一类6-吡啶苯并咪唑吲哚衍生物及其制备方法与医药领域的应用转让专利
申请号 : CN201510507146.X
文献号 : CN106467515B
文献日 : 2019-09-24
发明人 : 陈志龙 , 朱伟波 , 鲍晓璐 , 任何 , 廖平永 , 严懿嘉 , 陈聃烨
申请人 : 宁波洞密生物科技有限公司 , 陈志龙
摘要 :
本发明公开了一类6‑吡啶苯并咪唑吲哚衍生物及其制备方法。该类化合物是一种新型血管紧张素II受体拮抗剂，可用于预防和治疗高血压、冠心病、肺动脉高压等心脑肾血管疾病。
权利要求 :
1.一类6-吡啶苯并咪唑吲哚衍生物(系列I和系列II)，其结构式为：其中R为乙基、正丙基、正丁基。
2.根据权利要求1所述的6-吡啶苯并咪唑吲哚衍生物，其特征在于所述的R为乙基、正丙基或正丁基，该类化合物为：
2-(4-((2-乙基-4-甲基-6(吡啶-2-基)苯并咪唑基)甲基)-1H-吲哚-1-基)苯甲酸(化合物Ia)；
2-(4-((2-正丙基-4-甲基-6-(吡啶-2-基)苯并咪唑基)甲基)-1H-吲哚-1-基)苯甲酸(化合物Ib)；
2-(4-((2-正丁基-4-甲基-6-(吡啶-2-基)苯并咪唑基)甲基)-1H-吲哚-1-基)苯甲酸(化合物Ic)；
2-(5-((2-乙基-4-甲基-6-(吡啶-2-基)苯并咪唑基)甲基)-1H-吲哚-1-基)苯甲酸(化合物IIa)；
2-(5-((2-正丙基-4-甲基-6-(吡啶-2-基)苯并咪唑基)甲基)-1H-吲哚-1-基)苯甲酸(化合物IIb)；
2-(5-((2-正丁基-4-甲基-6-(吡啶-2-基)苯并咪唑基)甲基)-1H-吲哚-1-基)苯甲酸(化合物IIc)。
说明书 :
一类6-吡啶苯并咪唑吲哚衍生物及其制备方法与医药领域的
应用
技术领域
[0001] 本发明涉及一类新的6-吡啶苯并咪唑吲哚衍生物以及该类化合物的制备方法。该化合物能够有效预防和治疗高血压、冠心病、偏头痛、肺动脉高压等心脑肾血管疾病。
背景技术
[0002] 1970年Marshall等人合成了第一个血管紧张素II(Angiotensin II，A II)受体拮抗剂--肽类化合物沙拉新(Saralasin：Sarl-Ala8-Ang II)，它与血管紧张素II的结构十分相似，其对离体组织有专属性拮抗作用。但在临床实际应用中，由于口服无效、代谢不稳定且会使部分A II产生激动作用而受到限制。1982年，日本武田制药公司在研究咪唑乙酸类化合物的利尿降压作用时，发现S-8307能够抑制A II诱发的兔动脉收缩和升压效应，虽然活性较弱，但属于A II受体专一性拮抗剂，且没有沙拉新的激动效应。80年代末期，Dupont公司(Med.Rev.1992，12：149-158)和Smithkline Beecham公司(Drugs of the fixture.1992，17：575-593)的研究人员，将A II的C-末端区域与S-8307排列比较，对S-
8307进行了系列的结构修饰，结果分别得到了两种不同结构类型的、都具有较高活性的化合物Dup-753(Losartan，氯沙坦)和SK&F-108566(Eprosartan，伊普沙坦)，氯沙坦于1994年在瑞典上市(Drugs of the Future.1997，22：1079-1085)。伊普沙坦于1997年在德国上市(Drugs of the future.1996，21(8)：794-798)。
8307进行了系列的结构修饰，结果分别得到了两种不同结构类型的、都具有较高活性的化合物Dup-753(Losartan，氯沙坦)和SK&F-108566(Eprosartan，伊普沙坦)，氯沙坦于1994年在瑞典上市(Drugs of the Future.1997，22：1079-1085)。伊普沙坦于1997年在德国上市(Drugs of the future.1996，21(8)：794-798)。
[0003] 非肽类A II受体拮抗剂以其与A II受体亲和力强、选择性高、口服有效、作用时间长等优点而被看好，是一类很有前途的降压药。目前上市的非肽类A II受体拮抗剂有缬沙坦(Valsartan)、氯沙坦、伊普沙坦、伊贝沙坦(Irbesartan)、替米沙坦(Telmisartan)等。
[0004] 氯沙坦(化合物XIII)于1994年在瑞典上市，成为第一个用于临床的ARB类药物。对氯沙坦的构效关系的研究表明：在苄基对位引入1个额外的苯环，构成联苯结构，生物活性提高；引人的苯环邻位有一酸性官能团，亲和力增强，例如：-CN、-COOMe、-CONH2、-COOH、四氮唑等；咪唑环的2位取代基为长度3-4个碳原子的亲脂性侧链如正烷烃，而亲脂性侧链为支链烷烃、环烷烃和芳香取代基均降低亲合力；咪唑环4位最好是1个亲脂性的大功能团或基团；咪唑环5位取代基为能形成氢键的小基团，如醇、醛、酸等。
[0005] 氯沙坦的发现为Ang II受体拮抗剂的研究提供了分子模型，揭示了该类化合物的3大部分结构：咪唑环结构、4-亚甲基-1，1’-联苯结构、四氮唑或羧酸结构。近年来许多国家都以此为模板，进行结构修饰和改造，得到更多良好的AT1受体拮抗剂。
[0006] 血管紧张素II受体拮抗剂新药大多是对氯沙坦的结构进行改造而成，如Candesartan(J.Med.Chem.1993，36，15：2182-2195)，Pomisartan(中国药科大学学报，
2005，36，2：99-101)、TAK-536(J.Med.Chem.1996，39，26：5228-5235)是将氯沙坦的咪唑结构用苯并咪唑结构代替。
2005，36，2：99-101)、TAK-536(J.Med.Chem.1996，39，26：5228-5235)是将氯沙坦的咪唑结构用苯并咪唑结构代替。
[0007]
发明内容
[0008] 为寻找制备方便，并具有更佳AT1受体拮抗效果的新药，本发明在前人研究的基础上，在苯并咪唑的6位上引入吡啶基团，再用N-苯基吲哚基团替换沙坦类药物的联苯基团，并通过增减苯并咪唑2位上碳链的长度来寻找最优键长，设计合成了一类新的6-吡啶苯并咪唑吲哚衍生物(系列I和系列II)，并提供了该化合物的制备方法。
[0009]
[0010] 其中R为乙基、正丙基、正丁基。
[0011] 所保护的化合物为：
[0012] 2-(4-((2-乙基-4-甲基-6(吡啶-2-基)苯并咪唑基)甲基)-1H-吲哚-1-基)苯甲酸(化合物Ia)
[0013] 2-(4-((2-正丙基-4-甲基-6-(吡啶-2-基)苯并咪唑基)甲基)-1H-吲哚-1-基)苯甲酸(化合物Ib)
[0014] 2-(4-((2-正丁基-4-甲基-6-(吡啶-2-基)苯并咪唑基)甲基)-1H-吲哚-1-基)苯甲酸(化合物Ic)
[0015] 2-(5-((2-乙基-4-甲基-6-(吡啶-2-基)苯并咪唑基)甲基)-1H-吲哚-1-基)苯甲酸(化合物IIa)
[0016] 2-(5-((2-正丙基-4-甲基-6-(吡啶-2-基)苯并咪唑基)甲基)-1H-吲哚-1-基)苯甲酸(化合物IIb)
[0017] 2-(5-((2-正丁基-4-甲基-6-(吡啶-2-基)苯并咪唑基)甲基)-1H-吲哚-1-基)苯甲酸(化合物IIc)
[0018] 本发明提供的化合物，可以通过下述两种方法制备(以Ib的合成为例)：
[0019] 方法一：
[0020]
[0021] 化合物III在碱性条件下与邻氟苯腈发生取代反应生成化合物V。化合物V被还原为醇类化合物VI。醇类化合物VI被溴化后与6-吡啶苯并咪唑化合物VIII在碱性条件下发生取代反应得到化合物IX，最后水解得到6-吡啶苯并咪唑吲哚化合物Ib。Ia与Ic的合成方法与化合物Ib类似；IIa-c的起始原料为1H-吲哚-5-甲醛，合成方法与Ib类似。
[0022] 方法二：
[0023]
[0024] 由方法一得到的化合物VI，在碱性条件下水解为羧酸化合物X，然后发生酯化反应得到化合物XI。化合物XI发生溴化反应，然后与6-吡啶苯并咪唑化合物VIII在碱性条件下发生取代反应，并接着水解得到6-吡啶苯并咪唑吲哚化合物Ib。Ia与Ic的合成方法与化合物Ib类似；IIa-c的起始原料为1H-吲哚-5-甲醛，合成方法与Ib类似。
[0025] 本领域技术人员根据上述描述的两种方法可以合成该类化合物。
[0026] 经进一步的研究发现，上述化合物对高血压、冠心病、偏头痛、肺动脉高压等心脑肾血管疾病具有较好的预防或治疗作用。因此，本发明的化合物可用于制备预防或治疗高血压等疾病的药物。
具体实施方式
[0027] [实施例1]
[0028] 2-(4-((2-正丙基-4-甲基-6-(吡啶-2-基)苯并咪唑基)甲基)-1H-吲哚-1-基)苯甲酸(化合物Ib)的制备方法具体包括以下步骤：
[0029] 步骤1：N-邻氰基苯基-1H-吲哚-4-甲醛(化合物V)的合成：
[0030]
[0031] 将1H-吲哚-4-甲醛(10.00g，68.97mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(150mL)中，加入邻氟苯腈(8.40mL，75.86mmol)和碳酸钾(19.03g，137.94mmol)。混合液于160℃搅拌回流约2h，TLC监测至反应完全。待反应液温度降低至常温后，过滤，滤饼用二氯甲烷(20mL)洗涤三次。向滤液中加入200mL二氯甲烷和200mL水，分取有机相；用二氯甲烷(150mL×3)萃取水相，合并有机相。有机相用饱和食盐水(300mL×4)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤。将滤液减压蒸除溶剂，得到黄褐色固体。将该固体重结晶得到灰白色固体产物V约16g(收率约94.3％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ：10.32(s，1H)，7.91(d，1H)，7.81(t，1H)，7.76(d，1H)，7.61-7.56(m，5H)，7.42(t，1H)。MS(ESI)m/z：247.2[M+H]+，269.2[M+Na]+。
[0032] 步骤2：N-邻氰基苯基-4-羟甲基-1H-吲哚(化合物VI)的合成：
[0033]
[0034] 将N-邻氰基苯基-1H-吲哚-4-甲醛(10g，40.65mmol)溶于乙醇(100mL)和四氢呋喃(50mL)的混合液中，于冰浴下搅拌。边搅拌边缓慢加入硼氢化钠(386mg，10.16mmol)，添加完毕后于室温下搅拌。TLC监测反应完全后，加入200mL水终止反应。用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并有机相。有机相用无水硫酸镁干燥，过滤，减压蒸除溶剂，得到淡黄色固体。将该固体重结晶得到灰白色固体产物VI约10g(收率约99.2％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ：7.88(d，1H)，7.78(t，1H)，7.63(d，1H)，7.54(t，1H)，7.46(d，1H)，7.32-7.26(m，3H)，6.94(d，1H)，
5.06(s，2H)。MS(ESI)m/z：249.2[M+H]+，271.2[M+Na]+。
5.06(s，2H)。MS(ESI)m/z：249.2[M+H]+，271.2[M+Na]+。
[0035] 步骤3：N-邻氰基苯基-4-溴甲基吲哚(化合物VII)的合成
[0036]
[0037] 将N-邻氰基苯基-4-羟甲基-1H-吲哚(500mg，2.02mmol)溶于100mL无水二氯甲烷中，于冰浴下搅拌，缓慢滴加含约35％溴化氢的醋酸溶液(0.5mL)。滴毕，冰浴下继续搅拌1-2h。反应完毕后，往反应液中加入50mL二氯甲烷和150mL水，分取有机相；用二氯甲烷(100mL×3)萃取水相三次；合并有机相。有机相用饱和食盐水(100mlL×3)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压蒸除溶剂，得到灰色固体。对所得固体进行重结晶得到灰白色固体VII约500mg(收率约80.0％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ：7.88(d，1H)，7.79(t，1H)，7.63(d，1H)，7.57-7.51(m，2H)，7.33-7.22(m，3H)，6.97(d，1H)，4.89(s，2H)。MS(ESI)m/z：311.0[M+H]+，313.0[M+2+H]+。
[0038] 步骤4：2-(4-((2-正丙基-4-甲基-6-(吡啶-2-基)苯并咪唑基)甲基)-1H-吲哚-1-基)苯腈(化合物IX)的合成
[0039]
[0040] 将2-正丙基-4-甲基-6-(吡啶-2-基)苯并咪唑(化合物VIII，300mg，1.20mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(50mL)中，加入N-邻氰基苯基-4-溴甲基-1H-吲哚(化合物VII，409mg，1.32mmol)和碳酸钾(331mg，2.40mmol)，于40℃-50℃下反应4h。TLC监测反应近完全后，过滤，往滤液中加入50mL水，用乙酸乙酯萃取滤液(100mL×3)，合并有机相。有机相用饱和食盐水洗涤(100mL×3)，无水硫酸镁干燥，过滤，减压蒸除溶剂，对所得残留物进行柱层析分离纯化(洗脱液为二氯甲烷∶甲醇＝100∶1)，得淡黄色固体IX约515mg(收率约89.6％)。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ：8.65(d，1H)，7.90(d，1H)，7.80-7.69(m，5H)，7.64(d，1H)，7.56(t，
1H)，7.50(d，1H)，7.26(d，1H)，7.18(m，1H)，7.09(t，1H)，6.80(d，1H)，6.52(d，1H)，5.78(s，
2H)，2.93(t，2H)，2.82(s，3H)，1.85(m，2H)，1.02(t，3H)。MS(ESI)m/z：482.4[M+H]+。
1HNMR(400MHz，CDCl3)δ：8.65(d，1H)，7.90(d，1H)，7.80-7.69(m，5H)，7.64(d，1H)，7.56(t，
1H)，7.50(d，1H)，7.26(d，1H)，7.18(m，1H)，7.09(t，1H)，6.80(d，1H)，6.52(d，1H)，5.78(s，
2H)，2.93(t，2H)，2.82(s，3H)，1.85(m，2H)，1.02(t，3H)。MS(ESI)m/z：482.4[M+H]+。
[0041] 步骤5：2-(4-((2-正丙基-4-甲基-6-(吡啶-2-基)苯并咪唑基)甲基)-1H-吲哚-1-基)苯甲酸(化合物Ib)的合成
[0042]
[0043] 将2-(4-((2-正丙基-4-甲基-6-(吡啶-2-基)苯并咪唑基)甲基)-1H-吲哚-1-基)苯腈(化合物IX)(500mg，1.04mmol)用40mL甲醇溶解，加入5M的NaOH溶液40mL，搅拌回流18h，减压蒸出甲醇，盐酸调pH至5-6，用二氯甲烷(100mL×3)萃取反应液三次，合并有机相。
有机相用饱和食盐水(100mL×3)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压蒸除溶剂，对所得残留物进行柱层析(洗脱液为二氯甲烷∶甲醇＝100∶1)，得灰白色固体Ib约320mg(收率约
61.6％)。1H NMR(400MHz，DMSO)：δ12.93(s，1H)，8.60(s，1H)，8.04-7.95(m，3H)，7.81-7.73(m，3H)，7.59-7.54(m，3H)，7.27-7.26(m，1H)，7.01(s，2H)，6.74-6.73(m，1H)，6.35-6.34(m，1H)，5.88(s，2H)，2.83(t，2H)，2.65(s，3H)，1.78-1.76(m，2H)，0.95(t，3H)。13C NMR(101MHz，DMSO)：δ167.62，157.29，156.52，149.71，143.12，137.72，137.51，137.48，
137.19，136.26，132.98，132.95，131.11，130.49，129.23，128.91，128.47，128.45，126.50，
122.45，122.24，121.16，120.52，116.75，109.74，106.42，101.17，45.07，29.30，20.99，
17.14，14.32。HRMS(ESI)m/z：501.2278[M+H]+。
有机相用饱和食盐水(100mL×3)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压蒸除溶剂，对所得残留物进行柱层析(洗脱液为二氯甲烷∶甲醇＝100∶1)，得灰白色固体Ib约320mg(收率约
61.6％)。1H NMR(400MHz，DMSO)：δ12.93(s，1H)，8.60(s，1H)，8.04-7.95(m，3H)，7.81-7.73(m，3H)，7.59-7.54(m，3H)，7.27-7.26(m，1H)，7.01(s，2H)，6.74-6.73(m，1H)，6.35-6.34(m，1H)，5.88(s，2H)，2.83(t，2H)，2.65(s，3H)，1.78-1.76(m，2H)，0.95(t，3H)。13C NMR(101MHz，DMSO)：δ167.62，157.29，156.52，149.71，143.12，137.72，137.51，137.48，
137.19，136.26，132.98，132.95，131.11，130.49，129.23，128.91，128.47，128.45，126.50，
122.45，122.24，121.16，120.52，116.75，109.74，106.42，101.17，45.07，29.30，20.99，
17.14，14.32。HRMS(ESI)m/z：501.2278[M+H]+。
[0044] [实施例2]
[0045] 2-(4-((2-正丙基-4-甲基-6-(吡啶-2-基)苯并咪唑基)甲基)-1H-吲哚-1-基)苯甲酸(化合物Ib)的制备方法具体包括以下步骤：
[0046] 步骤1：N-邻羧基苯基-4-羟甲基-1H-吲哚(化合物X)的合成：
[0047]
[0048] 将N-邻氰基苯基-4-羟甲基-1H-吲哚(10g，40.32mmol)溶于乙二醇(100mL)中，缓慢滴加5M氢氧化钠(80mL)溶液，添加完毕后回流搅拌。TLC监测反应完全后，冷却至室温，于冰浴下加入5M盐酸(约80mL)溶液调节pH至5-7，用二氯甲烷(100mL×3)萃取三次，合并有机相。有机相用饱和食盐水(100mL×3)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压蒸除有机相，得到淡黄色固体。将该固体重结晶得到灰白色固体X约10g(收率约92.9％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ：8.03(d，1H)，7.78(t，1H)，7.63(d，1H)，7.54(t，1H)，7.46(d，1H)，7.32-7.26(m，3H)，6.94(d，1H)，5.77(s，2H)。MS(ESI)m/z：268.1[M+H]+。
[0049] 步骤2：N-邻甲氧羰基苯基-4-羟甲基-1H-吲哚(化合物XI)的合成：
[0050]
[0051] 将N-邻羧基苯基-4-羟甲基-1H-吲哚(10g，37.45mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(150mL)中，加入碳酸钾(5.2g，37.45mmol)，室温下搅拌，缓慢滴加碘甲烷(5.85g，41.20mmol)。滴加完毕后继续在室温下搅拌约2h，TLC监测至反应完全。过滤，滤饼用二氯甲烷(10mL×3)洗涤三次。合并滤液，加入200mL二氯甲烷和200mL水，分取有机相；用二氯甲烷(150mL×3)萃取水相三次；合并有机相。有机相用饱和食盐水(300mL×4)洗，无水硫酸镁干燥，过滤，减压蒸除溶剂，得到黄褐色固体。将该固体重结晶得到灰白色固体XI约10g(收率约95.2％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ：8.02(dd，1H)，7.72-7.68(m，1H)，7.57-7.51(m，2H)，
7.31(d，1H)，7.21-7.11(m，3H)，7.14-7.11(m，1H)，6.86(d，1H)，5.77(s，2H)，3.47(s，3H)。
MS(ESI)m/z：282.2[M+H]+。
7.31(d，1H)，7.21-7.11(m，3H)，7.14-7.11(m，1H)，6.86(d，1H)，5.77(s，2H)，3.47(s，3H)。
MS(ESI)m/z：282.2[M+H]+。
[0052] 步骤3：N-邻甲氧羰基苯基-4-溴甲基-1H-吲哚(化合物XII)的合成：
[0053]
[0054] 将N-邻甲氧羰基苯基-4-羟甲基-1H-吲哚(化合物XI，500mg，1.78mmol)溶于100mL无水二氯甲烷中，于冰浴下搅拌，缓慢滴加含约35％溴化氢的醋酸(0.5mL)溶液。滴加完毕后，冰浴下搅拌1-2h。反应完毕后，往反应液中加入50mL二氯甲烷和150mL水，分取有机相；用二氯甲烷(100mL×3)萃取水相，合并有机相。有机相用饱和食盐水(100mlL×3)洗，无水硫酸镁干燥，过滤，减压蒸除溶剂，得到灰色固体，对所得固体进行重结晶得到灰白色固体产物XII约500mg(收率约82.0％)。1HNMR(400MHz，CDCl3)δ：8.03(dd，1H)，7.72-7.68(m，1H)，
7.57-7.51(m，2H)，7.31(d，1H)，7.21-7.11(m，3H)，7.14-7.11(m，1H)，6.86(d，1H)，4.91(s，
2H)，3.48(s，3H)。MS(ESI)m/z：344.0[M+H]+，346.0[M+2+H]+。
7.57-7.51(m，2H)，7.31(d，1H)，7.21-7.11(m，3H)，7.14-7.11(m，1H)，6.86(d，1H)，4.91(s，
2H)，3.48(s，3H)。MS(ESI)m/z：344.0[M+H]+，346.0[M+2+H]+。
[0055] 步骤4：2-(4-((2-正丙基-4-甲基-6-(吡啶-2-基)苯并咪唑基)甲基)-1H-吲哚-1-基)苯甲酸(化合物Ib)的合成
[0056]
[0057] 将2-正丙基-4-甲基-6-(吡啶-2-基)苯并咪唑(化合物VIII，300mg，1.20mmol)溶于20mL N，N-二甲基甲酰胺中，加入钠氢(86.4mg，3.6mmol)，于室温下搅拌30min，缓慢滴加含N-邻甲氧羰基苯基-4-溴甲基-1H-吲哚(化合物XII，453mg，1.32mmol)的N，N-二甲基甲酰胺溶液(10mL)。滴加完毕后，混合液于室温下继续搅拌约2h，TLC监测至反应完全。补加2M的氢氧化钠溶液2mL，于室温下搅拌反应约2h。待反应完全后，用2M稀盐酸调节pH值至5-6，向反应液中加入200mL二氯甲烷和200mL水，分取有机相；用二氯甲烷(150mL×3)萃取水相三次，合并有机相。有机相用饱和食盐水(300mL×4)洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，减压蒸除溶剂，得到黄褐色固体。将该固体重结晶得到灰白色固体产物Ib约400mg(收率约66.9％)。1H NMR(400MHz，DMSO)：δ12.93(s，1H)，8.60(s，1H)，8.04-7.95(m，3H)，7.81-7.73(m，3H)，7.59-7.54(m，3H)，7.27-7.26(m，1H)，7.01(s，2H)，6.74-6.73(m，1H)，6.35-6.34(m，1H)，
5.88(s，2H)，2.83(t，2H)，2.65(s，3H)，1.78-1.76(m，2H)，0.95(t，3H)。13C NMR(101MHz，DMSO)：δ167.62，157.29，156.52，149.71，143.12，137.72，137.51，137.48，137.19，136.26，
132.98，132.95，131.11，130.49，129.23，128.91，128.47，128.45，126.50，122.45，122.24，
121.16，120.52，116.75，109.74，106.42，101.17，45.07，29.30，20.99，17.14，14.32。HRMS(ESI)m/z：501.2278[M+H]+。
5.88(s，2H)，2.83(t，2H)，2.65(s，3H)，1.78-1.76(m，2H)，0.95(t，3H)。13C NMR(101MHz，DMSO)：δ167.62，157.29，156.52，149.71，143.12，137.72，137.51，137.48，137.19，136.26，
132.98，132.95，131.11，130.49，129.23，128.91，128.47，128.45，126.50，122.45，122.24，
121.16，120.52，116.75，109.74，106.42，101.17，45.07，29.30，20.99，17.14，14.32。HRMS(ESI)m/z：501.2278[M+H]+。
[0058] [实施例3]
[0059] 2-(4-((2-乙基-4-甲基-6(吡啶-2-基)苯并咪唑基)甲基)-1H-吲哚-1-基)苯甲酸(化合物Ia)的制备方法：
[0060] 合成方法如实施例1和实施例2所述。1H NMR(400MHz，DMSO)：δ12.92(s，1H)，8.59(d，J＝4.7Hz，1H)，8.06(s，1H)，7.99-7.91(m，2H)，7.84-7.81(m，2H)，7.74(t，J＝7.6Hz，1H)，7.61-7.51(m，3H)，7.32-7.20(m，1H)，7.06-6.95(m，2H)，6.72(d，J＝3.2Hz，1H)，6.41-
6.30(m，1H)，5.87(s，2H)，2.85(q，J＝7.4Hz，2H)，2.65(s，3H)，1.29(t，J＝7.5Hz，3H).13C NMR(101MHz，DMSO)δ167.33，157.59，157.29，149.71，143.05，137.75，137.48，137.24，
137.22，136.41，133.05，133.03，131.11，130.48，129.22，128.96，128.94，128.49，126.50，
122.50，122.26，121.13，120.53，116.80，109.68，106.37，101.17，44.85，20.84，17.15，
12.13.HRMS(ESI)m/z：487.2121[M+H]+。
6.30(m，1H)，5.87(s，2H)，2.85(q，J＝7.4Hz，2H)，2.65(s，3H)，1.29(t，J＝7.5Hz，3H).13C NMR(101MHz，DMSO)δ167.33，157.59，157.29，149.71，143.05，137.75，137.48，137.24，
137.22，136.41，133.05，133.03，131.11，130.48，129.22，128.96，128.94，128.49，126.50，
122.50，122.26，121.13，120.53，116.80，109.68，106.37，101.17，44.85，20.84，17.15，
12.13.HRMS(ESI)m/z：487.2121[M+H]+。
[0061] [实施例4]
[0062] 2-(4-((2-正丁基-4-甲基-6-(吡啶-2-基)苯并咪唑基)甲基)-1H-吲哚-1-基)苯甲酸(化合物Ic)的制备方法：
[0063] 合成方法如实施例1和实施例2所述。1H NMR(400MHz，DMSO)：δ12.87(s，1H)，8.60(d，2H)，8.04(s，2H)，7.97-7.95(m，2H)，7.84-7.74(m，3H)，7.67-7.44(m，3H)，7.32-7.24(m，1H)，7.01(s，2H)，6.74(d，1H)，6.37-6.36(m，1H)，5.87(s，2H)，2.84(t，2H)，2.64(s，3H)，1.71-1.69(m，2H)，1.36-1.32(m，2H)，0.85(t，J＝7.3Hz，3H).13C NMR(101MHz，DMSO)：δ
167.62，157.29，156.67，149.70，143.08，137.80，137.48，137.22，137.21，136.27，133.12，
132.99，131.16，130.48，129.24，128.93，128.48，128.45，126.53，122.48，122.24，121.16，
120.52，116.85，109.69，106.41，101.19，45.09，29.67，27.11，22.40，17.14，14.16.HRMS(ESI)m/z：515.2429[M+H]+。
167.62，157.29，156.67，149.70，143.08，137.80，137.48，137.22，137.21，136.27，133.12，
132.99，131.16，130.48，129.24，128.93，128.48，128.45，126.53，122.48，122.24，121.16，
120.52，116.85，109.69，106.41，101.19，45.09，29.67，27.11，22.40，17.14，14.16.HRMS(ESI)m/z：515.2429[M+H]+。
[0064] [实施例5]
[0065] 2-(5-((2-乙基-4-甲基-6-(吡啶-2-基)苯并咪唑基)甲基)-1H-吲哚-1-基)苯甲酸(化合物IIa)的制备方法：
[0066] 合成方法如实施例1和实施例2所述。1H NMR(400MHz，DMSO)：δ12.83(s，1H)，8.61(d，J＝3.9Hz，1H)，8.09(s，1H)，7.98(d，J＝8.0Hz，1H)，7.91(d，J＝7.5Hz，1H)，7.88-7.75(m，2H)，7.71(t，J＝7.2Hz，1H)，7.57(t，J＝7.4Hz，1H)，7.48(d，J＝7.8Hz，1H)，7.43(d，J＝3.1Hz，1H)，7.37-7.18(m，2H)，7.07(d，J＝8.5Hz，1H)，7.02-6.85(m，1H)，6.61(d，J＝
18.9Hz，1H)，5.63(s，2H)，2.92(q，J＝14.9，7.4Hz，2H)，2.62(s，3H)，1.33(t，J＝7.5Hz，
13
3H). C NMR(101MHz，DMSO)：δ167.61，157.34，157.29，149.74，143.06，137.80，137.48，
136.48，136.15，133.07，133.01，131.10，130.85，130.34，130.31，129.04，129.00，128.82，
128.40，128.37，122.25，121.11，120.55，118.57，110.65，106.43，103.21，46.75，20.85，
17.13，12.19.HRMS(ESI)m/z：487.2119[M+H]+。
18.9Hz，1H)，5.63(s，2H)，2.92(q，J＝14.9，7.4Hz，2H)，2.62(s，3H)，1.33(t，J＝7.5Hz，
13
3H). C NMR(101MHz，DMSO)：δ167.61，157.34，157.29，149.74，143.06，137.80，137.48，
136.48，136.15，133.07，133.01，131.10，130.85，130.34，130.31，129.04，129.00，128.82，
128.40，128.37，122.25，121.11，120.55，118.57，110.65，106.43，103.21，46.75，20.85，
17.13，12.19.HRMS(ESI)m/z：487.2119[M+H]+。
[0067] [实施例6]
[0068] 2-(5-((2-正丙基-4-甲基-6-(吡啶-2-基)苯并咪唑基)甲基)-1H-吲哚-1-基)苯甲酸(化合物IIb)的制备方法：
[0069] 合成方法如实施例1和实施例2所述。1H NMR(400MHz，DMSO)：δ12.83(s，1H)，8.60(s，1H)，8.06(s，1H)，7.97-7.78(m，4H)，7.70-7.68(m，1H)，7.56-7.53(m，1H)，7.47-7.44(m，2H)，7.27(s，2H)，7.08-7.06(m，1H)，6.98-6.96(m，1H)，6.56(s，1H)，5.63(s，2H)，2.8813
(t，2H)，2.61(s，3H)，1.81-1.79(m，2H)，0.98(t，3H). C NMR(101MHz，DMSO)：δ167.62，
157.34，156.23，149.74，143.16，137.72，137.48，136.46，136.00，132.97，132.91，131.05，
130.88，129.04，128.99，128.76，128.37，128.33，128.28，122.24，121.12，121.01，120.55，
118.48，110.67，106.51，103.15，46.80，29.30，21.09，17.12，14.36.HRMS(ESI)m/z：
+
501.2278[M+H]。
(t，2H)，2.61(s，3H)，1.81-1.79(m，2H)，0.98(t，3H). C NMR(101MHz，DMSO)：δ167.62，
157.34，156.23，149.74，143.16，137.72，137.48，136.46，136.00，132.97，132.91，131.05，
130.88，129.04，128.99，128.76，128.37，128.33，128.28，122.24，121.12，121.01，120.55，
118.48，110.67，106.51，103.15，46.80，29.30，21.09，17.12，14.36.HRMS(ESI)m/z：
+
501.2278[M+H]。
[0070] [实施例7]
[0071] 2-(5-((2-正丁基-4-甲基-6-(吡啶-2-基)苯并咪唑基)甲基)-1H-吲哚-1-基)苯甲酸(化合物IIc)的制备方法：
[0072] 合成方法如实施例1和实施例2所述。1H NMR(400MHz，DMSO)：δ12.89(s，1H)，8.61(d，J＝3.6Hz，1H)，8.08(s，1H)，7.95(dd，J＝22.5，7.7Hz，2H)，7.87-7.75(m，2H)，7.70(t，J＝7.4Hz，1H)，7.56(t，J＝7.5Hz，1H)，7.48(d，J＝7.8Hz，1H)，7.43(d，J＝2.1Hz，1H)，7.34-7.22(m，2H)，7.07(d，J＝8.4Hz，1H)，6.98(d，J＝8.4Hz，1H)，6.58(s，1H)，5.63(s，2H)，2.90(t，J＝7.4Hz，2H)，2.62(s，3H)，1.76-1.74(m，2H)，1.43-1.37(m，2H)，0.89(t，J＝7.1Hz，
3H).13C NMR(101MHz，DMSO)：δ167.58，157.35，156.38，149.74，143.10，137.82，137.47，
136.49，136.01，133.06，133.00，131.12，130.85，130.35，129.06，129.00，128.81，128.36，
128.35，122.24，121.15，121.07，120.55，118.56，110.64，106.50，103.20，46.83，19.78，
27.10，22.45，17.12，14.18。HRMS(ESI)m/z：515.2430[M+H]+。
3H).13C NMR(101MHz，DMSO)：δ167.58，157.35，156.38，149.74，143.10，137.82，137.47，
136.49，136.01，133.06，133.00，131.12，130.85，130.35，129.06，129.00，128.81，128.36，
128.35，122.24，121.15，121.07，120.55，118.56，110.64，106.50，103.20，46.83，19.78，
27.10，22.45，17.12，14.18。HRMS(ESI)m/z：515.2430[M+H]+。
[0073] [实施例8]化合物受体结合活性实验
[0074] 受试细胞为大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)，受试化合物为Ia、Ib、Ic、IIa、IIb、IIc，氯沙坦，125I-AngII，[Sar1-Ile8]-Ang II。
[0075] 平滑肌细胞原代培养及鉴定：将SD大鼠用水合氯醛麻醉后，在无菌条件下剪开胸、腹腔，暴露心脏，除去结缔组织，分离主动脉，用PBS缓冲液冲洗残留血液。然后撕去血管外膜至血管光滑透明，用眼科剪将血管剪开，用眼科镊钝性刮去血管内膜，再用眼科剪将血管剪成1mm×1mm左右的小组织块，用胶原酶37℃消化1h，加入DMEM培养液(进口FBS20％)终止消化并离心倾去上清液，离心管中加入新鲜的培养基重悬细胞，接种于培养瓶中，静置培养3天，当细胞密度达到90％时进行消化传代。
[0076] 细胞鉴定：常规消化细胞，将细胞接种于已处理的盖玻片。24h后用PBS轻缓洗涤后加入4％多聚甲醛在室温下固定30min，再用PBS缓冲液洗涤3次，2min/次。然后用1％Triton X-100(PBS配制)室温下渗透细胞10min，增加细胞通透性以便抗体更好地进入细胞。3％H2O2室温下作用10min，PBS洗3次，5min/次。用山羊血清封闭非特异性抗原30min，滴加抗SMC-α-actin抗体(1∶200)，放置4℃过夜后用PBS缓冲液洗涤3次，5min/次。次日回收一抗，用PBS洗涤3次，5min/次，以下步骤避光操作，加入二抗(1∶200)在室温下孵育1h，PBS缓冲液洗涤3次，5min/次，然后用荧光封片剂封片后在荧光显微镜下检测。
[0077] 放射配基受体结合试验饱和实验：定量称取125I-Ang II溶解于1mL PBS溶液，再稀释成不同浓度的溶液，待用。取血管平滑肌细胞3-7代用于试验，铺于24孔板(1×105/孔)，500μL/孔，贴壁后进行试验。细胞板每孔依次加入浓度逐渐增加的125I-Ang II溶液，使其终浓度为0-3.0nM，4℃反应150min，为了扣除非特异性结合，加入未标记的Ang II(终浓度为1×10-6M)，反应结束后去除多余的反应液，用PBS洗涤3次，加入0.1mol/L NaOH溶液消化细胞
10min，将细胞消化液移入塑料管，用γ计数器测量每管内溶液的γ计数。经GraphPad
125
Prism 5饱和曲线拟合程序处理得到 I-Ang II受体结合饱和曲线。每个浓度采用(3个)复孔。
10min，将细胞消化液移入塑料管，用γ计数器测量每管内溶液的γ计数。经GraphPad
125
Prism 5饱和曲线拟合程序处理得到 I-Ang II受体结合饱和曲线。每个浓度采用(3个)复孔。
[0078] 竞争试验：取一定量的化合物溶于1mL DMSO溶液，使之浓度为10-2M，再稀释成不同浓度的溶液(1×10-10M-1×10-4M)，待用。细胞铺板(1×105/孔)后，每孔加入饱和浓度的125 -6 -11
I-Ang II以及不同浓度的待测化合物(终浓度1×10 -1×10 mol/L)，总体积为500μL，4℃反应150min，反应结束后去除游离的125I-Ang II，用PBS洗涤3次，加入0.1mol/L NaOH溶液消化10min，将细胞液移入塑料管，用γ计数器测量每管内溶液的γ计数。经GraphPad Prism 5竞争结合曲线拟合程序处理即可得出新型化合物抑制与膜蛋白结合的半抑制常数和IC50值。
I-Ang II以及不同浓度的待测化合物(终浓度1×10 -1×10 mol/L)，总体积为500μL，4℃反应150min，反应结束后去除游离的125I-Ang II，用PBS洗涤3次，加入0.1mol/L NaOH溶液消化10min，将细胞液移入塑料管，用γ计数器测量每管内溶液的γ计数。经GraphPad Prism 5竞争结合曲线拟合程序处理即可得出新型化合物抑制与膜蛋白结合的半抑制常数和IC50值。
[0079] 实验结果表明，本系列受试化合物与血管紧张素II AT1受体均具有很好的亲和性(如表1所示)，比较IC50值与Ki值发现，该系列化合物与氯沙坦相比对AngII均具有更好的抑制作用，值得进一步的研究。
[0080] 表1.化合物系列与AT1受体的亲和性比较
[0081]
[0082] [实施例9]降压药物活性筛选实验
[0083] 实验动物：健康自发性高血压大鼠(SHR)54只，雌雄各半(雌性未孕)。
[0084] 受试化合物：化合物Ia-Ic，IIa-IIc。试验时将待测化合物和氯沙坦配制成浓度为10mg/kg的水混悬液。
[0085] 阳性对照药：氯沙坦，临床用量为150mg/人，设人体重为60kg，换算为大鼠剂量后，氯沙坦为15mg/kg。试验取10mg/kg为对照浓度。
[0086] 实验方法：选用54只自发性高血压大鼠(SHR)模型，分为空白组、溶剂对照组、氯沙坦组、化合物Ia-Ic和IIa-IIc给药组，每组6只，用无创尾动脉血压测量仪(淮北正华生物仪器设备有限公司)进行检测，并记录给药前，给药后1-11h，12h及24h的收缩压(SBP)，舒张压(DBP)和心率(HR)。
[0087] 数据处理：所有实验数据均以均数±标准差( )表示，用药后各组间血压比较用完全随机设计的方差分析。
[0088] 实验结果：
[0089] 血压测试结果(见表1)：以给药前后血压降低值作为变量，结果显示溶剂组对大鼠血压及心率基本没有影响，所有化合物给药后各小时的血压值与空白组相应时间点相比均有显著性差异，其中Ia组降压效果最明显，将压作用持久，平缓且对心率没有影响。化合物Ia给药后1h就达到19.9mmHg的降压值，给药后5h达到最大将压值43.2mmHg，24h后还有较明显的将压效果。该化合物的降压效果与相同剂量下的氯沙坦相当，可认为是一种高效、长效、平稳降压的新型血管紧张素II受体拮抗剂，值得进一步研究开发。
[0090] 表1.实验后各组血压降低值比较( n＝6)
[0091]
[0092] 注：与空白组比较：*P＜0.05，**P＜0.01。
[0093] 应当理解，这些实施例的用途仅用于说明本发明而非意欲限制本发明的保护范围。此外，也应理解，在阅读了本发明的技术内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动、修改和/或变型，所有的这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的保护范围之内。