清远麻鸡无内源性禽白血病ev21病毒的抗病系的培育方法

摘要

清远麻鸡无内源性禽白血病ev21病毒的抗病系的培育方法，将麻鸡品种中隐性突变得到的隐性白羽群B与携带有酪氨酸(tyr)基因突变的清远麻鸡慢羽系中的麻鸡杂合子进行测交、自交扩繁，得到纯慢羽白羽群体；通过分子检测对纯慢羽白羽群体中筛选出无内源性禽白血病ev21病毒的个体，进行横交、扩繁，得到无内源性禽白血病ev21病毒慢羽白新品系；该品系保持了清远麻鸡慢羽品系高产的性能和隐性白羽鸡的体型和外貌特征，又保持清远麻鸡肉质的优质性；从种源上根除内源性病毒的传播，提高对禽白血病的免疫应答能力，为进一步开展科学研究具有重要的研究价值；其市场应用前景广阔，对优质肉用鸡产业化的生产及抗病新品系的开发具有重要的参考价值。

权利要求

1.清远麻鸡无内源性禽白血病ev21病毒的抗病系的培育方法，其特征在于：其特征在于：包括如下步骤：（1）亲本P0的选育：由麻鸡品种内产生隐性突变，得到隐性白羽群B；通过分子手段，甄别携带有酪氨酸（tyr）基因突变的清远麻鸡慢羽系中的麻鸡杂合子，得到麻鸡杂合子组群M1；

将所述隐性白羽群B和麻鸡杂合子组群M1作为亲本；

（2）测交：将所述麻鸡杂合子组群M1与所述隐性白羽群中的个体B进行测交，得到具有慢羽后代的白羽鸡系，即F1代；

（3）自交扩繁：将步骤（2）获得的F1代进行自交扩繁，选留慢羽表型特征为等长型和倒长型的个体，并通过测交和分子选育组建得到纯慢羽白羽群体，即F2代；

（4）ev21检测：通过分子检测F2代，筛选出无内源性禽白血病ev21病毒的个体，并进一步选留慢羽表型特征为等长型和倒长型的个体，组建得到ev21缺失体抗病群体；

（5）将所述步骤（4）中得到的ev21缺失体抗病群进行横交固定，使之稳定遗传，并通过扩繁组建，得到无内源性禽白血病ev21病毒慢羽白新品系。

2.根据权利要求1所述的清远麻鸡无内源性禽白血病ev21病毒的抗病系的培育方法，其特征在于：所述步骤（2）与步骤（3）之间还包括对F1代中的杂合麻羽个体的淘汰，选择具有慢羽后代的隐性白羽鸡F1代进入下一步骤。

3.根据权利要求1所述的清远麻鸡无内源性禽白血病ev21病毒的抗病系的培育方法，其特征在于：所述步骤（4）中所述分子检测是通过PCR进行基因分型。

4.根据权利要求3所述的清远麻鸡无内源性禽白血病ev21病毒的抗病系的培育方法，其特征在于：所述PCR基因分型是采用PCR扩增，PCR扩增后使用HaeⅢ进行酶切，检测选留无内源 性 禽白 血 病 e v2 1 病 毒的 个 体 ，所 用 引 物为 ，上游 引 物 F ：5 ′- ATTGGTACTACAGAGAAGGTAGGATATC-3′；下游引物R：5′- GTAAGACTAACACAGTATTCTCGAGT - 

3′。

说明书

清远麻鸡无内源性禽白血病ev21病毒的抗病系的培育方法

技术领域

[0001] 本发明涉及家禽遗传育种技术领域，尤其涉及清远麻鸡无内源性禽白血病ev21病毒的抗病系的培育方法。

背景技术

[0002] 清远麻鸡是广东省第一优质名鸡，具有优美外观和优良肉质特性，在清远麻鸡繁育过程中，出现了白色变异的隐性白羽个体，除羽毛颜色为白色外，其余均保持了清远麻鸡原有的特性，可将其扩群得到隐性白羽系。而在慢羽系中，慢羽基因K被认为与内源性病毒21(ev21)存在紧密连锁关系，但其中也存在一些无ev21插入的个体(ev21缺失体)，ev21的存在将降低鸡对禽白血病病毒(ALV)的免疫应答，同时携带有ev21的慢羽鸡感染外源性白血病毒后病毒血症的发生率升高，并引起产蛋量的下降和死亡率升高。

[0003] 由于禽白血病净化是一个长期的工作，因此从遗传的角度有效解决无内源性禽白血病内源性病毒21(ev21缺失体)对疾病的净化具有重要的意义，实现根除假阳性的误判，优化种源。目前在清远麻鸡慢羽品系中出现的白羽个体，我们已经组建了白羽系，但如何更高效构建白羽的抗性品系，保持其产蛋性能高产和肉质的优良、屠宰品质的美观，成为生产中急需解决的问题。

[0004] 目前国内隐性白羽品系的培育都以快大型的隐性白羽鸡或是地方鸡分离出的隐性白羽鸡为亲本，通过杂交与测交，辅助分子选育的方法得到新隐性白羽品系，但经资料查询，目前尚未开展白羽抗病新品系的选育报道；虽国内已有一种通过异嗜性粒细胞/淋巴细胞的比值表型选择与SNP标记基因型辅助选择相结合构建鸡抗病品系的方法，但在选育操作上复杂繁琐，实用性低、经济效益低；基于此，本专利利用现代分子数量遗传育种的有关原理，以清远麻鸡慢羽系中的隐性白羽鸡为例，提出了慢羽白新抗病品系的构建方法，对加大地方鸡种的选育具有重要参考应用价值。

发明内容

[0005] 本发明的目的在于提出一种清远麻鸡无内源性禽白血病ev21病毒的抗病系的培育方法，选育操作更为简单、实用，获得的新品系具有高产的性能、优质肉的风味、外貌体型特征好且抗病能力高的特点。

[0006] 为达此目的，本发明采用以下技术方案：

[0007] 清远麻鸡无内源性禽白血病ev21病毒的抗病系的培育方法，将麻鸡品种中由隐性突变得到的隐性白羽群B与携带有酪氨酸(tyr)基因突变的清远麻鸡慢羽系中的麻鸡杂合子进行测交、自交扩繁，得到纯慢羽白羽群体；再通过分子检测对所述纯慢羽白羽群体中筛选出无内源性禽白血病ev21病毒的个体(ev21缺失体)，进行横交、扩繁，得到无内源性禽白血病ev21病毒慢羽白新品系。

[0008] 进一步说明，清远麻鸡无内源性禽白血病ev21病毒的抗病系的培育方法，包括如下步骤：

[0009] (1)亲本P0的选育：由麻鸡品种内产生隐性突变，得到隐性白羽群B；通过分子手段，甄别携带有酪氨酸(tyr)基因突变的清远麻鸡慢羽系中的麻鸡杂合子，得到麻鸡杂合子组群M1；将所述隐性白羽群B和麻鸡杂合子组群M1作为亲本；

[0010] (2)测交：将所述麻鸡杂合子M1与所述隐性白羽群中的个体B进行测交，得到具有慢羽后代的白羽鸡系，即F1代；

[0011] (3)自交扩繁：将步骤(2)获得的F1代进行自交扩繁，选留慢羽表型特征为等长型和倒长型的个体，并通过测交和分子选育组建得到纯慢羽白羽群体，即F2代；

[0012] (4)ev21检测：通过分子检测F2代，筛选出无内源性禽白血病ev21病毒的个体(ev21缺失体)，并进一步选留慢羽表型特征为等长型和倒长型的个体，组建得到ev21缺失体抗病群体；

[0013] (5)将所述步骤(4)中得到的ev21缺失体抗病群进行横交固定，使之稳定遗传，并通过扩繁组建，得到无内源性禽白血病ev21病毒慢羽白新品系。

[0014] 进一步说明，所述步骤(2)与步骤(3)之间还包括对F1代中的杂合麻羽个体的淘汰，选择具有慢羽后代的隐性白羽鸡F1代进入下一步骤。

[0015] 进一步说明，所述步骤(4)中所述分子检测是通过PCR进行基因分型。

[0016] 进一步说明，所述PCR基因分型是采用PCR扩增，PCR扩增后使用HaeⅢ进行酶切，检测选留无内源性禽白血病ev21病毒的个体(ev21缺失体)，所用引物为，上游引物F：5′-ATTGGTACTACAGAGAAGGTAGGATATC-3′；下游引物R：5′-GTAAGACTAACACAGTATTCTCGAGT-3′。

[0017] 本发明的有益效果：(1)既能保持清远麻鸡慢羽品系高产的性能和隐性白羽鸡的体型和外貌特征，又能保持清远麻鸡肉质的优质性，其屠宰品质特别是通管性能好，可用于优质肉鸡的产业化生产；(2)与传统的清远慢羽麻鸡和隐性白羽鸡相比，构建了抗病品系，从种源上有效根除内源性病毒的传播，提高了机体对禽白血病的免疫应答能力，可为其他新配套系的开发提供亲本，新品系的构建，为进一步开展科学研究具有重要的研究价值；(3)可广泛应用于地方优质肉鸡、快大型肉鸡以及蛋鸡的选育中，具有广阔的市场应用前景，特别对优质肉用鸡产业化的生产及抗病新品系的开发具有重要的参考价值。

附图说明

[0018] 图1是本发明一个实施例的清远麻鸡无内源性禽白血病ev21病毒慢羽白新品系的培育模式图；

[0019] 其中：W为常染色体上控制白羽的基因，P为控制麻羽的基因，ev21+为含有ev21插入的个体，ev21－为无ev21插入的个体；a为未出型，b为等长型，c为倒长型，d为微长型。

具体实施方式

[0020] 下面结合附图并通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。

[0021] 清远麻鸡无内源性禽白血病ev21病毒的抗病系的培育方法，将麻鸡品种中由隐性突变得到的隐性白羽群B与携带有酪氨酸(tyr)基因突变的清远麻鸡慢羽系中的麻鸡杂合子进行测交、自交扩繁，得到纯慢羽白羽群体；再通过分子检测对所述纯慢羽白羽群体中筛选出无内源性禽白血病ev21病毒的个体(ev21缺失体)，进行横交、扩繁，得到清远麻鸡无内源性禽白血病ev21病毒的抗病系，即无内源性禽白血病ev21病毒慢羽白新品系。

[0022] 本发明主要针对清远麻鸡的慢羽抗病品系的研究，即无内源性禽白血病ev21病毒的抗病系(ev21缺失体)，是利用清远麻鸡慢羽系和麻鸡中的突变白羽个体作为育种素材，并通过分子生物学的方法，快速构建了无内源性禽白血病ev21病毒的慢羽白品系(ev21缺失体)；该方法在选育操作上，简单、实用、经济有效；通过本发明的方法所培育出的新品系，具有以下优点：

[0023] (1)既能保持清远麻鸡慢羽品系高产的性能和隐性白羽鸡的体型和外貌特征，又能保持清远麻鸡肉质的优质性，其屠宰品质特别是通管性能好，可用于优质肉鸡的产业化生产，增加经济效益；

[0024] (2)与传统的清远慢羽麻鸡和隐性白羽鸡相比，构建了抗病品系，从种源上有效根除内源性病毒的传播，提高了机体对禽白血病的免疫应答能力，可为其他新配套系的开发提供亲本，新品系的构建，具有重要的研究价值；

[0025] (3)可广泛应用于地方优质肉鸡、快大型肉鸡以及蛋鸡的选育中，具有广阔的市场应用前景，特别对优质肉用鸡产业化的生产及抗病新品系的开发具有重要的参考价值。

[0026] 进一步说明，清远麻鸡无内源性禽白血病ev21病毒的抗病系的培育方法，包括如下步骤：

[0027] (1)亲本P0的选育：由麻鸡品种内产生隐性突变，得到隐性白羽群B；通过分子手段，甄别携带有酪氨酸(tyr)基因突变的清远麻鸡慢羽系中的麻鸡杂合子，得到麻鸡杂合子组群M1；将所述隐性白羽群B和麻鸡杂合子组群M1作为亲本；

[0028] (2)测交：将所述麻鸡杂合子M1与所述隐性白羽群中的个体B进行测交，得到具有慢羽后代的白羽鸡系，即F1代；

[0029] (3)自交扩繁：将步骤(2)获得的F1代进行自交扩繁，选留慢羽表型特征为等长型和倒长型的个体，并通过测交和分子选育组建得到纯慢羽白羽群体，即F2代；

[0030] (4)ev21检测：通过分子检测F2代，筛选出无内源性禽白血病ev21病毒的个体(ev21缺失体)，并进一步选留慢羽表型特征为等长型和倒长型的个体，组建得到ev21缺失体抗病群体；

[0031] (5)将所述步骤(4)中得到的ev21缺失体抗病群进行横交固定，使之稳定遗传，并通过扩繁组建，得到无内源性禽白血病ev21病毒慢羽白新品系。

[0032] 通过本发明的培育方法所培育出的新品系，有效保持了原有清远麻鸡所具有的体型和肉质优点，并通过分子育种手段，达到了抗病品系的构建目的；使所述无内源性禽白血病ev21病毒慢羽白新品系既保留了清远麻鸡慢羽品系的优质肉质和产蛋量高的特点，又提高了其抗病能力，大大提高了经济效益，促进经济增收。

[0033] 进一步说明，所述步骤(2)与步骤(3)之间还包括对F1代中的杂合麻羽个体的淘汰，选择具有慢羽后代的隐性白羽鸡F1代进入下一步骤。

[0034] 由于亲本进行测交获得的F1代包含了杂合麻羽个体和慢羽白羽个体，因此将获得的F1代进行自交扩繁之前需要将杂合麻羽个体进行淘汰，只对慢羽白羽个体进行自交扩繁，保证所得到的F2代为纯慢羽白羽群体。

[0035] 进一步说明，所述步骤(4)中所述分子检测是通过PCR进行基因分型。

[0036] 通过采用PCR进行基因分型，可有效筛选出无内源性禽白血病ev21病毒的个体(ev21缺失体)，淘汰含有ev21插入的个体，具有分子鉴别高效、快速的特点，从而获得ev21缺失体抗病群体。

[0037] 进一步说明，所述PCR基因分型是采用PCR扩增，PCR扩增后使用HaeⅢ进行酶切，检测选留无内源性禽白血病ev21病毒的个体(ev21缺失体)，所用引物为，上游引物F：5′-ATTGGTACTACAGAGAAGGTAGGATATC-3′；下游引物R：5′-GTAAGACTAACACAGTATTCTCGAGT-3′。

[0038] 实施例-清远麻鸡无内源性禽白血病ev21病毒的抗病系的培育方法，如图1所示，包括如下步骤：

[0039] (1)亲本P0的选育：由麻鸡品种内产生隐性突变，得到隐性白羽群B；通过分子手段，甄别携带有酪氨酸(tyr)基因突变的清远麻鸡慢羽系中的麻鸡杂合子，得到麻鸡杂合子组群M1；将所述隐性白羽群B和麻鸡杂合子组群M1作为亲本；其中，B群为：隐性白羽，慢羽；M1群为：麻鸡杂合子，慢羽；

[0040] (2)测交：将所述麻鸡杂合子M1与所述隐性白羽群中的个体B进行测交，得到具有慢羽后代的白羽鸡系，即F1代 将杂合麻羽鸡淘汰；

[0041] (3)自交扩繁：将步骤(2)获得的F1代 进行自交扩繁，选留慢羽表型特征为等长型和倒长型的个体，并通过测交和分子选育组建得到纯慢羽白羽群体，即F2代；

[0042] (4)ev21检测：通过分子检测F2代，利用PCR扩增，扩增后使用HaeⅢ进行酶切，检测选留无内源性禽白血病ev21病毒的个体(ev21缺失体)，所用引物为，上游引物F：5′-ATTGGTACTACAGAGAAGGTAGGATATC-3′；下游引物R：5′-GTAAGACTAACACAGTATTCTCGAGT-3′；筛选出无内源性禽白血病ev21病毒的个体(ev21缺失体)，淘汰含有ev21插入的个体，并进一步选留慢羽表型特征为等长型和倒长型的个体(ev21－b/ev21－c)，组建得到ev21缺失体抗病群体；

[0043] (5)将所述步骤(4)中得到的ev21缺失体抗病群进行横交固定，使之稳定遗传，并通过扩繁组建，得到无内源性禽白血病ev21病毒慢羽白新品系。

[0044] 以上结合具体实施例描述了本发明的技术原理。这些描述只是为了解释本发明的原理，而不能以任何方式解释为对本发明保护范围的限制。基于此处的解释，本领域的技术人员不需要付出创造性的劳动即可联想到本发明的其它具体实施方式，这些方式都将落入本发明的保护范围之内。