一种底泥沉积物中三唑磷的超高效液相色谱质谱检测方法

摘要

本发明公开了一种底泥沉积物中三唑磷的超高效液相色谱质谱检测方法，包括如下步骤：①涡旋震荡+超声溶剂萃取；②分散固相萃取+固相萃取柱富集净化：萃取液中加入石墨化碳黑和N‑丙基乙二胺，涡旋震荡，离心，过无水硫酸钠，旋转蒸发至干，加入正己烷洗涤溶解后得待检测液，待检测液上弗罗里硅土固相萃取柱，二氯甲烷洗脱，收集洗脱液；③超高效液相色谱质谱检测：取洗脱液进行液相色谱‑质谱检测，然后绘制标准工作曲线，外标法定量，根据峰面积计算三唑磷的浓度。本发明操作方便，重现性较好，定性准确且回收率较高，能够快速分析底泥沉积物中三唑磷。

权利要求

1.一种底泥沉积物中三唑磷的超高效液相色谱质谱检测方法，其特征在于，包括如下步骤：①涡旋震荡+超声溶剂萃取：称量10g样品于50毫升离心管中，加入10毫升纯净水，再加入15毫升乙酸乙酯，加盖涡旋震荡混匀2分钟，在40KHz超声波作用下35℃-45℃温度萃取10 min，然后将萃取样品在5000 转每分钟转速下离心5 分钟，分离出萃取液，再加15毫升乙酸乙酯重复提取一次，合并萃取液；

②分散固相萃取+固相萃取柱富集净化：萃取液中加入石墨化碳黑和N-丙基乙二胺各

0.2克，涡旋震荡2分钟，5000转每分钟转速下离心2分钟，离心分离出的液体过无水硫酸钠，收集于100毫升鸡型瓶，旋转蒸发至干，加入3毫升正己烷洗涤溶解后得待检测液；

③超高效液相色谱质谱检测：洗脱液进行液相色谱-质谱检测，然后绘制标准工作曲线，外标法定量，根据峰面积计算三唑磷的浓度；液相色谱检测条件为：色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18柱，规格：2.1mm×50mm，1.7µm；样品室温度4℃；柱温40℃；进样量10μL；流速

0.2mL/min；流动相A为0.1%甲酸水溶液，B为乙腈，梯度洗脱：0 2.0min，40%A；2.0 4.0min，~ ~

10%A；4.0 5.0min，40%A；质谱检测条件为：电喷雾离子源，正离子扫描（ESI+）；检测方式：多~反应监测（MRM）；毛细管电压：3.5kV；离子源温度：110℃；脱溶剂气温度：360℃；锥孔气流量：50L/h；脱溶剂气流量：800L/h；三唑磷母离子m/z313.9，定量离子m/z161.7，驻留时间

0.15秒，锥孔电压30伏特，碰撞能20Ev，定性离子选择m/z285.7，驻留时间0.15秒，锥孔电压

30伏特，碰撞能15Ev。

2.根据权利要求1所述的一种底泥沉积物中三唑磷的超高效液相色谱质谱检测方法，其特征在于，步骤②中：待检测液上弗罗里硅土固相萃取柱，弃去流出液，再向弗罗里硅土固相萃取柱加入色谱纯二氯甲烷洗脱，每次5mL，收集洗脱液。

说明书

一种底泥沉积物中三唑磷的超高效液相色谱质谱检测方法

技术领域

[0001] 本发明涉及渔业环境监测技术领域，特别涉及一种底泥沉积物中三唑磷的超高效液相色谱质谱检测方法。

背景技术

[0002] 三唑磷(triazophos)是一种广谱有机磷杀虫剂、杀螨剂、杀线虫剂，主要用于防治果树、棉花、粮食类作物上的鳞翅目害虫、害螨、蝇类幼虫及地下害虫等, 具有强烈的触杀、胃毒作用和兼具一定内吸作用。随着大多数有机氯和有机磷高毒农药的禁用,因三唑磷在环境中能较快速的降解，所以对其需求越来越大,而且在短时间内难以被其它品种农药完全取代。石利利研究了3种不同类型土壤中的降解特性，表明降解半衰期分别为28.3、3.75和3.28d，且不易向下渗漏，在水体环境中，三唑磷会被吸附于悬浮颗粒物（矿物、生物碎屑、胶体物质和有机质）中，最终通过物理、化学及生物作用沉积于水体底部。三唑磷在大规模使用后可通过迁移、扩散和转化，进入到食物链和食物网，可对生态系统的结构和功能产生不可避免的影响。由于三唑磷对水生生物具有毒性，国内外很多学者对其毒理学进行了多方面的研究。现对三唑磷的检测分析一般都是GC和GC-MS为主，但其对三唑磷灵敏度在10ppb左右，有时候并不能满足底泥沉积物中痕量三唑磷的分析要求，由于底泥沉积物品样品基质复杂，若样品前处理过程中杂质去除不好，可直接干扰仪器的测定结果，甚至损坏仪器。目前国内还没有针对底泥沉积物中三唑磷超高液相色谱质谱检测的方法。因此如何高效地从底泥沉积物中提取三唑磷并进行净化，成了底泥沉积物痕量三唑磷分析的一个瓶颈。

发明内容

[0003] 本发明的目的在于提供一种底泥沉积物中三唑磷的超高效液相色谱质谱检测方法，能快速、准确的对沉积物中三唑磷测定，实现三唑磷的定量及定性测定。

[0004] 本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

[0005] 一种底泥沉积物中三唑磷的超高效液相色谱质谱检测方法，包括如下步骤：

[0006] ①涡旋震荡+超声溶剂萃取：以纯净水和乙酸乙酯为溶剂，对样品涡旋震荡后，进行超声萃取得萃取液；

[0007] ②分散固相萃取+固相萃取柱富集净化：萃取液中加入石墨化碳黑和N-丙基乙二胺（或称乙二胺-N-丙基硅烷），涡旋震荡，离心，过无水硫酸钠，旋转蒸发至干，加入正己烷洗涤溶解后得待检测液，待检测液上弗罗里硅土固相萃取柱，二氯甲烷洗脱，收集洗脱液；

[0008] ③超高效液相色谱质谱检测：取洗脱液进行液相色谱-质谱检测，然后绘制标准工作曲线，外标法定量，根据峰面积计算三唑磷的浓度。

[0009] 作为优选，步骤①涡旋震荡+超声溶剂萃取具体过程为：称量10g样品于50毫升离心管中，加入10毫升纯净水，再加入15毫升乙酸乙酯，加盖涡旋震荡混匀2分钟，在40KHz超声波作用下35℃-45℃温度萃取10 min，然后将萃取样品在5000 转每分钟转速下离心5 分钟，分离出萃取液，再加15毫升乙酸乙酯重复提取一次，合并萃取液；

[0010] 作为优选，步骤②中：萃取液中加入石墨化碳黑和N-丙基乙二胺各0.2克，涡旋震荡2分钟，5000转每分钟转速下离心2分钟，离心分离出的液体过无水硫酸钠，收集于100毫升鸡型瓶，旋转蒸发至干，加入3毫升正己烷洗涤溶解后得待检测液。

[0011] 作为优选，步骤②中：待检测液上弗罗里硅土固相萃取柱，弃去流出液，再向弗罗里硅土固相萃取柱加入色谱纯二氯甲烷洗脱，每次5mL，收集洗脱液。

[0012] 作为优选，步骤③中液相色谱检测条件为：色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18柱，规格：2.1 mm×50 mm，1.7 µm；样品室温度4 ℃；柱温40 ℃；进样量10 μL；流速 0.2 mL/min；流动相A为0.1%甲酸水溶液，B为乙腈，梯度洗脱：0 2.0 min，40% A；2.0 4.0 min，10% A；
~ ~
4.0 5.0 min，40% A。
~

[0013] 作为优选，步骤③中质谱检测条件为：电喷雾离子源，正离子扫描（ESI+）；检测方式：多反应监测（MRM）；毛细管电压：3.5 kV；离子源温度：110℃；脱溶剂气温度：360℃；锥孔气流量：50L/h；脱溶剂气流量：800L/h；三唑磷母离子m/z313.9，定量离子m/z161.7，驻留时间0.15秒，锥孔电压30伏特，碰撞能20Ev，定性离子选择m/z285.7，驻留时间0.15秒，锥孔电压30伏特，碰撞能15Ev。

[0014] 本发明主要是开发一种检测灵敏度比传统气相色谱和质谱低两个数量级左右的检测方法，满足底泥沉积物中痕量三唑磷的分析研究。

[0015] 本发明的有益效果是：本发明在一定的温度下采用涡旋震荡+超声辅助乙酸乙酯萃取底泥沉积物中的三唑磷，萃取效果好，操作简单；采用石墨化碳黑和PSA分散固相萃取+弗罗里硅土固相萃取柱富集净化，净化效果好，有效地降低了萃取液中杂质对超高效液相色谱质谱测定过程的干扰；采用超高效液相色谱质谱进行选择离子监测，具有非常高的灵敏度和精确度；与已有的测试技术相比，本发明在检测三唑磷过程中耗时少，灵敏度高，方法可同时进行定性及定量测定，操作简单易行，消耗成本低，能够快速分析底泥沉积物中三唑磷。

附图说明

[0016] 图1是三唑磷的离子色谱流图。图中下半部分为三唑磷定量离子对m/z 313.9>161.7采集通道，上半部分为定性离子对m/z 313.9>285.7采集通道。

具体实施方式

[0017] 下面通过具体实施例，对本发明的技术方案作进一步的具体说明。

[0018] 本发明中，若非特指，所采用的原料和设备等均可从市场购得或是本领域常用的。下述实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。

[0019] 本发明采用ACQUITYTM超高效液相色谱仪，配Waters Quattro Premier XE质谱仪测定。三唑磷的离子色谱流图见图1，由图中可看出三唑磷的保留时间为1.61min，峰形尖锐对称，无毛刺，整体基线平稳，且无溶剂峰或其它杂峰，完全满足日常分析测试的需要。

[0020] 实施例：

[0021] 泥鳅养殖塘中底泥三唑磷测定

[0022] 1、涡旋震荡+超声溶剂萃取：称量10g左右湿样于50毫升离心管中，加入10毫升纯净水，再加入15毫升乙酸乙酯，加塞震荡混匀2分钟，在40KHz超声波作用下35℃-45℃温度萃取10 min，然后将萃取样品离心5 分钟，转速5000 转每分钟，分离出萃取液，再加15毫升乙酸乙酯重复提取一次，合并萃取液。

[0023] 2、分散固相萃取+固相萃取柱富集净化：萃取液中加入石墨化碳黑和N-丙基乙二胺（PSA）各0.2克左右，涡旋震荡2分钟，5000转每分钟离心2分钟，离心分离出的液体过无水硫酸钠，收集于100毫升鸡型瓶，旋转蒸发至干，加入3毫升正己烷洗涤溶解后得待检测液。0.5g/3mL规格佛罗里硅土柱，用3毫升正己烷活化弗罗里硅土固相萃取柱，待检测液上弗罗里硅土固相萃取柱，弃去流出液，再向弗罗里硅土固相萃取柱加入色谱纯二氯甲烷5毫升洗脱，收集洗脱液于15毫升规格离心管中。

[0024] 3、超高效液相色谱质谱检测：

[0025] 取收集的洗脱液经氮吹至干，以初始流动相（0.1%甲酸水：乙腈，4:6体积比）1 mL洗脱定容，经0.22 µm的有机滤膜过滤到进样瓶中，进行液相色谱-质谱检测。

[0026] 色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18柱（2.1 mm×50 mm，1.7 µm）；样品室温度4 ℃；柱温40 ℃；进样量10 μL；流速 0.2 mL/min；流动相A为0.1%甲酸水溶液，B为乙腈，梯度洗脱：0 2.0 min，40% A；2.0 4.0 min，10% A；4.0 5.0 min，40% A；质谱条件：电喷雾离子源，正~ ~ ~
离子扫描（ESI+）；检测方式：多反应监测（MRM）；毛细管电压：3.5 kV；离子源温度：110℃；脱溶剂气温度：360℃；锥孔气流量：50L/h；脱溶剂气流量：800L/h；三唑磷母离子m/z313.9，定量离子m/z161.7，驻留时间0.15秒，锥孔电压30伏特，碰撞能20Ev，定性离子选择m/z285.7，驻留时间0.15秒，锥孔电压30伏特，碰撞能15Ev。

[0027] 4、标准曲线绘制

[0028] 0.1%甲酸水和乙腈（V/V,4:6）配置使用浓度为100µg/L三唑磷标准溶液，然后逐级稀释成浓度为1.0µg/L、5.0µg/L、10.0µg/L、20.0µg/L、40.0µg/L、100.0µg/L三唑磷标准曲线，根据分面积进行定量，保留时间定性。

[0029] 5、方法回收率的测定

[0030] 分别添加0.5µg/Kg，2.0µg/Kg,8.0µg/Kg的三个梯度浓度加标，每个添加水平做三个平行样，按1-3步骤进行超高效液相色谱质谱检测，并与上述得到的标准曲线比较，通过换算最终得到泥样中三唑磷浓度，方法回收率在60%-120%之间，RSD≤15%。

[0031] 利用本发明的方法检测海洋沉积物30份，同采用DB 33/T 610 -2006 的方法检测结果一致。仪器检出限为0.1µg/L，方法检出限为0.25µg/Kg。

[0032] 以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案，并非对本发明作任何形式上的限制，在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。