直接观察盐生草根系及周围环境盐分的方法

摘要

本发明涉及盐生草盐分直接观察的方法，提供了一种直接观察盐生草根系及周围环境盐分的方法。主要步骤包括：1.以琼脂为基质，培育盐生草无菌苗；2.待幼苗生长至2‑3个月，将琼脂包裹的盐生草无菌苗原封不动地取出；3.保留琼脂固定的根系，沿根系横切切片；4.以根系横截面为中心纵切切片；5.切片用液氮速冻，然后真空冷冻干燥；6.用电镜扫描，并通过能量色散X射线光谱仪测定不同NaCl处理下根系横截面和周围琼脂中盐分的重量百分比。该方法能准确直观地观察盐生草根系内部与周围环境中盐分的差异；过程操作简单，避免了外界环境的干扰，为研究不同植物对矿质元素的吸收，尤其是观察根系吸收特征提供了更为便捷有效的方法。

权利要求

1.一种直接观察盐生草根系及周围环境盐分的方法，其特征在于步骤为：

(1)以琼脂为基质，培育0-300mM NaCl处理下的盐生草无菌苗，培养基为Hoagland完全营养液，4-6g/L琼脂，pH为5.7-5.8；

(2)待步骤(1)的盐生草无菌苗生长至2-3个月，将琼脂包裹的盐生草无菌苗原封不动地取出，切去幼苗茎、叶部分，原样保留琼脂固定根系的状态；

(3)用双面刀片将步骤(2)琼脂包裹的盐生草无菌苗的琼脂固定根系从根尖往上0.5-

1.0cm处横切，保留固定根尖部分的琼脂，在1-2min内横切成厚度为0.2-0.5cm的切片；

(4)将步骤(3)获得的切片以根系横截面为中心纵切，留取琼脂厚度0.2-0.5cm的琼脂包裹根系横截面的切片，用镊子在1-2min之内将琼脂包裹根系横截面的小切片移入置有液氮的铝盒，速冻5-10min；

(5)液氮速冻后，在2-3min之内将步骤(4)装有小切片的铝盒放入冷冻干燥机，真空冷冻干燥12-18h，真空度为15-80pa，温度为-50℃；

(6)将步骤(5)所获小切片中根系横截面和周围琼脂进行电镜扫描观察，利用能量色散X射线光谱仪分别测定不同NaCl处理下根系横截面和周围琼脂中Na的重量百分比。

2.如权利要求1所述的直接观察盐生草根系及周围环境盐分的方法，其特征在于步骤(1)所述无菌苗的培养所用试管为平口试管，每个试管中50mL固体培养基，每管10-15粒种子。

3.如权利要求1所述的直接观察盐生草根系及周围环境盐分的方法，其特征在于步骤(4)所述用镊子将琼脂包裹根系横截面切片移入铝盒时，应从包裹根系横截面的琼脂小块周围轻轻夹取，不能接触根系横截面。

4.如权利要求1所述的直接观察盐生草根系及周围环境盐分的方法，其特征在于步骤(6)所述切片电镜扫描和能量色散X射线光谱仪分析时，分别扫描同一切块的根系横截面和周围琼脂。

说明书

直接观察盐生草根系及周围环境盐分的方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种盐生植物盐分观察的方法，特别是直接观察盐生草根系及周围环境盐分的方法。

背景技术

[0002] 盐碱土是地球上分布最广泛的一种土壤类型，约占陆地总面积的25％，在我国，盐碱地的面积为3400多万公顷，其主要分布在华北平原，东北平原，西北内陆及滨海地区。盐生草(Halogetonglomeratus)为一年生稀盐盐生植物，通过自身叶片较强的聚盐特性使得土壤含盐量降低，进而改良盐碱地土壤、提高盐碱地土壤肥力水平。在盐胁迫下，盐生草根系内部盐分含量随外界环境变化呈现一定的规律性，其主要是通过自身调节来实现对盐分的限制性吸收，维持胁迫环境下植株的正常生长发育。这种根系对盐分的限制性吸收特性是盐生草耐盐性的重要特征。目前并没有准确直观的方法来观察盐生植物根系内部与外界环境中盐分差异，尤其是盐生草根系对盐分限制性吸收的研究尚未见任何报道，所以，提供一种直接观察盐生草根系及周围环境盐分的方法至关重要。

发明内容

[0003] 本发明的目的在于避免现有技术的不足之处而提供一种直接观察盐生草根系及周围环境盐分的方法，以解决无法提供直接证据来证实盐生草根系对盐分的限制性吸收特性。同时，本方法为研究不同植物对矿质元素的吸收，尤其是观察根系对矿质元素吸收特征提供了更为便捷有效的方法。

[0004] 为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种直接观察盐生草根系及周围环境盐分的方法，其主要特点在于步骤为：

[0005] (1)以琼脂为基质，培育0-300mM NaCl处理下的盐生草无菌苗，培养基为Hoagland完全营养液，4-6g/L琼脂，pH为5.7-5.8；

[0006] (2)待步骤(1)的盐生草无菌苗生长至2-3个月，将琼脂包裹的盐生草无菌苗原封不动地取出，切去幼苗茎、叶部分，原样保留琼脂固定根系的状态；

[0007] (3)用双面刀片将步骤(2)琼脂包裹的盐生草无菌苗的琼脂固定根系从根尖往上0.5-1.0cm处横切，保留固定根尖部分的琼脂，在1-2min内横切成厚度为0.2-0.5cm的切片；
(4)将步骤(3)获得的切片以根系横截面为中心纵切，留取琼脂厚度0.2-0.5cm的琼脂包裹根系横截面的切片，用镊子在1-2min之内将琼脂包裹根系横截面的小切片移入置有液氮的铝盒，速冻5-10min；

[0008] (5)液氮速冻后，在2-3min之内将步骤(4)装有小切片的铝盒放入冷冻干燥机，真空冷冻干燥12-18h，真空度为15-80pa，温度为-50℃；

[0009] (6)将步骤(5)所获小切片中根系横截面和周围琼脂进行电镜扫描观察，利用能量色散X射线光谱仪分别测定不同NaCl处理下根系横截面和周围琼脂中Na的重量百分比。

[0010] 所述的直接观察盐生草根系及周围环境盐分的方法，其步骤(1)所述无菌苗的培养所用试管为平口试管，每个试管中50mL固体培养基，每管10-15粒种子。

[0011] 所述的直接观察盐生草根系及周围环境盐分的方法，其步骤(4)所述用镊子将琼脂包裹根系横截面的切片移入铝盒时，应从包裹根系横截面的琼脂小块周围轻轻夹取，不能接触根系横截面。

[0012] 所述的直接观察盐生草根系及周围环境盐分的方法，其步骤(6)所述切片电镜扫描和能量色散X射线光谱仪分析时，分别扫描同一切块的根系横截面和周围琼脂。

[0013] 本发明的有益效果如下：

[0014] 1.选用2-3个月的无菌苗，其根系生长发育已经基本完成，表皮坚硬，横切时对根系内部结构造成的影响较小，同时，无菌苗生长环境容易控制，外界环境对其造成的干扰较小。

[0015] 2.将切好琼脂包裹根系横截面的小块用液氮速冻，使根系横截面保持了原有的生长状态，对研究更具有说服力。

[0016] 3.液氮速冻后的小块真空冷冻12-18h，只是最大限度地将其内部的水分抽干，其它成分与含量不发生变化，电镜扫描并结合利用能量色散X射线光谱仪测定的结果准确可信，对最终结果影响较小。

[0017] 4.通过扫描根系横截面和周围琼脂并且对根系横截面Na的重量百分比与周围琼脂中Na的重量百分比进行分析，能够直接观察盐生草根系内部与周围环境中NaCl的差异，并且操作技术简单易行，实验结果一目了然，为研究不同植物对矿质元素的吸收尤其是观察其吸收特征提供了方法基础。附图说明：

[0018] 图1生长2个月的盐生草试管苗图片；

[0019] 图2A ck处理下根系横截面与周围琼脂的电镜扫描图片；

[0020] 图2B 50mM NaCl处理下根系横截面与周围琼脂的电镜扫描图片；

[0021] 图2C 100mM NaCl处理下根系横截面与周围琼脂的电镜扫描图片；

[0022] 图2D 150mM NaCl处理下根系横截面与周围琼脂的电镜扫描图片；

[0023] 图2E 200mMNaCl处理下根系横截面与周围琼脂的电镜扫描图片；

[0024] 图2F 300mMNaCl处理下根系横截面与周围琼脂的电镜扫描图片；

[0025] 图中：a:根系横截面；b:外部环境(琼脂)；

[0026] 图3A ck处理下根系横截面与周围琼脂的光谱图；

[0027] 图3B 50mM NaCl处理下根系横截面与周围琼脂的光谱图；

[0028] 图3C 100mM NaCl处理下根系横截面与周围琼脂的光谱图；

[0029] 图3D 150mM NaCl处理下根系横截面与周围琼脂的光谱图；

[0030] 图3E 200mM NaCl处理下根系横截面与周围琼脂的光谱图；

[0031] 图3F 300mM NaCl处理下根系横截面与周围琼脂的光谱图；

[0032] 图3中：a:根系横截面；b:外部环境(琼脂)；

[0033] 图4不同处理下根系横截面Na的重量百分比与周围琼脂中Na的重量百分比分析图。

具体实施方式

[0034] 以下结合实施例对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。下面对本发明的内容进行详细的说明。

[0035] 实施例1：一种直接观察盐生草根系及周围环境盐分的方法，其主要特点在于步骤为：(1)以琼脂为基质，培育0-300mM NaCl处理下的盐生草无菌苗，培养基为Hoagland完全营养液，4-6g/L琼脂，pH为5.7-5.8；

[0036] (2)待步骤(1)的盐生草无菌苗生长至2-3个月，将琼脂包裹的盐生草无菌苗原封不动地取出，切去幼苗茎、叶部分，原样保留琼脂固定根系的状态；

[0037] (3)用双面刀片将步骤(2)琼脂包裹的盐生草无菌苗的琼脂固定根系从根尖往上0.5-1.0cm处横切，保留固定根尖部分的琼脂，在1-2min内横切成厚度为0.2-0.5cm的切片；

[0038] (4)将步骤(3)获得的切片以根系横截面为中心纵切，留取琼脂厚度0.2-0.5cm的琼脂包裹根系横截面的切片，用镊子在1-2min之内将琼脂包裹根系横截面的小切片移入置有液氮的铝盒，速冻5-10min；

[0039] (5)液氮速冻后，在2-3min之内将步骤(4)装有小切片的铝盒放入冷冻干燥机，真空冷冻干燥12-18h，真空度为15-80pa，温度为-50℃；

[0040] (6)将步骤(5)所获小切片中根系横截面和周围琼脂进行电镜扫描观察，利用能量色散X射线光谱仪分别测定不同NaCl处理下根系横截面和周围琼脂中Na的重量百分比。

[0041] 实施例2：一种直接观察盐生草根系及周围环境盐分的方法，其主要特点在于步骤为：

[0042] (1)以琼脂为基质，培育0-300mM NaCl处理下的盐生草无菌苗，培养基为Hoagland完全营养液，4-6g/L琼脂，pH为5.7-5.8；

[0043] (2)待步骤(1)的盐生草无菌苗生长至2-3个月，将琼脂包裹的盐生草无菌苗原封不动地取出，切去幼苗茎、叶部分，原样保留琼脂固定根系的状态；

[0044] (3)用双面刀片将步骤(2)琼脂包裹的盐生草无菌苗的琼脂固定根系从根尖往上0.5-1.0cm处横切，保留固定根尖部分的琼脂，在1-2min内横切成厚度为0.2-0.5cm的切片；

[0045] (4)将步骤(3)获得的切片以根系横截面为中心纵切，留取琼脂厚度0.2-0.5cm的琼脂包裹根系横截面的切片，用镊子在1-2min之内将琼脂包裹根系横截面的小切片移入置有液氮的铝盒，速冻5-10min；

[0046] (5)液氮速冻后，在2-3min之内将步骤(4)装有小切片的铝盒放入冷冻干燥机，真空冷冻干燥12-18h，真空度为15-80pa，温度为-50℃；

[0047] (6)将步骤(5)所获小切片中根系横截面和周围琼脂进行电镜扫描观察，利用能量色散X射线光谱仪分别测定不同NaCl处理下根系横截面和周围琼脂中Na的重量百分比；

[0048] 其步骤(1)所述无菌苗的培养所用试管为平口试管，每个试管中50mL固体培养基，每管10-15粒种子。

[0049] 其步骤(4)所述用镊子将琼脂包裹根系横截面的切片移入铝盒时，应从包裹根系横截面的琼脂小块周围轻轻夹取，不能接触根系横截面。

[0050] 其步骤(6)所述切片电镜扫描和能量色散X射线光谱仪分析时，分别扫描同一切块的根系横截面和周围琼脂。

[0051] 实施例3：见图1至图4，一种直接观察盐生草根系和周围环境盐分的方法，其步骤为：

[0052] (1)培育0-300mM NaCl处理下的盐生草无菌苗，培养基为Hoagland完全营养液，4-6g/L琼脂，NaCl浓度为0，50mM，100mM，150mM，200mM，300mM，其中0为ck，pH为5.7-5.8；

[0053] (2)待步骤(1)的盐生草无菌苗生长至2-3个月，将琼脂包裹的盐生草无菌苗原封不动地取出，切去幼苗茎、叶部分，原样保留琼脂固定根系的状态；

[0054] (3)用双面刀片将步骤(2)琼脂包裹的盐生草无菌苗的琼脂固定根系从根尖往上0.5-1.0cm处横切，保留固定根尖部分的琼脂，在1-2min内横切成厚度为0.2-0.5cm的切片；；

[0055] (4)将步骤(3)获得的切片以根系横截面为中心纵切，留取琼脂厚度0.2-0.5cm的琼脂包裹根系横截面的切片，用镊子在1-2min之内将琼脂包裹根系横截面的小切片移入置有液氮的铝盒，速冻5-10min；

[0056] (5)液氮速冻后，在2-3min之内将步骤(4)装有小切片的铝盒放入冷冻干燥机，真空冷冻干燥12-18h，真空度为15-80pa，温度为-50℃；

[0057] (6)将经过上述步骤(5)所获小切片中根系横截面和周围琼脂进行电镜扫描观察，利用能量色散X射线光谱仪分别测定不同处理下根系横截面和周围琼脂中Na的重量百分比。

[0058] 将0-300mM NaCl处理下根系横截面Na的重量百分比与周围琼脂中Na的重量百分比进行分析，得出随着NaCl浓度的升高，根系横截面Na的重量百分比先升高，然后趋于稳定，而其生长的外界固体培养基中Na的重量百分比一直升高，并且外界固体培养基中Na的重量百分比升高的幅度更大。

[0059] 步骤(1)中所述的无菌苗的培养选用Hoagland完全营养液+4-6g/L琼脂+NaCl(0，50mM，100mM，150mM，200mM和300mM)，0为ck，pH为5.7-5.8，所用试管为高12cm，直径3.7cm的平口试管，每个试管中50mL固体培养基，10-15粒种子。

[0060] 步骤(2)所述的将琼脂包裹的盐生草无菌苗原封不动地取出时，首先要将试管倾斜，使得培养基与植株一起倒出，置于干净的白纸上，然后切去幼苗茎、叶部分，原样保留琼脂固定的根系的状态；

[0061] 步骤(3)所述的横切根系时，刀片要锋利，切割的部位尽量一致，从根尖往上0.5-1.0cm处为根毛区，是吸收养分的主要部位。

[0062] 步骤(4)所述的铝盒要用蒸馏水冲洗干净，并且烘干，其标记相应地为ck，50，100，150，200，300，用镊子将琼脂包裹根系横截面的小块移入铝盒时，应从包裹根系横截面的琼脂小块周围轻轻夹取，不能接触根系横截面。

[0063] 在步骤(5)所述的冷冻干燥机要提前真空制冷30min，然后将铝盒放入冷冻干燥机，真空度为15-80Pa，温度为-50℃，真空冷冻12-18h。

[0064] 步骤(6)所述电镜扫描时，分别扫描根系横截面和周围琼脂，因为根系横截面是将完整的根系横切，液氮速冻后得到的，其特性与植株本身的特性一致，足以代表根系内部，周围琼脂则代表外界环境。

[0065] 所述的将0-300mM NaCl处理下根系横截面Na的重量百分比与周围琼脂中Na的重量百分比进行分析时，得出随着NaCl浓度的升高，根系横截面Na的重量百分比先升高，然后趋于稳定，而其生长的外界固体培养基中Na的重量百分比一直升高，并且外界固体培养基中Na的重量百分比升高的幅度更大。但是，外界NaCl浓度指能使盐生草正常完成生活史的浓度，并不是盐生草的致死浓度。

[0066] 所述的将不同处理下根系横截面Na的重量百分比与周围琼脂中Na的重量百分比进行分析时，ck条件下，根系横截面与周围琼脂中出现一定量的Na的重量百分比，是因为Hoagland完全营养液的铁盐中含有少量Na+。

[0067] 实施例4：见图1至图4，一种直接观察盐生草根系及周围环境盐分的方法，培育无菌苗，培养基为Hoagland完全营养液+4.5g/L琼脂+NaCl(0，50mM，100mM，150mM，200mM和300mM)，0为ck，pH为5.8，每个试管中50mL固体培养基，种12粒种子，每个处理设置3个重复，待其生长2个月，将包裹盐生草根系的琼脂从根尖往上0.5cm处横切，保留固定根尖部分的琼脂，在2min内将琼脂切片继续横切成厚度为0.5cm的切片，然后以切片的根系横截面为中心纵切，留取琼脂厚度0.5cm的琼脂包裹根系横截面的切片，迅速移入铝盒，液氮速冻5min，再将铝盒放入提前真空制冷好的冷冻干燥机(FD-1B-5，北京博医康)，真空度为80Pa，温度为-50℃，真空冷冻16h，最后扫描电镜(JSM-5600LV，日本JEOL公司)对不同处理下根系横截面和周围琼脂进行扫描，结合利用能量色散X射线光谱仪(EDX-9100，日本日立公司)测定其含量并进行分析。

[0068] 结果：扫描电镜下能看到理想的根系横截面，并且根系横截面的Na的重量百分比(wt％)依次为0.06，0.72，1.53，2.18，2.18和2.25。周围琼脂中Na的重量百分比(wt％)依次为0.07，1.01，2.76，3.77，5.03和5.73。随着NaCl浓度的升高，根系横截面Na的重量百分比先升高，然后趋于稳定，而其生长的外界固体培养基中Na的重量百分比一直升高，并且外界固体培养基中Na的重量百分比升高的幅度更大。

[0069] 实施例5：见图1至图4，一种直接观察盐生草根系和周围环境盐分的方法，培育无菌苗，培养基为Hoagland完全营养液+5g/L琼脂+NaCl(0，50mM，100mM，150mM，200mM和300mM)，0为ck，pH为5.8，每个试管中50mL固体培养基，种10粒种子，每个处理设置3个重复，待其生长2个月，将包裹盐生草根系的琼脂从根尖往上0.7cm处横切，保留固定根尖部分的琼脂，在2min内将琼脂切片继续横切成厚度为0.4cm的切片，以切片的根系横截面为中心纵切，留取琼脂厚度0.5cm的琼脂包裹根系横截面的切片，然后迅速移入铝盒，液氮速冻4min，再将铝盒放入提前真空制冷好的冷冻干燥机(FD-1B-5，北京博医康)，真空度为80Pa，温度为-50℃，真空冷冻14h，最后扫描电镜(JSM-5600LV，日本JEOL公司)对不同处理下根系横截面和周围琼脂进行扫描，结合利用能量色散X射线光谱仪(EDX-9100，日本日立公司)测定其含量并进行分析。

[0070] 结果：扫描电镜下能看到理想的根系横截面，并且根系横截面的Na的重量百分比(wt％)依次为0.05，0.72，1.54，2.17，2.18和2.20。周围琼脂中Na的重量百分比(wt％)依次为0.06，1.02，2.76，3.78，5.00和5.91。随着NaCl浓度的升高，根系横截面Na的重量百分比先升高，然后趋于稳定，而其生长的外界固体培养基中Na的重量百分比一直升高，并且外界固体培养基中Na的重量百分比升高的幅度更大。

[0071] 实施例6：一种直接观察盐生草根系和周围环境盐分的方法，培育无菌苗，培养基为Hoagland完全营养液+4g/L琼脂+NaCl(0，50mM，100mM，150mM，200mM和300mM)，0为ck，pH为5.8，每个试管中50mL固体培养基，种15粒种子，每个处理设置3个重复，待其生长3个月，将包裹盐生草根系的琼脂从根尖往上1.0cm处横切，保留固定根尖部分的琼脂，在2min内将琼脂切片继续横切成厚度为0.5cm的切片，以切片的根系横截面为中心纵切，留取琼脂厚度0.4cm的琼脂包裹根系横截面的切片，然后迅速移入铝盒，液氮速冻5min，再将铝盒放入提前真空制冷好的冷冻干燥机(FD-1B-5，北京博医康)，真空度为80Pa，温度为-50℃，真空冷冻18h，最后扫描电镜(JSM-5600LV，日本JEOL公司)对不同处理下根系横截面和周围琼脂进行扫描，结合利用能量色散X射线光谱仪(EDX-9100，日本日立公司)测定其含量并进行分析。

[0072] 结果：扫描电镜下能看到理想的根系横截面，并且根系横截面的Na的重量百分比(wt％)依次为0.06，0.71，1.54，2.19，2.18和2.23，周围琼脂中Na的重量百分比(wt％)依次为0.07，1.00，2.77，3.77，5.03和5.80。随着NaCl浓度的升高，根系横截面Na的重量百分比先升高，然后趋于稳定，而其生长的外界固体培养基中Na的重量百分比一直升高，并且外界固体培养基中Na的重量百分比升高的幅度更大。

[0073] 试验例：在观察盐生草根系及周围环境盐分差异的过程中，无菌苗的大小，根系横切的部位，真空冷冻的时间起到了关键作用，本试验通过对上述三种关键因素进行优化，最终确定了最佳的测定盐生草根系限制性吸收NaCl的方法。

[0074] 1.最佳无菌苗的选择:设置三个时间处理，分别是处理A：20d，处理B：40d，处理C：60d的无菌苗，培养基为Hoagland完全营养液+5g/L琼脂+NaCl(0，50mM，100mM，150mM，200mM和300mM)，0为ck，pH为5.8，每个试管中50mL固体培养基，种13粒种子，每个处理设置3个重复，生长时间分别为A，B，C，将培养基连同植株一起取出，选取生长健壮的植株，将包裹盐生草根系的琼脂从根尖往上0.5cm处横切，保留固定根尖部分的琼脂，在2min内将琼脂切片继续横切成厚度为0.5cm的切片，以切片的根系横截面为中心纵切，留取琼脂厚度0.5cm的琼脂包裹根系横截面的切片，然后迅速移入铝盒，液氮速冻5min，再将铝盒放入提前真空制冷好的冷冻干燥机，真空度为80Pa，温度为-50℃，真空冷冻18h，最后扫描电镜对不同处理下根系横截面和周围琼脂进行扫描，利用能量色散X射线光谱仪测定其含量并进行分析。

[0075] 结果发现：处理A和处理B在电镜下观察不到理想的根系横截面，并且测定得到的数据没有规律性，处理C在电镜下观察到理想的根系横截面，并且根系横截面的Na的重量百分比(wt％)依次为0.05，0.71，1.54，2.18，2.17和2.24，周围琼脂中Na的重量百分比(wt％)依次为0.07，1.00，2.73，3.80，5.00和5.81。即处理C条件下，随着NaCl浓度的升高，根系横截面Na的重量百分比先升高，然后趋于稳定，而其生长的外界固体培养基中Na的重量百分比一直升高，并且外界固体培养基中Na的重量百分比升高的幅度更大。

[0076] 2.最佳根系横切部位的选择：通过实验1优选出的最佳无菌苗大小的基础上，对根系横切部位进行研究，设置3个横切位置，分别是处理A：从根尖往上0.6cm，处理B：从根尖往上2cm，处理C：从根尖往上0.2cm。选取生长2个月的无菌苗，培养基为Hoagland完全营养液+5g/L琼脂+NaCl(0，50mM，100mM，150mM，200mM和300mM)，0为ck，pH为5.8，每个试管中50mL固体培养基，种13粒种子，每个处理设置3个重复，将培养基连同植株一起取出，选取生长健壮的植株，将包裹盐生草根系的琼脂从根尖往上A，B，C处横切，保留固定根尖部分的琼脂，在
2min内将琼脂切片继续横切成厚度为0.5cm的切片，以切片的根系横截面为中心纵切，留取琼脂厚度0.5cm的琼脂包裹根系横截面的切片，然后迅速移入铝盒，液氮速冻5min，再将铝盒放入提前真空制冷好的冷冻干燥机，真空度为80Pa，温度为-50℃，真空冷冻18h，最后扫描电镜对不同处理下根系横截面和周围琼脂进行扫描，利用能量色散X射线光谱仪测定其含量并进行分析。

[0077] 结果发现：处理B和处理C在电镜下能观察到理想的根系横截面，但是测定得到的数据没有规律性，而处理A在电镜下观察到理想的根系横截面，并且根系横截面的Na的重量百分比(wt％)依次为0.06，0.70，1.60，2.20，2.21和2.25，周围琼脂中Na的重量百分比(wt％)依次为0.07，1.02，2.78，3.80，5.04和5.73，即处理A条件下，随着NaCl浓度的升高，根系横截面Na的重量百分比先升高，然后趋于稳定，而其生长的外界固体培养基中Na的重量百分比一直升高，并且外界固体培养基中Na的重量百分比升高的幅度更大。

[0078] 3.最适真空冷冻时间的选择:通过实验2优选出的最佳根系横切部位的基础上，对真空冷冻时间进行了研究，设置三个时间处理，分别是处理A：5h，处理B：8h，处理C：16h。选取生长2个月的无菌苗，培养基为Hoagland完全营养液+5g/L琼脂+NaCl(0，50mM，100mM，150mM，200mM和300mM)，0为ck，pH为5.8，每个试管中50mL固体培养基，种植13粒种子，每个处理设置3个重复，将培养基连同植株一起取出，选取生长健壮的植株，将包裹盐生草根系的琼脂从根尖往上0.5cm处横切，保留固定根尖部分的琼脂，在2min内将琼脂切片继续横切成厚度为0.5cm的切片，以切片的根系横截面为中心纵切，留取琼脂厚度0.5cm的琼脂包裹根系横截面的切片，然后迅速移入铝盒，液氮速冻5min，再将铝盒放入提前真空制冷好的冷冻干燥机，真空度为80Pa，温度为-50℃，真空冷冻时间A，B，C，最后扫描电镜对不同处理下根系横截面和周围琼脂进行扫描，利用能量色散X射线光谱仪测定其含量并进行分析。

[0079] 结果发现：处理A和处理B在电镜下能观察到理想的根系横截面，但是测定得到的数据没有规律性，而处理C在电镜下能观察到理想的根系横截面，并且根系横截面的Na的重量百分比(wt％)依次为0.05，0.71，1.54，2.17，2.17和2.20，周围琼脂中Na的重量百分比(wt％)依次为0.06，1.02，2.75，3.77，5.02和5.74。即处理C条件下，随着NaCl浓度的升高，根系横截面Na的重量百分比先升高，然后趋于稳定，而其生长的外界固体培养基中Na的重量百分比一直升高，并且外界固体培养基中Na的重量百分比升高的幅度更大。

[0080] 上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。