一种抗生育药、药物制剂及应用

摘要

本发明涉及医药领域，公开了一种抗生育药，其中，所述抗生育药含有鬼臼毒素类化合物，所述抗生育药应用于哺乳动物的杀精避孕。还公开了一种药物制剂，该药物制剂含有活性成分，其中，所述活性成分为本发明提供的抗生育药。本发明还提供了鬼臼毒素类化合物在制备抗生育药中的应用，其中，所述抗生育药应用于哺乳动物的生殖道内的杀精避孕。本发明提供的所述鬼臼毒素类化合物可以直接作为雌性哺乳动物的生殖道内的杀精避孕，特别是人类女性的生殖道内的杀精避孕药物，安全性高，并且对人体器官的毒性小。因此，本发明提供的所述抗生育药对于提高生殖健康水平具有非常重要的现实意义和应用推广价值。

权利要求

1.脱氧鬼臼毒素在制备抗生育药中的应用，其特征在于，所述抗生育药应用于人类女性的生殖道内的杀精避孕。

2.根据权利要求1所述的应用，其中，所述脱氧鬼臼毒素来自于选自叉子圆柏(Sabina vulgaris Ant)、桃儿七(Sinopodophyllumhexandrum(Royle)Ying)、南方山荷叶(Diphylleiagrayi)、云南八角莲(Dysosmaaurantiocaulis(Hand.-Mazz.)Hu)、小八角莲(Dysosmadifformis(Hemsl.et  Wils.)T.H.Wang  ex  Ying)、贵州八角莲(Dysosmamajorensis(Gagnep.)Ying)、六角莲(Dysosmapleiantha(Hance)Woods)、西藏八角莲(Dysosmatsayuensis Ying)、川八角莲(Dysosmaveitchii(Hemsl.et Wils)Fu ex Ying)、八角莲(Dysosmaversipellis(Hance)M.Cheng ex Ying)、日本罗汉柏(Thujopsisdolabrata(Thunberg  ex  Linn.f.)Sieb.et  Zucc.)和峨参(Anthriscussylvestris(L.)Hoffm.Gen.)中至少一种的提取物。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其中，药物制剂的剂型为凝胶剂或发泡剂，该凝胶剂或发泡剂中，活性成分脱氧鬼臼毒素的含量为0.1-60重量％、水的含量为1-99重量％，辅料的含量为0.9-98重量％。

4.根据权利要求1或2所述的应用，其中，药物制剂的剂型为膜剂或栓剂，该膜剂或栓剂中，活性成分脱氧鬼臼毒素的含量为0.1-60重量％，辅料的含量为40-99.9重量％。

说明书

一种抗生育药、药物制剂及应用

技术领域

[0001] 本发明涉及一种抗生育药、药物制剂及应用。

背景技术

[0002] 近年来我国未婚先孕人数/人工流产率，生殖道感染率呈急剧上升趋势。在目前常用到的各种避孕措施中，无论是宫内节育器、输卵管结扎和输精管结扎，还是激素类口服避孕药等，均存在着长期使用副作用大、病人顺应性差、可能干扰人体正常的内分泌等问题。另外，还存在许多潜在的危险致病因素，尤其是致畸性、致癌性、性传染病(STDs)传播等。在众多的节育方法中，女性生殖道内杀精避孕剂是一类安全性较高的避孕方法。它具有全身副反应小、不干扰人体正常生理过程的优点。壬苯醇醚(NP-9)为世界卫生组织在全球唯一推广的一种杀精避孕药物，它是非离子型表面活性剂，通过降低精子脂膜表面张力、改变精子渗透压而杀死精子。虽然它的杀精作用很强，但是NP-9对损伤女性阴道上皮细胞的发生率增加，因而增加了STDs传播的风险。再者，许多研究证明它在体内存在肝-肠循环，具有体内蓄积性，对肝脏、肾脏均有毒性。国内外虽然还有不少应用于生殖道内的杀精避孕药物的报道，如植物血细胞凝集素、牛膝皂甙、洗必泰等，但是都由于毒副作用过大等原因尚未应用于临床研究。因此，寻找安全、低毒的应用于生殖道内的杀精避孕药物，对于提高生殖健康水平尤为显得具有非常重要的现实意义和应用推广价值。

发明内容

[0003] 本发明的目的是提供一种杀精效果好的抗生育药、药物制剂及应用。

[0004] 为了实现上述目的，本发明提供了一种抗生育药，其中，所述抗生育药含有鬼臼毒素类化合物，所述抗生育药应用于哺乳动物的杀精避孕。

[0005] 本发明还提供了一种药物制剂，该药物制剂含有活性成分，其中，所述活性成分为本发明提供的抗生育药。

[0006] 本发明还提供了鬼臼毒素类化合物在制备抗生育药中的应用，其中，所述抗生育药应用于哺乳动物的生殖道内的杀精避孕。

[0007] 本发明的发明人发现所述鬼臼毒素类化合物可以直接作为雌性哺乳动物的生殖道内的杀精避孕药物，特别是人类女性的生殖道内的杀精避孕药物，所述抗生育药可以直接应用于女性的生殖道和/或子宫内，抗生育药中的鬼臼毒素类化合物可与精子作用，改变精子的细胞渗透性，从而杀死精子或使精子失去活力，以使得精子不能通过子宫到达输卵管与卵子结合以达到避孕的效果。此外，不会干扰女性的正常生理功能和生理周期。特别是来自于本发明中所述植物提取物的鬼臼毒素类化合物的安全性更佳。因此，本发明提供的所述抗生育药对于提高生殖健康水平具有非常重要的现实意义和应用推广价值。

[0008] 本发明的其它特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。

具体实施方式

[0009] 以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。

[0010] 按照本发明，所述抗生育药含有鬼臼毒素类化合物，所述抗生育药应用于哺乳动物的杀精避孕。

[0011] 本发明所述的抗生育药是一种外用避孕药或者称为杀精剂，因此，所述抗生育药应用于哺乳动物的生殖道内的杀精避孕，优选应用于人类的生殖道内的杀精避孕。所述抗生育药作为外用避孕药的用法为本领域技术人员所公知，即可以直接应用于雌性哺乳动物，特别是人类女性的生殖道和/或子宫内以达到杀精避孕的作用。

[0012] 优选情况下，本发明所述鬼臼毒素类化合物为鬼臼毒素和/或脱氧鬼臼毒素。

[0013] 所述鬼臼毒素类化合物的来源没有特别限制，可以来源于天然植物的提取物，亦可以通过化学合成及生物技术，如植物器官培养、细胞悬浮液培养等途径获得。其中，在上述天然植物的来源中，所述天然的鬼臼毒素类化合物可以来源于于小檗科的鬼臼属(Dysosma)、山荷叶属(Diphylleia)、桃儿七属(Sinopodophyllum)、柏科的圆柏属(Sabina)以及伞形科等植物，本发明中，优选来源于叉子圆柏(Sabina vulgaris Ant)、桃儿七(Sinopodophyllumhexandrum(Royle)Ying)、南方山荷叶(Diphylleiagrayi)、云南八角莲(Dysosmaaurantiocaulis(Hand.-Mazz.)Hu)、小八角莲(Dysosmadifformis(Hemsl.et Wils.)T.H.Wang ex Ying)、贵州八角莲(Dysosmamajorensis(Gagnep.)Ying)、六角莲(Dysosmapleiantha(Hance)Woods)、西藏八角莲(Dysosmatsayuensis Ying)、川八角莲(Dysosmaveitchii(Hemsl.et Wils)Fu ex Ying)、八角莲(Dysosmaversipellis(Hance)M.Cheng ex Ying)、日本罗汉柏(Thujopsisdolabrata(Thunberg ex Linn.f.)Sieb.et Zucc.)、峨参(Anthriscussylvestris(L.)Hoffm.Gen.)等，特别优选为叉子圆柏(Sabina vulgaris Ant)的提取物。来自于本发明中所述植物提取物的鬼臼毒素类化合物作为植物药的安全性更佳。

[0014] 按照本发明，所述鬼臼毒素类化合物的提取方法可以参考本领域技术人员公知的各种提取方法，在本发明中，当所述鬼臼毒素类化合物来源于叉子圆柏(Sabina vulgaris Ant)的提取物时，可以参考CN 104277049A中公开的高效逆流色谱分离的方法获得鬼臼毒素和脱氧鬼臼毒素。

[0015] 具体方法例如：将叉子圆柏的果实(球果)作为原料，先将原料粉碎成粗粉，采用95％的乙醇进行冷浸和渗漉提取，合并叉子圆柏的乙醇提取液，减压浓缩回收乙醇，将残留乙醇完全蒸出后，进行冷冻干燥，得到叉子圆柏乙醇提取浸膏。经HPLC分析检测，叉子圆柏的乙醇提取浸膏中鬼臼毒素的质量百分含量为0.41％，脱氧鬼臼毒素的质量百分含量为
1.54％。

[0016] 溶剂系统采用四氯化碳：乙酸乙酯：甲醇：水＝17:6:15:3.5(容积比)。取四氯化碳3.4L、乙酸乙酯1.2L、甲醇3.0L、水0.7L，于10L的混合釜中充分混合均匀，静置分层后，将上下两相分开备用。以上相为固定相，将上相用气压方式压入并充满逆流色谱主机工作鼓。称取叉子圆柏的乙醇提取浸膏20g，用200mL的下相溶液溶解，过滤得到溶解的叉子圆柏的乙醇提取浸膏溶液，备用。开启逆流色谱分离装置，调整主机转速400rpm，然后以5mL/min的流量泵入上述溶解的叉子圆柏的乙醇提取浸膏溶液，进样后维持流量不变，泵入下相(下相作为流动相)洗脱主机工作鼓内的鬼臼毒素和脱氧鬼臼毒素组分。根据检测谱图在洗脱的流动相中分别收集鬼臼毒素和脱氧鬼臼毒素组分，并确定其流出的时间段。分离收集的鬼臼毒素和脱氧鬼臼毒素组分经减压浓缩、真空干燥，最后可得到鬼臼毒素52mg，脱氧鬼臼毒素
196mg，经HPLC检测，鬼臼毒素纯度98.6％，脱氧鬼臼毒素的纯度98.2％。

[0017] 其中，所述叉子圆柏(中国树木学)的拉丁学名为Sabina vulgaris Ant，又名新疆圆柏、天山圆柏(中国树木学)、双子柏、沙地柏(中国树木学)，爬柏(甘肃张掖)或臭柏(内蒙古乌审旗)。

[0018] 所述叉子圆柏为松柏门、松柏纲、松柏目、柏科、圆柏属匍匐灌木，高不及1米，稀灌木或小乔木；产于新疆天山至阿尔泰山、宁夏贺兰山、内蒙古、青海东北部、甘肃祁连山北坡及古浪、景泰、靖远等地以及陕西北部榆林。生于海拔1100-2800米(青海可达3300米)地带的多石山坡，或生于针叶或针叶树阔叶树混交林内，或生于沙丘上。

[0019] 所述叉子圆柏球果为叉子圆柏灌木植物的果实。

[0020] 再者，本发明还提供了鬼臼毒素类化合物在制备抗生育药中的应用，其中，所述抗生育药应用于雌性哺乳动物的生殖道内的杀精避孕。优选应用于人类女性的生殖道内的杀精避孕。所述鬼臼毒素类化合物优选为鬼臼毒素和/或脱氧鬼臼毒素。其中，所述鬼臼毒素类化合物的来源已经在上文中具体阐述，在此不再赘述。

[0021] 再者，本发明还提供了一种药物制剂，该药物制剂含有活性成分，其中，所述活性成分为本发明上述的抗生育药。

[0022] 按照本发明，所述药物制剂的剂型可以是本领域公知的各种药物制剂剂型，因此，本发明提供的药物制剂也可以为各种公知的药物制剂剂型，特别是可以应用于各自外用避孕药的剂型，为了利于给药，本发明所述的药物制剂剂型可以选自凝胶剂、发泡剂、膜和栓剂中的一种。上述各种剂型的制备方法使用医药领域公知的制备方法即可。

[0023] 本发明提供的药物制剂为凝胶剂或发泡剂时，所述凝胶剂或发泡剂中，活性成分的含量为0.1-60重量％、水的含量为1-99重量％，辅料的含量为0.9-98重量％。该凝胶剂以及发泡剂的制备方法分别为医药领域中凝胶剂和发泡剂常规的制备方法。所述凝胶剂或发泡剂中的辅料可以为医药领域常规使用的药用辅料。

[0024] 本发明提供的药物制剂为膜剂或栓剂时，所述膜剂或栓剂中，活性成分的含量为0.1-60重量％，辅料的含量为40-99.9重量％。该膜剂以及栓剂的制备方法分别为医药领域中膜剂和栓剂的常规的制备方法。所述膜剂或栓剂中的辅料可以为医药领域常规使用的药用辅料。

[0025] 其中，所述医药领域常规使用的药用辅料包括但不限于：高分子聚合物、表面活性剂、助溶剂、稳定剂、pH值调节剂和防腐剂等中的一种或多种的混合物。

[0026] 具体而言，所述高分子聚合物包括但不限于：海藻酸盐、明胶、果胶、黄原胶、环糊精、淀粉及其衍生物、纤维素衍生物如甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、透明质酸、丙稀酸类聚合物(如：不同类型的卡波姆(980、971、974等))、聚丙烯酸及丙烯酸树脂等中的一种或多种的混合物。

[0027] 表面活性剂包括但不限于：磷脂、月桂醇硫酸钠、十二烷基硫酸钠、十二烷基磺酸钠、十六烷基三甲基溴化铵、单烷基甘油醚、聚氧乙烯聚氧丙烯共聚醚、聚甘油-聚亚丁基脂肪醇醚、硬脂酸丁酯、异硬脂酸异丙醇酯、十二烷基二甲基乙酸钠、烷基酰胺丙基甜菜碱和烷基咪唑林中的一种或多种的混合物。

[0028] 助溶剂包括但不限于：丙三醇、丙二醇、乙醇、聚乙二醇(如：不同型号的聚乙二醇(聚乙二醇400、聚乙二醇200等))、司盘、吐温80、吐温20和植物油(如：大豆油、玉米油等)等中的一种或多种的混合物。

[0029] pH值调节剂包括但不限于：乳酸、柠檬酸、冰醋酸、氢氧化钠及碳酸氢钠等中的一种或多种的混合物。

[0030] 稳定剂包括但不限于硬脂酸等。

[0031] 防腐剂包括但不限于苯甲酸、苯甲酸钠、对羟基苯甲酸酯类(尼泊金类的甲、乙、丙、丁四种酯)和山梨酸等中的一种或多种的混合物。

[0032] 以上描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。

[0033] 另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。

[0034] 此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。

[0035] 以下将通过实施例对本发明进行详细描述。

[0036] 按照说明书中的方法(CN 104277049A的实施例1的方法)从叉子圆柏中提取鬼臼毒素和脱氧鬼臼毒素，并通过高效液相色谱和核磁共振对分离出的有效成分进行了测定。其中：

[0037] 鬼臼毒素(podophyllotoxin)为白色结晶粉末，核磁共振氢谱1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ2.50(s,1H,-OH)，δ2.80(m,2H,H11,12)，δ3.75(s,6H,H27,29)，δ3.81(s,3H,H28)，δ4.05(t,1H,H16)，δ4.55(m,2H,H13,H16)，δ4.75(d,1H,H10)，δ5.95(d,2H,-OCH2O-)，δ6.35(s,2H,H18,22)，δ6.50(s,1H,H3)，δ7.12(s,1H,H6)。

[0038] 鬼臼毒素的分子结构式：

[0039]

[0040] 脱氧鬼臼毒素(deoxypodophyllotoxin)为白色无定形粉末，核磁共振氢谱1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ2.73(m,2H,H13)，δ2.78(m,1H,H11)，δ3.07(m,1H,H12)，δ3.75(s,6H,H27,29)，δ3.80(s,3H,H28)，δ3.92(m,1H,H16)，δ4.45(m,1H,H16’)，δ4.60(m,1H,H10)，δ5.94(dd,2H,H8)，δ6.34(s,2H,H18,22)，δ6.52(s,1H,H3)，δ6.67(s,1H,H6)。

[0041] 脱氧鬼臼毒素的分子结构式：

[0042]

[0043] 以下实施例中，鬼臼毒素的来源为采用上述方法提取分离得到，脱氧鬼臼毒素的来源为购自美国Toronto research chemicals inc.公司的标准品。

[0044] 实施例1

[0045] 本实施例用于说明本发明提供的抗生育药的体外杀精药效观察。

[0046] 供试品溶液的配制：取上述方法获得的鬼臼毒素作为供试品(含量为98％)(HPLC检测)。使用生理盐水将上述鬼臼毒素供试品稀释至2.0mg/ml、1.0mg/ml、0.5mg/ml、0.25mg/ml、0.125mg/ml和0.0625mg/ml，备用待测。

[0047] 大鼠精子采取及计数方法：取SD雄性大鼠(3只，雄性，250-300g，海市西普尔-比凯实验动物有限公司提供，生产许可证号：SCXK(沪)2013-0016)双侧附睾置于无菌小烧杯中，用生理盐水冲洗后加精子营养液(Tyrode液：NaCl 4.0g，KCl 0.10g，CaCl20.10g，MgCl2·6H2O 0.05g，NaH2PO4·2H2O 0.025g，NaHCO30.50g，Glucose 0.50g，用去离子水分次溶解，定容至1000ml)4ml，用解剖剪在附睾尾划一十字形切口后，置37℃水浴箱孵育10分钟后，取一滴于载玻片上，低倍镜下(10×10)检查精子活率，要求活动率≥60％；符合条件后(即符合活动率≥60％)吸取0.1ml加入装有1.9ml精子稀释液的小试管中，混匀，静置3分钟，取一滴于精子计数板中，高倍镜(10×40)下计数(方法：4小格精子数×4×稀释倍数(20倍)×
104)，根据计数所测得的密度，加Tyrode液将精液稀释到107/ml，置37℃水浴中待用。

[0048] 大鼠杀精实验方法：将配制好的不同浓度的上述供试品稀释液各1ml分装于Eppendorf管并置37℃水浴中保温待用。对3份大鼠精液分别进行体外杀精试验。参照Sander-Cramer法(WHO精液操作手册)，取上述选定的精液0.2ml加入以上不同供试品稀释液中，混匀后取一滴于载玻片上，观察10个高倍视野，以全部精子失活为终点，测出供试品在20秒至3分钟内的杀精效果。不同浓度的鬼臼毒素抑制大鼠精子活力有效浓度及对应时间点如表1所示。

[0049] 表1

[0050]

[0051] 注：“+”表示视野内至少有一个精子活动；“—”表示视野内无活动精子。

[0052] 结果表明：鬼臼毒素20秒完全抑制精子活力的有效浓度为0.5mg/ml。

[0053] 实施例2

[0054] 本实施例用于说明本发明提供的抗生育药的体外杀精药效观察。

[0055] 供试品溶液的配制：取脱氧鬼臼毒素作为供试品。使用生理盐水将上述脱氧鬼臼毒素供试品稀释至2.0mg/ml、1.0mg/ml、0.5mg/ml、0.25mg/ml、0.125mg/ml和0.0625mg/ml，备用待测。

[0056] 大鼠精子采取及计数方法和大鼠杀精实验方法与实施例1相同。不同浓度的脱氧鬼臼毒素抑制大鼠精子活力有效浓度及对应时间点如表2所示。

[0057] 表2

[0058]

[0059] 注：“+”表示视野内至少有一个精子活动；“—”表示视野内无活动精子。

[0060] 结果表明：脱氧鬼臼毒素20秒完全抑制精子活力的有效浓度为0.5mg/ml。

[0061] 实施例3

[0062] 本实施例用于说明本发明提供的抗生育药的体外杀精药效观察。

[0063] 供试品溶液的配制：取上述方法获得的鬼臼毒素以及脱氧鬼臼毒素作为供试品(含量为98％)(HPLC检测)。使用生理盐水将上述鬼臼毒素供试品稀释至2.0mg/ml、1.0mg/ml、0.5mg/ml、0.25mg/ml、0.125mg/ml和0.0625mg/ml，将上述脱氧鬼臼毒素供试品稀释至2.0mg/ml、1.0mg/ml、0.5mg/ml、0.25mg/ml、0.125mg/ml，备用待测。

[0064] 人精液标本处理及精子计数方法：取健康成年男性精液(人精液标本选取具有生育能力、禁欲7天以上的男性精液，精子活动率≥70％，前向运动精子≥75％，畸形≤20％)，置于无菌小烧杯中，然后加精子营养液(Tyrode液：NaCl 4.0g，KCl 0.10g，CaCl20.10g，MgCl2·6H2O 0.05g，NaH2PO4·2H2O0.025g，NaHCO30.50g，Glucose 0.50g，用去离子水分次溶解，定容至1000ml)3ml，置37℃水浴箱孵育10分钟后，取一滴于载玻片上，低倍镜下(10×10)检查精子活率，要求活动率≥60％；符合条件后(即符合活动率≥60％)吸取0.1ml加入装有1.9ml精子稀释液的小试管中，混匀，静置3分钟，取一滴于精子计数板中，高倍镜(10×
40)下计数(方法：4小格精子数×4×稀释倍数(20倍)×104)，根据计数所测得的密度，加Tyrode液将精液稀释到106/ml，置37℃水浴中待用。

[0065] 杀精实验方法：将配制好的不同浓度的上述供试品稀释液各1ml分装于Eppendorf管并置37℃水浴中保温待用。对3份人精液分别进行体外杀精试验。参照Sander-Cramer法(WHO精液操作手册)，取上述选定的精液0.2ml加入以上不同供试品稀释液中，立即置于震荡器上混匀5秒钟，取一滴于载玻片上，室温22℃下，观察10个高倍视野(10×40)，以全部精子失活为终点，测出供试品在20秒至3分钟内的杀精效果。不同浓度的鬼臼毒素、脱氧鬼臼毒素抑制人精子活力有效浓度及对应时间点如表3所示。

[0066] 表3

[0067]

[0068] 注：“+”表示视野内至少有一个精子活动；“—”表示视野内无活动精子。

[0069] 结果表明：鬼臼毒素和脱氧鬼臼毒素20秒内可以有效抑制人精子活力，有效杀精浓度为0.25mg/ml。

[0070] 实施例4

[0071] 检测脱氧鬼臼毒素对鼠伤寒沙门氏菌是否具有致突变作用。

[0072] 样品的处理方法：样品用二甲基亚砜(DMSO)稀释。

[0073] 试验菌株：选用MOLECULAR TOXICOLOGY.INC鼠伤寒沙门氏菌TA97、TA98、TA100、TA102为本试验的试验菌株。经自发回变、深粗糙型(rfa)鉴定(结晶紫抑菌试验)、uvrB缺失的鉴定(紫外线敏感试验)、R因子(氨苄青霉素抗性试验)和pAQ1质粒(四环素抗性试验)的鉴定、组氨酸需求试验和对阳性致突变物的反应等检定，符合要求后用于试验。

[0074] 试验方法：

[0075] 参照保健食品检验与评价技术规范(2003年版)中Ames实验的方法进行。采用平皿掺入法，分别在加或不加体外活化系统(S9混合液)的条件下对受试物进行测试。共设5个剂量组，剂量设计分别为5mg/皿；1mg/皿；0.2mg/皿；0.04mg/皿原液；0.008mg/皿。另设阴性对照(自发回变)、受试物溶剂对照(DMSO)和阳性对照组(按不同菌株加或不加体外活化系统的要求选择特定阳性物，阳性物的具体名称和剂量见下表4)。

[0076] 平皿掺入试验时，取融化并45℃保温的顶层培养基一管(2ml)，加入受试物(或对照物)0.1ml、菌液0.1ml(如加S9则再加入S9混合液0.5ml)，迅速充分混合后，倒至低层培养基上铺平待凝。顶层培养基凝结后翻转平皿，37℃培养48小时，观察结果。每个剂量做三块平皿。试验重复进行一次。如出现阳性结果，则试验重复进行两次。

[0077] 表4 脱氧鬼臼毒素Ames试验掺入法结果

[0078]

[0079] 注：

[0080] 1.TA97、TA98、TA102不加S9选用的阳性物为敌克松(25ug/皿)，溶剂为二甲基亚砜。

[0081] 2.TA100TA1535不加S9选用的阳性物为叠氮钠(2.5ug/皿)，溶剂为蒸馏水。

[0082] 3.TA97、TA98、TA100加S9选用的阳性物为2-氨基蒽(2ug/皿)，TA102加S9选用的阳性物为1,8-二羟基蒽醌(50ug/皿)，溶剂为二甲基亚砜。受试物溶剂对照为DMSO。

[0083] 试验结果：

[0084] 脱氧鬼臼毒素平皿掺入法的结果见表4。

[0085] 从表4中可见，受试物脱氧鬼臼毒素无论在有代谢活化系统还是无代谢活化系统的情况下，均未表现出回变菌落数的增加，而各菌株的阳性对照物，在加和不加代谢活化系统的条件下，回变菌落数均超过对照的两倍。

[0086] 试验结果表明，受试物脱氧鬼臼毒素在Ames试验中，用平皿掺入法在无体外活化系统S9存在的情况下，对TA97、TA98、TA100、TA102和TA1535均未表现出诱变效应。在有体外活化系统S9存在的情况下，对TA97、TA98、TA100、TA102和TA1535也均未表现出诱变效应。说明受试物脱氧鬼臼毒素对鼠伤寒沙门氏菌无致突变作用。

[0087] 对比例1

[0088] 本对比例用于说明采用生理盐水作为阴性对照组用于杀精效果观察

[0089] 供试品溶液：生理盐水，批号：13032331，由江苏四环生物制药有限公司提供。大鼠精子采取及计数方法和大鼠杀精实验方法与实施例1相同。生理盐水抑制大鼠精子活力有效浓度及对应时间点如表5所示。

[0090] 表5

[0091]

[0092] 注：“+”表示视野内至少有一个精子活动；“—”表示视野内无活动精子。

[0093] 结果表明：生理盐水并未具有杀精作用。

[0094] 从上述结果可以看出，本发明提供的鬼臼毒素类化合物可以用于哺乳动物，特别是人类的杀精避孕。特别适用于作为人类女性的生殖道内的杀精避孕药物，杀精效果佳。此外，鬼臼毒素类化合物中的鬼臼毒素还具有抗病毒和杀精的双重作用，脱氧鬼臼毒素的遗传毒性更小，对粘膜的刺激小，应用更为安全。