一种食用土当归种苗的组织培养方法

摘要

本发明公开了一种食用土当归种苗的组织培养方法，先从土当归的叶片中诱导出愈伤组织，然后使其形成不定胚，再继代增殖不定胚芽，通过循环培养分离成单个的不定胚，在固体培养基上培养成苗。本发明的优点在于：选用配方合理的培养基，培养出的组培苗生根率高，稳定性好。该方法易操作，而且不受外界条件的限制，四季皆可进行，节约育苗占地面积，降低生产成本，不污染环境，可以实现批量生产。通过本发明方法生产土当归，产量大，成本低，周期短，极具市场竞争力。本方法不仅取材方便，不会影响土当归野生种群的数量；而且操作简单、生产成本低、稳定高效，能大大缩短育苗周期，将为其保护和开发利用提供技术保障。

权利要求

1.一种食用土当归种苗的组织培养方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）外植体处理：取土当归叶片为外植体，用清水洗去其表面的尘土，于70%酒精浸泡

20-30s，无菌水冲洗2 3次，再用0.1%升汞溶液浸泡消毒7 10min，再用无菌水冲洗3 5次，最~ ~ ~后用无菌滤纸吸干外植体表面水分；

（2）外植体的初代培养：将处理后的外植体用解剖刀切成1.0cm×1.0cm的小块，接种于MS+TDZ0 0.1mg/L +6-BA0.1 0.5mg/L+NAA0.05 0.5mg/L + 蔗糖30g/L+琼脂6.5g/L， ~ ~ ~pH5.8的培养基中，初代培养50天，培养温度25±2℃，光照时间12h/d，光照强度2000~

3000lx；

（3）继代培养：经初代培养后，叶片边缘诱导产生大量小苗，将小苗接入MS+0.1%活性炭+蔗糖30g/L+琼脂6.5g/L，pH5.8的培养基中培养，培养温度25±2℃，光照时间12h/d，光照强度2000 3000lx；继代3天开始有根发生，培养35 40天长成完整健壮小苗，株高2-3cm，根~ ~的数目为8-20根；

（4）炼苗与移栽：待土当归小苗株高2 3cm时，打开培养瓶盖，在室温下炼苗7天后，将小~苗移栽至珍珠岩:红辉沸石＝1:1混合的基质中。

2.根据权利要求1所述的食用土当归种苗的组织培养方法，其特征在于：步骤（2）所述培养基为：MS +TDZ0.1 mg/L+6-BA0.1mg/L+NAA0.5mg/L +蔗糖30g/L+琼脂6.5g/L。

3.根据权利要求1所述的食用土当归种苗的组织培养方法，其特征在于：步骤（2）所述培养基为：MS +6-BA0.1mg/L+NAA0.05mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.5g/L。

说明书

一种食用土当归种苗的组织培养方法

技术领域

[0001] 本发明涉及组织培养，具体是一种食用土当归种苗的组织培养方法。

背景技术

[0002] 食用土当归是一种多年生草本植物，为药食两用的传统中药，其嫩茎叶可做菜食用，可炒食、凉拌或腌食；其根及根茎做九眼独活入药，具有祛风活血、解热镇痛、利尿消肿、疏风补虚的功效，用于风湿痹痕、腰膝酸软、头痛目眩、水肿等症。当前，食用土当归的地上部分是国内、国际市场最紧俏的野生绿色蔬菜之一，具有较大的经济价值，但是其野生资源遭到掠夺式采集，加上其自身内在因素的影响，其生长大面积大幅减少。

[0003] 通常情况下，土当归的种植周期一般为2年，第一年的3月直接栽培，十月下旬收获肉质根作为药用，选择留种母根贮藏，次年的3～4月份移栽定植，当年的7～8月份留种母株开花结实，11月份采收，采用上述传统的种植方法种植的土当归，生产周期长，人力、物力、财力的投资成本高，并且有将近15～25%的植株容易早抽薹造成产量和质量的下降，并且，随着种植面积的逐步扩大，病虫害也逐步加重，轻者影响土当归的产量和质量，重者绝收，造成重大的经济损失。

[0004] 土当归一般是单株增殖，但一年只增殖5-6倍，种植户必须把耕地面积的五分之一用于采收种苗，即使有新品种供应，为了增殖也需要很多时间和场地。

[0005] 为了适应市场需求，扩大食用土当归种植面积，提高产量水平，增加经济效益，广西资源县银竹老山中草药种植专业合作社进行了食用土当归种苗的组织培养，利用土当归的叶片为外植体建立其快速繁殖技术，为该物种的资源保护和可持续开发利用奠定基础。

发明内容

[0006] 本发明的目的是提供一种利用食用土当归的叶片为外植体，组织培养其种苗的方法，克服现有土当归的种植生产周期长，成本高等不足。

[0007] 本发明一种食用土当归种苗的组织培养方法，包括如下步骤：

[0008] （1）外植体处理：取土当归叶片为外植体，用清水洗去其表面的尘土，于70%酒精浸泡20-30s，无菌水冲洗2 3次，再用0.1%升汞溶液浸泡消毒7 10min，再用无菌水冲洗3 5次，~ ~ ~最后用无菌滤纸吸干外植体表面水分；

[0009] （2）外植体的初代培养：将处理后的外植体用解剖刀切成1.0cm×1.0cm的小块，接种于MS+TDZ0 0.1mg/L +6-BA0.1 0.5mg/L+NAA0.05 0.5mg/L + 蔗糖30g/L+琼脂6.5g/L， ~ ~ ~pH5.8的培养基中，初代培养50天，培养温度25±2℃，光照时间12h/d，光照强度2000~
3000lx；

[0010] （3）继代培养：经初代培养后，叶片边缘诱导产生大量小苗，将小苗接入MS+0.1%活性炭+蔗糖30g/L+琼脂6.5g/L，pH5.8的培养基中培养，培养温度25±2℃，光照时间12h/d，光照强度2000 3000lx；继代3天开始有根发生，培养35 40天长成完整健壮小苗，株高2-~ ~3cm，根的数目为8-20根；

[0011] （4）炼苗与移栽：待土当归小苗株高2 3cm时，打开培养瓶盖，在室温下炼苗7天后，~将小苗移栽至珍珠岩:红辉沸石＝1:1混合的基质中。

[0012] 进一步的，步骤（2）所述培养基的优选为：MS +TDZ0.1 mg/L+6-BA0.1mg/L+NAA0.5mg/L +蔗糖30g/L+琼脂6.5g/L。

[0013] 更进一步的，步骤（2）所述培养基的优选为：MS +6-BA0.1mg/L+NAA0.05mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.5g/L。

[0014] 本发明方法先从土当归的叶片中诱导出愈伤组织，然后使其形成不定胚，再继代增殖不定胚芽，通过循环培养分离成单个的不定胚，在固体培养基上培养成苗。

[0015] 本发明的优点在于：选用配方合理的培养基，培养出的组培苗生根率高，稳定性好。该方法易操作，而且不受外界条件的限制，四季皆可进行，节约育苗占地面积，降低生产成本，不污染环境，可以实现批量生产。通过本发明方法生产土当归，产量大，成本低，周期短，极具市场竞争力。本方法不仅取材方便，不会影响土当归野生种群的数量；而且操作简单、生产成本低、稳定高效，能大大缩短育苗周期，将为其保护和开发利用提供技术保障。

具体实施方式

[0016] 下面结合实施例对本发明的内容作进一步说明，但并不是对本发明的限定。

[0017] 实施例1

[0018] 一种食用土当归种苗的组织培养方法，包括如下步骤：

[0019] （1）外植体处理：取土当归叶片为外植体，用清水洗去其表面的尘土，于70%酒精浸泡20-30s，无菌水冲洗2 3次，再用0.1%升汞溶液浸泡消毒7 10min，再用无菌水冲洗3 5次，~ ~ ~最后用无菌滤纸吸干外植体表面水分；

[0020] （2）外植体的初代培养：将处理后的外植体用解剖刀切成1.0 cm×1.0 cm的小块，接种于MS +TDZ0.1 mg/L+6-BA0.1mg/L+NAA0.5mg/L +蔗糖30g/L+琼脂6.5g/L， pH5.8的培养基中培养，培养温度25±2℃，光照时间12h·d-1，光照强度2000 3000lx，21d时切口边缘~处即开始诱导出丛生小芽，诱导率为100%，培养50天统计增殖率，单个叶片诱导小苗数为20
30棵；
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[0021] （3）继代培养：将土当归小苗接入MS+0.1%活性炭+蔗糖30g/L+琼脂6.5g/L， pH5.8的培养基中进行继代培养，培养温度25±2℃，光照时间12h·d-1，光照强度2000 3000lx，3~天后小苗陆续诱导出根，继续培养至40天长成健壮小苗，株高2-3cm，根的数目为8-20根；

[0022] （4）炼苗与移栽：待土当归小苗株高2 3cm时，打开培养瓶盖，在室温下炼苗7天后~进行移栽，花盆用50%多菌灵可湿粉剂1g/L溶液浸泡30min；将小苗用50%多菌灵可湿粉剂
1000倍液浸泡整株小苗 10 分钟，移栽入经高压灭菌的珍珠岩和红辉沸石体积比为1:1混合的基质中，30天后统计成活率，成活率为100%。

[0023] 实施例2

[0024] 一种食用土当归种苗的组织培养方法，包括实施例1的方法步骤，与其不同的是：初代培养的外植体接种于MS+TDZ0.1 mg/L +6-BA0.5mg/L+NAA0.5mg/L +蔗糖30g/L+琼脂
6.5g/L培养基中。13d时，叶片边缘及外植体表面萌生大量细小芽点，芽在外植体上散在分布，芽健壮嫩绿，诱导率为66.7%。培养50天统计增殖率，单个叶片诱导小苗数为35 50棵。
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[0025] 实施例3

[0026] 一种食用土当归种苗的组织培养方法，包括实施例1的方法步骤，与其不同的是：初代培养的外植体接种于MS +6-BA0.1mg/L+NAA0.05mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.5g/L培养基中。19d时切口边缘处即开始诱导出小芽，诱导率为100%。培养50天统计增殖率，单个叶片诱导小苗数为40 60棵。
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