一种含腐植酸螯合微量元素的发酵饲料及其制备方法

摘要

本发明公开了一种含腐植酸螯合微量元素的发酵饲料，是在含有腐植酸螯合微量元素的发酵培养基中接种菌种，发酵，得到含腐植酸螯合微量元素的发酵饲料；所述发酵培养基是由发酵料和水组成；发酵料的原料组成为：豆粕10‑20份、麸皮20‑45份、腐植酸5‑10份、石粉40‑50份、丝穗金粟兰5‑10份、银线草5‑10份、罗布麻叶4‑8份、金龙胆草4‑8份、布渣叶4‑8份、腐植酸螯合微量元素0.7‑1.4份。本发明还公开了该发酵饲料的制备方法。本发明的发酵饲料通过腐植酸与微量元素的螯合，有助于缓解无机微量元素的添加引发的资源浪费和环境污染问题，以及解决氨基酸微量元素螯合物生产费用高、不利于广泛使用的问题。

权利要求

1.一种含腐植酸螯合微量元素的发酵饲料，其特征在于，是在含有腐植酸螯合微量元素的发酵培养基中接种菌种，发酵，得到含腐植酸螯合微量元素的发酵饲料；

其中，所述腐植酸螯合微量元素是由腐植酸锌、腐植酸铜和腐植酸锰按质量比(1.4-

3.6)：(0.086-0.215)：(6-10)混合而成；

所述发酵培养基是由发酵料和水组成；所述发酵料的原料组成为：豆粕10-20份、麸皮

20-45份、腐植酸5-10份、石粉40-50份、丝穗金粟兰5-10份、银线草5-10份、罗布麻叶4-8份、金龙胆草4-8份、布渣叶4-8份、腐植酸螯合微量元素0.7-1.4份；

所述菌种为植物乳杆菌LP，保藏编号为：CCTCC M 2010150。

2.如权利要求1所述的发酵饲料，其特征在于，所述发酵料占发酵培养基的质量百分比为50-60％，水占发酵培养基的质量百分比为40-50％。

3.权利要求1或2所述的发酵饲料的制备方法，其特征在于，步骤如下：(1)将丝穗金粟兰、银线草、罗布麻叶、金龙胆草和布渣叶干燥，粉碎，混合，制成中药粉；

(2)将步骤(1)的中药粉与豆粕、麸皮、腐植酸、石粉和腐植酸螯合微量元素混合，加入水，搅拌均匀，制备得到发酵培养基，并调节发酵培养基的含水量为40-50％，pH为6.0-7.0；

(3)向发酵培养基中接种植物乳杆菌LP，保藏编号为：CCTCC M 2010150，在30-42℃进行发酵，当发酵物pH降至4.0以下时，结束发酵，即得发酵饲料。

4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，所述腐植酸螯合微量元素的制备方法为：将腐植酸与微量元素的无机盐离子按摩尔比(1-3)：(1-2)加入到水中，调节pH为4-6，在60-80℃，搅拌条件下，反应1-2h，得到腐植酸微量元素螯合液；然后将腐植酸微量元素螯合液浓缩，加入2-3倍体积的无水乙醇搅拌均匀，洗涤去除游离微量元素的无机盐离子，离心弃掉上清，沉淀物干燥，即得。

5.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，植物乳杆菌LP的添加量为5×105-5×106cfu/g。

说明书

一种含腐植酸螯合微量元素的发酵饲料及其制备方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种含腐植酸螯合微量元素的发酵饲料及其制备方法，属于发酵饲料技术领域。

背景技术

[0002] 矿物质元素是动物维持生命和生产产品必不可少的营养素之一，根据动物体内含量的不同，矿物质通常分为两类：常量元素是指占动物机体总量万分之一以上的无机元素，如钙、磷、钠、钾、镁、硫等；微量元素是指那些在动物机体内含量不及体重万分之一的化学元素，如铁、铜、钴、锰、锌等。微量元素在动物饲料中含量虽少，但它们直接或间接地参与机体几乎所有生理和生化过程，在畜禽的消化、繁殖、免疫系统和骨骼、肌肉及牙齿的生长中都起到重要的作用，与动物生长和健康密切相关，因此动物营养和饲料行业普遍公认在动物日粮中补充微量元素是必要的。

[0003] 微量元素以什么化学状态添加于饲料中一直是国内外近几十年来研究的重点课题之一。应用的起始阶段，微量元素都是以无机盐的形式添加在饲料中，但研究表明，无机盐微量元素本身化学性质不稳定，具有催化和氧化催化作用，从而破坏维生素，降低某些药物的效价，直接导致饲料的质量和安全性下降；且无机盐微量元素的生物学效价较低，以硫酸铜为例，断奶仔猪对其吸收率仅为5％～20％，成年猪不高于5％～10％，大部分通过粪便排出，造成资源浪费，同时也污染了环境。由于无机盐微量元素的种种缺陷，国外专家早在20世纪60年代开始了有机微量元素产品的研究，国内研究此类产品则始于20世纪80年代中期。

[0004] 氨基酸螯合微量元素是第三代产品，具有吸收效果好，是无机微量元素吸收率的4倍，化学结构稳定，生物效价高等优点，但是氨基酸螯合微量元素价格昂贵，不利于广泛使用。

[0005] 腐植酸是一类从泥炭、褐煤或风化煤中提取的高分子化合物，根据其溶解度、颜色及分子量大小，可将其分为黑腐酸、棕腐酸和黄腐酸。腐植酸的主要元素组成为C、H、O、N和S，相对密度在1.330-1.448之间。腐植酸有许多活性基团，如羰基、酚羟基、醇羟基、羧基、烯醇基、磺酸基、胺基、醌基和甲氧基等，具有弱酸性、亲水性、阳离子交换性、络合能力及较高的吸附能力，可与K+、Na+、Ca2+、Mg2+及NH4+结合生成相应的腐植酸盐。腐植酸作为肥料生产利用已有多年的历史，现已在国内外广泛推广使用；但是，由于腐植酸分子量大，生物活性物质少，营养成分低，不适宜做生物饲料的培养基质，因此对于腐植酸发酵饲料的研究甚少。

发明内容

[0006] 针对上述现有技术，本发明的目的是提供一种含腐植酸螯合微量元素的发酵饲料，该发酵饲料通过腐植酸与微量元素的螯合，有助于缓解无机微量元素的添加引发的资源浪费和环境污染问题，以及解决氨基酸微量元素螯合物生产费用高、不利于广泛使用的问题。

[0007] 本发明的另一目的是提供该含腐植酸螯合微量元素的发酵饲料的制备方法。

[0008] 为实现上述目的，本发明采用下述技术方案：

[0009] 本发明的一个目的是提供一种含腐植酸螯合微量元素的发酵饲料。

[0010] 本发明提供的发酵饲料，是在含有腐植酸螯合微量元素的发酵培养基中接种菌种，发酵，得到含腐植酸螯合微量元素的发酵饲料。

[0011] 在上述发酵饲料中，所述腐植酸螯合微量元素为腐植酸锌、腐植酸铜和腐植酸锰中的一种或多种。优选的，所述腐植酸螯合微量元素是由腐植酸锌、腐植酸铜和腐植酸锰按质量比(1.4-3.6)：(0.086-0.215)：(6-10)混合而成。

[0012] 在上述发酵饲料中，所述发酵培养基是由发酵料和水组成；所述发酵料的原料组成为：

[0013] 豆粕10-20份、麸皮20-45份、腐植酸5-10份、石粉40-50份、丝穗金粟兰5-10份、银线草5-10份、罗布麻叶4-8份、金龙胆草4-8份、布渣叶4-8份、腐植酸螯合微量元素0.7-1.4份。

[0014] 在上述发酵饲料中，所述发酵料占发酵培养基的质量百分比为50-60％，水占发酵培养基的质量百分比为40-50％。

[0015] 在上述发酵饲料中，所述菌种为植物乳杆菌。优选的，所述植物乳杆菌为植物乳杆菌LP(Lactobacillus plantarum)，所述植物乳杆菌LP(Lactobacillus plantarum)，已于2010年06月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为：CCTCC M 2010150；记载在申请人的另一项专利“一株可用于生物防腐保鲜的乳酸菌及其应用”(CN 101914475 A)中。

[0016] 本发明的另一个目的是提供一种制备上述含腐植酸螯合微量元素的发酵饲料的方法。

[0017] 本发明提供的方法，包括如下步骤：

[0018] (1)将丝穗金粟兰、银线草、罗布麻叶、金龙胆草和布渣叶干燥，粉碎，混合，制成中药粉；

[0019] (2)将步骤(1)的中药粉与豆粕、麸皮、腐植酸、石粉和腐植酸螯合微量元素混合，加入水，搅拌均匀，制备得到发酵培养基，并调节发酵培养基的含水量为40-50％，pH为6.0-7.0；

[0020] (3)向发酵培养基中接种植物乳杆菌，在30-42℃进行发酵，当发酵物pH降至4.0以下时，结束发酵，即得发酵饲料。

[0021] 步骤(2)中，所述腐植酸螯合微量元素的制备方法为：

[0022] 将腐植酸与微量元素的无机盐离子按摩尔比(1-3)：(1-2)加入到水中，调节pH为4-6，在60-80℃，搅拌条件下，反应1-2h，得到腐植酸微量元素螯合液；然后将腐植酸微量元素螯合液浓缩，加入2-3倍体积的无水乙醇搅拌均匀，洗涤去除游离微量元素的无机盐离子，离心弃掉上清，沉淀物干燥，即得。

[0023] 本发明对螯合过程中腐植酸与微量元素的无机盐离子加入量的比例、pH条件和反应温度等参数条件进行了优化考察，结果表明采用本发明的腐植酸与微量元素的螯合方法，可以极大的提高微量元素的螯合率。

[0024] 步骤(3)中，植物乳杆菌的添加量为5×105-5×106cfu/g，即每克发酵料中加入的植物乳杆菌的活菌数为5×105-5×106cfu。

[0025] 本发明的含腐植酸螯合微量元素的发酵饲料是经发酵生产制备得到的，因此发酵工艺条件对于发酵饲料性能的影响是至关重要的。具体而言：

[0026] 发酵培养基是供菌体生长、繁殖和合成产物之用，本发明的发酵培养基中含有腐植酸螯合微量元素作为基质组分之一，经植物乳杆菌发酵后，一方面可以促进菌体的生长，提高发酵产物中蛋白含量和营养价值；另一方面，提高了发酵饲料中水溶性腐植酸的含量，更有利于机体对微量元素的吸收。

[0027] 本发明的发酵培养基中还含有中草药组分，该中草药组分一方面可以为植物乳杆菌的生长繁殖提供碳源和营养物质；另一方面，植物乳杆菌可以对中草药进行生物学的发酵转化，发酵过程完成一系列化学合成难以进行的反应，发酵产生新的化合物或活性更强的先导化合物，并能产生多种次生代谢产物，更大幅度的改变药性，将中草药中的大分子物质转化为能够被机体肠道迅速吸收利用的小分子物质，两者相互作用，增强了中草药的应用效果。

[0028] 本发明发酵培养基中的中草药组分含有多味原料药，而中药的配伍讲究相须、相使、相畏、相杀、相恶、相反，由于不同的中药之间存在不同的配伍关系，因此在使用两味以上中药时，必须有所选择，充分发挥药物之间相须相使的配伍关系。本发明的中草药组分中通过将多味中药进行配伍，药物之间共同发挥了活血散瘀、清热解毒、增强免疫力的作用，具有明显的增效作用，充分发挥了相须相使的配伍关系。药物组方中各味药的药理分析如下：

[0029] 丝穗金粟兰C.fortune(A.Gray)Solms：多年生草本，全草药用，能活血散瘀，清热解毒。

[0030] 银线草C.japonicas Sieb：多年生草本，全草药用，能理气、活血、散瘀、解毒。

[0031] 罗布麻叶：甘、苦，凉。归肝经。平肝安神，清热利水。用于肝阳眩晕，心悸失眠，浮肿尿少。

[0032] 金龙胆草：苦，寒。归肺、肝经。清热化痰，止咳平喘，解毒利湿，凉血止血。用于肺热咳嗽，痰多气喘，咽痛，口疮，湿热黄疸，衄血，便血，崩漏，外伤出血。

[0033] 布渣叶：微酸，凉。归脾、胃经。消食化滞，清热利湿。用于饮食积滞，感冒发热，湿热黄疸。

[0034] 上述中草药组分中，以丝穗金粟兰、银线草为君药，罗布麻叶、金龙胆草为臣药，各味中药协同作用，共同起到抗菌抗病毒、增强机体免疫力的功效。

[0035] 本发明的中草药组分中，各原料药是一个有机的整体，缺一不可。发明人在研发过程中发现，减少上述中草药组分中的任何一种原料药，或以具有相似药性的原料药对本发明中药组合物的原料组分进行替换，则中草药组分整体的作用效果显著降低；在本发明的中草药组分的基础上再增加其他的原料组分，发酵饲料的整体效果并未有明显的改善，甚至有发酵饲料的整体效果降低的情况出现。

[0036] 发酵过程中发酵液的pH值是微生物在一定环境条件下代谢活动的综合指标，是一项重要的发酵参数，它对菌体的生长和产品的积累有很大的影响。本发明对发酵过程中pH值进行了优化考察，并以发酵物的pH值作为控制发酵反应的关键指标。结果表明，采用本发明的pH条件进行发酵反应，能明显提高发酵饲料中的有效成分。

[0037] 微生物的生长和产物的合成都是在各种酶的催化下进行的，温度是保证酶活性的重要条件，因此发酵系统必须保证稳定而合适的温度环境。本发明对发酵的温度进行了优化考察，结果表明，采用本发明的温度条件，一方面可以保证酶的活性，不至于因温度过高导致酶的失活；另一方面，可以最大程度的提高菌体的生长和产物的合成。

[0038] 本发明的有益效果：

[0039] 本发明利用益生菌发酵技术，在发酵培养基中添加腐植酸螯合微量元素，可以促进菌体的生长，提高发酵产物的蛋白含量和营养价值。采用本发明制备的含有腐植酸螯合微量元素的发酵饲料饲喂肉鸡，可以显著降低饲料的料肉比，降低了养殖成本；还可以提高脾脏指数和法氏囊指数，增强了机体的免疫力。

具体实施方式

[0040] 结合实施例对本发明作进一步的说明，应该说明的是，下述实施例仅是为了解释本发明，并不对其内容进行限定。

[0041] 实施例1：微量元素与腐植酸的螯合工艺研究

[0042] 1.腐植酸与锌的螯合

[0043] 具体的螯合方法如下：

[0044] 将腐植酸(黄腐酸，市售产品)与Zn2+按照摩尔比1:1(1kg腐植酸：50g ZnSO4·7H2O)的比例加入50L水中，调节pH为5，在80℃、搅拌条件下，反应1h，得到腐植酸锌螯合液。
然后将腐植酸锌螯合液在60℃条件下浓缩，待螯合液粘稠而又不干硬时取出，加入(分多次)100L的无水乙醇搅拌混匀，用来洗涤去除游离态锌，离心弃掉上清，将沉淀物于烘箱完全烘干，得到腐植酸锌螯合物。

[0045] 采用原子吸收分光光度法测定螯合物的螯合率，具体方法为：

[0046] 原子吸收分光光度法：称取0.5g烘干螯合物于马弗炉灰化5h，用50％盐酸定容至50毫升，检测溶液中的总锌量；另取0.5g烘干螯合物用50毫升无水乙醇洗涤后，离心，沉淀物马弗炉灰化5h，用50％盐酸定容至50毫升，检测螯合物中的纯螯合态微量元素。经检测，腐植酸锌螯合物的螯合率为93.79％，螯合物中锌的含量为9.72mg/g，回收率为63.29％。

[0047] 2.腐植酸与锰的螯合

[0048] 具体的螯合方法如下：

[0049] 将腐植酸与Mn2+按照摩尔比为3:1(3kg腐植酸：30g MnSO4·H2O)的比例加入50L水中，调节pH为5，在80℃、搅拌条件下，反应1h，得到腐植酸锰螯合液。然后将螯合液在60℃下浓缩，待螯合液粘稠而又不干硬时取出，加入(分多次)100L的无水乙醇搅拌混匀，用来洗涤去除游离态锰，离心弃掉上清，将沉淀物于烘箱完全烘干，得到腐殖酸锰螯合物，采用上述原子吸收分光光度法测定螯合物的螯合率。经检测，腐植酸锰螯合物的螯合率为92.79％，螯合物中锰含量为2.44mg/g，回收率为53.38％。

[0050] 3.腐植酸与铜的螯合

[0051] 具体的螯合方法如下：

[0052] 将腐植酸样品与Cu2+按照摩尔比为1:2(1kg腐植酸：100g CuSO4·5H2O)的比例加入50L水中，调节pH为5，在70℃，搅拌条件下，反应1h，得到腐植酸铜螯合液。然后将螯合液在60℃下浓缩，待螯合液粘稠而又不干硬时取出，加入(分多次)100L无水乙醇搅拌混匀，用来洗涤去除游离态铜，离心弃掉上清，将沉淀物于烘箱完全烘干，得到腐植酸铜螯合物，采用上述原子吸收分光光度法测定螯合物的螯合率。经检测，腐植酸铜螯合物的螯合率为96.29％，螯合产物的铜含量为12mg/g，回收率为69.66％。

[0053] 对比例1：微量元素与腐植酸的螯合

[0054] 1.腐植酸与锌的螯合

[0055] 将腐植酸(黄腐酸，市售产品)与Zn2+加入的摩尔比调整为1：2，pH值调为3，在50℃条件下进行搅拌，其余操作同实施例1中“腐植酸与锌的螯合”，制备得到腐植酸锌螯合物，经检测，螯合物的螯合率为81.32％。

[0056] 2.腐植酸与锰的螯合

[0057] 将腐植酸与Mn2+加入的摩尔比调整为1:1，pH值调为6，在90℃条件下进行搅拌，其余操作同实施例1中“腐植酸与锰的螯合”，制备得到腐植酸锰螯合物，经检测，螯合物的螯合率为78.69％。

[0058] 3.腐植酸与铜的螯合

[0059] 将腐植酸与Cu2+加入的摩尔比调整为1:3，pH值调为6，在85℃条件下进行搅拌，其余操作同实施例1中“腐植酸与铜的螯合”，制备得到腐植酸铜螯合物，经检测，螯合物的螯合率为84.16％。

[0060] 由实施例1和对比例1可以看出，采用本发明的腐植酸与微量元素螯合工艺，可以显著提高螯合率。

[0061] 实施例2：含腐植酸螯合微量元素的发酵饲料的制备

[0062] 1.发酵培养基的组成：

[0063] 55％发酵料、45％水；均为质量百分数。

[0064] 发酵料的组成为：

[0065] 豆粕15份、麸皮35份、腐植酸8份、石粉45份、丝穗金粟兰8份、银线草6份、罗布麻叶6份、金龙胆草5份、布渣叶5份、腐植酸螯合微量元素1份。

[0066] 其中，腐植酸螯合微量元素是由腐植酸锌、腐植酸铜和腐植酸锰按质量比2：0.1：8混合而成。

[0067] 上述的腐植酸锌、腐植酸铜和腐植酸锰是按照实施例1的螯合方法制备得到的。

[0068] 2.制备方法如下：

[0069] (1)将丝穗金粟兰、银线草、罗布麻叶、金龙胆草和布渣叶干燥，粉碎，混合，制成中药粉；

[0070] (2)将步骤(1)的中药粉与豆粕、麸皮、腐植酸、石粉和腐植酸螯合微量元素混合，加入水，搅拌均匀，制备得到发酵培养基，并调节发酵培养基的含水量为45％，pH为6.5；

[0071] (3)向发酵培养基中加入植物乳杆菌LP(保藏编号为：CCTCC M 2010150)菌粉，使其在发酵料中的活菌数为1×106cfu/g，在37℃进行发酵，当发酵物pH降至4.0以下时，结束发酵，即得发酵饲料。

[0072] 实施例3：含腐植酸螯合微量元素的发酵饲料的制备

[0073] 1.发酵培养基的组成：

[0074] 60％发酵料、40％水；均为质量百分数。

[0075] 发酵料的组成为：

[0076] 豆粕10份、麸皮45份、腐植酸5份、石粉50份、丝穗金粟兰5份、银线草10份、罗布麻叶4份、金龙胆草8份、布渣叶4份、腐植酸螯合微量元素0.7份。

[0077] 其中，所述腐植酸螯合微量元素是由腐植酸锌、腐植酸铜和腐植酸锰按质量比3.6：0.215：10混合而成。

[0078] 上述的腐植酸锌、腐植酸铜和腐植酸锰是按照实施例1的螯合方法制备得到的。

[0079] 2.制备方法如下：

[0080] (1)将丝穗金粟兰、银线草、罗布麻叶、金龙胆草和布渣叶干燥，粉碎，混合，制成中药粉；

[0081] (2)将步骤(1)的中药粉与豆粕、麸皮、腐植酸、石粉和腐植酸螯合微量元素混合，加入水，搅拌均匀，制备得到发酵培养基，并调节发酵培养基的含水量为40％，pH为6.0；

[0082] (3)向发酵培养基中加入植物乳杆菌LP(保藏编号为：CCTCC M 2010150)菌粉，使5
其在发酵料中的活菌数为5×10cfu/g，在30℃进行发酵，当发酵物pH降至4.0以下时，结束发酵，即得发酵饲料。

[0083] 实施例4：含腐植酸螯合微量元素的发酵饲料的制备

[0084] 1.发酵培养基的组成：

[0085] 50％发酵料、50％水；均为质量百分数。

[0086] 发酵料的组成为：

[0087] 豆粕20份、麸皮20份、腐植酸10份、石粉40份、丝穗金粟兰10份、银线草5份、罗布麻叶8份、金龙胆草4份、布渣叶8份、腐植酸螯合微量元素1.4份。

[0088] 其中，所述腐植酸螯合微量元素是由腐植酸锌、腐植酸铜和腐植酸锰按质量比1.4：0.086：6混合而成。

[0089] 上述的腐植酸锌、腐植酸铜和腐植酸锰是按照实施例1的螯合方法制备得到的。

[0090] 2.制备方法如下：

[0091] (1)将丝穗金粟兰、银线草、罗布麻叶、金龙胆草和布渣叶干燥，粉碎，混合，制成中药粉；

[0092] (2)将步骤(1)的中药粉与豆粕、麸皮、腐植酸、石粉和腐植酸螯合微量元素混合，加入水，搅拌均匀，制备得到发酵培养基，并调节发酵培养基的含水量为50％，pH为7.0；

[0093] (3)向发酵培养基中加入植物乳杆菌LP(保藏编号为：CCTCC M 2010150)菌粉，使其在发酵料中的活菌数为5×106cfu/g，在42℃进行发酵，当发酵物pH降至4.0以下时，结束发酵，即得发酵饲料。

[0094] 实施例5：发酵饲料的营养成分检测：

[0095] 1.检测方法：

[0096] 粗蛋白含量测定：采用GB/T 6432-1994饲料中粗蛋白测定方法。

[0097] 粗纤维含量测定：采用GB/T 6434-1994饲料中粗纤维测定方法。

[0098] 活菌数测定：采用平板菌落计数法。

[0099] 2.检测结果：

[0100] 发酵前和发酵后的发酵培养基中营养成分的检测结果如表1所示：

[0101] 表1 发酵前后粗蛋白、粗纤维素、活菌数含量变化

[0102]  粗蛋白含量(％) 粗纤维含量(％) 活菌数cfu/g
发酵前 13.6 14.3 1×106
发酵后 28.4 8.2 3.2×108

[0103] 实施例6：安全性试验：

[0104] 1.急性毒性试验：

[0105] 以体重约20克、雌雄各半的昆明小鼠40只为试验动物，设三个处理组和一个空白对照组。每组10只，雌雄各半。空白对照组饲喂基础日粮，处理组在基础日粮中添加本发明实施例2制备的含腐植酸螯合微量元素的发酵饲料，三个处理组的发酵饲料在日粮中的添加量分别为4.0g/kg、8.0g/kg、12.0g/kg。连续给药7天，每天观察小鼠的精神、食欲、饮水及中毒情况。

[0106] 观察7天发现，三个处理组的小鼠的精神、食欲、饮水等情况与空白对照组相比均无异常，均未出现小鼠中毒的情况。急性毒性试验表明，本发明的发酵饲料临床使用安全。

[0107] 2.长期毒性试验：

[0108] 以体重约20克、雌雄各半的昆明小鼠32只为试验动物，设三个处理组和一个空白对照组。每组8只，雌雄各半。空白对照组饲喂基础日粮，处理组在基础日粮中添加本发明实施例2制备的含腐植酸螯合微量元素的发酵饲料，三个处理组的发酵饲料在日粮中的添加量分别为1.0g/kg、2.0g/kg、3.0g/kg。连续给药2个月后，各组分别留1/4的小鼠做恢复期观察外，其余全部处死，测定各项指标。观察和测定项目包括如外观体征和行为活动、分泌物、粪便性状；血液的常规指标和生化指标；系统尸检及脏器系数和组织学检查等内容。

[0109] 结果表明：对小鼠连续饲喂不同添加量的发酵饲料后，对小鼠的进食量和体重增长均无影响。对肝肾功能均未发现毒性作用；说明本发明的发酵饲料安全无毒性。

[0110] 实施例7：效果试验：在肉鸡生产中的应用

[0111] 1.试验设计：1日龄白羽肉鸡正常饲料育雏7天后，选取体重均匀、健康状况基本相近的300只随机分为3组，每组5个重复，每个重复20只。具体分组如下：Ⅰ组为对照组，饲喂基础日粮；Ⅱ组，在基础日粮中添加2‰本发明实施例2制备的含腐植酸螯合微量元素的发酵饲料；Ⅲ组，在基础日粮中添加2‰的不含腐植酸螯合微量元素的发酵饲料(该发酵饲料的制备方法与本发明实施例2的制备方法相同，只是在发酵培养基中不添加腐殖酸螯合微量元素)。

[0112] 2.饲养管理：

[0113] 各重复组试验鸡只采用分笼饲养，自由采食和饮水。试验前将鸡舍、鸡笼进行彻底清扫，熏蒸消毒。于第7和第21日龄接种新城疫疫苗，28日龄接种法氏囊疫苗。从第7天正式开始试验，饲喂相应的饲粮。温度控制在22-29℃，相对湿度55％-60％。饲养期为35天。

[0114] 3.检测指标：

[0115] 生长指标21日龄和42日龄分别称取鸡重和料重，计算料肉比和平均日增重。

[0116] 免疫指标21日龄和42日龄分别称取活鸡体重，并对鸡只进行屠杀和解剖，称取脾脏重和法氏囊重，计算脾脏指数和法氏囊指数。

[0117] 4.试验结果：

[0118] 生长指标的检测结果如表2所示：

[0119] 表2 料肉比及平均日增重

[0120]

[0121] 同列数据肩标无字母或相同字母表示差异不显著(P>0.05)，不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。

[0122] 下表同。

[0123] 由表2可以看出，7-21日龄和21-42日龄料肉比均以Ⅱ组最低，分别比对照组低4.41％(P＞0.05)和10.91％(P<0.05)；分别比Ⅲ组低3.70％(P＞0.05)和6.22％(P<0.05)。

[0124] 7-21日龄和21-42日龄平均日增重均以Ⅱ组最高，分别比对照组高4.28％(P＞0.05)和8.19％(P<0.05)；分别比Ⅲ组高3.32％(P＞0.05)和6.47％(P<0.05)。

[0125] 免疫指标的检测结果如表3所示：

[0126] 表3 脾脏指数和法氏囊指数

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[0128] 从表3中可以看出，21日龄时，Ⅱ组脾脏指数最高，比对照组高9.26％(P＞0.05)；Ⅱ组法氏囊指数最高，比对照组高4.95％(P＞0.05)。42日龄时，Ⅱ组脾脏指数显著高于其他两组，比对照组高14.10％(P<0.05)；Ⅱ组法氏囊指数显著高于其他两组，比对照组高
12.26％(P<0.05)。

[0129] 试验过程中，Ⅱ组的试验鸡只在饲喂过程中均未出现不良反应，说明本发明的含腐植酸螯合微量元素的发酵饲料安全、无毒副作用。

[0130] 对比例2：

[0131] 本发明人在研发过程中对发酵培养基中的中草药组分进行了配伍关系的考察和药效的研究，结果发现，即使某几味原料药之间的药性相似，但与其他不同的原料药配伍使用后，其药效效果差别显著。例如：将实施例2发酵培养基的中草药组分中的丝穗金粟兰替换为板蓝根；将银线草替换为肿节风；将罗布麻叶替换为苏梗，按实施例2的方法制备得到发酵饲料；

[0132] 对比例3：

[0133] 中药组合物中各原料药的药量是标识药力的，即使方剂的药物组成相同，但若药物的用量各不相同，其药力则有大小之分，配伍关系则有君臣佐使之变，从而其功主治则各有所异。本发明人在研发过程中对发酵培养基中的中草药组分中的各个原料的含量进行了考察和药效的研究，结果发现，不同的原料配比关系，尤其是君药和臣药所占份量的不同，其药效效果差别显著。例如：将实施例2发酵培养基的中草药组分中丝穗金粟兰的用量调整为3份，银线草的用量调整为15份，罗布麻叶的用量调整为15份，金龙胆草的用量调整为15份，其他原料的用量同实施例2，并按实施例2的方法制备得到发酵饲料。

[0134] 将对比例2和对比例3制备的发酵饲料按照“效果试验”的方法考察其在肉鸡生产中的应用效果，结果表明，饲喂本发明实施例2制备的发酵饲料的鸡只21-42日龄的料肉比与对比例2相比，降低了8.4％；与对比例3相比，降低了6.2％。

[0135] 饲喂本发明实施例2制备的发酵饲料的鸡只42日龄的脾脏指数与对比例2相比，提高了11.8％；与对比例3相比，提高了9.7％。

[0136] 饲喂本发明实施例2制备的发酵饲料的鸡只42日龄的法氏囊指数与对比例2相比，提高了10.4％；与对比例3相比，提高了8.9％。

[0137] 说明本发明发酵培养基中的中草药组分中各原料药之间具有协同促进作用，并非是具有相似性质的原料的简单替换或组合。各原料的用量也并非是常规的调整所能得到的，本发明的发酵培养基中的中草药组分中，各原料的用量配比是根据其原料特性、君臣佐使配伍等各种考虑因素决定的，对于发酵饲料的整体效果起到非常重要的作用。