本发明公开了一种1,3,4‑噻二唑硫醚衍生物及其制备方法和应用，本发明所述1,3,4‑噻二唑硫醚衍生物即5‑(4‑(1,3‑二甲基‑1H‑吡唑))‑1,3,4‑噻二唑‑2‑硫醚衍生物在20μg/mL浓度下对灰霉菌、炭疽菌、苹果轮纹病和水稻纹枯病均有一定的抑制性，化合物(I‑10)对炭疽菌的抑制率达到43.06％；本发明所述化合物为具有杀菌活性的新化合物，为新农药的研发提供了基础。
一种1,3,4-噻二唑硫醚衍生物及其制备方法和应用
技术领域
[0001] 本发明涉及一种1,3,4-噻二唑硫醚衍生物即5-(4-(1,3-二甲基-1H-吡唑))-1,3,4-噻二唑-2-硫醚类衍生物及其制备方法和应用。
背景技术
[0002] 在过去几十年，杂环化合物拥有广泛和多样的生物活性，特别是1,3,4-噻二唑和吡唑化合物。1,3,4-噻二唑和吡唑是两类含氮或硫的五元杂环化合物。许多文献都报道了1,3,4-噻二唑化合物表现出广泛的生物活性，包括抗结核活性，抗肿瘤活性，杀菌活性，抗炎活性，抗氧化活性，抑制胆碱酯酶活性，杀虫活性等。此外，杂环硫酮类衍生物也展现出优秀的生物活性，比如杀菌活性，除草活性，抗肿瘤活性等。特别地，1,3,4-噻二唑硫酮结构在发明药物方面是一种非常重要的药效结构。另一方面，吡唑环存在于许多合成药物或杀虫剂中。
发明内容
[0003] 针对现有技术中存在的上述问题，本发明目的是提供一种1,3,4-噻二唑硫醚衍生物即5-(4-(1,3-二甲基-1H-吡唑))-1,3,4-噻二唑-2-硫醚类衍生物及其制备方法和应用。它通过在微波辅助合成下用较简便的方法合成了一系列新化合物，并这些化合物有些具良好杀菌活性，为新农药的合成探索了方法和制备技术。
[0004] 所述的一种1,3,4-噻二唑硫醚衍生物，即5-(4-(1,3-二甲基-1H-吡唑))-1,3,4-噻二唑-2-硫醚类衍生物，其特征在于其结构通式如式(I)所示：
[0005]
[0006] 式(I)中：R为C1～C14烷基、苯基或取代苯基，所述取代苯基的取代基为卤素、甲氧基、氰基或C1～C9烷基。
[0007] 所述的一种1,3,4-噻二唑硫醚衍生物，其特征在于所述R为下列之一：正丙基、苯基、对氯苯基、对溴苯基、2-氯苯基、2-氟苯基、3-氯苯基、对甲氧基苯基、2,4-二氯苯基、对氰基苯基或对叔丁基苯基。
[0008] 所述的1,3,4-噻二唑硫醚衍生物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
[0009] 1)将乙酰乙酸乙酯、原甲酸三乙酯和乙酸酐加入到三口瓶中，加热到115-125℃反应9-11h，反应完毕后旋蒸掉溶剂得棕色液体，将棕色液体加入到有机溶剂A中，然后在冰浴条件下将甲基肼滴加到上述溶液中，再在室温下搅拌反应2.5-3.5h，反应完毕后，旋掉溶剂得白色固体如式(Ⅱ)所示的1,3-二甲基-1H-吡唑-4甲酸乙酯；
[0010] 2)将步骤1)得到的式(Ⅱ)所示的1,3-二甲基-1H-吡唑-4甲酸乙酯溶于有机溶剂B中，加入80％的水合肼，加热回流反应7.5-8.5h，反应完毕后旋蒸掉溶剂，冷却析出白色固体如(Ⅲ)所示的1,3-二甲基-1H-吡唑-4甲酰肼；
[0011] 3)将步骤2)得到的如式(Ⅲ)所示的1,3-二甲基-1H-吡唑-4甲酰肼和无机碱A加入到有机溶剂C中搅拌30min，然后逐滴加入CS2，再室温下搅拌反应15-18h，过滤得如(Ⅳ)所示的2-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-羰基)酰肼-1-二硫代钾；
[0012] 4)将步骤3)得到的式(Ⅳ)所示的2-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-羰基)酰肼-1-二硫代钾加入到98％的浓硫酸中，室温下搅拌反应4-6h，然后将混合液倒入碎冰中，析出沉淀，过滤，水洗，干燥，乙醇重结晶得白色固体如式(Ⅴ)所示的5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1,3,4-噻二唑-2-硫醇；
[0013] 5)将有机溶剂D、步骤4)得到的式(Ⅴ)所示的5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1,3,4-噻二唑-2-硫醇、RCH2Cl和无机碱B混合，微波辅助反应，反应结束后冷却到50℃以下，然后将混合液倒入碎冰中，析出固体，过滤得目标化合物1,3,4-噻二唑硫醚衍生物；
[0014]
[0015] 所述的1,3,4-噻二唑硫醚衍生物的制备方法，其特征在于步骤1)中所述有机溶剂A为甲醇、乙醇、二氯甲烷、四氢呋喃、DMF中的一种或多种，优选乙醇；所述乙酰乙酸乙酯、原甲酸三乙酯和乙酸酐的物质的量之比为1:1～5:1～5；优选1:2:2.5。
[0016] 所述的1,3,4-噻二唑硫醚衍生物的制备方法，其特征在于步骤2)中所述水合肼水的用量以水合肼的物质的量计，所述1,3-二甲基-1H-吡唑-4甲酸乙酯和水合肼的物质的量之比为1:1～10，优选为1:9；所述有机溶剂B为甲醇、乙醇、二氯甲烷、四氢呋喃、DMF中的一种或多种，优选乙醇。
[0017] 所述的1,3,4-噻二唑硫醚衍生物的制备方法，其特征在于步骤3)中所述无机碱A为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠和碳酸钾中的一种或多种，优选氢氧化钾；有机溶剂C为甲醇、乙醇、二氯甲烷、四氢呋喃、DMF中的一种或多种，优选乙醇；所述1,3-二甲基-1H-吡唑-4甲酰肼、无机碱A和CS2的物质的量之比为1:1～2:1～2；优选为1:1.2:1。
[0018] 所述的1,3,4-噻二唑硫醚衍生物的制备方法，其特征在于步骤4)中硫酸的体积用量以如式(Ⅳ)所示的2-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-羰基)酰肼-1-二硫代钾的物质的量记为0.1～1mmol/ml，优选为0.2mmol/ml。
[0019] 所述的1,3,4-噻二唑硫醚衍生物的制备方法，其特征在于步骤5)中所述有机溶剂D为甲醇、乙醇、二氯甲烷、四氢呋喃、DMF中的一种或多种，优选为DMF；有机溶剂D的用量以5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1,3,4-噻二唑-2-硫醇的物质的量计为0.1～1mmol/ml，优选为0.2mmol/ml；所述无机碱B为氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠和碳酸钾中的一种或多种，优选为氢氧化钠；所述5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1,3,4-噻二唑-2-硫醇、RCH2Cl和无机碱B的物质的量之比为1:1～2:1～2，优选为1:1.1:1.2；微波辅助条件为：150W、90℃、
200psi下微波照射15分钟。
[0020] 其反应过程如下：
[0021]
[0022] 所述的1,3,4-噻二唑硫醚衍生物在制备杀菌剂中的应用。
[0023] 所述的应用，其特征在于作为防治灰霉菌、炭疽菌、苹果轮纹病和水稻纹枯病的杀菌剂的应用，其浓度为20ppm。
[0024] 与现有技术相比，本发明的有益效果主要体现在：本发明提供了一种5-(4-(1,3-二甲基-1H-吡唑))-1,3,4-噻二唑-2-硫醚衍生物及其制备方法和作为杀菌剂中的应用，本发明所述化合物在20μg/mL浓度下对灰霉菌(Botrytis cinerea)、炭疽菌(Colletotrichum orbiculare)、苹果轮纹病(Botryospuaeria berengeriana)和水稻纹枯病(Rhizoctonia solani)均有一定的抑制性，化合物(I-10)对炭疽菌(Colletotrichum orbiculare)的抑制率达到43.06％；本发明所述化合物为具有杀菌活性的新化合物，为新农药的研发提供了基础。
具体实施方式
[0025] 下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
[0026] 实施例1
[0027] (1)1,3-二甲基-1H-吡唑-4甲酸乙酯式(Ⅱ)的合成
[0028] 将乙酰乙酸乙酯(1mol)、原甲酸三乙酯(2mol)和乙酸酐(2.5mol)加入到三口瓶中，加热到120℃反应10h，反应完毕后旋蒸掉溶剂得棕色液体。将棕色液体加入到乙醇(550ml)中，然后在冰浴条件下将甲基肼(1.5mol)滴加到上述溶液中，再在室温下搅拌反应3h，反应完毕后，旋掉溶剂得白色固体(Ⅱ)1,3-二甲基-1H-吡唑-4甲酸乙酯86.1g，收率
51.2％。
[0029] (2)将上述(Ⅱ)1,3-二甲基-1H-吡唑-4甲酸乙酯(10mmol)溶于乙醇(10ml)中，加入80％的水合肼(90mmol)，加热回流反应8h，反应完毕后旋蒸掉溶剂，冷却析出白色固体(Ⅲ)1,3-二甲基-1H-吡唑-4甲酰肼1.42g，收率92.1％。
[0030] (3)将上述(Ⅲ)1,3-二甲基-1H-吡唑-4甲酰肼(65mmol)和KOH(78mmol)加入到乙醇(250ml)中搅拌30min，然后逐滴加入CS2(65mmol)，再室温下搅拌反应16h，过滤得(Ⅳ)2-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-羰基)酰肼-1-二硫代钾1.8g，收率67.7％。
[0031] (4)将上述制得的(Ⅳ)2-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-羰基)酰肼-1-二硫代钾(11.8mmol)加入到98％H2SO4(60ml)中，室温下搅拌反应5h，然后将混合液倒入碎冰中，析出沉淀，过滤，水洗，干燥，乙醇重结晶得白色固体(Ⅴ)5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1,3,4-噻二唑-2-硫醇，收率43％。
[0032] (5)将DMF(5ML)、5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1,3,4-噻二唑-2-硫醇(1mmol)、氯苄(1.1mmol)和NaOH(1.2mmol)混合加入到10ml的额定压力瓶中，微波辅助反应(150W，90℃，200psi，15min)，反应结束后冷却到50℃以下，然后将混合液倒入碎冰中，析出固体，过滤得目标化合物(I-1)所示2-(苄硫基)-5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1,3,4-噻二唑，收率77.3％。
[0033]
[0034] 2-(苄硫基)-5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1,3,4-噻二唑m.p.106-108℃,yield 77.3％，1H NMR(500MHz,CDCl3)ppm 7.82(s,1H,pyrazole H),7.46(d,J＝7.14Hz,2H,Ar-H),7.38-7.30(m,3H,Ar-H),4.50(s,2H,-CH2-),3.91(s,3H,N-CH3),2.53(s,3H,pyrazole CH3)；MS(ESI),m/z:303(M+1)+.
[0035] 实施例2
[0036] 将实施例1步骤(5)中氯苄换成1.1mol的2-氯氯苄，其他操作同实施例1，获得2-((2-氯苄基)巯基)-5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1,3,4-噻二唑(I-2)，产率59.5％。
[0037]
[0038] 2-((2-氯苄基)巯基)-5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1,3,4-噻二唑m.p.105-106℃，yield 59.5％，1H NMR(400MHz,CDCl3)ppm 7.83(s,1H,pyrazole H),7.60(d,J＝
6.50Hz,1H,Ar-H),7.41(d,J＝6.92Hz,1H,Ar-H),7.30-7.25(m,1H,Ar-H),4.72(s,2H,-CH2-),3.90(s,3H,N-CH3),2.50(s,3H,pyrazole CH3)；MS(ESI),m/z:338(M+1)+.[0039] 实施例3
[0040] 将实施例1步骤(5)中氯苄换成1.1mol的4-氯氯苄，其他操作同实施例1，获得2-((4-氯苄基)巯基)-5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1,3,4-噻二唑(I-3)，产率75.4％。
[0041]
[0042] 2-((4-氯苄基)巯基)-5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1,3,4-噻二唑m.p.82-84℃，yield 75.4％，1H NMR(400MHz,CDCl3)ppm 7.83(s,1H,pyrazole H),7.40(d,J＝7.42Hz,2H,Ar-H),7.31-7.29(m,2H,Ar-H),4.55(s,2H,-CH2-),3.91(s,3H,N-CH3),2.50(s,
3H,pyrazole CH3)；MS(ESI),m/z:338(M+1)+.
[0043] 实施例4
[0044] 将实施例1步骤(5)中氯苄换成1.1mol的4-腈基氯苄，其他操作同实施例1，获得2-((4-腈基苄基)巯基)-5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1,3,4-噻二唑(I-4)，产率75.4％。
[0045]
[0046] 2-((4-腈基苄基)巯基)-5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1,3,4-噻二唑m.p.46-147℃，yield 75.4％，1H NMR(400MHz,CDCl3)ppm 7.83(s,1H,pyrazole H),7.64-7.58(m,
4H,Ar-H),4.60(s,2H,-CH2-),3.90(s,3H,N-CH3),2.49(s,3H,pyrazole CH3)；MS(ESI),m/+
z:328(M+1) .
[0047] 实施例5
[0048] 将实施例1步骤(5)中氯苄换成1.1mol的2-氟氯苄，其他操作同实施例1，获得2-((2-氟苄基)巯基)-5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1,3,4-噻二唑(I-5)，产率87.5％。
[0049]
[0050] 2-((2-氟苄基)巯基)-5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1,3,4-噻二唑m.p.107-109℃，yield 87.5％，1H NMR(400MHz,CDCl3)ppm 7.84(s,1H,pyrazole H),7.53(t,J＝
7.50,7.50Hz,Ar-H),7.34-7.25(m,1H,Ar-H),7.10(dd,J＝16.96,8.61Hz,2H,Ar-H),4.63(s,2H,-CH2-),3.91(s,3H,N-CH3),2.51(s,3H,pyrazole CH3)；MS(ESI),m/z:321(M+1)+.[0051] 实施例6
[0052] 将实施例1步骤(5)中氯苄换成1.1mol的2,4-二氯氯苄，其他操作同实施例1，获得2-((2,4-二氯苄基)巯基)-5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1,3,4-噻二唑(I-6)，产率
73.9％。
[0053]
[0054] 2-((2,4-二氯苄基)巯基)-5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1,3,4-噻二唑m.p.100-101℃，yield 73.9％，1H NMR(400MHz,CDCl3)ppm 7.82(s,1H,pyrazole H),7.56(d,J＝8.28Hz,1H,Ar-H),7.41(s,1H,Ar-H),7.19(d,J＝8.14Hz,1H,Ar-H),4.65(s,2H,-CH2-),3.89(s,3H,N-CH3),2.48(s,3H,pyrazole CH3)；MS(ESI),m/z:372(M+1)+.[0055] 实施例7
[0056] 将实施例1步骤(5)中氯苄换成1.1mol的3-氯氯苄，其他操作同实施例1，获得2-((3-氯苄基)巯基)-5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1,3,4-噻二唑(I-7)，产率81.3％。
[0057]
[0058] 2-((3-氯苄基)巯基)-5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1,3,4-噻二唑m.p.94-96℃，yield 81.3％，1H NMR(400MHz,CDCl3)ppm 7.83(s,1H,pyrazole H),7.46(s,1H,Ar-H),7.38-7.31(m,1H,Ar-H),7.30-7.23(m,2H,Ar-H),4.56(s,2H,-CH2-),3.91(s,3H,N-CH3),
2.50(s,3H,pyrazole CH3)；MS(ESI),m/z:338(M+1)+.
[0059] 实施例8
[0060] 将实施例1步骤(5)中氯苄换成1.1mol的3,4-二氯氯苄，其他操作同实施例1，获得2-((3,4-二氯苄基)巯基)-5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1,3,4-噻二唑(I-8)，产率
81.1％。
[0061]
[0062] 2-((3,4-二氯苄基)巯基)-5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1,3,4-噻二唑m.p.108-111℃，yield 81.1％，1H NMR(400MHz,CDCl3)ppm 7.84(s,1H,pyrazole H),7.57(s,1H,Ar-H),7.41(d,J＝8.26Hz,1H,Ar-H),7.33(d,J＝8.12Hz,1H,Ar-H),4.53(s,2H,-CH2-),3.92(s,3H,N-CH3),2.51(s,3H,pyrazole CH3)；MS(ESI),m/z:372(M+1)+.[0063] 实施例9
[0064] 将实施例1步骤(5)中氯苄换成1.1mol的4-溴氯苄，其他操作同实施例1，获得2-((4-溴苄基)巯基)-5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1,3,4-噻二唑(I-9)，产率84.2％。
[0065]
[0066] 2-((4-溴苄基)巯基)-5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1,3,4-噻二唑m.p.98-99℃，yield 84.2％，1H NMR(400MHz,CDCl3)ppm 7.72(s,1H,pyrazole H),7.36(d,J＝7.05Hz,2H,Ar-H),7.23(d,J＝7.18Hz,2H,Ar-H),4.42(s,2H,-CH2-),3.80(s,3H,N-CH3),+
2.39(s,3H,pyrazole CH3)；MS(ESI),m/z:382(M+1) .
[0067] 实施例10
[0068] 将实施例1步骤(5)中氯苄换成1.1mol的2-氯-5-氯甲基噻唑，其他操作同实施例1，获得2-(((2-氯噻唑-5-基)甲基)巯基)-5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1,3,4-噻二唑(I-10)，产率38.9％。
[0069]
[0070] 2-(((2-氯噻唑-5-基)甲基)巯基)-5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1,3,4-噻二唑m.p.155-156℃，yield 38.9％，1H NMR(400MHz,CDCl3)ppm 7.87(s,1H,pyrazole H),7.53(s,1H,Thiazole-H),4.72(s,2H,-CH2-),3.93(s,3H,N-CH3),2.52(s,3H,pyrazole CH3)；MS(ESI),m/z:345(M+1)+.
[0071] 实施例11
[0072] 将实施例1步骤(5)中氯苄换成1.1mol的氯乙腈，其他操作同实施例1，获得2-((5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)巯基)乙腈(I-11)，产率18.6％。
[0073]
[0074] 2-((5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1,3,4-噻二唑-2-基)巯基)乙腈m.p.162-164℃，yeild 18.6％，1H NMR(400MHz,CDCl3)ppm 7.83(s,1H,pyrazole H)4.14(s,2H,-CH2-),3.88(s,3H,N-CH3),2.48(s,3H,pyrazole CH3)；MS(ESI),m/z:252(M+1)+.[0075] 实施例12
[0076] 将实施例1步骤(5)中氯苄换成1.1mol的6-氯-3-氯甲基吡啶，其他操作同实施例1，获得2-(((6-氯吡啶-3-基)甲基)巯基)-5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1,3,4-噻二唑(I-12)，产率39.6％。
[0077]
[0078] 2-(((6-氯吡啶-3-基)甲基)巯基)-5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1,3,4-噻二唑m.p.110-112℃，yield 39.6％，1H NMR(400MHz,CDCl3)ppm 8.46(s,1H,Py-H),7.82(s,2H,pyrazole H and Py-H),7.29(d,J＝12.23Hz,1H,Py-H),4.54(s,2H,-CH2-),3.90(s,
3H,N-CH3),2.48(s,3H,pyrazole CH3)；MS(ESI),m/z:339(M+1)+.
[0079] 实施例13
[0080] 将实施例1步骤(5)中氯苄换成1.1mol的3-氯丙烯，其他操作同实施例1，获得2-(丙烯基)-5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1,3,4-噻二唑(I-13)，产率34.4％。
[0081]
[0082] 2-(丙烯基)-5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1,3,4-噻二唑m.p.197-200℃，yield 34.4％，1H NMR(400MHz,CDCl3)ppm 7.85(s,1H,pyrazole H),6.10-5.99(m,1H,-CH＝),5.38(d,J＝17.01Hz,1H,＝CH2),5.23(d,J＝9.90Hz,1H,＝CH2),3.99(d,J＝6.89Hz,2H,-CH2-),3.92(s,3H,N-CH3),2.52(s,3H,pyrazole CH3)；MS(ESI),m/z:253(M+1)+.[0083] 实施例14
[0084] 将实施例1步骤(5)中氯苄换成1.1mol的4-叔丁基氯苄，其他操作同实施例1，获得2-((4-叔丁基苄基)巯基)-5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1,3,4-噻二唑(I-14)，产率
41.0％。
[0085]
[0086] 2-((4-叔丁基苄基)巯基)-5-(1,3-二甲基-1H-吡唑-4-基)-1,3,4-噻二唑m.p.104-108℃，yield 41.0％，1H NMR(400MHz,CDCl3)ppm 7.84(s,1H,pyrazole H),7.38(s,4H,Ar-H),4.58(s,2H,-CH2-),3.91(s,3H,N-CH3),2.50(s,3H,pyrazole CH3),1.33(s,9H,-C(CH3)3)；MS(ESI),m/z:359(M+1)+.
[0087] 实施例15杀菌活性测试
[0088] 试验对象：灰霉菌(Botrytis cinerea)、炭疽菌(Colletotrichum orbiculare)、苹果轮纹病(Botryospuaeria berengeriana)和水稻纹枯病(Rhizoctonia solani)。
[0089] 试验方法：采用盆栽试验法。将目标种子经过50℃浸泡，催芽后播种于育苗钵中，待生长至2片真叶的幼苗，供试验。实验重复4次。接种病菌后，植物被维持在18-30℃[平均温度24℃，80％以上的相对湿度(RH)]。
[0090] 药剂准备：取实施例1-14制备的(I-1)-(I-14)化合物各1mg，加0.5ml丙酮溶解后再加0.05ml 10％土温80，最后加50ml水充分溶解，获得100ppm样品药剂。因20ppm为20mg/L所以加水量＝5mg*1000/20mg＝50ml，因有机溶剂最终含量≤1％所以加丙酮的量＝50ml*1％＝0.5ml(溶解)，因吐温最终含量为0.1％所以50ml水里应有吐温0.05ml，即：应加10％吐温0.05ml。
[0091] 接种方法：
[0092] 采用菌悬液喷雾法接种：将试验对象的病菌经种子培养后，取种子液用蒸馏水稀释成3×107cfu/ml菌悬液，采用用喷壶喷雾接种至相应的植株。接种后18-30℃保湿培养。
[0093] 施药方法：待接种病菌的幼苗长出两片复叶时，用喷壶将样品药剂与对照药剂均匀喷施在供试植株的茎叶上，以清水代替样品药剂作为空白对照。
[0094] 待清水(空白实验)喷施植株充分发病后进行杀菌情况调查，并计算杀菌指数和防治效果。
[0095]
[0096] 公式(1)中：EF:相对防治效果；CK:对照区终期平均病情指数；PT:处理区终期平均病情指数，其杀菌活性测试结果如表1所示。
[0097] 表1 20ppm下各化合物的杀菌活性(％防效)
[0098]
[0099] 从表中可以看出除本发明得到的大部分化合物对灰霉菌(Botrytis cinerea)、炭疽菌(Colletotrichum orbiculare)、苹果轮纹病(Botryospuaeria berengeriana)和水稻纹枯病(Rhizoctonia solani)均表现出杀菌活性，且化合物I-10对炭疽菌(Colletotrichum orbiculare)表现出的活性最好。
