一种核糖核酸酶及其衍生物和/或变体及其应用

摘要

本发明涉及生物化学、分子生物学、生物技术领域，具体而言，涉及一种核糖核酸酶及其衍生物和/或变体，该核糖核酸酶及其衍生物和/或变体对温度、pH以及离子条件等适应范围较广，而且RNA切割活性较高，弥补了一些RNase酶切条件苛刻的不足，并且反应条件温和，具有很好的商业应用前景与较高的研究价值。

权利要求

1.氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的活性片段作为核糖核酸酶的应用；

所述核糖核酸酶切割RNA时的反应条件为：

37℃～75℃，pH6.5～12。

说明书

一种核糖核酸酶及其衍生物和/或变体及其应用

技术领域

[0001] 本发明涉及生物化学、分子生物学、生物技术领域，具体而言，涉及一种核糖核酸酶及其衍生物和/或变体及其应用。

背景技术

[0002] 核糖核酸酶RNase(EC3.1.26/27.—)和(EC 2.7.—.—)，是核酸酶的一种，可以催化RNA的降解成小分子。核糖核酸酶广泛存在于微生物、动植物之中。不同来源的核糖核酸酶其作用方式也存在差异，根据其作用位点的不同可以分为核酸内切酶和核酸外切酶。其中RNase A(EC 3.1.27.5)，来源于牛的胰脏，被广泛应用于实验室中RNA的去除实验中，而且大量的研究表明，它可以用于抗病毒，抗肿瘤的治疗之中。它可以切割RNA 3’末端非配对的嘧啶核苷酸(C和U)，通过2’,3’-环化的单磷酸中间产物形成3’-磷酸化的产物。该蛋白可以专一性的降解单链的RNA，其结构以及具体的作用机制已经阐明。此后又有多种RNase被发现。比如可以切割DNA-RNA杂交产物中的RNA的RNaseH。专一性切割单链RNA 3’末端非配对的G的RNaseT1等。RNase不仅具有RNA的降解功能，其中一部分还参与了细胞的多种其他生理功能，比如RNA的生成，RNA可变剪切体的形成，抗病毒等。随着科学研究的深入，多种RNase被发现，而且其作用的具体机制、作用的位点等都被一一阐明，新的RNase也被不断地发现。

[0003] 人类基因组计划完成以来，新的基因不断被发现，但是有很多基因其功能未知。未知功能基因C19orf43，少有被提起，仅在7篇左右的文献中有过提及但是关于该基因的具体功能未做任何阐明。人C19orf43(Chromosome 19open reading frame 43)基因定位于人19号染色体短臂13.2区段，该基因的同源基因广泛存在于真核生物中，从昆虫到人类的细胞中都发现了该基因同源基因的存在。C19orf43基因编码一个含有176个氨基酸，分子量为18.42KDa的蛋白，UniProt中蛋白编号为：Q9BQ61(CS043_HUMAN)。广泛存在于人体的各种组织和器官中，在细胞核以及细胞器中均发现其表达。但是没有关于该蛋白功能的任何报道。
本发明的目的是克隆并表达纯化该蛋白，证明了该蛋白的功能，并阐述了该蛋白在RNA降解中的具体作用机制。细胞中的C19orf43蛋白，其可以降解RNA，同时也可能参与了其他的生理过程，其它重要的用途仍然有待研究。

[0004] 有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

[0005] 本发明的目的在于提供一种核糖核酸酶及其衍生物和/或变体以解决上述问题。

[0006] 为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

[0007] 一种核糖核酸酶及其衍生物和/或变体，其具有氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的核糖核酸酶活性片段。

[0008] SEQ ID NO:1所示的核糖核酸酶活性片段分离于RNase蛋白的基因C19orf43(Chromosome 19open reading frame 43)的一个结构域，是C19orf43蛋白中起切割RNA活性的主要结构域。

[0009] 在本发明的一个实施例中，提供了对C19orf43全长蛋白及其各种缺失突变体的Rnase活性检测，从其中可见具有SEQ ID NO:1所示的核糖核酸酶活性片段的衍生物和/或变体均具有RNase活性。

[0010] 本发明请求保护SEQ ID NO:1所示的核糖核酸酶活性片段及包含该片段的、具有RNase活性的各种衍生物和/或变体。

[0011] 如上所述的核糖核酸酶及其衍生物和/或变体切割RNA时的反应条件为：

[0012] 37℃～75℃，pH 6.5～12。

[0013] 本发明提供的核糖核酸酶及其衍生物和/或变体对温度、pH以及离子条件等适应范围较广，而且RNA切割活性较高，弥补了一些RNase酶切条件苛刻的不足，并且反应条件温和，具有很好的商业应用前景与较高的研究价值。

[0014] 一种分离的核酸分子，所述核酸分子选自如下核酸：

[0015] A)、DNA或RNA，编码权利要求1所述的核糖核酸酶及其衍生物和/或变体；

[0016] B)、与A)中定义的核酸互补的核酸。

[0017] 本发明所请求保护的DNA分子还包括与此相关的cDNA序列。

[0018] 优选的，所述分离的核酸分子包括SEQ ID NO:2所示的核酸序列。

[0019] SEQ ID NO:2所示的核酸序列即编码SEQ ID NO:1所示的核糖核酸酶活性片段的蛋白序列。

[0020] 一种载体，其包括如上所述的核酸分子。

[0021] 一种宿主细胞，其被如上所述的载体转化。

[0022] 在本发明的一个实施例中，优选该载体为原核表达载体pET33b(+)，优选该宿主细胞为大肠杆菌Ecoli BL21(DE3)细胞。

[0023] 一种制备如上所述的核糖核酸酶及其衍生物和/或变体的方法，包括如下步骤：

[0024] 在培养基中和合适的培养条件下培养如上所述的宿主细胞；

[0025] 从所培养的宿主细胞的裂解液中分离纯化得到所述核糖核酸酶及其衍生物和/或变体。

[0026] 一种试剂盒，所述试剂盒包含如上所述的核糖核酸酶及其衍生物和/或变体。

[0027] 如上所述的核糖核酸酶及其衍生物和/或变体的抑制剂。

[0028] 优选的，所述抑制剂包括Zn2+、EDTA、EGTA。

[0029] 其中EDTA和EGTA起到部分抑制该核糖核酸酶及其衍生物和/或变体的作用。

[0030] 本发明成功构建并表达纯化了C19orf43蛋白，并证明了C19orf43蛋白RNA切割的功能，阐述了RNA切割中的具体作用位点与机制，同时探讨了在RNA切割过程中该酶所需要的条件，发现该酶在RNA降解，合成等研究领域具有广泛的用途。除RNA切割功能之外，极大可能参与了细胞的其他生理功能，目前尚未可知。同时，本发明也为未知RNase的发现与功能研究提供了新的思路与参考。

附图说明

[0031] 为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

[0032] 图1为C19orf43基因PCR扩增胶图；

[0033] 图2为C19orf43蛋白诱导表达的染色图片；

[0034] 图3为C19orf43蛋白经 pure纯化后各组分染色图片；

[0035] 图4为各种不同类型RNA切割结果；

[0036] 图5为时间和温度对C19orf43蛋白切割RNA的影响；

[0037] 图6为pH对C19orf43蛋白切割RNA的影响；

[0038] 图7为不同离子条件对C19orf43蛋白切割RNA的影响；

[0039] 图8为C19orf43蛋白截短体的构建与RNA切割活性验证；

[0040] 图9为C19orf43蛋白切割RNA的机制。

具体实施方式

[0041] 下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

[0042] 本发明的目的是通过人C19orf43基因克隆、蛋白诱导表达纯化，体外RNA切割实验等方法，阐明C19orf43蛋白切割RNA的机制。以及阐述其应用的前景。

[0043] 本发明提供了人C19orf43基因克隆，质粒构建，蛋白诱导表达纯化，体外RNA切割实验的具体实施步骤；

[0044] 在实施例中，本发明提供了如下操作的具体内容：

[0045] cDNA文库的获得：HeLa-S3细胞培养好后，提取RNA，使用MMLV逆转录酶，构建cDNA文库的具体步骤。

[0046] C19orf43基因的克隆：用构建的cDNA文库为PCR的模板，扩增C19orf43片段，胶回收后，酶切过夜，胶回收片段后连入相同原核表达载体pET33b(+)，转化涂板，挑取单克隆酶切鉴定，并测序确认结果。

[0047] 构建好的pET33b(+)-C19orf43表达载体，转化入大肠杆菌Ecoli BL21(DE3)中，IPTG诱导蛋白表达，并提供了蛋白表达的条件。

[0048] 大规模培养细菌，离心收集，裂解菌液，通过GE公司的AKTA pure蛋白纯化仪，以及GE公司的HisTrap HP柱，HiTrap SP HP柱以及superdex 75柱，将C19orf43蛋白纯化并浓缩，测定蛋白浓度，分装速冻后，-80℃保存。

[0049] 设计酶切体系，验证C19orf43对不同类型的RNA，可以进行切割，探讨切割的时间、温度、离子浓度以及pH等影响酶活性的因素。发现C19orf43蛋白，可以切割不同类型的RNA，而且切割过程中很少受离子浓度以及种类的限制，pH适应范围较广，pH 6.5～12下，该蛋白具有很好的切割活性。温度范围适应广，从37℃～75℃条件下均表现出良好的酶切活性。

[0050] 通过合成小RNA的切割实验，阐明了C19orf43蛋白切割RNA的机制，主要是通过切割RNA中嘌呤碱基，降解RNA。

[0051] 本发明还请求保护一种试剂盒，所述试剂盒包含如上所述的核糖核酸酶及其衍生物和/或变体。

[0052] 实施例1 C19orf43基因克隆与原核表达载体的构建

[0053] 一、人HeLa-S3细胞cDNA文库的构建，主要分为以下步骤。

[0054] 1、HeLa-S3细胞的培养，细胞在90％DMEM、10％FBS、1％双抗的培养基中生长，条件为37℃，5％CO2。

[0055] 2、待细胞长势良好，培养瓶中汇合度达90％时，吸尽细胞培养液，加无菌PBS溶液清洗细胞2次，吸尽。

[0056] 3、T25培养皿加1ml Trizol(Invitrogen)溶解细胞，反复用移液器吸打，室温裂解15min，吸至新的1.5ml无RNase的离心管中，加200μl氯仿剧烈混匀15s，静置3min，12000rpm离心5min。

[0057] 4、吸取上清至新的1.5ml无RNase的离心管中，加500μl异丙醇混匀，静置20min。12000rpm，4℃离心15min。

[0058] 5、弃上清液，用冰冷的70％乙醇溶液1ml清洗沉淀，12000rpm，4℃离心5min，弃上清，吹干。

[0059] 6、加200μl Nuclease-free water(Ambion)溶解，测浓度。

[0060] 7、根据SupersciptIII Reverse Transcription protocol(Invitrogen)步骤将总RNA中含有poly(A)的mRNA逆转录成单链DNA，构建cDNA文库，-20℃保存备用。

[0061] 二、C19orf43基因克隆与原核表达载体的构建

[0062] 1、根据C19orf43基因的核苷酸序列(SEQ ID NO:3所述的核苷酸序列)，设计引物(上游引物：tccgaattcgatggctgcccgagggag，下游引物：acgcgtcgactcatttcaccaggggcc)，进行PCR扩增C19orf43基因片段，PCR扩增产物胶图如图1。

[0063] 反应体系为：

[0064]

[0065]

[0066] PCR扩增程序为：

[0067]

[0068] 截短体的引物为：C19orf43A(上游引物：tccgaattcgggcgtgaacttgttcgc，下游引物：acgcgtcgactcatttcaccaggggcc)，C19orf43B(上游引物：tccgaattcgggcgtgaacttgttcgc，下游引物：ccgCTCGAGgtcacctttacttgttaatac)，C19orf43C(上游引物：tccgaattcgatggctgcccgagggag，下游引物：
ccgctcgaggcccggaccgcccttcctcttc)，C19orf43D(上游引物：
tccgaattcgtccacacttagcttcgtg，下游引物：ccgctcgagtttcaccaggggccgag)，C19orf43E(上游引物：tccgaattcgatggctgcccgagggag，下游引物：acgcgtcgactcatttcaccaggggcc)。

[0069] 2、将PCR产物跑胶割胶回收后，使用选取的DNA限制性内切酶EcoRI&SalI将片段37℃，过夜酶切，试剂盒回收酶切好的片段。

[0070] 3、采用同样的限制性内切酶将pET33b(+)原核表达载体进行37℃，过夜酶切，试剂盒回收酶切好的线性化载体。

[0071] 4、使用T4DNA(NEB)连接酶将回收的线性化载体与DNA片段按照摩尔比1:3-1:6配置连接体系，具体参照T4连接酶的操作手册，16℃过夜连接。

[0072] 5、将连接产物采用热激法转入感受态大肠杆菌E.coli之中，加入1ml LB培养基，37℃，100rpm培养1小时。

[0073] 6、将转化的大肠杆菌涂布到含有kan(卡那霉素)的平板，置入37℃恒温培养箱中培养。

[0074] 7、挑选单克隆，摇菌，抽提质粒，酶切跑胶鉴定，酶切片段大小正确的质粒，送样测序，正确的质粒用于蛋白的诱导表达。

[0075] 实施例2 C19orf43蛋白的诱导表达与纯化

[0076] 1、将pET33b(+)-C19orf43质粒转入原核表达载体Ecoli BL21(DE3)中，挑单克隆摇菌，加IPTG诱导，跑SDS-Page胶鉴定，确定最终的诱导条件，如图2所示，诱导条件为16℃，16小时蛋白表达效果最佳。

[0077] 2、挑取单克隆摇菌，扩大培养至100ml OD600＝1，作为种子加入4×1L LB培养基中，调节加入量，使LB培养基中OD600＝0.05，37℃，200rpm培养，不同时段取菌液测OD值。当OD600＝0.6时，将培养瓶拿出冷却是室温。加入IPTG至终浓度0.4mM，16℃200rpm培养16小时诱导C19orf43蛋白表达。6000rpm，4℃离心10min收集菌体，加入裂解液(300mM NaCl，50mM Tris pH 7.5，10mM imidazole，0.02％(w/v)NaN3，20％(v/v)glycerol，0.22μm filtered)后-80℃保存。

[0078] 3、菌液经高压匀质机，14,500psi(ATS Engineering Ltd.)破碎3-5个循环后，导入小烧杯中加NP-40，至终浓度为0.1％(v/v)，低速混匀20min，菌体破碎，蛋白纯化等所有操作步骤在4℃房间中完成。破碎后，14000rpm 4℃离心80min。取上清，0.22μm过滤。上5ml HiTrap His柱(GE)纯化，经5％，10％洗提液(300mM NaCl，50mM Tris pH7.5，500mM imidazole，0.02％(w/v)NaN3，20％(v/v)glycerol，0.22μm filtered)洗脱后，将洗提液浓度升至60％，洗脱5个柱体积，收集含有280nm吸收峰值的各管。用低盐溶液(50mM NaCl，50mM Tris pH 7.5，0.02％(w/v)NaN3，20％(v/v)glycerol，0.1mM EDTA(pH 8.0)，0.22μm filtered)稀释至NaCI浓度为75mM时止，加入DTT至终浓度为1mM。混匀后上5ml HiTrap SP HP柱进行纯化，采用分部洗脱的方式，，第一步洗脱杂蛋白为10％的高盐溶液，第二步洗脱杂蛋白为25％的高盐溶液，高盐溶液(1M NaCl，50mM Tris pH7.5，0.02％(w/v)NaN3，20％(v/v)glycerol，0.1mM EDTA(pH 8.0)，0.22μm filtered)洗脱杂蛋白3个柱体积后，采用
60％高盐溶液洗脱蛋白5个柱体积。收集含有280nm吸收峰值的各管洗脱物，使用millipore公司生产的10KDa cut-off的浓缩管，将蛋白浓缩至体积为1ml。上superdex 75(GE)柱，进行分子筛分级分离，洗脱液为(250mM NaCl，5mM Tris pH 7.5，0.02％(w/v)NaN3，20％(v/v)glycerol，0.22μm filtered)。收集含有280nm吸收峰值的各管洗脱物，浓缩至蛋白浓度为10mg/ml，蛋白的摩尔消光系数参考(http://www.expasy.ch/tools/protparam.html)预测数值。将蛋白分装后液氮瞬冻，-80℃保存，备用。各组分的纯化结果参考图3，其中每条泳道表示经过不同的纯化柱得到的洗脱产物，crude为细菌的裂解液，Ft of His是His柱流川液，His E8为His柱第,8号管洗脱产物，SP E4为经过SP柱纯化后第4号管洗脱产物，SP E18为经过SP柱纯化后第18号管洗脱产物，GF E8为经分子筛纯化后第8号管洗脱产物，GF E11为经分子筛纯化后第11号管洗脱产物，GF组分为分子筛分级分离后，蛋白纯化终产物浓缩保存备用的样品，C19orf43蛋白经 pure纯化仪三步柱纯化后，纯度大于99％。

[0079] 实施例3 C19orf43蛋白切割不同类型的RNA

[0080] 1、总RNA的切割实验，总RNA的提取参照上文Trizol方法。总RNA切割实验中每个反应管中加入2μg RNA，不同量的C19orf43蛋白溶解于2μl gel buffer(250mM NaCl，5mM Tris pH 7.5，0.02％(w/v)NaN3，20％(v/v)glycerol，0.22μm filtered)中，Nuclease-free water补加至20μl，置于37℃，反应30min。加入loading buffer后，1％agarose胶分离，结果如图4中A图所示。当C19orf43蛋白加入量为1μg时，总RNA量有显著的降低，如图4A中lane 4，当C19orf43蛋白加入量为2μg时，总RNA几乎被全部降解，如图4A中lane 5。

[0081] 2、单条RNA的切割实验中，用到了T7(Thermo)转录的含有ɑ-32P-GTP(PerkinElmer)标记的RNA，每个反应中RNA加入量相等，反应体系为20μl，反应条件为37℃，30min。酚氯仿抽提RNA，乙醇和Glycogen沉淀20min，-40℃，离心，弃上清，加1×loading，95℃变性5min，6％聚丙烯酰胺尿素胶，550V 2小时分离，跑胶结束后，封胶压磷屏，24小时后，扫描仪(PerkinElmer)，扫描结果。实验发现当C19orf43蛋白的加入量为0.1μg时，RNA的量有显著性降低，如图4B中lane 2和lane 5，当C19orf43蛋白的加入量为1μg时，RNA量有极显著降低，如图4B中lane 3和lane 6。T7转录体系以及转录是需要的条件参照Thermo公司提供的实验操作手册。结果显示C19orf43蛋白可以切割具有颈环结构的RNA，以及正常不具有特殊结构的RNA，如图4中B图所示。

[0082] 3、小RNA的切割实验中，小RNA长度为31nt，由生物公司(IDT)合成切割反应体系为20μl，RNA加入量为2pmoles，C19orf43蛋白加入量为1μg，反应条件为37℃，30min。加入2×Stop solution终止反应，20％聚丙烯酰胺尿素胶，200V 30min分离，后用RNA燃料stain-all染色。C19orf43蛋白可以切割化学合成的小RNA，如图4C图中lane 2。

[0083] 实施例4 C19orf43蛋白切割RNA条件的探索

[0084] 1、时间和温度对C19orf43蛋白切割RNA的影响，切割体系参照实施例3中第2条。实验结果如图5所示，切割5min后，RNA的量有了显著性降低，如图5A中lane2，10min后RNA有极显著降低，结果表明C19orf43切割RNA效率很高，参照图5A和图5B。温度对C19orf43蛋白切割的影响，参照图5C和5D温度达37℃后如5C图中lane 5，RNA量有极显著降低，考虑到95℃时，RNA存在降解现象，不考虑该温度的切割条件。37℃到75℃，C19orf43蛋白具有较高的RNA切割活性。说明C19orf43蛋白温度范围适应性较广。该特点可以很好的扩展C19orf43蛋白在RNA降解方面的应用。

[0085] 2、pH条件对C19orf43蛋白切割RNA的影响，切割体系参照实施例3中第2条。pH从6-12条件下，分别检测了不同pH对C19orf43蛋白切割RNA的影响，pH＝6时影响了C19orf43蛋白对RNA的切割，如图6A中lane 2，pH 6.5～12时C19orf43对RNA都有降解，且RNA量的降低具有显著性，如图6A中lane 3-lane 15。pH＝13时RNA可以自行降解，如6C图中lane 5和lane 6，不考虑该pH值。图6说明C19orf43蛋白pH范围适应性较广，在pH 6.5-pH 12不同pH条件下对RNA都具有很好的切割活性，该特点可以很好的拓展C19orf43蛋白在RNA降解方面的应用。

[0086] 3、不同离子条件对C19orf43蛋白切割RNA的影响，切割体系参照实施例3中第2条。蛋白溶解的Gel buffer之中仅含有NaCl、Tris和甘油，其他离子条件是否可以影响C19orf43蛋白对RNA的切割？本发明选取了一价的K+，二价的Mg2+，Mn2+，Ca2+，Zn2+以及金属离子螯合剂EDTA和EGTA，研究不同的离子对C19orf43蛋白切割RNA的影响，结果如图7A和B中所示，各种离子以及EDTA和EGTA对C19orf43切割RNA具有不同程度的影响，其中Zn2+对C19orf43蛋白切割RNA具有明显的抑制作用，如图7A中Lane 7，用于终止酶反应的EDTA和EGTA螯合剂具有一定的抑制效果，但是不明显。其他的离子对C19orf43切割RNA没有显著的影响。C19orf43的酶活性不需要二价离子的辅助，在螯合剂EDTA和EGTA存在下，仍然具有很好的切割活性，证明C19orf43可以有较为广泛的应用。

[0087] 实施例5 C19orf43不同突变体的构建

[0088] C19orf43不同突变体的构建为了探究该蛋白的哪一段区域具有RNA的切割活性，C19orf43A(55-176)，C19orf43B(55-148)，C19orf43C(1-110)，C19orf43D(111-176)，C19orf43E(1-176，146K-A)不同突变体的构建参照实施例1中步骤二，蛋白诱导与纯化参考实施例2；C19orf43(1-176)的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。将纯化的不同的截短体蛋白分别切割RNA，检测哪一段截短体蛋白含有和全长蛋白一样的RNA切割活性，如图8C，结果发现除C19orf43C不具有RNA切割活性外，其他截短体均具有RNA切割活性，且活性较高，如图8A和图8B所示，由此得到其RNA切割的活性结构域位于C端111-148区39个氨基酸内，该区段的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，该区段的核酸序列如SEQ ID NO:2所示。C19orf43蛋白截短体均具有良好的RNA切割活性。C19orf43D仅含有C端66个氨基酸，但是具有较高的RNA切割活性，可以广泛的应用于RNA去除实验中，具有良好的开发应用前景。

[0089] 图5～图8中Ratio及Digestion Ratio都是指的降解RNA的反应完成后，各组剩余的RNA量与初始RNA量的比例。

[0090] 实施例6 C19orf43蛋白切割RNA的分子机制

[0091] 利用BIONEER公司合成的含有两端甲基化标记的小RNA，如图9A中所示，探讨C19orf43蛋白切割RNA的分子机制。其中合成的小RNA长度为10个核苷酸，切割条件为37℃，30min，反应体系为20μl，参照实施例3步骤3。据图9B和图9C中lane 2和lane 8结果所示，C19orf43D可以切割1A，1G，A1和G1，而不能切割U和C嘧啶碱基，证明C19orf43D切割RNA的分子机制是通过切断RNA中嘌呤碱基，将RNA降解。同时为了确定C19orf43D切割RNA是从RNA的
5'还是3'端，抑或中间位置。有合成了三条RNA，如图9D，按照相同的酶切条件将3条RNA进行了切割实验，发现lane 3，5和7中实验组RNA，被C19orf43蛋白切割，参照图9E。5R5这条RNA两端都被甲基化，不能被RNase从两端进行切割，C19orf43可以切割该RNA，说明C19orfr43蛋白切割RNA是通过RNA分子内部的嘌呤碱基，因此本发明提出C19orf43蛋白切割RNA的分子机制模型，如图9F。C19orf43蛋白切割RNA，是通过RNA分子内部的嘌呤碱基实现的。

[0092] 以上为对本发明内容作出具体解释所列举的实施例，一切基于本发明的表达质粒，C19orf43截短体蛋白的构建，蛋白表达纯化，以及C19orf43蛋白切割RNA的分子机制等均属于本发明保护的范畴。

[0093] 最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，但本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。