盐酸纳美芬和还原型谷胱甘肽两种药效成分的药物组合物

摘要

本发明涉及一种含有盐酸纳美芬和还原型谷胱甘肽的药物组合物，所述药物组合物含有两种药效成分，分别为0.06mg/ml~0.2mg/ml盐酸纳美芬、50mg/ml~100mg/ml还原型谷胱甘肽，另外还含有0.01mg/ml~0.05mg/ml门冬氨酸，并且所述药物组合物的PH为3.0~4.6。本发明提供的上述含有盐酸纳美芬和还原型谷胱甘肽的药物组合物，在治疗重度酒精中毒方面产生极好的协同作用，能够大大缩短清醒时间，同时产品具有很好的稳定性，相关杂质能控制在极低水平，安全性更高。

权利要求

1.一种含有盐酸纳美芬和还原型谷胱甘肽的药物组合物，其特征在于所述药物组合物的组成为：。

2.根据权利要求1所述的含有盐酸纳美芬和还原型谷胱甘肽的药物组合物，其特征在于所述药物组合物制备方法为：在充氮条件下，取盐酸纳美芬加入全量 20％的注射用水， 搅拌至完全溶解， 加入门冬氨酸搅拌使溶解；取还原型谷胱甘肽加入全量50％的注射用水，搅拌使溶解，两者混合，再加入剩余30％的注射用水，混匀，用盐酸或氢氧化钠溶液调节pH，另加入处方量 0.05％ (w/v)的活性炭，在 60℃保温搅拌吸附 30min，粗滤，脱炭，用 0.22μm滤膜过滤后分装，充氮，封口，于 121℃下热压灭菌12min。

说明书

盐酸纳美芬和还原型谷胱甘肽两种药效成分的药物组合物

技术领域

[0001] 本发明涉及药物组合物，更具体地，涉及一种稳定的含有盐酸纳美芬和还原型谷胱甘肽两种药效成分的药物组合物及其制备方法。

背景技术

[0002] 盐酸纳美芬是继纳洛酮和纳曲酮后合成的新一代纯阿片受体拮抗剂，由美国Ivax/Ohmeda公司研发，于1995年首次被美国FDA批准上市，上市剂型为注射剂。目前，盐酸纳美芬已成为纳洛酮的替代品，与纳洛酮和纳曲酮相比，其具有作用时间长、口服生物利用度高、用药剂量小、安全范围宽等优点。盐酸纳美芬临床用途广泛，已用于拮抗麻醉性镇痛剂引起的呼吸抑制、镇静和低血压等症状，并应用于酒精中毒和海洛因依赖等的治疗。

[0003] 还原型谷胱甘肽，商品名称为阿拓莫兰，是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸通过肽键缩合而成的三肽化合物，含巯基，通过巯基和体内自由基结合，可以转化为容易代谢的酸性物质，从而促进自由基的排泄。急性重症酒精中毒患者体内酒精经代谢后产生大量自由基，导致体内还原型谷胱甘肽减少，氧化型谷胱甘肽增加，及时补充还原型谷胱甘肽，清除自由基，清除酒精，是阿拓莫兰治疗急性重症酒精中毒的主要作用机制。

[0004] 目前，已有报道在急性重度酒精中毒的常规治疗基础上，联合应用盐酸纳美芬和还原型谷胱甘肽具有协同作用，能够缩短患者的意识清醒时间和症状消失时间，并减轻其
它临床症状，但是，尚没有两种药物剂量配比和疗效之间的关系研究，市场上也没有将此两种药物成分制备成的复方制剂，这将导致临床应用时药物剂量不可调控，并且每次使用均
需要现用现配，十分不便。

[0005] 但是，盐酸纳美芬和还原型谷胱甘肽的复方制剂并不容易制得，本发明申请人研究发现，当两种药物制备成复方制剂时，相关杂质较单方制剂时增长更多，制剂的稳定性较差，故而找到一种有效的技术手段对相关杂质进行控制对保证产品疗效和安全性是十分必
要的。

[0006] 因此，迫切需要一种含有盐酸纳美芬和还原型谷胱甘肽的稳定的药物组合物以满足临床急救应用。

发明内容

[0007] 本发明的目的在于提供一种稳定的含有盐酸纳美芬和还原型谷胱甘肽的药物组合物。

[0008] 本发明的药物组合物中，含有两种药效成分，分别为盐酸纳美芬0.06mg/ml～0.2mg/ml、还原型谷胱甘肽50mg/ml～100mg/ml，另外还含有门冬氨酸0.01 mg/ml 
~
0.05mg/ml，并且所述药物组合物的pH为3.0-4.6。

[0009] 优选药物组合物包含盐酸纳美芬0.1mg/ml、还原型谷胱甘肽80mg/ml。

[0010] 优选药物组合物的pH为3.8-4.2。

[0011] 本发明还提供了一种具体的含有盐酸纳美芬和还原型谷胱甘肽的药物组合物，所述药物组合物的组成为：

[0012] 。

[0013] 本发明进一步提供了一种所述药物组合物的制备方法：在充氮条件下，取盐酸纳美芬加入全量 20％的注射用水， 搅拌至完全溶解， 加入门冬氨酸搅拌使溶解；取还原型谷胱甘肽加入全量50％的注射用水，搅拌使溶解，两者混合，再加入剩余30％的注射用水，混匀，用盐酸或氢氧化钠溶液调节pH，另加入处方量 0.05％ (w/v)的活性炭，在 60℃保温搅拌吸附 30min，粗滤，脱炭，用 0.22μm滤膜过滤后分装，充氮，封口，于 121℃下热压灭菌
12min。

[0014] 本发明申请人研究发现，当两种药效成分，即盐酸纳美芬和还原型谷胱甘肽的重量比在1: 1667～1: 250的范围内时，两者的协同作用最强，疗效最好，尤其当两者的重量比为1: 800时，药理实验中急性重度酒精中毒小鼠中毒持续时间最短，症状改善最为明显，配制成注射液时，具体含量则为盐酸纳美芬0.06mg/ml～0.2mg/ml、还原型谷胱甘肽50mg/
ml～100mg/ml，优选盐酸纳美芬0.1mg/ml、还原型谷胱甘肽80mg/ml。然而，由于上述两种药效成分稳定性均较差，例如盐酸纳美芬中的酚羟基容易氧化变成双纳美芬，还原型谷胱甘
肽中的巯基为活性极端，除了容易被氧化以外，还容易和其他药物反应，因此当将盐酸纳美芬和还原型谷胱甘肽制备成复方注射液时，本申请人发现，其杂质双纳美芬（以下称为杂质A）和氧化型谷胱甘肽（以下称为杂质B）的含量均比单方制剂时更高，为1.4%和1.7%（单方制剂时约为0.8%和1.1%），产品稳定性差，极大地影响了产品的安全性。

[0015] 为了克服上述技术问题，本发明申请人曾试图在注射液中添加抗氧剂如亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、维生素C、叔丁基羟基茴香醚等；或者添加螯合剂如乙二胺四乙酸二钠、乙二胺四乙酸四钠等；或者添加缓冲液如柠檬酸-柠檬酸钠等；或者在注射液制备过程中控制在线冲氮的程度和效果，但收效甚微，仍然难以将杂质A和杂质B均控制在1.0%以下。

[0016] 本发明申请人经过大量实验研究意外地发现，门冬氨酸对于盐酸纳美芬和还原型谷胱甘肽复方注射液具有极好的稳定作用，特别是当门冬氨酸的量在0.01 mg/ml 
~
0.05mg/ml范围，并且同时注射液的PH值为3.0-4.6时，能够大幅降低产品杂质A和杂质B的
含量，将其均控制在0.5%以下；此外，经HPLC分析，注射液中，杂质B的含量往往较高，达到
0.44%，但当注射液的PH值为3.8-4.2时，其值则可控制在0.2%以下，优选本发明所述组合物的PH为3.8-4.2。

[0017] 本发明还提供了一种具体的含有盐酸纳美芬和还原型谷胱甘肽的药物组合物，所述药物组合物的组成为：盐酸纳美芬（以纳美芬计）0.5mg，还原型谷胱甘肽400mg，门冬氨酸
0.25mg，PH调节剂（盐酸或氢氧化钠）适量调至PH为4.0，注射用水5ml，该组成制备的注射液其杂质A和杂质B均控制在最低水平。

[0018] 本发明还提供了一种具体的所述药物组合物的制备方法：在充氮条件下，取盐酸纳美芬加入全量 20％的注射用水，搅拌至完全溶解，加入门冬氨酸搅拌使溶解；取还原型谷胱甘肽加入全量50％的注射用水，搅拌使溶解，两者混合，再加入剩余30％的注射用水，混匀，用盐酸或氢氧化钠溶液调节pH，另加入处方量 0.05％ (w/v)的活性炭，在 60℃保温搅拌吸附 30min，粗滤，脱炭，用 0.22μm滤膜过滤后分装，充氮，封口，于 121℃下热压灭菌
12min。相较于其他制备方法，该方法采用了特定的配制比例和顺序，能够最大限度的发挥门冬氨酸的稳定性作用，在保证产品杂质A和杂质B控制在最低水平的前提下，其加入的门
冬氨酸剂量最小，稳定效果最好。

[0019] 本发明所述杂质A和杂质B的含量，是通过高效液相色谱法进行检测，具体方法如下。

[0020] 【杂质A】取本品，作为供试品溶液；精密量取1ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；取盐酸纳美芬对照品适量，加0.1mol/L盐酸溶液溶解并稀释制成每1ml中含0.2mg的溶液，取10ml，置25ml量瓶中，加0.4%三氯化铁溶液1ml，置水浴中加热10分钟，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液。照高效液相色谱法（中国药典
2015年版四部 通则0512）试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Kromasil C18, 4.6mm×250mm,5μm 或效能相当的色谱柱）；以磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钠7.8g，加水适量使溶解，加三乙胺2ml，加水至1000ml，用磷酸调节pH至4.2)-乙腈（80:20）为流动相，流速为
1.0ml/min；检测波长为210nm；柱温为30℃。取系统适用性溶液10μl注人液相色谱仪，调节流动相比例使纳美芬峰保留时间约为7分钟，双纳美芬（杂质A）峰相对纳美芬峰的保留时间约为1.6。精密量取供试品溶液、对照溶液各10μl，分别注人液相色谱仪，记录色谱图至主峰保留时间的3倍。供试品溶液色谱图中如有与双纳美芬(杂质A，校正因子为2.0)保留时间一致的色谱峰，按下式计算杂质A的含量：

[0021] 杂质A（%）=（A杂质A×f/A对）×1.0%

[0022] 式中，A杂质A为供试品溶液色谱图中双纳美芬峰面积；

[0023] A对为对照溶液色谱图中纳美芬峰面积；

[0024] f为双纳美芬的校正因子。

[0025] 【杂质B】临用新配。精密量取本品适量,置棕色量瓶中，用水定量稀释制成每1ml中约还原型谷胱甘肽0.5mg的溶液，作为供试品溶液。精密称取氧化型谷胱甘肽对照品适量，置50ml棕色量瓶中，加供试品溶液10ml，摇匀，加水稀释至刻度，摇匀，作为系统适用性溶液。精密称取氧化型谷胱甘肽对照品适量，置棕色量瓶中，加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含2.5μg的溶液，作为氧化型谷胱甘肽对照品溶液。照高效液相色谱法（中国药典2015年版四部 通则0512）试验，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（Kromasil C18, 4.6mm×250mm,5μm或效能相当的色谱柱）；以磷酸盐缓冲液（取磷酸二氢钠7.8g，加水适量使溶解，加三乙胺2ml，加水至1000ml，用磷酸调节pH至4.2)为流动相A，乙腈为流动相B，按下表进行梯度洗脱，流速为1.0ml/min；检测波长为210nm；柱温为30℃。取系统适用性溶液10μl注人液相色谱仪，还原型谷胱甘肽峰与氧化型谷胱甘肽峰之间的分离度应大于3.0。精密量取供试品溶液和氧化型谷胱甘肽对照品溶液各10μl，分别注人液相色谱仪，记录色谱图。并按下式计算氧化型谷胱甘肽（杂质B）的量。

[0026]

[0027] 杂质B（%）=（C氧化型谷胱甘肽对照品×AS氧化型谷胱甘肽×V）/（Ar氧化型谷胱甘肽）×100mg/ml) ×100%[0028] 式中，C氧化型谷胱甘肽对照品为氧化型谷胱甘肽对照品溶液的浓度；

[0029] AS氧化型谷胱甘肽为氧化型谷胱甘肽对照品溶液色谱图中主峰面积；

[0030] Ar氧化型谷胱甘肽为供试品溶液色谱图中氧化型谷胱甘肽峰面积；

[0031] V为氧化型谷胱甘肽对照品溶液的体积。

[0032] 对比例

[0033] 对比例1

[0034]

[0035] 整个制备过程中采用冲氮工艺。取80%处方量注射用水，加入处方全量的盐酸纳美芬，搅拌使其溶解，用盐酸调节溶解PH至3.5，补加剩余的注射用水至全量，加入处方量 
0.05％ (w/v)的活性炭，在 60℃保温搅拌吸附 30min，粗滤，脱炭，0.22um微孔滤膜过滤后分装，充氮，封口，于 121℃下热压灭菌12min。

[0036] 对比例2

[0037]

[0038] 整个制备过程中采用冲氮工艺。取80%处方量注射用水，加入处方全量的还原型谷胱甘肽，搅拌使其溶解，用盐酸调节溶解PH至3.5，补加剩余的注射用水至全量，加入处方量 
0.05％ (w/v)的活性炭，在 60℃保温搅拌吸附 30min，粗滤，脱炭，0.22um微孔滤膜过滤后分装，充氮，封口，于 121℃下热压灭菌12min。

[0039] 对比例3

[0040]

[0041] 整个制备过程中采用冲氮工艺。取80%处方量注射用水，加入处方全量的盐酸纳美芬和还原型谷胱甘肽，搅拌使其溶解，用盐酸调节溶解PH至3.5，补加剩余的注射用水至全量，加入处方量 0.05％ (w/v)的活性炭，在 60℃保温搅拌吸附 30min，粗滤，脱炭，0.22um微孔滤膜过滤后分装，充氮，封口，于 121℃下热压灭菌12min。

[0042] 对比例4

[0043]

[0044] 整个制备过程中采用冲氮工艺。取80%处方量注射用水，加入处方全量的盐酸纳美芬和还原型谷胱甘肽，搅拌使其溶解，然后加入焦亚硫酸钠，搅拌使其溶解，用盐酸调节溶解PH至3.5，补加剩余的注射用水至全量，加入处方量 0.05％ (w/v)的活性炭，在 60℃保温搅拌吸附 30min，粗滤，脱炭，0.22um微孔滤膜过滤后分装，充氮，封口，于 121℃下热压灭菌12min。

[0045] 对比例5

[0046]

[0047] 整个制备过程中采用冲氮工艺。取80%处方量注射用水，加入处方全量的盐酸纳美芬和还原型谷胱甘肽，搅拌使其溶解，然后加入焦亚硫酸钠和乙二胺四乙酸二钠，搅拌使其溶解，用盐酸调节溶解PH至3.5，补加剩余的注射用水至全量，加入处方量 0.05％ (w/v)的活性炭，在 60℃保温搅拌吸附 30min，粗滤，脱炭，0.22um微孔滤膜过滤后分装，充氮，封口，于 121℃下热压灭菌12min。

[0048] 对比例6

[0049]

[0050] 整个制备过程中采用冲氮工艺。取80%处方量注射用水，加入处方量的柠檬酸和柠檬酸钠，搅拌使其溶解，然后加入处方全量的盐酸纳美芬和还原型谷胱甘肽，搅拌使其溶
解，最后加入亚硫酸氢钠和乙二胺四乙酸二钠，搅拌使其溶解，用盐酸调节溶解PH至3.5，补加剩余的注射用水至全量，加入处方量 0.05％ (w/v)的活性炭，在 60℃保温搅拌吸附 
30min，粗滤，脱炭，0.22um微孔滤膜过滤后分装，充氮，封口，于 121℃下热压灭菌12min。

[0051] 对比例7

[0052]

[0053] 整个制备过程中采用冲氮工艺。取80%处方量注射用水，加入处方全量的盐酸纳美芬和还原型谷胱甘肽，搅拌使其溶解，然后加入门冬氨酸，搅拌使其溶解，用盐酸调节溶解PH至3.5，补加剩余的注射用水至全量，加入处方量 0.05％ (w/v)的活性炭，在 60℃保温搅拌吸附 30min，粗滤，脱炭，0.22um微孔滤膜过滤后分装，充氮，封口，于 121℃下热压灭菌12min。

[0054] 对比例8

[0055]

[0056] 按对比例7所述制备方法制备复方注射液。

[0057] 对比例9

[0058]

[0059] 按对比例7所述制备方法制备复方注射液。

[0060] 对比例10

[0061]

[0062] 按对比例7所述制备方法制备复方注射液。

[0063] 对比例11

[0064]

[0065] 按对比例7所述制备方法制备复方注射液。

[0066] 按对比例1～11制备的复方注射液，检测0天杂质A和杂质B的含量，其检测结果见下表。

[0067] 。

[0068] 结果表明，对比例1～3中，盐酸纳美芬和还原型谷胱甘肽制备成复方注射液时，产品稳定性较差，杂质A和杂质B均高达1.5%左右，而单方制剂杂质A和B仅有0.8%和1.1%。虽然对比例4～6分别在注射液中加入了抗氧剂、金属离子螯合剂以及缓冲液等，但对于稳定性的提高效果并不显著，杂质A和杂质B均在1.2%左右，而对比例7在复方注射液中加入门冬氨酸后，产品的稳定性大大提高，杂质A和杂质B均有一定程度的降低，直至对比例8将门冬氨酸的用量提高至0.01mg/ml时，其杂质A和杂质B的含量均可降低至0.5%以下。

[0069] 令人惊讶的是，门冬氨酸的这种稳定作用还与复方注射液的PH值有关，例如在对比例9中，当将注射液的PH调整至4.9时，其发挥的稳定作用则不如在PH为3.5时，经过一系列实验，最终确定PH为3.0-4.6时，门冬氨酸的稳定性效果最好。

[0070] 此外，另一项惊人的发现是，门冬氨酸的稳定效果与其用量并不一直呈现正比关系，例如对比例10（门冬氨酸用量为0.05mg/ml）与对比例11（门冬氨酸用量为0.08mg/ml）的稳定性效果相差不大，适宜的门冬氨酸的浓度应为0.01 mg/ml～0.05mg/ml。

具体实施方式

[0071] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。但这些实施例仅限于说明本发明而不是对本发明的保护范围的进一步限定。

[0072] 实验方法

[0073] 昆明种小鼠50只，体重（21±2）g，雌雄各半。所有小鼠按8ml/kg腹腔注射60%的乙醇，制备小鼠乙醇中毒模型。模型制备成功后，将小鼠随机分成5组，每组10只。比较例1组，将注射用还原型谷胱甘肽(0.1g)用1.2ml注射用水溶液配制成80mg/ml，以及纳美芬注射液（0.1mg/ml）；实施例2-4组，为不同剂量配比的纳美芬和还原型谷胱甘肽复方注射液。待翻正反射消失后，各组分别腹腔注射上述药物，模型组动物则给于等体积的生理盐水，剂量均按0.6ml/kg腹腔注射给予。然后记录小鼠中毒时间t1（以翻正反射消失为准）、中毒消失时间t2（以翻正反射恢复为准），t2-t1即中毒持续时间，对比不同组别的中毒持续时间，以观察其对急性乙醇中毒的催醒作用。
实施例

[0074] 比较例1

[0075] 盐酸纳美芬注射液，规格1ml:0.1mg，成都天台山制药有限公司；

[0076] 注射用还原型谷胱甘肽，规格0.1g，上海复旦复华药业有限公司。

[0077] 实施例2

[0078]

[0079] 整个制备过程中采用冲氮工艺。取80%处方量注射用水，加入处方全量的盐酸纳美芬和还原型谷胱甘肽，搅拌使其溶解，然后加入门冬氨酸，搅拌使其溶解，用盐酸调节溶解PH至4.0，补加剩余的注射用水至全量，加入处方量 0.05％ (w/v)的活性炭，在 60℃保温搅拌吸附 30min，粗滤，脱炭，0.22um微孔滤膜过滤后分装，充氮，封口，于 121℃下热压灭菌12min。

[0080] 实施例3

[0081]

[0082] 按实施例2所述制备方法制备复方注射液。

[0083] 实施例4

[0084]

[0085] 按实施例2所述制备方法制备复方注射液。

[0086] 各组小鼠中毒持续时间结果见下表。

[0087] 盐酸纳美芬及还原型谷胱甘肽复方对急性重度酒精中毒小鼠中毒持续时间比较

[0088]

[0089] *，与模型组相比，p<0.05 ； **与模型组相比，p<0.01

[0090] 从结果分析，当盐酸纳美芬0.06mg/ml～0.2mg/ml、还原型谷胱甘肽50mg/ml～100mg/ml，并搭配0.01mg/ml  0.05mg/ml门冬氨酸时，两种有效成分的协同作用更强，小鼠~
的中毒持续时间更短，尤其是当盐酸纳美芬0.1mg/ml、还原型谷胱甘肽80mg/ml时，协同作用最强，疗效最为显著。

[0091] 实施例5

[0092]

[0093] 按实施例2所述制备方法制备复方注射液。

[0094] 实施例6

[0095]

[0096] 按实施例2所述制备方法制备复方注射液。

[0097] 实施例7

[0098]

[0099] 按实施例2所述制备方法制备复方注射液。

[0100] 实施例8

[0101]

[0102] 按实施例2所述制备方法制备复方注射液。

[0103] 实施例9

[0104]

[0105] 按实施例2所述制备方法制备复方注射液。

[0106] 实施例10

[0107]

[0108] 按实施例2所述制备方法制备复方注射液。

[0109] 实施例11

[0110] 药物组合物成分如实施例4；

[0111] 在充氮条件下，取门冬氨酸加入全量20％的注射用水，搅拌至完全溶解，取盐酸纳美芬和还原型谷胱甘肽加入全量60％的注射用水，搅拌使溶解，两者混合，再加入剩余20％的注射用水，混匀，用盐酸或氢氧化钠溶液调节pH至4.0，另加入处方量 0.05％ (w/v)的活性炭，在 60℃保温搅拌吸附 30min，粗滤，脱炭，用 0.22μm滤膜过滤后分装，充氮，封口，于 121℃下热压灭菌12min。

[0112] 实施例12

[0113] 药物组合物成分如实施例4；

[0114] 在充氮条件下，取盐酸纳美芬加入全量 20％的注射用水，搅拌至完全溶解，加入门冬氨酸搅拌使溶解；取还原型谷胱甘肽加入全量50％的注射用水，搅拌使溶解，两者混
合，再加入剩余30％的注射用水，混匀，用盐酸或氢氧化钠溶液调节pH至4.0，另加入处方量 
0.05％ (w/v)的活性炭，在 60℃保温搅拌吸附 30min，粗滤，脱炭，用 0.22μm滤膜过滤后分装，充氮，封口，于 121℃下热压灭菌12min。

[0115] 按实施例2～12制备的复方注射液，检测0天单杂氧化型谷胱甘肽以及总杂的含量，其检测结果见下表。

[0116] 。