任一项的抗体,其中该抗体包含包含消除对人效应细胞的结合的突变的变异IgG1Fc多肽,具有相对于包含天然序列IgG1Fc部分的抗人OX40激动性抗体降低的活性。
27.权利要求26的抗体,其中该抗体包含包含DANA突变的变异Fc部分。
28.前述权利要求任一项的抗体,其中抗人OX40激动性抗体功能需要抗体交联。
29.前述权利要求任一项的抗体,其中该抗体包含(a)VH域,该VH域包含(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:2,8或9的HVR-H1,(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:3,10,11,12,13或14的HVR-H2,和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:4,15或19的HVR-H3;和(iv)包含氨基酸序列SEQ ID NO:5的HVR-L1,(v)包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的HVR-L2,和(vi)包含氨基酸序列SEQ ID NO:7,22,23,24,25,26,27或28的HVR-L3。
30.权利要求29的抗体,其中该抗体包含(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HVR-H1;
(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:3的HVR-H2;(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:4的HVR-H3;(d)包含氨基酸序列SEQ ID NO:5的HVR-L1;(e)包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的HVR-L2;和(f)包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的HVR-L3。
31.权利要求29的抗体,其中该抗体包含(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HVR-H1;
(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:3的HVR-H2;(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:4的HVR-H3;(d)包含氨基酸序列SEQ ID NO:5的HVR-L1;(e)包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的HVR-L2;和(f)包含氨基酸序列SEQ ID NO:26的HVR-L3。
32.权利要求29的抗体,其中该抗体包含(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HVR-H1;
(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:3的HVR-H2;(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:4的HVR-H3;(d)包含氨基酸序列SEQ ID NO:5的HVR-L1;(e)包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的HVR-L2;和(f)包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的HVR-L3。
33.前述权利要求任一项的抗体,其中该抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO:56,58,60,
62,64,66,68,70,72,74,76,78,80,82,84,86,88,90,92,94,96,98,100,108,114,116,183,或184具有至少90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,99%,或100%序列同一性的重链可变域(VH)序列。
34.前述权利要求任一项的抗体,其中该抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO:57,59,61,
63,65,67,69,71,73,75,77,79,81,83,85,87,89,91,93,95,97,99,101,109,115,或117具有至少90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,99%,或100%序列同一性的轻链可变域(VL)。
35.前述权利要求任一项的抗体,其中该抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO:56具有至少90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,99%,或100%序列同一性的重链可变域(VH)序列。
36.权利要求35的抗体,其中具有至少90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,
98%,或99%同一性的VH序列相对于参照序列含有替代(例如保守替代),插入,或删除,但是包含该序列的抗人OX40激动性抗体保留结合人OX40的能力。
37.权利要求35或36的抗体,其中在SEQ ID NO:56中替代,插入和/或删除了总共1至10个氨基酸。
38.权利要求35-37任一项的抗体,其中该VH包含一个,两个或三个选自下述的HVR:(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HVR-H1,(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:3的HVR-H2,和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:4的HVR-H3。
39.前述权利要求任一项的抗体,其中该抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO:57具有至少90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,99%,或100%序列同一性的轻链可变域(VL)。
40.权利要求39的抗体,其中具有至少90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,
98%,或99%同一性的VL序列相对于参照序列含有替代(例如保守替代),插入,或删除,但是包含该序列的抗人OX40激动性抗体保留结合人OX40的能力。
41.权利要求39或40的抗体,其中在SEQ ID NO:57中替代,插入和/或删除了总共1至10个氨基酸。
42.权利要求49-40任一项的抗体,其中该VL包含一个,两个或三个选自下述的HVR:(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:5的HVR-L1;(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的HVR-L2;和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的HVR-L3。
43.前述权利要求任一项的抗体,其包含VH序列SEQ ID NO:56。
44.前述权利要求任一项的抗体,其包含VL序列SEQ ID NO:57。
45.前述权利要求任一项的抗体,其包含VH序列SEQ ID NO:56和VL序列SEQ ID NO:57。
46.前述权利要求任一项的抗体,其包含VH序列SEQ ID NO:94。
47.前述权利要求任一项的抗体,其包含VL序列SEQ ID NO:95。
48.前述权利要求任一项的抗体,其包含VH序列SEQ ID NO:94和VL序列SEQ ID NO:95。
49.前述权利要求任一项的抗体,其包含VH序列SEQ ID NO:96。
50.前述权利要求任一项的抗体,其包含VL序列SEQ ID NO:97。
51.前述权利要求任一项的抗体,其包含VH序列SEQ ID NO:96和VL序列SEQ ID NO:97。
52.一种抗人OX40激动性抗体,其中该抗体包含(a)VH域,该VH域包含(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:2,8或9的HVR-H1,(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:3,10,11,12,13或14的HVR-H2,和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:4,15或19的HVR-H3;和(iv)包含氨基酸序列SEQ ID NO:5的HVR-L1,(v)包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的HVR-L2,和(vi)包含氨基酸序列SEQ ID NO:7,22,23,24,25,26,27或28的HVR-L3。
53.一种抗人OX40激动性抗体,其中该抗体包含(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HVR-H1;(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:3的HVR-H2;(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:4的HVR-H3;(d)包含氨基酸序列SEQ ID NO:5的HVR-L1;(e)包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的HVR-L2;和(f)包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的HVR-L3。
54.一种抗人OX40激动性抗体,其中该抗体包含(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HVR-H1;(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:3的HVR-H2;(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:4的HVR-H3;(d)包含氨基酸序列SEQ ID NO:5的HVR-L1;(e)包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的HVR-L2;和(f)包含氨基酸序列SEQ ID NO:26的HVR-L3。
55.一种抗人OX40激动性抗体,其中该抗体包含(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HVR-H1;(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:3的HVR-H2;(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:4的HVR-H3;(d)包含氨基酸序列SEQ ID NO:5的HVR-L1;(e)包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的HVR-L2;和(f)包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的HVR-L3。
56.一种抗人OX40激动性抗体,其中该抗体包含VH序列SEQ ID NO:180和VL序列SEQ ID NO:179。
57.一种抗人OX40激动性抗体,其中该抗体包含VH序列SEQ ID NO:182和VL序列SEQ ID NO:181。
58.前述权利要求任一项的抗体,其为全长人IgG1抗体。
59.分离的核酸,其编码前述权利要求任一项的抗体。
60.一种宿主细胞,其包含权利要求59的核酸。
61.一种生成抗体的方法,其包括培养权利要求60的宿主细胞,使得该抗体生成。
62.权利要求61的方法,其进一步包括自该宿主细胞回收该抗体。
63.一种免疫缀合物,其包含前述权利要求任一项的抗体和细胞毒剂。
64.一种药物配制剂,其包含权利要求1-58任一项的抗体和药学可接受载剂。
65.一种药物配制剂,其包含(a)权利要求1-58任一项的抗体,处于介于约10mg/mL和约
100mg/mL之间的浓度,(b)聚山梨酯,其中该聚山梨酯的浓度为约0.02%至约0.06%;(c)组氨酸缓冲液,处于pH 5.0至6.0;和(d)糖,其中该糖的浓度为约120mM至约320mM。
66.权利要求1-58任一项的抗体,其用作药物。
67.权利要求1-58任一项的抗体,其用于治疗癌症。
68.权利要求1-58任一项的抗体,其用于下述一项或多项:抑制Treg功能(例如抑制Treg的遏制性功能),杀死表达OX40的细胞(例如表达高水平OX40的细胞),提高效应T细胞功能和/或提高记忆T细胞功能,降低肿瘤免疫,增强T细胞功能和/或消减表达OX40的细胞。
69.权利要求1-58任一项的抗体制造用于治疗癌症的药物的用途。
70.权利要求1-58任一项的抗体制造用于下述一项或多项的药物的用途:抑制Treg功能(例如抑制Treg的遏制性功能),杀死表达OX40的细胞(例如表达高水平OX40的细胞),提高效应T细胞功能和/或提高记忆T细胞功能,降低肿瘤免疫,增强T细胞功能和/或消减表达OX40的细胞。
71.一种治疗具有癌症的个体的方法,其包括对该个体施用有效量的权利要求1-58任一项的抗体。
72.权利要求71的方法,其进一步包括施用别的治疗剂。
73.权利要求72的方法,其中该别的治疗剂包含化疗剂。
74.权利要求72的方法,其中该别的治疗剂包含PD-1轴结合拮抗剂。
说明书 :
抗OX40抗体和使用方法
的美国临时申请;和2014年11月14日提交的流水号62/080,171的美国临时申请的优先权,
通过援引将其每一篇完整收入本文。
143KB)。
发明领域
OX40L主要在抗原呈递细胞上表达。OX40由活化后的CD4+T细胞,活化后的CD8+T细胞,记忆T细胞,和调节T细胞高表达。OX40信号传导能给CD4和CD8T细胞提供共刺激信号,引起增强的细胞增殖,存活,效应器功能和迁移。OX40信号传导还增强记忆T细胞发育和功能。
定的。在一些实施方案中,对人OX40的结合具有小于或等于0.2ug/ml的EC50。在一些实施方案中,对人OX40的结合具有小于或等于0.3ug/ml或更低的EC50。在一些实施方案中,对食蟹猴OX40的结合具有小于或等于1.5ug/ml的EC50。在一些实施方案中,对食蟹猴OX40的结合
具有小于或等于1.4ug/ml的EC50。
的抗人OX40激动性抗体。在一些实施方案中,该细胞因子是γ-干扰素。
分的抗人OX40激动性抗体降低的活性。在一些实施方案中,该抗体包含变异Fc部分,其包含消除对FcR的结合的突变(例如DANA或N297G突变)。在一些实施方案中,该活性是下述一项
或多项:提高CD4+效应T细胞增殖和/或细胞因子生成,提高CD4+记忆T细胞增殖和/或细胞
因子生成,和/或通过ADCC和/或吞噬来消减细胞。
ADCC和/或吞噬来消减细胞。
11,12,13或14的HVR-H2,和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:4,15或19的HVR-H3;和(iv)包含氨基酸序列SEQ ID NO:5的HVR-L1,(v)包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的HVR-L2,和(vi)包含氨基酸序列SEQ ID NO:7,22,23,24,25,26,27或28的HVR-L3。
114,116,183,或184具有至少90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,99%,或
100%序列同一性的重链可变域(VH)序列。
115,或117具有至少90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,99%,或100%序列同一性的轻链可变域(VL)。
95%,96%,97%,98%,或99%同一性的VH序列相对于参照序列含有替代(例如保守替代),插入,或删除,但是包含该序列的抗人OX40激动性抗体保留结合人OX40的能力。在一些实施方案中,在SEQ ID NO:56中替代,插入和/或删除了总共1至10个氨基酸。在一些实施方案
中,该VH包含一个,两个或三个选自下述的HVR:(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HVR-H1,(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:3的HVR-H2,和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:4的HVR-H3。
96%,97%,98%,或99%同一性的VL序列相对于参照序列含有替代(例如保守替代),插入,或删除,但是包含该序列的抗人OX40激动性抗体保留结合人OX40的能力。在一些实施方案
中,在SEQ ID NO:57中替代,插入和/或删除了总共1至10个氨基酸。在一些实施方案中,该VL包含一个,两个或三个选自下述的HVR:(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:5的HVR-L1;(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的HVR-L2;和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的HVR-L3。
何抗人OX40激动性抗体,处于介于约10mg/mL和约100mg/mL之间的浓度,(b)聚山梨酯
(polysorbate),其中该聚山梨酯浓度是约0.02%至约0.06%;(c)组氨酸缓冲液,处于约pH
5.0至约pH 6.0;和(d)糖,其中该糖浓度是约120mM至约320mM。在一些实施方案中,该组氨酸缓冲液处于pH 5.0至6.0。在一些实施方案中,该糖是蔗糖。在一些实施方案中,该药物配制剂包含(a)本文中描述的任何抗人OX40激动性抗体,(b)聚山梨酯20,其中该聚山梨酯浓
度是约0.02%;(c)组氨酸乙酸酯缓冲液,处于pH 6.0;和(d)蔗糖,其中该蔗糖浓度是约
320mM。在一些实施方案中,该药物配制剂包含(a)本文中描述的任何抗人OX40激动性抗体,(b)聚山梨酯20,其中该聚山梨酯浓度是约0.02%;(c)组氨酸乙酸酯缓冲液,处于pH 5.5;
和(d)蔗糖,其中该蔗糖浓度是约240mM。在一些实施方案中,该药物配制剂包含(a)本文中描述的任何抗人OX40激动性抗体,(b)聚山梨酯20,其中该聚山梨酯浓度是约0.04%;(c)组氨酸乙酸酯缓冲液,处于pH 6.0;和(d)蔗糖,其中该蔗糖浓度是约120mM。在一些实施方案中,该药物配制剂包含(a)本文中描述的任何抗人OX40激动性抗体,(b)聚山梨酯40,其中该聚山梨酯浓度是约0.04%;(c)组氨酸乙酸酯缓冲液,处于pH 5.0;和(d)蔗糖,其中该蔗糖浓度是约240mM。在一些实施方案中,该药物配制剂包含(a)本文中描述的任何抗人OX40激
动性抗体,(b)聚山梨酯40,其中该聚山梨酯浓度是约0.04%;(c)组氨酸乙酸酯缓冲液,处于pH 6.0;和(d)蔗糖,其中该蔗糖浓度是约120mM。在一些实施方案中,该配制剂的抗体包含(a)VH域,该VH域包含(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:2,8或9的HVR-H1,(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:3,10,11,12,13或14的HVR-H2,和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:4,15或
19的HVR-H3;和(iv)包含氨基酸序列SEQ ID NO:5的HVR-L1,(v)包含氨基酸序列SEQ ID
NO:6的HVR-L2,和(vi)包含氨基酸序列SEQ ID NO:7,22,23,24,25,26,27或28的HVR-L3。在一些实施方案中,该配制剂的抗体包含(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HVR-H1;(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:3的HVR-H2;(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:4的HVR-H3;(d)包含氨
基酸序列SEQ ID NO:5的HVR-L1;(e)包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的HVR-L2;和(f)包含氨
基酸序列SEQ ID NO:7的HVR-L3。在一些实施方案中,该配制剂的抗体包含(a)包含氨基酸
序列SEQ ID NO:2的HVR-H1;(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:3的HVR-H2;(c)包含氨基酸序
列SEQ ID NO:4的HVR-H3;(d)包含氨基酸序列SEQ ID NO:5的HVR-L1;(e)包含氨基酸序列
SEQ ID NO:6的HVR-L2;和(f)包含氨基酸序列SEQ ID NO:26的HVR-L3。在一些实施方案中,该配制剂的抗体包含(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HVR-H1;(b)包含氨基酸序列SEQ
ID NO:3的HVR-H2;(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:4的HVR-H3;(d)包含氨基酸序列SEQ ID NO:5的HVR-L1;(e)包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的HVR-L2;和(f)包含氨基酸序列SEQ ID
NO:27的HVR-L3。在一些实施方案中,该配制剂的抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO:56,58,
60,62,64,66,68,70,72,74,76,78,80,82,84,86,88,90,92,94,96,98,100,108,114,116,
183,或184具有至少90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,99%,或100%序列同一性的重链可变域(VH)序列。在一些实施方案中,该配制剂的抗体包含与氨基酸序列
SEQ ID NO:57,59,61,63,65,67,69,71,73,75,77,79,81,83,85,87,89,91,93,95,97,99,
101,109,115,或117具有至少90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,99%,或
100%序列同一性的轻链可变域(VL)。在一些实施方案中,该配制剂的抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO:56具有至少90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,99%,或
100%序列同一性的重链可变域(VH)序列。在一些实施方案中,具有至少90%,91%,92%,
93%,94%,95%,96%,97%,98%,或99%同一性的VH序列相对于参照序列含有替代(例如保守替代),插入,或删除,但是包含该序列的抗人OX40激动性抗体保留结合人OX40的能力。
在一些实施方案中,在SEQ ID NO:56中替代,插入和/或删除了总共1至10个氨基酸。在一些实施方案中,该VH包含一个,两个或三个选自下述的HVR:(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HVR-H1,(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:3的HVR-H2,和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:4
的HVR-H3。在一些实施方案中,该配制剂的抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO:57具有至少
90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,99%,或100%序列同一性的轻链可变域(VL)。在一些实施方案中,具有至少90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,或99%同一性的VL序列相对于参照序列含有替代(例如保守替代),插入,或删除,但是包含该序列的抗人OX40激动性抗体保留结合人OX40的能力。在一些实施方案中,在SEQ ID NO:
57中替代,插入和/或删除了总共1至10个氨基酸。在一些实施方案中,该VL包含一个,两个或三个选自下述的HVR:(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:5的HVR-L1;(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的HVR-L2;和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的HVR-L3。在一些实施方案中,该配制剂的抗体包含VH序列SEQ ID NO:56。在一些实施方案中,该配制剂的抗体包含VL序列SEQ ID NO:57。在一些实施方案中,该配制剂的抗体包含VH序列SEQ ID NO:56和VL序列SEQ ID NO:57。在一些实施方案中,该配制剂的抗体包含VH序列SEQ ID NO:94。在一些实施方案中,该配制剂的抗体包含VL序列SEQ ID NO:95。在一些实施方案中,该配制剂的抗体包含VH序
列SEQ ID NO:94和VL序列SEQ ID NO:95。在一些实施方案中,该配制剂的抗体包含VH序列
SEQ ID NO:96。在一些实施方案中,该配制剂的抗体包含VL序列SEQ ID NO:97。在一些实施方案中,该配制剂的抗体包含VH序列SEQ ID NO:96和VL序列SEQ ID NO:97。在一些实施方
案中,该配制剂的抗体包含VH序列SEQ ID NO:180。在一些实施方案中,该配制剂的抗体包含VL序列SEQ ID NO:179。在一些实施方案中,该配制剂的抗体包含VH序列SEQ ID NO:180
和VL序列SEQ ID NO:179。在一些实施方案中,该配制剂的抗体包含VH序列SEQ ID NO:182。
在一些实施方案中,该配制剂的抗体包含VL序列SEQ ID NO:181。在一些实施方案中,该配制剂的抗体包含VH序列SEQ ID NO:182和VL序列SEQ ID NO:181。
高效应T细胞功能和/或提高记忆T细胞功能,降低肿瘤免疫,增强T细胞功能和/或消减表达OX40的细胞。
治疗剂。在一些实施方案中,该别的治疗剂包含化疗剂。在一些实施方案中,该别的治疗剂包含PD-1轴结合拮抗剂。
症的说明书。
的计算EC50为9.96ng/mL(n=2)。(图3B)提高单抗1A7.gr.1的浓度响应抗CD3交联而共刺激
CD4+记忆T细胞的干扰素-γ生成。
结合的抗CD3存在下用板结合的同种型对照抗体观察到的水平相似。
CD4+T细胞增殖抑制在含有抗OX40抗体,单抗1A7.gr.1的培养物中被消除。数据代表3项独
立实验的平均值。
的CD4+T细胞的ADCC。
14B)在给予0.3mg/kg或10mg/kg剂量的猴中观察到的随时间的CRP水平。
IL10和IL1ra随时间的水平。在图15A和15B中,10mg/kg剂量组中展现细胞因子水平瞬时升
高的猴个体以箭标记。
1A7.gr.1的猴中随时间的外周CD4+T细胞的OX40受体占据。
应T细胞的γ-干扰素分泌,升高的来自CD4+记忆和/或效应T细胞的γ-干扰素分泌,升高的CD4+效应和/或记忆T细胞增殖,升高的CD8+效应T细胞增殖,升高的抗原响应性(例如清除)。
在一个实施方案中,增强的水平是至少50%,或者60%,70%,80%,90%,100%,120%,
150%,200%。测量此增强的方式是本领域普通技术人员已知的。
和力通常可以用解离常数(Kd)来表述。亲和力可以通过本领域知道的常用方法来测量,包
括本文中所描述的方法。下文描述了用于测量结合亲和力的具体的说明性和例示性的实施
方案。
胞毒性形式。介导ADCC的主要细胞,NK细胞,只表达FcγRIII,而单核细胞表达FcγRI,FcγRII和FcγRIII。Ravetch and Kinet,Annu.Rev.Immunol.9:457-92(1991)第464页表3总结
了造血细胞上的FcR表达。为了评估目的分子的ADCC活性,可进行体外ADCC测定法,诸如美国专利No.5,500,362或5,821,337或美国专利No.6,737,056(Presta)中所记载的。可用于
此类测定法的效应细胞包括PBMC和NK细胞。或者/另外,可在体内评估目的分子的ADCC活
性,例如在动物模型中,诸如Clynes et al.,PNAS(USA)95:652-656(1998)中所披露的。本文实施例中提供了用于评估ADCC活性的一种例示性测定法。
1nM,≤0.1nM,≤0.01nM,或≤0.001nM(例如10-8M或更少,例如10-8M到10-13M,例如10-9M到
10-13M)的解离常数(Kd)。在某些实施方案中,抗OX40抗体结合在来自不同物种的OX40中保守的OX40表位。
其结合其它靶物更大的亲和力,亲合力,更容易,和/或以更大的持续时间结合此靶物的抗体。在一个实施方案中,抗体结合无关靶物的程度小于抗体结合靶物的约10%,如例如通过放射性免疫测定法(RIA)测量的。在某些实施方案中,特异性结合靶物的抗体具有≤1μM,≤
100nM,≤10nM,≤1nM,或≤0.1nM的解离常数(Kd)。在某些实施方案中,抗体特异性结合蛋白质上在来自不同物种的蛋白质间保守的表位。在另一个实施方案中,特异性结合可以包
括但不需要排他结合。
断50%或更多。本文中提供了例示性的竞争测定法。
增强或减弱的多肽。
NO:1。
胞肺癌,非小细胞肺癌,肺的腺癌,和肺的鳞癌),腹膜癌,肝细胞癌,胃癌(包括胃肠癌和胃肠基质癌),胰腺癌,成胶质细胞瘤,宫颈癌,卵巢癌,肝癌,膀胱癌,尿道癌,肝瘤,乳腺癌,结肠癌,直肠癌,结肠直肠癌,子宫内膜癌或子宫癌,唾液腺癌,肾癌,前列腺癌,外阴癌,甲状腺癌,肝癌,肛门癌,阴茎癌,黑素瘤,浅表扩散性黑素瘤,恶性雀斑样痣黑素瘤,肢端黑素瘤,结节性黑素瘤,多发性骨髓瘤和B细胞淋巴瘤,慢性淋巴细胞性白血病(CLL),急性成淋巴细胞性白血病(ALL),毛细胞性白血病,慢性成髓细胞性白血病,和移植后淋巴增殖性病症(PTLD),以及与瘢痣病(phakomatoses),水肿(诸如与脑瘤有关的)和梅格斯氏(Meigs)综合征有关的异常血管增殖,脑瘤和脑癌,以及头颈癌,及相关转移。在某些实施方案中,适合于通过本发明的抗体来治疗的癌症包括乳腺癌,结肠直肠癌,直肠癌,非小细胞肺癌,成胶质细胞瘤,非何杰金氏淋巴瘤(NHL),肾细胞癌,前列腺癌,肝癌,胰腺癌,软组织肉瘤,卡波西(Kaposi)氏肉瘤,类癌癌(carcinoid carcinoma),头颈癌,卵巢癌,间皮瘤,和多发性骨髓瘤。在一些实施方案中,癌症选自:非小细胞肺癌,成胶质细胞瘤,成神经细胞瘤,黑素瘤,乳腺癌(例如三重阴性乳腺癌),胃癌,结肠直肠癌(CRC),和肝细胞癌。还有,在一些实施方案中,癌症选自:非小细胞肺癌,结肠直肠癌,成胶质细胞瘤和乳腺癌(例如三重阴性乳腺癌),包括那些癌症的转移性形式。
J.Immunol.Methods 202:163(1996)中所记载的。具有更改的Fc区氨基酸序列(具有变异Fc
区的多肽)及提高或降低的C1q结合能力的多肽变体记载于例如美国专利No.6,194,551B1
和WO 1999/51642。还可参见例如Idusogie et al.,J.Immunol.164:4178-4184(2000)。
(trastuzumab) 是诱导G0/G1阻滞的细胞抑制剂的一个例子。经典的M期
阻断剂包括长春药类(vincas)(长春新碱(vincristine)和长春碱(vinblastine)),紫杉烷
类(taxanes),和拓扑异构酶II抑制剂诸如多柔比星(doxorubicin),表柔比星
(epirubicin),柔红霉素(daunorubicin),依托泊苷(etoposide)和博来霉素(bleomycin)。
某些阻滞G1的药剂也溢出进入S期停滞,例如DNA烷化剂类诸如他莫昔芬(tamoxifen),泼尼松(prednisone),达卡巴嗪(dacarbazine),双氯乙基甲胺(mechlorethamine),顺铂
(cisplatin),甲氨蝶呤(methotrexate),5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)和ara-C。更多信息可参见Mendelsohn和Israel编,《The Molecular Basis of Cancer》,第1章,题为“Cell cycle regulation,oncogenes,and antineoplastic drugs”,Murakami等,W.B.Saunders,Philadelphia,1995,例如第13页。紫杉烷类(帕利他赛(paclitaxel)和多西他赛
(docetaxel))是衍生自紫杉树的抗癌药。衍生自欧洲紫杉的多西他赛(
Rhone-Poulenc Rorer)是帕利他赛( Bristol-Myers Squibb)的半合成类似物。
帕利他赛和多西他赛促进由微管蛋白二聚体装配成微管并通过防止解聚使微管稳定,导致
对细胞中有丝分裂的抑制。
(methotrexate),阿霉素(adriamicin),长春花生物碱类(vinca alkaloids)(长春新碱
(vincristine),长春碱(vinblastine),依托泊苷(etoposide)),多柔比星(doxorubicin),美法仑(melphalan),丝裂霉素(mitomycin)C,苯丁酸氮芥(chlorambucil),柔红霉素
(daunorubicin)或其它嵌入剂);生长抑制剂;酶及其片段,诸如溶核酶;抗生素;毒素,诸如小分子毒素或者细菌,真菌,植物或动物起源的酶活性毒素,包括其片段和/或变体;及下文公开的各种抗肿瘤或抗癌剂。
(ITAM)。抑制受体FcγRIIB在其胞质结构域中包含免疫受体基于酪氨酸的抑制基序(ITIM)
(参见例如 Annu.Rev.Immunol.15:203-234(1997))。FcR的综述参见例如Ravetch
and Kinet,Annu.Rev.Immunol.9:457-492(1991);Capel et al.,Immunomethods 4:25-34
(1994);及de Haas et al.,J.Lab.Clin.Med.126:330-41(1995)。术语“FcR”在本文中涵盖其它FcR,包括那些未来将会鉴定的。术语“Fc受体”或“FcR”还包括新生儿受体,FcRn,其负责将母体IgG转移给胎儿(Guyer et al.,J.Immunol.117:587(1976)及Kim et al.,
J.Immunol.24:249(1994))和调节免疫球蛋白的体内稳态。测量对FcRn的结合的方法是已
知的(参见例如Ghetie and Ward.,Immunol.Today 18(12):592-598(1997);Ghetie et
al.,Nature Biotechnology,15(7):637-640(1997);Hinton et al.,J.Biol.Chem.279
(8):6213-6216(2004);WO 2004/92219(Hinton et al.))。可测定人FcRn高亲和力结合多
肽与人FcRn的体内结合和血清半衰期,例如在表达人FcRn的转基因小鼠或经转染的人细胞
系中,或者在施用了具有变异Fc区的多肽的灵长类动物中。WO 2000/42072(Presta)记载了对FcR的结合提高或降低的抗体变体。还可参见例如Shields et al.,J.Biol.Chem.9(2):
6591-6604(2001)。
引,如记载于Kabat等,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版
Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD,1991。
外周血单个核细胞(PBMC),天然杀伤(NK)细胞,单核细胞,细胞毒性T细胞和嗜中性粒细胞。
效应细胞可以从其天然来源分离,例如血液。
选择的相同功能或生物学活性的突变体后代。
除包含非人抗原结合残基的人源化抗体。
Publication 91-3242,Bethesda MD(1991),第1-3卷中的亚组。在一个实施方案中,对于VL,亚组是如Kabat等,见上文中的亚组κI。在一个实施方案中,对于VH,亚组是如Kabat等,见上文中的亚组III。
人抗体的那些。任选地,人源化抗体可以至少包含自人抗体衍生的抗体恒定区的一部分。抗体,例如非人抗体的“人源化形式”指已经经历人源化的抗体。
MD(1991));
个位置的此类核酸分子。
常包含针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制备物不同,单克隆抗体制备物的
每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。如此,修饰语“单克隆”指示抗体自一群基本上同质的抗体获得的特性,而不应解释为要求通过任何特定方法来生成抗体。例如,可以通过多种技术来生成要依照本发明使用的单克隆抗体,包括但不限于杂交瘤方法,重组DNA方
法,噬菌体展示方法,和利用含有所有或部分人免疫球蛋白基因座的转基因动物的方法,本文中描述了用于生成单克隆抗体的此类方法和其它例示性方法。
型);天然序列人IgG2 Fc区;天然序列人IgG3 Fc区;和天然序列人IgG4 Fc区;及其天然存在变体。
分时,候选序列中与参照多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分率。为测定百
分比氨基酸序列同一性目的的对比可以以本领域技术范围内的多种方式进行,例如使用公
众可得到的计算机软件,诸如BLAST,BLAST-2,ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可以决定用于比对序列的合适参数,包括对所比较序列全长获得最大对比所需的任
何算法。然而,为了本发明的目的,%氨基酸序列同一性值是使用序列比较计算机程序
ALIGN-2产生的。ALIGN-2序列比较计算机程序由Genentech,Inc.编写,并且源代码已经连
同用户文档一起提交给美国版权局(US Copyright Office,Washington D.C.,20559),其
中其以美国版权注册号TXU510087注册。公众自Genentech,Inc.,South San Francisco,
California可获得ALIGN-2程序,或者可以从源代码编译。ALIGN2程序应当编译成在UNIX操作系统,包括数码UNIX V4.0D上使用。所有序列比较参数由ALIGN-2程序设定且不变。
包含相对于,与,或针对给定氨基酸序列B的某一%氨基酸序列同一性的给定氨基酸序列A)如下计算:
同一性。除非另有明确说明,本文中所使用的所有%氨基酸序列同一性值都是依照上一段
所述,使用ALIGN-2计算机程序获得的。
病理学后果,预防转移,减缓疾病进展的速率,改善或减轻疾病状态,及免除或改善预后。在有些实施方案中,本发明的抗体用于延迟疾病的发生/发展,或用于减缓疾病的进展。
Co.,第91页(2007))。单个VH或VL域可以足以赋予抗原结合特异性。此外,可以分别使用来自结合抗原的抗体的VH或VL域筛选互补VL或VH域的文库来分离结合特定抗原的抗体。见例
如,Portolano等,J.Immunol.150:880-887(1993);Clarkson等,Nature 352:624-628
(1991)。
肽的Fc区相比具有至少一处氨基酸替代,例如在天然序列Fc区中或在亲本多肽的Fc区中具
有约1处至约10处氨基酸替代,优选约1处至约5处氨基酸替代。变异Fc区在本文中优选与天然序列Fc区和/或亲本多肽的Fc区拥有至少约80%的同源性,最优选与它们具有至少约
90%的同源性,更优选与它们具有至少约95%的同源性。
体”。
NO:186)-H2-RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYC(SEQ ID NO:187)-H3-WGQGTLVTVSS(SEQ
ID NO:188)。
190)-L2-GVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYC(SEQ ID NO:191)-L3-FGQGTKVEIK(SEQ ID
NO:192)。
和毒素,诸如小分子毒素或者细菌,真菌,植物或动物起源的酶活性毒素,包括其片段和/或变体。例示性的细胞毒剂可选自抗微管剂,铂配位复合物,烷化剂,抗生剂,拓扑异构酶II抑制剂,抗代谢物,拓扑异构酶I抑制剂,激素和激素类似物,信号转导途径抑制剂,非受体酪氨酸激酶血管发生抑制剂,免疫治疗剂,促凋亡剂,LDH-A的抑制剂,脂肪酸生物合成的抑制剂,细胞周期信号传导抑制剂,HDAC抑制剂,蛋白酶体抑制剂,和癌代谢的抑制剂。
Millennium Pharm.),双硫仑(disulfiram),没食子酸表没食子儿茶精
(epigallocatechin gallate),salinosporamide A,carfilzomib,17-AAG(格尔德霉素
(geldanamycin)),根赤壳菌素(radicicol),乳酸脱氢酶A(LDH-A),氟维司群
(fulvestrant)( AstraZeneca),舒尼替尼(sunitib)(
Pfizer/Sugen),来曲唑(letrozole)( Novartis),甲磺酸伊马替尼(imatinib
mesylate)( Novartis),finasunate( Novartis),奥沙利
铂(oxaliplatin)( Sanofi),5-FU(5-氟尿嘧啶),甲酰四氢叶酸
(leucovorin),雷帕霉素(Rapamycin)(西罗莫司(Sirolimus), Wyeth),
拉帕替尼(Lapatinib)( GSK572016,Glaxo Smith Kline),Lonafamib(SCH
66336),索拉非尼(sorafenib)( Bayer Labs),吉非替尼(gefitinib)(
AstraZeneca),AG1478,烷化剂类(alkylating agents),诸如塞替派
(thiotepa)和 环磷酰胺(cyclophosphamide);磺酸烷基酯类(alkyl
sulfonates),诸如白消安(busulfan),英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan);
氮丙啶类(aziridines),诸如苯佐替派(benzodopa),卡波醌(carboquone),美妥替派
(meturedopa),和乌瑞替派(uredopa);乙撑亚胺类(ethylenimines)和甲基蜜胺类
(methylamelamines),包括六甲蜜胺(altretamine),三乙撑蜜胺(triethylenemelamine),三乙撑磷酰胺(triethylenephosphoramide),三乙撑硫代磷酰胺
(triethylenethiophosphoramide)和三羟甲蜜胺(trimethylomelamine);番荔枝内酯类
(acetogenins)(尤其是布拉他辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone));喜树碱
(camptothecin)(包括托泊替康(topotecan)和伊立替康(irinotecan));苔藓抑素
(bryostatin);callystatin;CC-1065(包括其阿多来新(adozelesin),卡折来新
(carzelesin)和比折来新(bizelesin)合成类似物);隐藻素类(cryptophycins)(特别是隐
藻素1和隐藻素8);肾上腺皮质类固醇类(adrenocorticosteroids),包括泼尼松
(prednisone)和泼尼松龙(prednisolone);醋酸环丙孕酮(cyproterone acetate);5α-还原酶,包括非那雄胺(finasteride)和度他雄胺(dutasteride);vorinostat,romidepsin,panobinostat,丙戊酸(valproic acid),mocetinostat多拉司他汀(dolastatin);阿地白
介素(aldesleukin),滑石(talc)duocarmycin(包括合成类似物,KW-2189和CB1-TM1);艾榴塞洛素(eleutherobin);pancratistatin;sarcodictyin;海绵抑素(spongistatin);氮芥类(nitrogen mustards),诸如苯丁酸氮芥(chlorambucil),萘氮芥(chlomaphazine),胆磷酰胺(chlorophosphamide),雌莫司汀(estramustine),异环磷酰胺(ifosfamide),双氯乙基甲胺(mechlorethamine),盐酸氧氮芥(mechlorethamine oxide hydrochloride),美法
仑(melphalan),新氮芥(novembichin),苯芥胆甾醇(phenesterine),泼尼莫司汀
(prednimustine),曲磷胺(trofosfamide),尿嘧啶氮芥(uracil mustard);亚硝脲类
(nitrosoureas),诸如卡莫司汀(carmustine),氯脲菌素(chlorozotocin),福莫司汀
(fotemustine),洛莫司汀(lomustine),尼莫司汀(nimustine),和雷莫司汀
(ranimnustine);抗生素类,诸如烯二炔类抗生素(例如加利车霉素(calicheamicin),尤其是加利车霉素γ1I和加利车霉素ω1I(Angew Chem.Intl.Ed.Engl.1994,33:183-186);蒽
环类抗生素(dynemicin),包括dynemicin A;二膦酸盐类(bisphosphonates),诸如氯膦酸盐(clodronate);埃斯波霉素(esperamicin);以及新制癌素(neocarzinostatin)发色团和相关色蛋白烯二炔类抗生素发色团),阿克拉霉素(aclacinomysins),放线菌素
(actinomycin),氨茴霉素(authramycin),偶氮丝氨酸(azaserine),博来霉素
(bleomycin),放线菌素C(cactinomycin),carabicin,洋红霉素(caminomycin),嗜癌霉素(carzinophilin),色霉素(chromomycinis),放线菌素D(dactinomycin),柔红霉素
(daunorubicin),地托比星(detorubicin),6-二氮-5-氧-L-正亮氨酸,
(多柔比星(doxorubicin)),吗啉代多柔比星,氰基吗啉代多柔比星,2-吡咯代多柔比星和脱氧多柔比星),表柔比星(epirubicin),依索比星(esorubicin),伊达比星(idarubicin),麻西罗霉素(marcellomycin),丝裂霉素(mitomycin)诸如丝裂霉素C,霉酚酸
(mycophenolic acid),诺拉霉素(nogalamycin),橄榄霉素(olivomycin),培洛霉素
(peplomycin),泊非霉素(porfiromycin),嘌呤霉素(puromycin),三铁阿霉素
(quelamycin),罗多比星(rodorubicin),链黑菌素(streptonigrin),链佐星
(streptozocin),杀结核菌素(tubercidin),乌苯美司(ubenimex),净司他丁
(zinostatin),佐柔比星(zorubicin);抗代谢物类,诸如甲氨蝶呤(methotrexate)和5-氟尿嘧啶(fluorouracil)(5-FU);叶酸类似物,诸如二甲叶酸(denopterin),甲氨蝶呤,蝶酰三谷氨酸(pteropterin),三甲曲沙(trimetrexate);嘌呤类似物,诸如氟达拉滨
(fludarabine),6-巯基嘌呤(mercaptopurine),硫咪嘌呤(thiamiprine),硫鸟嘌呤
(thioguanine);嘧啶类似物,诸如安西他滨(ancitabine),阿扎胞苷(azacitidine),6-氮尿苷,卡莫氟(carmofur),阿糖胞苷(cytarabine),双脱氧尿苷(dideoxyuridine),去氧氟尿苷(doxifluridine),依诺他滨(enocitabine),氟尿苷(floxuridine);雄激素类,诸如卡鲁睾酮(calusterone),丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate),表硫雄醇
(epitiostanol),美雄烷(mepitiostane),睾内酯(testolactone);抗肾上腺类,诸如氨鲁米特(aminoglutethimide),米托坦(mitotane),曲洛司坦(trilostane);叶酸补充剂,诸如亚叶酸(frolinic acid);醋葡醛内酯(aceglatone);醛磷酰胺糖苷(aldophosphamide
glycoside);氨基乙酰丙酸(aminolevulinic acid);恩尿嘧啶(eniluracil);安吖啶
(amsacrine);bestrabucil;比生群(bisantrene);依达曲沙(edatraxate);地磷酰胺
(defofamine);地美可辛(demecolcine);地吖醌(diaziquone);elfomithine;依利醋铵
(elliptinium acetate);epothilone;依托格鲁(etoglucid);硝酸镓;羟脲
(hydroxyurea);香菇多糖(lentinan);氯尼达明(lonidainine);美登木素生物碱类
(maytansinoids),诸如美登素(maytansine)和安丝菌素(ansamitocin);米托胍腙
(mitoguazone);米托蒽醌(mitoxantrone);莫哌达醇(mopidamnol);二胺硝吖啶
(nitraerine);喷司他丁(pentostatin);蛋氨氮芥(phenamet);吡柔比星(pirarubicin);
洛索蒽醌(losoxantrone);鬼臼酸(podophyllinic acid);2-乙基酰肼(ethylhydrazide);
丙卡巴肼(procarbazine); 多糖复合物(JHS Natural Products,Eugene,Oreg.);雷
佐生(razoxane);根霉素(rhizoxin);西索菲兰(sizofuran);螺旋锗(spirogermanium);细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid);三亚胺醌(triaziquone);2,2',2”-三氯三乙胺;单端孢菌素类(trichothecenes)(尤其是T-2毒素,疣孢菌素(verracurin)A,杆孢菌素(roridin)A和蛇行菌素(anguidine));乌拉坦(urethan);长春地辛(vindesine);达卡巴嗪
(dacarbazine);甘露醇氮芥(mannomustine);二溴甘露醇(mitobronitol);二溴卫矛醇
(mitolactol);哌泊溴烷(pipobroman);gacytosine;阿糖胞苷(arabinoside)(“Ara-C”);
环磷酰胺(cyclophosphamide);塞替派(thiotepa);类紫杉醇(taxoids),例如泰素(TAXOL)(帕利他赛(paclitaxel);Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,N.J.),
(无克列莫佛(Cremophor)的),帕利他赛的清蛋白改造的纳米颗粒剂型
(American Pharmaceutical Partners,Schaumberg,Ill.)和泰索帝 (多
西他赛(docetaxel,doxetaxel);Sanofi-Aventis);苯丁酸氮芥(chloranmbucil);
(吉西他滨(gemcitabine));6-硫鸟嘌呤(thioguanine);巯基嘌呤
(mercaptopurine);甲氨蝶呤(methotrexate);铂类似物,诸如顺铂(cisplatin)和卡铂
(carboplatin);长春碱(vinblastine);依托泊苷(etoposide)(VP-16);异环磷酰胺
(ifosfamide);米托蒽醌(mitoxantrone);长春新碱(vincristine); (长
春瑞滨(vinorelbine));能灭瘤(novantrone);替尼泊苷(teniposide);依达曲沙
(edatrexate);道诺霉素(daunomycin);氨基蝶呤(aminopterin);卡培他滨
(capecitabine) 伊本膦酸盐(ibandronate);CPT-11;拓扑异构酶抑制剂
RFS 2000;二氟甲基鸟氨酸(DMFO);类视黄酸(retinoids),诸如视黄酸(retinoic acid);
及任何上述各项的药学可接受盐,酸或衍生物。
柠檬酸他莫昔芬),雷洛昔芬(raloxifene),屈洛昔芬(droloxifene),
iodoxyfene,4-羟基他莫昔芬,曲沃昔芬(trioxifene),那洛昔芬(keoxifene),LY117018,奥那司酮(onapristone),和 (柠檬酸托瑞米芬(toremifine citrate));
(ii)抑制在肾上腺中调节雌激素生成的芳香酶的芳香酶抑制剂,诸如例如4(5)-咪唑,氨鲁米特(aminoglutethimide), (醋酸甲地孕酮(megestrol acetate)),
(依西美坦(exemestane);Pfizer),福美坦(formestanie),法倔唑
(fadrozole), (伏罗唑(vorozole)), (来曲唑(letrozole);
Novartis),和 (阿那曲唑(anastrozole);AstraZeneca);(iii)抗雄激素
类,诸如氟他米特(flutamide),尼鲁米特(nilutamide),比卡米特(bicalutamide),亮丙瑞林(leuprolide)和戈舍瑞林(goserelin);布舍瑞林(buserelin),曲普瑞林(tripterelin),醋酸甲羟孕酮(medroxyprogesterone acetate),己烯雌酚(diethylstilbestrol),倍美力(premarin),氟甲睾酮(fluoxymesterone),全反式视黄酸,芬维A胺(fenretinide),以及曲沙他滨(troxacitabine)(1,3-二氧戊环核苷胞嘧啶类似物);(iv)蛋白质激酶抑制剂;(v)
脂质激酶抑制剂;(vi)反义寡核苷酸,特别是抑制牵涉异常细胞增殖的信号传导途经中的
基因表达的反义寡核苷酸,诸如例如PKC-α,Ralf和H-Ras;(vii)核酶,诸如VEGF表达抑制剂(例如 )和HER2表达抑制剂;(viii)疫苗,诸如基因疗法疫苗,例如
和 rIL-2;拓扑异
构酶1抑制剂,诸如 rmRH;和(ix)及任何上述药剂的
药学可接受盐,酸和衍生物。
Imclone);帕尼单抗(panitumumab)( Amgen),利妥昔单抗(rituximab)(
Genentech/Biogen Idec),帕妥珠单抗(pertuzumab)(
2C4,Genentech),曲妥珠单抗( Genentech),托西莫单抗(tositumomab)
(Bexxar,Corixia),和抗体药物缀合物,吉妥珠单抗奥佐米星(gemtuzumab ozogamicin)(Wyeth)。具有作为与本发明化合物组合的药剂的治疗潜力的别的人源化
单克隆抗体包括:阿泊珠单抗(apolizumab),阿塞珠单抗(aselizumab),atlizumab,巴匹珠单抗(bapineuzumab),bivatuzumab mertansine,莫坎妥珠单抗(cantuzumab
mertansine),西利珠单抗(cedelizumab),培舍珠单抗(certolizumab pegol),
cidfusituzumab,cidtuzumab,达克珠单抗(daclizumab),依库珠单抗(eculizumab),依法珠单抗(efalizumab),依帕珠单抗(epratuzumab),厄利珠单抗(erlizumab),非维珠单抗
(felvizumab),芳妥珠单抗(fontolizumab),吉妥珠单抗奥佐米星(gemtuzumab
ozogamicin),英妥珠单抗奥佐米星(inotuzumab ozogamicin),伊匹木单抗(ipilimumab),拉贝珠单抗(labetuzumab),林妥珠单抗(lintuzumab),马妥珠单抗(matuzumab),美泊利单抗(mepolizumab),莫维珠单抗(motavizumab),motovizumab,那他珠单抗(natalizumab),尼妥珠单抗(nimotuzumab),nolovizumab,numavizumab,ocrelizumab,奥马珠单抗
(omalizumab),帕利珠单抗(palivizumab),帕考珠单抗(pascolizumab),pecfusituzumab,pectuzumab,培克珠单抗(pexelizumab),ralivizumab,雷珠单抗(ranibizumab),
reslivizumab,瑞利珠单抗(reslizumab),resyvizumab,罗维珠单抗(rovelizumab),卢利珠单抗(ruplizumab),西罗珠单抗(sibrotuzumab),西利珠单抗(siplizumab),索土珠单抗(sontuzumab),tacatuzumab tetraxetan,tadocizumab,他利珠单抗(talizumab),特非珠单抗(tefibazumab),托珠单抗(tocilizumab),托利珠单抗(toralizumab),tucotuzumab西莫白介素(celmoleukin),tucusituzumab,umavizumab,乌珠单抗(urtoxazumab),优特克单抗(ustekinumab),维西珠单抗(visilizumab),和抗白介素-12(ABT-874/J695,Wyeth
Research and Abbott Laboratories),其为经遗传修饰以识别白介素-12p40蛋白的重组
专有人序列全长IgG1λ抗体。
)和重构的人225(H225)(参见WO96/40210,Imclone Systerms Inc.);IMC-
11F8,一种完全人的EGFR靶向抗体(Imclone);结合II型突变体EGFR的抗体(美国专利No.5,
212,290);结合EGFR的人源化和嵌合抗体,如美国专利No.5,891,996中所述;和结合EGFR的人抗体,诸如ABX-EGF或帕尼单抗(Panitumumab)(参见WO98/50433,Abgenix/Amgen);EMD
55900(Stragliotto et al.,Eur.J.Cancer 32A:636-640(1996));EMD7200(matuzumab),
一种针对EGFR且与EGF和TGF-α二者竞争EGFR结合的人源化EGFR抗体(EMD/Merck);人EGFR
抗体,HuMax-EGFR(GenMab);称作E1.1,E2.4,E2.5,E6.2,E6.4,E2.11,E6.3和E7.6.3且描述在US 6,235,883中的完全人抗体;MDX-447(Medarex Inc);和mAb 806或人源化mAb 806
(Johns et al.,J.Biol.Chem.279(29):30375-30384(2004))。抗EGFR抗体可与细胞毒剂缀
合,由此产生免疫缀合物(参见例如EP 659,439A2,Merck Patent GmbH)。EGFR拮抗剂包括小分子,诸如美国专利No.5,616,582,5,457,105,5,475,001,5,654,307,5,679,683,6,
084,095,6,265,410,6,455,534,6,521,620,6,596,726,6,713,484,5,770,599,6,140,
332,5,866,572,6,399,602,6,344,459,6,602,863,6,391,874,6,344,455,5,760,041,6,
002,008,和5,747,498,以及PCT公开文本WO98/14451,WO98/50038,WO99/09016,和WO99/
24037中描述的化合物。具体的小分子EGFR拮抗剂包括OSI-774(CP-358774,厄洛替尼
(erlotinib), Genentech/OSI Pharmaceuticals);PD 183805(CI 1033,2-
丙烯酰胺,N-[4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-7-[3-(4-吗啉基)丙氧基]-6-喹唑啉基]-,二氢
氯化物,Pfizer Inc.);ZD1839,吉非替尼(gefitinib) 4-(3’-氯-4’-氟苯胺
基)-7-甲氧基-6-(3-吗啉代丙氧基)喹唑啉,AstraZeneca);ZM 105180((6-氨基-4-(3-甲
基苯基-氨基)-喹唑啉,Zeneca);BIBX-1382(N8-(3-氯-4-氟-苯基)-N2-(1-甲基-哌啶-4-
基)-嘧啶并[5,4-d]嘧啶-2,8-二胺,Boehringer Ingelheim);PKI-166((R)-4-[4-[(1-苯
基乙基)氨基]-1H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-基]-苯酚);(R)-6-(4-羟基苯基)-4-[(1-苯基乙
基)氨基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶);CL-387785(N-[4-[(3-溴苯基)氨基]-6-喹唑啉基]-2-
丁炔酰胺);EKB-569(N-[4-[(3-氯-4-氟苯基)氨基]-3-氰基-7-乙氧基-6-喹啉基]-4-(二
甲基氨基)-2-丁烯酰胺)(Wyeth);AG1478(Pfizer);AG1571(SU 5271;Pfizer);双重EGFR/HER2酪氨酸激酶抑制剂,诸如拉帕替尼(lapatinib)( GSK572016或N-[3-氯4-
[(3氟苯基)甲氧基]苯基]-6[5[[[2甲基磺酰基)乙基]氨基]甲基]-2-呋喃基]-4-喹唑啉
胺)。
Novartis获得);泛HER抑制剂,诸如卡奈替尼(canertinib)(CI-1033;Pharmacia);Raf-1抑制剂,诸如可从ISIS Pharmaceuticals获得的,抑制Raf-1信号传导的反义药剂ISIS-5132;
非HER靶向TK抑制剂,诸如甲磺酸伊马替尼( 可得自Glaxo SmithKline);多
靶向酪氨酸激酶抑制剂,诸如舒尼替尼(sunitinib)( 可从Pfizer获得);VEGF
受体酪氨酸激酶抑制剂,诸如瓦他拉尼(vatalanib)(PTK787/ZK222584,可从Novartis/
Schering AG获得);MAPK胞外调控激酶I抑制剂CI-1040(可从Pharmacia获得);喹唑啉类,诸如PD 153035,4-(3-氯苯胺基)喹唑啉;吡啶并嘧啶类;嘧啶并嘧啶类;吡咯并嘧啶类,诸如CGP 59326,CGP 60261和CGP 62706;吡唑并嘧啶类,4-(苯基氨基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶类;姜黄素(二阿魏酰甲烷,4,5-双(4-氟苯胺基)-酞酰亚胺);含有硝基噻吩模块的
tyrphostine;PD-0183805(Warner-Lamber);反义分子(例如那些与编码HER的核酸结合的
反义分子);喹喔啉类(美国专利No.5,804,396);tryphostins(美国专利No.5,804,396);
ZD6474(AstraZeneca);PTK-787(Novartis/Schering AG);泛HER抑制剂,诸如CI-1033
(Pfizer);Affinitac(ISIS 3521;Isis/Lilly);甲磺酸伊马替尼 PKI 166
(Novartis);GW2016(Glaxo SmithKline);CI-1033(Pfizer);EKB-569(Wyeth);Semaxinib(Pfizer);ZD6474(AstraZeneca);PTK-787(Novartis/Schering AG);INC-1C11(Imclone),雷帕霉素(西罗莫司, );或任何下列专利公开文本中描述的:美国专利
No.5,804,396;WO1999/09016(American Cyanamid);WO1998/43960(American Cyanamid);
WO1997/38983(Warner Lambert);WO1999/06378(Warner Lambert);WO1999/06396
(WarnerLambert);WO1996/30347(Pfizer,Inc);WO1996/33978(Zeneca);WO1996/3397
(Zeneca)和WO1996/33980(Zeneca)。
(metronidazole),阿仑单抗(alemtuzumab),阿利维A酸(alitretinoin),别嘌醇
(allopurinol),氨磷汀(amifostine),三氧化二砷(arsenic trioxide),天冬酰胺酶
(asparaginase),活的BCG,贝伐珠单抗(bevacuzimab),贝沙罗汀(bexarotene),克拉屈滨(cladribine),里本灵(clofarabine),darbepoetin alfa,地尼白介素(denileukin),右雷佐生(dexrazoxane),阿法依伯汀(epoetin alfa),厄洛替尼(elotinib),非格司亭
(filgrastim),醋酸组氨瑞林(histrelin acetate),ibritumomab,干扰素α-2a,干扰素α-
2b,lenalidomide,左旋咪唑(levamisole),美司钠(mesna),甲氧沙林(methoxsalen),诺龙(nandrolone),奈拉滨(nelarabine),诺非单抗(nofetumomab),奥普瑞白介素
(oprelvekin),palifermin,帕米膦酸盐(pamidronate),培加酶(pegademase),培门冬酶(pegaspargase),PEG非格司亭(pegfilgrastim),培美曲塞二钠(pemetrexed disodium),普卡霉素(plicamycin),卟吩姆钠(porfimer sodium),喹纳克林(quinacrine),拉布立酶(rasburicase),沙格司亭(sargramostim),替莫唑胺(temozolomide),VM-26,6-TG,托瑞米芬(toremifene),tretinoin,ATRA,戊柔比星(valrubicin),唑来膦酸盐(zoledronate),和唑来膦酸(zoledronic acid),及其药学可接受盐。
(mometasone),安西奈德(amcinonide),布地奈德(budesonide),地奈德(desonide),
fluocinonide,fluocinolone acetonide,倍他米松(betamethasone),倍他米松磷酸钠
(betamethasone sodium phosphate),地塞米松(dexamethasone),地塞米松磷酸钠
(dexamethasone sodium phosphate),氟可龙(fluocortolone),氢化可的松-17-丁酸盐
(hydrocortisone-17-butyrate),氢化可的松-17-戊酸盐(hydrocortisone-17-
valerate),aclometasone dipropionate,戊酸倍他米松(betamethasone valerate),二丙酸倍他米松(betamethasone dipropionate),泼尼卡酯(prednicarbate),氯倍他松-17-丁酸盐(clobetasone-17-butyrate),氯倍他松-17-丙酸盐(clobetasol-17-propionate),己酸氟考龙(fluocortolone caproate),特戊酸氟考龙(fluocortolone pivalate)和醋酸氟
甲叉龙(fluprednidene acetate);免疫选择性抗炎肽(ImSAID),诸如苯丙氨酸-谷氨酰胺-甘氨酸(FEG)及其D-异构体形式(feG)(IMULAN BioTherapeutics,LLC);抗风湿药物,诸如
硫唑嘌呤(azathioprine),环孢素(ciclosporin)(环孢霉素(cyclosporine)A),D-青霉胺,金盐,羟氯喹,来氟米特(leflunomide)米诺环素(minocycline),柳氮磺吡啶
(sulfasalazine),肿瘤坏死因子α(TNFα)阻断剂,诸如依那西普(etanercept)(Enbrel),英夫利昔单抗(infliximab)(Remicade),阿达木单抗(adalimumab)(Humira),certolizumab pegol(Cimzia),golimumab(Simponi),白介素-1(IL-1)阻断剂,诸如阿那白滞素
(anakinra)(Kineret),T细胞共刺激阻断剂,诸如abatacept(Orencia),白介素-6(IL-6)阻断剂,诸如tocilizumab 白介素-13(IL-13)阻断剂,诸如lebrikizumab;
干扰素α(IFN)阻断剂,诸如Rontalizumab;β7-整联蛋白阻断剂,诸如rhuMAb Beta7;IgE途径阻断剂,诸如抗M1prime;分泌型同三聚LTa3和膜结合型异三聚LTa1/β2阻断剂,诸如抗淋巴毒素α(LTa);放射性同位素,例如At211,I131,I125,Y90,Re186,Re188,Sm153,Bi212,P32,Pb212和Lu放射性同位素;混杂调查性药剂,诸如thioplatin,PS-341,丁酸苯酯,ET-18-OCH3,或法尼基转移酶抑制剂(L-739749,L-744832;多酚,诸如槲皮素(quercetin),白藜芦醇
(resveratrol),piceatannol,没食子酸表没食子儿茶精(epigallocatechine gallate),茶黄素(theaflavin),黄烷醇(flavanol),原花青素(procyanidins),白桦脂酸(betulinic acid)及其衍生物;自噬抑制剂,诸如氯喹;δ-9-四氢大麻酚(tetrahydrocannabinol)(屈大麻酚(dronabinol), );β-拉帕醌(lapachone);拉帕醇(lapachol);秋水仙素
类(colchicines);白桦脂酸(betulinic acid);乙酰喜树碱,东莨菪亭(scopolectin),和
9-氨基喜树碱);鬼臼毒素(podophyllotoxin);替加氟(tegafur) 贝沙
罗汀(bexarotene) 二膦酸盐类(bisphosphonates),诸如氯膦酸盐
(clodronate)(例如 或 ),依替膦酸钠(etidronate)
NE-58095,唑来膦酸/唑来膦酸盐(zoledronic acid/zoledronate)
阿伦膦酸盐(alendronate) 帕米膦酸盐
(pamidronate) 替鲁膦酸盐(tiludronate) 或利塞膦酸盐
(risedronate) 和表皮生长因子受体(EGF-R);疫苗,诸如
疫苗;哌立福辛(perifosine),COX-2抑制剂(例如塞来考昔(celecoxib)
或艾托考昔(etoricoxib)),蛋白体抑制剂(例如PS341);CCI-779;tipifarnib(R11577);
orafenib,ABT510;Bcl-2抑制剂,诸如oblimersen sodium
pixantrone;法尼基转移酶抑制剂,诸如lonafarnib(SCH 6636,SARASARTM);及任何上述各项的药学可接受盐,酸或衍生物;以及两种或更多种上述各项的组合,诸如CHOP(环磷酰胺,多柔比星,长春新碱,和泼尼松龙联合疗法的缩写)和FOLFOX(奥沙利铂(ELOXATINTM)联合5-FU和亚叶酸的治疗方案的缩写)。
(ibuprofen),非诺洛芬(fenoprofen),酮洛芬(ketoprofen),氟比洛芬(flurbiprofen),奥沙普秦(oxaprozin)和荼普生(naproxen),乙酸衍生物诸如吲哚美辛(indomethacin),舒林酸(sulindac),依托度酸(etodolac),双氯芬酸(diclofenac),烯醇酸衍生物诸如吡罗昔康(piroxicam),美洛昔康(meloxicam),替诺昔康(tenoxicam),屈恶昔康(droxicam),氯诺昔康(lornoxicam)和伊索昔康(isoxicam),灭酸衍生物诸如甲灭酸(mefenamic acid),甲氯
芬那酸(meclofenamic acid),氟芬那酸(flufenamic acid),托芬那酸(tolfenamic
acid),和COX-2抑制剂诸如塞来考昔(celecoxib),依托考昔(etoricoxib),罗美考昔
(lumiracoxib),帕瑞考昔(parecoxib),罗非考昔(rofecoxib),罗非昔布(rofecoxib),和伐地考昔(valdecoxib)。NSAID可被指示用于诸如类风湿性关节炎,骨关节炎,炎性关节病,强直性脊柱炎,银屑病关节炎,莱特尔氏综合征,急性痛风,痛经,骨转移疼痛,头痛和偏头痛,手术后疼痛,由于炎症和组织损伤引起的轻至中度疼痛,发热,肠梗阻,和肾绞痛等疾患的症状缓解。
功能障碍性T细胞不太功能障碍性(例如增强对抗原识别的效应器应答)。在一些实施方案
中,PD-1结合拮抗剂是抗PD-1抗体。在一个特定方面,PD-1结合拮抗剂是本文所述MDX-
1106。在另一个特定方面,PD-1结合拮抗剂是本文所述Merck 3475。在另一个特定方面,PD-
1结合拮抗剂是本文所述CT-011。
强对抗原识别的效应器应答)。在一些实施方案中,PD-L1结合拮抗剂是抗PD-L1抗体。在一个具体方面,抗PD-L1抗体是本文所述YW243.55.S70。在另一个具体方面,抗PD-L1抗体是本文所述MDX-1105。在仍有另一个具体方面,抗PD-L1抗体是本文所述MPDL3280A。
结合片段,免疫粘附素,融合蛋白,寡肽和其它分子。在一个实施方案中,PD-L2结合拮抗剂降低由或经由T淋巴细胞上表达的细胞表面蛋白质介导的负面共刺激信号(经由PD-L2介导
信号传导),从而使得功能障碍性T细胞不太功能障碍性(例如增强对抗原识别的效应器应
答)。在一些实施方案中,PD-L2结合拮抗剂是免疫粘附素。
化的另一细胞的存在。在其它实施方案中,使用FACS来检测吞噬,例如通过检测细胞(其可以是可检测标记的,例如用与下述细胞不同的标记物)内可检测标记的另一细胞的存在。
的那些。在一些实施方案中,抗体功能是刺激效应T细胞增殖和/或细胞因子分泌。
合物,诸如防腐剂、抗凝剂、缓冲剂、固定剂、营养物、抗生素、等等。肿瘤样品的例子在本文中包括但不限于肿瘤活检、细针吸出物、支气管灌洗液、胸膜液(胸水)、痰液、尿液、手术标本、循环中的肿瘤细胞、血清、血浆、循环中的血浆蛋白质、腹水、衍生自肿瘤或展现出肿瘤样特性的原代细胞培养物或细胞系,以及保存的肿瘤样品,诸如福尔马林固定的、石蜡包埋的肿瘤样品或冷冻的肿瘤样品。
流行度)的信息用于告知治疗决定、包装插页上提供的信息、或营销/促销指导、等。
FcγR。在一些实施方案中,FcR是活化性FcγR。
所述疗法可包含c-met抗体(例如onartuzumab)在一些实施方案中,所述疗法可包含VEGF拮
抗剂(例如贝伐珠单抗)。在一些实施方案中,所述疗法可包含抗人OX40激动性抗体。所述信息或数据可以是任何形式,书面的、口头的或电子的。在一些实施方案中,使用所生成的信息或数据包括传达、呈现、报告、存储、发送、转移、供应、传输、递送、分发、或其组合。在一些实施方案中,传达、呈现、报告、存储、发送、转移、供应、传输、递送、分发、或其组合是由计算装置、分析单元或其组合实施的。在一些进一步的实施方案中,传达、呈现、报告、存储、发送、转移、供应、传输、分发、或其组合是由个人(例如实验室或医学专业人员)实施的。在一些实施方案中,所述信息或数据包括表达FcR的细胞的量或流行度与参照水平的比较。在一些实施方案中,所述信息或数据包括人效应细胞的量或流行度与参照水平的比较。在一些
实施方案中,所述信息或数据包括样品中存在或缺失人效应细胞或表达FcR的细胞的指示。
在一些实施方案中,所述信息或数据包括特定百分比的细胞中(例如高流行度)存在表达
FcR的细胞和/或人效应细胞的指示。在一些实施方案中,所述信息或数据包括患者适合或
不适合用包含抗人OX40激动性抗体的疗法治疗的指示。
在一些实施方案中,该抗人OX40抗体以小于或等于约0.5nM的亲和力结合人OX40。在一些实施方案中,结合亲和力是使用放射免疫测定法测定的。
0.2ug/ml的EC50。在一些实施方案中,对人OX40的结合具有约0.3ug/ml或更低的EC50。在一些实施方案中,对食蟹猴OX40的结合具有约1.5ug/ml的EC50。在一些实施方案中,对食蟹猴OX40的结合具有约1.4ug/ml的EC50。
抗体处理之前的增殖和/或细胞因子生成相比)。在一些实施方案中,该细胞因子是γ-干扰素。在一些实施方案中,该抗人OX40激动性抗体提高肿瘤内(浸润性)CD4+效应T细胞的数目(例如CD4+效应T细胞的总数,或例如CD45+细胞中CD4+细胞的百分比),例如与抗人OX40激
动性抗体处理之前肿瘤内(浸润性)CD4+T细胞的数目相比。在一些实施方案中,该抗人OX40激动性抗体提高表达γ-干扰素的肿瘤内(浸润性)CD4+效应T细胞的数目(例如表达γ-干
扰素的CD4+细胞的总数,或例如总CD4+细胞中表达γ-干扰素的CD4+细胞的百分比),例如
与抗人OX40激动性抗体处理之前表达γ-干扰素的肿瘤内(浸润性)CD4+T细胞的数目相比。
激动性抗体处理之前肿瘤内(浸润性)CD8+T效应细胞的数目相比。在一些实施方案中,该抗人OX40激动性抗体提高表达γ-干扰素的肿瘤内(浸润性)CD8+效应T细胞的数目(例如总
CD8+细胞中表达γ-干扰素的CD8+细胞的百分比),例如与抗人OX40激动性抗体处理之前表
达γ-干扰素的肿瘤内(浸润性)CD8+T细胞的数目相比。
中,该效应T细胞是CD4+效应T细胞。在一些实施方案中,该抗人OX40激动性抗体降低肿瘤内(浸润性)Treg的数目(例如Treg的总数或例如CD4+细胞中Fox3p+细胞的百分比)。
在一些实施方案中,该抗体缺少附着(直接或间接)Fc区的岩藻糖。例如,此类抗体中岩藻糖的量可以是1%至80%,1%至65%,5%至65%或20%至40%。在一些实施方案中,该Fc区包含两分型寡糖,例如其中附着至抗体Fc区的双触角寡糖是通过GlcNAc两分的。在一些实施
方案中,该抗体包含具有一处或多处提高ADCC的氨基酸替代的Fc区,例如Fc区位置298,
333,和/或334(EU残基编号方式)处的替代。
ADCC效应器功能。在一些实施方案中,该人效应细胞实施(能够实施)吞噬效应器功能。
动性抗体具有降低的活性(例如CD4+效应T细胞功能,例如增殖)。在一些实施方案中,包含变异IgG1 Fc多肽(其包含消除对人效应细胞的结合的突变,例如DANA突变)的抗人OX40激
动性抗体并不拥有实质性活性(例如CD4+效应T细胞功能,例如增殖)。
OX40,在一些实施方案中,以约1.5ug/ml的EC50结合食蟹猴OX40,在一些实施方案中,以约
1.4ug/ml的EC50结合食蟹猴OX40,(4)并不实质性结合大鼠OX40或小鼠OX40,(6)是消减性
抗人OX40抗体(例如消减表达人OX40的细胞),在一些实施方案中,该细胞是CD4+效应T细胞和/或Treg细胞,(7)增强CD4+效应T细胞功能,例如通过提高CD4+效应T细胞增殖和/或提高CD4+效应T细胞的γ-干扰素生成(例如与抗人OX40激动性抗体处理之前的增殖和/或细胞
因子生成相比),(8)增强记忆T细胞功能,例如通过提高记忆T细胞增殖和/或提高记忆细胞的细胞因子生成,(9)抑制Treg功能,例如通过降低效应T细胞功能(例如效应T细胞增殖和/或效应T细胞细胞因子分泌)的Treg遏制。在一些实施方案中,该效应T细胞是CD4+效应T细
胞,(10)提高表达OX40的靶细胞中的OX40信号转导(在一些实施方案中,OX40信号转导是通过监测NFkB下游信号传导检测的),(11)于40℃处理2周后是稳定的,(12)结合人效应细胞,例如结合由人效应细胞表达的FcγR,(13)包含变异IgG1Fc多肽(其包含消除对人效应细胞
的结合的突变,例如N297G)的抗人OX40激动性抗体相对于包含天然序列IgG1Fc部分的抗人
OX40激动性抗体具有降低的活性(例如CD4+效应T细胞功能,例如增殖),在一些实施方案
中,包含变异IgG1 Fc多肽(其包含消除对人效应细胞的结合的突变,例如N297G)的抗人
OX40激动性抗体并不拥有实质性活性(例如CD4+效应T细胞功能,例如增殖),(14)抗人OX40激动性抗体功能需要抗体交联(例如通过Fc受体结合)。
的HVR-L3,和包含氨基酸序列SEQ ID NO:3的HVR-H2。在又一个实施方案中,该抗体包含(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HVR-H1;(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:3的HVR-H2;和(c)
包含氨基酸序列SEQ ID NO:4的HVR-H3。
6的HVR-L2;和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的HVR-L3。
(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:3的HVR-H2,和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:4的HVR-
H3;和(b)VL域,该VL域包含至少一个,至少两个,或所有三个选自下述的VL HVR序列:(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:5的HVR-L1,(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的HVR-L2,和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的HVR-L3。
4的HVR-H3;(d)包含氨基酸序列SEQ ID NO:5的HVR-L1;(e)包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的HVR-L2;和(f)包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的HVR-L3。
3的HVR-H2。
(d)包含氨基酸序列SEQ ID NO:5的HVR-L1;(e)包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的HVR-L2;和
(f)包含氨基酸序列SEQ ID NO:26的HVR-L3。
3的HVR-H2。
(d)包含氨基酸序列SEQ ID NO:5的HVR-L1;(e)包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的HVR-L2;和
(f)包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的HVR-L3。
的HVR-L2;和(f)包含氨基酸序列SEQ ID NO:7,22,23,24,25,26,27,或28的HVR-L3。
在又一个实施方案中,该抗体包含(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:2,8或9的HVR-H1;(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:3,10,11,12,13或14的HVR-H2;和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:
4,15,或19的HVR-H3。
HVR-L2,和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:7,22,23,24,25,26,27,或28的HVR-L3。
序列SEQ ID NO:175的HVR-L3。在一些实施方案中,HVR-H2不是DMYPDAAAASYNQKFRE(SEQ ID NO:193)。在一些实施方案中,HVR-H3不是APRWAAAA(SEQ ID NO:194)。在一些实施方案中,HVR-L3不是QAAAAAAAT(SEQ ID NO:195)。
施方案中,该抗体包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:174的HVR-H3,包含氨基酸序列SEQ ID
NO:175的HVR-L3,和包含氨基酸序列SEQ ID NO:173的HVR-H2。在又一个实施方案中,该抗体包含(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:172的HVR-H1;(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:173的
HVR-H2;和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:174的HVR-H3。在一些实施方案中,HVR-H2不是
DMYPDAAAASYNQKFRE(SEQ ID NO:193)。在一些实施方案中,HVR-H3不是APRWAAAA(SEQ ID
NO:194)。在一些实施方案中,HVR-L3不是QAAAAAAAT(SEQ ID NO:195)。
HVR-L3。在一些实施方案中,HVR-L3不是QAAAAAAAT(SEQ ID NO:195)。
域,该VL域包含至少一个,至少两个,或所有三个选自下述的VL HVR序列:(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:5的HVR-L1,(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的HVR-L2,和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:175的HVR-L3。
的HVR-H3;(d)包含氨基酸序列SEQ ID NO:5的HVR-L1;(e)包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的
HVR-L2;和(f)包含氨基酸序列SEQ ID NO:175的HVR-L3。在一些实施方案中,HVR-H2不是
DMYPDAAAASYNQKFRE(SEQ ID NO:193)。在一些实施方案中,HVR-H3不是APRWAAAA(SEQ ID
NO:194)。在一些实施方案中,HVR-L3不是QAAAAAAAT(SEQ ID NO:195)。
序列SEQ ID NO:42的HVR-L3。
酸序列SEQ ID NO:33的HVR-H3和包含氨基酸序列SEQ ID NO:42的HVR-L3。在又一个实施方
案中,该抗体包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:33的HVR-H3,包含氨基酸序列SEQ ID NO:42
的HVR-L3,和包含氨基酸序列SEQ ID NO:30的HVR-H2。在又一个实施方案中,该抗体包含
(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:29的HVR-H1;(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:30的HVR-H2;
和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:33的HVR-H3。
H3;(d)包含氨基酸序列SEQ ID NO:37的HVR-L1;(e)包含氨基酸序列SEQ ID NO:39的HVR-
L2;和(f)包含氨基酸序列SEQ ID NO:42的HVR-L3。
序列SEQ ID NO:42的HVR-L3。
H3;(d)包含氨基酸序列SEQ ID NO:37的HVR-L1;(e)包含氨基酸序列SEQ ID NO:40的HVR-
L2;和(f)包含氨基酸序列SEQ ID NO:42的HVR-L3。
42,43,或44的HVR-L3。在又一个实施方案中,该抗体包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:33的HVR-H3,包含氨基酸序列SEQ ID NO:42,43,或44的HVR-L3,和包含氨基酸序列SEQ ID NO:
39,40或41的HVR-H2。在又一个实施方案中,该抗体包含(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:29的HVR-H1;(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:30,31,或32的HVR-H2;和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:33的HVR-H3。
33的HVR-H3;(d)包含氨基酸序列SEQ ID NO:37的HVR-L1;(e)包含氨基酸序列SEQ ID NO:
39,40或41的HVR-L2;和(f)包含氨基酸序列SEQ ID NO:42,43,或44的HVR-L3。
L3。在又一个实施方案中,该抗体包含包含氨基酸序列SEQ ID NO:33的HVR-H3,包含氨基酸序列SEQ ID NO:178的HVR-L3,和包含氨基酸序列SEQ ID NO:176的HVR-H2。在又一个实施
方案中,该抗体包含(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:29的HVR-H1;(b)包含氨基酸序列SEQ
ID NO:176的HVR-H2;和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:33的HVR-H3。
架,例如人免疫球蛋白框架或人共有框架。在另一个实施方案中,抗OX40抗体包含任何上述实施方案的HVR,且进一步包含包含图11A-I中所示FR序列的VH和/或VL。
96%,97%,98%,或99%同一性的VH序列相对于参照序列含有替代(例如保守替代),插入,或删除,但是包含该序列的抗人OX40激动性抗体保留结合OX40的能力。在某些实施方案中,在SEQ ID NO:56,58,60,62,64,66,68,70,72,74,76,78,80,82,84,86,88,90,92,94,96,
98,100,108,114,116,183,或184中替代,插入和/或删除了总共1至10个氨基酸。在某些实施方案中,替代,插入,或删除发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地,该抗人OX40激动性抗体包含SEQ ID NO:SEQ ID NO:56,58,60,62,64,66,68,70,72,74,76,78,80,82,84,
86,88,90,92,94,96,98,100,108,114,116,183,或184中的VH序列,包括该序列的翻译后修饰。在特定实施方案中,该VH包含一个,两个或三个选自下述的HVR:(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HVR-H1,(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:3的HVR-H2,和(c)包含氨基酸序列SEQ
ID NO:4的HVR-H3。
96%,97%,98%,或99%同一性的VL序列相对于参照序列含有替代(例如保守替代),插入,或删除,但是包含该序列的抗人OX40激动性抗体保留结合OX40的能力。在某些实施方案中,在SEQ ID NO:57,59,61,63,65,67,69,71,73,75,77,79,81,83,85,87,89,91,93,95,97,
99,101,109,115或117中替代,插入和/或删除了总共1至10个氨基酸。在某些实施方案中,替代,插入,或删除发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地,该抗人OX40激动性抗体包含SEQ ID NO:57,59,61,63,65,67,69,71,73,75,77,79,81,83,85,87,89,91,93,95,97,
99,101,109,115或117中的VL序列,包括该序列的翻译后修饰。在特定实施方案中,该VL包含一个,两个或三个选自下述的HVR:(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:5的HVR-L1;(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的HVR-L2;和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的HVR-L3。
98%,或99%同一性的VH序列相对于参照序列含有替代(例如保守替代),插入,或删除,但是包含该序列的抗人OX40激动性抗体保留结合OX40的能力。在某些实施方案中,在SEQ ID NO:56中替代,插入和/或删除了总共1至10个氨基酸。在某些实施方案中,替代,插入,或删除发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地,该抗人OX40激动性抗体包含SEQ ID NO:56中的VH序列,包括该序列的翻译后修饰。在特定实施方案中,该VH包含一个,两个或三个选自下述的HVR:(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HVR-H1,(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:3的HVR-H2,和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:4的HVR-H3。
97%,98%,或99%同一性的VL序列相对于参照序列含有替代(例如保守替代),插入,或删除,但是包含该序列的抗人OX40激动性抗体保留结合OX40的能力。在某些实施方案中,在
SEQ ID NO:57中替代,插入和/或删除了总共1至10个氨基酸。在某些实施方案中,替代,插入,或删除发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地,该抗人OX40激动性抗体包含SEQ ID NO:57中的VL序列,包括该序列的翻译后修饰。在特定实施方案中,该VL包含一个,两个或三个选自下述的HVR:(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:5的HVR-L1;(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的HVR-L2;和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的HVR-L3。
98%,或99%同一性的VH序列相对于参照序列含有替代(例如保守替代),插入,或删除,但是包含该序列的抗人OX40激动性抗体保留结合OX40的能力。在某些实施方案中,在SEQ ID NO:180中替代,插入和/或删除了总共1至10个氨基酸。在某些实施方案中,替代,插入,或删除发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地,该抗人OX40激动性抗体包含SEQ ID NO:
180中的VH序列,包括该序列的翻译后修饰。在特定实施方案中,该VH包含一个,两个或三个选自下述的HVR:(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HVR-H1,(b)包含氨基酸序列SEQ ID
NO:3的HVR-H2,和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:4的HVR-H3。
96%,97%,98%,或99%同一性的VL序列相对于参照序列含有替代(例如保守替代),插入,或删除,但是包含该序列的抗人OX40激动性抗体保留结合OX40的能力。在某些实施方案中,在SEQ ID NO:179中替代,插入和/或删除了总共1至10个氨基酸。在某些实施方案中,替代,插入,或删除发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地,该抗人OX40激动性抗体包含SEQ ID NO:179中的VL序列,包括该序列的翻译后修饰。在特定实施方案中,该VL包含一个,两个或三个选自下述的HVR:(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:5的HVR-L1;(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的HVR-L2;和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的HVR-L3。
98%,或99%同一性的VH序列相对于参照序列含有替代(例如保守替代),插入,或删除,但是包含该序列的抗人OX40激动性抗体保留结合OX40的能力。在某些实施方案中,在SEQ ID NO:94中替代,插入和/或删除了总共1至10个氨基酸。在某些实施方案中,替代,插入,或删除发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地,该抗人OX40激动性抗体包含SEQ ID NO:94中的VH序列,包括该序列的翻译后修饰。在特定实施方案中,该VH包含一个,两个或三个选自下述的HVR:(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HVR-H1,(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:3的HVR-H2,和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:4的HVR-H3。
97%,98%,或99%同一性的VL序列相对于参照序列含有替代(例如保守替代),插入,或删除,但是包含该序列的抗人OX40激动性抗体保留结合OX40的能力。在某些实施方案中,在
SEQ ID NO:95中替代,插入和/或删除了总共1至10个氨基酸。在某些实施方案中,替代,插入,或删除发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地,该抗人OX40激动性抗体包含SEQ ID NO:95中的VL序列,包括该序列的翻译后修饰。在特定实施方案中,该VL包含一个,两个或三个选自下述的HVR:(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:5的HVR-L1;(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的HVR-L2;和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:26的HVR-L3。
98%,或99%同一性的VH序列相对于参照序列含有替代(例如保守替代),插入,或删除,但是包含该序列的抗人OX40激动性抗体保留结合OX40的能力。在某些实施方案中,在SEQ ID NO:96中替代,插入和/或删除了总共1至10个氨基酸。在某些实施方案中,替代,插入,或删除发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地,该抗人OX40激动性抗体包含SEQ ID NO:96中的VH序列,包括该序列的翻译后修饰。在特定实施方案中,该VH包含一个,两个或三个选自下述的HVR:(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HVR-H1,(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:3的HVR-H2,和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:4的HVR-H3。
97%,98%,或99%同一性的VL序列相对于参照序列含有替代(例如保守替代),插入,或删除,但是包含该序列的抗人OX40激动性抗体保留结合OX40的能力。在某些实施方案中,在
SEQ ID NO:97中替代,插入和/或删除了总共1至10个氨基酸。在某些实施方案中,替代,插入,或删除发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地,该抗人OX40激动性抗体包含SEQ ID NO:97中的VL序列,包括该序列的翻译后修饰。在特定实施方案中,该VL包含一个,两个或三个选自下述的HVR:(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:5的HVR-L1;(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的HVR-L2;和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:27的HVR-L3。
94%,95%,96%,97%,98%,99%,或100%序列同一性的重链可变域(VH)序列。在某些实施方案中,具有至少90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,或99%同一性的VH序列相对于参照序列含有替代(例如保守替代),插入,或删除,但是包含该序列的抗人
OX40激动性抗体保留结合OX40的能力。在某些实施方案中,在SEQ ID NO:118,120,122,
124,126,128,130,132,134,136,138,140,142,144,146,148中替代,插入和/或删除了总共
1至10个氨基酸。在某些实施方案中,替代,插入,或删除发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地,该抗人OX40激动性抗体包含SEQ ID NO:118,120,122,124,126,128,130,132,
134,136,138,140,142,144,146,148中的VH序列,包括该序列的翻译后修饰。在特定实施方案中,该VH包含一个,两个或三个选自下述的HVR:(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:29的HVR-H1,(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:30的HVR-H2,和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:33的
HVR-H3。
91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,99%,或100%序列同一性的轻链可变域(VL)。在某些实施方案中,具有至少90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,或
99%同一性的VL序列相对于参照序列含有替代(例如保守替代),插入,或删除,但是包含该序列的抗人OX40激动性抗体保留结合OX40的能力。在某些实施方案中,在SEQ ID NO:119,
121,123,125,127,129,131,133,135,137,139,141,143,145,147,149中替代,插入和/或删除了总共1至10个氨基酸。在某些实施方案中,替代,插入,或删除发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地,该抗人OX40激动性抗体包含SEQ ID NO:119,121,123,125,127,129,
131,133,135,137,139,141,143,145,147,149中的VL序列,包括该序列的翻译后修饰。在特定实施方案中,该VL包含一个,两个或三个选自下述的HVR:(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:
37的HVR-L1;(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:39的HVR-L2;和(c)包含氨基酸序列SEQ ID
NO:42的HVR-L3。
一个实施方案中,该抗体包含分别在SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:63中的VH和VL序列,包括
那些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中,该抗体包含分别在SEQ ID NO:64和SEQ ID
NO:65中的VH和VL序列,包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中,该抗体包含分别在SEQ ID NO:66和SEQ ID NO:67中的VH和VL序列,包括那些序列的翻译后修饰。在一个实
施方案中,该抗体包含分别在SEQ ID NO:68和SEQ ID NO:69中的VH和VL序列,包括那些序
列的翻译后修饰。在一个实施方案中,该抗体包含分别在SEQ ID NO:70和SEQ ID NO:71中
的VH和VL序列,包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中,该抗体包含分别在SEQ ID NO:72和SEQ ID NO:73中的VH和VL序列,包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中,该抗体包含分别在SEQ ID NO:74和SEQ ID NO:75中的VH和VL序列,包括那些序列的翻译后
修饰。在一个实施方案中,该抗体包含分别在SEQ ID NO:76和SEQ ID NO:77中的VH和VL序
列,包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中,该抗体包含分别在SEQ ID NO:78和
SEQ ID NO:79中的VH和VL序列,包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中,该抗体包含分别在SEQ ID NO:80和SEQ ID NO:81中的VH和VL序列,包括那些序列的翻译后修饰。在
一个实施方案中,该抗体包含分别在SEQ ID NO:82和SEQ ID NO:83中的VH和VL序列,包括
那些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中,该抗体包含分别在SEQ ID NO:84和SEQ ID
NO:85中的VH和VL序列,包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中,该抗体包含分别在SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:87中的VH和VL序列,包括那些序列的翻译后修饰。在一个实
施方案中,该抗体包含分别在SEQ ID NO:88和SEQ ID NO:89中的VH和VL序列,包括那些序
列的翻译后修饰。在一个实施方案中,该抗体包含分别在SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:91中
的VH和VL序列,包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中,该抗体包含分别在SEQ ID NO:92和SEQ ID NO:93中的VH和VL序列,包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中,该抗体包含分别在SEQ ID NO:94和SEQ ID NO:95中的VH和VL序列,包括那些序列的翻译后
修饰。在一个实施方案中,该抗体包含分别在SEQ ID NO:96和SEQ ID NO:97中的VH和VL序
列,包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中,该抗体包含分别在SEQ ID NO:98和
SEQ ID NO:99中的VH和VL序列,包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中,该抗体包含分别在SEQ ID NO:100和SEQ ID NO:101中的VH和VL序列,包括那些序列的翻译后修饰。
在一个实施方案中,该抗体包含分别在SEQ ID NO:108和SEQ ID NO:109中的VH和VL序列,
包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中,该抗体包含分别在SEQ ID NO:114和SEQ ID NO:115中的VH和VL序列,包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中,该抗体包含分别在SEQ ID NO:116和SEQ ID NO:117中的VH和VL序列,包括那些序列的翻译后修饰。在
一个实施方案中,该抗体包含分别在SEQ ID NO:183和SEQ ID NO:65中的VH和VL序列,包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中,该抗体包含分别在SEQ ID NO:184和SEQ ID
NO:69中的VH和VL序列,包括那些序列的翻译后修饰。
120和SEQ ID NO:121中的VH和VL序列,包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中,该抗体包含分别在SEQ ID NO:122和SEQ ID NO:123中的VH和VL序列,包括那些序列的翻译后
修饰。在一个实施方案中,该抗体包含分别在SEQ ID NO:124和SEQ ID NO:125中的VH和VL
序列,包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中,该抗体包含分别在SEQ ID NO:126和SEQ ID NO:127中的VH和VL序列,包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中,该抗体包含分别在SEQ ID NO:128和SEQ ID NO:129中的VH和VL序列,包括那些序列的翻译后修
饰。在一个实施方案中,该抗体包含分别SEQ ID NO:130和SEQ ID NO:131在中的VH和VL序
列,包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中,该抗体包含分别在SEQ ID NO:132和SEQ ID NO:133中的VH和VL序列,包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中,该抗体包含分别在SEQ ID NO:134和SEQ ID NO:135中的VH和VL序列,包括那些序列的翻译后修
饰。在一个实施方案中,该抗体包含分别在SEQ ID NO:136和SEQ ID NO:137中的VH和VL序
列,包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中,该抗体包含分别在SEQ ID NO:138和SEQ ID NO:139中的VH和VL序列,包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中,该抗体包含分别在SEQ ID NO:140和SEQ ID NO:141中的VH和VL序列,包括那些序列的翻译后修
饰。在一个实施方案中,该抗体包含分别SEQ ID NO:142和SEQ ID NO:143在中的VH和VL序
列,包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中,该抗体包含分别在SEQ ID NO:144和SEQ ID NO:145中的VH和VL序列,包括那些序列的翻译后修饰。在一个实施方案中,该抗体包含分别在SEQ ID NO:146和SEQ ID NO:147中的VH和VL序列,包括那些序列的翻译后修
饰。
的抗原来测量Fab对抗原的溶液结合亲和力(见例如Chen等,J.Mol.Biol.293:865-881
(1999))。为了建立测定法的条件,将 多孔板(Thermo Scientific)用
50mM碳酸钠(pH 9.6)中的5μg/ml捕捉用抗Fab抗体(Cappel Labs)包被过夜,随后用PBS中
的2%(w/v)牛血清清蛋白于室温(约23℃)封闭2-5小时。在非吸附板(Nunc#269620)中,将
100pM或26pM[125I]-抗原与连续稀释的感兴趣Fab(例如与Presta等,Cancer Res.57:4593-
4599(1997)中抗VEGF抗体,Fab-12的评估一致)混合。然后将感兴趣的Fab温育过夜;然而,温育可持续更长时间(例如约65小时)以确保达到平衡。此后,将混合物转移至捕捉板,于室温温育(例如1小时)。然后除去溶液,并用PBS中的0.1%聚山梨酯20 洗板8
次。平板干燥后,加入150μl/孔闪烁液(MICROSCINT-20TM;Packard),然后在TOPCOUNTTM伽马计数器(Packard)上对平板计数10分钟。选择各Fab给出小于或等于最大结合之20%的浓度
用于竞争性结合测定法。
(BIAcore,Inc.,Piscataway,NJ)实施测定法。在一个实施方案中,依
照供应商的用法说明书用盐酸N-乙基-N’-(3-二甲氨基丙基)-碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥
珀酰亚胺(NHS)活化羧甲基化右旋糖苷生物传感器芯片(CM5,BIACORE,Inc.)。将抗原用
10mM乙酸钠pH 4.8稀释至5μg/ml(约0.2μM),然后以5μl/分钟的流速注射以获得约10个响应单位(RU)的偶联蛋白质。注入抗原后,注入1M乙醇胺以封闭未反应基团。为了进行动力学测量,于25℃以约25μl/分钟的流速注入在含0.05%聚山梨酯20(TWEEN-20TM)表面活性剂的PBS(PBST)中两倍连续稀释的Fab(0.78nM至500nM)。使用简单一对一朗格缪尔(Langmuir)
结合模型( Evaluation Software version 3.2)通过同时拟合结合和解离传
感图计算结合速率(kon)和解离速率(koff)。平衡解离常数(Kd)以比率koff/kon计算。见例如Chen等,J.Mol.Biol.293:865-881(1999)。如果根据上文表面等离振子共振测定法,结合速率超过106M-1S-1,那么结合速率可使用荧光淬灭技术来测定,即根据分光计诸如配备了断流装置的分光光度计(Aviv Instruments)或8000系列SLM-AMINCOTM分光光度计
(ThermoSpectronic)中用搅拌比色杯的测量,在存在浓度渐增的抗原的情况中,测量PBS
pH 7.2中20nM抗抗原抗体(Fab形式)于25℃的荧光发射强度(激发=295nm;发射=340nm,
16nm带通)的升高或降低。
(Springer-Verlag,New York),第269-315页(1994);还可见WO 93/16185;及美国专利
No.5,571,894和5,587,458。关于包含补救受体结合表位残基,并且具有延长的体内半衰期的Fab和F(ab’)2片段的讨论,见美国专利No.5,869,046。
Nat.Med.9:129-134(2003)。
Queen等,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 86:10029-10033(1989);美国专利No.5,821,337,7,
527,791,6,982,321和7,087,409;Kashmiri等,Methods 36∶25-34(2005)(描述了特异性决定区(SDR)嫁接);Padlan,Mol.Immunol.28∶489-498(1991)(描述了“重修表面”);Dall’Acqua等,Methods 36:43-60(2005)(描述了“FR改组”);及Osbourn等,Methods 36:61-68
(2005)和Klimka等,Br.J.Cancer,83∶252-260(2000)(描述了FR改组的“引导选择”方法)。
(1992);及Presta等,J.Immunol.,151:2623(1993));人成熟的(体细胞突变的)框架区或人种系框架区(见例如Almagro和Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008));和通过筛
选FR文库衍生的框架区(见例如Baca等,J.Biol.Chem.272:10678-10684(1997)及Rosok等,
J.Biol.Chem.271:22611-22618(1996))。
Curr.Opin.Pharmacol.5:368-74(2001)及Lonberg,Curr.Opin.Immunol.20:450-459
(2008)。
入动物的染色体中。在此类转基因小鼠中,一般已经将内源免疫球蛋白基因座灭活。关于自转基因动物获得人抗体的方法的综述,见Lonberg,Nat.Biotech.23:1117-1125(2005)。还
可见例如美国专利No.6,075,181和6,150,584,其描述了XENOMOUSETM技术;美国专利No.5,
770,429,其描述了 技术;美国专利No.7,041,870,其描述了K-M 技
术,和美国专利申请公开文本No.US 2007/0061900,其描述了 技术)。
可以例如通过与不同人恒定区组合进一步修饰来自由此类动物生成的完整抗体的人可变
区。
Brodeur等,Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications,第51-63
页(Marcel Dekker,Inc.,New York,1987);及Boerner等,J.Immunol.,147:86(1991))。经由人B细胞杂交瘤技术生成的人抗体也记载于Li等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,103:3557-
3562(2006)。其它方法包括那些例如记载于美国专利No.7,189,826(其描述了自杂交瘤细
胞系生成单克隆人IgM抗体)和Ni,Xiandai Mianyixue,26(4):265-268(2006)(其描述了
人-人杂交瘤)的。人杂交瘤技术(Trioma技术)也记载于Vollmers和Brandlein,Histology
and Histopathology,20(3):927-937(2005)及Vollmers和Brandlein,Methods and
Findings in Experimental and Clinical Pharmacology,27(3):185-91(2005)。
法是本领域中已知的。此类方法综述于例如Hoogenboom等,于Methods in Molecular
Biology 178:1-37(O’Brien等编,Human Press,Totowa,NJ,2001),并且进一步记载于例如McCafferty等,Nature 348:552-554;Clackson等,Nature 352:624-628(1991);Marks等,
J.Mol.Biol.222:581-597(1992);Marks和Bradbury,于Methods in Molecular Biology
248:161-175(Lo编,Human Press,Totowa,NJ,2003);Sidhu等,J.Mol.Biol.338(2):299-
310(2004);Lee等,J.Mol.Biol.340(5):1073-1093(2004);Fellouse,
Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101(34):12467-12472(2004);及Lee等,J.Immunol.Methods
284(1-2):119-132(2004)。
或以Fab片段展示抗体片段。来自经免疫的来源的文库提供针对免疫原的高亲和力抗体,而不需要构建杂交瘤。或者,可以(例如自人)克隆天然全集以在没有任何免疫的情况中提供
针对一大批非自身和还有自身抗原的抗体的单一来源,如由Griffiths等,EMBO J,12:725-
734(1993)描述的。最后,也可以通过自干细胞克隆未重排的V基因区段,并使用含有随机序列的PCR引物编码高度可变的CDR3区并在体外实现重排来合成生成未免疫文库,如由
Hoogenboom和Winter,J.Mol.Biol.,227:381-388(1992)所描述的。描述人抗体噬菌体文库
的专利公开文本包括例如:美国专利No.5,750,373,和美国专利公开文本No.2005/
0079574,2005/0119455,2005/0266000,2007/0117126,2007/0160598,2007/0237764,
2007/0292936和2009/0002360。
胞。双特异性抗体可以以全长抗体或抗体片段制备。
731,168)。也可以通过用于生成抗体Fc-异二聚体分子的工程化静电操纵效应(WO 2009/
089004A1);交联两个或更多个抗体或片段(见例如美国专利No.4,676,980,及Brennan等,
Science,229:81(1985));使用亮氨酸拉链来生成双特异性抗体(见例如Kostelny等,
J.Immunol.,148(5):1547-1553(1992));使用用于生成双特异性抗体片段的“双抗体”技术(见例如Hollinger等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90∶6444-6448(1993));及使用单链Fv
(sFv)二聚体(见例如Gruber等,J.Immunol.,152:5368(1994));及如例如Tutt等,
J.Immunol.147:60(1991)中所描述的,制备三特异性抗体来生成多特异性抗体。
基酸序列内的残基的删除,和/或插入和/或替代。可以进行删除,插入,和替代的任何组合以得到最终的构建体,只要最终的构建体拥有期望的特征,例如,抗原结合。
(例如改善)(例如升高的亲和力,降低的免疫原性)和/或会基本上保留亲本抗体的某些生
物学特性。例示性的替代变体是亲和力成熟的抗体,其可以例如使用基于噬菌体展示的亲
和力成熟技术诸如本文中所描述的那些技术来方便地生成。简言之,将一个或多个HVR残基突变,并将变体抗体在噬菌体上展示,并对其筛选特定的生物学活性(例如结合亲和力)。
得的变体VH或VL测试结合亲和力。通过次级文库的构建和再选择进行的亲和力成熟已经记
载于例如Hoogenboom等,于Methods in Molecular Biology 178:1-37(O’Brien等编,
Human Press,Totowa,NJ,(2001))。在亲和力成熟的一些实施方案中,通过多种方法(例如,易错PCR,链改组,或寡核苷酸指导的诱变)将多样性引入为成熟选择的可变基因。然后,创建次级文库。然后,筛选文库以鉴定具有期望的亲和力的任何抗体变体。另一种引入多样性的方法牵涉HVR指导的方法,其中将几个HVR残基(例如,一次4-6个残基)随机化。可以例如使用丙氨酸扫描诱变或建模来特异性鉴定牵涉抗原结合的HVR残基。特别地,经常靶向CDR-H3和CDR-L3。
响。可以在对初始替代表明功能敏感性的氨基酸位置引入进一步的替代。或者/另外,利用抗原-抗体复合物的晶体结构来鉴定抗体与抗原间的接触点。作为替代的候选,可以靶向或消除此类接触残基和邻近残基。可以筛选变体以确定它们是否含有期望的特性。
甲硫氨酰基残基的抗体。抗体分子的其它插入变体包括抗体的N或C端与酶(例如对于
ADEPT)或延长抗体的血清半衰期的多肽的融合物。
基化位点的添加或删除。
见例如Wright等,TIBTECH 15:26-32(1997)。寡糖可以包括各种碳水化合物,例如,甘露糖,N-乙酰葡糖胺(GlcNAc),半乳糖,和唾液酸,以及附着于双触角寡糖结构“主干”中的GlcNAc的岩藻糖。在一些实施方案中,可以对本发明抗体中的寡糖进行修饰以创建具有某些改善
的特性的抗体变体。
65%或20%至40%。通过相对于附着于Asn297的所有糖结构(例如,复合的,杂合的和高甘露糖的结构)的总和,计算Asn297处糖链内岩藻糖的平均量来测定岩藻糖量,如通过MALDI-TOF质谱术测量的,例如如记载于WO 2008/077546的。Asn297指位于Fc区中的约第297位(Fc区残基的Eu编号方式)的天冬酰胺残基;然而,Asn297也可以由于抗体中的微小序列变异而位于第297位上游或下游约±3个氨基酸,即在第294位和第300位之间。此类岩藻糖基化变
体可以具有改善的ADCC功能。见例如美国专利公开文本No.US 2003/0157108(Presta,L.);
US 2004/0093621(Kyowa Hakko Kogyo Co.,Ltd)。涉及“脱岩藻糖基化的”或“岩藻糖缺乏的”抗体变体的出版物的例子包括:US 2003/0157108;WO 2000/61739;WO 2001/29246;US
2003/0115614;US 2002/0164328;US 2004/0093621;US 2004/0132140;US 2004/0110704;
US 2004/0110282;US 2004/0109865;WO 2003/085119;WO 2003/084570;WO 2005/035586;
WO 2005/035778;WO2005/053742;WO2002/031140;Okazaki等,J.Mol.Biol.336:1239-1249(2004);Yamane-Ohnuki等,Biotech.Bioeng.87:614(2004)。能够生成脱岩藻糖基化抗体的细胞系的例子包括蛋白质岩藻糖基化缺陷的Lec13CHO细胞(Ripka等 ,
Arch.Biochem.Biophys.249:533-545(1986);美国专利申请No US 2003/0157108A1,
Presta,L;及WO 2004/056312A1,Adams等,尤其在实施例11),和敲除细胞系,诸如α-1,6-岩藻糖基转移酶基因FUT8敲除CHO细胞(见例如Yamane-Ohnuki等,Biotech.Bioeng.87:614
(2004);Kanda,Y.等,Biotechnol.Bioeng.,94(4):680-688(2006);及WO2003/085107)。
此类抗体变体的例子记载于例如WO 2003/011878(Jean-Mairet等);美国专利No.6,602,
684(Umana等);及US 2005/0123546(Umana等)。还提供了在附着于Fc区的寡糖中具有至少
一个半乳糖残基的抗体变体。此类抗体变体可以具有改善的CDC功能。此类抗体变体记载于例如WO 1997/30087(Patel等);WO 1998/58964(Raju,S.);及WO 1999/22764(Raju,S.)。
效应器功能(诸如补体和ADCC)是不必要的或有害的。可以进行体外和/或体内细胞毒性测
定法以确认CDC和/或ADCC活性的降低/消减。例如,可以进行Fc受体(FcR)结合测定法以确
保抗体缺乏FcγR结合(因此有可能缺乏ADCC活性),但是保留FcRn结合能力。介导ADCC的主要细胞NK细胞仅表达FcγRIII,而单核细胞表达FcγRI,FcγRII和FcγRIII。在Ravetch和Kinet,Annu.Rev.Immunol.9:457-492(1991)的第464页上的表3中汇总了造血细胞上的FcR
表达。评估感兴趣分子的ADCC活性的体外测定法的非限制性例子记载于美国专利No.5,
500,362(见例如Hellstrom,I.等,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 83:7059-7063(1986))和
Hellstrom,I等,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 82:1499-1502(1985);5,821,337(见
Bruggemann,M.等,J.Exp.Med.166:1351-1361(1987))。或者,可以采用非放射性测定方法
(见例如用于流式细胞术的ACTITM非放射性细胞毒性测定法(CellTechnology,
Inc.Mountain View,CA;和CytoTox 非放射性细胞毒性测定法(Promega,Madison,
WI))。对于此类测定法有用的效应细胞包括外周血单个核细胞(PBMC)和天然杀伤(NK)细
胞。或者/另外,可以在体内评估感兴趣分子的ADCC活性,例如在动物模型中,诸如披露于Clynes等,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA95:652-656(1998)的。也可以实施C1q结合测定法以
确认抗体不能结合C1q,并且因此缺乏CDC活性。见例如WO 2006/029879和WO 2005/100402
中的C1q和C3c结合ELISA。为了评估补体激活,可以实施CDC测定法(见例如Gazzano-
Santoro等,J.Immunol.Methods 202:163(1996);Cragg,M.S.等,Blood 101:1045-1052
(2003);及Cragg,M.S.和M.J.Glennie,Blood 103:2738-2743(2004))。也可以使用本领域
中已知的方法来实施FcRn结合和体内清除/半衰期测定(见例如Petkova,S.B.等,Int’
l.Immunol.18(12):1759-1769(2006))。
置265,269,270,297和327中的两处或更多处具有替代的Fc突变体,包括残基265和297替代成丙氨酸的所谓的“DANA”Fc突变体(美国专利No.7,332,581)。
J.Immunol.117:587(1976)及Kim等,J.Immunol.24:249(1994))。那些抗体包含其中具有改
善Fc区对FcRn结合的一处或多处替代的Fc区。此类Fc变体包括那些在Fc区残基238,256,
265,272,286,303,305,307,311,312,317,340,356,360,362,376,378,380,382,413,424或
434中的一处或多处具有替代,例如,Fc区残基434的替代的(美国专利No.7,371,826)。
位于抗体的可接近位点,并且可以用于将抗体与其它模块,诸如药物模块或接头-药物模块缀合,以创建免疫缀合物,如本文中进一步描述的。在某些实施方案中,可以用半胱氨酸替代下列残基之任一个或多个:轻链的V205(Kabat编号方式);重链的A118(EU编号方式);和重链Fc区的S400(EU编号方式)。可以如例如美国专利No.7,521,541所述生成经半胱氨酸工
程化改造的抗体。
水溶性聚合物的非限制性例子包括但不限于聚乙二醇(PEG),乙二醇/丙二醇共聚物,羧甲
基纤维素,右旋糖苷,聚乙烯醇,聚乙烯吡咯烷酮,聚-1,3-二氧戊环,聚-1,3,6-三口恶烷,乙烯/马来酸酐共聚物,聚氨基酸(均聚物或随机共聚物),和右旋糖苷或聚(n-乙烯吡咯烷
酮)聚乙二醇,丙二醇均聚物,环氧丙烷/环氧乙烷共聚物,聚氧乙烯化多元醇(例如甘油),聚乙烯醇及其混合物。由于其在水中的稳定性,聚乙二醇丙醛在生产中可能具有优势。聚合物可以是任何分子量,而且可以是分支的或不分支的。附着到抗体上的聚合物数目可以变
化,而且如果附着了超过一个聚合物,那么它们可以是相同或不同的分子。一般而言,可根据下列考虑来确定用于衍生化的聚合物的数目和/或类型,包括但不限于抗体要改进的具
体特性或功能,抗体衍生物是否将用于指定条件下的治疗等。
Proc.Natl.Acad.Sci.USA 102:11600-11605(2005))。辐射可以是任何波长的,并且包括但不限于对普通细胞没有损害,但是将非蛋白质性质模块加热至抗体-非蛋白质性质模块附
近的细胞被杀死的温度的波长。
链)。在又一个实施方案中,提供了包含此类核酸的一种或多种载体(例如,表达载体)。在又一个实施方案中,提供了包含此类核酸的宿主细胞。在一个此类实施方案中,宿主细胞包含(例如,已经用下列载体转化):(1)包含核酸的载体,所述核酸编码包含抗体的VL的氨基酸序列和包含抗体的VH的氨基酸序列,或(2)第一载体和第二载体,所述第一载体包含编码包含抗体的VL的氨基酸序列的核酸,所述第二载体包含编码包含抗体的VH的氨基酸序列的核
酸。在一个实施方案中,宿主细胞是真核的,例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或淋巴样细胞(例如,Y0,NS0,Sp20细胞)。在一个实施方案中,提供了生成抗OX40抗体的方法,其中该方法包括在适合于表达抗体的条件下培养包含编码抗体的核酸的宿主细胞,如上文提供的,并且
任选地,自宿主细胞(或宿主细胞培养液)回收抗体。
Charlton,Methods in Molecular Biology,第248卷(B.K.C.Lo编,Humana Press,Totowa,
NJ,2003),第245-254页,其描述了抗体片段在大肠杆菌(E.coli.)中的表达)。表达后,可以将抗体在可溶性级分中自细菌细胞团糊分离,并可以进一步纯化。
Nat.Biotech.24:210-215(2006)。
TM
PLANTIBODIES 技术)。
(COS-7);人胚肾系(293或293细胞,如记载于例如Graham等,J.Gen Virol.36:59(1977)
的);幼年仓鼠肾细胞(BHK);小鼠塞托利(sertoli)细胞(TM4细胞,如记载于例如Mather,
Biol.Reprod.23:243-251(1980)的);猴肾细胞(CV1);非洲绿猴肾细胞(VERO-76);人宫颈癌细胞(HELA);犬肾细胞(MDCK;牛鼠(buffalo rat)肝细胞(BRL 3A);人肺细胞(W138);人肝细胞(Hep G2);小鼠乳房肿瘤(MMT 060562);TRI细胞,如记载于例如Mather等,Annals N.Y.Acad.Sci.383:44-68(1982)的;MRC 5细胞;和FS4细胞。其它有用的哺乳动物宿主细胞系包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,包括DHFR-CHO细胞(Urlaub等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA
77:4216(1980));和骨髓瘤细胞系诸如Y0,NS0和Sp2/0。关于适合于抗体生成的某些哺乳动物宿主细胞系的综述,见例如Yazaki和Wu,Methods in Molecular Biology,第248卷
(B.K.C.Lo编,Humana Press,Totowa,NJ),第255-268页(2003)。
标记OX40抗体的竞争反应混合物。将表达OX40的细胞(例如经人OX40稳定转染的BT474细
胞)添加至反应混合物。温育后,清洗细胞将游离的碘化OX40抗体与结合至细胞的OX40抗体分开。测定结合的碘化OX40抗体的水平,例如通过对与细胞联合的放射性计数来进行,并使用标准方法测定结合亲和力。在另一个实施方案中,使用流式细胞术评估OX40抗体结合表
面表达的OX40(例如在T细胞子集上)的能力。获得外周白血球(例如来自人,食蟹猴,大鼠或小鼠),并用血清封闭细胞。以连续稀释液添加经标记的OX40抗体,还对T细胞染色以鉴定T细胞子集(使用本领域已知方法)。样品温育和清洗后,使用流式细胞仪分选细胞,并使用本领域公知方法分析数据。在另一个实施方案中,可使用表面等离振子共振来分析OX40结合。
实施例中例示了一种例示性表面等离振子共振方法。
所结合表位相同的表位(例如线性或构象表位)。用于定位抗体所结合表位的详细例示性方
法见Morris(1996)“Epitope Mapping Protocols”,Methods in Molecular Biology
vol.66(Humana Press,Totowa,NJ)。实施例中例示了一种竞争测定法。
力)的溶液中温育固定化OX40。第二抗体可存在于杂交瘤上清液中。作为对照,在包含第一经标记抗体但不包含第二未标记抗体的溶液中温育固定化OX40。在允许第一抗体结合OX40
的条件下温育后,除去过量的未结合抗体,并测量与固定化OX40联合的标记物的量。如果测试样品中与固定化OX40联合的标记物的量与对照样品相比实质性降低,那么这指示第二抗
体与第一抗体竞争对OX40的结合。参见Harlow and Lane(1988)Antibodies:A Laboratory Manual ch.14(Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,NY)。
NFkB介导的转录),消减表达人OX40的细胞(例如T细胞),通过ADCC和/或吞噬消减表达人
OX40的细胞,增强T效应细胞功能(例如CD4+效应T细胞)(例如通过提高效应T细胞增殖和/
或提高效应T细胞的细胞因子生成(例如γ干扰素)),增强记忆T细胞功能(例如CD4+记忆T
细胞)(例如通过提高记忆T细胞增殖和/或提高记忆T细胞的细胞因子生成(例如γ干扰
素)),抑制调节T细胞功能(例如通过降低效应T细胞功能(例如CD4+效应T细胞功能))的
Treg遏制),结合人效应细胞。还提供在体内和/或在体外具有此类生物学活性的抗体。
人全血分离)。可以使用本领域已知的方法自PBMC分离记忆T细胞(例如CD4+记忆T细胞)或
效应T细胞(例如CD4+Teff细胞)。例如,可以使用Miltenyi CD4+记忆T细胞分离试剂盒或
Miltenyi幼稚CD4+T细胞分离试剂盒。在抗原呈递细胞(例如经过照射的表达CD32和CD80的
L细胞)存在下培养分离的T细胞,并通过在OX40激动性抗体存在或缺失下添加抗CD3抗体来
活化。可以使用本领域公知的方法来测量激动性OX40抗体对T细胞增殖的影响。例如,可以使用CellTiter Glo试剂盒(Promega),并在多标记物读数仪(Perkin Elmer)上读取结果。
还可以通过分析由T细胞生成的细胞因子来测定激动性OX40抗体对T细胞功能的影响。在一
个实施方案中,测定CD4+T细胞的干扰素γ生成,例如通过测量细胞培养物上清液中的干扰素γ。用于测量干扰素γ的方法是本领域公知的。
CFSE),并用不同试剂标记纯化后的Treg细胞。将经过照射的抗原呈递细胞(例如表达CD32
和CD80的L细胞)与经过标记的纯化后的幼稚CD4+T细胞和纯化后的Treg共培养。使用抗CD3
抗体活化共培养物,并在激动性OX40抗体存在或缺失下测试。合适时间(例如共培养6天)
后,使用FACS分析通过降低的标记物染色(例如降低的CFSE标记物染色)中的染料稀释来跟
踪CD4+幼稚T细胞增殖的水平。
酶)的NFkB启动子)的转基因细胞。对细胞添加OX40激动性抗体导致NFkB转录升高,这使用
针对报告基因的测定法来检测。
或缺失下将表达OX40的细胞添加至单核细胞衍生的巨噬细胞或U937细胞。将细胞培养合适
时间段后,通过检查针对1)巨噬细胞或U937细胞和2)表达OX40的细胞的标志物双重染色的
细胞的百分比,并将此除以显示表达OX40的细胞的标志物(例如GFP)的细胞的总数来测定
吞噬百分比。可以通过流式细胞术来进行分析。在另一个实施方案中,可以通过荧光显微术分析来进行分析。
OX40的细胞上的OX40水平。将细胞用可检测标记的抗OX40抗体(例如PE标记的)染色,然后
使用流式细胞术测定荧光水平,并以中值荧光强度(MFI)呈现结果。在另一个实施方案中,可以通过CellTiter Glo测定法试剂盒来分析ADCC,而且可以通过化学发光来测定细胞存
活力/细胞毒性。
白表达纯化后的人Fcγ受体。如下测定抗体对那些人Fcγ受体的结合亲和力。对于低亲和
力受体,即FcγRIIA(CD32A),FcγRIIB(CD32B),和FcγRIIIA(CD16)的两种同种异型,F-
158和V-158,可以通过用山羊抗人卡帕链的F(ab’)2片段(ICN Biomedical;Irvine,CA)交联(以近似摩尔比1:3抗体:交联用F(ab’)2)作为多聚体测试抗体。将板用抗GST抗体
(Genentech)包被,并用牛血清清蛋白(BSA)封闭。用含有0.05% Tween-20的磷酸盐缓冲盐水(PBS)及ELx405TM洗板仪(Biotek Instruments;Winooski,VT)清洗后,以25ng/孔将Fcγ受体添加至板,并于室温温育1小时。清洗板后,作为多聚体复合物添加测试抗体的系列稀释液,并将板于室温温育2小时。清洗板以去除未结合的抗体后,用辣根过氧化物酶(HRP)缀合的山羊抗人F(ab’)2的F(ab’)2片段(Jackson ImmunoResearch Laboratories;West
Grove,PA)检测结合至Fcγ受体的抗体,接着添加底物,四甲基联苯胺(TMB)(Kirkegaard and Perry Laboratories;Gaithersburg,MD)。取决于所测试的Fcγ受体,将板于室温温育
5-20分钟以容许显色。用1M H3PO4终止反应,并用微量板读数仪( 190,
Molecular Devices;Sunnyvale,CA)测量450nm处的吸光度。通过将来自一式两份抗体稀释液的均值吸光值针对抗体浓度绘图,生成剂量-响应结合曲线。使用SoftMax Pro
(Molecular Devices)用四参数方程拟合结合曲线后确定检测到来自结合Fcγ受体的最大
响应50%时的有效抗体浓度的值(EC50)。
在单独的培养基或含有浓度为例如约10μg/ml的适宜单克隆抗体的培养基中温育表达OX40
的细胞。将细胞温育某个时段(例如1或3天)。每次处理后,将细胞清洗并等分。在一些实施方案中,将细胞等分到35mm盖有滤网(strainer-capped)的12x 75管中(每管1ml,每个处理组3管)以除去细胞团块。然后向管中加入PI(10μg/ml)。可以使用FACSCANTM流式细胞仪和FACSCONVERTTM CellQuest软件(Becton Dickinson)分析样品。
胞。此类细胞还包括表达OX40的细胞系和并非正常情况下表达OX40但已经用编码OX40的核
酸转染的细胞系。本文中提供的供任何上述体外测定法使用的例示性细胞系包括表达人
OX40的转基因BT474细胞(一种人乳腺癌细胞系)。
专利EP 0 425 235 B1);auristatin诸如单甲基auristatin药物模块DE和DF(MMAE和MMAF)
(见美国专利No.5,635,483和5,780,588及7,498,298);多拉司他汀(dolastatin);加利车
霉素(calicheamicin)或其衍生物(见美国专利No.5,712,374,5,714,586,5,739,116,5,
767,285,5,770,701,5,770,710,5,773,001和5,877,296;Hinman等,Cancer Res.53:3336-
3342(1993);及Lode等,Cancer Res.58:2925-2928(1998));蒽环类抗生素诸如道诺霉素
(daunomycin)或多柔比星(doxorubicin)(见Kratz等,Current Med.Chem.13:477-523
(2006);Jeffrey等,Bioorganic&Med.Chem.Letters 16:358-362(2006);Torgov等,
Bioconj.Chem.16:717-721(2005);Nagy等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 97:829-834(2000);
Dubowchik等,Bioorg.&Med.Chem.Letters 12:1529-1532(2002);King等,J.Med.Chem.45:
4336-4343(2002);及美国专利No.6,630,579);甲氨蝶呤;长春地辛(vindesine);紫杉烷(taxane)诸如多西他赛(docetaxel),帕利他赛,larotaxel,tesetaxel,和ortataxel;单端孢霉素(trichothecene);和CC1065。
白(abrin)A链,蒴莲根毒蛋白(modeccin)A链,α-帚曲霉素(sarcin),油桐(Aleurites
fordii)毒蛋白,香石竹(dianthin)毒蛋白,美洲商陆(Phytolaca americana)蛋白(PAPI,PAPII和PAP-S),苦瓜(Momordica charantia)抑制物,麻疯树毒蛋白(curcin),巴豆毒蛋白(crotin),肥皂草(sapaonaria officinalis)抑制剂,白树毒蛋白(gelonin),丝林霉素
(mitogellin),局限曲菌素(restrictocin),酚霉素(phenomycin),依诺霉素(enomycin)和单端孢菌素(tricothecenes)。
125 90 186 188 153 212 32 212
I ,Y ,Re ,Re ,Sm ,Bi ,P ,Pb 和Lu的放射性同位素。在使用放射性缀合物进行
检测时,它可以包含供闪烁法研究用的放射性原子,例如tc99m或I123,或供核磁共振(NMR)成像(又称为磁共振成像,mri)用的自旋标记物,诸如再一次的碘-123,碘-131,铟-111,氟-
19,碳-13,氮-15,氧-17,钆,锰或铁。
己烷-1-羧酸酯(SMCC),亚氨基硫烷(IT),亚氨酸酯(诸如盐酸己二酰亚氨酸二甲酯),活性酯类(诸如辛二酸二琥珀酰亚氨基酯),醛类(诸如戊二醛),双叠氮化合物(诸如双(对-叠氮苯甲酰基)己二胺),双重氮衍生物(诸如双(对-重氮苯甲酰基)-乙二胺),二异硫氰酸酯(诸如甲苯2,6-二异氰酸酯),和双活性氟化合物(诸如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)的双功能衍生
物。例如,可以如Vitetta等,Science 238:1098(1987)中所述制备蓖麻毒蛋白免疫毒素。
碳-14标记的1-异硫氰酸苄基-3-甲基二亚乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)是用于将放射性核苷
酸与抗体缀合的例示性螯合剂。参见WO94/11026。接头可以是便于在细胞中释放细胞毒性
药物的“可切割接头”。例如,可使用酸不稳定接头,肽酶敏感性接头,光不稳定接头,二甲基接头或含二硫化物接头(Chari等,Cancer Res 52:127-131(1992);美国专利No.5,208,
020)。
是否在抗OX40抗体与OX40间形成复合物。此类方法可以是体外或体内方法。在一个实施方
案中,使用抗OX40抗体来选择适合用抗OX40抗体治疗的受试者,例如其中OX40是一种用于
选择患者的生物标志。
4的HVR-H3;(d)包含氨基酸序列SEQ ID NO:5的HVR-L1;(e)包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的HVR-L2;和(f)包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的HVR-L3。在一些实施方案中,该抗OX40抗体包含(a)VH域,该VH域包含至少一个,至少两个,或所有三个选自下述的VH HVR序列:(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HVR-H1,(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:3的HVR-H2,和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:4的HVR-H3;和(b)VL域,该VL域包含至少一个,至少两个,或所有三个选自下述的VL HVR序列:(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:5的HVR-L1,(ii)包含氨基酸
序列SEQ ID NO:6的HVR-L2,和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的HVR-L3。在一些实施方案中,该OX40抗体包含(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HVR-H1;(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:3的HVR-H2;(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:4的HVR-H3;(d)包含氨基酸序列SEQ ID NO:
5的HVR-L1;(e)包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的HVR-L2;和(f)包含氨基酸序列SEQ ID NO:7的HVR-L3。在一些实施方案中,该抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO:180具有至少90%,
91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,99%,或100%序列同一性的重链可变域(VH)序列。在某些实施方案中,具有至少90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,
98%,或99%同一性的VH序列相对于参照序列含有替代(例如保守替代),插入,或删除,但是包含该序列的抗人OX40激动性抗体保留结合人OX40的能力。在某些实施方案中,在SEQ
ID NO:180中替代,插入和/或删除了总共1至10个氨基酸。在某些实施方案中,替代,插入,或删除发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地,该抗人OX40激动性抗体包含SEQ ID
NO:180中的VH序列,包括该序列的翻译后修饰。在一个特定实施方案中,该VH包含一个,两个或三个选自下述的HVR:(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:2的HVR-H1,(b)包含氨基酸序列
SEQ ID NO:3的HVR-H2,和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:4的HVR-H3。在一些实施方案中,该抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO:179具有至少90%,91%,92%,93%,94%,95%,
96%,97%,98%,99%,或100%序列同一性的轻链可变域(VL)。在某些实施方案中,具有至少90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,或99%同一性的VL序列相对于参照序列含有替代(例如保守替代),插入,或删除,但是包含该序列的抗人OX40激动性抗体保留结合人OX40的能力。在某些实施方案中,在SEQ ID NO:179中替代,插入和/或删除了总共1至10个氨基酸。在某些实施方案中,替代,插入,或删除发生在HVR以外的区域中(即在FR
中)。任选地,该抗人OX40激动性抗体包含SEQ ID NO:179中的VL序列,包括该序列的翻译后修饰。在一个特定实施方案中,该VL包含一个,两个或三个选自下述的HVR:(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:5的HVR-L1;(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:6的HVR-L2;和(c)包含氨基酸
序列SEQ ID NO:7的HVR-L3。
NO:31的HVR-H3;(d)包含氨基酸序列SEQ ID NO:37的HVR-L1;(e)包含氨基酸序列SEQ ID
NO:39的HVR-L2;和(f)包含氨基酸序列SEQ ID NO:42的HVR-L3。在一些实施方案中,该抗
OX40抗体包含(a)VH域,该VH域包含至少一个,至少两个,或所有三个选自下述的VH HVR序列:(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:29的HVR-H1,(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:30的HVR-H2,和(iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:31的HVR-H3;和(b)VL域,该VL域包含至少一个,至少两个,或所有三个选自下述的VL HVR序列:(i)包含氨基酸序列SEQ ID NO:37的HVR-L1,(ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO:39的HVR-L2,和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:42的HVR-
L3。在一些实施方案中,该抗OX40抗体包含(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:29的HVR-H1;(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:30的HVR-H2;(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:31的HVR-H3;(d)
包含氨基酸序列SEQ ID NO:37的HVR-L1;(e)包含氨基酸序列SEQ ID NO:39的HVR-L2;和
(f)包含氨基酸序列SEQ ID NO:42的HVR-L3。在一些实施方案中,该抗OX40抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO:182具有至少90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,99%,或100%序列同一性的重链可变域(VH)序列。在某些实施方案中,具有至少90%,91%,
92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,或99%同一性的VH序列相对于参照序列含有替代(例如保守替代),插入,或删除,但是包含该序列的抗人OX40激动性抗体保留结合OX40的能力。在某些实施方案中,在SEQ ID NO:182中替代,插入和/或删除了总共1至10个氨基酸。在某些实施方案中,替代,插入,或删除发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地,该抗人OX40激动性抗体包含SEQ ID NO:182中的VH序列,包括该序列的翻译后修饰。在一个特定实施方案中,该VH包含一个,两个或三个选自下述的HVR:(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:29的HVR-H1,(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:30的HVR-H2,和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:31
的HVR-H3。在一些实施方案中,该抗OX40抗体包含与氨基酸序列SEQ ID NO:181具有至少
90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,99%,或100%序列同一性的轻链可变域(VL)。在某些实施方案中,具有至少90%,91%,92%,93%,94%,95%,96%,97%,98%,或99%同一性的VL序列相对于参照序列含有替代(例如保守替代),插入,或删除,但是包含该序列的抗人OX40激动性抗体保留结合人OX40的能力。在某些实施方案中,在SEQ ID NO:
181中替代,插入和/或删除了总共1至10个氨基酸。在某些实施方案中,替代,插入,或删除发生在HVR以外的区域中(即在FR中)。任选地,该抗人OX40激动性抗体包含SEQ ID NO:181
中的VL序列,包括该序列的翻译后修饰。在一个特定实施方案中,该VL包含一个,两个或三个选自下述的HVR:(a)包含氨基酸序列SEQ ID NO:37的HVR-L1;(b)包含氨基酸序列SEQ ID NO:39的HVR-L2;和(c)包含氨基酸序列SEQ ID NO:42的HVR-L3。
SEQ ID NO:182。在一些实施方案中,该抗OX40抗体包含VL序列SEQ ID NO:181。在一些实施方案中,该抗OX40抗体包含VH序列SEQ ID NO:182和VL序列SEQ ID NO:181。
同位素32P,14C,125I,3H,和131I,荧光团诸如稀土螯合物或荧光素及其衍生物,罗丹明(rhodamine)及其衍生物,丹酰,伞形酮,萤光素酶,例如,萤火虫萤光素酶和细菌萤光素酶(美国专利No.4,737,456),萤光素,2,3-二氢酞嗪二酮,辣根过氧化物酶(HRP),碱性磷酸酶,β-半乳糖苷酶,葡糖淀粉酶,溶菌酶,糖类氧化酶,例如,葡萄糖氧化酶,半乳糖氧化酶,和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶,杂环氧化酶诸如尿酸酶和黄嘌呤氧化酶(其与采用过氧化氢氧化
染料前体的酶诸如HRP偶联),乳过氧化物酶,或微过氧化物酶,生物素/亲合素,自旋标记物,噬菌体标记物,稳定的自由基,等等。
如每个给定样品尺寸中的数目),并(ii)若该样品包含表达FcR的细胞(例如高数目的表达
FcR的细胞),则将该患者鉴定为有可能响应。用于检测表达FcR的细胞的方法是本领域公知的,包括例如通过IHC。在一些实施方案中,FcR是FcγR。在一些实施方案中,FcR是活化性FcγR。在一些实施方案中,该癌症是本文中描述的任何癌症。在一些实施方案中,该癌症是非小细胞肺癌(NSCLC),成胶质细胞瘤,成神经细胞瘤,黑素瘤,乳腺癌(例如三重阴性乳腺
癌),胃癌,结直肠癌(CRC),或肝细胞癌。在一些实施方案中,该方法是体外方法。在一些实施方案中,该方法进一步包括(iii)推荐抗人OX40激动性抗体(例如本文中描述的任何抗人
OX40激动性抗体)治疗。在一些实施方案中,该方法进一步包括(iv)用该抗人OX40激动性抗体治疗该患者。
存在或缺失或量(例如每个给定样品尺寸中的数目),并(ii)若该样品包含效应细胞(例如
高数目的效应细胞),则将该患者鉴定为有可能响应。用于检测浸润性人效应细胞的方法是本领域公知的,包括例如通过IHC。在一些实施方案中,人效应细胞是NK细胞,巨噬细胞,单核细胞中的一项或多项。在一些实施方案中,该效应细胞表达活化性FcγR。在一些实施方案中,该方法是体外方法。在一些实施方案中,该癌症是本文中描述的任何癌症。在一些实施方案中,该癌症是非小细胞肺癌(NSCLC),成胶质细胞瘤,成神经细胞瘤,黑素瘤,乳腺癌(例如三重阴性乳腺癌),胃癌,结直肠癌(CRC),或肝细胞癌。在一些实施方案中,该方法进一步包括(iii)推荐抗人OX40激动性抗体(例如本文中描述的任何抗人OX40激动性抗体)治
疗。在一些实施方案中,该方法进一步包括(iv)用该抗人OX40激动性抗体治疗该患者。
IHC));(ii)当该样品具有FcR生物标志物表达时,将该患者诊断为具有包含FcR生物标志物(例如高FcR生物标志物)的癌症。在一些实施方案中,该方法进一步包括(iii)为该患者(a)选择包含抗人OX40激动性抗体的疗法或(b)推荐包含抗人OX40激动性抗体的疗法。在一些
实施方案中,该方法是体外方法。
品具有人效应细胞生物标志物时,将该患者诊断为具有包含人效应细胞(例如高人效应细
胞)的癌症。在一些实施方案中,该方法进一步包括(iii)为该患者(a)选择包含抗人OX40激动性抗体的疗法或(b)推荐包含抗人OX40激动性抗体的疗法。在一些实施方案中,该方法是体外方法。
当该样品具有表达FcR的细胞(在一些实施方案中,高表达FcR的细胞)时,推荐抗人OX40激
动性抗体治疗。在一些实施方案中,该方法进一步包括(iii)为该患者选择包含抗人OX40激动性抗体的疗法。在一些实施方案中,该方法是体外方法。
当该样品具有人效应细胞(在一些实施方案中,高人效应细胞)时,推荐抗人OX40激动性抗
体治疗。在一些实施方案中,该方法进一步包括(iii)为该患者选择包含抗人OX40激动性抗体的疗法。在一些实施方案中,该方法是体外方法。
溶液形式制备如本文中所描述的抗OX40抗体的药物配制剂。一般地,药学可接受载剂在所
采用的剂量和浓度对接受者是无毒的,而且包括但不限于缓冲剂,诸如磷酸盐,柠檬酸盐,和其它有机酸;抗氧化剂,包括抗坏血酸和甲硫氨酸;防腐剂(诸如氯化十八烷基二甲基苄基铵;氯化己烷双胺;苯扎氯铵,苄索氯铵;酚,丁醇或苯甲醇;对羟基苯甲酸烃基酯,诸如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯;邻苯二酚;间苯二酚;环己醇;3-戊醇;和间甲酚);低分子量(少于约10个残基)多肽;蛋白质,诸如血清清蛋白,明胶或免疫球蛋白;亲水性聚合物,诸如聚乙烯吡咯烷酮;氨基酸,诸如甘氨酸,谷氨酰胺,天冬酰胺,组氨酸,精氨酸或赖氨酸;单糖,二糖和其它碳水化合物,包括葡萄糖,甘露糖或糊精;螯合剂,诸如EDTA;糖类,诸如蔗糖,甘露醇,海藻糖或山梨醇;成盐相反离子,诸如钠;金属复合物(例如Zn-蛋白质复合物);和/或非离子表面活性剂,诸如聚乙二醇(PEG)。本文中的例示性的药学可接受载剂进一步包含间质药物分散剂诸如可溶性中性活性透明质酸酶糖蛋白(sHASEGP),例如人可溶性PH-20透明质
酸酶糖蛋白,诸如rHuPH20( Baxter International,Inc.)。某些例示性的
sHASEGP和使用方法,包括rHuPH20记载于美国专利公开文本No.2005/0260186和2006/
0104968。在一方面,将sHASEGP与一种或多种别的糖胺聚糖酶诸如软骨素酶组合。
(Mona Industries,Inc.,Paterson,New Jersey);聚乙二醇,聚丙二醇,及乙二醇和丙二醇的共聚物(例如Pluronics,PF68等);等。在一些实施方案中,表面活性剂是聚山梨酯20。在一些实施方案中,表面活性剂是聚山梨酯80。
冲液。
如脂质体,清蛋白微球体,微乳剂,纳米颗粒和纳米胶囊),或在粗滴乳状液中。此类技术披露于Remington's Pharmaceutical Sciences,第16版,Osol,A.编(1980)。
在。
320mM的浓度存在。在一些实施方案中,该糖是二糖。在一些实施方案中,该二糖是海藻糖。
在一些实施方案中,该二糖是蔗糖。
30mM的浓度。在一些实施方案中,该组氨酸缓冲液是组氨酸乙酸酯。
(例如处于pH 5.0至6.0的组氨酸缓冲液)。
度是约0.02%至约0.06%;(c)组氨酸缓冲液(例如处于pH 5.0至6.0的组氨酸缓冲液);和
糖,其中该糖浓度是约120mM至约320mM。在一些实施方案中,该糖是蔗糖。
0.02%至约0.06%,其中该聚山梨酯是聚山梨酯20或聚山梨酯40;(c)组氨酸乙酸酯缓冲
液,处于pH 5.0至6.0;和糖(例如蔗糖),处于约120mM至约320mM的浓度。
120mM至约320mM。
至约320mM。
6.0;和(d)蔗糖,其中该蔗糖浓度是约320mM。
5.5;和(d)蔗糖,其中该蔗糖浓度是约240mM。
6.0;和(d)蔗糖,其中该蔗糖浓度是约120mM。
5.0;和(d)蔗糖,其中该蔗糖浓度是约240mM。
6.0;和(d)蔗糖,其中该蔗糖浓度是约120mM。
50mg/mL至100mg/mL,50mg/mL至75mg/mL,和/或75mg/mL至100mg/mL任一之间。在一些实施方案中,该人OX40激动性抗体的浓度大于约20mg/mL,30mg/mL,40mg/mL,50mg/mL,60mg/mL,
70mg/mL,或100mg/mL任一。
单月桂酸酯),聚山梨酯40(聚氧乙烯(20)山梨聚糖单棕榈酸酯),聚山梨酯60(聚氧乙烯
(20)山梨聚糖单硬脂酸酯),和/或聚山梨酯80(聚氧乙烯(20)山梨聚糖单油酸酯)。在一些
实施方案中,聚山梨酯为聚山梨酯20(聚氧乙烯(20)山梨聚糖单月桂酸酯)。在本文所述任
何药物配制剂的一些实施方案中,聚山梨酯浓度足以在长期储存时和/或在施用期间(例如
在IV袋中稀释之后)最小化聚集和/或维持稳定性。在一些实施方案中,聚山梨酯浓度为约
0.005%w/v,约0.02%w/v,约0.04%w/v且小于约0.1%w/v。在一些实施方案中,聚山梨酯浓度大于0.01%w/v且小于约0.1%w/v。在一些实施方案中,聚山梨酯浓度为约0.005%w/
v,约0.02%w/v,0.03%w/v,0.04%w/v,或0.05%w/v任一。在一些实施方案中,聚山梨酯以约0.04%w/v的浓度存在。在一些实施方案中,聚山梨酯以约0.02%w/v的浓度存在。
130mM,100mM至320mM,240mM至320mM,或240mM至400mM任一之间的浓度存在。在一些实施方案中,糖类以大于约50mM,75mM,100mM,110mM,或115mM任一的浓度存在。在一些实施方案中,糖类以约100mM,110mM,120mM,130mM,或140mM任一的浓度存在。在一些实施方案中,糖类以约120mM的浓度存在。在任何配制剂的一些实施方案中,糖类以约75mM至约360mM(例如约100mM,约120mM,约240mM,约320mM至约360mM)的浓度存在。在一些实施方案中,糖类以约
240mM的浓度存在。在一些实施方案中,糖类以约320mM的浓度存在。
酸缓冲剂浓度介于约1mM至50mM,1mM至35mM,1mM至25mM,1mM至20mM,7.5mM至12.5mM,5mM至
15mM,20mM至30mM,或25mM至35mM任一之间。在一些实施方案中,该组氨酸缓冲剂浓度为约
5mM,7.5mM,10mM,12.5mM,15mM,20mM,25mM,30mM,35mM或40mM任一。在一些实施方案中,该组氨酸缓冲剂浓度为约10mM。在一些实施方案中,该组氨酸缓冲剂浓度为约20mM。在一些实施方案中,该组氨酸缓冲剂浓度为约30mM。在一些实施方案中,该组氨酸缓冲剂浓度为约
40mM。在本文所述任何药物配制剂的一些实施方案中,该组氨酸缓冲剂处于介于pH 5.0和
6.0之间的pH,例如约pH5.0,pH 5.1,pH 5.2,pH 5.3,pH 5.4,pH 5.5,pH 5.6,pH 5.7,pH
5.8,pH5.9或pH 6.0任一。在一些实施方案中,该pH介于pH 4.9和pH 6.3之间。
组合存在。
形式。期望将管形瓶于约2-8℃以及直至30℃储存24小时,直到将它施用于需要它的受试
者。管形瓶可例如为15cc管形瓶(例如用于200mg剂量)。
性抗体。在一个方面,提供的是抗人OX40激动性抗体,其用于在具有癌症的个体中增强T细胞功能,包括对该个体施用有效量的该抗人OX40激动性抗体。在一个方面,提供的是抗人
OX40激动性抗体,其用于消减表达人OX40的细胞(例如表达OX40的T细胞,例如表达OX40的
Treg),包括对该个体施用有效量的该抗人OX40激动性抗体。在一些实施方案中,消减是通过ADCC进行的。在一些实施方案中,消减是通过吞噬进行的。提供的是抗人OX40激动性抗
体,其用于治疗具有肿瘤免疫的个体。
施用有效量的至少一种别的治疗剂,例如下文所述。
达高OX40的细胞,例如表达OX40的T细胞),其包括对该个体施用有效量的该药物。在一些实施方案中,消减是通过ADCC进行的。在一些实施方案中,消减是通过吞噬进行的。在一个方面,该药物用于治疗具有肿瘤免疫的个体。
该药物。在一些实施方案中,感染是病毒和/或细菌感染。在一些实施方案中,感染是病原体感染。
的“个体”可以是人。
动性抗体。在一些实施方案中,消减是通过ADCC进行的。在一些实施方案中,消减是通过吞噬进行的。提供的是抗人OX40激动性抗体,其用于治疗具有肿瘤免疫的个体。
disease)NHL,套细胞淋巴瘤,AIDS相关淋巴瘤,和瓦尔登斯特伦氏(Waldenstrom)巨球蛋白血症),慢性淋巴细胞性白血病(CLL),急性成淋巴细胞性白血病(ALL),毛细胞性白血病,慢性成髓细胞性白血病,和移植后淋巴增殖性病症(PTLD),以及与瘢痣病(phakomatoses),水肿(诸如与脑瘤有关的),B细胞增殖性病症,和梅格斯氏(Meigs)综合征有关的异常血管增
殖。更具体例子包括但不限于复发性或顽固性NHL,前线(front line)低级NHL,阶段III/IV NHL,化疗耐受性NHL,前体B成淋巴细胞性白血病和/或淋巴瘤,小淋巴细胞性淋巴瘤,B细胞慢性淋巴细胞性白血病和/或前淋巴细胞性白血病和/或小淋巴细胞性淋巴瘤,B细胞前淋
巴细胞性淋巴瘤,免疫细胞瘤和/或淋巴浆细胞性(lymphoplasmacytic)淋巴瘤,淋巴浆细
胞性淋巴瘤,边缘区B细胞淋巴瘤,脾边缘区淋巴瘤,节外边缘区(extranodal marginal
zone)-MALT淋巴瘤,节边缘区(nodal marginal zone)淋巴瘤,毛细胞性白血病,浆细胞瘤和/或浆细胞骨髓瘤,低级/滤泡淋巴瘤,中级/滤泡NHL,套细胞淋巴瘤,滤泡中心淋巴瘤(滤泡的),中级弥漫性NHL,弥漫性大B细胞淋巴瘤,攻击性(agressive)NHL(包括攻击性前线
NHL和攻击性复发性NHL),自体干细胞移植后复发性或顽固性NHL,原发性纵隔大B细胞淋巴瘤,原发性渗出性淋巴瘤,高级成免疫细胞NHL,高级成淋巴细胞NHL,高级小无核裂细胞
NHL,贮积病(bulky disease)NHL,伯基特氏(Burkitt)淋巴瘤,前体(外周)大粒状淋巴细胞白血病,蕈样肉芽肿病和/或塞扎里(Sezary)综合征,皮肤淋巴瘤,间变性大细胞淋巴瘤,血管中心性淋巴瘤。
瘤和淋巴细胞性白血病包括例如a)滤泡性淋巴瘤,b)小无核裂细胞淋巴瘤(Small Non-
Cleaved Cell Lymphoma)/伯基特(Burkitt)氏淋巴瘤(包括地方性伯基特氏淋巴瘤,散发
性伯基特氏淋巴瘤和非伯基特氏淋巴瘤),c)边缘区淋巴瘤(包括结外边缘区B细胞淋巴瘤
(粘膜相关淋巴组织淋巴瘤,MALT),结边缘区B细胞淋巴瘤和脾边缘区淋巴瘤),d)套细胞淋巴瘤(MCL),e)大细胞淋巴瘤(包括B细胞弥漫性大细胞淋巴瘤(DLCL),弥漫性混合细胞淋巴瘤,免疫母细胞性淋巴瘤,原发性纵隔B细胞淋巴瘤,血管中心性淋巴瘤-肺B细胞淋巴瘤),f)毛细胞白血病,g)淋巴细胞性淋巴瘤,瓦尔登斯特伦(waldenstrom)氏巨球蛋白血症,h)急性淋巴细胞性白血病(ALL),慢性淋巴细胞性白血病(CLL)/小淋巴细胞性淋巴瘤(SLL),B细胞幼淋巴细胞白血病,i)浆细胞赘生物,浆细胞骨髓瘤,多发性骨髓瘤,浆细胞瘤,和/或j)霍奇金氏病。
抗体和至少一种别的治疗剂,例如下文所述。
高效应T细胞功能和/或提高记忆T细胞功能来抑制肿瘤免疫。在本发明的任何方法的一些
实施方案中,该抗人OX40激动性抗体通过抑制Treg功能(例如抑制Treg的遏制性功能),杀
死表达OX40的细胞(例如表达高水平OX40的细胞),提高效应T细胞功能和/或提高记忆T细
胞功能来治疗癌症。在本发明的任何方法的一些实施方案中,该抗人OX40激动性抗体通过
抑制Treg功能(例如抑制Treg的遏制性功能),杀死表达OX40的细胞(例如表达高水平OX40
的细胞),提高效应T细胞功能和/或提高记忆T细胞功能来增强免疫功能。在本发明的任何
方法的一些实施方案中,该抗人OX40激动性抗体通过抑制Treg功能(例如抑制Treg的遏制
性功能),杀死表达OX40的细胞(例如表达高水平OX40的细胞),提高效应T细胞功能和/或提高记忆T细胞功能来增强T细胞功能。
细胞和/或记忆T细胞增殖和/或细胞因子分泌)的Treg遏制来抑制Treg功能。在任何方法的
一些实施方案中,相对于施用该OX40激动性抗体之前的效应T细胞增殖,该抗人OX40激动性抗体提高效应T细胞增殖。在任何方法的一些实施方案中,相对于施用该OX40激动性抗体之前的记忆T细胞增殖,该抗人OX40激动性抗体提高记忆T细胞增殖。在任何方法的一些实施
方案中,相对于施用该OX40激动性抗体之前的效应T细胞细胞因子生成,该抗人OX40激动性抗体提高效应T细胞细胞因子生成(例如γ-干扰素生成)。在任何方法的一些实施方案中,
相对于施用该OX40激动性抗体之前的记忆T细胞细胞因子生成,该抗人OX40激动性抗体提
高记忆T细胞细胞因子生成(例如γ-干扰素生成)。在任何方法的一些实施方案中,相对于
施用该OX40激动性抗体之前的CD4+效应T细胞增殖和/或CD8+效应T细胞增殖,该抗人OX40
激动性抗体提高CD4+效应T细胞增殖和/或CD8+效应T细胞增殖。在任何方法的一些实施方
案中,相对于施用该OX40激动性抗体之前的记忆T细胞增殖,该抗人OX40激动性抗体提高记忆T细胞增殖(例如CD4+记忆T细胞增殖)。在一些实施方案中,相对于施用该抗人OX40激动
性抗体的之前的增殖,细胞因子分泌和/或溶胞活性,个体中的CD4+效应T细胞具有增强的
增殖,细胞因子分泌和/或溶胞活性。
然序列IgG1Fc部分的抗人OX40激动性抗体降低的活性(例如CD4+效应T细胞功能,例如增
殖)。在一些实施方案中,包含变异IgG1Fc多肽(其包含消除对人效应细胞的结合的突变,例如DANA或N297G突变)的抗人OX40激动性抗体并不拥有实质性活性(例如CD4+效应T细胞功
能,例如增殖)。
案中,抗体交联是通过在该抗体的IgG1Fc部分中引入突变(例如DANA或N297S突变)并测试
突变体抗体的功能而测定的。
对于施用该抗人OX40激动性抗体之前升高。在一些实施方案中,记忆T细胞细胞因子分泌
(水平)相对于施用该抗人OX40激动性抗体之前升高。在任何方法的一些实施方案中,个体
中的Treg具有相对于施用该抗人OX40激动性抗体之前降低的效应T细胞功能(例如增殖和/
或细胞因子分泌)抑制。在一些实施方案中,效应T细胞的数目相对于施用该抗人OX40激动
性抗体之前升高。在一些实施方案中,效应T细胞细胞因子分泌(水平)相对于施用该抗人
OX40激动性抗体之前升高。
OX40激动性抗体之前升高。在本发明的任何方法的一些实施方案中,表达γ-干扰素的肿瘤内(浸润性)CD4+效应T细胞的数目(例如总的表达γ-干扰素的CD4+细胞,或例如总的CD4+
细胞中表达γ-干扰素的CD4+细胞的百分比)相对于施用抗人OX40激动性抗体之前升高。
性抗体之前升高。在本发明的任何方法的一些实施方案中,表达γ-干扰素的肿瘤内(浸润
性)CD8+效应T细胞的数目(例如总的CD8+细胞中表达γ-干扰素的CD8+细胞的百分比)相对
于施用抗人OX40激动性抗体之前升高。
低。
前,同时,和/或之后发生本发明的抗体的施用。在一个实施方案中,抗OX40抗体的施用和别的治疗剂的施用彼此在约一个月内,或约一,两或三周内,或约1,2,3,4,5,或6天内发生。也可以与放射疗法组合使用本发明的抗体。
动性抗体可以与免疫疗法或免疫治疗剂,例如单克隆抗体联合施用。
everolimus,氟尿嘧啶(例如FOLFOX,FOLFIRI),IFL,regorafenib,Reolysin,Alimta,Zykadia,Sutent,Torisel(temsirolimus),Inlyta(axitinib,Pfizer),Afinitor
(everolimus,Novartis),Nexavar(sorafenib,Onyx/Bayer),Votrient,Pazopanib,
axitinib,IMA-901,AGS-003,cabozantinib,Vinflunine,Hsp90抑制剂(例如apatorsin),Ad-GM-CSF(CT-0070),Temazolomide,IL-2,IFNa,vinblastine,Thalomid,dacarbazine,cyclophosphamide,lenalidomide,azacytidine,lenalidomide,bortezomid(VELCADE),amrubicine,carfilzomib,pralatrexate,和/或enzastaurin联合施用。
1"的备选名称包括CD279和SLEB2。"PD-L1"的备选名称包括B7-H1,B7-4,CD274,和B7-H。"PD-L2"的备选名称包括B7-DC,Btdc,和CD273。在一些实施方案中,PD-1,PD-L1,和PD-L2是人PD-1,PD-L1和PD-L2。在一些实施方案中,PD-1结合拮抗剂是抑制PD-1结合其配体结合配偶的分子。在一个具体方面,PD-1配体结合配偶是PD-L1和/或PD-L2。在另一个实施方案中,PD-L1结合拮抗剂是抑制PD-L1结合其结合配偶的分子。在一个具体方面,PD-L1结合配偶是PD-1和/或B7-1。在另一个实施方案中,PD-L2结合拮抗剂是抑制PD-L2结合其结合配偶的分子。在一个具体方面,PD-L2结合配偶是PD-1。拮抗剂可以是抗体,其抗原结合片段,免疫粘附素,融合蛋白,或寡肽。在一些实施方案中,PD-1结合拮抗剂是抗PD-1抗体(例如人抗体,人源化抗体,或嵌合抗体)。在一些实施方案中,抗PD-1抗体选自下组:MDX-1106
(nivolumab,OPDIVO),Merck 3475(MK-3475,pembrolizumab,KEYTRUDA)和CT-011
(Pidilizumab)。在一些实施方案中,PD-1结合拮抗剂是免疫粘附素(例如包含融合至恒定
区(例如免疫球蛋白序列的Fc区)的,PD-L1或PD-L2的胞外或PD-1结合部分的免疫粘附素)。
在一些实施方案中,PD-1结合拮抗剂是AMP-224。在一些实施方案中,PD-L1结合拮抗剂是抗PD-L1抗体。在一些实施方案中,抗PD-Ll结合拮抗剂选自下组:YW243.55.S70,MPDL3280A,MEDI4736和MDX-1105。MDX-1105,也称作BMS-936559,是WO2007/005874中记载的抗PD-L1抗体。抗体YW243.55.S70(重和轻链可变区序列分别显示于SEQ ID No.20和21)是WO 2010/
077634 A1中记载的抗PD-L1。MDX-1106,也称作MDX-1106-04,ONO-4538,BMS-936558或
nivolumab,是WO2006/121168中记载的抗PD-1抗体。Merck 3475,也称作MK-3475,SCH-
900475或pembrolizumab,是WO2009/114335中记载的抗PD-1抗体。CT-011,也称作hBAT,
hBAT-1或pidilizumab,是WO2009/101611中记载的抗PD-1抗体。AMP-224,也称作B7-DCIg,是WO2010/027827和WO2011/066342中记载的PD-L2-Fc融合可溶性受体。在一些实施方案
中,抗PD-1抗体是MDX-1106。"MDX-1106"的备选名称包括MDX-1106-04,ONO-4538,BMS-
936558或nivolumab。在一些实施方案中,抗PD-1抗体是nivolumab(CAS注册号:946414-94-
4)。
抑制性共刺激分子可包括CTLA-4(也称作CD152),PD-1,TIM-3,BTLA,VISTA,LAG-3,B7-H3,B7-H4,IDO,TIGIT,MICA/B,或精氨酸酶。在一些实施方案中,针对抑制性共刺激分子的拮抗剂是结合CTLA-4,PD-1,TIM-3,BTLA,VISTA,LAG-3(例如LAG-3-IgG融合蛋白(IMP321)),B7-H3,B7-H4,IDO,TIGIT,MICA/B,或精氨酸酶的拮抗性抗体。
ipilimumab(也称作MDX-010,MDX-101,或 )联合施用。在一些实施方案中,抗人
OX40激动性抗体可以与tremelimumab(也称作ticilimumab或CP-675,206)联合施用。在一
些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与针对B7-H3(也称作CD276)的拮抗剂,例如阻断
性抗体联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与MGA271联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与针对TGFβ的拮抗剂,例如metelimumab(也称作
CAT-192),fresolimumab(也称作GC1008),或LY2157299联合施用。
激动性抗体可以与UCART19联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与
WT128z联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与KTE-C19(Kite)联合施
用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与CTL019(Novartis)联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与包含过继转移包含显性阴性TGFβ受体,例如,显性阴性TGFβII型受体的T细胞的治疗联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与包含HERCREEM方案的治疗(参见例如ClinicalTrials.gov Identifier NCT00889954)联合
施用。
抗体可以与daratumumab联合施用。
可以与针对CD40的激动剂,例如活化性抗体联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与CP-870893联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与针对OX40(也称作CD134)的激动剂,例如活化性抗体联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与不同的抗OX40抗体(例如AgonOX)联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动
性抗体可以与针对CD27的激动剂,例如活化性抗体联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与CDX-1127联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与针
对吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)的拮抗剂联合施用。在一些实施方案中,该IDO拮抗剂是1-甲基-D-色氨酸(也称作1-D-MT)。
可以与针对CD40的激动剂,例如活化性抗体联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与CP-870893或RO7009789联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可
以与针对OX40(也称作CD134)的激动剂,例如活化性抗体联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与针对CD27的激动剂,例如活化性抗体联合施用。在一些实施方案
中,抗人OX40激动性抗体可以与CDX-1127(也称作varlilumab)联合施用。在一些实施方案
中,抗人OX40激动性抗体可以与针对吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)的拮抗剂联合施用。在一
些实施方案中,该IDO拮抗剂是1-甲基-D-色氨酸(也称作1-D-MT)。在一些实施方案中,该
IDO拮抗剂是WO2010/005958(通过此处记录明确收录其内容)中所示IDO拮抗剂。在一些实
施方案中,该IDO拮抗剂是4-({2-[(氨基磺酰基)氨基]乙基}氨基)-N-(3-溴-4-氟苯基)-
N’-羟基-1,2,5-口恶二唑-3-甲脒(例如如WO2010/005958实施例23中记载的)。在一些实施方案中,该IDO拮抗剂是
甲基奥瑞司他汀E(MMAE)。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与抗NaPi2b抗体-
MMAE缀合物(也称作DNIB0600A,RG7599或lifastuzumab vedotin)联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与trastuzumab emtansine(也称作T-DM1,ado-
trastuzumab emtansine,或 Genentech)联合施用。在一些实施方案中,抗
人OX40激动性抗体可以与抗MUC16抗体-MMAE缀合物,DMUC5754A联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与抗MUC16抗体-MMAE缀合物,DMUC4064A联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与靶向内皮缩血管肽B受体(EDNBR)的抗体-药物缀合
物,例如缀合有MMAE的针对EDNBR的抗体联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与靶向淋巴细胞抗原6复合物,基因座E(Ly6E)的抗体-药物缀合物,例如缀合有MMAE的针对Ly6E的抗体(也称作DLYE5953A)联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与polatuzumab vedotin联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与靶向CD30的抗体-药物缀合物联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与
ADCETRIS(也称作brentuximab vedotin)联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与polatuzumab vedotin联合施用。
合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与针对血管生成素2(也称作Ang2)的抗体联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与MEDI3617联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与针对VEGFR2的抗体联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与ramucirumab联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与VEGF受体融合蛋白联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与
aflibercept联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与ziv-aflibercept
(也称作VEGF陷阱或 )联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可
以与针对VEGF和Ang2的双特异性抗体联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体
可以与RG7221(也称作vanucizumab)联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与血管发生抑制剂联合和与PD-1轴结合拮抗剂(例如PD-1结合拮抗剂诸如抗PD-1抗体,
PD-L1结合拮抗剂诸如抗PD-L1抗体,和PD-L2结合拮抗剂诸如抗PD-L2抗体)联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与贝伐珠单抗和PD-1轴结合拮抗剂(例如PD-1结
合拮抗剂诸如抗PD-1抗体,PD-L1结合拮抗剂诸如抗PD-L1抗体,和PD-L2结合拮抗剂诸如抗PD-L2抗体)联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与贝伐珠单抗和MDX-
1106(nivolumab,OPDIVO)联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与贝伐珠单抗和Merck 3475(MK-3475,pembrolizumab,KEYTRUDA)联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与贝伐珠单抗和CT-011(Pidilizumab)联合施用。在一些实施方
案中,抗人OX40激动性抗体可以与贝伐珠单抗和YW243.55.S70联合施用。在一些实施方案
中,抗人OX40激动性抗体可以与贝伐珠单抗和MPDL3280A联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与贝伐珠单抗和MEDI4736联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40
激动性抗体可以与贝伐珠单抗和MDX-1105联合施用。
在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与抗CSF-1R抗体(也称作IMC-CS4或
LY3022855)联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与抗CSF-1R抗体,
RG7155(也称作RO5509554或emactuzumab)联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性
抗体可以与干扰素,例如干扰素-α或干扰素-γ联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与Roferon-A(也称作重组干扰素α-2a)联合施用。在一些实施方案中,抗人
OX40激动性抗体可以与GM-CSF(也称作重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子,rhu GM-CSF,sargramostim,或 )联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与
IL-2(也称作aldesleukin或 )联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性
抗体可以与IL-12联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与IL27联合施
用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与IL-15联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与ALT-803联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与靶向CD20的抗体联合施用。在一些实施方案中,靶向CD20的抗体是奥奴珠单抗(也称作
GA101或 )或利妥昔单抗。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与靶向
GITR的抗体联合施用。在一些实施方案中,靶向GITR的抗体是TRX518。在一些实施方案中,靶向GITR的抗体是MK04166(Merck)。
的抑制剂联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与AG-120(Agios)联合施用。
拮抗剂诸如抗PD-L2抗体)联合施用。
方案中,抗人OX40激动性抗体可以与肿瘤坏死因子(TNF)α联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与IL-1联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与
HMGB1联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与IL-10拮抗剂联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与IL-4拮抗剂联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与IL-13拮抗剂联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与IL-17拮抗剂联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与HVEM拮抗剂联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与ICOS激动剂(例如通过施用
ICOS-L,或针对ICOS的激动性抗体)联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与靶向CX3CL1的治疗联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与靶向
CXCL9的治疗联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与靶向CXCL10的治疗联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与靶向CCL5的治疗联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与LFA-1或ICAM1激动剂联合施用。在一些实施方
案中,抗人OX40激动性抗体可以与选择蛋白激动剂联合施用。
实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与dabrafenib(也称作 )联合施用。在一些
实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与encorafenib(LGX818)联合施用。
施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与EGFR-T790M的抑制剂联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与gefitinib联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与afatinib联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与西妥昔单抗(也称作 )联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与panitumumab
(也称作 )联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与
rociletinib联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与AZD9291联合施用。
在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与MEK,诸如MEK1(也称作MAP2K1)和/或MEK2
(也称作MAP2K2)的抑制剂联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与
cobimetinib(也称作GDC-0973或XL-518)联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与trametinib(也称作 )联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性
抗体可以与binimetinib联合施用。
施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与ERK(例如ERK1/2)的抑制剂联合施
用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与GDC-0994联合施用。在一些实施方案
中,抗人OX40激动性抗体可以与B-Raf的抑制剂,MEK的抑制剂,和ERK1/2的抑制剂联合施
用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与EGFR的抑制剂,MEK的抑制剂,和ERK1/2的抑制剂联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与一种或多种MAP激酶途径抑制剂联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与CK127联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与K-Ras的抑制剂联合施用。
一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与AF802(也称作CH5424802或alectinib)联合
施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与crizotinib联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与ceritinib联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)的抑制剂联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40
激动性抗体可以与buparlisib(BKM-120)联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与pictilisib(也称作GDC-0941)联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗
体可以与buparlisib(也称作BKM-120)联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与perifosine(也称作KRX-0401)联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体
可以与磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)的δ选择性抑制剂联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与idelalisib(也称作GS-1101或CAL-101)联合施用。在一些实施方案中,
抗人OX40激动性抗体可以与taselisib(也称作GDC-0032)联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与BYL-719联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与Akt的抑制剂联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与MK2206联合施
用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与GSK690693联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与ipatasertib(也称作GDC-0068)联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与mTOR的抑制剂联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与sirolimus(也称作rapamycin)联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动
性抗体可以与temsirolimus(也称作CCI-779或 )联合施用。在一些实施方案中,抗
人OX40激动性抗体可以与everolimus(也称作RAD001)联合施用。在一些实施方案中,抗人
OX40激动性抗体可以与ridaforolimus(也称作AP-23573,MK-8669,或deforolimus)联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与OSI-027联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与AZD8055联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与INK128联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与双重PI3K/mTOR抑制剂联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与XL765联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与GDC-0980联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与BEZ235(也称作NVP-BEZ235)联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性
抗体可以与BGT226联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与GSK2126458
联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与PF-04691502联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与PF-05212384(也称作PKI-587)联合施用。
合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与BCL2的抑制剂联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与venetoclax联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与CHK1的抑制剂联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以
与GDC-0575联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与激活的hedgehog信
号传导途径的抑制剂联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与ERIVEDGE
联合施用。
抗体可以与曲妥珠单抗联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与TVEC联
合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与IL27联合施用。在一些实施方案
中,抗人OX40激动性抗体可以与环磷酰胺联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与募集T细胞至肿瘤的药剂联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与lirilumab(IPH2102/BMS-986015)联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与Idelalisib联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与靶向CD3和CD20的抗体联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与REGN1979联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与靶向CD3和CD19的抗体联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与blinatumomab联合施用。
性抗体可以与顺铂和培美曲塞联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与
顺铂和吉西他滨联合施用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与FOLFOX联合施
用。在一些实施方案中,抗人OX40激动性抗体可以与FOLFIRI联合施用。
前,同时,和/或之后发生本发明抗体的施用。也可以与放射疗法组合使用本发明抗体。
程表,包括但不限于单次施用或在多个时间点里的多次施用,推注施用,和脉冲输注。
效量取决于配制剂中存在的抗体的量,病症或治疗的类型,及上文所述其它因素。这些通常以本文所述相同的剂量和施用途径使用,或以约1-99%的本文所述剂量使用,或以凭经验/临床上确定为适宜的任何剂量和任何途径使用。
施用或者是通过连续输注。根据上文所述因素,一种典型的日剂量可以在约1μg/kg至
100mg/kg或更多的范围中。对于几天或更长时间上的重复施用,根据状况,治疗通常会持续直至疾病症状发生期望的阻抑。此类剂量可间歇施用,例如每周或每三周(例如使得患者接受约2至约20剂,或例如约6剂抗体)。可以施用较高的初始加载剂,接着是较低的一或多剂。
然而,其它剂量方案可能是有用的。此疗法的进展易于通过常规技术和测定法来监测。
器包括例如瓶,管形瓶,注射器,IV溶液袋,等。容器可以自多种材料诸如玻璃或塑料形成。
容器容纳单独或与另一种组合物组合有效治疗,预防和/或诊断状况的组合物,并且可以具有无菌存取口(例如,容器可以是具有由皮下注射针可刺穿的塞子的管形瓶或静脉内溶液
袋)。组合物中的至少一种活性剂是本发明的抗体。标签或包装插页指示使用组合物来治疗选择的状况。此外,制品可以包含(a)其中装有组合物的第一容器,其中组合物包含本发明的抗体;和(b)其中装有组合物的第二容器,其中组合物包含别的细胞毒性或其它方面治疗性的药剂。本发明的此实施方案中的制品可以进一步包含包装插页,其指示可以使用组合
物来治疗特定的状况。或者/另外,制品或试剂盒可以进一步包含第二(或第三)容器,其包含药学可接受缓冲液,诸如抑菌性注射用水(BWFI),磷酸盐缓冲盐水,Ringer氏溶液和右旋糖溶液。它可以进一步包含从商业和用户观点看期望的其它材料,包括其它缓冲剂,稀释
剂,滤器,针,和注射器。
于施用该药物来治疗癌症的说明书。
传感器芯片上固定化抗人Fc(GE Healthcare)。以300-400个共振单位(RU)的水平捕捉抗
OX40抗体。测量抗体对人OX40(Sino Biological Inc)的结合。使用范围为18.75至300nM或
6.25至200nM的huOX40的两倍浓度系列进行实验。使用注射时间2分钟,流速30μl/min,温度
25℃,及运行缓冲液10mM HEPES,pH 7.4,150mM NaCl,和0.005%Tween 20记录OX40结合的传感图。注射后,在运行缓冲液中监测配体自抗体解离600秒。在结合循环之间用注射40μl
3M氯化镁再生表面。减去只含有运行缓冲液的空白之后,用制造商提供的软件使用1:1朗格缪尔(Langmuir)结合模型分析对OX40结合抗OX40抗体观察到的传感图以计算动力学和结
合常数。
3C8.gr.5,和1D2.chimera 2.5分钟。共振单位(RU)是升高指示无交叉阻断,而RU无变化指示竞争。对于第二种型式,倒转抗体型式,并使用抗人Fc(GE Healthcare)捕捉人源化变体。
这接着注射huOX40 2分钟,然后是鼠抗体。每一种克隆能在其它两种克隆存在下结合,而且只竞争自身的结合。
冲液(1X PBS,0.5%BSA,0.05%叠氮化钠)封闭后,用0.1,1.0,或10.0μg/ml抗体在冰上对细胞染色30分钟。染色后,用冷的FACS缓冲液(1X PBS,0.5%BSA,0.05%叠氮化钠)清洗细胞2次。然后在冰上用抗huFc藻红蛋白(PE)或抗muFc PE对细胞染色30分钟。用冷的FACS缓
冲液清洗经过染色的细胞3次,之后在FACSCalibur上读数,接着使用Flowjo软件进行分析。
蛋白酶作图分析CDR中氧化残基(例如M或W)的存在。
染的BT-474细胞。使用细胞解离溶液(Sigma-Aldrich;St.Louis,MO)自烧瓶脱离细胞,并用结合缓冲液(含2%FBS,50mM HEPES,pH 7.2,2mM叠氮化钠的DMEM)清洗。在0.2mL结合缓冲液中以近似密度5x 104个细胞将经过清洗的细胞添加至装有50μL竞争反应混合物的96孔
板。每份含细胞的竞争反应中碘化抗体的终浓度为大约100pM(大约16.0x 104cpm每
0.25mL),而每份含细胞的竞争反应中未标记抗体的终浓度有变化,以500nM开始并以3倍梯级递减10个浓度,接着是只使用结合缓冲液的不添加未标记抗体梯级。将含细胞的竞争反
应于室温温育2小时。于未标记抗体的每一种浓度一式三份测定含细胞的竞争反应。温育2
小时后,将竞争反应转移至Millipore Multiscreen滤板(Millipore;Billerica,MA),并用结合缓冲液清洗4次以分开游离的与结合的碘化抗体。在Wallac Wizard 1470伽马计数器
(PerkinElmer Life and Analytical Sciences Inc.;Wellesley,MA)上对滤器计数。使用NewLigand软件(Genentech)评估结合数据,该软件使用Munson和Rodbard的拟合算法来确
定抗体的结合亲和力(Munson和Rodbard,1980)。
PBS中用10%人,食蟹猴,大鼠或小鼠血清于4℃封闭15分钟,并以100μL全血每份反应的当量分配入96孔板。
Biosciences);食蟹猴,抗CD3-PE-Cy7,抗CD4-PerCP-Cy5.5,抗CD8-APC-H7(BD
Biosciences);大鼠,抗CD3-PE,抗CD4-FITC(BD Biosciences);小鼠,抗CD3-FITC,抗CD4-PE(eBioscience,San Diego,CA)。
FACSDiva软件分析获取的数据。
进一步富集。使用Miltenyi CD4+记忆T细胞分离试剂盒(Miltenyi)依照制造商的说明书自
PBMC分离CD4+记忆T细胞。以5000Rad照射表达CD32和CD80的L细胞,并用作抗原呈递细胞。
至0.16ng/mL 2倍连续稀释)激活CD4+记忆T细胞。在培养的第5天通过Luminex(Bio-Rad)评
估上清液中的IFN-γ水平,并在培养的第7天通过Cell Titer-Glo luminescence
(Promega)测量T细胞增殖,在EnVision多标记物读数仪(Perkin Elmer)上读数。
结合,如通过Biacore测量的。这项分析的结果显示于表2。
1A7.gr.1 4.38e5 1.52e-4 0.529
1A7.gr.2 4.44e5 2.33e-4 0.524
1A7.gr.3 4.62e5 2.43e-4 0.525
1A7.gr.4 3.45e5 1.63e-4 0.472
1A7.gr.5’ 2.78e5 4.92e-4 1.77
1A7.gr.6 3.91e5 6.93e-5 0.177
1A7.gr.7’ 4.01e5 1.45e-4 0.360
1D2.gr.1 快上 快下
1D2.gr.2 3.19e5 1.78e-2 55.9
1D2.gr.3 2.73e5 1.63e-2 59.5
1A7.gr.2,1A7.gr.3,3C8.gr.1,3C8.gr.2,和3C8.gr.3较好地结合细胞表面上表达的人
OX40。
1A7.gr.1,序列DS(D在CDR H1中;DS潜在进行升高的异构化)和NGDS(在CDR H2中;NG潜在进行升高的异构化)鉴定为潜在不稳定残基,而且如表5中所示进行突变。如上所述通过
Biacore(评估结合动力学)和在共刺激测定法中(测定生物学活性)测试变体。
没有显著改变(数据未显示)。
8)。
丙氨酸扫描突变体1A7.Ala9,1A7.Ala10,1A7.Ala11,1A7.Ala13,和1A7.Ala14在一种体外T细胞共刺激测定法中的功能表征显示了降低的OX40抗体亲和力与降低的抗体共刺激效应T
细胞增殖活性的能力有关。
的亲和力。Kd值汇总于表11。平均测量结合亲和力为0.45nM(n=3,个别值0.43,0.44,
0.49)。
可测量的单抗1A7.gr.1对大鼠或小鼠T细胞的结合。
或对照抗体刺激CD4+记忆T细胞。在抗CD3交联缺失下,单抗1A7.gr.1对T细胞增殖没有影响(图3A)。渐增浓度的单抗1A7.gr.1共刺激CD4+记忆T细胞响应抗CD3交联而增殖。单抗
1A7.gr.1的共刺激效果的计算EC50为9.96ng/mL(n=2,图3A)。渐增浓度的单抗1A7.gr.1共刺激CD4+记忆T细胞响应抗CD3交联而生成干扰素-γ(图3B)。这些结果证明激动性OX40单
抗1A7.gr.1共刺激CD4+记忆T细胞增殖和干扰素-γ生成。
(嵌合抗CD20,IgG1)和抗HSV糖蛋白D(抗gD抗体,人IgG1)是在Genentech生成的。抗人IgG
(PE)购自BD Biosciences。人CD4分离试剂盒II来自Miltenyi Biotech。人NK分离试剂盒购自Stem Cell Technology。
培养和维持BT474和双向性细胞。于37C/5% CO2温箱,在完全RPMI培养基(补充有10%FBS
(热灭活的)/青霉素/链霉素/谷氨酰胺/非必需氨基酸/55μMβME的RPMI-1640)中培养和维
持表达CD32a和CD80的L细胞。于37C/5%CO2温箱,在完全RPMI培养基中培养和维持U937(一种人单核细胞细胞系)。
毒载体(Clontech)。经Fugene HD(Roche)用hOX40-MSCV质粒转染双向性Phoenix包装细胞。
随后用来自经转染双向性细胞的病毒上清液感染BT474细胞。通过分选表面gD+和GFP+细胞
来富集表达OX40的BT474细胞的集合。通过表达OX40的克隆的有限稀释分析,生成了表达
OX40的克隆。通过流式细胞术基于gD标签的表面表达和OX40表达水平选择表达高和低水平
的OX40的克隆。为了测定BT474克隆上的人OX40表达水平,将表达OX40的细胞用抗人OX40-
PE(克隆ACT35,BD Biosciences)染色,并在FACS Canto II(BD Bioscience)上测量细胞荧光,使用Flowjo软件(TreeStar)进行分析。
血回收外周白血球(PBMC),并通过Ficoll-Hypaque梯度离心(GE Healthcare)进一步富集。
GM-CSF存在下用完全RPMI培养基培养7至14天以生成单核细胞衍生的巨噬细胞(MDM)。
过纯化的Treg细胞。两种试剂盒均依照制造商的说明书使用。
为了测试抗OX40抗体1A7.gr.1的活性,将1A7.gr.1或同种型对照抗体抗CD20抗体(利妥昔
单抗)(均以200ng/ml)添加至幼稚CD4+T细胞,Treg细胞,和经过照射的CD32+CD80+L细胞的共培养物。将可溶性抗CD3以终浓度2.5ng/mL添加至细胞。在数据获取之前将测定板于37C/
5%CO2温箱维持6天。在第6天,通过CFSE染料稀释来描绘幼稚CD4T细胞的增殖,并在FACS Canto II(BD Bioscience)上测量细胞荧光,使用FlowJo软件(Treestar)进行分析。
的抗OX40,1A7.gr.1或抗HER2(曲妥珠单抗同种型对照)抗体(2倍连续稀释,1000至7.8ng/
ml)添加至U937细胞。在ADCP测定法中利用高或低表达OX40的BT474克隆作为靶细胞。将5,
000个OX40+BT474细胞添加至测定板中的U937细胞。将测定板于37C/5%CO2温箱温育4小
时。然后收获细胞,在FACS Canto II(BD Bioscience)上测量细胞荧光,并使用FlowJo软件(Treestar)进行分析。通过将GFP+PKH26+事件(即测量到的吞咽了BT474细胞的U937细胞)
除以所有GFP+事件(所有BT474细胞)来计算吞噬百分比。
Technology)自相同PBMC捐献人分离的。通过在完全RPMI-1640培养基中用PHA(5ug/ml)激
活T细胞48小时来诱导分离的CD4+T细胞上的OX40表达。对于ADCC测定法,使用Alemtuzumab(抗CD52单抗)作为阳性对照,并使用抗gD作为阴性对照。将激活的CD4+细胞(5,000个每孔)与可变量的1A7.gr.1或对照抗体(3倍连续稀释,10000至0.01ng/ml)一起在96孔组织培养
测定板中温育30分钟。随后,通过将NK细胞(50,000个细胞)添加至每个孔来启动ADCC测定
法。然后将测定板在37C/5%CO2温箱中另温育20小时。然后将共培养物用抗人CD4-FITC和
7AAD(BD Biosciences)染色。用PBS清洗后,通过流式细胞术(BD FACScaliber)获取数据,并通过Flowjo程序(TreeStar)进行分析。表达OX40的CD4 T细胞的杀伤(ADCC)频率定义为
CD4+7AAD+细胞对于总CD4T细胞的百分比。
CO2温箱维持24小时。然后,将抗CD20(同种型对照)或抗OX40激动性抗体1A7.gr.1添加至
BT474细胞。使用人NK细胞富集试剂盒(Stem Cell Technology)自血沉棕黄层PBMC分离来
自健康捐献人的原代人NK细胞,然后在抗CD20(利妥昔单抗同种型对照)或1A7.gr.1存在下
将50,000个纯化的NK细胞添加至装有BT474克隆的孔。将测定板温育24小时,之后添加
CellTiterGlo试剂以捕捉化学发光信号。通过将经过抗体处理的细胞的信号除以未经处理
的细胞的信号来计算经历抗OX40诱导的ADCC的细胞的百分比。减去来自NK单培养物的信号
以抵消来自NK细胞的背景信号。
失下通过抗CD3交联诱导幼稚CD4+T细胞增殖。将Treg细胞添加至幼稚T细胞培养物遏制抗
CD3诱导的幼稚T细胞增殖。单抗1A7.gr.1处理抑制调节T细胞的遏制功能(n=3,图6)。经由流式细胞术分析通过监测CFSE低群体测量幼稚T细胞增殖。这一结果证明单抗1A7.gr.1抑
制Treg细胞的遏制功能。
OX40高克隆的OX40表达比BT474-人OX40低克隆要高超过5倍,其中高-OX40克隆显示5243的
MFI(图8B)而低-OX40克隆显示994的MFI(图8A)。同种型对照抗体曲妥珠单抗具有10的MFI
(数据未显示)。
低水平的OX40的BT474克隆一起培养。OX40激动性抗体1A7处理以剂量依赖性方式诱导表达
低和高水平的hOX40的BT474-hOX40克隆的吞噬,如使用FACS测定(图9)。另外,使用BT474-hOX40-高克隆观察到比使用BT474-hOX4-低克隆更高水平的吞噬,提示OX40抗体介导的细
胞介导的吞噬依赖于靶细胞上的OX40表达水平(图9)。作为对比,曲妥珠单抗(也称作
Herceptin),即同种型对照抗体,只介导10%吞噬,如用BT474-hOX40高克隆显示的。这些数据证明单抗1A7.gr.1诱导表达OX40的靶细胞的吞噬,而且抗体依赖性细胞介导的吞噬的水
平与OX40水平有关联。
OX40激动性抗体1A7.gr.1处理在表达OX40的细胞中诱导ADCC(图10)。为了检测ADCC,实施
CellTiterGlo测定法。抗OX40激动性抗体1A7.gr.1处理在0.1ug/mL诱导显著的hOX40-
BT474-低细胞的ADCC,如通过降低的靶细胞存活力表现的。OX40激动性抗体1A7.gr.1处理
在0.1ug/ml导致甚至更加广泛的hOX40-BT474高细胞的ADCC。hOX40-BT474低和高克隆之间
ADCC的差异是统计学上显著的(p=0.0077)。作为对比,利妥昔单抗(对照)处理不改变高和低表达OX40的BT474克隆的二者的存活力。这些数据证明激动性OX40抗体1A7.gr.1能够在
体外介导表达OX40的细胞的杀伤。另外,表达高水平的OX40的细胞中ADCC的水平比表达低
水平的OX40的细胞中ADCC的水平显著更高。OX40在肿瘤内T细胞中高表达,而且人肿瘤内
Treg细胞表达高水平的人OX40。
合或可溶性形式添加至培养物。这项实验的结果显示于图4A。在板结合的抗CD3存在下,板结合的单抗1A7.gr.1共刺激CD4+效应T细胞增殖。作为对比,在板结合的抗CD3存在下以可
溶性形式提供1A7时共刺激活性被消除,水平与在板结合的抗CD3存在下用板结合的同种型
对照抗体观察到的水平相似。这些结果提示交联(例如通过将单抗1A7.gr.1粘附至板而提
供的)可能是效应T细胞的单抗1A7共刺激需要的。
的N连接的糖基化的位点)突变成甘氨酸(N297G)以防止抗体Fc结合Fc受体。这项实验的结
果显示于图4B。包含N297G突变的单抗1A7gr.1(IgG1)未能共刺激Teff细胞增殖。作为对比,野生型(未突变的)单抗1A7gr.1共刺激抗CD3诱导的Teff细胞增殖。结合图4A中所示结果,
这些结果证明OX40激动性单抗1A7gr.1的活性是交联依赖性的,需要Fc效应器功能来共刺
激效应T细胞。
型,将具有人IgG1Fc的单抗1A7.gr.1的活性与在人IgG4骨架上的单抗1A7gr.1的活性比较。
这项实验的结果显示于图5。单抗1A7gr.1-IgG1比单抗1A7gr.1-IgG4更加有力地共刺激抗
CD3诱导的效应T细胞增殖。这一结果指示包含人IgG1Fc的单抗1A7gr.1拥有比包含人
IgG4Fc的单抗1A7.gr.1更加有力的交联活性。
否诱导ADCC,通过用PHA刺激外周血CD4+T细胞并在人效应细胞存在下与单抗1A7.gr.1接触
来生成表达高水平的OX40的靶细胞。这项实验的结果显示于图7A。当NK细胞与经过刺激的
CD4+T细胞一起培养(以10个NK细胞:1个激活的T细胞的比率)时,单抗1A7.gr.1处理诱导表
达OX40的T细胞的ADCC。这一结果证明1A7.gr.1在表达高水平的OX40的T细胞上诱导ADCC。
由单抗1A7.gr.1诱导的消减不如通过阳性对照抗体Alemtuzumab(抗CD52单抗)处理诱导的
消减广泛。作为对比,阴性对照单抗抗gD(同种型对照)处理没有导致ADCC的诱导。
比较。这项实验的结果显示于图7B。单抗A7.gr.1(IgG1)处理诱导与由单抗1A7.gr.1(IgG4)诱导的ADCC的水平相比更大的表达OX40的CD4+T细胞的ADCC。
抗flag抗体购自Cell Signaling(产品目录号3768)。于37C/5%CO2温箱,在完全RPMI培养
基(补充有10%FBS(热灭活的)/青霉素/链霉素/谷氨酰胺/非必需氨基酸/55uMβME的RPMI-
1640)中培养和维持转基因Hut78-hOX40细胞(Hut78-hOX40,一种人T细胞系,为了人OX40表达进行逆转录病毒转导)。
后通过Flowjo程序(TreeStar)分析数据,并捕捉均值荧光强度(MFI)。选择单抗1A7.gr.1产生最大MFI的70%左右的量(200ng/mL)用于竞争测定法。以相似方式进行OX40L-flag结合
的滴定,只是将OX40L-flag自10ug/mL开始向下3倍滴定。
缓冲液中清洗细胞2次,然后添加10ug/mL抗flag-Alexa Fluor 555和200ng/mL单抗
1A7.gr.1-AlexaFluor647以测试OX40L和抗hOX40单抗1A7.gr.1之间的竞争。于4C温育30分
钟后,在清洗缓冲液中清洗细胞2次,接着在FACSCantoII流式细胞仪(BD)上获取数据。然后通过Flowjo程序(TreeStar)分析数据以捕捉1A7.gr.1结合的MFI。
flag还展现剂量依赖性的对Hut78-hOX40细胞的结合(图12B)。
予每只小鼠剂量体积5mL/kg(1mg/kg剂量处于0.2mg/mL的浓度;10mg/kg剂量处于2mg/mL的
浓度)。于给药后5分钟;1,3,8,和24小时;和2,4,7,10,14,21,和28天经心脏穿刺(每只动物
3个时间点;每个时间点3只动物)自每只动物收集血液样品(125-150μL)。没有为研究收集给药前样品。将样品收集入装有血清分离管的管,并如下所述进行加工。
预标记的0.5mL带帽的管。将样品保存在设置成维持-80℃的冰箱中直至分析。
间曲线下面积),AUCinf(外推至无穷的血清浓度对时间曲线下面积),Cmax/D(剂量标准化的Cmax),AUCinf/D(剂量标准化的AUCinf),CL(清除;剂量/AUCinf),Vss(稳态时的分配体积),和t1/2,λz(终末半衰期)。
CL(ml/kg/天) 6.1 0.2
Vc(ml/kg) 54.5 2.2
Vp(ml/kg) 76.4 4.5
CLD(ml/kg/天) 188 26.8
在小鼠中预期的,而且与典型的IgG1单克隆抗体的相似。
在静脉穿刺后首先收集那些样品,接着是FACS和PD样品。通过引流自特殊不锈钢笼盘收集
尿液。收集后,将样品转移至适宜实验室进行加工。为了血清加工血液样品,并对血清分析各种临床化学参数。
Austin,TX)测定细胞因子水平,这是一种基于珠的多路技术,能够同时量化多种细胞因子。
使用 MAP非人灵长动物细胞因子磁珠组试剂盒(EMD Millipore,
Billerica,MA)依照制造商的方案分析样品。标准品含有重组GCSF,GMCSF,IFNγ,IL1β,IL1ra,IL2,IL4,IL5,IL6,IL8,IL10,IL12/23p40,IL13,IL15,IL17A,IL18,MCP1,MIP1α,MIP1β,sCD40,TGFα,TNFα,和VEGF的混合物。标准曲线的范围,IL4为4.6-3000pg/mL;IL10和IL18为11.6-7500pg/mL;而所有其它细胞因子为2.3-1500pg/mL。将血浆样品1:3稀释,接着是96孔板中的三次连续1:2稀释,并添加对每种细胞因子特异性的抗体缀合的荧光珠的混
合物。将板于室温温育30分钟,接着于4℃温育过夜。次日,将生物素化的检测抗体的混合物添加至样品,并将板于室温温育1小时,接着与链霉亲合素-藻红蛋白一起温育30分钟。然后使用 FLEXMAP 仪器评估荧光信号,藻红蛋白信号的强度与存在的细胞因
子的量对应。自每种蛋白质的标准曲线的五参数拟合确定血清细胞因子浓度。
的)作为检测试剂。
混合物的适宜等分试样分发入96深孔板的指定孔。对于每只动物,转移100μL全血液样品,并混合入装有染色混合物的适宜孔。将经过染色的血液在黑暗中于环境温度温育最少30分
钟。于室温用1.8mL1X BD FACS裂解液(BD Biosciences)裂解红血球至少6分钟。将样品离
心,吸出并丢弃上清液。用1.8mL HBSS清洗细胞团粒两次。第二次清洗后,在300μL 1%低聚甲醛中重悬浮每份样品。将每份样品(200μL)转移至96孔U底板的适宜孔,在BD FACS Canto II流式细胞仪上获取。使用FACS Diva软件(BD Biosciences)实施数据分析。基于它们的
FSC/SSC概况来鉴定淋巴细胞,并以CD3+/SSC低门控T细胞。使用后续的CD3+T细胞的等级门控来鉴定和列举每种T细胞子集。使用荧光标记的在施用的测试物品存在下不结合OX40的
测试物品(抗OX40抗体)评估CD3+CD4+CD8-Th淋巴细胞上OX40的占据。使用一种无关的人源
化IgG1抗体作为1A7.gr.1的同种型对照。将Th细胞中在同种型门上阳性的级分归类为%
OX40+细胞。
1,15,29,和43天施用)。给主要研究动物指派第45天终末尸检。指派恢复尸检的动物在最后一剂后经历6周恢复,并在第85天尸检。安全性终点包括:临床和日常观察,临床病理,凝固,尿液分析,宏观和微观分析,毒动学(TK),抗治疗性抗体(ATA)滴度,CV安全性药理学,和神经学评估。药效学(PD)分析包括血清细胞因子,T细胞激活/增殖/消减,和OX40受体占据(外周和组织)。
将在每个给药后时间点为每只动物生成的数据与对应的研究前值以及对照值的范围比较。
继而评估升高或降低的程度以确定任何观察到的变化的潜在生物学意义。
的珠作为固体支持物。将标准品和样品添加至孔,而且存在的分析物(细胞因子)结合缀合
至颜色编码的珠的特异性捕捉抗体(每种颜色珠是对一种细胞因子特异性的)。测定法中的
检测系统是缀合至荧光蛋白R-藻红蛋白的链霉亲合素或链霉亲合素-藻红蛋白(链霉亲合
素-RPE),它与分析物特异性的生物素化检测抗体混合。在Luminex仪器中吸出每个微量板
孔的内容。通过监测珠的光谱特性和联合的RPE荧光的量,同时测定数种分析物的浓度。将样品离心以使碎片形成团粒。用200μL清洗缓冲液清洗96孔多重screen滤板的孔。然后将标准品,质量对照(QC)样品,和样品转移(25μL)至装有25μL测定缓冲液的适宜孔,接着添加25μL适宜抗体珠工作溶液。将板在设置成剧烈摇动的板摇床上于室温在黑暗中温育2小时(±
5分钟),然后用200μL清洗缓冲液清洗两次,接着将25μL检测抗体添加至每个孔。将板在设置成剧烈摇动的板摇床上于室温在黑暗中温育1小时(±2分钟)。然后,将25μL工作链霉亲
合素-RPE工作溶液添加至每个孔,并将板在设置成剧烈摇动的板摇床上于室温在黑暗中温
育30分钟(±1分钟)。用200μL清洗缓冲液清洗板2次后,将150μL鞘液添加至每个孔,并将板在设置成剧烈摇动的板摇床上在黑暗中于室温位于至少5分钟。在Luminex系统上读板。在
测定稀释剂中制备猴MCP-1的标准品,覆盖浓度范围37.500至6000pg/mL。测定法的LLOQ和
ULOQ为75.00至6000pg/mL。以理论浓度200,1000,和3200pg/mL在测定稀释剂中制备猴MCP-
1的QC样品。另外,内源QC(EQC)是分发的未稀释的(Plated Neat),而且在曲线的范围中。
升高,正如在抗原攻击缺失下预期的。
(图18)。在0.5和5mg/kg剂量水平在所有动物中检测到ATA,但是在30mg/kg剂量水平不然,伴有暴露和受体占据的丧失。在中等剂量动物中观察到MCP-1的瞬时升高(图19)。没有观察到外周T细胞的显著激活或增殖(图20),也没有观察到绝对外周T计数的任何显著降低。
两项研究中一致)。没有记录到药物相关器官重量变化,宏观,或微观发现。在0.5mg/kg和
5mg/kg(但非30mg/kg)剂量组的所有动物中检测到ATA,伴有暴露和受体占据的丧失。发现
1A7.gr.1以高亲和力(~0.45nM)结合人OX40,而且PK正如为典型的IgG1预期的且是与剂量
成比例的。这些投射至人CL=2.5mL/d/kg和t1/2=~3周。对组织或外周中的T细胞数目或激活状态没有观察到显著PD影响。外周T细胞没有显著激活或增殖和绝对外周T细胞计数没有
显著变化并不令人惊讶,因为OX40只在激活的T细胞上瞬时表达,而且健康食蟹猴会具有可忽略的激活的T细胞。
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