大蒜中氟啶虫胺腈残留量的检测方法

摘要

本发明公开了大蒜中氟啶虫胺腈残留量的检测方法，包括：(1)样品的预处理：称取大蒜样品于塑料离心管中，加入含乙酸、正己烷饱和的乙腈，加入振荡子，加入无水硫酸镁和乙酸钠，振摇；离心后取上清液，转移入另一支离心管中，离心管中事先加入PSA填料和无水硫酸镁，振摇，离心后移取上清液至另一支试管中，在水浴中，用氮气流吹干，加入甲醇充分溶解残渣后，再加入水混匀，过滤膜；(2)氟啶虫胺腈的测定：采用高效液相色谱串联质谱技术检测经过预处理的样品，先利用高效液相色谱将氟啶虫胺腈分离，采用质谱外标法定量，以标准品的浓度为X轴，标准品的离子丰度为y轴，建立标准曲线，计算氟啶虫胺腈的含量。

权利要求

1.大蒜中氟啶虫胺腈残留量的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：(1) 样品的预处理：

称取15g大蒜样品于塑料离心管中，加入20.0mL含体积百分数0.1%的乙酸、正己烷饱和的乙腈，加入1粒振荡子，加入6g无水硫酸镁和1.5g乙酸钠，盖上塞子，振摇3min；离心后取上清液10.0mL，转移入另一支15mL离心管中，离心管中事先加入400mgPSA填料和1200mg无水硫酸镁，盖上塞子，振摇1min，离心后移取5-8mL上清液至另一支试管中，在40℃水浴中，用氮气流吹干，加入0.5mL甲醇充分溶解残渣后，再加入0.5mL水混匀，过0.45μm 滤膜；

(2) 氟啶虫胺腈的测定：

采用高效液相色谱串联质谱技术检测经过预处理的样品，先利用高效液相色谱将氟啶虫胺腈分离，采用质谱外标法定量，以标准品的浓度为X轴，标准品的离子丰度为y轴，建立标准曲线，计算氟啶虫胺腈的含量，具体仪器参数为：(a) 高效液相色谱参数：

色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18，150 mm×4.6 mm×5μm；

柱温：30℃；

流速：600μL/min；

进样量：25μL；

流动相：A相为含体积百分数1‰甲酸的5mmol乙酸铵水溶液，B相为甲醇；

梯度洗脱程序：0.0～5.5min，A相从体积百分数87%线性降至体积百分数10%，保持

2min，再在0.1min内，A相升至体积百分数87%，并保持6.4min；

(b) 质谱参数：

采用电喷雾离子源，通过正离子多反应监测方式检测氟啶虫胺腈；

离子化模式：ESI+；

离子源电压：5500 V；

离子源温度：550℃；

MRM监测离子对、去簇电压、碰撞电压见表1；

表1 氟啶虫胺腈的质谱参数

。

2.根据权利要求1所述的大蒜中氟啶虫胺腈残留量的检测方法，其特征在于，所述的标准曲线按如下方法绘制得到：准确称取氟啶虫胺腈标准品10.0mg，用甲醇溶解并定容至10mL，获得浓度为1.0mg/mL的标准品母液；取100μL标准品母液，用甲醇稀释至1mL，得到氟啶虫胺腈的浓度为0.1mg/mL，以此逐级稀释至氟啶虫胺腈浓度为1.0μg/mL；分别移取50μL、100μL、150μL、200μL、300μL和400μL上述浓度为1.0μg/mL的氟啶虫胺腈标准使用液，并用流动相定容至1mL，获得浓度为0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.15μg/mL、0.2μg/mL、0.3μg/mL和0.4μg/mL的标准工作点，用液相色谱串联质谱测定后，绘制标准曲线。

说明书

大蒜中氟啶虫胺腈残留量的检测方法

技术领域

[0001] 本发明属于食品安全技术领域，涉及一种大蒜中农药残留检测的方法。

背景技术

[0002] 氟啶虫胺腈是由陶氏农业科学在2010年公开报道的一种防治吸汁害虫的新型杀虫剂。一般制成水分散颗粒，54℃、14天稳定。因具有高效、广谱活性和使用量低等优点，且与其他化学类别的杀虫剂无交互抗性，所以同已上市的产品相比很具优越性。主要用于防治棉田盲蝽、叶蝉、蚜虫，飞虱等害虫，也可用于果树、蔬菜、大豆等作物的害虫防治上。虽然暂未有研究表明氟啶虫胺腈会产生生殖毒性、致畸致突变、致癌和神经毒害，而且其容易分解、无残留，在空气、水环境中存在水平非常低，不会在动物脂肪组织内蓄积，但印度尼西亚却将其列为大蒜中的残留监控项目(印度尼西亚农业部长4号令《关于进出口新鲜植物源食品安全管理规定》，2016年2月17日正式实施)，且限量设定为0.01mg/kg，这对我国在对印尼出口大蒜业务造成了严重影响。

[0003] 目前国内对于氟啶虫胺腈残留检测方法的研究较少，主要集中在棉田残留(秦旭等，氟啶虫胺腈在棉花和土壤中的检测方法与残留动态研究，农业资源与环境学报，2014,31(4)：381-387)、水果残留(黄庆等，气相色谱法测定柑橘与土壤中氟啶虫胺腈的残留量，光谱实验室，2013,30(2)：985-990)，杨勇等采用液相色谱法对氟啶虫胺腈悬浮剂和水分散剂中的有效成分进行了测定(农药，2015年第7期)，陈九星等采用气相色谱、液相色谱质谱联用对氟啶虫胺腈在不同溶剂中的光化学行为进行了研究(环境科学学报，2012年第12期)。目前尚未检索到大蒜中氟啶虫胺腈残留的检测方法，而且气相色谱和液相色谱对其检出限均为0.05mg/kg(秦旭、黄庆)，无法满足出口印尼的需要，且前处理时需要过固相萃取小柱(氧化铝柱或弗罗里硅土柱)，过程繁琐。

发明内容

[0004] 本发明所要解决的技术问题是提供一种大蒜中氟啶虫胺腈残留量的检测方法。

[0005] 为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

[0006] 大蒜中氟啶虫胺腈残留量的检测方法，包括如下步骤：

[0007] (1)样品的预处理：

[0008] 称取15g经均质的大蒜样品于塑料离心管中，加入20.0mL含0.1％(v/v)乙酸、正己烷饱和的乙腈(即以乙腈为溶剂，以0.1％(v/v)乙酸和饱和量的正己烷为溶质，进行配制)，加入1粒振荡子，加入6g无水硫酸镁和1.5g乙酸钠，盖上塞子，振摇3min；离心后取上清液10.0mL，转移入另一支15mL离心管中，离心管中事先加入400mgPSA填料和1200mg无水硫酸镁，盖上塞子，振摇1min，离心后移取5-8mL上清液至另一支试管中，在40℃水浴中，用氮气流吹干，加入0.5mL甲醇充分溶解残渣后，再加入0.5mL水混匀，过0.45μm滤膜；

[0009] (2)氟啶虫胺腈的测定：

[0010] 采用高效液相色谱串联质谱技术检测经过预处理的样品，先利用高效液相色谱将氟啶虫胺腈分离，采用质谱外标法定量，以标准品的浓度为X轴，标准品的离子丰度为y轴，建立标准曲线，计算氟啶虫胺腈的含量，具体测定条件为：

[0011] (a)高效液相色谱参数：

[0012] 色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18，150mm×4.6mm×5μm；

[0013] 柱温：30℃；

[0014] 流速：600μL/min；

[0015] 进样量：25μL；

[0016] 流动相：A相为含1‰(v/v)甲酸的5mmol乙酸铵水溶液，B相为甲醇；

[0017] 梯度洗脱程序：0.0～5.5min，A相从87％(v/v)线性降至10％(v/v)，保持2min，再在0.1min内，A相升至87％(v/v)，并保持6.4min；

[0018] (b)质谱参数：

[0019] 采用电喷雾离子源，通过正离子多反应监测方式检测氟啶虫胺腈；

[0020] 离子化模式：ESI(+)；

[0021] 离子源电压：5500V；

[0022] 离子源温度：550℃；

[0023] MRM监测离子对、去簇电压、碰撞电压见表1；

[0024] 表1氟啶虫胺腈的质谱参数

[0025]

[0026]

[0027] 其中，所述的标准曲线按如下方法绘制得到：

[0028] 准确称取氟啶虫胺腈标准品10.0mg，用甲醇溶解并定容至10mL，获得浓度为1.0mg/mL的标准品母液；取100μL标准品母液，用甲醇稀释至1mL，得到氟啶虫胺腈的浓度为
0.1mg/mL，以此逐级稀释至氟啶虫胺腈浓度为1.0μg/mL；分别移取50μL、100μL、150μL、200μL、300μL和400μL上述浓度为1.0μg/mL的氟啶虫胺腈标准使用液，并用流动相定容至1mL，获得浓度为0.05μg/mL、0.1μg/mL、0.15μg/mL、0.2μg/mL、0.3μg/mL和0.4μg/mL的标准工作点，用液相色谱串联质谱测定后，绘制标准曲线。以氟啶虫胺腈的浓度为横坐标，响应值为纵坐标，标准曲线方程为y＝7.86×106*C+2450.98，相关系数R2＝0.9993，标准曲线见附图3。

[0029] 本发明的有益效果是：

[0030] 1、前处理过程简便：本发明采用的改进的QuChERS前处理技术，使得前处理过程时间明显缩短。传统提取方法采用大体积乙腈(70-80mL)匀浆或振荡(一般需要30min以上)，过滤后采用旋转蒸干(一般70mL乙腈提取液需要5-8min可以旋转蒸发至近干)后再定容5mL，通过固相萃取小柱净化(包括活化、上样、清洗，洗脱等步骤，约需30min-40min)，洗脱液再用氮气吹干(约需20min)，最终过滤膜上机。而改进的QuChERS前处理技术可以免去振荡步骤，减少旋转蒸干体积(仅需10mL)缩短蒸干时间，直接采用PSA填料和无水硫酸镁粉末，仅需5min即可完成净化过程。

[0031] 2、检出限低：本发明采用液相色谱-串联质谱法测定大蒜中的氟啶虫胺腈，检出限可以低至0.01mg/kg，不仅满足大蒜出口印尼的限量要求，对输往其他国家和地区的限量也能满足。而气相色谱或液相色谱均无法达到此检出限。

[0032] 3、定性准确：由于大蒜基质复杂，存在多种挥发性物质，在气相色谱或液相色谱测定时，容易产生“假阳性”干扰。采用串联质谱，监测氟啶虫胺腈的特征离子反应，具有准确定性的功能。

[0033] 4、本发明方法完全可以满足大蒜出口印度尼西亚的要求。

附图说明

[0034] 图1为氟啶虫胺腈标准质谱图。

[0035] 图2为大蒜样品中加入氟啶虫胺腈后的质谱图。

[0036] 图3为绘制的标准工作曲线。

具体实施方式

[0037] 根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。

[0038] 实施例1：

[0039] 1.样品的前处理

[0040] 称取15g均质的大蒜样品于塑料离心管中，加入20mL正己烷饱和的乙腈(含体积分数0.1％乙酸)，加入1粒振荡子，加入6g无水硫酸镁和1.5g乙酸钠，盖上塞子，剧烈振摇3min。在6000rpm的转速下离心5min，小心移取上清液10.0mL，转移入另一支15mL离心管中(离心管中事先加入400mgPSA填料和1200mg无水硫酸镁)，盖上塞子，剧烈振摇1min，离心
5min，准确移取5-8mL上清液至另一支试管中，在40℃水浴中，用氮气流吹干。加入0.5mL甲醇充分溶解残渣后，再加入0.5mL水充分混匀，过0.45μm滤膜。

[0041] 2.标准曲线的绘制

[0042] 准确称取氟啶虫胺腈标准品10.0mg，用甲醇溶解并定容至10mL，获得浓度为1.0mg/mL的标准品母液。

[0043] 取100μL标准品母液，用甲醇稀释至1mL，得到氟啶虫胺腈的浓度为0.1mg/mL，以此逐级稀释至氟啶虫胺腈浓度为1.0μg/mL。

[0044] 分别移取50、100、150、200、300和400μL上述浓度为1.0μg/mL的氟啶虫胺腈标准使用液，并用流动相定容至1mL，获得浓度为0.05、0.1、0.15、0.2、0.3和0.4μg/mL的标准工作点，用液相色谱串联质谱测定后，绘制标准工作曲线。以氟啶虫胺腈的浓度为横坐标，响应6 2
值为纵坐标，标准曲线方程为y＝7.86×10*C+2450.98，相关系数R＝0.9993，标准曲线见附图3。

[0045] 仪器的检测低限为0.03μg/mL，方法的检测低限为0.005-0.008mg/kg。

[0046] 3.氟啶虫胺腈的测定

[0047] 3.1液相色谱参数

[0048] 色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C18，150mm×4.6mm×5μm；柱温：30℃；流速：600μL/min；进样量：25μL；流动相：A相为含1‰(v/v)甲酸的5mmol乙酸铵水溶液，B相为甲醇(HPLC)；梯度洗脱程序：0.0～5.5min，A相从87％(v/v)线性降至10％(v/v)，保持2min。在0.1min内，A相升至87％(v/v)，并保持6.4min。

[0049] 3.2质谱参数

[0050] 采用电喷雾离子源，通过正离子多反应监测(MRM)方式检测氟啶虫胺腈。离子化模式：ESI(+)；离子源电压：5500V；离子源温度：550℃。MRM监测离子对、去簇电压(DP)、碰撞电压(CE)见表1。

[0051] 氟啶虫胺腈标准质谱图及大蒜样品中加入氟啶虫胺腈后的质谱图见图1和图2。

[0052] 4.加标回收试验

[0053] 称取7份大蒜样品，每份15.00±0.05g，其中1份不添加氟啶虫胺腈标准溶液，其余6份分三组，分别添加150、300和750μL1.0μg/mL的氟啶虫胺腈标准使用液，按照上述预处理方法，在0.01,0.02,0.05mg/kg三个水平上进行添加回收试验。最终测定值及回收率分别如表2所示：

[0054] 表2添加回收试验数据表

[0055]

[0056] 5.精密度试验

[0057] 对制成的样品，按照上述预处理方法，分别进行日间精密度(连续四日，每天测定2批)和日内精密度(同一天内，连续测定8批)试验，样液的测定值及相对标准偏差如下表所示。

[0058] 表3日间和日内精密度试验表

[0059]

[0060] 6.按照上述检测方法对送检的多批大蒜进行测定，测定结果在0.005-0.008mg/kg之间，均小于0.01mg/kg，能满足出口印尼的要求。

[0061] 对比例：

[0062] 传统测试方法：称取10.0g样品于具塞三角瓶中，加入50mL提取溶剂，加入适量无水乙酸钠，混合均匀，置于振荡器上振荡30-40min。将提取液通过盛有无水硫酸钠的漏斗过滤于平底烧瓶中，用30mL提取溶剂分两次洗涤三角瓶，并将洗涤液收集于平底烧瓶中。在旋转蒸发仪上将提取液蒸发至近干，加入5mL提取溶剂，充分振荡平底烧瓶，使提取物溶解于溶剂中，待净化。将提取液加载在预先活化过的固相萃取小柱上，使其缓慢通过固相萃取柱，加入洗脱剂并收集洗脱液于试管中。将洗脱液置于水浴中，用氮气流吹干。先用0.5mL甲醇溶解残渣，再加入0.5mL水混合均匀，通过0.45μm滤膜，待上机分析。各步骤的时间约如表4所示。

[0063] 表4实验过程所需时间对比表(单位：分钟)

[0064]方法 振荡 提取 蒸干 净化 氮吹 定容 过膜 总时间
对比例 30-40 10 8-10 30-40 15 3 2 98-120
实施例1 1-2 5-8 3-5 5-8 15 3 2 34-43