本发明根据金钱小榕的生长特性，以MS培养基为基础配制出适合金钱小榕组织培养的培养基，包括不定芽诱导、增殖和生根的培养基。使用本发明所述的用于不定芽诱导的培养基、用于继代增殖的培养基和用于无菌生根的培养基能有效提高繁殖系数和成苗率；种苗强壮，缩短上市时间，提高种植效益；能够有效解决金钱小榕严重供应不足的问题，也为种植者提供良好的经济效益。
1.一种金钱小榕的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)外植体选取与消毒：
①选取生长健康无病虫害的金钱小榕的幼嫩茎作为外植体；
②去除多余的叶片，用洗涤剂洗涤去除枝条表面的污垢，再用纸巾吸干；
③在超净工作台上，先用70％酒精浸泡10-30s，再用无菌水冲洗1次，3-5min；
④再用0.1-0.3％的升汞溶液消毒10-15min，最后用无菌水洗涤3-5次，每次3-5min，得到消毒外植体；
改良MS培养基的配方为：在改良MS培养基中FeSO4的浓度为50～60mg/L，其它组分及浓度与原MS培养基配方完全一致；
将步骤(1)得到的消毒外植体，用无菌手术刀片切下侧芽，然后接种于不定芽诱导培养基中，进行诱导培养4周，得到金钱小榕不定芽；
诱导培养条件如下：温度为28±2℃，湿度为50-80％，光照时间为12小时/天，光照强度为600-8001x；
所述不定芽诱导培养基的配方为：在所述改良MS培养基的基础上添加6-BA和NAA，其中
6-BA的浓度为0.5-2mg/L，NAA的浓度为0.05-0.5mg/L；
将步骤(3)得到的金钱小榕不定芽接入继代增殖培养基，进行继代培养4周，得到金钱小榕丛 苗；
继代增殖培养条件如下：温度为28±2℃，湿度为75-85％，光照时间为12小时/天，光照强度为600-10001x；
所述继代增殖培养基的配方为：在所述改良MS培养基的基础上添加6-BA和NAA，其中6-BA的浓度为1.5-2.5mg/L，NAA为0.05-0.5mg/L；
待步骤(4)获得的金钱小榕丛 苗长至1.5-2cm高时进行诱导生根，切下单株，接种于生根培养基中，进行生根培养20-30天，得到金钱小榕幼苗；
生根培养条件如下：培养温度为28±2℃，湿度为75-85％，光照时间为10-15小时/天，光照强度为600-8001x；
所述生根培养基的配方为：在所述改良MS培养基的基础上添加NAA，NAA的浓度为0.5-
步骤(5)中金钱小榕幼苗生长至根长0.5-1cm、苗高2-4cm后，将培养瓶瓶盖打开，室内炼苗培养5-7天；
然后洗净根部培养基，用消毒后的岩棉包裹好组培苗根部，放入直径为5cm的镂空塑料杯中，移至塑料大棚。
2.如权利要求1所述的金钱小榕的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，在改良MS培养基中FeSO4的浓度为55.6mg/L。
3.如权利要求1所述的金钱小榕的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，在所述不定芽诱导培养基中6-BA的浓度为1mg/L，NAA的浓度为0.1mg/L。
4.如权利要求1所述的金钱小榕的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，在所述继代增殖培养基中6-BA的浓度为2mg/L，NAA的浓度为0.2mg/L。
5.如权利要求1所述的金钱小榕的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，在所述生根培养基中，NAA的浓度为1.5mg/L。
一种金钱小榕的组织培养快速繁殖方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种金钱小榕的组织培养快速繁殖方法，属于植物快速繁殖技术领域。
背景技术
[0002] 随着社会的发展和生活水平的提高，水族箱也越来越流行。观赏水草是水族箱的重要组成成分。由于人们对水草的喜爱，大量仅以水草为主的观赏水族箱十分畅销。目前观赏水草品种已经超过500多种，其中绝大多数来原于美洲、非洲、东南亚等热带地区。金钱小榕也称金钱榕，是一种单子叶植物，属于天南星科水榕属，和水榕相比较，叶形呈圆形。其属于挺水性水草，生长缓慢，叶色浓绿，是中前景草的最好选择之一，十分非常流行，市场上往往供不应求。
[0003] 金钱小榕的繁殖主要依靠对成年的茎进行分支，但是其生长十分缓慢，繁殖系数较低同时成本较高。植物组织培养技术能够利用侧芽，茎段等快速繁殖，缓解传统生产上的种苗繁殖率低下的问题。目前虽有一些观赏水草如水榕、红椒、绿椒等已经成功建立了组织培养技术体系，但是还没有金钱小榕相关的报道，也没有进行金钱小榕工厂化生产。观赏水草常年生长在水中，外植体常常带有多种细菌，导致无菌培养困难，严重制约组织培养技术的应用。通过建立组织培养技术能够在短期内大量提供金钱小榕的种苗，保障期周年供应市场。
[0004] 针对以上的现状，本发明提供了一种金钱小榕的组织培养快速繁殖方法，能有效增加种苗的繁殖系数，满足生产上对种苗的需求，进一步提高种植和销售者的收入，促进观赏水草产业的发展。
发明内容
[0005] 本发明的目的在于解决当前金钱小榕种苗的来源，提供一种快速、低成本的金钱小榕的组织培养快速繁殖方法。
[0006] 为实现上述目的，本发明采用的技术方法如下：
[0007] 一种金钱小榕的组织培养快速繁殖方法，
[0008] (1)外植体选取与消毒：
[0009] ①选取生长健康无病虫害的金钱小榕的幼嫩茎作为外植体；
[0010] ②去除多余的叶片，用洗涤剂洗涤去除枝条表面的污垢，再用纸巾吸干；
[0011] ③在超净工作台上，先用70％酒精浸泡10-30s，再用无菌水冲洗1次，3-5min；
[0012] ④再用0.1-0.3％的升汞溶液消毒10-15min，最后用无菌水洗涤3-5次，每次3-5min，得到消毒外植体；
[0013] 还包括以下步骤：
[0014] (2)改良MS培养基的制备：
[0015] 改良MS培养基的配方为：在改良MS培养基中FeSO4的浓度为50～60mg/L，其它组分及浓度与原MS培养基配方完全一致；
[0016] (3)不定芽诱导：
[0017] 将步骤(1)得到的消毒外植体，用无菌手术刀片切下侧芽，然后接种于不定芽诱导培养基中，进行诱导培养4周，得到金钱小榕不定芽；
[0018] 诱导培养条件如下：温度为28±2℃，湿度为50-80％，光照时间为12小时/天，光照强度为600-8001x；
[0019] 所述不定芽诱导培养基的配方为：在所述改良MS培养基的基础上添加6-BA和NAA，其中6-BA的浓度为0.5-2mg/L，NAA的浓度为0.05-0.5mg/L；
[0020] (4)继代增殖：
[0021] 将步骤(3)得到的金钱小榕不定芽接入继代增殖培养基，进行继代培养4周，得到金钱小榕从苗；
[0022] 继代增殖培养条件如下：温度为28±2℃，湿度为75-85％，光照时间为12小时/天，光照强度为600-10001x；
[0023] 所述继代增殖培养基的配方为：在所述改良MS培养基的基础上添加6-BA和NAA，其中6-BA的浓度为1.5-2.5mg/L，NAA为0.05-0.5mg/L；
[0024] (5)无菌生根：
[0025] 待步骤(4)获得的金钱小榕从苗长至1.5-2cm高时进行诱导生根，切下单株，接种于生根培养基中，进行生根培养20-30天，得到金钱小榕幼苗；
[0026] 生根培养条件如下：培养温度为28±2℃，湿度为75-85％，光照时间为10-15小时/天，光照强度为600-8001x；
[0027] 所述无菌生根培养基的配方为：在所述改良MS培养基的基础上添加NAA，NAA的浓度为0.5-3mg/L；
[0028] (6)炼苗与移栽
[0029] 步骤(5)中金钱小榕幼苗生长至根长0.5-1cm、苗高2-4cm后，将培养瓶瓶盖打开，室内炼苗培养5-7天；
[0030] 然后洗净根部培养基，用消毒后的岩棉包裹好组培苗根部，放入直径为5cm的镂空塑料杯中，移至塑料大棚。
[0031] 在改良MS培养基中FeSO4的浓度为55.6mg/L。
[0032] 在所述不定芽诱导培养基中6-BA的浓度为1mg/L，NAA的浓度为0.1mg/L；
[0033] 在所述继代增殖培养基中6-BA的浓度为2mg/L，NAA的浓度为0.2mg/L。
[0034] 在所述无菌生根培养基中，NAA的浓度为1.5mg/L。
[0035] 与现有技术相比较，本发明具备的有益效果：
[0036] 利用本发明对金钱小榕茎段的腋芽进行组织培养快速繁殖，有效提高繁殖系数，缩短生产周期，提高种植效益，能够有效解决当前金钱小榕严重供应不足的问题，也为种植者提供良好的经济效益。
附图说明
[0037] 图1继代增殖步骤得到的金钱小榕从苗。
[0038] 图2无菌生根步骤得到的金钱小榕幼苗。
[0039] 图3种植待上市的金钱小榕。
具体实施方式
[0040] 实施例1
[0041] 一种金钱小榕的组织培养快速繁殖方法，包括以下步骤：
[0042] (1)外植体选取与消毒：
[0043] ①选取生长健康无病虫害的金钱小榕的幼嫩茎作为外植体；
[0044] ②去除多余的叶片，用洗涤剂洗涤去除枝条表面的污垢，再用纸巾吸干；
[0045] ③在超净工作台上，先用70％酒精浸泡10-30s，再用无菌水冲洗1次，3-5min；
[0046] ④再用0.1-0.3％的升汞溶液消毒10-15min，最后用无菌水洗涤3-5次，每次3-5min，得到消毒外植体；
[0047] (2)改良MS培养基的制备：
[0048] 改良MS培养基的配方为：在改良MS培养基中FeSO4的浓度为55.6mg/L，其它组分及浓度与原MS培养基配方完全一致；
[0049] (3)不定芽诱导：
[0050] 将步骤(1)得到的消毒外植体，用无菌手术刀片切下侧芽，然后接种于不定芽诱导培养基中，进行诱导培养4周，得到金钱小榕不定芽；
[0051] 诱导培养条件如下：温度为28±2℃，湿度为50-80％，光照时间为12小时/天，光照强度为600-8001x；
[0052] 所述不定芽诱导培养基的配方为：在所述改良MS培养基的基础上添加6-BA和NAA，在所述不定芽诱导培养基中6-BA的浓度为1mg/L，NAA的浓度为0.1mg/L；
[0053] (4)继代增殖：
[0054] 将步骤(3)得到的金钱小榕不定芽接入继代增殖培养基，进行继代培养4周，得到金钱小榕从苗；
[0055] 继代增殖培养条件如下：温度为28±2℃，湿度为75-85％，光照时间为12小时/天，光照强度为600-10001x；
[0056] 所述继代增殖培养基的配方为：在所述改良MS培养基的基础上添加6-BA和NAA，在所述继代增殖培养基中6-BA的浓度为2mg/L，NAA的浓度为0.2mg/L。
[0057] (5)无菌生根：
[0058] 待步骤(4)获得的金钱小榕从苗长至1.5-2cm高时进行诱导生根，切下单株，接种于生根培养基中，进行生根培养20-30天，得到金钱小榕幼苗；
[0059] 生根培养条件如下：培养温度为28±2℃，湿度为75-85％，光照时间为10-15小时/天，光照强度为600-8001x；
[0060] 所述无菌生根培养基的配方为：在所述改良MS培养基的基础上添加NAA，在所述无菌生根培养基中，NAA的浓度为1.5mg/L。
[0061] (6)炼苗与移栽
[0062] 步骤(5)中金钱小榕幼苗生长至根长0.5-1cm、苗高2-4cm后，将培养瓶瓶盖打开，室内炼苗培养5-7天；
[0063] 然后洗净根部培养基，用消毒后的岩棉包裹好组培苗根部，放入直径为5cm的镂空塑料杯中，移至塑料大棚。
[0064] 实施例2
[0065] 改良MS培养基的配方为：在改良MS培养基中FeSO4的浓度为50mg/L，其他组分及浓度与原MS培养基配方完全一致；
[0066] 所述不定芽诱导培养基的配方中6-BA的浓度为0.5mg/L，NAA的浓度为0.05mg/L；
[0067] 所述继代增殖培养基的配方中6-BA的浓度为1.5mg/L，NAA为0.05mg/L；
[0068] 所述无菌生根培养基的配方中NAA的浓度为0.5mg/L，
[0069] 其余步骤与实施例1相同，不再赘述。
[0070] 实施例3
[0071] 改良MS培养基的配方为：在改良MS培养基中FeSO4的浓度为60mg/L，其他组分及浓度与原MS培养基配方完全一致；
[0072] 所述不定芽诱导培养基的配方中6-BA的浓度为2mg/L，NAA的浓度为0.5mg/L；
[0073] 所述继代增殖培养基的配方中6-BA的浓度为2.5mg/L，NAA为0.5mg/L；
[0074] 所述无菌生根培养基的配方中NAA的浓度为3mg/L，
[0075] 其余步骤与实施例1相同，不再赘述。
